專利名稱：一種血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒及其制備方法
一種血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒及其制備方法技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種緩釋微粒及其制備的方法，特別是一種用于減緩 血管內(nèi)皮生長因子衰弱、延長活性時間的緩釋微粒。背景技術(shù)：
聚乳酸具有獨特的生物降解性，中間產(chǎn)物乳酸與體內(nèi)糖代謝產(chǎn) 物相同，最終產(chǎn)物是水和二氧化碳，對人體無害，而聚乳酸/乙醇酸 共聚物則一直做為體內(nèi)可降解埋植材料。血管內(nèi)皮生長因子(英文vascular endothelial growth factor, 簡稱VEGF)，是血管內(nèi)皮細胞特異性的肝素結(jié)合生長因子 (h印arin-binding growth factor),可在體內(nèi)誘導血管新生(induce angiogenesis in vivo)。 VEGF是高度保守的同源二聚體糖蛋白。二 條分子量各為24kDa的單鏈以二硫鍵組成二聚體。VEGF分解的單 體無活性，去除N 2糖基對生物效應(yīng)無影響，但可能在細胞分泌中起 作用，能直接作用于血管內(nèi)皮細胞促進血管內(nèi)皮細胞增殖，增加血管 通透性,對組織器官的再生、修復(fù)有重要的作用。盡管血管內(nèi)皮生長因子有著如此重要作用，但在現(xiàn)實醫(yī)用中，卻 存在著半衰期短、易失去活性的缺點，這些缺點使得血管內(nèi)皮生長因 子在實用中的生理效應(yīng)與預(yù)期效果相差甚遠，必須加大給藥次數(shù)與劑 量，產(chǎn)生毒副作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是為了解決上述不足而發(fā)明的一種用于醫(yī)學上，既能保證 血管內(nèi)皮生長因子運用效果，又能增加其半衰器延長活性的血管內(nèi)皮 生長因子緩釋微粒。本發(fā)明所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒的制備方法由以下各 步驟完成a、 首先稱取聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g 2.0g;b、 然后向聚乳酸/乙醇酸共聚物加入二氯甲垸32ml 40ml;c、 再加入丙酮2.5ml 3ml后持續(xù)攪拌；d、 攪拌中，滴入兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗體工作液 12ml 16ml，均勻乳化；e、 加入2.5%聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水溶液32ml 36ml，繼 續(xù)攪拌；f、 再加入100ml0.5X聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水溶液，持續(xù)攪 拌24h，揮發(fā)除去二氯甲烷溶劑；g、 最后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除盡除盡所有有機溶劑，剩余物為緩釋 微粒。
本發(fā)明所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒的制備方法，按照上述步驟進行制備，但原料可以改為聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g 1.9g、 二 氯甲烷32ml 38ml、丙酮2.5ml 2.9ml、兔抗人血管內(nèi)皮生長因子 多克隆抗體工作液12ml 15ml、 2.5%聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水 溶液32ml 35ml。本發(fā)明所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒的制備方法，按照上述 步驟進行制備，但原料還可以改為聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g 1.8g、 二氯甲烷32ml 35ml、丙酮2.5ml 2.8ml、兔抗人血管內(nèi)皮生長因 子多克隆抗體工作液12ml 14ml、 2.5%聚乙烯醇(PVA)乳化劑的 水溶液32ml 34ml。本發(fā)明所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒的制備方法，按照上述 步驟進行制備，但原料還可以用聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g 1.7g、 二 氯甲烷32ml 34ml、丙酮2.5ml 2.7ml、兔抗人血管內(nèi)皮生長因子 多克隆抗體工作液12ml 13ml、 2.5%聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水 溶液32ml 33ml。本發(fā)明所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒的制備方法，按照上述 步驟進行制備，但原料還可以用聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g、 二氯甲 烷33ml、丙酮2.5ml、兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗體工作液 12ml、 2.5%聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水溶液32ml。本發(fā)明所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒的制備方法，在對聚乳 酸/乙醇酸共聚物、二氯甲烷、丙酮、兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克 隆抗體工作液與2.5%聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水溶液攪拌過程中， 攪拌速度最低不能低于800r/min，攪拌時間為4h以上。本發(fā)明所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒，緩釋微粒是可降解的聚合物載血管內(nèi)皮生長因子納米級微粒；本發(fā)明所述的緩釋微粒可降解的聚合物為聚乳酸/乙醇酸共聚物，血管內(nèi)皮生長因子被其包裹；微粒平均粒徑為130-190納米。本發(fā)明通過乳化—分散方法，使聚乳酸/乙醇酸共聚物對血管內(nèi)皮生長因子進行包裹，制成的納米級緩釋微粒，具有以下優(yōu)點.-① 由于微粒體積小可通過組織間隙；② 通過聚乳酸/乙醇酸共聚物控制藥物釋放，延長半衰期，減少 給藥次數(shù)，降低毒副作用；③ 減輕藥物失活，增加穩(wěn)定性。④ 可以實現(xiàn)靶向和定位給藥。⑤ 微粒降解產(chǎn)物與人體代謝物相同，對人體沒有任何影響。具體實施例實施一稱取聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g 2.0g放入燒杯中，向燒杯中加 入二氯甲烷32ml 40ml，再加入丙酮2.5ml 3ml，開始以穩(wěn)定 1000r/min速度攪拌，攪拌中滴入兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗 體工作液12ml 16ml，使溶液均勻乳化，乳化后加入2.5%聚乙烯醇 (PVA)乳化劑的水溶液32ml 36ml，繼續(xù)攪拌4小時。時間到后
取出上述乳化溶液并加入100ml 0.5%聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水 溶液，再以500r/min持續(xù)攪拌24h，揮發(fā)除去二氯甲烷溶劑，最后在旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除盡除盡所有有機溶劑，溶質(zhì)即為血管內(nèi)皮生長因子緩釋 微粒。用激光粒度分析儀測量，微粒平均粒徑為130-190納米。實施二稱取聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g 1.9g放入燒杯中，向燒杯中加 入二氯甲垸32ml 38ml，再加入丙酮2.5ml 2.9ml，開始以穩(wěn)定 950r/min速度攪拌，攪拌中滴入兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗體 工作液12ml 15ml，使溶液均勻乳化，乳化后加入2.5%聚乙烯醇 (PVA)乳化劑的水溶液32ml 35ml，繼續(xù)攪拌4個半小時。時間 到后取出上述乳化溶液并加入100ml 0.5%聚乙烯醇(PVA)乳化劑 的水溶液，再以500r/min持續(xù)攪拌24h，揮發(fā)除去二氯甲烷溶劑，最后 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除盡除盡所有有機溶劑，溶質(zhì)即為血管內(nèi)皮生長因子 緩釋微粒。用激光粒度分析儀測量，微粒平均粒徑為130~190納米。實施三稱取聚乳酸/乙醇酸共聚物L6g 1.8g放入燒杯中，向燒杯中加 入二氯甲烷32ml 35ml，再加入丙酮2.5ml 2.8ml，開始以穩(wěn)定 900r/min速度攪拌，攪拌中滴入兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗體 工作液12ml 14ml，使溶液均勻乳化，乳化后加入2.5%聚乙烯醇 (PVA)乳化劑的水溶液32ml 34ml，繼續(xù)攪拌4個半小時。時間
到后取出上述乳化溶液并加入100ml 0.5%聚乙烯醇(PVA)乳化劑 的水溶液,再以500r/min持續(xù)攪拌24h，揮發(fā)除去二氯甲垸溶劑，最后 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除盡除盡所有有機溶劑，溶質(zhì)即為血管內(nèi)皮生長因子 緩釋微粒。用激光粒度分析儀測量，微粒平均粒徑為130~190納米。實施四稱取聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g 1.7g放入燒杯中，向燒杯中加 入二氯甲烷32ml 34ml，再加入丙酮2.5ml 2.7ml，開始以穩(wěn)定 900r/min速度攪拌，攪拌中滴入兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗體 工作液12ml 13ml，使溶液均勻乳化，乳化后加入2.5%聚乙烯醇 (PVA)乳化劑的水溶液32ml 34ml，繼續(xù)攪拌4個半小時。時間 到后取出上述乳化溶液并加入100ml 0.5%聚乙烯醇(PVA)乳化劑 的水溶液,再以500r/min持續(xù)攪拌24h，揮發(fā)除去二氯甲烷溶劑，最 后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除盡除盡所有有機溶劑，溶質(zhì)即為血管內(nèi)皮生長因 子緩釋微粒。用激光粒度分析儀測量，微粒平均粒徑為130 190納米。實施五稱取聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g放入燒杯中，向燒杯中加入二氯 甲烷33ml，再加入丙酮2.5ml,開始以穩(wěn)定850r/min速度攪拌，攪拌 中滴入兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗體工作液12ml，使溶液均 勻乳化，乳化后加入2.5%聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水溶液32ml， 繼續(xù)攪拌5個小時。時間到后取出上述乳化溶液并加入100ml 0.5%
聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水溶液,再以500r/min持續(xù)攪拌24h,揮發(fā)除去二氯甲垸溶劑，最后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除盡除盡所有有機溶劑，溶 質(zhì)即為血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒。用激光粒度分析儀測量，微粒平 均粒徑為130 190納米。盡管對本發(fā)明的特征及其優(yōu)勢已經(jīng)描述了很多，然而可以理解的 是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，可以根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案和 技術(shù)構(gòu)思做出其他各種相應(yīng)的改變，而所有這些改變都應(yīng)屬于本發(fā)明 的權(quán)利要求的保護范圍。
權(quán)利要求
1、一種血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒的制備方法，其特征在于緩釋微粒由以下各步驟制備a、稱取聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g～2.0g；b、向聚乳酸/乙醇酸共聚物加入二氯甲烷32ml～40ml；c、再加入丙酮2.5ml～3ml然后攪拌；d、攪拌中，滴入兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗體工作液12ml～16ml，均勻乳化；e、加入2.5％聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水溶液32ml～36ml，繼續(xù)攪拌；f、再加入100ml 0.5％聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水溶液，持續(xù)攪拌24h，揮發(fā)除去二氯甲烷溶劑；g、最后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除盡除盡所有有機溶劑，剩余物為緩釋微粒。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒的制備方法， 其特征在于所需原料為聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g 1.9g、 二氯甲烷 32ml 38ml、丙酮2.5ml 2.9ml、兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗 體工作液12ml 15ml、 2.5X聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水溶液32ml 35mlc
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒的制備方法， 其特征在于所需原料為聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g 1.8g、 二氯甲烷 32ml 35ml、丙酮2.5ml 2.8ml、兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗 體工作液12ml 14ml、2.5X聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水溶液32m1 34ml。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒的制備方法， 其特征在于所需原料為聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g 1.7g、 二氯甲垸 32ml 34ml、丙酮2.5ml 2.7ml、兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗 體工作液12ml 13ml、 2.5 %聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水溶液32ml 33ml。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒的制備方法， 其特征在于所需原料為聚乳酸/乙醇酸共聚物1.6g、 二氯甲烷33ml、 丙酮2.5ml、兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗體工作液12ml、 2.5 %聚乙烯醇(PVA)乳化劑的水溶液32ml。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1、 2、 3、 4、 5所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒 的制備方法，其特征在于所述的步驟c、 d、 e，攪拌速度最低不低于 800r/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒的制備方法，其特征在于所述的攪拌時間不低于4h。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒，其特征在于所 述緩釋微粒為可降解的聚合物載血管內(nèi)皮生長因子納米級微粒，平均 粒徑為130 190納米。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒，其特征在于所述 的可降解聚合物為聚乳酸/乙醇酸共聚物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種緩釋微粒，特別是一種血管內(nèi)皮生長因子緩釋微粒。將聚乳酸/乙醇酸、兔抗人血管內(nèi)皮生長因子多克隆抗體工作液在不同溶劑中乳化-分散，最后得到含有聚乳酸/乙醇酸載血管內(nèi)因子的緩釋微粒，可以減緩血管內(nèi)皮生長因子衰弱、延長其活性，具有方便醫(yī)用、提高血管內(nèi)因子藥效與穩(wěn)定、無害等優(yōu)點。
文檔編號A61K9/16GK101152151SQ200710076850
公開日2008年4月2日 申請日期2007年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月31日
發(fā)明者李振宇, 王大平, 郭悅青, 閆洪印, 揚 陳 申請人:深圳市第二人民醫(yī)院