專利名稱：：波棱內(nèi)酯及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種新化合物波棱內(nèi)酯及其制備方法和用途，屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：波棱瓜/^^etos/^r附M柳cam/^erm^Val1為葫盧科波棱瓜屬單屬種植物，主要分布于中國西藏、云南，以及印度和尼泊爾。波棱瓜子系波棱瓜的干燥成熟種子，是一種常用藏藥。波棱瓜子味苦，性寒，能清腑熱，膽熱，具有清熱解毒、去火降熱、助消化作用，用于治療肝熱、黃疸型傳染性肝炎等癥[提供出處中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(藏藥))[S].Vol.9.1995.64。目前，波棱瓜子提取報道的化合物有KaouadjiMourad等人報道的苯呋喃類化合物波棱醛(Herpetal)，波棱醇(Herpetoriol);木脂素類化合物木脂素二聚物(Herpetol)，木脂素三聚物(Herpetrione)，木脂素四聚物(Herpetetradione，Herpetetrone),木脂素五聚物(Herp印entol)等。中國專利申請CN1486691記載，從波棱瓜子中得到波棱素2-(4-Hydroxy-3-metho-xyphenyl)-6-5-(3-hydroxy陽4-methoxyphenyl)-4-hydroxymethyl陽3-tetrahydrofuranylmethyl-3-hydroxymethyl-4-methoxy-2，3-dihydrobenzofura)，所得到的波棱素可以制成藥物用于治療乙型肝炎病毒、化學(xué)物質(zhì)導(dǎo)致的肝損傷及肝癌等疾病。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種新化合物，其結(jié)構(gòu)式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>R為一CH2OH、一CHO、一COOH、一CH3、H2OCH—、RCOOH2C—、R、OOC一或r'ikx:h—;其中，r'-c,d的烷烴基。進(jìn)一步地，所述化合物優(yōu)選波棱內(nèi)酯，即波棱內(nèi)酯I(Herpetolidel)和波棱內(nèi)酯II(Herpeto]ideII)。其結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>波棱內(nèi)酯I<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>波棱內(nèi)酯n。本發(fā)明還提供上述化合物的制備方法，包括以下步驟-a、醇提波棱瓜丑e/p"仍/^f"iH挑Wall的種子干燥、粉碎，用乙醇加熱回流提取，回收乙醇得浸膏；b、萃取浸膏干燥后經(jīng)石油醚脫油、乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯提取物；C、層析取乙酸乙酯提取物進(jìn)行硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，洗脫液濃度依次為石油醚，石油醚15:乙酸乙酯l，石油醚10:乙酸乙酯l，石油醚8:乙酸乙酯l，石油醚6:乙酸乙酯1，石油醚4:乙酸乙酯1，乙酸乙酯，收集石油醚6:乙酸乙酯l洗脫物，得波棱內(nèi)酯I;d、石油醚6:乙酸乙酯1洗脫物再次硅膠柱層析，采用流動相石油醚-丙酮洗脫，洗脫液濃度為石油醚10:丙酮1，石油醚8:丙酮l，石油醚6:丙酮1，石油醚4:丙酮i，丙酮，收集洗脫物得波棱內(nèi)酯II。本發(fā)明還提供了上述化合物在制備抗肝損傷、抗腫瘤藥物中的用途。本發(fā)明提供了一種新的化合物，該化合物可用于制備抗肝損傷、抗腫瘤的藥物，為臨床提供了一種新的選擇，也為揭示波棱瓜子治療肝病作用物質(zhì)基礎(chǔ)，進(jìn)一步擴(kuò)大波棱瓜子臨床應(yīng)用范圍和新藥研究奠定了一定的基礎(chǔ)。具體實施例方式實施例1本發(fā)明化合物的制備本發(fā)明提供的新化合物具體是采用以下方法提取制備的-a、醇提波棱瓜7/er/jeto5/7C附"附Cfl"rf&""OTWall的種子干燥、粉碎，用乙醇加熱回流提取，回收乙醇得浸膏；為了提高回收乙醇效率、防止化學(xué)成分分解，干燥可以采用減壓干燥。由于活性部位是乙酸乙酯提取物，采用醇提可以抑制水溶性雜質(zhì)提出率，同時乙醇與其它有機(jī)試劑相比較具有毒性小、滲透力強(qiáng)、提取率高等優(yōu)點，因此選擇醇提。乙醇濃度可以是60%-95%,通常采用95%。由于乙醇提取物含油脂比較多，液-液萃取困難，乳化現(xiàn)象十分嚴(yán)重，加入的硅膠可以起到分散、吸濕作用，使乙醇提取物成固態(tài)，利于下一步提取。因此在干燥時可加硅膠拌勻并真空干燥。b、萃取浸膏干燥后經(jīng)石油醚脫油、乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯提取物，所采用的石油醚的沸程為6090'C，極性較低，回收時損失小，并且在水浴范圍內(nèi)，可以防止化學(xué)成分分解。從該提取物中分離出6個單體化合物。具體經(jīng)以下步驟分離出兩個新的香豆素類化合物c、層析取乙酸乙酯提取物進(jìn)行硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，洗脫液濃度依次為石油醚，石油醚15:乙酸乙酯1，石油醚10:乙酸乙酯1，石油醚8:乙酸乙酯l，石油醚6:乙酸乙酯1，石油醚4:乙酸乙酯1，乙酸乙酯，收集石油醚6:乙酸乙酯l洗脫物，得化合物I(純度98%以上)；白色粉末，紫外燈下觀察為藍(lán)色熒光，mp9596.5。C;d、石油醚6:乙酸乙酯l洗脫物再次硅膠柱層析，采用流動相石油醚-丙酮洗脫，洗脫液濃度為石油醚10:丙酮1，石油醚8:丙酮1，石油醚6:丙酮1，石油醚4:丙酮1，丙酮，收集洗脫物得化合物II(純度98%以上)。淡黃色粉末，紫外燈下觀察為黃色熒光，mpU2.5114'C。通過波譜和理化性質(zhì)鑒定結(jié)構(gòu)，化合物i、n為兩個新的香豆素類化合物，分別命名為波棱內(nèi)酯I(HerpetolideI)和波棱內(nèi)酯II(HerpetolideII)。其結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>波棱內(nèi)酯I8-hydroxy-l-hydroxymethyl-3，9-dimethoxy-6H-Dibenzo[b，dPyran-6-one1-羥甲基-8-羥基-3,9-二甲氧基-6H-二苯并[b,d]吡喃-6-酮OMe波棱內(nèi)酯II(HerpetolideII)l-formoyl-8-hydroxy-3，9-dimethoxy-6H-Dibenzob，djPyran-6-onel-甲酰基-8-羥基-3，9-二甲氧基-6H-二苯并b，d吡喃-6-酮波棱內(nèi)酯I和波棱內(nèi)酯II'H-NMR和3C-NMR化學(xué)位移值見表1。表1波棱內(nèi)酯I和波棱內(nèi)酯I"H-NMR和3C-NMR化學(xué)位移值<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>波棱內(nèi)酯I:C16H1406，相對分子質(zhì)量302，白色粉末(石油醚/乙酸乙酯)，紫外燈下觀察為藍(lán)色熒光，mp9596.5°C。EI-MS(C16H1406):302[M+，84，32，47，57。(HRESI-MS)m/z:325.0682(IVT+Na),計算值是325.06827。UV入max(CH3OH)mn:205，227，260,303，335。IRv(KBr)cm1:3384.5(OH);1687.9(CO);16121453，900840(C6H6);13081013(C隱O)。iH-NMR(DMSO)S:9.983(1H，S)，8.02(IH，S)，7.58(1H，S)，7力5(1H，d，J=2.7Hz)，6.93(1H，d,J=2.7Hz)，5.73(H，t，J=5.1Hz)，4.89(2H,d，J=4.8Hz)，4.06(3H，S)，3.卯(3H，S)。13C-NMR(DMSO)S:140.1(C-1)，115.0(02),159.3(C-3)，101.4(C-4)，152.8(C-4a)，160.5(C-6)，113.6(C-6a),114.6(C-7)，147.1(C-8)，154.3(C-9)，109.7(C-10)，128.9(C-10a)，lll.l(C-lOb)，63.8(l-CH2OH)，56.2(3-OCH3)，56.0(9-OCH3)。波棱內(nèi)酯II:CI6H1206，相對分子質(zhì)量300，淡黃色粉末(石油醚/乙酸乙酯)，紫外燈下觀察為黃色熒光，mpU2.5114。C。EI-MS(C16H1206):300[M+I，272，257，229，213，201，186，129，113。UVAmax(CH3OH)腿215，242,265，295，360。'H-畫R(DMSO)S:10.51(1H，S)，10.32(1H，S)7.605(1H，S)，7.31(1H,d，J=6.8Hz)，7.30(1H，S)，7.29(1H，d，J-6.8Hz)，3.95(3H，S)，3.90(3H，S)。13C-NMR(DMSO)6:135.9(C-1)，114.7(C-2)，159.6(C-3)，106.7(C-4)，152.9(C-4a)，160.0(C-6)，113.8(C-6a)，114.2(C-7)，148.4(C-8)，154.2(C-9)，110.2(C-10)，126.5(C-10a)，112.4(C-10b)，192.6(1-COH)，56.6(3-OCH3)56.3(9-OCH3)。藥理試驗表明，波棱內(nèi)酯I(HerpetolideI)和波棱內(nèi)酯II(HerpetolideII)對化學(xué)物質(zhì)導(dǎo)致的肝損傷有一定的保護(hù)作用，對腫瘤細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用。試驗例1波棱內(nèi)酯I對鹿S0損傷大鼠肝細(xì)胞的保護(hù)作用。釆用體外培養(yǎng)法得到肝實質(zhì)細(xì)胞。將肝實質(zhì)細(xì)胞用DMEM分散，細(xì)胞計數(shù)不得少于2xl()S個/ml，細(xì)胞活力大于卯。/。。將分散的細(xì)胞加入96孔板，每空8(^1。實驗共設(shè)置3組，除空白對照組外，包括造模組和給藥組每空加入終濃度為8mmol/L的DMSO，造肝細(xì)胞損傷模型；給藥組加入波棱內(nèi)酯I，濃度為0.6mg/ml，放入二氧化碳孵箱中孵化24h。將細(xì)胞于37°C，5%C02孵箱培養(yǎng)24小時后，加入MTT50pl(0.25毫克/ml)，37°C,5。/。C02孵箱培養(yǎng)分別于4小時，吸凈培養(yǎng)液后再加入DMSO150pl中止反應(yīng)，充分震蕩后用酶標(biāo)儀測定OD值。并根據(jù)OD值計算細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率=藥物處理細(xì)胞ODl/藥物未處理細(xì)胞[ODxl00。/0。表l波棱內(nèi)酯I對DMSO損傷肝細(xì)胞存活率的影響組別均值士標(biāo)準(zhǔn)差P值存活率(100%)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與空白對照組比較，"★"表示p〈0.01:和造?？瞻捉M比較，"A"表示p〈0.01.實驗結(jié)果表明，波棱內(nèi)酯I能明顯提高DMSO損傷肝細(xì)胞存活率。試驗例2波棱內(nèi)酯對人白血病細(xì)胞抹HL-60細(xì)胞的生長抑制作用。取對數(shù)生長期腫瘤細(xì)胞株接種在96孔培養(yǎng)板上進(jìn)行培養(yǎng)。待貼壁后分別加入受試化合物波棱內(nèi)酯I和波棱內(nèi)酯n，培養(yǎng)72h，加入MTT。4h后，去除培養(yǎng)液，加入酸化異丙醇，振蕩后在酶標(biāo)儀570mn波長下測定吸光度(OD)。根據(jù)下式計算抑制率抑制率=(1-實驗組OD值/對照組OD值)xl00X。實驗結(jié)果表明，波棱內(nèi)酯I和波棱內(nèi)酯II對人白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞的生長有一定程度的抑制作用，其ICso分別為7.26X10-5和8.78XIO.5mol/L。權(quán)利要求1、具有下式結(jié)構(gòu)的化合物-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>R為—CH20H、一CHO、—COOH、—CH3、H2C=CH—、RCOOH2C—、R、OOC—或R、HC-CH—;其中，R、dCt的烷烴基。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物，其特征在于R為-CH20H，所述化合物為波棱內(nèi)酯I,其化學(xué)名為l-羥甲基-8-羥基-3，9-二甲氧基-6H-二苯并[b，d]吡喃-6-酮，結(jié)構(gòu)式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>3、根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物，II，其化學(xué)名為l-甲酰基-8-羥基-3波棱內(nèi)酯I。其特征在于R為-CHO，所述化合物為波棱內(nèi)酯9-二甲氧基-6H-二苯并[b，d吡喃-6-酮，結(jié)構(gòu)式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>波棱內(nèi)酯II。4、權(quán)利要求2或3所述化合物的制備方法，包括以下步驟a、醇提波棱瓜種子干燥、粉碎，用乙醇加熱回流提取，回收乙醇得浸膏；b、萃取浸膏干燥后經(jīng)石油醚脫油、乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯提取物；C、層析取乙酸乙酯提取物進(jìn)行硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，洗脫液濃度依次為石油醚，石油醚15:乙酸乙酯1，石油醚10:乙酸乙酯1，石油醚8:乙酸乙酯1，石油醚6:乙酸乙酯1，石油醚4:乙酸乙酯1，乙酸乙酯，收集石油醚6:乙酸乙酯1洗脫物即得波棱內(nèi)酯I;d、石油醚6:乙酸乙酯1洗脫物再次硅膠柱層析，采用流動相石油醚-丙酮洗脫，洗脫液濃度為石油醚10:丙酮1，石油醚8:丙酮1，石油醚6:丙酮1，石油醚4:丙酮l，丙酮，收集石油醚6:丙酮l洗脫物即得波棱內(nèi)酯II。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟b中浸膏干燥是將浸膏加入硅膠拌勻并真空干燥。6、權(quán)利要求1所述化合物在抗肝損傷、抗腫瘤方面的用途。全文摘要本發(fā)明涉及一種新化合物波棱內(nèi)酯及其制備方法和用途。本發(fā)明提供的化合物可用于制備抗肝損傷、抗腫瘤的藥物，為臨床提供了一種新的選擇，也為揭示波棱瓜子治療肝病作用物質(zhì)基礎(chǔ)，進(jìn)一步擴(kuò)大波棱瓜子臨床應(yīng)用范圍和新藥研究奠定了一定的基礎(chǔ)。文檔編號A61K31/365GK101311173SQ20071004917公開日2008年11月26日申請日期2007年5月25日優(yōu)先權(quán)日2007年5月25日發(fā)明者梅張,張洪彬,赟鄧,陳胡蘭申請人:成都中醫(yī)藥大學(xué)