專利名稱：：含Withanolide型化合物的免疫抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及免疫抑制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體地，是指一種含有Withanolide型化合物的免疫抑制劑。
背景技術(shù)：
：Withanolide類型化合物是一類具有28個碳原子的麥角甾烷型的化合物，其特有的結(jié)構(gòu)是22位與26位碳連接形成一個5內(nèi)酯環(huán)的側(cè)鏈(參見下列W池anolide骨架結(jié)構(gòu))。fghWithanolide不僅可以用來表示麥角甾烷型的22,26-內(nèi)酯，也可以用來表示所有生源相關(guān)的化合物。前者是經(jīng)典型的Withanolide型化合物，后者是非經(jīng)典型的Withanolide型化合物。這些化合物主要分布在茄科的幾個屬中，如Physalis,Withania,Datura,Jaborosa，Dunalia,Salpichroa,Deprea，Solarium,Vassobia,Exodeconus,Hyoscyamus,Iochroma,Discopodium等(P.Chirsten.Withanolide,Pharm.zeit.,1989，18，129-139.和E.Glotter.Withanolidesandrelatedergostane-typesteroids,Nat.Prod.Reports,1991，8,415-440.)。Withanolide型化合物的生物活性多種多樣，包括抗菌，抗炎，抗病毒，抗微生物，抗氧化，抗腫瘤，抗驚厥，免疫抑制，細(xì)胞毒，以及乙酰膽堿酯酶的抑制活性(A.S.Veleiro,J.C.Oberti,G.Burton,in'StudiesinNatural'ProductsChemistry,(PartL)BioactiveNaturalProducts',Ed.Atta-ur-Rahman,Elsevier,Amsterdam,2005,Vol.32.p.1019.)。通過文獻(xiàn)調(diào)研，發(fā)現(xiàn)我國的一些茄科植物如酸漿(尸/^a/ka/fete"gO和5苦藤(/^"fl/"a"gw/ato)中含有大量的Withanolide型化合物，而這些植物藥在民間常用來作為抗炎的藥物，治療一些關(guān)節(jié)炎等疾病(中國科學(xué)院植物研究所等，中國植物志，第67分巻第1分冊，北京，科學(xué)出版社，1978,53-59)。但是對于這些植物成分抗炎的作用機理以及具體含有的Withanolide型化合物、以及這些化合物各自的特性，均不清楚。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的主要目的就是針對以上存在的問題與不足，提供一種含有Withanolide型化合物的免疫抑制劑，該免疫抑制劑具有較強的免疫抑制作用，對過度增值的T、B淋巴細(xì)胞周期產(chǎn)生阻遏作用，可用于以治療自身免疫碑病及相關(guān)疾病。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下本發(fā)明首先提供了一種含有Withanolide型化合物的免疫抑制劑，其特點是，所述免疫抑制劑包括如下通式I和/或通式II所示化合物或其光學(xué)異構(gòu)體其中，Rl、R2、R3、R4、R5、R6、R7選自H、OH、O-acyl、OMe、OEt、OnPr、Oipr、F、Cl、Br、NH2、N02或CN,其中5,6位為環(huán)氧或雙鍵，通式I中14,27位醚鍵連接或斷開，通式II中14,15位和16,17位為環(huán)氧和雙4建。所述通式I所示化合物包括PhysalinA,PhysalinB,PhysalinD,PhysalinH,2,3-DihydrophysalinD,13-AcetoxyphysalinD，PhysalinL,PhysalinN，Physalin0,IsophysalinB和IsophysalinG的一種或幾種所述通式II所示化合物包括PhysagulinL，PhysagulinM,PhysagulinN,PhysagulinJ,PhysagulinO,WithagulatinA,PhysagulinA,Withaminimin,PhysagulinB,PhysagulinC,Pubesenolide,PhysagulinI,PhysagulinF和PhysagulinK的一種或幾種OHPhysagulinOHPhyssgulinMR=H(PhysagulinN>R=Ac(PhysagulinJ)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>所述通式I所示化合物為PhysalinH,所述通式II所示化合物為PhysagulinB和/或PhysagulinI。本發(fā)明還提供了一種免疫抑制劑，其特點是，所述免疫抑制劑包括植物提取物，所述植物提取物含有上述的通式I或通式II所示的化合物或其光學(xué)異構(gòu)體。所述植物提取物為苦藤地上部分提取物或酸漿地上部分提取物。所述免疫抑制劑在制備治療自身免疫疾病的藥物中的應(yīng)用。所述自身免疫疾病為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性肝炎、胰島素依賴性糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、多發(fā)性硬化、硬皮病、重癥肌無力、多泉肌炎、自身免疫性血細(xì)胞減少癥、脈管炎綜合癥或系統(tǒng)性紅斑狼疳。所述免疫抑制劑在制備治療炎癥反應(yīng)、纖維化或由自身免役疾病及相關(guān)疾病所致具有組織損傷或感染的功能異常、過敏性疾病、由骨髓(造血干細(xì)胞)移植所致的移植物抗宿主疾病的藥物中的應(yīng)用。所述的過敏性疾病為支氣管哮喘、過敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎或花粉病。本發(fā)明的有益效果如下1.本發(fā)明的含有withanolide型化合物的免疫抑制劑，由于其含有的withanolide型化合物具有較強的免疫抑制作用，對過度增值的T、B淋巴細(xì)胞周期產(chǎn)生阻遏作用，尤其是其中的化合物PhysalinH,PhysagulinB和PhysagulinI顯示出環(huán)苞菌素(CsA)的免疫抑制活性。2.本發(fā)明的含有withanolide型化合物的免疫抑制劑真有低毒和較強的免疫抑制活性的特點。3.本發(fā)明的withanolide型化合物單體的分離方法簡便、成本低。圖l是測定化合物PhysagulinL的HMBC相關(guān)圖。圖2是測定化合物PhysagulinM的HMBC相關(guān)圖。圖3是測定化合物PhysagulinN的HMBC相關(guān)圖。圖4是測定化合物PhysagulinO的HMBC相關(guān)圖。具體實施例方式中國生長的一些茄科酸漿屬植物，例如酸漿(Physalisallelengi)和苦藤(Physalisangulata)具有清熱解毒，利咽喉，通利二便之功效，主治咽喉腫痛，牙齦胂脹，小便淋澀，大便不通，黃水瘡，濕務(wù)(《中華本草》編委會編.中華本草[M])。本發(fā)明首先對漿、苦藤的地上部分進(jìn)行提取，分別獲得酸漿提取物和苦藤提取物，對酸漿地上部分進(jìn)行分離得到ll個physalin骨架的化合物，分別是PhysalinA，PhysalinB,PhysalinD，PhysalinH,2,3-DihydrophysalinD,13-AcetoxyphysalinD,PhysalinL,PhysalinN,PhysalinO,IsophysalinB,IsophysalinG;對苦藤地上部分分離得到14個經(jīng)典withanolide骨架的化合物，分別是PhysagulinL，PhysagulinM,PhysagulinN，PhysagulinJ,PhysagulinO,WithagulatinA，PhysagulinA，Withaminimin,PhysagulinB，PhysagulinC,Pubesenolide,PhysagulinI,PhysagulinF,PhysagulinK。對上述提取物和化合物進(jìn)行免疫生物活性分析，發(fā)現(xiàn)上述物質(zhì)均能有效抑制T、9B細(xì)胞增殖，尤其是化合物PhysalinH,PhysagulinB和PhysagulinI具有優(yōu)于環(huán)苞菌素的活性。因此，上述化合物或提取物均可以用于制備免疫抑制劑藥物，酸漿提取物和苦藤提取物可以是凍干粉末形式或液體形式。本發(fā)明的Withanolide成分的免疫抑制活性，低毒，適合于人和哺乳類動物經(jīng)口或非經(jīng)口給藥。本發(fā)明提供的Withanolide成分的免疫抑制活性,在劑型方面無特定的限制，可作為經(jīng)口給藥的散劑，丸劑，片劑，膠嚢劑等固型制劑，也可作為非經(jīng)口給藥的外用劑，軟膏，貼敷劑，注射劑。本發(fā)明提供的W池anolide成分的免疫抑制活性，通常能與不影響藥理學(xué)作用的輔助料配合制成經(jīng)口或非經(jīng)口給藥的制劑。本發(fā)明提供的Withanolide成分的免疫抑制活性，可經(jīng)水溶劑(如蒸餾水)，水溶性制劑(如生理鹽水)，脂溶劑(如胡麻油)等溶劑用常規(guī)法調(diào)制。本發(fā)明提供的Withanolide成分的免疫抑制活性，通常能與藥理學(xué)上允許的添加成分(稀釋劑，著色劑，安定劑，界面活性劑，助溶劑，緩沖劑，矯味劑，香料，保存劑，糖衣劑)相組合，用于經(jīng)口或非經(jīng)口劑型。本發(fā)明提供的Withanolide成分的免疫抑制活性，在劑型上通常能與藥理學(xué)上允許的稀釋成分和成型成分相組合，用于經(jīng)口或非經(jīng)口劑型。本發(fā)明提供的Withanolide成分的免疫抑制活性，是指片劑，丸劑，顆粒劑，散劑或膠囊。非經(jīng)口劑型是指靜脈注射劑，肌肉注射劑，皮下注射劑，浴劑，直腸，肛門或陰道給藥。為進(jìn)一步了解本發(fā)明，下面結(jié)合具體實施例作進(jìn)一步說明。實施例l總Withanolide化合物篩選樣品制備1.酸漿總Withanolide化合物篩選樣品制備酸漿500g用85。/。乙醇回流提取三次，濃縮，通過大孔吸附樹脂(D101型)，先用10%蒸餾水洗、然后用75%乙醇洗脫，75%乙醇洗脫部位減壓濃縮得送體外生物學(xué)評價樣品l(54g)。2.苦藤總withanolide化合物篩選樣品制備苦藏500g用85。/。乙醇回流提取三次，濃縮，通過大孔吸附樹脂(D101型)，先用蒸餾水洗、然后用60%乙醇洗脫，60%乙醇洗脫部位減壓濃縮得送體外生物學(xué)評價樣10品2(卯g)實施例2酸漿中Withanolide型化合物的分離酸漿(i^"afe)地上部采自重慶市南川縣，經(jīng)重慶市植物園易思榮老師采集并鑒定為茄科植物小酸漿i^^a/ha〃e/e"gZ。標(biāo)本存放于上海中藥現(xiàn)代化研究中心。酸漿地上部分(5.0Kg)，用3倍量乙醇冷浸提取3次，每次2天，合并濾液，減壓濃縮得浸膏(1.8kg),用少量水溶解，用氯仿萃取，得到氯仿部分(197g),氯仿部分上D-lOl型大孔樹脂，分別用25%,75%,95%乙醇洗脫得3個部位(^V.爿-C)。Fr5(24.4g)部位進(jìn)行MCI柱層析(MC7ge/C/Z尸20PH20/Me2CO1:1)得到4個部位(Fr及7-)。5.7ODS柱層析(i尸-M;MeOH/H2040:60)得到PhysalinD(37mg)，2，3-Dihydrophysalin(14mg)和PhysalinH(40mg)。5.2ODS柱層析(及尸-7S;MeOH/H2050:50)得到PhysalinA(19mg)，IsohysalinB(25mg)和IsophysalinG(34mg)。及3ODS柱層析(及尸-M;MeOH/H2060:40)得到13-AcetoxylphysalinD(14mg),PhysalinL(29mg),PhysalinN(14mg)和PhysalinO(27mg)。Fr.￡j凝膠柱層析(Se;^attecMeOH)PhysalinB(120mg)。上述分離產(chǎn)物為ll個physalin骨架的化合物，其結(jié)構(gòu)通過iHNMR和"C-NMR確定，測定數(shù)據(jù)與結(jié)構(gòu)式分別如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>lsophysalinBlsophysalinG化合物PhysalinA白色無定型粉末，EI-MS:526,分子式C28H30O10。'H-NMR(DMSO-A):(55.84(1H,必,《/=2.5,10.0Hz,H-2)，6.79(1H,必《/=2.5,4.5，10.0Hz,H-3),2.93(1H，必,J=4.6，22.1Hz,H-4a),3.26(1H,《/=22.1Hz,H曙4b),5.75(1H,cW，J=5.9，2.0Hz，H-6),1.59(3H,H3-19),1.93(3H,s，H3-21)，4.56(1H,f，/=3.1Hz,H-22),6.67(1H,H-27a)，5.74(1H，s，H-27b),1.16(3H，H3-28)。13C-NMR(DMSO-4):3203.3(s,C-l),127.4(《C-2),145.7(《C-3),32.7C-4),140.10,C-5),126.1W，C-6)，63.1(《C-7),46.3(《C隱8)，28.7(c/，C-9)，54,1(s，C國IO),24.1"C-ll),29.50,C-12),82.6"C-13),101.8(s,C-14),211.1(、C-15),53.7(《C-16),82.6(s,C-17),172.2(s,C-18),26.9(g,C-19),79.9(s,C-20)，21.5(仏C-21),76.8(《C-22),31.4(f,C-23),36.5"C-24),139.1(《C-25),163.8(s,C-26)，133.5(f,C-27),15.5(仏C-28)。其'HNMR及13CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Glotter,E.;Kirson，I.;Abraham,A.;Sethi,P.D.;Subramanian,S.S./C/ze肌Pwib'w7>ww.71975,1370-1374)才艮道的PhysalinA波語數(shù)據(jù)一致，故該化合物被確定為PhysalinA?；衔颬hysalinB白色無定型粉末，EI-MS:510,分子式C28H30O9。丄H-NMR(DMSO-^):35.80(1H,必，J=2.2，10.0Hz,H匿2)，6.89(1H，d必，J=2.2，4.9，10.0Hz,H陽3),2.88(1H,必,/=4.9,20.1Hz,H-4a)，3.26(1H,d,J=20.1Hz，H-4b)，5.59(1H,《5.9Hz,H-6),1.09(3H，s,H3-19)，4.56(1H，《/=3.1,2.2Hz，H-22),3.61(1H，必，/=14.3,1.4Hz，H-27a),4.27(1H,《/=14.3,4.2Hz,H-27b),1.18(3H,s，H3-28)。13C-NMR(DMSO-份3202.3(;y，C隱l)，126.7(《C-2)，146.0(4C-3),32.3(,，C-4),135.5C-5)，123.4(《C-6),24.4"C-7),40.2(《C-8),33.1(《C-9),52.0C-10),24.20,C-ll),25.60，C-12)，78.20，C-13),106.3(s，C-14),209.40,C-15)，54.2(>/,C-16),80.7C-17),171.8Cs,C-18),16.8(仏C-19),80.3C-20),21.7(《，C-21),76.3(《C-22),31.4(,,C-23),30.50,C曙24),49.4(《C-25),167.0(s,C-26),60.60,C-27)，24.4(仏C隱28)。其！HNMR及'3CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Glotter，E.;Kirson,I.;Abraham,A.;Sethi,P.D.;Subramanian,S.S./Soc.，i^A/w71975,1370-1374)報道的PhysalinB波語數(shù)據(jù)一致，故該化合物被確定為PhysalinB?；衔颬hysalinD白色無定型粉末，EI-MS:544，分子式C^H^O^工H隱NMR(DMSO-4):<55.71(1H，浙J=2.0，10.2Hz,H-2)，6.63(IH,械/=2.0，4.9,10.2Hz,H-3)，1.98(IH,必,/=4.9,20.1Hz,H-4a)，3.11(IH,6r《/=20.1Hz,H國4b),4.25(s,5-OH),3.49(IH,w,H-6),4.90(J,/OH,6=4.2Hz,6-OH),5.77(s,13-OH),1.11(3H,H3-19),1.82(3H,&H3-21),4.56(1H，《/=3.1,2.2Hz，H-22),3.58(IH,13.3，H-27a),4.26(IH,必，《/=13.3,4.6Hz,H-27b),1.18(3H,H3-28)。13C-NMR(DMSO-A):<5204.3(s,C-1),127.1(《C-2)，142.9(《C-3)，36.9C-4),82.3(s，C-5),72.5(4C-6),26.7(f,C-7),38.，,C-8),30.9(《C-9)，54.3(s,C-10),24.2C-ll),25.6C-12),78.3C-13),106.3(s,C-14),210.0(s,C-15)，54.2(《C-16),80.7(s,C-17),171.8Cs,C-18),14.0(仏C-19),80.3(s，C-20),21.7(《，C-21),76.3(《C-22),31.4(f，C-23),30.5C-24),49.4(《C-25),167.00,C-26),60.6(f，C-27)，24.4(《,C-28)。其iHNMR及^CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Glotter,E.;Kirson,I.;Abraham,A.;Sethi,P.D.;Subramanian,S.S./Cfe肌Soc.,Perfe'w7Va肌71975,1370-1374)報道的PhysalinD波譜數(shù)據(jù)一致，故該化合物被確定為PhysalinD。化合物PhysalinH白色無定型粉末，EI陽MS:562,分子式C28H31ClOi0。^-NMR(DMSO-A):35.83(1H，瓶2.5,10.0Hz,H-2),6.79(1H,械/=2.3，4.9,10.0Hz,H-3),2.46(1H,必,/=4.9,21.1Hz,H-4a),3.48(1H,《《/=21.1Hz,H-4b),3.89(1H,成/=5.2,3.0,3.1Hz,H-6)，5.69(《Joh'6=5.2Hz,6-OH),6.060,13-OH),1.23(3H，H3-19)，1.82(3H，s，H3-21)，4.56(1H，《/=3.1，2.2Hz,H-22)3.60(1H，必，《/=13.3，1.2Hz,H-27a)，4.27(1H,13.3,4.6Hz,H-27b),1.18(3H,aH3-28)。13C-NMR(DMSOO:3200.3C,C-l),127.1(4C-2),142.9(《C-3),36.90,C-4),82.3C-5)，72.5(《C-6),26.7(,,C-7),38.4(《C-8),30.9(《C-9)，54.3(s,C-IO)，24.2C-ll),25.6(,,C-12),78.3(s,C-13),106.30,C-14)，209.4(、C-15),54.2(i/，C-16)，80.7(s,C-17)，171.8(s,C-18),14.0(《，C-19),80.3O，C-20),21.7(仏C-21),76.3(《C-22)，31.4(/，C-23),30.5Cj,C-24),49.4(c/，C-25),167.0(s，C-26),60.6(r,C-27),24.4(g，C-28)。其iHNMR及"CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Glotter,E.;Kirson,L;Abraham,A.;Sethi,P.D.;Subramanian,S.S.■/CTe附.Soc.，7>ww./1975,1370-1374)報道的PhysalinH波語數(shù)據(jù)一致，故該化合物被確定為PhysalinH。化合物2，3誦DihydrophysalinD白色無定型粉末，EI隱MS:546,分子式C^H^Ouoi關(guān)MR(函SO-A):(55.71(1H,必,/=2.0,10.2Hz,H-2),6.63(1H,認(rèn)，/=2.0,4.9，10.2Hz,H-3),1.98(1H，必，/=4.9,20.1Hz，H-4a)，3.11(1H，6r《/=20.1Hz，H-4b)，4.255-OH),3.49(1H,H-6),4.90(《JoH,6=4.2Hz，6-OH),5.77(s,13-OH),1.11(3H，&H3-19),1.82(3H,H3-21),4.56(1H,/=3.1，2.2Hz,H-22),3.58(1H,《/=13.3,H-27a),4.26(1H,/=13.3,4.6Hz,H-27b),1.18(3H,H3-28)。13C-NMR(DMSOO:5215.3(s,C-l)，29.7C-2),25.0"C-3)，36.90,C-4),80.5(s,C-5),73.4C-6),26,7C-7)，38.0(4C-8)，30.9(《C-9)，56,9(s,C-10),24.5"C-ll)，25.60,C-12),77.60，C-13),107.00，C-14),209.8(s，C-15)，54.2(《C-16),78.9(、C-17),171.9C-18),14.6(仏C-19),80.3(s,C-20),21.7(仏C-21),76.3(《C-22),31.4"C-23),30.5C-24),49.4(《C-25),167.40,C-26)，60.6(f，C-27),24.4(仏C-28)。其1^111及。CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Glotter,E.;Kirson,I.;Abraham,A.;Sethi,P.D.;Subramanian,S.S.乂C/ze附.Sbc.，Perib'"/1975，1370-1374)報道的2，3-DihydrophysalinD波謙數(shù)據(jù)一致，故該化合物被確定為2,3-DihydrophysalinD。14化合物13-AcetoxylphysalinD白色無定型粉末，EI-MS:586，分子式C30H34O12。iH-NMR(DMSOO:<55.71(1H，瓶《/=2.0,10.2Hz，H-2),6.63(1H，械J=2.0，4.9，10.2Hz，H-3),1.98(IH，必,/=4.9,20.1Hz,H-4a)，3.11(IH，《■/=20.1Hz，H-4b),4.25(■s,5-OH),3.49(1H,附，H-6),4.90(《Joh,6=4.2Hz,6-OH),5.77(s，13-OH),1.26(3H，H3-19),1.99(3H,H3-21),4.56(1H，《</=3.1，2.2Hz，H-22),3.58(IH，《/=13.3,H-27a),4.26(1H,必,J=13.3,4.6Hz,H-27b),1.26(3H，H3-28)，2.12(3H,OAc)。13C-NMR(DMSO-4):3204.3(s，C-l),127.1(《C-2),142.9(《C-3),36.9(/,C隱4)，82.3(s,C-5),72.5(AC陽6),26.70,C-7)，38.4(d,C-8)，30.9(《C-9)，54.3(s，C-IO)，24.20，C-ll)，25.6(/，C-12),78.3(;y，C-13),106.3(s，C-14),210.0(;，C-15)，54.2(《C-16)，80.7(s,C-17),171.8Cs，C-18),14.1(《，C-l9),80.3O,C-20),21.6(《，C-21),76.3(d,C-22),31.40，C-23)，30.5(s,C-24),49.4(《C-25),167.0(s，C-26),60.6(,C-27)，24.1(《，C-28),170.00，OAc),21.5(仏OAc)。其！HNMR及13CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Glotter,E.;Kirson，I.;Abraham,A.;Sethi,P.D.;Subramanian,S.S.■/Soc.，rra肌71975，1370-1374)報道的PhysalinD波鐠數(shù)據(jù)一致，故該化合物被確定為13-AcetoxylphysalinD?；衔颬hysalinL白色無定型粉末，EI-MS:528,分子式C28H32O10。!H-NMR(DMSO-&):(55.86(1H，6r《/=10.0Hz,H-3),6.13(1H,《/=10.0Hz,H-4),5.75(IH，&《《/=5.1Hz，H-6),4.60(1H,附，H-7)，5.07(1H，《/=4.2Hz,OH陽7)，5.07(1H,&OH-14),1.15(3H,H3-19)，1.70(3H,H3-21),4.57(1H，zn，H-22),1.17(3H,d，/=8.2Hz，H3-27),1.32(3H，H3-28)。13C-NMR(DMSO-似(5209.2(s,C-l)，127.4(AC-2),126.3(t/，C-3),128.3"C-4),142.90,C-5),1228.0(《C-6),61,8(rf，C-7),45.5(《C-8)，28.5(d，C-9)，56.30,C-10),24.1(f,C-ll)，29.80，C-12),82.6(s，C-13),101.3(s，C-14),216.0(s,C-15),53.7(d，C-16),82.60,C-17)，172.20,C-18),21.6(《，C-19),79.9C-20),25.5(《，C-21),76.8(d，C-22)，26.3(，C-23),35.00,C-24),139.1(《C-25),172.0(s,C-26),17.0(g,C-27),15.9(《，C-28)。15其'HNMR及"CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Kawai，M.etal.,Anewphysalinfrom尸/^^tofl/fefewg/:structureofphysalinL尸/^toc/^m/W^y，1987,26，3313)才艮道的PhysalinL波譜數(shù)據(jù)一致，故該化合物被確定為PhysalinL?；衔颬hysalinN白色無定型粉末，EI-MS:526,分子式C28H30O10。iH隱NMR(DMSO-A):35.84(1H，cW,/=2.1,10.0Hz,H-2),6.94(1H,^W，/=2.1,5.3，10.0Hz,H-3),2.89(1H,w,H-4a)，3.29(1H,m,H-4b)，5.69(1H，AJ"=5.9Hz,H-6),4.35(1H,w,H-7),3.32(1H,附，7-OH),1.08(3H,s，H3-19),1.76(3H,H3-21),4.61(1H,附，H-22),3.67(1H,浙/=133,1.4Hz，H-27a),4.33(1H，《/=133,4.2Hz,H-27b),1.18(3H,&H3-28)。13C-NMR(DMSO-似(5201.4(s,C-l),126.7(c/，C-2)，146.0(d,C-3)，32.3(f,C-4),139.0C,C-5),125.4(《C-6),61.4(《C-7),44.2(《C-8),27.5(《C-9),52.6C-10),24.0(/,C-ll),25.60，C-12),78.00,C-13)，106.30，C，14),208.50,C-15),52.8(《C-16),80.90,C-17),171.6(s，C-18),15.5(g,C-19),80.30,C-20),21.7(9,C-21),76.1(AC-22),31.2(,,C-23),30.50，C-24),49.2(AC-25),167.20,C-26),61.00,C-27),24.2(ac-28)。其iHNMR及"CNMRit據(jù)與文獻(xiàn)(MasaoKawai,ToichiOgura,BunshoMakino,AkihideMatsumoto,HatsuoYamamura,YasuoButsuganandMitsuoHayashi,PhysalinsNandOfrom"/fefe"g/尸/^/oc/^w/Wo;,1992，31，￥299-4302)才艮道的PhysalinN波譜數(shù)據(jù)一致，故該化合物被確定為PhysalinN。化合物PhysalinO白色無定型粉末，EI-MS:528,分子式C28H32O10。'H-畫R(DMSO-A):35.84(1H,瓶/=2.5,10.0Hz,H-2),6.95(1H,械2.5,5.0,10.0Hz,H-3),2.93(1H,^W,/=4.6,22.1Hz,H-4a)，3.26(1H,/=22.1Hz，H-4b)，5.75(1H,d《/=5.9,2.0Hz,H-6)，4.52(1H,dc/，/=6.5，4.5Hz,H-7),5.00(1H,s，OH-7),1.03(3H,;y,H3-19),1.68(3H，H3-21),4.56(1H,/=3.1Hz，H-22),1.15(3H,H3-27),1.31(3H,s,H3-28)。13C-NMR(DMSO-似<5202.1C-l),126.9(《C國2),146.6(《C-3),32.0(,,C-4)，139.5(s,C-5),127.3(d，C國6),61.4(J，C-7),46.2(4C-8),29.0(AC-9),54.10，C-10),23.4"C-ll),29.6"C-12),82.10，C-13),101.0C-14),216.00,C-15)，53.2(《C-16),79.40,C-17),171.9(;y，C-18),14.1(《，C-19),82.10，C-20),21.3(《，C-21)，76.2W，C隱22)，26.0(f，C-23),34.6C-24)，40.7(《C-25),172.0(s,C-26),16.8(《，C-27),25.1(《，C-28)。其'HNMR及^CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(Glotter,E.;Kirson,I.;Abraham,A.;Sethi,P.D.;Subramanian，S.S.C/z綴Soc.，尸dz'"7>纖.71975，1370-1374)報道的PhysalinO波語數(shù)據(jù)一致，故該化合物被確定為PhysalinO?；衔颕sophysalinB白色無定型粉末，EI-MS:510,分子式C28H30O9。!H-NMR(DMSO-A):32.79(1H,瓶/=20.2,4.7Hz,H-2a)，3.32(1H,20.2Hz，H-2b)，5.60(1H,附，H-3)，6.07(1H,瓶/=9.7,H-4)，5.68(1H,6r1.27(3H,H3-19),1.98(3H,&H3-21),4.56(1H,>/=3.5,H-22)，3.77(1H,瓶/=13.3,H-27a),4.54(1H,13.3，4.2Hz,H-27b)，1.33(3H,s，H3-28)。13C-NMR(DMSO-A):5208.0C國l)，39.4(/，C-2),121.3(d,C-3),126.5W，C-4)，139.50,C陽5),128.8^，C-6),25.8"C-7),39.2(c，C-8),33.1(《C國9),56.4"C-10),24.50,C-ll),26.5"C-12),79.8(s，C-13),107.70,C」14),214.1Cs,C-15),55.0C-16)，80.3(、C-17),172.1C-18),25.3(《,C-19),81.00,C-20)，21.4(《，C-21),76,9(AC-22),32.0(f,C-23),31.2(s,C-24),51.0(《C-25),166.6C,C-26)，60.60,C-27),19.3(《，C-28)。其iHNMR及"CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(ReikoSunayama，MasanoriKuroyanagi,PhysalinandNeophysalinsfroma/fe^ewg/vw.y^awc/ze"andtheirdifferentiationinducingactivity,P/^toc/^w/Wo^,1993,34,529-533)才艮道的IsophysalinB波語數(shù)據(jù)一致，故該化合物被確定為IsophysalinB。化合物IsophysalinG白色無定型粉末，EI-MS:526，分子式C28H30O10。iH-NMR(CDC13):<53.12(1H,瓶J-7.2,12.5Hz,H曙2a),2.87(1H，附，H-2b),4.69(1H,m,H-3),5.58(1H，43.5Hz，H-4)，6.19(1H，《/=10Hz，H-6),6.13(1H,cW,/17=10.4,2.5Hz,H-7),1.40(3H,;y，H3-19),1.95(3H,H3-21),4.54(1H,brt，/=2.5Hz，H-22),3.82(1H,瓶《/=13.5Hz，H-27a),4.61(1H,《13.5,4.5Hz,H-27b),1.27(3H,s,H3-28)。13C-NMR(CDC13):S207.7(s,C-l),44.7(f,C-2),69.0"C曙3)，126.6(d，C-4),141.2(s,C-5),128.0(i/,C陽6)，126.0(d，C-7),44.2C-8),32.5(AC-9)，55.2(、C-10),26.1(,，C-ll),25.6(,,C-12),81.0C-13),106.3(;,C-14)，213.4C-15),51.2W,C-16),80.70,C-17),172.20，C-18)，24.9(《，C-19)，79.80，C-20)，21.2(仏C-21),77.0W，C-22)，32.40,C-23)，31.10,C-24),50.6(《C-25),167.20,C-26),61.1(,,C-27)，20.3(《，C-28)。其&NMR及"CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(ReikoSunayama，MasanoriKuroyanagi，PhysalinandNeophysalinsfrom尸/^a/z'51a/AeA:ewg/var_/h2wc/z"/andtheirdifferentiationinducingactivity,P/y^oc/e/w^o;,1993，34，529-533)報道的IsophysalinG波譜數(shù)據(jù)一致，故該化合物被確定為IsophysalinG。實施例3苦藏中Withanolide型化合物的分離苦藤(P/^w/Z;yiwgw/fl/flL.)地上部采自重慶市南川縣，經(jīng)重慶市植物園的易思榮老師采集并鑒定為茄科植物小酸漿/^"a/z's朋gw/fl/aL.標(biāo)本存放于上海中藥現(xiàn)代化研究中心。5.0Kg苦藤(P/y^fl/"a"gw/atoL.)地上部分，用85%曱醇熱提取三次，得浸膏0.9Kg,聚酰胺柱層析分離，100%蒸餾水洗脫部分，60%甲醇洗脫部分，80%甲醇洗脫部分(含葉綠素)，60%曱醇洗脫部分(921g)硅膠褲層析(石油醚/丙酮5:1-1:1)得到四個部位(部位A-D)，部位A經(jīng)ODS(C-18)枉層析(曱醇/水85:15)以及SephadaxLH-20純化(氯仿/曱醇)，得化合物PhysagilinA(135mg)和WithagulatinA(124mg);部位B經(jīng)ODS(C-18)柱層析(曱醇/水78:22)以及SephadaxLH-20純化(氯仿/甲醇),得化合物PhysagulinsL(55mg),PhysagulinB(27mg),PhysagulinC(23mg)和PhysagulinI(31mg);部位C經(jīng)ODS(C-18)柱層析(曱醇/水65:35)以及SephadaxLH-20純化(甲醇)，得化合物PhysagulinsM(27mg),PhysagulinJ(12mg)，Withaminimin(90mg)Pubesenolide(46mg)和PhysagulinF(47mg);部位A經(jīng)ODS(C-18)柱層析(曱醇/水50:50)以及SephadaxLH-20純化(甲醇)，得化合物PhysagulinsN(33mg)，PhysagulinsO(32mg)，PhysagulinK(87mg)。上述分離產(chǎn)物為14個經(jīng)典withanolide骨架的化合物，通過^NMR和UC-NMR確定其結(jié)構(gòu)，測定數(shù)據(jù)與結(jié)構(gòu)式分別如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>化合物PhysagulinsL白色不定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及甲醇。根據(jù)其質(zhì)譜m/z510.2637,得到其分子式C30H38O7。紅外色譜提示有一個a，,不飽和&內(nèi)酯(1731cm-1)和一個ct,/-不飽和酮(1712cnT1)。通過iH-NMR和"C-NMR提示是一個經(jīng)典的Withanolides:Physagulin類化合物。通過&,13C-NMR#(表1和表2)提示有六個曱基的存在，其中一個與叔碳相連的曱基[1.08(A^6.9)]'另五個與季碳相連(1H,1.72，s;1H,1.85,s;1H,1.92，s;1H,1.13,s;1H,1.28，s),從DEPT語可以看出四個亞曱基[C(34.3),C(21.2)，C(38.2),C(32.0)],—個連0的季碳[C(82.4)],三個羰基[C(206.2),C(167.8),C(169.7)]，三個連0的次曱基[C(72.8),C(83.6),C(78.2)]?；衔颬hysagulinsL和化合物withaminimin比較，在C-E環(huán)上的信號兩者都很接近，提示化合物PhysagulinsL與withaminimin是A、B環(huán)的不同。從偶合常數(shù)J值可知雙鍵信號36.92(dc/,/=9.7,6.0Hz)與其它雙鍵信號36.12(《/=6.0Hz)和35.92/=9.7Hz)相關(guān)。乂人HMQC、HMQC鐠可知36.12(^，J:6.0Hz)與C-2，C-6和C-10相關(guān)(圖l),提示".92(瓶J=9.7，6.0Hz)是H-C(4);<56.92(瓶/=9.7,6.0Hz)與C-l和C-5相關(guān),提示36.92(瓶/=9.7，6.0Hz)是H-C(3),所以從上可以推測出雙鍵位置在C-2和C-4。NOE確定了該化合物的相對構(gòu)型Me(18)與H—C(8),Me(19)與H—C(8),Me(19)與H-C(6)提示H-C(8)和H-C(6)都是A構(gòu)型。從文獻(xiàn)上可知，如果H-C(22)是a-構(gòu)型，則J(22,23)分別是0.5-4Hz和9-13.8Hz,如果是盡構(gòu)型，則J(22，23)分別是2.5—7Hz和2-5Hz。因此(《/=3.2,13.0Hz)提示H-C(22)是a構(gòu)型；15a-乙?；?14"-羥基或者是羥基-14"-羥基的話C(14，15)化學(xué)位移值分別是76-80和80-88ppm,另一方面15a-乙?；?14ct-羥基化學(xué)位移值分別是83-84和82-83ppm[3,7，ll]，從C-15("3.6)和C-14((582.4)可知化合物含有15a-乙酰基羥基。故化合物的結(jié)構(gòu)被確定為(22i)-15a-acetoxy-6ct,14a-dihydroxy-l隱oxo-witha-2,4,16,24-tetraenolide,被命名為PhysagulinL。表lPhysagulinsL,PhysagulinsM,PhysagulinsN和PhysagulinsO的氫語數(shù)據(jù)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>表2.化合物PhysagulinL,M,N,O，K,J以及Withaminimin的i3C-NMR數(shù)據(jù)(100MHz)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>)MeasuredinCDC13.b)MeasuredinCDC13/CD30D，95:5(v/v).化合物PhysagulinsM白色無定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。根據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù)確定化合物PhysagulinsM的分子式為C3oH4oOs。與化合物PhysagulinK比較化合物PhysagulinJ中的亞甲基(336.8)和連氧季碳(<577.3),被化合物PhysagulinsM中的雙鍵(3117.8，157.4)取代。與化合物PhysagulinsM比較化合物多了一根雙鍵少了一個羥基。從HMQC、HMBC可知H-C(4)(".12W，J^5.9Hz)與C-6(373.6)和C-IO(353.7)相關(guān)，C-5(J157.4)與H國C(19)(31.42W)相關(guān)(圖2)，提示C-4、C-5有雙鍵。因為化合物PhysagulinsM和化合物PhysagulinJ在C-E環(huán)的信號很相近，所以14，17位上的羥基和H-C(15)都是^。C-150587.0)和C-14(379.0)也證實了是15a-乙?；?14yff-羥基。故化合物PhysagulinsM結(jié)構(gòu)#皮確定為(22及)陽15a-acetoxy-6,14A17々-trihydroxy-l-oxo-witha-2，4,24-trienolide，4皮命名為PhysagulinM?；衔颬hysagulinsN白色無定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。根據(jù)質(zhì)鐠數(shù)據(jù)確定化合物PhysagulinsN的分子式為C28H4007。從譜圖上可以看出，有6個甲基，6個亞甲基[C(34.6)，C(35.9),C(23.2)，C(42.7)，C(29.3)，C(27.4)]，2個連0的季碳[C(76.6),C(84.3)],2個羰基[C(205.4),C(167.9)],3個連0的次曱基[C(73.5),C(76.7),C(78.8)]。與化合物PhysagulinsN比較，唯一不同的地方是化合物的C(15)-OAc信號((5170.3,21.4)被化合物PhysagulinsM中的羥基所取代。其它的氫、石友信號被HMQC和HMBC所確定(圖3)。所以化合物PhysagulinsN的結(jié)構(gòu)凈皮確定為(17及,22及)-5oc，6/,14/U5a-tetrahydroxy-l-oxo-witha-2，24-dienolide,被命名為PhysagulinN?；衔颬hysagulinsO白色無定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。與化合物Withaminimin比較，化合物同樣有15a-乙?；煌牡胤皆谟陔p鍵的位置和羥基的的數(shù)目。C-l向低場移動了5.6ppm,并且35.61(成J^9.5,4.2Hz)與C-l(<5210.3)和C-5(377.7)相關(guān)，36.10(af,J-9.5Hz)與C-6((574.1)相關(guān)，這些提示了雙鍵位置在C-3，C-4?；衔颬hysagulinsO比化合物Withaminimin多了一個羥基，因為多了一個連O的叔碳070.7(^)),并且這個叔碳與H-18相關(guān)，提示連0的叔碳是C-12。從NOE可以看出來H-19與H-12相關(guān)，提示H-12為構(gòu)型。因此化合物PhysagulinsO的結(jié)構(gòu)凈皮確定為(22i)-15a-acetoxy國5a，6卩，12a,14a-tetrahydroxy-l-oxo-witha-3，16，24-trienolide,命名為PhysagulinO?；衔颳ithagulatinA白色不定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及甲醇。EI-MS:526，分子式C3()H3808。^-NMR(CDC13):".14(1H,《《/=10Hz,H-2)，6.96(1H,瓶/=10,5.8Hz，H-3),3.76(1H,fiW，/=5.8,2.0Hz,H國4),3.33(1H,^&H-6),5.19(1H,《《/=2.7Hz,H-15),5.62(1H,4J=2.7Hz，H-16)，1.05(3H，s，H-18)，1.40(3H,H-19),1.07(3H，t/，H-21),4.21(1H,iW《12，7,3Hz,H-22),1.80(3H,s，H-27)，1,90(3H,;y，H-28),1.91(3H,;y，H-OAc);13C-NMR(CDC13):3202.50，C-l)，131.5C-2)，142.8(《C-3)，69.6W，C-4),63.30,C-5),63.3(《C-6)，24.7"C-7)，34.80，C-8)，39.4C-9)，47.7(s，C-IO)，21.90,C-ll),37.60，C-12)，52.10，C-13),81.6(《C-14)，83.6(,，C-15),120.9(f,C-16),162.50,C-17),17.7(《，C-18),16.0(《，C-19),35.5(4C-20),17.4(《，C-21),79.5C-22)，33.20，C隱23)，148.5C-24)，122.20，C-25),166.4C,C-26),12.6Q,C-27),20.3C-28),21.3^，C-OAc)，170.0(s,C-OAc)。!H，"C-NMR譜與文獻(xiàn)報道的(C.M.Chen,Z.T.Chen,C.H.Hsieh，W.S.Li，S.Y.Wen,//"erac;;c/es1990,37,1371.)中的WithagulatinA波^普凄t據(jù)一致。化合物PhysagulinK白色不定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。EI-MS:546，分子式C30H42O9。丄H-NMR(CDC13):36.13(1H,瓶/=10,2Hz,H-2)，6.65(1H,械10,5,2Hz,H-3)，4.15(1H，/=2Hz,H-6),5.88(1H，《《/=4Hz，H-15)，1.47(3H，；y,H-18)，1.66(3H,&H-19),1.26(3H,</,J=2Hz,H-21),5.05(1H,成■/=13,2Hz,H-22),1.95(3H,s，H-27),1.73(3H,s，H-28),2.23(3H,H-OAc),i3C-NMRi普歸屬見表2。其氫譜和碳諳數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(S.Nagafuji,H.Okabe,H.Akahane,F.Abe，說o/.P/wr附.2004,27(2),193.)中的PhysagulinK波譜數(shù)據(jù)一致?；衔颳ithaminimin白色不定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。5%的硫酸加顯色呈紫紅色。EI-MS:528,分子式C30H40O8。力-雨R(CDC13):(55.86(1H,瓶J=10,2.5Hz,H-2),6.57(IH,認(rèn)，/=10,5,2Hz,H國3),3.60(IH,&■/=2Hz,H-6),5.32(1H，J,,/=2.5Hz,H-15),5.59(IH,6rJ,/=2.5Hz,H-16)，1.15(3H，;y,H-18),1.20(3H,H-19),1.11(3H，《H-21),4.34(IH,AW,/=12，7,4Hz，H-22),4.36(2H,《，《/=14，2Hz,H-27),3.98(1H，w，H-3)，3.85(IH,,,H-1),1.86(3H,s，H-27),1.98(3H，"H-28),"C-NMR譜歸屬見表2。其氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(H.E.Gottlieb,M.Cojocaru,S.C.Sinha,M.Saha,尸/^oc/ew/;^71987,26,1801.)中的Withaminimin波譜數(shù)據(jù)一致?；衔颬hysagulinJ白色不定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。EI-MS:530，分子式C30H42O8。iH-畫R(CDC13):".11(IH,瓶《/=10，2Hz,H-2),6.69(1H，械/=10，5,2Hz,H-3)，4.15(IH，f，J=2Hz，H-6),5.73(IH，《7=4Hz,H-15),1.44(3H,H-18),1.65(3H，;y，H-19),1.12(3H,《/=2Hz,H-21),4.50(IH,成《/=13,2Hz，H-22),1.92(3H，s，H-27)，1.63(3H,&H-28),2.19(3H，s，H隱OAc),"C-NMR譜歸屬見表2。其氫鐠和碳譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(C.M.Chen,Z.T.Chen，C.H.Hsieh，W.S.Li,S.Y.Wen,//"eracyc/M19卯，1371.)中的PhysagulinJ波鐠數(shù)據(jù)一致?；衔颬hysagulinB白色無定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。EI-MS:546,分子式C30H39ClO7。^NMR(CDC13):(55.89(IH,10.3，2.6Hz,H-2),6.61(舊，蘊，J=10.3,5.1,3.0Hz,H-3),3.95(IH,s，H-6)，5.28(IH,《《/=2.6Hz,H-15),5.64(IH,《/=2.6Hz,H-16),1.14(3H,s，H-18)，1.27(3H,&H-19),1.11(3H,《/=6.5Hz,H-21),1.85(3H,s，H-27)，2.00(3H,s，H-28),2.05(3H,s，H-OAc);13C-NMR(CDC13):3200.9(s,C-l),128.2C-2),141.7(《C-3)，36.90,C-4),81.00,C-5),73.9(《C-6),26.5"C-7),35.2(f,C-8),36.9(《C-9),52.70,C-10),22.80，C-ll)，38.5"C-12),52.00,C-13),82.0(c/,C-14),83.4"C-15),120.5G，C-16),160.7(s,C-17)，16.7&，C-18),15.5C-19),35.3(c/，C-20),17.0(《，C-21),78.3(《C-22),32.00,C-23),150.5(s,C-24),121.2(s,C-25),167.5C-26)，12.2(《，C-27),20.6(《，C-28),21.3(《，C-OAc),170.40，C-OAc)。其氯譜和碳i普數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(K.Shingu,S.Yahara,T.Nohara，H.Okabe,C/ze附._Sw//.1992,40,2088.)中的PhysagulinB波語數(shù)據(jù)一致。化合物Pubesenolide白色不定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。EI-MS:458，分子式C28H4205。'HNMR(CDC13):35.59(1H,&《/=5.4Hz，H-6),4.45(1H，我14.3，3,4Hz，H-22),4.36(2H,&14,2Hz，H-27)，3.98(1H，m,H-3)，3.85(1H,f，H-l)，2.03(3H，;y，H-28),1.04(3H,s，H-19),1.03(3H,d，/=6.5Hz,H-21),0.73(3H，s，H-18);13C-NMR(CDC13):372.7(《C陽l)，38.2(/，C-2),66.0(《C-3)，41.4(/,C-4)，137.70,C-5)，125.5C-6)，31.90，C-7)，31.3(,，C墨8)，41.5(d，C陽9)，41.5C,C-10),22.3C-l1),39.5(f,C-12),42.80,C-13),56.2(rf，C-14)，24.5(r,C-15)，27.3("C-16),52.0(d,C-17),11.7(仏C國18)，15.4(:C-19),38.7(《C-20),13.4(《，C-21)，78.7C隱22)，29.8G,C-23),154.0(s，C-24),124.80,C-25)，167.1C-26),56.9C-27),20.1C-28)。其氫語和碳語數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(M.Sahai，Ato.Prod1985，M,474.)中的Pubesenolide波諳數(shù)據(jù)一致，故該化合物被確定為Pubesenolide?；衔颬hysagulinD白色不定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。EI-MS:620,分子式C34H52Oi0。^NMR(CDC13):35.59(1H,《J-5.4Hz，H-6),4.45(1H，/=14.3，3.4Hz，H-22),4.36(2H，g，/=14,2Hz,H-27)，3.82(1H,附，H-3),3.85(1H，f,H-l),2.03(3H,s，H-28),1.04(3H,s，H-19),1.03(3H，《/=6.5Hz,H-21),0.73(3H,&H-18),4.58(1H,flf，7=8Hz,H-l，)；13C-NMR(C5D5N):<572.4(《C-1),37.9C-2),74.0(《C-3)，39.2C-4)，139.30，C-5)，124.1W,C-6)，32.2(f,C-7)，32.1"C-8)，41.5(d，C-9)，42.20，C-IO)，20.6(f,C-ll),39.70,C-12)，42.8(s,C-13),56.5(《C-14),24.7C-15)，27.3(,,C-16),52.0(《C-17),11.7(仏C-18),19.7(《，C-19),39.1(rf，C-20),13.6(《，C-21),78.3(d，C隱22)，29.8(f，C-23),154.00,C-24),127.40,C-25),166.40，C-26),,56.10，C-27),20.1(《，C-28),102.8(《C-glc陽l)，75.3(4C國glc-2),78.5C-glc-3),71.5(《C國glc-4)，78.4(《C-glc-5),62.6(f,C-glc-6)。其氫譜和碳語數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(K.Shingu,S.Yahara，T.Nohara，H.Okabe，CTem.尸/wr附.Bw〃.1992,40，2088.)中的PhysagulinD波譜數(shù)據(jù)一致?；衔颬hysagulinI白色無定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。EI-MS:562,分子式C3()H39C108。!HNMR(CDC13):".11(1H,瓶J=10,2Hz,H-2),6.69(IH,械/=10,5,2Hz,H-3),4.27(IH,A/=3Hz，H-6),5.47(1H，H-15)，3.76(IH,s，H-16)，1.34(3H,s，H-18),1.58(3H,s，H-19),1.01(3H，《>/=7Hz，H-21),1.89(3H,s，H-27),1.74(3H,;y，H-28),2.19(3H,;s，H-OAc);13C-NMR(CDC13):3201.50,C-l),128.6(d,C-2)，142.9(d,C-3),38.00,C-4),83.20,C-5),74.4(《C-6),29.1(/，C-7),36.3C-8)，37.1(《C-9)，53.60,C-10),22.6(/，C陽ll),32.9"C-12),47.20,C-13),81.8(《C-14),77.8"C-15),59.7(《C-16),76.30，C-17),16.1(《，C-18),16.3(《，C-19)，34.1(d,C-20)，14.2(《，C-21)，77.1(c/，C-22),32.9"C-23),149.4(s,C-24),121.9Cs,C-25),165.9(s，C-26),12.7(《，C-27),20.1(《,C-28),21.3(9,C-OAc)，170.0(s,C國OAc)。其氫語和碳譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(C.M.Chen,Z.T.Chen,C.H.Hsieh,W.S.Li，S.Y.Wen,//"eracyc/^1990,37,1371.)中的PhysagulinI波語數(shù)據(jù)一致。化合物PhysagilinA白色無定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。EI-MS:510,分子式C3()H3807。NMR(CDC13):(56.03(IH,W,/=10.0，2.7Hz,H-2)，6.89(IH,超，■/=10.0,6.1,2.2Hz,H隱3)，3.25(1H，/=2.7Hz,H-6),5.24(IH,d，/=2.8Hz,H-15),5.68(IH,《/=2.8Hz,H-16)，1.10(3H,s，H-18),1.27(3H,s，H-19),1.13(3H，《/=7.2Hz，H-21),1.85(3H，s，H-27),1.94(3H,，H-28),1.96(3H，s，H-OAc);13C-NMR(CDC13):3203.8(s，C-l),128.9(《C-2),145.0W，C-3),33.0(,,C-4),61.7(s，C-5)，64.0(《C-6),25.00，C-7),35.1(f，C-8)，36.4^，C-9)，48.50，C-10),23.5(f,C-ll),37.80,C-12),52.20,C-13),81.5(d,C-14),83.80,C-15)，121.30，C-16),162.0(s，C-17),16.2(g,C-18),15.3(《，C-19),35.5(《C-20),17.6(《，C-21)，78.0C-22),32.8(,,C-23)，148.9(s,C-24),122.20,C-25),166.4(s，C-26)，12.6C-27),20.6(仏C-28)，21.3(《，C-OAc),170.00，C-OAc)。其氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(K.Shingu,S.Yahara,T.Nohara,H.Okabe,CTe附.i^awz.1992,40,2088.)中的PhysagulinA波諳數(shù)據(jù)一致?；衔颬hysagulinC白色無定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。EI-MS:542,分子式C3()H3S09。NMR(CDC13):<56.45(1H,《/=10Hz,H-2)，7.26(1H,瓶《/=10,6Hz,H-3)，4.01(1H,47=6Hz，H-4),3.26(1H,^s，H-6),5.31(1H,;y，H-15),3.75(1H，H-16),1.29(3H,;，H-18),1.77(3H,s，H-19),0.97(3H,《/=7Hz,H-21),1.89(3H，"H隱27)，1.74(3H,s，H-28),2.12(3H,s，H-OAc);13C-NMR(CDC13):<5202.9C-l),131.6"C-2),146.0C-3),70.2(d，C陽4),63.8C-5),61.0(《C-6),26.30,C-7),35.80,C國8),40.1C-9),48.3(s，C-0),20.4(f，C-ll),31.50,C隱12)，46.90,C-13),81.5(《C-14),78.4C-15)，59.2(《C-16),76.30,C-17),15.5(《，C-18),17.1(《，C-19)，34.4(《C-20)，^4.0(《，C-21),77.0(《C-22),33.0C隱23)，149.80，C-24),122.0C,C-25),165.90,C-26),12.7(《，C-27),20.1(仏C-28),20.9(仏C-OAc),169.70,C-OAc)。其氫i普和石友讒數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(C.M.Chen,Z.T.Chen,C.H.Hsieh,W.S.Li,S.Y.Wen,//"eroc_yc/M1990，37，1371.)中的PhysagulinC波鐠數(shù)據(jù)一致。化合物PhysagulinF白色無定形粉末，易溶于氯仿、丙酮及曱醇。EI-MS:544,分子式C30H40O9。&畫R(CDC13):".11(1H，瓶《/=10,2Hz,H-2),6.67(IH,械《/=10，5,2Hz,H-3)，4.11(IH,,，/=3Hz,H-6),5.60(IH,&H-15),3.70(IH,s，H-16),1.39(3H,;y，H-18),1.60(3H,s，H-19),1.01(3H，《J=7Hz,H-21),1.89(3H，■，H-27)，1.74(3H，■，H-28),2.22(3H,"H-OAc);13C-NMR(CDC13):<5204.90,C-l)，129.0(《C-2),142.4(《C-3),36.9"C-4)，77.30，C-5),74.9(《C-6)，29.2(/,C-7),36.50,C-8),36.0(《C-9),52.6C-10),23.10,C國ll),33.5"C-12),47.2(s，C-13),82.5(d,C-14),77.40，C-15),59.7(c，C-16),76.8(s,C-17),16.1(9,C-18),15.3(仏C-19),33.7(《C-20)，14.2(《，C-21),77.1(《C-22)，32.90,C-23)，149.4(s,C-24),121.9(s，C-25),165.90,C-26),12.7(《，C-27),20.1(《,C-28)，21.3(《，C-OAc),170.40,C-OAc)。其氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(C.M.Chen,Z.T.Chen,C.H.Hsieh,W.S.Li,S.Y.Wen,//"eTOC_yc/es1990,37，1371.)中的PhysagulinF波語數(shù)據(jù)一致。實施例4Withanolide型化合物免疫生物活性篩選實驗?zāi)Ｐ兔QT、B淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)及細(xì)胞毒性實驗篩選對象實施例1-3制備的樣品1、樣品2和25種Withanolide型化合物。篩選方法BALB/C小鼠脾臟淋巴細(xì)胞在有絲分裂原ConA,LPS的刺激下，細(xì)胞的形態(tài)和代謝可發(fā)生一系列的變化，轉(zhuǎn)化為母細(xì)胞，并分化增殖。本實驗加入ConA(刀豆蛋白A)5ug/ml誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖。加入LPS(脂多糖)10ug/ml誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增殖。以3H-TdR摻入法定量測定細(xì)胞的增殖?；罴?xì)胞內(nèi)線粒體脫氬酶能將MTT有黃色還原成藍(lán)色的甲肷，曱肷產(chǎn)量與活細(xì)胞成正比。用有機溶劑溶解后，可用酶標(biāo)儀檢測OD值。測試體系體外。檢測結(jié)果見表3。表3.從酸漿和苦藤乙醇提取物中分離得到的單體以及樣品1和樣品2的抑制T、B細(xì)胞增殖的活性<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>0.47±0.03從表3可以看出，抑制T、B細(xì)胞增殖的活性成分主要為Withanolide類成分，其中包括Physalin骨架和經(jīng)典Withanolide骨架兩種骨架類型。尤其是化合物PhysalinH,PhysagulinB和PhysagulinI具有優(yōu)于環(huán)苞菌素(CsA)的活性。綜上所述，本發(fā)明的Withanolide型化合物具有較強的免疫抑制作用，對過度增值的T、B淋巴細(xì)胞周期產(chǎn)生阻遏作用，可用于制備免疫抑制劑，以治療自身免疫疾病及相關(guān)疾病。需要說明的是，在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，以上所述的是本發(fā)明的具體實施例及所運用的技術(shù)原理，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改而不背離本發(fā)明的精神與范圍，這些等價形式同樣落在本發(fā)明的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.一種免疫抑制劑，其特征在于，所述免疫抑制劑包括如下通式I和/或通式II所示化合物或其光學(xué)異構(gòu)體其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7選自H、OH、O-acyl、OMe、OEt、OnPr、OiPr、F、Cl、Br、NH2、NO2或CN，其中5，6位為環(huán)氧或雙鍵，通式I中14，27位醚鍵連接或斷開，通式II中14，15位和16，17位為環(huán)氧和雙鍵。如權(quán)利要求1所述的免疫抑制劑，其特征在于，所述通式I所示化合物包括PhysalinA，PhysalinB，PhysalinD，PhysalinH，2，3-DihydrophysalinD，13-AcetoxyphysalinD，PhysalinL，PhysalinN，PhysalinO，IsophysalinB和IsophysalinG的一種或幾種所述通式II所示化合物包括PhysagulinL，PhysagulinM，PhysagulinN，PhysagulinJ，PhysagulinO，WithagulatinA，PhysagulinA，Withaminimin，PhysagulinB，PhysagulinC，Pubesenolide，PhysagulinI，PhysagulinF和PhysagulinK的一種或幾種2.如權(quán)利要求2所述的免疫抑制劑，其特征在于，所述通式I所示化合物為PhysalinH,所述通式II所示化合物為PhysagulinB和/或PhysagulinI。3.—種免疫抑制劑，其特征在于，所述免疫抑制劑包括植物提取物，所述植物提取物含有如權(quán)利要求1所述的通式I或通式II所示的化合物或其光學(xué)異構(gòu)體。4.如權(quán)利要求4所述的植物提取物，其特征在于，所述植物提取物為苦藤地上部分提取物和/或酸漿地上部分提取物。5.如權(quán)利要求1或4所述的免疫抑制劑在制備治療自身免疫疾病的藥物中的應(yīng)用。6.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述自身免疫疾病為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性肝炎、胰島素依賴性糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、多發(fā)性硬化、硬皮病、重癥肌無力、多發(fā)肌炎、自身免疫性血細(xì)胞減少癥、脈管炎綜合癥或系統(tǒng)性紅斑狼瘡。7.如權(quán)利要求1或4所述的免疫抑制劑在制備治療炎癥反應(yīng)、纖維化或由自身免役疾病及相關(guān)疾病所致具有組織損傷或感染的功能異常、過敏性疾病、由骨髓(造血干細(xì)胞)移植所致的移植物抗宿主疾病的藥物中的應(yīng)用。8.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的過敏性疾病為支氣管哮喘、過敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎或花粉病。全文摘要本發(fā)明提供了一種免疫抑制劑，包括如下通式I和/或通式II所示化合物或其光學(xué)異構(gòu)體，其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7選自H、OH、O-acyl、OMe、OEt、OⁿPr、OⁱPr、F、Cl、Br、NH₂、NO₂或CN，其中5，6位為環(huán)氧或雙鍵，通式I中14，27位醚鍵連接或斷開，通式II中14，15位和16，17位為環(huán)氧和雙鍵，或者包括含有上述化合物的植物提取物，本發(fā)明的該免疫抑制劑具有較強的免疫抑制作用，對過度增值的T、B淋巴細(xì)胞周期產(chǎn)生阻遏作用，可用于治療自身免疫疾病及相關(guān)疾病。文檔編號A61P11/00GK101422467SQ20071004773公開日2009年5月6日申請日期2007年11月2日優(yōu)先權(quán)日2007年11月2日發(fā)明者于有軍,劉建文,孫麗娟,胡立宏,磊馬申請人:華東理工大學(xué)