專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種治療阿爾茨海默癥的中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥組合物，尤其涉及一種治療阿爾茨海默癥的中藥組合物及其制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：目前，臨床治療阿爾茨海默癥(AD)，中醫(yī)主要是針對(duì)腎精虧損，腦髓失養(yǎng)而應(yīng)用益髓填精的單味藥及復(fù)方藥物，如何首烏、還少丹等，用于改善記憶力，提高智力水平，阻止腦萎縮的進(jìn)程，或者針對(duì)心脾兩虛而采用補(bǔ)脾益氣，養(yǎng)血安神藥，例如黃芪、黨參、人參以及遠(yuǎn)志等，具有益智強(qiáng)記之功效。然而，由于這類(lèi)治療對(duì)于導(dǎo)致淀粉樣蛋白沉積的級(jí)聯(lián)因素影響甚微，臨床療效并未獲得顯著提高。可行的西醫(yī)治療分為兩類(lèi)其一是改善癥狀類(lèi)，主要是提高膽堿能神經(jīng)元的功能。膽堿類(lèi)似物可用來(lái)緩解記憶力喪失，目前效果較好的膽堿脂酶(ACHE)的抑制劑是Tacrine和donepezil及新發(fā)展的一些類(lèi)似藥物、此外還開(kāi)發(fā)了膽堿脂酶受體的拮抗劑。這些藥物可能緩解膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)參與的APP的異常剪切過(guò)程，但缺乏特異的療效。另一類(lèi)是利用抗氧化劑的神經(jīng)保護(hù)類(lèi)藥物。神經(jīng)保護(hù)類(lèi)藥物可成功地減慢AD的病程，已證實(shí)ct一tocopherol和selegmne可以明確地減慢AD的主要病理過(guò)程，但不能緩解已經(jīng)出現(xiàn)的癥狀。迄今為止，對(duì)阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)以淀粉樣物瀑布效應(yīng)假說(shuō)為主導(dǎo)地位。該學(xué)說(shuō)認(rèn)為p-淀粉樣蛋白(A/3)沉積是AD發(fā)病的中心環(huán)節(jié)，一系列連續(xù)的變化事件是AD病理改變的主要因素。通過(guò)一些措施清除淀粉樣蛋白后，神經(jīng)系統(tǒng)病變?nèi)缟窠?jīng)元皺縮、小膠質(zhì)細(xì)胞激活可以逆轉(zhuǎn)。A/S存在于腦脊液和血漿中，是健康人體液的正常組成成分。可溶性A/5是相對(duì)無(wú)毒的，一旦聚集為淀粉樣蛋白后就會(huì)引起神經(jīng)系統(tǒng)退行性變。A/3毒性作用的產(chǎn)生與其數(shù)量增多密切相關(guān)。研究證明，AD病人腦A(3含量比正常對(duì)照明顯增加。在AD病人的腦中，A/3沉積在老年斑和大腦的血管壁上。通常認(rèn)為這種沉積引發(fā)了病理的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致神經(jīng)元功能紊亂和死亡。A^蛋白通過(guò)惡性改變神經(jīng)元的功能甚至存活來(lái)起作用。A/3增加了H202的生成，從而引起了氧化損傷和細(xì)胞死廣:。氧化應(yīng)激即自由某產(chǎn)生的細(xì)胞毒性效應(yīng)，在利用氧氣的lK常和異常的細(xì)胞活動(dòng)中產(chǎn)生。氧自由基對(duì)神經(jīng)元的細(xì)胞膜和線(xiàn)粒體的DNA產(chǎn)生損傷。氧化損傷也可使神經(jīng)元更易受到興奮性氨基酸的傷害。自由基也有助于A/3的聚集、沉積以及與ApoE-4的結(jié)合。在AD患者大腦皮層中脂質(zhì)過(guò)氧化的增加和線(xiàn)粒體的破壞證明了在AD中有異常增強(qiáng)的氧化損傷。除了引起氧白由基對(duì)神經(jīng)元的直接損害外，A/3可以激活小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞。在動(dòng)物模型中，A^斑塊和激活的小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量呈正相關(guān)，后者產(chǎn)生毒性自由基并分泌細(xì)胞因子，從而對(duì)神經(jīng)元產(chǎn)生進(jìn)一步地?fù)p害。小膠質(zhì)細(xì)胞可合成和分泌A^，而刺激物恰恰是A/3本身，從而形成一個(gè)正反饋機(jī)制，使A/3生成量不斷增加。在AD病人的腦中，大量炎癥反應(yīng)的分子標(biāo)志物的水平也大大增加，這些內(nèi)源產(chǎn)生的因子又可以促進(jìn)A^產(chǎn)生和沉積，從而進(jìn)一步刺激炎癥反應(yīng)。A/3也可以直接誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放細(xì)胞因子。同時(shí)，A/3沉積還可以激活補(bǔ)體的不依賴(lài)抗體形成的經(jīng)典途徑。補(bǔ)體的激活又反過(guò)來(lái)驅(qū)動(dòng)并維持多種慢性、低水平的炎癥反應(yīng)。A/3干擾鈣的穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)，增加神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的濃度，從而激活細(xì)胞內(nèi)的蛋白激酶、脂酶和其他可導(dǎo)致細(xì)胞死亡的酶類(lèi)。鈣—內(nèi)流也可損傷線(xiàn)粒體，從而增加自由基的產(chǎn)生和氧化損傷?？梢哉J(rèn)為，A/340或A/542產(chǎn)生過(guò)多，是形成淀粉樣蛋白沉積從而引起AD的主要病因。A/340和A/342是APP經(jīng)過(guò)分泌酶切割后的產(chǎn)物。APP是一種跨膜的單鏈糖蛋白，它的半衰期很短，通過(guò)兩條通路代謝。經(jīng)分泌酶切割后，會(huì)產(chǎn)生A^40或A/342。因此，抑制/3分泌酶的活性，減少A^40或A^42的產(chǎn)生，可以達(dá)到阻斷淀粉樣蛋白的沉積，阻抑氧化損傷、非特異性炎癥反應(yīng)，保持鈣離子穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)的目的，從而預(yù)防和治療AD。而現(xiàn)有中西藥物尚不能有效地阻抑上述A/340或Aj842產(chǎn)生過(guò)多這一核心病理過(guò)程。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供-種對(duì)于阿爾茨海默癥療效顯著的中藥組合物。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下技術(shù)途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種治療阿爾茨海默癥的中藥組合物，由以下重量份的原料藥制成梔子150-200份和三七總皂苷4-6份。優(yōu)選的，各原料藥的重量份是梔子180份，三七總皂苷5份。三七總皂苷是將五加科植物三七[尸a"ox"otog/"""gF/Z.C/je"]的蘆頭按照現(xiàn)有的提取工藝提取得的總皂苷，另外，三七總皂苷在國(guó)內(nèi)很多醫(yī)藥公司有售(例如云南玉溪萬(wàn)方天然藥物有限公司，商品名稱(chēng)三七總皂苷)。本發(fā)明所用到的原料都可從普通中醫(yī)藥商店購(gòu)買(mǎi)得到，其規(guī)格符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明人在多年的研究基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)，腎虛是阿爾茨海默癥的發(fā)生與發(fā)展的根本原因，而痰濁停聚和脈絡(luò)瘀阻后化毒為害，產(chǎn)生的"內(nèi)生之毒"則為阿爾茨海默癥發(fā)病過(guò)程中的基本病理環(huán)節(jié)。阿爾茨海默癥病程延綿，腦神難復(fù)的深層病機(jī)乃為"毒損腦絡(luò)"。其實(shí)質(zhì)為年高體虛，腎衰精枯，肝脾腎功能低下，七情內(nèi)傷，氣血失調(diào)，痰濁內(nèi)生，氣滯血瘀，痰濁瘀血混雜于腦髓，元神失養(yǎng)，神明失聰，神機(jī)失調(diào)而致癡呆，其發(fā)病特點(diǎn)是本虛標(biāo)實(shí)，虛實(shí)夾雜的疾患。現(xiàn)代神經(jīng)病理學(xué)、分子生物學(xué)、神經(jīng)生理及神經(jīng)解剖學(xué)證實(shí)，老年癡呆的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程與腦的微循環(huán)及神經(jīng)細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境變化有關(guān)，且與超氧自由基的攻擊、興奮性氨基酸的增加而產(chǎn)生的神經(jīng)毒性作用密切相關(guān)。因此，解毒、通絡(luò)是針對(duì)本病病機(jī)關(guān)鍵的核心治療大法。本發(fā)明針對(duì)阿爾茨海默癥乃AiS40或A^42產(chǎn)生過(guò)多這一核心病理過(guò)程，解決對(duì)腦神(神經(jīng)元)的保護(hù)作用問(wèn)題。本發(fā)明從毒論治以"解毒通絡(luò)"立法，建立涼血解毒、化瘀通絡(luò)的藥物配伍原則，解毒以祛除內(nèi)生毒性物質(zhì)損害，則絡(luò)脈易和，腦神可復(fù)；通絡(luò)以改善缺血腦區(qū)的微灌流狀態(tài)，暢通氣血的滲灌使毒易祛，從而阻斷淀粉樣蛋白沉積的惡性循環(huán)損傷病理過(guò)程。本發(fā)明中藥組合物可有效阻抑A/340和A042的過(guò)度產(chǎn)生，阻斷淀粉樣蛋白的沉積，保持鈣離子穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)，阻抑淀粉樣斑塊引起的氧化損傷、非特異性炎癥反應(yīng)和代謝毒性物質(zhì)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的繼發(fā)性損害。從而解除病變的發(fā)生和發(fā)展，減輕遲發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞死亡和皮層萎縮，對(duì)于阿爾茨海默癥療效顯著。本發(fā)明藥物活性組分可以加入制備不同劑型時(shí)所需的各種輔料，例如崩解劑、潤(rùn)滑劑、黏合劑等，以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用的口服制劑或注射制劑，例如可以是丸劑、膠囊劑、片劑、散劑、顆粒劑、口服液或注射液等，優(yōu)選為注射液。優(yōu)選的，一種制備本發(fā)明中藥組合物的方法，包括以下步驟(1)按下述重量份稱(chēng)取各原料梔子150-200份，三七總皂苷4-6份；(2)將梔子粉碎成粗粉，用50-90%的乙醇滲漉，收集滲漉液，回收乙醇，濃縮，得清膏l(xiāng);(3)將清膏l(xiāng)加水稀釋?zhuān)瑪噭颍洳?，濾過(guò)，將濾液減壓濃縮，得清膏2;(4)將清膏2上活性炭柱，先叫蒸餾水洗脫至洗脫液無(wú)色，再用60-80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，干燥，得梔子半成品；(5)將梔子半成品與三七總皂苷混勻，按照現(xiàn)有技術(shù)制劑成型，即得。上述制備方法中，優(yōu)選的，步驟(2)中將梔子粉碎成粗粉，用70%的乙醇滲漉；所述清膏1的相對(duì)密度優(yōu)選為1.10(6(TC測(cè)定)。步驟(3)中優(yōu)選將清膏1加3-5倍重量水稀釋?zhuān)凰龅睦洳貎?yōu)選為在0-4"C溫度下冷藏48小時(shí)；所述清膏2的相對(duì)密度優(yōu)選為1.10(6(TC測(cè)定)。步驟(4)中所述乙醇洗脫優(yōu)選為用8-12倍重量70%乙醇進(jìn)行洗脫。本發(fā)明藥物的用法與用量本發(fā)明藥物的用藥量取決于具體劑型，以及病人的年齡、體重、健康狀況等因素。作為指導(dǎo):注射液在臨床使用過(guò)程中，患者每次3支(30ml)，每日一次，加入0.9。/。生理鹽水250ml，40滴/分鐘。具體實(shí)施方式以下通過(guò)實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例僅用于例證的目的，決不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例l按下述重量稱(chēng)取各原料梔子150g，三七總皂苷4g;將梔子粉碎成粗粉，用50%的乙醇滲漉，收集滲漉液，回收乙醇，濃縮，得清膏l(xiāng);將清膏1加3倍重量水稀釋?zhuān)瑪噭?，冷藏，濾過(guò)，將濾液減壓濃縮，得清膏2;將清膏2上活性炭柱，先用蒸餾水洗脫至洗脫液無(wú)色，再用8倍重量60%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，干燥，得梔子半成品；在取得梔子半成品后，將其用適量注射用水溶解，濾過(guò)；另取三七總皂苷(購(gòu)自云南玉溪萬(wàn)方天然藥物有限公司，商品名稱(chēng)三七總皂苷)，加適量注射用水溶解，過(guò)濾；將三七藥液與梔子藥液混勻，調(diào)節(jié)pH值至6.0-7.0，0-4T:冷藏24小時(shí)，0.45/mi濾膜過(guò)濾，加注射用水于濾液中至1000ml，再用0.22/mi濾膜過(guò)濾，濾液灌裝成于注射液安瓿，11(TC熱壓滅菌30分鐘，即得。實(shí)施例2按下述重量稱(chēng)取各原料梔子200g，三七總皂苷6g;將梔子粉碎成粗粉，用90%的乙醇滲漉，收集滲漉液，回收乙醇，濃縮，得清膏l(xiāng);將清膏1加5倍重量水稀釋?zhuān)瑪噭?，冷藏，濾過(guò)，將濾液減壓濃縮，得清膏2;將清膏2上活性炭柱，先用蒸餾水洗脫至洗脫液無(wú)色，再用12倍重量80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，干燥，得梔子半成品；在取得梔子半成品后，將其用適量注射用水溶解，濾過(guò)；另取三七總皂苷(購(gòu)自云南fi溪萬(wàn)方天然藥物有限公司，商品名稱(chēng)三七總皂苷)，加適量注射用水溶解，過(guò)濾；將三七藥液與梔子藥液混勻，調(diào)節(jié)pH值至6.0-7.0，0-4t:冷藏24小時(shí)，0.45/wn濾膜過(guò)濾，加注射用水于濾液中至1000ml，再用0.22pm濾膜過(guò)濾，濾液灌裝成于注射液安瓿，11(TC熱壓滅菌30分鐘，即得。實(shí)施例3按下述重量稱(chēng)取各原料梔子180g,三七總皂苷5g;將梔子粉碎成粗粉，用70%的乙醇滲漉，收集滲漉液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為I.IO(60°C測(cè)定)，得清膏l(xiāng);將清膏1加4倍重量水稀釋?zhuān)瑪噭颍?-4"C溫度下冷藏48小時(shí)，濾過(guò)，將濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為I.IO(60°C測(cè)定)，得清膏2;將清膏2上活性炭柱，先用蒸餾水洗脫至洗脫液無(wú)色，再用10倍重量70%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，干燥，得梔子半成品；在取得梔子半成品后，將其用適量注射用水溶解，濾過(guò)；另取三七總皂苷(購(gòu)自云南玉溪萬(wàn)方天然藥物有限公司，商品名稱(chēng)三七總皂苷)，加適量注射用水溶解，過(guò)濾；將三七藥液與梔子藥液混勻，調(diào)節(jié)pH值至6.0-7.0，0-4'C冷藏24小時(shí)，0.45/mv濾膜過(guò)濾，加注射用水于濾液中至1000ml，再用0.22pm濾膜過(guò)濾，濾液灌裝成于注射液安瓿，11(TC熱壓滅菌30分鐘，即得。實(shí)施例4制備顆粒劑按下述重量稱(chēng)取各原料梔子180g，三七總皂苷5g;將梔子粉碎成粗粉，用70%的乙醇滲漉，收集滲漉液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為I.IO(60°C測(cè)定)，得清膏l(xiāng);將清膏1加4倍重量水稀釋?zhuān)瑪噭颍?-4"C溫度下冷藏48小時(shí)，濾過(guò)，將濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為I.IO(60°C測(cè)定)，得清膏2;將清膏2上活性炭柱，先用蒸餾水洗脫至洗脫液無(wú)色，再用10倍重量70%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，干燥，得梔子半成品；在取得梔子半成品后，將其用適量純水溶解，另取三七總皂苷(購(gòu)自云南玉溪萬(wàn)方天然藥物有限公司，商品名稱(chēng)三七總皂苷)，加適量純水溶解；將三七藥液與梔子藥液充分混勻，低溫真空濃縮為清膏，噴霧干燥，制成細(xì)粉，以l:l比例加糊精，混勻，制粒，干燥，分裝入袋，即得。試驗(yàn)例1、本發(fā)明中藥組合物對(duì)APP695轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞所產(chǎn)生的AjS40和A/42含量的影響試驗(yàn)材料1、藥品與試劑受試藥本發(fā)明實(shí)施例1所制備的注射液，外觀呈淡黃色，含量104mg/10ml/支。具有涼血解毒，化瘀通絡(luò)之功能，主治阿爾茨海默癥。試劑與藥品細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清，美國(guó)Hyclone公司生產(chǎn)。DMEM液體培養(yǎng)基，美國(guó)Hyclone公司生產(chǎn)。選擇試劑G418，美國(guó)Promega公司生產(chǎn)。2、細(xì)胞APP695轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞3、儀器HERAcell50細(xì)胞培養(yǎng)箱，TECANSAFIRE2酶標(biāo)儀。方法與結(jié)果1、給藥APP695轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞，在每ml培養(yǎng)基中分別加入lOOul、200ul試驗(yàn)藥(本發(fā)明藥物)，陰性對(duì)照組加入200ul試驗(yàn)藥的溶劑。2、Aj840和A)342的含量的測(cè)定加藥后，細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)，收集培養(yǎng)基。采用BIOSOURCE的ELISA試劑盒測(cè)定A/340和A/342的含量。陰性對(duì)照組培養(yǎng)基中測(cè)定出的A/340和A/342含量定為100%，其余組測(cè)定的A/340和A)342含量與之相比，給出相對(duì)值。結(jié)果見(jiàn)表l。表1受試藥對(duì)APP695轉(zhuǎn)化K269細(xì)胞所產(chǎn)生的A/340和A/342含量的影響(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)果顯示，細(xì)胞培養(yǎng)基中僅加入試驗(yàn)藥的溶劑時(shí)(即陰性對(duì)照組)培養(yǎng)基中A04O和A/342含量較高。細(xì)胞培養(yǎng)基中加入受試藥時(shí)，受試藥可明顯降低APP轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞所產(chǎn)生的A/340和A/342的含量。受試藥各劑量組對(duì)于AWO和AW2的含量均有不同程度的改善。試驗(yàn)例2本發(fā)明中藥組合物對(duì)C99轉(zhuǎn)化K269細(xì)胞所產(chǎn)生的AWO和A/342含量的影響試驗(yàn)材料1、藥品與試劑受試藥本發(fā)明實(shí)施例2所制備的注射液。2、細(xì)胞C99轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞3、儀器HERAcell50細(xì)胞培養(yǎng)箱，TECANSAFIRE2酶標(biāo)儀，方法與結(jié)果1、給藥C99轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞，在每ml培養(yǎng)基中分別加入lOOul、200ul受試藥(本發(fā)明藥物)，陰性對(duì)照組加入200ul試驗(yàn)藥的溶劑。2、A/340和A)842的含量的測(cè)定加藥后，細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)，收集培養(yǎng)基。采用BIOSOURCE的ELISA試劑盒測(cè)定A/340和A/342的含量。陰性對(duì)照組培養(yǎng)基中測(cè)定出的A/340和A/342含量定為100%，其余組測(cè)定的A/340和A/342含量與之相比，給出相對(duì)值。結(jié)果見(jiàn)表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結(jié)果顯示，細(xì)胞培養(yǎng)基中僅加入試驗(yàn)藥的溶劑時(shí)(即陰性對(duì)照組)，培養(yǎng)基中A04O和A/342含量較高。細(xì)胞培養(yǎng)基中加入試驗(yàn)藥(本發(fā)明藥物)時(shí)，試驗(yàn)藥可明顯降低C99轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞所產(chǎn)生的A|840和A/842的含量。試驗(yàn)藥各劑量組對(duì)于A/340和A/342的含量均有不同程度的改善。試驗(yàn)例3本發(fā)明中藥組合物對(duì)/3分泌酶(BACE)轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞中BACE活性的影響。試驗(yàn)材料1、藥品與試劑受試藥本發(fā)明實(shí)施例3所制備的注射液。2、細(xì)胞BACE轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞3、儀器HERAcell50細(xì)胞培養(yǎng)箱，TECANSAFIRE2酶標(biāo)儀。方法與結(jié)果1、給藥BACE轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞，在每ml培養(yǎng)基中分別加入lOOul、200ul試驗(yàn)藥(本發(fā)明藥物)，陰性對(duì)照組加入200ul試驗(yàn)藥的溶劑。2、BACE活性的測(cè)定加藥后，細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)。在Tnton-100裂解液中裂解細(xì)胞，在pH4.5條件下，采用熒光底物檢測(cè)BACE的活性。陰性對(duì)照組中測(cè)定出的BACE活性定為100%，其余組測(cè)定的BACE活性與之相比，給出相對(duì)值。結(jié)果見(jiàn)表3。表3試驗(yàn)藥對(duì)BACE轉(zhuǎn)化K269細(xì)胞的BACE活性的影響(X±SD)組別劑量NBACE活性(％)pl/ml培養(yǎng)基陰性對(duì)照組20010100±7.36試驗(yàn)藥組1001092.25±7.142001079.07士5.62試驗(yàn)結(jié)果顯示，細(xì)胞培養(yǎng)基中僅加入試驗(yàn)藥的溶劑時(shí)(即陰性對(duì)照組)，在BACE轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞的細(xì)胞裂解物當(dāng)中，BACE的活性較高。當(dāng)加入試驗(yàn)藥(本發(fā)明藥物)時(shí)，試驗(yàn)藥可明顯降低BACE的活性。試驗(yàn)藥各劑量組對(duì)于BACE活性的降低均有不同程度的影響。試驗(yàn)例4本發(fā)明中藥組合物對(duì)BACE轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞中BACE表達(dá)水平的影響。試驗(yàn)材料1、藥品與試劑受試藥同試驗(yàn)例1。2、細(xì)胞BACE轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞3、儀器HERAcell50細(xì)胞培養(yǎng)箱，TECANSAFIRE2酶標(biāo)儀。方法與結(jié)果-1、給藥BACE轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞，在每ml培養(yǎng)基中分別加入lOOul、200ul試驗(yàn)藥(本發(fā)明藥物)，陰性對(duì)照組加入200ul試驗(yàn)藥的溶劑。2、BACE表達(dá)水平的測(cè)定加藥后，細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)。在Triton-100裂解液中裂解細(xì)胞，裂解物采用Westemblot方—法分析蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。用抗BACE的單克隆抗體檢測(cè)BACE的表達(dá)水平；用抗actin的抗體檢測(cè)actin的表達(dá)水平，作為內(nèi)對(duì)照。與陰性對(duì)照組中測(cè)定出的BACE和actin表達(dá)水平對(duì)比。結(jié)果顯示，細(xì)胞培養(yǎng)基中加入試驗(yàn)藥的溶劑時(shí)(即陰性對(duì)照組)，在BACE轉(zhuǎn)化的K269細(xì)胞的細(xì)胞裂解物當(dāng)中，BACE的表達(dá)水平較高。當(dāng)加入試驗(yàn)藥時(shí)，試驗(yàn)藥各劑量組對(duì)于BACE的表達(dá)水平?jīng)]有顯著影響。綜合以上試驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明中藥組合物可明顯降低APP轉(zhuǎn)化的神經(jīng)元細(xì)胞所產(chǎn)生的A/340和A/342的含量，產(chǎn)生A/340的量與對(duì)照相比降低了約50%，產(chǎn)生A/342的量與對(duì)照相比降低了約75%;另外，在C99轉(zhuǎn)化的神經(jīng)元細(xì)胞上，A/340和A/542的產(chǎn)量也明顯降低，與對(duì)照相比，產(chǎn)生A/340的量降低了約40。/。，產(chǎn)生A/342的量降低了約25%，顯示了其具有減少A/340和A/342產(chǎn)生，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞之功效；另外，細(xì)胞裂解物當(dāng)中，BACE的表達(dá)量沒(méi)有顯著改變，A)840和A042產(chǎn)生量的降低，主要是由于BACE的活性降低了20%，顯示其作用的靶點(diǎn)主要在于阻抑BACE的活性。權(quán)利要求1.一種治療阿爾茨海默癥的中藥組合物，其特征在于，由以下重量份的原料藥制成梔子150-200份和三七總皂苷4-6份。2、按照權(quán)利要求l的中藥組合物，其特征在于，各原料藥的重量份是梔子1S0份，三七總皂苷5份。3、一種制備權(quán)利要求l中藥組合物的方法，包括以下步驟(1)按下述重量份稱(chēng)取各原料梔子150-200份，三七總皂苷4-6份；(2)將梔子粉碎成粗粉，用50-90%的乙醇滲漉，收集滲漉液，回收乙醇，濃縮，得清膏l(xiāng);(3)將清膏l(xiāng)加水稀釋?zhuān)瑪噭?，冷藏，濾過(guò)，將濾液減壓濃縮，得清膏2;(4)將清膏2t活性炭柱，先用蒸餾水洗脫至洗脫液無(wú)色，再用60-80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，干燥，得梔子半成品；(5)將梔子半成品與三七總皂苷混勻，按照現(xiàn)有技術(shù)制劑成型，即得。4、按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于，步驟(2)中將梔子粉碎成粗粉后用70%的乙醇滲漉。5、按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于，步驟(3)中將清膏1加3-5倍重量水稀釋?zhuān)凰龅睦洳貫樵?-4t:溫度下冷藏48小時(shí)。6、按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于，所述清膏1或清膏2的相對(duì)密度為1.10，測(cè)定溫度為6(TC。7、按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于，步驟(4)中所述乙醇洗脫為用8-12倍重量70%乙醇進(jìn)行洗脫。8、權(quán)利要求1或2的中藥組合物在制備治療阿爾茨海默癥藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種治療阿爾茨海默癥的中藥組合物及其制備方法。該中藥組合物由以下重量份的原料藥制成梔子150-200份和三七總皂苷4-6份。本發(fā)明中藥組合物可有效阻抑Aβ40和Aβ42的過(guò)度產(chǎn)生，阻斷淀粉樣蛋白的沉積，保持鈣離子穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)，阻抑淀粉樣斑塊引起的氧化損傷、非特異性炎癥反應(yīng)和代謝毒性物質(zhì)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的繼發(fā)性損害，從而解除病變的發(fā)生和發(fā)展，減輕遲發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞死亡和皮層萎縮，對(duì)于阿爾茨海默癥具有顯著的治療效果。文檔編號(hào)A61K36/185GK101224247SQ200710062879公開(kāi)日2008年7月23日申請(qǐng)日期2007年1月19日優(yōu)先權(quán)日2007年1月19日發(fā)明者茜華,李澎濤,勇申申請(qǐng)人:北京中醫(yī)藥大學(xué)