專利名稱：納米氟尿嘧啶涂層人工晶體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種涂層的人工晶狀體(intraocular lenses，IOL)及其制備方法。
背景技術(shù)：
氟尿嘧啶(Fluorouracil，5-Fu)是胸苷酸合成酶的抑制劑，可有效抑制細胞的有絲分裂，是臨床常用抗腫瘤藥物。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)氟尿嘧啶具有抑制晶狀體上皮細胞增殖和移行的作用(參見孫巖秀，李筱榮，張曉紅等，5-氟尿嘧啶抑制兔晶狀體上皮細胞(lens epithelial cell，LECs)增殖及眼內(nèi)毒性的研究，眼科研究，2000；18(3)224-226)，可用于預(yù)防人工晶狀體植入術(shù)后人工晶狀體前膜和后發(fā)性白內(nèi)障，還可以抗青光眼術(shù)后疤痕形成(參見熊小玲，青光眼術(shù)后5-Fu抗瘢痕形成的實驗動物研究和兔眼房水的5-Fu藥代動力學(xué)研究，眼科研究，1993；11(3)157-159)。
白內(nèi)障是世界范圍內(nèi)最主要的致盲眼病。治療白內(nèi)障的方法有手術(shù)療法和藥物療法，但目前用于治療白內(nèi)障的藥物均不能有效阻止或延緩晶狀體混濁的發(fā)展，因而手術(shù)治療仍是目前治療白內(nèi)障的主要手段。目前臨床上使用最多的晶狀體材料是聚甲基丙烯酸甲酯(polymethylmethacrylate，PMMA)，但PMMA的生物相容性仍存在一些問題，PMMA植入人體內(nèi)后常會引起炎癥反應(yīng)，人工晶狀體表面細胞粘附、色素沉著、細胞增殖、表面蛋白膜的形成，及周圍組織的反應(yīng)，如角膜內(nèi)皮細胞損害、葡萄膜炎等。為解決這些問題，常對人工晶狀體進行表面修飾以改變?nèi)斯ぞ铙w表面特性，增加其生物相容性。目前已有表面修飾肝素的人工晶狀體應(yīng)用于臨床(參見靳濤，李惠琪，微波等離子體在肝素修飾人工晶體表面中的應(yīng)用，山東科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2004；23(4)108-110)。
后囊膜混濁是白內(nèi)障術(shù)后的主要并發(fā)癥，目前認為，術(shù)中殘留晶狀體上皮細胞的增殖、移行及纖維化可引起后囊膜混濁。LECs是晶狀體中保持增殖與分化能力的成分。白內(nèi)障手術(shù)客觀上是一個創(chuàng)傷，一方面LECs失去皮質(zhì)對它的壓力；另一方面房水中一些因子作用于它引發(fā)創(chuàng)傷性修復(fù)機制，表現(xiàn)為上皮細胞移行、增殖，并且其增殖時失去單層性向成纖維細胞轉(zhuǎn)化。同時傷口愈合機制誘導(dǎo)纖維化生，膠原產(chǎn)生，使后囊纖維化，出現(xiàn)混濁和皺縮，阻礙光線通過，引起晶體偏位，影響視力提高。后囊膜混濁的藥物治療是目前研究的熱點問題，理想的藥物應(yīng)具備以下三個條件(1)能有效抑制晶狀體上皮細胞增生；(2)對眼內(nèi)其他細胞無毒性作用；(3)臨床用藥方便可行。目前已有報道阿霉素藥物緩釋系統(tǒng)抑制人工晶狀體植入術(shù)后后囊膜混濁的實驗研究、漢防己甲素抑制兔晶狀體后囊膜混濁的研究、吉西他濱眼內(nèi)應(yīng)用抑制兔眼白內(nèi)障術(shù)后后囊膜混濁的實驗研究、駱駝蓬總堿及其脂質(zhì)體對兔晶狀體上皮細胞的抑制作用、全反式維甲酸緩釋系統(tǒng)防治后囊膜混濁的實驗研究、柔紅霉素預(yù)防后囊膜混濁的實驗研究、絲裂霉素抑制后囊膜混濁的實驗研究、組織纖溶酶原激活劑肝素對晶狀體后囊膜混濁抑制作用的實驗對比研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種涂層的人工晶狀體，用以增加人工晶狀體的生物相容性、抑制人工晶狀體植入術(shù)后后囊膜混濁，并預(yù)防人工晶狀體植入術(shù)后前膜和后發(fā)性白內(nèi)障。本發(fā)明的另一目的是提供上述人工晶狀體的制備方法。
本發(fā)明的一種涂層的人工晶狀體，選用抗腫瘤藥氟尿嘧啶作為抑制人工晶狀體植入術(shù)后后囊膜混濁的藥物，并根據(jù)殼聚糖納米粒在眼內(nèi)穿透力弱及結(jié)膜上皮細胞對納米粒的吞噬量與該納米粒粒徑大小有關(guān)的特點，以殼聚糖—聚丙烯酸作為載體制備氟尿嘧啶納米粒制劑，混合涂層在聚甲基丙烯酸甲酯人工晶狀體表面。
本發(fā)明的氟尿嘧啶納米粒平均粒徑為100nm～150nm。該納米粒混懸液點眼或晶狀體囊內(nèi)注射后，由于生物黏附性好、易被結(jié)膜上皮細胞或晶狀體上皮細胞吸附吞噬且穿透力弱，在結(jié)膜囊或晶狀體囊內(nèi)粘滯度高，停留時間長，可提高局部藥物濃度；由于藥物隨殼聚糖的生物降解緩慢釋放，能使眼部有效藥物濃度維持較長時間，提高療效；由于該納米粒生物黏附性好，通過鼻淚管或房水循環(huán)擴散到全身的藥量顯著減少，可顯著降低毒副作用。
本發(fā)明還提供了上述人工晶狀體的制備方法，該方法包括首先將殼聚糖溶液、聚丙烯酸溶液和氟尿嘧啶溶液按一定比例混合、以一定速度攪拌并透析，制得殼聚糖-聚丙烯酸-氟尿嘧啶納米?；鞈乙?，納米粒平均粒徑為100nm～150nm；然后將經(jīng)過表面清洗活化和離子處理過的聚甲基丙烯酸甲酯人工晶狀體浸漬在殼聚糖-聚丙烯酸-氟尿嘧啶納米粒混懸液36～72小時。
(一)材料與試劑PMMA IOL 上海瀟萊科貿(mào)有限公司殼聚糖上海如吉生物科技發(fā)展有限公司脫乙酰度大于92％聚丙烯酸 北京舒伯偉化工儀器有限責(zé)任公司上海分公司分子量100kDa，35％(w/v)氟尿嘧啶 上海旭東海普藥業(yè)有限公司0.25g/10ml冰醋酸上海醫(yī)藥公司制劑公司產(chǎn)品分析純無水乙醇 上海醫(yī)藥公司制劑公司產(chǎn)品分析純表面活化劑上海醫(yī)藥公司制劑公司產(chǎn)品氟離子上海醫(yī)藥公司制劑公司產(chǎn)品(二)組分與配比殼聚糖8～800mg聚丙烯酸 40～4000mg氟尿嘧啶 100～1000mg冰醋酸200～400mg蒸餾水750～780ml氟離子5×1013～5×1015ions/cm2(三)操作步驟I制備氟尿嘧啶-殼聚糖納米?；鞈乙?i)制備A溶液將殼聚糖粉末充分溶脹于0.5％～1％(w/v)的醋酸溶液，配成0.02％～2％(w/v)的殼聚糖溶液A；(ii)制備B溶液將聚丙烯酸加水稀釋成0.02％～2％(w/v)聚丙烯酸溶液B；(iii)制備C溶液將氟尿嘧啶加水稀釋成2.5～25mg/ml，得氟尿嘧啶溶液C；(iv)制備納米?；鞈乙撼掷m(xù)攪拌下，按配比將C溶液逐滴加入B溶液中，控制滴速1～4ml/min，控制pH值3-7，再按配比滴加A溶液，反應(yīng)30分鐘～2小時；或按配比先將A溶液滴入B溶液，再滴加C溶液，反應(yīng)條件相同；反應(yīng)結(jié)束后移至透析袋，兩端夾閉后置于500ml二次蒸餾水中透析5小時去除游離組分后取出，即制得殼聚糖-聚丙烯酸-氟尿嘧啶納米?；鞈乙?；II制備納米氟尿嘧啶涂層人工晶狀體(i)PMMA人工晶狀體由去離子水在凈化工作臺環(huán)境下用超聲清洗機反復(fù)清洗3次，在分析純的無水乙醇中浸泡24小時，干燥后再浸入表面活化劑溶液中24小時，在真空干燥器內(nèi)干燥保存待用；(ii)經(jīng)表面清洗活化的人工晶狀體用低能離子注入機進行氟離子雙面注入，處理的能量為70keV，氟離子的劑量為5×1013～5×1015ions/cm2；(iii)經(jīng)氟離子處理的人工晶狀體和氟尿嘧啶-殼聚糖納米粒混懸液配合浸漬48小時；(iv)經(jīng)上述處理修飾后的人工晶狀體用去離子水在超凈工作臺上反復(fù)超聲清洗，干燥包裝后用環(huán)氧乙烷消毒保存。
本發(fā)明的人工晶狀體經(jīng)動物實驗證明的方法1.術(shù)后3天，以及1、2、4周行活體裂隙燈顯微鏡檢查，觀察前房及后囊膜情況，評價各組的眼內(nèi)毒性。
(注晶狀體后囊膜中央視區(qū)混濁程度分級標準0級為無混濁；1級為少量混濁，晶狀體后囊膜可見微皺褶或單層晶狀體上皮細胞(lensepithelial cells，LECs)薄片；2級為輕度混濁，晶狀體后囊膜可見蜂巢樣混濁和較厚的晶狀體上皮細胞片或纖維膜；3級為中度混濁，可見典型的Elschnig珍珠樣小體或致密的纖維膜；4級為重度混濁，可見致密的Elschnig珍珠樣小體。)2.術(shù)后4周，摘除兔眼，取角鞏緣組織放入4％甲醛溶液中固定48h以上，梯度乙醇溶液脫水，浸蠟、包埋、切片，常規(guī)HE染色后于光鏡下觀察各部分眼組織情況，評價各組的眼內(nèi)毒性。
常規(guī)HE染色方法(1)二甲苯I、二甲苯II脫蠟10分鐘，(2)無水乙醇洗二甲苯1分鐘，兩次，(3)95％乙醇、90％乙醇、85％乙醇、75％乙醇各1分鐘，(4)流水洗2分鐘，(5)蘇木精染色3分鐘，(6)流水洗2分鐘，(7)1％鹽酸乙醇分化20秒，(8)流水洗2分鐘，(9)伊紅染色1分鐘，(10)85％乙醇、90％乙醇、95％乙醇、無水乙醇各1分鐘，(11)二甲苯I、二甲苯II、二甲苯III各2分鐘，(12)常規(guī)樹脂封片。
3.術(shù)后4周，摘除兔眼，分離晶狀體后囊膜，取晶狀體后囊膜中央部位組織，立即放入4℃的2.5％戊二醛溶液中固定24h以上，1％鋨酸染色，618包埋液包埋，超薄切片機切片，鈾-鉛電子染色，行透射電鏡觀查后囊膜混濁情況。
具體透射電鏡樣品制備過程前固定2％戊二醛PBS固定液在4℃條件下固定2小時。
漂洗PBS緩沖液在4℃條件下洗滌兩次，每次10分鐘。
后固定1％鋨酸PBS固定液在4℃條件下固定2小時。
漂洗PBS緩沖液在4℃條件下洗滌兩次，每次10分鐘。
脫水30％-50％-70％乙醇逐及脫水(70％乙醇含3％醋酸雙氧鈾)，每次10分鐘，4℃塊染，80％-95％-100％乙醇逐及脫水，每次10分鐘。
置換環(huán)氧丙烷置換二次，每次10分鐘。
浸透618包埋液與環(huán)氧丙烷(比例1∶1)，浸透2小時。618包埋液與環(huán)氧丙烷(比例2∶1)過液，純618包埋液在37％條件下，浸透6小時。
包埋60℃烘箱內(nèi)48小時。
切片LKB V型超薄切片機切片。
染色鈾-鉛電子染色。
本發(fā)明可以抑制人工晶狀體植入術(shù)后后囊膜混濁，預(yù)防后發(fā)性白內(nèi)障，并且眼內(nèi)毒性較小。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步描述實施例1制備涂層人工晶狀體一、組分與配比殼聚糖8mg聚丙烯酸 40mg氟尿嘧啶 100mg冰醋酸400mg蒸餾水752ml氟離子5×1013ions/cm2二、制備方法(一)制備氟尿嘧啶-殼聚糖納米?；鞈乙?、制備A溶液取冰醋酸400mg溶于40ml蒸餾水，加入8mg殼聚糖粉末室溫下充分溶脹，配成0.02％的殼聚糖醋酸溶液A；2、制備B溶液取40mg聚丙烯酸溶于200ml蒸餾水配成0.02％聚丙烯酸溶液B；3、制備C溶液取100mg氟尿嘧啶溶于12ml蒸餾水，得氟尿嘧啶溶液C；4、制備納米?；鞈乙撼掷m(xù)500rpm攪拌下，向B溶液中逐滴滴加溶液C，控制滴速2ml/min，控制pH值3-7，再滴加A溶液，滴速2ml/min，反應(yīng)2小時；反應(yīng)結(jié)束后移至透析袋，兩端夾閉后置于500ml二次蒸餾水中透析5小時去除游離組分后取出。
(二)制備納米氟尿嘧啶涂層人工晶狀體1、PMMA人工晶狀體由去離子水在凈化工作臺環(huán)境下用超聲清洗機反復(fù)清洗3次。在分析純的無水乙醇中浸泡24h，干燥后再浸入表面活化劑溶液中24h，在真空干燥器內(nèi)干燥保存待用。
2、經(jīng)表面清洗活化的人工晶狀體用低能離子注入機進行氟離子雙面注入。處理的能量為70keV，氟離子的劑量為5×1013ions/cm2。
3、經(jīng)氟離子處理的人工晶狀體和氟尿嘧啶-殼聚糖納米?；鞈乙号浜辖n48h。
4、經(jīng)上述處理修飾后的人工晶狀體用去離子水在超凈工作臺上反復(fù)超聲清洗，干燥包裝后用環(huán)氧乙烷消毒保存。
實施例2實施例1制備的涂層人工晶狀體在兔眼上的應(yīng)用將實施例1制備的涂層人工晶狀體植入兔眼1.實驗設(shè)計分組，將20只兔子分別標記為A1-5、B1-5、C1-5、D1-5。
2.術(shù)前麻醉3％戊巴比妥鈉，按每千克體重1ml從耳緣靜脈定量麻醉，球結(jié)膜下注射適量利多卡因局麻，眼表滴愛爾卡因眼液表面麻醉。
3.麻醉后將兔側(cè)臥在兔臺上，手術(shù)眼均為左眼。常規(guī)消毒、鋪單，上開瞼器。11-1點作以上穹隆為基底的結(jié)膜瓣，11-1點角膜緣后1mm做反眉鞏膜瓣，瓣高2.5mm，2點處刺穿角膜，切開隧道切口至3.2mm，前房內(nèi)注入透明質(zhì)酸鈉0.2ml，撕囊鑷環(huán)形撕囊，直徑6mm，水分離。
4.Geu der超聲乳化儀超聲乳化約7秒(55％的能量)，吸出皮質(zhì)，注入透明質(zhì)酸鈉0.2ml。
A1-5植入非折疊普通人工晶狀體，于囊袋內(nèi)，調(diào)整位置居中，吸出前房內(nèi)殘余藥液及粘彈劑。
B1-5植入非折疊納米氟尿嘧啶涂層人工晶狀體，于囊袋內(nèi)，調(diào)整位置居中，吸出前房內(nèi)殘余藥液及粘彈劑。
C1-5植入非折疊普通人工晶狀體，并注入0.2ml氟尿嘧啶-殼聚糖納米顆?；鞈乙海饔?min，吸出混懸液及其他殘余藥液和粘彈劑。
D1-5植入非折疊普通人工晶狀體，并注入0.2ml的80ug/ml的氟尿嘧啶溶液，作用5min，吸出氟尿嘧啶溶液及其他殘余藥液和粘彈劑。
5.術(shù)后不包扎，常規(guī)典必殊眼液滴眼。
6.術(shù)后3天，以及1、2、4周行活體裂隙燈顯微鏡檢查前房與晶狀體后囊膜。術(shù)后12周取角膜、虹膜及部分鞏膜行光鏡檢查，取后囊膜行電鏡檢查。
光鏡結(jié)果A組角膜組織結(jié)構(gòu)完整，未見明顯異常，各層次分明，內(nèi)皮細胞有缺失。房角結(jié)構(gòu)疏松。虹膜基質(zhì)形態(tài)正常，無明顯炎癥。睫狀突上皮細胞大部分為透明空泡狀，無明顯水腫。
B組角膜、虹膜組織結(jié)構(gòu)清晰。角膜組織層次分明，無明顯異常。房角結(jié)構(gòu)因取材撕裂、缺失。虹膜及睫狀體、睫狀突組織正常，上皮細胞排列完整，基質(zhì)無水腫及異常，未見明顯炎癥細胞浸潤。
C組角膜層次欠清，有炎癥細胞浸潤及新生血管，角膜內(nèi)皮有單核樣細胞附著。房角結(jié)構(gòu)不清，缺失。虹膜血管擴張、充盈。淺層鞏膜中有彌散、灶性炎癥細胞浸潤，與睫狀突粘連的玻璃體內(nèi)見單核樣淋巴細胞。睫狀突內(nèi)有炎癥細胞浸潤，有單核樣細胞和淋巴樣細胞。
D組角膜組織層次排列正常，少許炎癥細胞浸潤。房角內(nèi)出血，有炎癥細胞，部分睫狀突上皮細胞空泡化，睫狀突血管擴張、充盈，見有少數(shù)單核樣細胞附著。
電鏡結(jié)果A組晶狀體上皮細胞呈復(fù)層、扁平狀，梭形，胞體大，細胞內(nèi)有大量的線粒體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細絲數(shù)量很多，細胞核結(jié)構(gòu)疏松，存在大量常染色質(zhì)，提示細胞增殖活躍。
B組晶狀體上皮細胞緊密排列，細胞外形不規(guī)則，細胞間距相嵌連接，細胞內(nèi)充滿細絲樣結(jié)構(gòu)，線粒體數(shù)量少，體積較小，嵴密集，其余細胞器數(shù)量較少，細胞核卵圓或不規(guī)則形，染色質(zhì)均勻，有明顯核仁，部分細胞壞死溶解。提示細胞增殖不活躍。
C組晶狀體上皮細胞呈扁平狀，細胞內(nèi)有很多擴張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，有少量線粒體，細胞核扁，提示細胞增殖不活躍。
D組晶狀體上皮細胞數(shù)量很少，散在分布在纖維膜中，細胞內(nèi)線粒體很少，細胞核固縮，提示細胞增殖不活躍。
實施例3制備涂層人工晶狀體一、組分與配比殼聚糖 80mg聚丙烯酸400mg氟尿嘧啶500mg冰醋酸 200mg蒸餾水 760ml氟離子 5×1015ions/cm2二、制備方法為(一)制備氟尿嘧啶-殼聚糖納米?；鞈乙?、制備A溶液取冰醋酸200mg溶于40ml蒸餾水，加入80mg殼聚糖粉末室溫下充分溶脹，配成0.2％的殼聚糖醋酸溶液A；2、制備B溶液取400mg聚丙烯酸溶于200ml蒸餾水配成0.2％聚丙烯酸溶液B；3、制備C溶液取500mg氟尿嘧啶溶于20ml蒸餾水，得氟尿嘧啶溶液C；4、制備納米?；鞈乙撼掷m(xù)600rpm攪拌下，向B溶液中逐滴滴加溶液C，控制滴速2ml/min，控制pH值3-7，再滴加A溶液，滴速2ml/min，反應(yīng)2小時；反應(yīng)結(jié)束后移至透析袋，兩端夾閉后置于500ml二次蒸餾水中透析5小時去除游離組分后取出。
(二)制備納米氟尿嘧啶涂層人工晶狀體1、PMMA人工晶狀體由去離子水在凈化工作臺環(huán)境下用超聲清洗機反復(fù)清洗3次。在分析純的無水乙醇中浸泡24h，干燥后再浸入表面活化劑溶液中24h，在真空干燥器內(nèi)干燥保存待用。
2、表面清洗活化的人工晶狀體用低能離子注入機進行氟離子雙面注入。處理的能量為70keV，氟離子的劑量為5×1015ions/cm2。
3、經(jīng)氟離子處理的人工晶狀體和氟尿嘧啶-殼聚糖納米粒混懸液配合浸漬48h。
4、經(jīng)上述處理修飾后的人工晶狀體用去離子水在超凈工作臺上反復(fù)超聲清洗，干燥包裝后用環(huán)氧乙烷消毒保存。
實施例4實施例3制備的涂層人工晶狀體在兔眼上的應(yīng)用將實施例3制備的涂層人工晶狀體植入兔眼1.實驗設(shè)計分組，將20只兔子分別標記為A6-10、B6-10、C6-10、D6-10。
2.術(shù)前麻醉3％戊巴比妥鈉，按每千克體重1ml從耳緣靜脈定量麻醉，球結(jié)膜下注射適量利多卡因局麻，眼表滴愛爾卡因眼液表面麻醉。
3.麻醉后將兔側(cè)臥在兔臺上，手術(shù)眼均為左眼。常規(guī)消毒、鋪單，上開瞼器。11-1點作以上穹隆為基底的結(jié)膜瓣，11-1點角膜緣后1mm做反眉鞏膜瓣，瓣高2.5mm，2點處刺穿角膜，切開隧道切口至3.2mm，前房內(nèi)注入透明質(zhì)酸鈉0.2ml，撕囊鑷環(huán)形撕囊，直徑6mm，水分離。
4.Geu der超聲乳化儀超聲乳化約7秒(55％的能量)，吸出皮質(zhì)，注入透明質(zhì)酸鈉0.2ml。
A6-10植入非折疊普通人工晶狀體，于囊袋內(nèi)，調(diào)整位置居中，吸出前房內(nèi)殘余藥液及粘彈劑。
B6-10植入非折疊納米氟尿嘧啶涂層人工晶狀體，于囊袋內(nèi)，調(diào)整位置居中，吸出前房內(nèi)殘余藥液及粘彈劑。
C6-10植入非折疊普通人工晶狀體，并注入0.2ml稀釋50倍的氟尿嘧啶-殼聚糖納米顆?；鞈乙?，作用5min，吸出混懸液及其他殘余藥液和粘彈劑。
D6-10植入非折疊普通人工晶狀體，并注入0.2ml的80ug/ml的氟尿嘧啶溶液，作用5min，吸出氟尿嘧啶溶液及其他殘余藥液和粘彈劑。
5.術(shù)后不包扎，常規(guī)典必殊眼液滴眼。
6.術(shù)后3天，以及1、2、4周行裂隙燈顯微鏡檢查。術(shù)后4周取角膜、虹膜及部分鞏膜行光鏡檢查，取后囊膜行電鏡檢查。
光鏡結(jié)果A組角膜組織結(jié)構(gòu)完整，未見明顯異常，各層次分明，內(nèi)皮細胞有缺失。房角結(jié)構(gòu)因取材人為撕裂。虹膜基質(zhì)形態(tài)正常，無明顯炎癥，僅見虹膜瞳孔區(qū)外含少許單核細胞的玻璃體粘著。睫狀突因取人工晶體斷裂破碎，上皮細胞排列基本正常，無明顯水腫、異常改變。
B組角膜、虹膜組織結(jié)構(gòu)清晰。角膜組織層次分明，無明顯異常。房角結(jié)構(gòu)撕裂、缺失。虹膜及睫狀體、睫狀突組織正常，上皮細胞排列完整，基質(zhì)無水腫及異常，胞核、胞漿比例正常，未見明顯炎癥細胞浸潤。
C組角膜層次欠清，有炎癥細胞浸潤及新生血管，角膜內(nèi)皮有單核樣細胞附著，后彈力膜后見有增生的纖維組織。房角結(jié)構(gòu)不清，缺失。虹膜血管擴張、充盈。在睫狀突周圍見有少量單核樣細胞附著，睫狀突內(nèi)有炎癥細胞浸潤，有單核樣細胞和淋巴樣細胞。
D組角膜組織層次排列正常，少許炎癥細胞浸潤。房角內(nèi)出血，有炎癥細胞，見有嗜藍染色顆粒殘留，部分睫狀突上皮細胞空泡化，睫狀突血管擴張、充盈，見有少數(shù)單核樣細胞附著。
電鏡結(jié)果A組晶狀體上皮細胞呈復(fù)層、扁平狀，梭形，胞體大，細胞內(nèi)有大量的線粒體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細絲數(shù)量很多，細胞核結(jié)構(gòu)疏松，存在大量常染色質(zhì)，提示細胞增殖活躍。
B組部分晶狀體上皮細胞脫落、丟失，余結(jié)構(gòu)完整。細胞排列緊密，呈立方形，相互間有相嵌連接，細胞內(nèi)少量線粒體，細絲結(jié)構(gòu)豐富，核呈不規(guī)則形。提示細胞增殖不活躍。。
C組晶狀體上皮細胞呈扁平狀，細胞內(nèi)有很多擴張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，有少量線粒體，細胞核扁。提示細胞增殖不活躍。
D組晶狀體上皮細胞數(shù)量很少，散在分布在纖維膜中，細胞內(nèi)線粒體很少，細胞核固縮。提示細胞增殖不活躍。
權(quán)利要求
1.一種涂層的聚甲基丙烯酸甲酯人工晶狀體，其特征在于涂層是以殼聚糖-聚丙烯酸作為載體的氟尿嘧啶納米粒制劑，該納米粒的平均粒徑為100nm～150nm。
2.一種涂層的聚甲基丙烯酸甲酯人工晶狀體的制備方法，其特征在于該方法包括首先將殼聚糖溶液、聚丙烯酸溶液和氟尿嘧啶溶液按一定比例混合、以一定速度攪拌并透析，制得殼聚糖-聚丙烯酸-氟尿嘧啶納米?；鞈乙海{米粒平均粒徑為100nm～150nm；然后將經(jīng)過表面清洗活化和離子處理過的聚甲基丙烯酸甲酯人工晶狀體浸漬在殼聚糖-聚丙烯酸-氟尿嘧啶納米?；鞈乙?6～72小時。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種涂層的聚甲基丙烯酸甲酯人工晶狀體的制備方法，其特征在于該方法由以下步驟組成I制備氟尿嘧啶-殼聚糖納米?；鞈乙?i)制備A溶液將殼聚糖粉末充分溶脹于0.5％～1％(w/v)的醋酸溶液，配成0.02％～2％(w/v)的殼聚糖溶液A；(ii)制備B溶液將聚丙烯酸加水稀釋成0.02％～2％(w/v)聚丙烯酸溶液B；(iii)制備C溶液將氟尿嘧啶加水稀釋成2.5～25mg/ml，得氟尿嘧啶溶液C；(iv)制備納米?；鞈乙撼掷m(xù)攪拌下，按配比將C溶液逐滴加入B溶液中，控制滴速1～4ml/min，控制pH值3-7，再按配比滴加A溶液，反應(yīng)30分鐘～2小時；或按配比先將A溶液滴入B溶液，再滴加C溶液，反應(yīng)條件相同；反應(yīng)結(jié)束后移至透析袋，兩端夾閉后置于500ml二次蒸餾水中透析5小時去除游離組分后取出，即制得殼聚糖-聚丙烯酸-氟尿嘧啶納米?；鞈乙?；II制備納米氟尿嘧啶涂層人工晶狀體(i)PMMA人工晶狀體由去離子水在凈化工作臺環(huán)境下用超聲清洗機反復(fù)清洗3次，在分析純的無水乙醇中浸泡24小時，干燥后再浸入表面活化劑溶液中24小時，在真空干燥器內(nèi)干燥保存待用；(ii)經(jīng)表面清洗活化的人工晶狀體用低能離子注入機進行氟離子雙面注入，處理的能量為70keV，氟離子的劑量為5×1013～5×1015ions/cm2；(iii)經(jīng)氟離子處理的人工晶狀體和氟尿嘧啶-殼聚糖納米粒混懸液配合浸漬48小時；(iv)經(jīng)上述處理修飾后的人工晶狀體用去離子水在超凈工作臺上反復(fù)超聲清洗，干燥包裝后用環(huán)氧乙烷消毒保存。
全文摘要
本發(fā)明涉及人工晶狀體。目前治療白內(nèi)障臨床常用的聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)人工晶狀體植入人體內(nèi)后常會引起炎癥反應(yīng)，后囊膜混濁也是白內(nèi)障術(shù)后的主要并發(fā)癥，為解決這些問題本發(fā)明選用抗腫瘤藥氟尿嘧啶，并根據(jù)殼聚糖納米粒在眼內(nèi)穿透力弱及結(jié)膜上皮細胞對納米粒的吞噬量與該納米粒粒徑大小有關(guān)的特點，以殼聚糖—聚丙烯酸作為載體制備氟尿嘧啶納米粒制劑，混合涂層在PMMA人工晶狀體表面。本發(fā)明還提供上述人工晶狀體的制備方法。本發(fā)明不僅增加了人工晶狀體的生物相容性、抑制人工晶狀體植入術(shù)后后囊膜混濁，還可以預(yù)防人工晶狀體植入術(shù)后前膜和后發(fā)性白內(nèi)障。
文檔編號A61L27/28GK101036804SQ200710039180
公開日2007年9月19日 申請日期2007年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月6日
發(fā)明者魏銳利, 馬曉曄, 黃瀟, 蔡季平, 劉園園, 李由, 程金偉 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)