專利名稱：：一種具有抗惡性腫瘤作用的藥物組合及其制備方法一種具有抗惡性腫瘤作用的藥物組合及其制備方法跌術(shù)領(lǐng)塽本發(fā)明涉及一種治療惡性腫瘤的藥物組合，該組合物含有由中藥龍葵中提取的龍葵總生物堿和豆科植物苦豆草的種子苦豆子或豆科植物苦參的根中提取的苦參素，該藥物組合物對惡性腫瘤的治療有明顯作用，本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法。肖蹄*現(xiàn)代社會癌癥(惡性腫瘤)已成為威脅人類生命健康的主要問題之一，世界衛(wèi)生組織(WHO)報告表明，根據(jù)目前癌癥的發(fā)病趨勢，2020年全世界癌癥發(fā)病率將比現(xiàn)在增加50%，全球每年新增癌癥患者人數(shù)將達(dá)到1500萬人。醫(yī)療界迫切需求安全有效的癌癥治療藥物。本發(fā)明所述的龍葵總生物堿來源于單味藥材——龍葵。龍葵為茄科茄屬植物，一至數(shù)年生草本植物，性寒，味苦，微甘，具有小毒，歸肺、胃、膀胱經(jīng)，有清熱解毒、活血散瘀、利水消腫、止咳祛痰的功效。龍葵可全草入藥，可內(nèi)服及外用。作為傳統(tǒng)中藥的龍葵近年來得到了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，海內(nèi)外藥學(xué)家在原有的中醫(yī)藥理論的基礎(chǔ)上對其單味藥的化學(xué)成分進(jìn)行了進(jìn)一步提純分析，進(jìn)行了大量的研究，獲得了較為客觀的信息，尤其是在抗腫瘤方面的研究，無論是單味藥還是其復(fù)方制劑在基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)方面作了大量的工作。龍葵全草含苷類甾體生物堿、龍葵多糖、礦物質(zhì)、維生素、色素、氨基酸等，龍葵漿果中的提取物中還含有酯、羧基化合物、甾醇、酚性化合物(其主要成分為黃色不飽和酯)，此外還含有皂苷。而對腫瘤治療起關(guān)鍵作用的化學(xué)成分主要為龍葵總生物堿(包括澳洲茄堿、澳洲茄邊堿等)，其次為多糖。本發(fā)明所述的苦參素，是從豆科植物苦豆草(Sophoroal邵ecuroidesL.)的種子苦豆子或豆科植物苦參(SophoroflavescensAtt.)的根中提取的一種生物堿，其中氧化苦參堿含量>98%,是苦參素中的主要成分。在對苦參素大量的藥理和臨床研究中，發(fā)現(xiàn)其有抗炎、抗病毒、抗肝纖維化和保肝降酶、抗癌、升高白細(xì)胞、抗心率失常等多種藥理作用，且不良反應(yīng)較少。我們結(jié)合文獻(xiàn)資料，運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)方法，在制備工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥效、毒理及穩(wěn)定性等方面進(jìn)行了研究，以龍葵總生物堿和苦參素為原料制成藥物制劑，用于癌癥治療，具有增效減毒的作用。目前，尚未見有關(guān)龍葵總生物堿及其單方、復(fù)方制劑應(yīng)用于在抗腫瘤藥物方面的報道，國內(nèi)尚沒有有關(guān)龍葵總生物堿的制劑在SFDA注冊，國內(nèi)外專利(中國專利、曰本專利、韓國專利、歐洲專利、美國專利等)均未出現(xiàn)與本發(fā)明相近的專利保護(hù)內(nèi)容。鯽贈本發(fā)明的目的是提供一種抗惡性腫瘤療效顯著、毒副作用小、使用安全的藥物組合及其制備方法。該藥物組合以龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物與苦參素為原料。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的①本發(fā)明的龍葵提取物中，龍葵總生物堿含量為50.0%以上。龍葵總生物堿的提取步驟如下取龍葵全草與/或果實(shí)，加入50%90%乙醇溶液提取23次，每次68倍量，回收乙醇，濃縮至相對密度1.25,濃縮液中加入24倍量的0.lmo1/1酸性溶液，充分?jǐn)嚢?，冷藏，過濾，濾渣用鹽酸溶液洗滌13次，合并濾液和洗滌液，以弱極性或中等極性樹脂吸附。樹脂吸附后先用水沖洗樹脂柱/床至流出液近中性；再以O(shè).lmol/1堿性溶液沖洗樹脂柱/床至流出液近無色，再以含醇量10%柳％乙醇液沖洗樹脂柱庥至流出液近無色。棄去。再以鄰90%乙醇進(jìn)行洗脫，至洗脫液顯無色，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，以0.51.5mol/l的堿性溶液調(diào)PH值至810，靜置，冷藏，收集沉淀。自然晾干，即可得龍葵總生物堿含量大于鄰％的龍葵提取物。②將上述龍葵提取物與苦參素以規(guī)定比例混合均勻，加入適當(dāng)輔料，即得本發(fā)明所述藥物組合。以上所述的堿性溶液選自氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鉀、氫氧化鎂和氨水溶液；所述的酸性溶液逸自醋酸、鹽酸、硫酸和檸檬酸溶液；所述的洗脫用有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一項(xiàng)或者兩項(xiàng)或者三項(xiàng)以任意比例形成的混合相。本發(fā)明的藥物組合中含龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物l一重量份、苦參素1~3重量份。其中優(yōu)選比例為龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物3重量份、苦參素2重量份。本發(fā)明的藥物制劑含有1%99%的龍葵總生物堿含量大于鄰％的龍葵提取物與苦參素混合物和99%1%的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)，優(yōu)選含有45%95%的龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物與苦參素混合物和55%5%的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)，最好含有75%90%的龍葵總生物堿含量大于鄰％的龍葵提取物與苦參素混合物和25%10%的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明的龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物與苦參素組合物制備成多種臨床藥物劑型作為抗腫瘤藥物，包括口服制劑或非腸道給藥的劑型。所述口服制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑、混懸劑、口服液體制劑等；所述非腸道給藥劑型為注射液、輸液劑、凍千注射劑、注射乳劑、氣霧劑、栓劑等。本發(fā)明的抗腫瘤藥物組合制劑中的輔料是指常規(guī)的賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、粘合劑、著色劑、防腐劑等。本發(fā)明抗腫痏藥物中的其它配伍用的藥物，指的是以有效劑量的龍葵提取物與苦參素組合物為一定的藥物原料，再配伍其它已允許合用的中藥或化學(xué)藥品。本發(fā)明的龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物與苦參素藥物組^^及其藥物制劑具有抗腫痼作用，是通過以下龍葵總生物堿含量大于鄰％的龍葵提取物3重量份與苦參素2童量份的藥物組合的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)得到證實(shí)的。實(shí)驗(yàn)例l龍葵提取物與苦參素藥物組合物體外對腫瘤的抑制作用龍葵提取物與苦參素藥物組合物(3:2)分為五組劑量(0.5、2.5、12.5、50、l鄰將加r1)，分別體外作用于10種腫瘤細(xì)胞。從整個實(shí)驗(yàn)可以看出，在l鄰jig/ml及50jig/iia劑量下，藥物組合對于10種腫瘤細(xì)胞的均表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制作用，隨著藥物濃度的降低，腫瘤抑制率逐漸下降，當(dāng)藥物組合濃度降至0.4jig/ml時，腫瘤細(xì)胞基本不受影響。該藥物組合對各種腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制率經(jīng)計算分別為10.38Hg/ml(SMMC-7721)、15.47pg/ml(BGC-803)、12.45jig/ml(A549)、12.93pg/ml(LOVO)、11.08ng/ml(B16)、5.81將/ml(NCI-H460)、11.26ng/ml(KETR-3)、29.14ng/ml(PC-12)、5.10jig/ml(ECA-109)、120.17fig/ml(S180)。從腫瘤細(xì)胞形態(tài)上看，在150jig/ml及50jig/ml劑量作用下，腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)均遭到破壞，細(xì)胞數(shù)量稀少；隨著藥物組合劑量的降低，腫瘤細(xì)胞形態(tài)趨于完整，但數(shù)量仍較少；在0.5n『m"劑量下，藥物組合對腫瘤的抑制作用消失，細(xì)胞形態(tài)完整，數(shù)量較多。綜上所述，龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物3重量份與苦參素2重量份的藥物組合對于各種腫瘤細(xì)胞在體外均有較強(qiáng)的抑制作用，能明顯抑制腫癯細(xì)胞在體外的生長，改變腫瘤細(xì)胞的形態(tài)，引起腫瘤細(xì)胞的死亡。實(shí)驗(yàn)例2龍葵提取物與苦參素藥物組合物對Hep肝癌移植性腫瘤的影響實(shí)驗(yàn)方法無菌條件下抽取ICR小鼠腹腔內(nèi)生長8天的腹水癌細(xì)胞懸液，癌細(xì)胞懸液和滅菌生理鹽水按h3稀釋，取ICR小鼠70只，早3各半，體重1822g,接種稀釋后的癌細(xì)胞懸液0.2ml于腋部皮下。24h后隨機(jī)分為7組，即模型組、5-Fu組(25mg/kg)、華蟾素組(3g/kg)和注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合小、中、大劑量組(1.2mg/kg、2.4mg/kg、4.8mg/kg)及口服組(2.4mg/kg),每組10只，分別靜脈注射給予相應(yīng)藥物(模型組注射等容積生理鹽水，口服組灌胃給藥)，給藥容積均為10ml/kg。給藥8天后處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤，稱重，按下面公式計算抑瘤率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次。對照組平均瘤重一實(shí)驗(yàn)組平均瘤重對照組平均瘤蕙實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠接種H印肝癌腫瘤后，4天皮下即可觸到腫瘤，8天后解剖腫瘤平均重量均大于lg,藥物組合三個劑量組小鼠腫瘤浸潤范圍均小于模型組,瘤體易剝離，腫瘤重量明顯減輕(PO.Ol)。藥物組合對小鼠體重增長率、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)無明顯影響。藥物組合靜脈注射三個劑量組的抑瘤率均大于口服組。結(jié)果見表1~5。表l注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合對H鄰肝痛移植性實(shí)體癯抑瘤率的影響(S±S,n-10)組別劑量(班g/kg)第--次第:二次瘤重(g)抑瘤率(％)瘤重(g)抑瘤率(％)模型組一1.S1土(U7—1.58±0.13—5-Fu組2562.90.56±0.23"64.6華螗素組3X1030.94±(US*37.70.88±0.21"44.3小劑量組U0.97±0.32'35.81.0S±0.3S*33.S中劑量組2.442.446.2大劑暈組4.80.64±0.31"57.60.65±0,25"58,9口服組2.41.18±0.3423.81.21±(K3723,4注和模型組相比較，*P<0.05,**P<0.01。表2對H印肝痛移植性實(shí)體瘤小鼠體重增長率的影響(第一次實(shí)驗(yàn))(x±S,n=10)組別劑量(mg/kg)給藥前體重(g)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時體重(g)體重增長率(％)模型組—2039±0.9727,84±1.7236.55'Fu組2520,41±0.9920.70±2,49"1.4華蠊素組3X10320,45±0*842652±1.5829,7小劑量組1.220,40±0.8926.70±1.6130.9中劑量組2.420.48±0.9127.89±2.1536.2大劑量組4.820.44±1.0127.27±1.然33.4口服組2.420.50±0.8326.34±1.7428.9注和模型組相比較，MP<(W>1,表3對Hep肝痛移植性實(shí)體瘤小鼠腳腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響(第一次實(shí)驗(yàn))(x±S)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)胸腺指數(shù)脾指數(shù)模型組—100.297±0.0360.911±0.0755^Fu組2S100.559±0.139"華蛾素組3Xlfl3100.279±0.0420.881±0.135小劑量組1.2100.274±0緒0.挑3±0.077中劑量組2.4100.2S8土0.0480.929土0.096大劑量組4,8100302±0廁0.889±0.096口服組2.4100.277±0.0430.908±0.105注-和模型組相比較，"P<0.01。表4對H印肝癌移植性實(shí)體癯小鼠體重增長率的影響(第二次實(shí)驗(yàn))(；±S,b-IO)組別劑量(mg/kg)給藥前體重(g)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時體重(g)體重增長率(％)模型組—2036±0.紗26.96±1,5932,45-Fu組2520.41±0.9220.47±2.66"03華糖素組3X1032032±0.9026.15±1.7128.7小劑量組1.22037±化8526.11±1.4928.2中劑量組2.420.33±0.9126.65±1.8431.1大劑量組4.820>29土0.8626.84士1.8132.3口服組2.420.26±0.9626.91±1.7232.8注和模型組相比較，"P<0.01。表5對Hep肝痛移植性實(shí)體瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響(第二次實(shí)驗(yàn))(x±S)組別劑量(mg/kg〉動物數(shù)腳腺指數(shù)脾指數(shù)模型組—10(U61士0.0320.965±0.114S-Fu組25100.149±0.068"0.612±0.147"華蠊素組3X103100.249±0.0400.913土0,1S2小劑量組1.2100.259±0.0380.933±0,122中劑章組24100.2柳±0.0330.910±0.121大劑量組4.8100J74:fc0.0430.981±0.117口服組2.4100.268±0.0370.884±0.103注和模型組相比較，"P<0.01。實(shí)驗(yàn)例3龍葵提取物與苦參素藥物組合物對S，移植性實(shí)體瘤抑瘤率的影響實(shí)驗(yàn)方法無菌條件下抽取ICR小鼠腹腔內(nèi)生長8天的腹水癌細(xì)胞懸液，癌細(xì)胞懸液和滅菌生理鹽水按1:3稀釋，取ICR小鼠70只，羋纟各半，體重1822g,接種稀釋后的癌細(xì)胞懸液0.21111于腋部皮下。24h后隨機(jī)分為7組，即模型組、5-Fu組(25mg/kg)、華蟾素組(3g/kg)和注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合小、中、大劑量組(1.2mg/kg、2.4mg/kg、4.8mg/kg)及口服組(2.4mg/kg)，每組10只，分別靜脈注射給予相應(yīng)藥物(模型組注射等容積生理鹽水，口服組灌胄給藥)，給藥容積均為10ml/kg。給藥8天后處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤，稱重，按下面公式計算抑瘤率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次d對瓶組平均癍重—實(shí)驗(yàn)組平均瘤重抑瘤率(％)=~~~xioo%對照組平均癯重試驗(yàn)結(jié)果小鼠接種S180移植性實(shí)體瘤后，3天皮下即可觸到胂瘤，8天后解剖腫瘤平均童量均大于lg,注射用藥物組合三個劑量組小鼠腫瘤浸潤范圍均小于模型組，瘤體易剝離，腫瘤重量明顯減輕(PO.Ol)。注射用藥物組合對小鼠體重增長率、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)無明顯影響。注射用藥物組合靜脈注射三個劑量組的抑瘤率均大于口服組。結(jié)果見表6~10。表6注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合對S刷移植性實(shí)體瘤抑瘤率的影響(；*S，n-ld)組別菘r第-一次第二二次瘤重(g)抑瘤率(％)瘤重(g)抑瘤率(％)模型組—l.SS±0.59—1.57士(U1—5"Fn組2S0,56土0.26"63.90.63±0.29"S9.9<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.420.38±0.8226.07±1.4227.94.820.19±0.9326.89±1.3033.22.420.31±0.%26.57±1.3230.8注和模型組相比較，PK01。表10對Si抑移植性實(shí)體痼小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響(第二次實(shí)驗(yàn))(5±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注和模型組相比較，P<0.01.實(shí)驗(yàn)例4龍葵提取物與苦參素藥物組合物對Walk枕-256移植性鼠肝癌的影響實(shí)驗(yàn)方法將模型大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只。即模型組、華蟾素組(25mg/kg)和注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合小、中、大劑量組(1.2mg/fcg、2.4mg/kg、《8mg/kg)。各組大鼠分別給予相應(yīng)受試藥物，給藥容積為10ml/kg,連續(xù)給藥10天。給藥10日后，脫頸椎處死大鼠，記錄重量大小，按照下面公式計算腫瘤體積。腫瘤組織用10%甲醛固定，待做組織病理學(xué)觀察。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>實(shí)驗(yàn)結(jié)果注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合中、大劑量組的腫瘤體積和模型組相比，顯著縮小，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P〈0.05)。病理學(xué)撿査評分顯示注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合中、大劑量組可以減小腫瘤體積，抑制腫瘤生長(P〈0.05)。病理檢査顯示-(1)Walker-2S6癌性腹水種植到肝臟后，在肝臟內(nèi)形成腫塊，腫塊內(nèi)瘤中劑量組大劑量組口服組細(xì)胞異型性明顯，大小、形態(tài)不一，核大、深染、核分裂相易見。腫瘤細(xì)胞排列緊密，部分區(qū)域有壞死及出血。腫瘤無包胰，向周邊部肝細(xì)胞呈浸潤性生長。(2)應(yīng)用注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合后荷瘤大鼠數(shù)目減少，形成的腫瘤體積減小，壞死明顯。腫瘤周邊出現(xiàn)部分結(jié)締組織包膜，并見單個核細(xì)胞浸潤。上述結(jié)果說明注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合中、大劑量藥物對種植性Walker-2S6肝癌有抑制作用。結(jié)果見表1112。表11對Walker-2S6移植性鼠肝痛腫癯體積的影響(x±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注和模型組相比較，"P<0.01。表12對Walker-256移植性鼠肝癌病理評分的影響(5土S〉<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注和模型組相比較，"P<0,01。實(shí)驗(yàn)例5龍葵提取物與苦參素藥物組合物對荷H印肝癌小鼠白細(xì)胞、血小板的影響實(shí)驗(yàn)方法無菌條件下抽取ICR小鼠腹腔內(nèi)生長8天的腹水癌細(xì)胞懸液，癌細(xì)胞懸液和滅菌生理鹽水按1:3稀釋，取ICR小鼠70只，接種稀釋后的癌細(xì)胞懸液0.2ml于腋部皮下。24h后隨機(jī)分為7組，即模型組AFii組(2Smg/kg)、華蟾素組(3g/kg)和注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合小、中、大劑量組(1.2mg/kg、2.4mg/kg、4.8mg/kg)及口服組(2.4mg/kg),每組10只，分別靜脈注射給予相應(yīng)藥物(模型組注射等容積生理鹽水，口服組灌胄給藥)，給藥容積均為10ml/kg。給藥8天后處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤，稱重，按下面公式計算抑瘤率。對照組平均瘤重一實(shí)驗(yàn)組平均癍重抑痼率(0/0)=~"X1柳％對照組平均瘤重實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠接種Hep肝癌腫瘤后，4天皮下即可觸到腫瘤，8天后解剖腫瘤平均重量均大乎lg，注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組小鼠腫瘤浸潤范圍均小于模型組，瘤體易剝離，腫瘤重量明顯減輕(P《01)。注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合對小鼠白細(xì)胞、血小板、體重增長率、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)無明顯影響。注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合靜脈注射三個劑量組的抑瘤率均大于口服組。結(jié)果見表1316。表13注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合對H印肝癌移植性實(shí)體瘤抑瘠率的影響(；±S,n-10)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注-和模型組相比較，*P<0.05，**P<0.01。表14對H印肝癌移植性實(shí)體瘤小鼠體重增長率的影響(第一次實(shí)驗(yàn))(S*S,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注和模型組相比較，"P<(M>1。表15對Hep肝癌移植性實(shí)體癯小鼠腳腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響(第一次實(shí)驗(yàn))(5±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>S-Fu組25100.141±0,079(U60士0.158華維素組3X103100.259±0.0510.848±0.099小劑量組1.2100.245±0.0420.874±0,126中劑量組2.4100.228±0.030"0.817±0.063大劑量組4.8100.290±0.0530.787±0.071口服組2.4100.262士0.0S20.781±0.072注和模型組相比較，"P<0jDl。表16對H鄰肝癌移植性實(shí)體癍小鼠白細(xì)胞、血小板計數(shù)的影響(；±S)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)白細(xì)胞血小板模型組一1011.73±7.35848.7±26935-Fu組2S103.16±1.42"776.4±401^8華維素組3X1031011.12±5.321013.6±1407.8小劑量組1.21012^9±5.68IOIS.S土2076.9中劑量組2.41012.64±6.01877.8±252.6大劑量組4.8109.56±3.85806.4±182.6口服組2.4108,47±4.64853.4士298.9注和模型組相比較，"P<0.01。實(shí)驗(yàn)例6龍葵提取物與苦參素藥物組合物對荷瘤(Hep)小鼠6()C0放療的增效減毒作用實(shí)驗(yàn)方法無菌條件下抽取ICR小鼠腹腔內(nèi)生長8天的腹水癌細(xì)胞懸液，癌細(xì)胞懸液和滅菌生理鹽水按1:3稀釋，取ICR小鼠70只，罕^各半，體重1822g，接種稀釋后的癌細(xì)胞懸液0.2ml于腋部皮下。24h后隨機(jī)分為7組，即模型組、放療組、放療加華蟾素組(3g/kg)和放療加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合小、中、大劑量組(1.2mg/kg、2.4mg/kg、4.8mg/kg)及口服組(2.4mg/kg),每組10只，除模型組外，其他各組小鼠接種24h后均用60Co照射一次，照射劑量為鄰OCgy，射后2h，放療加華蟾素組，放療加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合小、中、大劑量組分別靜脈注射給予相應(yīng)藥物，模型組注射等容積生理鹽水，口服組灌胃給藥。8天后眼眶取血，測定血常規(guī)。取血后處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤，稱重，按下面公式計算抑瘤率；取胸腺、脾臟，稱重，按照下面公式計算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。抑瘤率(％)=對照組平均癍重一實(shí)驗(yàn)組平均癍重胸腺(脾)指數(shù)=重腳腺(脾〉重量(g)體重xioo實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠接種Hep肝癌移植性實(shí)體瘤后，模型組4天皮下即可觸到腫癯，8天后解剖腫瘤平均重量大于lg,放療及放療加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑暈組小鼠腫瘤浸潤范圍均小于模型組，瘤體易剝離，腫瘤重量明顯減輕(P^).01)。放療加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組瘤重均小于放療組(P〈0力5，P<0.01)，表明注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合對6eCo放療具有一定的增效作用。放療加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組的白細(xì)胞和血小板計數(shù)均大于放療組，但無統(tǒng)計學(xué)意義。放療加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組小鼠體重增長率均高于放療組(P<0.01)，放療加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合大劑量的胸腺指數(shù)高于放療組(P^).OS)，具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果見表1720。表17對荷瘤(H鄰)小鼠抑癍率的影響(玉土S)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)瘤重(g)抑瘤率模型組—10一放療組500cGY101.07±0.38AA29.6放療+華蟾素500cGY+3X10*100,61±0.37AA'59.9放療+小劑量組S00cGY+1.2100.62±(U0AA*SSf.2放療+中劑量組500cGY+2.410(K53±0.2SAA"6S.1放療+大劑量組鄰0cGY+4.8100.35±<U6AA"76.9放療+口服組500cGY+2.4100.80±0.34AA47.4注和模型組相比較^<0.01;和放療組相比較，*P<0.05,"><0.01。表18對荷癍(Hep)小鼠白細(xì)胞、血小板計數(shù)的影響(i±S)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)白細(xì)胞血小板模型組—109.91±1,5，5S8.6±1893放療組500cGY101.02±0.39AA45J±26.8AA放療+華搶素SOOcGY+3X103100.88±0.97AA5U±19.7AA放療+小劑量組500cGY+1.2100.98±0,66AA48.4±31.5AA放療+中劑量組鄰0cGY+2.4101.21±0，75AA71.S±40.9AA放療+大劑量組SOOeGY+4.8101.42±0.58AA72.9±24.4'放療+口服組500cGY+2.4100.10±0.32AA67.6±30.1注和模型組相比較，AAP<0.01:放療組相比較，'P<0.05,表19對荷瘤(H印)小鼠體重增長率的影響(;c±S,n=10)組別劑量(mg/kg)給藥前體重(g)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時體重(g)體重增長率(％)模型組一2(K14士0.9925.83±1.2128.2放療組鄰0cGY20.25±1.0218.6S±1.19AA-7.9放療+華敏素500cGY+3X10320,73±0.8722.22±152**7.2放療+小劑量組500cGY+1.220.21±1.1021.04±1.27"4.1放療+中劑量組500cGY+2.419.87土1.08加.92土L36"S.3放療+大劑暈組鄰0cGY+4.819.98±0.9221.54士1.08"7.8放療+口服組5O0cGY+2.420.32±0.89-3.4注和模型組相比較，AAP<0.01;和放療組相比較，*P<O.OS,"P<0.01。表20對荷瘤(H印)小鼠f腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響(x±s)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)胸腺指數(shù)脾指數(shù)模型組一100.298±0.0S10.9l8±0.104放療組鄰0cGY100.167±0.068AA0.406±0.203AA放療+華蠊素鄰0tGY+3X103100.199±0.0470.467±0.131放療+小劑量組S0OcGY+1.2100.237±0.0860.461±0.165放療+中劑量組5柳cGY+2.4100.224±0.0660.482±(U88放療+大劑量組500cGY+4.8100.249±0.072'(K539±0.237放療+口服組500cGY+2.4100.401±0.082注和模型組相比較，AAP<0.01;和放療組比較'P<0.05fl實(shí)驗(yàn)例7龍葵提取物與苦參素藥物組合物對荷瘤(S，)小鼠CTX化療的增效減毒作用實(shí)驗(yàn)方法無菌條件下抽取ICR小鼠腹腔內(nèi)生長8天的腹水癌細(xì)胞懸液，癌細(xì)胞懸液和滅菌生理鹽水按h3稀釋，取ICR小鼠70只，早S各半，體重lS22g，接種稀釋后的癌細(xì)胞懸液0.2ml于腋部皮下。24h后隨機(jī)分為7組，即模型組、CTX組(10mg/kg)、CTX(lOmg/kg)加華蟾素組(3g/kg)和CTX(10mg/kg)加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合小、中、大劑量組(1,2nig/kg、2.4mg/kg、4.8mg/kg)及口服組(2.4mg/kg)，每組10只，分別靜脈注射給予相應(yīng)藥物(模型組注射等容積生理鹽水，口服組灌胃給藥)，8天后眼眶取血，測定血常規(guī)。取血后處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤，稱重，按下面公式計算抑瘤率；脾臟，稱重，按照下面公式計算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。對照組平均癯重一實(shí)驗(yàn)組平均癯重抑癯率(％)=對照組平均癯重x柳％腳腺(脾)指數(shù)=胸腺(脾)重量(g)體重Xl柳實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠接種S，移植性實(shí)體瘤后，3天皮下即可觸到腫瘤，8天后解剖腫瘤平均重量均大于lg，CTX及CTX加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組小鼠腫瘤浸潤范圍均小于模型組，瘤體易剝離，腫瘤重量明顯減輕(P^).01)。CTX加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組瘤重均小于CTX組，其中CTX加注射用龍葵總生物堿中、大劑量組和CTX組相比，有統(tǒng)計學(xué)意義(PO.OS,P<0.01)。表明注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合對CTX具有一定的抗腫瘤增效作用。CTX加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組的白細(xì)胞和血小板和CTX組相比，無顯著差異。CTX加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合大劑量組小鼠的胸腺指數(shù)顯著高于CTX組(P<0.05)，CTX加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組小鼠的體重增長率均顯著高于CTX組(P《(M)5，P<0.01)。結(jié)果見表2124。表21對荷癍(S柳)小鼠抑癯率的影響(5±S)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)癍重(g)抑瘤率模型組—101.52±0.54一CTX組10101力5±0.4130.9CTX+華蟣素CTX+小劑量賴10+3X103MJ+1.210100.76±0.30AA57.2鄰.OCTX+中劑量組CTX+大劑量賴10+2.410+4.810100.62±0.29厶厶*(US±0.24AA"S9.276.9CTX+口服組100.89±0.45A41.4注和模型組相比較AAp〈Ml:和CTX組相比較，'P〈0,OS,"P<0.01。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>注和模型組相比較，AAP<0.01;和CTX組比較、<0.05。實(shí)驗(yàn)例8龍葵提取物與苦參素藥物組合物對荷瘤(H印)小鼠MMC化療的增效減毒作用實(shí)驗(yàn)方法無菌條件下抽取ICR小鼠腹腔內(nèi)生長8天的腹水癌細(xì)胞懸液，癌細(xì)胞懸液和滅菌生理鹽水按1:3稀釋，取1CR小鼠70只，早悉各半，體重1822g，接種稀釋后的癌細(xì)胞懸液IUml于腋部皮下。24h后隨機(jī)分為7組，即模型組、MMC組(lmg/kg)、MMC(lmg/kg)加華蟾素組(3g/kg)和MMC(lmg/kg)加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合小、中、大劑量組(1.2mg/kg、2.4mg/kg、4.8mg/kg)及口服組(2.4mg/kg),每組10只，分別靜脈注射給予相應(yīng)藥物(模型組注射等容積生理鹽水，口服組灌胃給藥)，8天后處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤，稱重，按下面公式計算抑瘤率。取胸腺、脾臟，稱重，按照下面公式計算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。對照組平均瘤重一實(shí)驗(yàn)組平均瘤重抑癍率(％)=胸腺(脾)指數(shù)=對照組平均癯重胸腺(脾)重量(g)體重xioo實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠接種H印肝癌移植性實(shí)體瘤后，4天皮下即可觸到腫瘤，8天后解剖腫瘤平均重量均大于lg,MMC及MMC加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組小鼠腫瘤浸潤范圍均小于模型組，瘤體易剝離，腫瘤重量明顯減輕(P《0.01)。MMC加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組瘤重均小于MMC組，其中MMC加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合中、大劑量組和MMC組相比，有統(tǒng)計學(xué)意義，<0.01>。表明注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合對MMC具有一定的抗腫瘤增效作用。MMC加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組的白細(xì)胞、血小板、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)和MMC組相比，無顯著差異。MMC加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組小鼠的體重增長率均顯著高于MMC組(PO.Ol)。結(jié)果見表2528。表25對荷瘤(H鄰)小鼠小鼠抑癯率的影響(玉土S)組別劑暈(mg/kg)動物數(shù)瘤重(g)抑癍率模型組—10l.S9±0.44一MMC組1101.03±0.42AA3S.2MMC+華糖素1+3X103100.64±032AA*S9.7MMC十小劑量組1+1.2100.71±(K3SAA55.3MMC+中劑量組1+2.410O.S3±030AA"66.7MMC+大劑量組1+4.8100.37±0.24AA"76.7MMC+口脤組1+2.4100.87±0.40AA45.2注和模型組相比較AAp〈(K01:和MMC組相比較，'P<0.05，"P<0.01。表26對荷癯(H鄰)小鼠白細(xì)胞、血小板計數(shù)的影響(JC±S)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)白細(xì)胞血小板模型組—1010.88±5.121007.8±123.4MMC組1101.27±0.98AAMMC+華糖素1+3X103100.98±0.61AA'205.1±73.5厶厶MMC+小劑量組1+1.2101.85±0.92AA214.7±75.9AAMMC+中劑量組1+2.4101.01±0.63AA287.4±104.6AAMMC+大劑量組1+4.8101.13士0,67厶a237.1±88.6AAMMC+口服組1+2.4101.35±0.67AA253.6±66.9AA注-和模型組相比較，aap<o.o:l:和MMC組比較'P<0.05,表27對荷癯(H印)小鼠體重增長率的影響(S±S,n=10)組別劑量(mg/kg)給藥前體重實(shí)驗(yàn)結(jié)束時體重體重增長率(％)模型組—19.75士0.8724.98±0.9226.5MMC組119.92土0.8918.68±1.95AA■6.2MMC+華螗素1+3X10319.47±0.8121.59±1.86"10.9MMC+小劑量組1+1.219.97士1.0222.21±2.07"11.2MMC+中劑量組1+2.419.58±0.9311,0MMC+大劑量組1+4.819.74±0.9522.32±2.0廣13.1MMC+口服組1+2.419.88±0.9121.57士2.18'8.S注和模型組相比較，AAP<0.01;和MMC組比較，'F<O.OS,"P<0.01。表28對荷瘤(H印)小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響(x±S,n-10)組別劑量(mg/kg)胸腺(g)胸腺指數(shù)脾指數(shù)模型組一100.338±0.0810.859±0,165MMC組1100.219±0.112A0.617±0.214AMMC+華艙素1+3X103100.237±0.0910.622±0.116MMC+小劑量組1+1.2100.248±0.1770.661±0.140MMC+中劑量組1+2.4100.262±0.1430.678±0.075MMC+大劑量組1+4.8100,271±0.1050.701±0.088MMC+口服組1+2.2100.209±0.0930.587±0.203注和模型組相比較，aap<0.01;和MMC組比較'p<0.05。實(shí)驗(yàn)例9龍葵提取物與苦參素藥物組合物對荷瘤(H印)小鼠5-Fu化療的增效減毒作用實(shí)驗(yàn)方法無菌條件下抽取ICR小鼠腹腔內(nèi)生長8天的腹水癌細(xì)胞懸液，癌細(xì)胞懸液和滅菌生理鹽水按1:3稀釋，取ICR小鼠70只，早S各半，體重1822g,接種稀釋后的癌細(xì)胞懸液0.2ml于腋部皮下。24h后隨機(jī)分為7組，即模型組、5-Fu組(15mg/kg)、5-Fu(15mg/kg)加華蟾素組(3g/kg)和5-Fu(15mg/kg)加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合小、中、大劑量組(1.2mg/kg、2.4mg/kg、4.8mg/kg)和口服組(2.4mg/kg)，每組10只，分別靜脈注射給予相應(yīng)藥物(模型組注射等容積生理鹽水，5-Fii組隔日注射一次)，8天后處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤，稱重，按下面公式計算抑瘤率。抑癍率(%)=_對磨均癯重—實(shí)驗(yàn)組平均癍重_X1TO%1^對照組平均瘤重實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠接種Hep肝癌移植性實(shí)體瘤后，4天皮下即可觸到腫瘤，8天后解剖腫瘤平均重量均大于lg,5-Fu及5>Fu加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組小鼠腫瘤浸潤范圍均小于模型組，瘤體易剝離，腫瘤重量明顯減輕(PO.01)。5-Fu加注射用龍葵總生物堿三個劑量組瘤重均小于5-Fn組，其中5-Fu加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合大劑量組和5-Fu組相比，有統(tǒng)計學(xué)意義(PO.Ol)。表明注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合對5-Fu具有一定的抗腫瘤增效作用。5-Fu加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組的白細(xì)胞、血小板、脾指數(shù)和5"Fu組相比，無顯著差異。5-Fu加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合大劑量組小鼠的胸腺指數(shù)顯著高于5-Fu組(PO.0S)，5-Fu加注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組小鼠的體重增長率均顯著高于5-Fu組(P0.05)。結(jié)果見表2932。表29對荷瘤(H印)小鼠抑癍率的影響(5±S)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)癍重(g)抑瘤率模型組一10一5"Fu組1S100.92±0.41AA36.65-Fu+華搶素15+3X10310O.S9±0.37AAS-Fu+小劑量5-Fu+中劑量15+1.2100.73±0.43AA49.715+2.4100.56±0.32AA61.45~Fu+大刑霣如15+4.81076.65-Fu+口服組15+2.4100.85±0.40AA41.4注和模型組相比較AAp〈0.01:和CTX組相比較，'P<0.05,"P<0.01,表30對荷癯(H印)小鼠白細(xì)胞、血小板計數(shù)的影響(；±S)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)白細(xì)胞血小板模型組一1010.00士2.72795.8士10S.35"Fu組15103.42±1.05AA747.1土148.9S-Fn+華螗素5-Fu+小劑量賴5-Fu+中劑量5-Fu+大劑量賴15+3X10315+1.21S+2.415+4.8101010103.19±1.18AA4.02±1.99AA5.28±2.84厶厶4.99±3.31厶&677.9±162.4719.4±151.7841.6±138.9673.7土72.55-Fu+口服組15+2.4103.13±1.17AAS9L9士115.8注和模型組相比較，AAP<0.01。表31對荷瘤(H印)小鼠體重增長率的影響(jc±S,n-10)組別劑量(mg/kg)給藥前體重實(shí)驗(yàn)結(jié)束時體重體重增長率(％)模型組—加.14±1.1526.54±1.2331.85-Fu組152037±1.2119.88±1.74AA-2.45"Fu+華蠊素15+3X10320,28±1.1921.74±1.38'7.25-Fu+小劑量組15+1.220.45±1.0923.19±2.09'13.4S-Fu+中劑量組1S+2.42ft.ll±0.9822.22±1.95'10.55-Fu+大劑量組15+4.820.09±1.0122.92±1.92'9.15-Fu+口服組15+2.420.26±1.2420.88±1363.1注和模型組相比較，AAP<0.01;和5"Fu組比較，'P<0.OS,"P<0.01。表32對荷瘤(H印)小鼠胸腺指數(shù)、脾措數(shù)的影響(；±S,n=10)組別劑量(mg/kg)腳腺(g)胸腺指數(shù)脾指數(shù)模型組一100.325±0.062化932土0.0915-Fu組15100.211±0.067AA0.564±0.192AA5-Fu+華錄素1S+3X103100.223±0.0650，±0.144S"Fm+小劑量組15+1.2100JS1±0.0760.593±0.1765-Fu+中劑量組15+2.4100.239±0.1110,611±0,158S-Fu+大劑量組1S+4.8100.278±0.068*0.621±0.1855-Fu+口服組1S+2.4100.22S士0.0750.577±0.166注和模型組相比較，AAP<0.01:和5-Fu組比較*P<0.05.實(shí)驗(yàn)例10龍葵提取物與苦參素藥物組合物對荷瘤小鼠TNF-ci，IL-2的影響實(shí)驗(yàn)方法無菌條件下抽取ICR小鼠腹腔內(nèi)生長8天的腹水癌細(xì)胞懸液，癌細(xì)胞懸液和滅菌生理鹽水按1:3稀釋，取ICR小鼠70只，早$各半，體重1822g,接種稀釋后的癌細(xì)胞懸液0.2ml于腋部皮下。24h后隨機(jī)分為7組，即模型組、S-Fu組(25mg/kg)、華蟾素組(3g/kg)和注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合小、中、大劑量組(1.2mg/kg、2.4mg/kg、4.8mg/kg)及口服組(2.4mg/kg)，每組10只，另取10只小鼠作為正常對照組。分別靜脈注射給予相應(yīng)藥物(正常對照組和模型組注射等容積生理鹽水，口服組灌胃給藥)。給藥容積均為10ml/kg。給藥8天后，眼眶取血，常規(guī)分離血清，-20t:保存，待測TNF-d和IL-2;脫頸椎處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤，稱重，按照下面公式計算抑瘤率；取胸腺、脾臟，稱重，按下面公式計算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。對照組平均癍重一實(shí)驗(yàn)組平均瘤重抑瘤率(％>=腳腺(脾)指數(shù)-對照組平均瘤重胸腺(脾)重量(g)體重xioo實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠接種S180移植性實(shí)體瘤后，3天皮下即可觸到腫瘤，8天后解剖腫瘤平均重量均大于lg，注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組小鼠腫瘤浸潤范圍均小于模型組，瘤體易剝離，腫瘤重量明顯減輕(<0.01)。模型組小鼠血清TNF-d、IL-2含量均低于正常對照組，注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合各組均可以升高血清TNF-a、IL-2含量，其中注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合中、大劑量組和模型組相比，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P^.05,PO.Ol)。結(jié)果見表3335。表33注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合對S鵬移植性實(shí)體癍抑癯率的影響(5±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>口服組2.4101.22±0.3317.6注和模型組相比較，*P<0.05,**P<0.01。表34注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合對S,助移植性實(shí)體瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響(S±S)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)胸腺指數(shù)脾指數(shù)正常對照組—100.2S2±0.0560.878±0.192模型組一100.253±0.0570.871±(U055-Fu組25100.131±0.054**0.S91±0.212*華鳙素組3X103100.223±0,0620.779±0.256小劑量組1.2100.242±0.0750.879±0.294中劑量組2.4100.231±0細(xì)0.822±0.197大劑量組4.8100.263±0.0620.915±0.186口服組2.4100.225±0.0510.787±0.210注-和正常對照組組相比較，*P<O.OS,**P<0.01。表3S對S,抑移植性實(shí)體癍小鼠血清TNF-a和1L"2含量的影響(；±S)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)TNF-a(ng/ml)IL-2(ng/ml)正常對照組—101.42±0.281.25士0.75模型組一101.01±0.30AA1.01±0.48S-Fu組25101.08±0.410.94±0.31華蟾素組3X103101.07±0.321.49±1.38小劑量組1.2101.26±0.321.37±1.07中劑量組2.4101.33±0.25'2.08±1.39'大劑量組4.810"0±0.18**2.19土1,S1'口服組2.410!25±0.34124±1.11注和正常對照組相比較，AAP<0.01;和模型組比較><0.05,"P<0.01。實(shí)驗(yàn)例11龍葵提取物與苦參素藥物組合物對小鼠血清溶血素量的影響實(shí)驗(yàn)方法ICR小鼠70只，體重2(K24g，雌雄各半。然后隨機(jī)分為7組，每組10只，即正常對照組、模型組、黃芪注射液組(6.7g/kg)和注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合小、中、大劑量組(1.2mg/kg、2.4mg/kg、4.8mg/kg)和口服組(2.4mg/kg)。各組小鼠靜脈注射給予相應(yīng)受試藥物(正常對照組和模型組靜脈注射給予等容積生理鹽水，口服組灌胃給藥)，給藥容積為10ml/kg,連續(xù)給7日。給藥后第4、6日，除正常對照組其余各組分別腹腔注射30mg/kg環(huán)磷酰胺，正常對照組注射等容積生理鹽水。各組小鼠從第3日開始分別腹腔注射5%綿羊紅細(xì)胞生理鹽水懸液0.2ml進(jìn)行免疫，共4日。末次灌胃給藥后30min，小鼠眼眶取血，分離血清鄰jil,用生理鹽水稀釋500倍。取稀釋血清lml，加入5%綿羊紅細(xì)胞0.5ml以及10%補(bǔ)體(新鮮豚鼠混合血清經(jīng)SRBC<10:1>于4°C吸收30min后置于-20。C備用)1ml，混勻后置于37°C恒溫水浴中30min，然后移至冰浴中終止反應(yīng)。1500rpm離心5min，取上清液lml，加都氏試劑(碳酸氫鈉1.0g、高鐵氰化鉀0.2g、氰化鉀0.05g加入蒸餾水1000ml)3ml，放置10min后，于540nm處測吸收度值。SRBC半數(shù)溶血時的吸收度值取S%SRBC(U5ml加都氏液至4ml，放置10mill后，比色讀取吸收光度值。按下面公式計算每只小鼠樣品的半數(shù)溶血值(HC鄰)。樣品的吸收度值SRBC半數(shù)溶血時的吸收度值X稀釋倍數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造模后小鼠血清溶血素量下降，模型組與正常對照組比較有顯著性差異(p<0.05)，表明小鼠經(jīng)造模后血清血溶素水平明顯下降；注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合三個劑量組均能明顯升高小鼠血清血溶素量水平，與模型組比較有顯著性差異(p<0.05)。結(jié)果見表36。表36對小鼠血清溶血素的影響(；±S)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)半數(shù)溶血值(HCso)正常對照組—3幼.12±30.56模型組一10149.47±33.14AA黃芪注射液1X10410228.9S±54.87**小劑量組1.210202.14±50.55*中劑量組2.410230.73±S3.26"大劑暈組4.810232.24±64.75**口瓶組2.410181.21±43.48注和正常對照組相比，AAP<0.01;和模型組相比較，'P<O.OS,"P<0.01。實(shí)驗(yàn)例12龍葵提取物與苦參素藥物組合物對小鼠炭粒廓清的影響實(shí)驗(yàn)方法ICR小鼠卯只，體重1822g,雌雄各半。然后隨機(jī)分為6組，每組15只，即正常對照組、黃芪注射液組(6.7g/kg)和注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合小、中、大劑量組(1.2mg/kg、2.4mg/kg、4.8mg/kg)和口服組(2mg/kg)。靜脈注射給予相應(yīng)受試藥物(正常對照組和模型組靜脈注射給予等容積生理鹽水，口服組灌胃給藥)，給藥容積為10ml/kg,連續(xù)給5日。末次給藥后30min,尾靜脈注射25%的印度墨汁0.1ml/10g,于2min和10min分別眼眶取血20jil，加入盛有2ml的碳酸鈉溶液(濃度1mg/ml)試管中，在6柳nm出測吸光度值0D2min和OD10min,將采完血液的小鼠處死，取肝、重。按下列公式計算廓清指數(shù)k及吞噬指數(shù)a。結(jié)果進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。X稀釋倍數(shù)a=體重(g)肝脾(g)1/3實(shí)驗(yàn)結(jié)果和正常對照組相比，注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合中、大劑量組均可以增加小鼠的碳粒廓清指數(shù)及吞噬指數(shù)，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，P<0,01)，表明注射用龍葵提取物與苦參素藥物組合可以增強(qiáng)小鼠單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能。結(jié)果見表37。表37對小鼠碳粒:廓清率的影響(x±S,n-15)組別劑量(mg/kg)動物數(shù)(只〉廓清指數(shù)k吞噬指數(shù)a正常對照組一150.040^0.0106.298±0.629黃芪注射液1X104150.052±0.014*6.887±0.818*小劑量組1.2150.048±0.012'6.825±1.292中劑量組2.4150.054±0.015*7.034±1.126*大劑量組4.8157.075±1.223'口脤組2.4150.043±0雄AAp<0.01,與空白對照組比較:p<0.05,**1<0.01與模型組|^,實(shí)施4龍葵提取物與苦參素藥物組合的制備(1)取龍葵全草與/或果實(shí)加入80%乙醇溶液提取3次，每次8倍量，回收乙醇，濃縮至相對密度1.25，濃縮液中加入3倍量的0.lmo1/1鹽酸溶液，充分?jǐn)嚢?，冷藏，過濾，濾渣用鹽酸溶液洗滌2次，合并濾液和洗滌液，以弱極性或中等極性樹脂吸附。樹脂吸附后先用水沖洗樹脂柱/床至流出液近中性；再以O(shè).lraol/I氨水溶液沖洗樹脂柱/床至流出液近無色，再以含醇量20/。乙醇液沖洗樹脂柱/床至流出液近無色。棄去。再以70%乙醇進(jìn)行洗脫，至洗脫液顯無色，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，以l.Omoi/1的氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至9,靜置，冷藏，收集沉淀。自然晾干，即可得龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提將上述龍葵提取物3重量份與苦參素2重量份以混合均勻，即得本發(fā)明所述藥物組合①。以上所述的堿性溶液選自氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鉀、氫氧化鎂和氨水溶液；所述的酸性溶液選自醋酸、鹽酸、硫酸和擰檬酸溶液；所述的洗脫用有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一項(xiàng)或者兩項(xiàng)或者三項(xiàng)以任意比例形成的混合相p(2)取龍葵全草與/或泉實(shí)加入70%乙醇溶液提取3次，每次7倍量，回收乙醇，濃縮至相對密度1.15,濃縮液中加入2.5倍量的0.lmol/1鹽酸溶液，充分?jǐn)嚢?，冷藏，過濾，濾渣用鹽酸溶液洗滌3次，合并濾液和洗滌液，以弱極性或中等極性樹脂吸附。樹脂吸附后先用水沖洗樹脂柱/床至流出液近中性；再以0.1mol/i氫氧化鈉溶液沖洗樹脂掛床至流出液近無色，再以含醇暈30%乙醇液沖洗樹脂柱/床至流出液近無色。棄去。再以75%乙醇進(jìn)行洗脫，至洗脫液顯無色，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，以l.Omol/l的氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至9，靜置，冷藏，收集沉淀。自然晾干，即可得龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物提取物。將上述龍葵提取物2重量份與苦參素1重量份以混合均勻，即得本發(fā)明所述藥物組合②。以上所述的堿性溶液選自氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鉀、氫氧化鎂和氨水溶液；所述的酸性溶液選自醋酸、鹽酸、硫酸和檸檬酸溶液；所述的洗脫用有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一項(xiàng)或者兩項(xiàng)或者三項(xiàng)以任意比例形成的混合相。(3)取龍葵全草與/或果實(shí)加入75%乙醇溶液提取2次，每次8倍量，回收乙醇，濃縮至相對密度1.10，濃縮液中加入3倍量的0.15mol/l鹽酸溶液，充分?jǐn)嚢?，冷藏，過濾，濾渣用鹽酸溶液洗滌3次，合并濾液和洗滌液，以弱極性或中等極性樹脂吸附。樹脂吸附后先用水沖洗樹脂柱/床至流出液近中性；再以O(shè).lmol/I氨水溶液沖洗樹脂柱/床至流出液近無色，再以含醇量20%乙醇液沖洗樹脂掛床至流出液近無色。棄去。再以70%乙醇進(jìn)行洗脫，至洗脫液顯無色，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，以l.Omol/l的氫氧化鎂溶液調(diào)PH值至10,靜置，冷藏，收集沉淀。自然晾干，即可得龍葵總生物堿含量大于鄰％的龍葵提取物提取物。將上述龍葵提取物1重量份與苦參素1重量份以混合均勻，即得本發(fā)明所述藥物組合③。以上所述的堿性溶液選自氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鉀、氫氧化鎂和氨水溶液；所述的酸性溶液選自醋酸、鹽酸、硫酸和檸檬酸溶液；所述的洗脫用有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一項(xiàng)或者兩項(xiàng)或者三項(xiàng)以任意比例形成的混合相。實(shí)施例2注射劑的制備(1)龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物與苦參素藥物組合的制備方法同實(shí)施例l。(2)水針劑的制備稱取龍葵總生物堿含量在50%以上的龍葵提取物與苦參素藥物組合物10g，用注射用水溶解，調(diào)PH值至7，過濾，滅菌，檢驗(yàn)，包裝，得水針劑1000支。(3)輸液劑的制備稱取龍葵總生物堿含量在50%以上的龍葵提取物與苦參素藥物組合物10g，用適量法射用水溶解后，以O(shè).lmol/1的鹽酸調(diào)節(jié)PH值至67,攪拌30分鐘，加入一定活性炭，繼續(xù)攪拌半個小時，過濾，過(U2iim濾膜后，加入適量注射用水，攪拌灌裝，即得輸液劑。(4)凍干粉針劑的制備稱取龍葵總生物堿含量在50%以上的龍葵提取物與苦參素藥物組合物10g,加10(M)ml注射用水，柳X:90'C保溫攪拌，完全溶解后，加入100g的甘露醇，攪拌使溶解；調(diào)節(jié)pH值至67，無菌精濾，定量分裝于管制玻璃瓶中，冷凍干燥，即得。實(shí)施例3固體制劑的制備(1)龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物與苦參素藥物組合的制備方法同實(shí)施例l。(2)片劑的制備龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物與苦參素藥物組合10克，藥用輔料淀粉、硬脂酸鎂100克?；旌暇鶆?，粉碎，過篩，制粒，干燥,壓片，檢驗(yàn)，包裝，得片劑10000片。(3)膠囊劑的制備稱取龍葵總生物堿含量在50%以上的龍葵提取物與苦參素藥物組合物100g,藥用淀粉1000g，混合均勻，裝入2號膠囊，每粒含藥物組合物100mg。(4)散劑的制備稱取龍葵總生物堿含量在50%以上的龍葵提取物與苦參素藥物組合物1000g,淀粉1000g，混合均勻，分裝，使每袋含藥物組合物100mg即得。權(quán)利要求1、一種藥物組合，其特征在于由龍葵提取物與苦參素組成。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，龍葵提取物中龍葵總生物堿的含量大于50%。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其制備方法如下①龍葵總生物堿的提取步驟如下取龍葵全草與/或果實(shí)，加入50%90%乙醇溶液提取23次，每次68倍量，回收乙醇，濃縮至相對密度1.25,濃縮液中加入24倍量的0.lmol/1酸性溶液，充分?jǐn)嚢?，冷藏，過濾，濾渣用鹽酸溶液洗滌13次，合并濾液和洗滌液，以弱極性或中等極性樹脂吸附。樹脂吸附后先用水沖洗樹脂柱/床至流出液近中性；再以0.1mol/l堿性溶液沖洗樹脂柱/床至流出液近無色，再以含醇量10%40%乙醇液沖洗樹脂柱/床至流出液近無色。棄去。再以50卯％2醇進(jìn)行洗脫，至洗脫液顯無色，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，以0.5l,5iml/l的堿性溶液調(diào)PH值至810,靜置，冷藏，收集沉淀。自然晾干，即可得龍葵總堿含量大于50%的龍葵提取物。②將上述龍葵提取物與苦參素以規(guī)定比例混合均勻，加入適當(dāng)輔料，即得本發(fā)明所述藥物組合。以上所述的堿性溶液選自氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鉀、氫氧化鎂和氨水溶液；所述的酸性溶液選自醋酸、鹽酸、硫酸和檸檬酸溶液；所述的洗脫用有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一項(xiàng)或者兩項(xiàng)或者三項(xiàng)以任意比例形成的混合相。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于含龍葵總生物堿含量大于鄰^的龍葵提取物14重量份、苦參素13重量份。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于優(yōu)選比例為龍葵總堿含量大于50%的龍葵提取物3重量份、苦參素2重量份。6、根據(jù)權(quán)利要求1和3所述的藥物組合，其特征在于該藥物組合和一種或幾種藥用賦形劑，或可與該藥物組合組方的其他藥物制備成抗腫瘤的口服藥物制劑或非腸道藥物制劑。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物制劑，其特征在于含有1"%99%的龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物與苦參素混合物和99%1%的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物制劑，其特征在于優(yōu)選含有45%95%的龍葵總生物堿含量大于50%的龍葵提取物與苦參素混合物和55%5%的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物制劑，其特征在于最好含有75%90%的龍葵總生物堿含量大于鄰％的龍葵提取物與苦參素混合物和25%10%的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。10、根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于所述口服藥物制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑、混懸劑、口服液體制劑等所述非腸道給藥劑型為注射液、輸液劑、凍千注射劑、注射乳劑、氣霧劑、栓劑等；所述藥用賦形劑為溶劑、崩解劑、矯味劑、粘合劑、著色劑、防腐劑等；所述的其它配伍用的藥物，指的是以有效劑量的含龍葵總生物堿不少于鄰％的龍葵提取物與苦參素藥物組合為一定的藥物原料，再配伍其它已允許合用的中藥或化學(xué)藥品。全文摘要本發(fā)明公開了一種抗惡性腫瘤療效顯著、毒副作用小、使用安全的藥物組合。該組合物由中藥材龍葵的提取物和豆科植物苦豆草的種子苦豆子或豆科植物苦參的根中提取的苦參素組成。該藥物組合中龍葵提取物的龍葵總生物堿含量大于50％。本發(fā)明的藥物組合中含龍葵總堿含量大于50％的龍葵提取物1～4重量份、苦參素1～3重量份。其中優(yōu)選比例為龍葵總堿含量大于50％的龍葵提取物3重量份、苦參素2重量份。本發(fā)明還公開了該藥物組合的制備方法。文檔編號A61K9/08GK101411780SQ20071005616公開日2009年4月22日申請日期2007年10月15日優(yōu)先權(quán)日2007年10月15日發(fā)明者李明慧,石楊申請人:劉陽