專利名稱：：一種山楂精降脂膠囊含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及-,山楂精降脂膠囊含量測定方法。技術(shù)背景山楂精降脂膠囊為山楂精降脂片的改劑型品種，原山楂精降脂片為中華人民共和國衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)第9冊收載的品種，由山楂水解提取物組成，具降血脂作用。原標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下收載的含量測定方法是以槲皮素為對照，通過與亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉溶液顯色后，采用分光光度法，在510nm處測定總黃酮含量。似在實(shí)際測定中發(fā)現(xiàn)，原測定方法，測定依據(jù)不合理，無法準(zhǔn)確測定供試品的含量。其理山有3點(diǎn)，(1)槲皮素對照品溶液顯色后，在510nm處無吸收，而供試品溶液有吸收，但吸收峰在480nm處。以無吸收峰的做對照，測定有吸收峰的含量，測定的結(jié)果是沒有任何參考價值的(見圖l、2、3、4)。(2)510nm是紫紅色的吸收區(qū)，樣品和對照品加堿后，樣品為紫紅色的，對照品為黃色的，在可見光區(qū)，以黃色做對照，測定紫紅色，從另一方面又說明了方法的欠科學(xué)性。(3)原含量測定方法樣品是以乙醇為提取溶劑，取2.0ml置10ml量瓶屮，加水及水系W色試劑至刻度，脂溶性成分析出，溶液變渾濁，影響吸收度。所以說原測定方法，無法準(zhǔn)確測定供試品的含量。
發(fā)明內(nèi)容通過對提取溶劑、顯色條件、測定波長的探討研究，提供-』種以槲皮素為指標(biāo)，316nm為檢測波長，低濃度乙醇為樣品提取溶劑，測定總黃酮的科學(xué)、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、靈敏度高的含量測定方法。解決了原測定方法，槲皮素對照品吸收度不隨濃度成比例增長，只能達(dá)到0.56的弊端，使其吸收度落在方法學(xué)規(guī)定的范圍之內(nèi)；線性相關(guān)系數(shù)由原方法r=0.9723，提高到r=0.9997;加樣問收實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明問收率為99.75%(見附表l)。方法的靈敏度是原方法的5倍以上。準(zhǔn)確測定方法提供了正確的含量限度，由原方法規(guī)定的毫無根據(jù)的每片或粒不得低下4.5mg，修訂為不得低于0.90mg。真正起到了科學(xué)、準(zhǔn)確控制制劑質(zhì)量的作消。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為1.對照品溶液的制備精密稱取在干燥器中干燥24小時的槲皮素適量，加乙醇配置成原液，再取一定量原液，加3060%的乙醇稀釋成每ml含槲皮素0.030.07mg的溶液；2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對照品溶液1.0，2.0，3.0ml分別置25ml量瓶中，依次加3060%乙醇使總量為5ml，搖勻，依次加5°/。亞硝酸鈉溶液lml，搖勻，放置6分鐘，再分別加10%的硝酸鋁溶液lml，搖勻，放置6分鐘，分別加入氫氧化鈉試液10ml，加3060%乙醇至刻度，搖勻，避光放置15分鐘，以相應(yīng)的溶劑和試劑為隨行空白，照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄VB)，迅速在316士2nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程；3.測定法取樣品10粒，傾出內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取0.030.5g，置具塞錐形瓶中，精密加3060%乙醇2550ml，密塞，稱定重量，回流1030分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，再用0.45um微孔濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液l5.0ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自加"加30609()乙醇使總量為5ml"起，依法測定吸收度，用回歸方程，計(jì)算供試品中槲皮素的含量。本發(fā)明的原理如下以槲皮素為對照，通過與亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉溶液顯色后，槲皮素對照品與供試品溶液在316士2nm處都有吸收峰，而且其含量與吸收強(qiáng)度符合比爾定律。本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)及有益效果如下(1)首次發(fā)現(xiàn)與亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉溶液顯色的槲皮素與總黃酮其共有吸收峰在316士2nm處，并非文獻(xiàn)報道的510nm處。(2)以低濃度乙醇取代乙醇作為樣品的提取溶劑，解決了原方法樣品溶液加水及水系顯色試劑后，溶液變渾濁，影響吸收度，使原方法失去準(zhǔn)確性的弊端。(3)檢測波長和提取溶劑的改進(jìn)，有效提高了方法的準(zhǔn)確性、靈敏度、重現(xiàn)性和線性范圍。徹底解決了原測定方法，槲皮素對照品含量不隨濃度成比例增長的弊端(其吸收度在0.1960.56)，使其吸收度落在方法學(xué)規(guī)定的范圍之內(nèi)；線性相關(guān)系數(shù)由Y=0.9723(見附表2、圖5)，提高到￥=0.9997(見附表3、圖6);方法的靈敏度是原方法的5倍以上。(4)提取方式由原方法的索氏提取3小時，改為回流10分鐘，縮短了時間，節(jié)約了試劑，提高了效率。(5)本發(fā)明不僅為山楂精降脂膠囊中的總黃酮含量提供了準(zhǔn)確、重現(xiàn)、靈敏的測定方法。糾正了由于原測定方法的不正確性，而導(dǎo)致制劑的含量限度不正確性。還為其他制劑中以槲皮素為指標(biāo)的總黃酮含量測定提供了新的參考依據(jù)。(6)根據(jù)測定結(jié)果，以正確的含量限度取代了原標(biāo)準(zhǔn)無根據(jù)的限度規(guī)定。真正起到了科學(xué)、準(zhǔn)確控制制劑質(zhì)量，確保人民用藥安全、有效的的作用。圖l槲皮素對照品光譜掃描圖圖2山楂精降脂膠囊光譜掃描3山楂精降脂片光譜掃描4空白樣品光譜掃描5原測定方法槲皮素對照品的線性關(guān)系6本發(fā)明方法槲皮素對照品的線性關(guān)系圖本發(fā)明具體實(shí)施方式如下1.對照品溶液的制備精密稱取在干燥器中干燥24小時的槲皮素適量，加乙醇配置成原液，再取一定量原液，加3060%的乙醇稀釋成每ml含槲皮素0.030.07mg的溶液；2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對照品溶液1.0，2.0，3.0ml分別置25ml量瓶中，依次加3060%乙醇使總量為5ml，搖勻，依次加5%亞硝酸鈉溶液lml，搖勻，放置6分鐘，再分別加10%的硝酸鋁溶液lml，搖勻，放置6分鐘，分別加入氫氧化鈉試液10ml，加3060%乙醇至刻度，搖勻，避光放置15分鐘，以相應(yīng)的溶劑和試劑為隨行空白，照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄VB)，迅速在316士2nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程；3.測定法取樣品10粒，傾出內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取0.030.5g，置具塞錐形瓶中，精密加3060%乙醇2550ml，密塞，稱定重量，回流1030分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，再用0.45um微孔濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液15.0ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自加"加306(m乙醇使總量為5ml"起，依法測定吸收度，用回歸方程，計(jì)算供試品中槲皮素的含量。本品每粒含總黃酮以槲皮素(C15H1()07)計(jì)，不得少于0.90mg。十批山楂精制劑中總黃酮含量測定結(jié)果見附表4。附表1槲皮素的回收率試驗(yàn)結(jié)果_樣品取樣對照品加入總測得量~~樣品測得量~~對照品湖ij~iH~~^^§5<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>附表2原方法槲皮素濃度與吸收度濃度(mg/ml)0.330.660.991.321.65吸收度0.1960.3460.4520.4980.560回歸方程Y=0.2667X+0.1464y=0.9723附表3本發(fā)明方法槲皮素濃度與吸收度濃度(ug/ml)61.2122.4153183.6244.8吸收度0.2160.4660.5670.6920.926回歸方程Y=3.8497X-0.0156y=0.9997附表4山楂精制劑中總黃酮含量測定結(jié)果樣品名稱樣品批號總黃酮含量(1Tig/?；蚱?生產(chǎn)廠家冋歸法_-點(diǎn)法山楂精降脂膠囊0509111.421.42承德燕峰藥業(yè)山楂精降脂膠囊0509121.131.12承德燕峰藥業(yè)山楂精降脂膠囊0508131.311.30承德燕峰藥業(yè)山楂精降脂膠囊0509151.311.31承德燕峰藥業(yè)山楂精降脂膠囊0509161.33l爭32承德燕峰藥業(yè)山楂精降脂膠囊0509171.341.33承德燕峰藥業(yè)山楂精降脂膠囊0509181.201.19承德燕峰藥業(yè)山楂精降脂膠囊0509191.191.19承德燕峰藥業(yè)山楂精降脂膠囊0509202.082.08承德燕峰藥業(yè)山楂精降脂膠囊0509212.102.09承德燕峰藥業(yè).山楂精降脂片0512010.920.91福建匯天藥業(yè)權(quán)利要求1.一種山楂精降脂膠囊含量測定方法。其特征在于(1)對照品溶液的制備精密稱取在干燥器中干燥24小時的槲皮素適量，加乙醇配置成原液，再取一定量的原液，加30～60％的乙醇稀釋成每ml含槲皮素0.03～0.07mg的溶液；(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對照品溶液1.0，2.0，3.0ml分別置25ml量瓶中，依次加30～60％乙醇使總量為5ml，搖勻，依次加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，再分別加10％的硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，分別加入氫氧化鈉試液10ml，加30～60％乙醇至刻度，搖勻，避光放置15分鐘，以相應(yīng)的溶劑和試劑為隨行空白，照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄VB)，迅速在316±2nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程；(3)測定法取樣品10粒，傾出內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取0.03～0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加30～60％乙醇25～50ml，密塞，稱定重量，回流10～30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，再用0.45μm的微孔濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液1～5.0ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自加“加30～60％乙醇使總量為5ml”起，依法測定吸收度，用回歸方程，計(jì)算供試品中槲皮素的含量。全文摘要本發(fā)明涉及一種山楂精降脂膠囊含量測定方法。其特征點(diǎn)如下通過對提取溶劑、顯色條件、測定波長的探討研究，提供一種以槲皮素為測定指標(biāo)，316nm為檢測波長，低濃度乙醇為樣品提取溶劑，測定總黃酮的科學(xué)、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、靈敏度高的含量測定方法。該方法解決了原方法槲皮素含量不隨濃度成比例增長的弊端，線性相關(guān)系數(shù)由γ＝0.9723，提高到γ＝0.9997；方法的靈敏度是原方法的5倍以上。準(zhǔn)確的測定方法提供了正確的含量限度，真正起到了科學(xué)、準(zhǔn)確控制制劑質(zhì)量，確保用藥安全、有效的作用。文檔編號A61P3/00GK101264147SQ200710061588公開日2008年9月17日申請日期2007年3月12日優(yōu)先權(quán)日2007年3月12日發(fā)明者張文臣,趙志軍,韓桂茹申請人:張文臣