專利名稱：：依博素在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及依博素的新用途，具體地，是在制備類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：依博素是經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)的一種具有抗白細(xì)胞介素1受體活性的微生物多糖，為鏈霉菌的代謝產(chǎn)物，在國內(nèi)外屬首次報(bào)導(dǎo)，已申請(qǐng)并獲得國家專利(專利申請(qǐng)?zhí)?9110826.4)，該產(chǎn)生菌由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所分離自我國四川省峨嵋山土壤，經(jīng)中國科學(xué)院微生物研究所對(duì)菌種進(jìn)行分類鑒定，根據(jù)菌種形態(tài)，培養(yǎng)特征及分子生物學(xué)分類等研究確定其為唐得鏈霉菌。據(jù)研究結(jié)果顯示，依博素是一種新型結(jié)構(gòu)微生物胞外多糖，由8種單糖組成，其種類為鼠李糖、木糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、巖藻糖、半乳糖和半乳糖醛酸。該專利申請(qǐng)指出，依博素用于治療可通過抑制IL-1活性得到緩解的疾病。同時(shí)在說明書中指出具體的疾病例如炎性疾病，敗血性休克、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病、急性或慢性骨髓白血病、胰島素依賴性糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、發(fā)熱、病理性移植排斥反應(yīng)，移植物抗宿主疾病等等。在說明書具體實(shí)施方式中，提供了依博素對(duì)小鼠叉角萊膠性足腫脹的抑制作用和對(duì)大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎模型中多發(fā)性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防作用，說明依博素具有明顯的抗炎作用。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis，RA)是一種病因尚未明了的慢性異質(zhì)性系統(tǒng)性疾病，屬自身免疫性疾病?？赡芘c感染、遺傳和免疫機(jī)制紊亂等多種因素有關(guān)。主要表現(xiàn)為周圍對(duì)稱性的多關(guān)節(jié)慢性非特異性炎癥。可伴有關(guān)節(jié)外的系統(tǒng)性損害，例如引起皮下類風(fēng)濕結(jié)節(jié)、心包炎、心肌炎、肺纖維化、胸膜炎、脾腫大、腎淀粉樣變、周圍神經(jīng)炎、動(dòng)脈炎等多種病變，有時(shí)還可能侵犯眼睛，發(fā)生鞏膜炎、虹膜炎。RA是一種T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病，T細(xì)胞數(shù)量增加，使得巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞數(shù)增加，而后兩者均與關(guān)節(jié)的破壞性病變有關(guān)。另外，細(xì)胞因子IL-1和TNF-ct可介導(dǎo)RA病人的關(guān)節(jié)破壞性病變。細(xì)胞因子釋放也可導(dǎo)致成纖維細(xì)胞和滑膜細(xì)胞的增生，并產(chǎn)生具有破壞作用的金屬蛋白酶(固P)，使B細(xì)胞、RF和免疫球蛋白生成增加。.綜上可知，hIL-lra是治療類風(fēng)濕的一種，而依博素對(duì)類風(fēng)濕的作用目前尚無相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了依博素的新用途，具體地，是在制備具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用的藥物中的用途。本發(fā)明提供了依博素在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。本發(fā)明還提供了一種治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，它是含有有效量的依博素為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。其中，所述的藥劑是口服制劑。本發(fā)明用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用的優(yōu)點(diǎn)對(duì)治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用明顯，而且毒副反應(yīng)很低。具體實(shí)施例方式試驗(yàn)例1本發(fā)明藥物類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用的試驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑囼?yàn)依博素對(duì)n型膠原誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)炎形成的影響，考察其抗炎作用。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，100±10g，按體重隨機(jī)分組，正常對(duì)照組5只，其它各組各ll只，分為模型組、依博素三個(gè)劑量(62.5、125、250mg/kg)組、陽性對(duì)照藥(地塞米松磷酸鈉，Dexa)組。三、樣品制備1.藥物依博素(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所李元教授提供)，地塞米松磷酸鈉(山西晉新雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn)品)2.配制方法依博素以水溶解，配制成62.5、125和250mg/10mL;地塞米松磷酸鈉以生理鹽水溶解成O.1mg/10mL。3.給藥劑量依博素為62.5、125和250mg/kg;地塞米松磷酸鈉為0.1mg/kg，模型組10mL/kg。4.給藥途徑灌胃5.II型膠原(CII)乳劑的配制CII(購于Sigma公司)溶解于0.1moL/L醋酸中，濃度為4mg/mL，4°C過夜。將CII溶液滴加入等量冰冷的不完全弗氏佐劑中，充分乳化混合，制成CII乳劑，最終濃度為2mg/mL。四、實(shí)驗(yàn)方法1.II型膠原誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎模型的建立大鼠于右后足跖皮內(nèi)注射O.1mLCII乳劑致敏，對(duì)照組注射不含CII的不完全弗氏佐劑制成的乳劑。7天后于大鼠尾根部皮內(nèi)注射0.1mL上述CII乳劑進(jìn)行強(qiáng)化。致敏后第20天開始給藥，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束(第43天)。2.II型膠原誘導(dǎo)的大鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前24h，麻醉下于大鼠右耳皮內(nèi)注射40L0.2mg/mL的CII乳劑，24h后處死大鼠，剪下左右耳廓，以8mm不銹鋼銃子沖下左右耳片，稱重，左右耳片重量差為其腫脹程度，與對(duì)照組比較，計(jì)算腫脹抑制率。3.II型膠原抗體的檢測(cè)利用Chondrex公司的大鼠II型膠原抗體ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)各組大鼠血清中II型膠原抗體生成水平。4.II型膠原誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)炎模型中細(xì)胞因子的檢測(cè)取II型膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠血清，利用服D公司的IL-1ELISA試劑盒檢測(cè)IL-1的含量。5.ConA誘導(dǎo)的II型膠原大鼠關(guān)節(jié)炎模型脾細(xì)胞增殖的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束，無菌條件下取大鼠脾組織，以80和200目篩分離脾淋巴細(xì)胞，用含有或不含ConA(3mg/mL)的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞72h，在試驗(yàn)結(jié)束前6h加入3H-TdR，終濃度為0.5pCi/孑L，培養(yǎng)結(jié)束，用液閃儀檢測(cè)細(xì)胞增殖。6、病理檢查大鼠處死后，剪下大鼠踝關(guān)節(jié)以上脛骨部位，福爾馬林固定，5%硝酸脫鈣，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡檢査踝關(guān)節(jié)病變程度。踝關(guān)節(jié)病變包括關(guān)節(jié)周圍組織炎、關(guān)節(jié)滑膜炎(增生、脫落、炎癥)、關(guān)節(jié)囊滲出、關(guān)節(jié)軟骨損傷和關(guān)節(jié)纖維組織增生等病變。根據(jù)病變程度以半定量方法打分(0-3分)。并按各種病變的重要性乘以不同的加權(quán)數(shù)(軟組織炎、滑膜炎、關(guān)節(jié)腔滲出和關(guān)節(jié)軟骨損傷X1，纖維增生X3)。病變?cè)絿?yán)重，積分越高。求出每組動(dòng)物積分平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±s)，經(jīng)t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。五、結(jié)果結(jié)果見表l5。依博素灌胃給藥在中、高劑量時(shí)，對(duì)II型膠原誘導(dǎo)的大鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)的耳腫脹有明顯的抑制作用，抑制率約為40%，對(duì)胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)無影響。對(duì)非注射側(cè)和注射側(cè)由n型膠原誘導(dǎo)的大鼠足腫脹無明顯抑制作用。依博素在中、高劑量時(shí)對(duì)II型膠原誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎模型血清中II型膠原抗體分泌和IL-1分泌有明顯抑制作用。同時(shí)，依博素各劑量下對(duì)ConA刺激的脾細(xì)胞增殖均有明顯的抑制作用。病理檢査結(jié)果表明，依博素在250mg/kg劑量時(shí)非致炎側(cè)和致炎側(cè)踝關(guān)節(jié)病變不明顯。病變總積分較模型組降低78.1%，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異非常顯著。依博素在125mg/kg劑量下致炎側(cè)和非致炎側(cè)踝關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)較輕，病變總積分較模型組降低62.9%，差異亦非常顯著。六、結(jié)論依博素在劑量125、250mg/kg灌胃給藥，對(duì)大鼠II型膠原性關(guān)節(jié)炎有明顯的抑制作用。表l依博素對(duì)II型膠原誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎踝關(guān)節(jié)腫脹的抑制作用(第43天)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>*尸〈0.05，***戶<0.001，與模型組比較；糊戶〈0.01，與對(duì)照組比較。括號(hào)內(nèi)數(shù)值為腫脹抑制率(％)。.依博素在劑量62.5、125和250mg/kg時(shí)，對(duì)II型膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹無明顯的抑制作用。表2依博素對(duì)II型膠原誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎模型血清IL-1分泌的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>**尸<0.01，***尸<0.001，與模型組比；##尸<0.01，與對(duì)照組比較。括號(hào)內(nèi)數(shù)值為抑制率(％)。依博素在劑量125和250mg/kg下，明顯抑制II型膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-1分泌水平，抑制率高達(dá)39.1%和65.3%，抑制IL-1分泌可能是依博素發(fā)揮抗炎免疫作用的機(jī)理之一。_表3依博素對(duì)II型膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>2.括號(hào)內(nèi)為抑制百分率。依博素在劑量125和250mg/kg下，對(duì)II型膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠血清中n型膠原玩體分泌有明顯的抑制作用。表5依博素對(duì)ConA誘導(dǎo)的II型膠原大鼠關(guān)節(jié)炎模型脾細(xì)胞增殖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>1.0.05，與對(duì)照組比較；*尸〈0.05，與模型組比較。2.括號(hào)內(nèi)數(shù)值為脾細(xì)胞增殖抑制率(％)。依博素在劑量62.5、125和250mg/kg劑量下明顯抑制由ConA誘導(dǎo)的II型膠原大鼠關(guān)節(jié)炎模型脾細(xì)胞增殖，抑制率分別為55.8、75.2和74.2%。權(quán)利要求1、依博素在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。2、一種治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，它是含有有效量的依博素為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑是口服制劑。全文摘要本發(fā)明提供了依博素的新用途，具體地，是在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。本發(fā)明用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用的優(yōu)點(diǎn)對(duì)治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用明顯，而且毒副反應(yīng)很低。文檔編號(hào)A61K31/715GK101306007SQ20071004909公開日2008年11月19日申請(qǐng)日期2007年5月14日優(yōu)先權(quán)日2007年5月14日發(fā)明者吳劍波,蓉姜,洋張,張寶華,彭紅衛(wèi),曾裕建,元李,李好雨,李寶義,偉楊,石蓮英,董兆勇,斌趙,郭連宏,陳春會(huì)申請(qǐng)人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所;四川恒星生物醫(yī)藥有限公司