專利名稱：用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及早期腫瘤診斷的磁共振成像劑，具體涉及一種脂質(zhì)體包裹 磁共振顯影劑并經(jīng)過肽靶向分子修飾的腫瘤靶向診斷顯影組合物及其制備 方法。
背景技術(shù)：
腫瘤治愈率可靠的出路在于早期發(fā)現(xiàn)與早期治療。目前腫瘤篩査措施
主要采用影像學(xué)(x線、核磁共振)及超聲波等技術(shù)。這些措施只能發(fā)現(xiàn)
臨床型腫瘤。因此，迫切需要發(fā)展敏感性高、特異性強(qiáng)的早期篩査方法， 如分子顯像技術(shù)，在亞臨床水平早期診斷出腫瘤，并予以早期干預(yù)。到目
前為止，最常用分析分子信息的顯像方法是核磁共振(MRI)、單光子發(fā)射 計(jì)算機(jī)斷層掃描(SPECT)和正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描(PET)等。在這些方 法中，MRI具有高度空間分辨率和同時(shí)揭示生物與解剖信息；與放射性同
位素相比，具有不可比擬的優(yōu)勢(shì)無放射性、不受半衰期的影響和較好的 空間分辯率。
中國專利公報(bào)CN1148812A提出了一種磁共振成像診斷用組合物，將 磁共振成像顯影劑包裹在中性磷脂和帶電磷脂構(gòu)成的脂質(zhì)體。其成像的效 果由于顯影劑的泄漏，背景噪聲高，對(duì)比度小，不能達(dá)到早期正確診斷的 作用。
中國專利公報(bào)CN1270698C提出了一種對(duì)水溶性藥物有較高包封率的 脂質(zhì)體的制備方法，但是其在血液中的穩(wěn)定性效果尚不能滿足磁共振成像的需要。
分子顯像(Molecularlmaging)技術(shù)以檢測(cè)疾病特異性生化特征為基礎(chǔ)， 是臨床診斷與治療上引人注目的進(jìn)展。它采用類似于體外免疫細(xì)胞化學(xué)或 原位雜交技術(shù)的方法，該方法的主要特點(diǎn)是以疾病實(shí)際發(fā)病機(jī)制相關(guān)的或 發(fā)病過程相關(guān)的分子為靶點(diǎn)，是增強(qiáng)了的"體內(nèi)"分子病理技術(shù)。它的敏感性 與特異性等方面均較傳統(tǒng)的影像技術(shù)有了質(zhì)的提高，而且方法學(xué)上有了很 大的改進(jìn)。它能發(fā)現(xiàn)疾病在體內(nèi)時(shí)間與空間上的特征疾病發(fā)生的部位、 演變過程、參與分子及對(duì)治療的反應(yīng)等。采用適當(dāng)?shù)娘@影劑，以放大病灶 信號(hào)，達(dá)到顯像的目的。目前多采用放射性同位素技術(shù)，如Somatostain-受 體顯像技術(shù)己用于檢測(cè)神經(jīng)內(nèi)分泌性腫瘤。锝標(biāo)記的Annexin用于檢測(cè)體 內(nèi)凋亡(目前正在進(jìn)行臨床試驗(yàn))。這些方法在診斷腫瘤中多數(shù)未能取得成 功。其原因可能與下列因素有關(guān)(1)腫瘤缺乏特異性抗原，因而也不存在 親和力強(qiáng)、特異性高的單克隆抗體。即使存在，這些抗體也只屬于少部分 的腫瘤細(xì)胞，不能反映腫瘤全體細(xì)胞。(2)抗體滲入到組織間液后，不易排 出體外，從而產(chǎn)生了背景噪音，不能很好地顯示出腫瘤部位。(3)導(dǎo)向分子 多采用單克隆抗體等，這些生物大分子只能單價(jià)或雙價(jià)地與同位素等造影 劑結(jié)合，信號(hào)放大程度小，敏感性差。(4)造影劑多采用同位素，同位素對(duì) 人體或多或少有傷害，設(shè)備要求高，難以推廣應(yīng)用?；谏鲜鲈颍詥?克隆抗體為導(dǎo)向的顯像技術(shù)一直未能應(yīng)用到臨床。
采用靶向載體技術(shù)進(jìn)行分子顯像，可用的靶點(diǎn)有癌基因和腫瘤的代謝 特征，癌基因缺乏腫瘤特異性，不同腫瘤，即使同種腫瘤不同個(gè)體間表達(dá) 差異較大，難以找到適用于所有實(shí)體瘤的癌基因靶點(diǎn)。FDG-正電子束斷層攝影已經(jīng)應(yīng)用到臨床，它缺乏特異性，許多非腫瘤性疾病如炎癥和結(jié)核均
可呈現(xiàn)出腫瘤樣改變；而且它的空間分辨率與現(xiàn)有方法類似，對(duì)于lcm以 下腫塊不能作出準(zhǔn)確的顯像。
實(shí)體瘤生長與轉(zhuǎn)移離不開血管生成，是所有實(shí)體瘤的共同特征。若無血 管生長，實(shí)體瘤不能長到l-2mm3以上大小。為此，血管生成成為當(dāng)今腫瘤 診治的可靠靶點(diǎn)。血管內(nèi)皮細(xì)胞屬于可暫時(shí)被血管生成因子活化的正常組 織，在缺氧或血管生成促進(jìn)因子存在下，可能通過發(fā)芽生長新的毛細(xì)血管。 腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞可以特異地表達(dá)許多受體，從而將他們與靜止 期血管內(nèi)皮細(xì)胞區(qū)別開來。大量資料證實(shí)，新生血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)整合素 受體avP3和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體(VEGFR);這些受體特異性高， 在全身其它組織幾不表達(dá)(其中整合素受體avp3在部分器官中有較高的表 達(dá))。以它們單克隆抗體或相應(yīng)配體為導(dǎo)向，進(jìn)行新生血管靶向治療在動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)中取得了一些進(jìn)展。有人應(yīng)用噬菌體展示技術(shù)，發(fā)現(xiàn)整合素參與放射 引起的腫瘤血管生成，其中含有RGD片段是整合素的主要配體，表達(dá)明顯 增加。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，RGD三肽能特異性地與整合素受體中的p3亞單位結(jié) 合，從而有效地抑制腫瘤血管生成，最終達(dá)到延緩或抑制腫瘤生長的療效。 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)是VEGFR的配體，在許多實(shí)體瘤表達(dá)明 顯上調(diào)；它具有與VEGFR特異性地結(jié)合，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和促進(jìn)血管生 長樣作用，是目前作用最強(qiáng)、特異最高的血管生成因子。Soker等研究(Shay Soker, et al. Inhibition of Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF)-induced Endothelial Cell Proliferation by a Peptide Corresponding to the Exon 7-Encoded Domain of VEGF165.J BC 1997; 272， 31582—31588)發(fā)現(xiàn)VEGF存在多個(gè)外顯子；其中，外顯子7編碼44個(gè)氨基酸的多肽，與VEGF競爭 結(jié)合到VEGFR上，抑制血管生長。Binetruy-Toumaire等(Binetruy-Toumaire R， et al. Identification of a peptide blocking vascular endothelial growth factor (VEGF)-mediated angiogenesis. EMBO J. 2000 Apr 3;19(7):1525-33 )采用噬菌 體庫技術(shù)，篩選到一個(gè)多肽分子，ATWLPPR，它能特異性地與VEGF競爭 地結(jié)合到細(xì)胞表面的VEGFR KDR上，從而在體內(nèi)與體外抑制內(nèi)皮細(xì)胞增 殖與血管生成。
中國專利公報(bào)CN1846691A公開了一種注射用整合素配體修飾的載抗 癌藥的長循環(huán)脂質(zhì)體。通過采用聚乙二醇(PEG)和含精氨酸一甘氨酸一天 冬氨酸序列的線性多肽片斷修飾脂質(zhì)體，具有一定的耙向治療效果。但是， 該技術(shù)沒有考慮加入顯影劑作為磁共振成像用脂質(zhì)體的方案，因而不能作 為本發(fā)明領(lǐng)域的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是公開一種用于磁共振成像診斷的腫瘤耙向顯影組合物 及其制備方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。
本發(fā)明所述的用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物的組分包括 外水相和懸浮在外水相中的經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體； 所說的經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體包括在其內(nèi)部的順磁性顯影劑和內(nèi)水 相，包裹在磷脂類脂質(zhì)體外表面的用于防泄漏修飾的聚乙二醇(PEG)或其 衍生物和/或用于耙向修飾的多肽分子；
基于經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體中固體物質(zhì)的重量，各個(gè)組分的重量百分 比含量為磷脂類脂質(zhì)體 80 99% 聚乙二醇(PEG)或其衍生物0 16% 順磁性顯影劑 0.1 2.0% 多肽分子 0.1 2.5%
基于經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體的重量，經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體中固體 物質(zhì)的重量含量為1.0 5.0%。 優(yōu)選的重量百分比含量為 磷脂類脂質(zhì)體 88~98% 聚乙二醇(PEG)或其衍生物0.4 10°% 順磁性顯影劑 0.4 1.6% 多肽分子 0.3 1.5%
術(shù)語"順磁性顯影劑"以及大多數(shù)商品顯影劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)在波譜學(xué)雜志 (2004年12月第21巻第4期第505-525頁，俞開潮等用于磁共振成像 對(duì)比增強(qiáng)的造影劑研發(fā)進(jìn)展)文獻(xiàn)中有詳細(xì)的報(bào)道；
按照本發(fā)明，用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物中，外水相中， 經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體的含量為500 900mg/ml;
按照本發(fā)明，在外水相中，還含有基于包裹在經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體 中的順磁性顯影劑重量的45 66%的順磁性顯影劑，換一種話說，本發(fā)明 對(duì)對(duì)順磁性顯影劑的包裹率大于60%;
所說的水相為為適宜于注射的緩沖溶液，所說的緩沖溶液可以選自磷酸 鹽緩沖溶液和檸檬酸緩沖溶液，緩沖溶液的的pH在5.5 8.5之間，優(yōu)選的 范圍為5.6-8.0;所說的磷脂類脂質(zhì)體的主要構(gòu)成物是磷脂和膽固醇，其中磷脂選自天然 磷脂或合成磷脂中的一種，如卵磷脂、大豆磷脂、二月桂酰卵磷脂和二棕
櫚酰卵磷脂，優(yōu)選為單室雙層脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，平均粒徑為100 210nm，磷脂 與膽固醇的質(zhì)量比為20:1 10:5，優(yōu)選10:1 10:3;
所說的聚乙二醇衍生物選自硬脂酸聚乙二醇單酯、月桂酸聚乙二醇單 酯或棕櫚酸聚乙二醇單酯中的一種，聚乙二醇(PEG)的分子量為200~6000， 優(yōu)選的分子量為1000 3000。
所說的多肽分子可以選自ATWLPPR、棕櫚酸一HL肽、棕櫚酸一GG肽 或棕櫚酸2-HL肽中的一種。所說的棕櫚酸-HL肽(A)、棕櫚酸2-HL肽(B) 和棕櫚酸-GG (C)肽分別具有下列結(jié)構(gòu)
A: Pal-HNrHL
B: Pal-Lys(Pal)-Gly-Gly-HL2 20 C: Pal-HN2-GG
上式中，Pal代表棕櫚酸基團(tuán)；HL肽是由組氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸、 酪氨酸、谷氨酸和亮氨酸組成的十二肽；GG肽是由賴氨酸、甘氨酸、丙氨 酸、精氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸和苯丙氨酸組成的十二肽。
所說的順磁性顯影劑是順磁性金屬(錳、軋、鏑和鐵)的螯合物中的 一種；螯合劑可以選自氨基多羧酸，例如乙二胺四乙酸、二乙撐三胺五乙 酸、N-羥乙基二胺三乙酸等中的一種；
所說的順磁性金屬螯合物優(yōu)選自商品Magnevist、 Omniscan、 Dotarem、 Prohance、 Gadovist、 MultiHance、軋噴酸葡胺或磁顯葡胺；
本發(fā)明所說的用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物的制備方法，包括如下步驟-
(1) 按照上述的比例，將磷脂、膽固醇和PEG或其衍生物用混合溶劑
溶解得到類酯溶液，然后蒸發(fā)脫除溶劑，獲得脂質(zhì)薄膜；
所說的混合溶劑是氯仿與乙醇的任意比例的混合液體，磷脂、膽固醇 和PEG或其衍生物在混合溶劑總的含量為2 20mg/ml;
(2) 按照上述的比例，加入pH為5.5 8.5的順磁性顯影劑緩沖溶液， 混合，得到脂質(zhì)體混懸液，于40~50°C溫度下采用超聲波或微孔膜壓濾等 方法使脂質(zhì)體顆粒達(dá)到100 210納米的中間產(chǎn)物，超聲波分散時(shí)間至少為 1 10min，優(yōu)選的是3min 8min，所說的微孔膜選自孔徑小于0.4微米的 聚碳酸酯微濾膜，最好是孔徑小于0.3微米；
順磁性顯影劑在緩沖溶液中的濃度為3~20mg/ml，最好在5~15mg/ml 之間，緩沖溶液優(yōu)選自磷酸鹽緩沖溶液和檸檬酸緩沖溶液體系； 按照本發(fā)明，還包括步驟(3):
按照上述的比例，在中間產(chǎn)物中加入多肽的二甲基亞砜溶液，混合后， 即得到本發(fā)明所說的用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物；
或者，將多肽的二甲基亞砜溶液添加到以上步驟(l)中的類酯溶液中， 再按照步驟(2)的方法，得到本發(fā)明所說的用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向 顯影劑組合物；
多肽在二甲基亞砜溶液中的濃度為0.2~2mg/ml;
按照上述方法所得到的組合物具有下列特出的優(yōu)點(diǎn)順磁性顯影劑在 脂質(zhì)體中的包裹率不低于60%，可以顯著降低磁共振成像時(shí)的背景噪聲， 提高了圖像的對(duì)比度質(zhì)量。脂質(zhì)體的物理化學(xué)穩(wěn)定性好，顆粒尺寸小，通過微孔除菌處理，適用于一般顯影劑的儲(chǔ)存條件，使用方便。多肽靶向的 協(xié)同作用下，不僅可以發(fā)現(xiàn)早期的腫瘤，而且使磁共振成像的有效觀察時(shí)
間長達(dá)2小時(shí)以上。


附圖l(a):用于實(shí)施例3的實(shí)驗(yàn)用荷瘤小鼠的磁共振平掃圖像；
附圖l(b):附圖l(a)實(shí)驗(yàn)用荷瘤小鼠在靜脈注射了實(shí)施例3的組合物后
1小時(shí)所得磁共振圖像；
附圖l(c):附圖1(a)實(shí)驗(yàn)用荷瘤小鼠在靜脈注射了實(shí)施例3的組合物后
2小時(shí)時(shí)所得磁共振圖像；
附圖2(a):用于實(shí)施例4的實(shí)驗(yàn)用荷瘤小鼠的磁共振平掃圖像；
附圖2(b):附圖2(a)實(shí)驗(yàn)用荷瘤小鼠在靜脈注射了實(shí)施例4的組合物后
1小時(shí)所得磁共振圖像；
附圖2(c):附圖2(a)實(shí)驗(yàn)用荷瘤小鼠在靜脈注射了實(shí)施例4的組合物后
2小時(shí)時(shí)所得磁共振圖像；
附圖3(a):用于實(shí)施例5的實(shí)驗(yàn)用荷瘤小鼠的磁共振平掃圖像；
附圖3(b):附圖3(a)實(shí)驗(yàn)用荷瘤小鼠在靜脈注射了實(shí)施例4的組合物后
1小時(shí)所得磁共振圖像；
附圖3(c):附圖3(a)實(shí)驗(yàn)用荷瘤小鼠在靜脈注射了實(shí)施例5的組合物后
2小時(shí)時(shí)所得磁共振圖像。
具體實(shí)施例方式
包裹率的測(cè)定定量吸取中間產(chǎn)物置于透析袋中，將透析袋置于與脂 質(zhì)體外部水相相同pH的同類緩沖溶液中透析8小時(shí)。定量吸取透析袋中透析過的顯影劑脂質(zhì)體，采用等離子體電感耦合發(fā)射光譜法測(cè)定顯影劑脂質(zhì) 體中金屬離子的含量，通過體積換算可求算出被脂質(zhì)體所包裹的顯影劑的 總量，采用同種方法測(cè)定加入量的顯影劑注射液中金屬離子的含量，包裹
率=(包裹顯影劑的總質(zhì)量/加入顯影劑的總質(zhì)量)xioo%)。
實(shí)施例1
取85mg卵磷脂、18mg膽固醇和lmg硬脂酸PEG2000單酯完全溶解 于10ml氯仿與乙醇體積比為1:1的溶劑中，將此溶液轉(zhuǎn)入250mL的茄形瓶 中于45°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫除氯仿等溶劑。添加pH值為7.38的顯影劑 Magnevist的磷酸鹽緩沖溶液10.3ml (磷酸鹽緩沖溶液中釓螯合物的濃度為 14mg/ml)，將脂質(zhì)體膜旋轉(zhuǎn)洗脫，得到白色脂質(zhì)體混懸液。將此混懸液在 45QC下振蕩30min，再在此溫度下超聲處理3min，然后壓過0.4微米孔徑 的7層微濾膜得到中間物A。測(cè)定中間物A，磷脂對(duì)釓螯合物顯影劑的包 裹率為63.8%。用Mastersize2000激光粒度儀測(cè)得其體積平均粒徑為185nm。
實(shí)施例2
取60mg大豆磷脂、14mg膽固醇和llmg PEG3000完全溶解于20ml氯 仿溶劑中，與棕櫚酸一GG肽2.0mg溶解于2ml 二甲基亞砜溶液一起混合， 將此溶液轉(zhuǎn)入250的茄形瓶中于48°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫除氯仿等溶劑。添加pH 值5.80的顯影劑Omniscan的檸檬酸緩沖溶液10.1ml(擰檬酸緩沖溶液中軋 螯合物的濃度為10mg/mL)，將脂質(zhì)體膜旋轉(zhuǎn)洗脫，得到白色脂質(zhì)體混懸液。 將此混懸液在42°C下振蕩30min，再在此溫度下超聲處理8min，然后壓過 0.4微米孔徑的7層微濾膜得到本發(fā)明所說的組合物。測(cè)定該組合物中磷脂 對(duì)釓螯合物顯影劑的包裹率為62.2%，經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體的含量為625mg/ml。用Mastersize2000激光粒度儀測(cè)得其體積平均粒徑為145nm。
實(shí)施例3
取160mg二月桂酰卵磷脂、20mg膽固醇和llmg棕櫚酸PEG3000單 酯完全溶解于10ml氯仿溶劑中，與棕櫚酸一GG肽l.Omg溶解于lml 二甲 基亞砜溶液一起混合，將此溶液轉(zhuǎn)入250的茄形瓶中于48°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫 除氯仿等溶劑。添加pH值5.95的顯影劑釓噴酸葡胺的緩沖溶液10.2ml (擰 檬酸緩沖溶液中釓螯合物的濃度為10mg/mL)，將脂質(zhì)體膜旋轉(zhuǎn)洗脫，得到 白色脂質(zhì)體混懸液。將此混懸液在46°C下振蕩30min，再在此溫度下超聲 處理4min,然后壓過0.4微米孔徑的7層微濾膜得到本發(fā)明所說的組合物。 測(cè)定該組合物中磷脂對(duì)釓螯合物顯影劑的包裹率為62.4%，經(jīng)過修飾的磷脂 類脂質(zhì)體的含量為686mg/ml。用Mastersize2000激光粒度儀測(cè)得其體積平 均粒徑為135nm。
取上述組合物50ml高速離心10min，取上層組合物供下列MRI實(shí)驗(yàn)用。 將接種荷瘤的小鼠首先在磁共振儀(荷蘭飛利浦公司)上于1.5T場強(qiáng) 下平掃，圖像見圖1 (a)。然后經(jīng)尾靜脈注射上述組合物，在相同條件下磁 共振成像檢査，注射后1小時(shí)和2小時(shí)所得圖像見圖1 (b)和圖1 (c)。 由圖可見，在注射后1小時(shí)和2小時(shí)的磁共振圖像上均可清晰地指認(rèn)出5mm 左右的小腫瘤。
實(shí)施例4
取100mg二棕櫚酰卵磷脂、20mg膽固醇和0.5mg月桂酸PEG2000單 酯完全溶解于30ml氯仿溶劑中，與棕櫚酸一HL肽0.5mg溶解于lml 二甲 基亞砜溶液一起混合，將此溶液轉(zhuǎn)入250的茄形瓶中于45°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫除氯仿等溶劑。添加pH值7.93的顯影劑磁顯葡胺的磷酸鹽緩沖溶液10.2ml (磷酸鹽緩沖溶液中釓螯合物的濃度為10mg/mL)，將脂質(zhì)體膜旋轉(zhuǎn)洗脫， 得到白色脂質(zhì)體混懸液。將此混懸液在44°C下振蕩30min，再在此溫度下 超聲處理3min，然后壓過0.4微米孔徑的7層微濾膜得到本發(fā)明所說的組 合物。測(cè)定該組合物中磷脂對(duì)釓螯合物顯影劑的包裹率為65.0%,經(jīng)過修飾 的磷脂類脂質(zhì)體的含量為655mg/ml。用Mastersize2000激光粒度儀測(cè)得其 體積平均粒徑為115nm。
取上述組合物50ml高速離心10min,取上層組合物供下列MRI實(shí)驗(yàn)用。 將接種荷瘤的小鼠首先在磁共振儀(荷蘭飛利浦公司)上于1.5T場強(qiáng) 下平掃，圖像見圖2 (a)。然后經(jīng)尾靜脈注射上述組合物，在相同條件下磁 共振成像檢査，注射后1小時(shí)和2小時(shí)所得圖像見圖2 (b)和圖2 (c)。 由圖可見，在注射后1小時(shí)和2小時(shí)的磁共振圖像上均可清晰地指認(rèn)出5mm 左右的小腫瘤。
實(shí)施例5
取棕櫚酸一GG肽0.5mg完全溶解于0.5ml 二甲基亞砜溶液，將此溶液 添加至實(shí)施例1方法所得中間物(A)100mg中，混合均勻后高速離心10min， 取上層組合物供下列MRI實(shí)驗(yàn)用。
將接種荷瘤的小鼠首先在磁共振儀(荷蘭飛利浦公司)上于1.5T場強(qiáng) 下平掃，圖像見圖3 (a)。然后經(jīng)尾靜脈注射上述組合物，在相同條件下磁 共振成像檢査，注射后1小時(shí)和2小時(shí)所得圖像見圖3 (b)和圖3 (c)。 由圖可見，在注射后1小時(shí)和2小時(shí)的磁共振圖像上均可清晰地指認(rèn)出5mm 左右的小腫瘤。
權(quán)利要求
1.一種用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物，其特征在于，組分包括外水相和懸浮在外水相中的經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體；所說的經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體包括在其內(nèi)部的順磁性顯影劑和內(nèi)水相，包裹在磷脂類脂質(zhì)體外表面的用于防泄漏修飾的聚乙二醇(PEG)或其衍生物和/或用于靶向修飾的多肽分子。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于磁共振成像診斷的腫瘤耙向顯影組合物， 其特征在于，基于經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體中的固體物質(zhì)的重量，各個(gè)組 分的重量百分比含量為-磷脂類脂質(zhì)體 80~99%聚乙二醇(PEG)或其衍生物0 16% 順磁性顯影劑 0.1 2.0% 多肽分子 0.1 2.5%基于經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體的重量，經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體中固體 物質(zhì)的重量含量為1.0 5.0%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物， 其特征在于，重量百分比含量為-磷脂類脂質(zhì)體 88~98%聚乙二醇(PEG)或其衍生物0.4 10% 順磁性顯影劑 0.4 1.6% 多肽分子 0.3 1.5%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于磁共振成像診斷的腫瘤耙向顯影組合物，其特征在于，用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物中，外水相中，經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體的含量為500 900mg/ml。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物， 其特征在于，外水相中，還含有基于包裹在經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體中的 順磁性顯影劑重量的45 66%的順磁性顯影劑，所說的水相為為適宜于注 射的緩沖溶液。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物， 其特征在于，所說的磷脂類脂質(zhì)體的主要構(gòu)成物是磷脂和膽固醇，其中磷 脂選自天然磷脂或合成磷脂中的一種，為單室雙層脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，平均粒徑 為100 210nm,磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為20:1 10:5。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物， 其特征在于，所說的聚乙二醇衍生物選自硬脂酸聚乙二醇單酯、月桂酸聚 乙二醇單酯或棕櫚酸聚乙二醇單酯中的一種，所說的多肽分子選自 ATWLPPR、棕櫚酸一HL肽、棕櫚酸一GG肽或棕櫚酸2-HL肽中的一種。 所說的棕櫚酸-HL肽(A)、棕櫚酸2-HL肽(B)和棕櫚酸-GG (C)肽， 分別具有下列結(jié)構(gòu)<formula>formula see original document page 3</formula>上式中，Pal代表棕櫚酸基團(tuán)；HL肽是由組氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸、 酪氨酸、谷氨酸和亮氨酸組成的十二肽；GG肽是由賴氨酸、甘氨酸、丙氨 酸、精氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸和苯丙氨酸組成的十二肽。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合 物，其特征在于，所說的順磁性顯影劑是順磁性金屬的螯合物中的一種； 螯合劑選自氨基多羧酸中的一種。
9. 制備權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯 影組合物的方法，包括如下步驟(1) 按照權(quán)利要求2所述的比例，將磷脂、膽固醇和PEG或其衍生物 用混合溶劑溶解得到類酯溶液，然后蒸發(fā)脫除溶劑，獲得脂質(zhì)薄膜；所說的混合溶劑是氯仿與乙醇的任意比例的混合液體，磷脂、膽固醇 和PEG或其衍生物在混合溶劑總的含量為2 20mg/ml;(2) 按照權(quán)利要求2所述的比例，加入pH為5.5 8.5的順磁性顯影 劑緩沖溶液，混合，得到脂質(zhì)體混懸液，于40~50QC溫度下采用超聲波或 微孔膜壓濾等方法使脂質(zhì)體顆粒達(dá)到100 210納米的中間產(chǎn)物。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，還包括步驟(3): 按照權(quán)利要求2所述的比例，在中間產(chǎn)物中加入多肽的二甲基亞砜溶液，混合后，即得到用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物；或者，將多肽的二甲基亞砜溶液添加到權(quán)利要求9中步驟(l)中的類酯 溶液中，再按照步驟(2)的方法，得到用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影 劑組合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于磁共振成像診斷的腫瘤靶向顯影組合物及其制備方法。其組分包括外水相和懸浮在外水相中的經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體，所說的經(jīng)過修飾的磷脂類脂質(zhì)體包括在其內(nèi)部的順磁性顯影劑，包裹在磷脂類脂質(zhì)體外表面的用于防泄漏修飾的聚乙二醇或其衍生物和/或用于靶向修飾的多肽分子。本發(fā)明順磁性顯影劑在脂質(zhì)體中的包裹率不低于60％，可以顯著降低磁共振成像時(shí)的背景噪聲，提高了圖像的對(duì)比度質(zhì)量。脂質(zhì)體的物理化學(xué)穩(wěn)定性好，顆粒尺寸小，通過微孔除菌處理，適用于一般顯影劑的儲(chǔ)存條件，使用方便。多肽靶向的協(xié)同作用下，不僅可以發(fā)現(xiàn)早期的腫瘤，而且使磁共振成像的有效觀察時(shí)間長達(dá)2小時(shí)以上。
文檔編號(hào)A61K49/18GK101301479SQ200710037510
公開日2008年11月12日 申請(qǐng)日期2007年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月8日
發(fā)明者吳秋芳, 周彩存, 孫希文, 穆曉紅, 波 粟, 鄭柏存, 馬新勝, 黃雪萍 申請(qǐng)人:上海華明高技術(shù)(集團(tuán))有限公司;上海市肺科醫(yī)院;上海益生源藥業(yè)有限公司