專利名稱：一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，屬于藥品的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
益心舒中藥制劑是以人參、麥冬、五味子、黃芪、丹參、川芎、山楂等七味藥組成，具有益氣復脈，活血化瘀，養(yǎng)陰生津的功效，用于氣陰兩虛，心悸脈結(jié)代，胸悶不舒、胸痛及冠心病心絞痛見有上述癥狀者，目前臨床上廣泛用于治療心絞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心絞痛患等。許多藥學工作者做了大量的研究工作，如貴州信邦遠東藥業(yè)有限公司提出的專利申請?zhí)枮椤?00610050956.8”，名稱為“一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒注射制劑及其制備方法”的專利申請，提供了益心舒注射劑的制備方法，但是藥物制劑必須要在保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控安全的基礎(chǔ)上，才能不斷的更新發(fā)展，為了更好的控制該中藥制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，更好的指導生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產(chǎn)品質(zhì)地，需要研究、控制該中藥制劑質(zhì)量的方法，安徽科創(chuàng)中藥天然藥物研究所有限責任公司雖然在專利申請?zhí)枮椤?00510038859.2”名稱為“益心舒顆粒的制備方法和質(zhì)量控制技術(shù)”專利申請中提供了顆粒劑的質(zhì)量控制方法，該方法是以人參的人參皂苷Re、Rb1為含量檢測指標，但是，它根本不能全面反應(yīng)產(chǎn)品的質(zhì)量，僅以此用來控制該中藥制劑的質(zhì)量不是十分合理；如果用其它的指標進行控制，由于沒有現(xiàn)成的檢測方案、檢測條件等，所以比較難于實施。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測機構(gòu)提供了檢測的指標、檢測的手段、技術(shù)方法等等；以便更好的控制該中藥制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產(chǎn)品質(zhì)地。
本發(fā)明涉及人參藥材或其提取物、麥冬藥材或其提取物、五味子藥材或其提取物、黃芪藥材或其提取物、丹參藥材或其提取物、川芎藥材或其提取物、山楂藥材或其提取物按照一定的比例組方制成的中藥制劑的質(zhì)量控制方法，主要包括鑒別、含量測定等項目，它是將人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂貳Rd、人參皂苷Ra1、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3、麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元、薯蕷皂苷元、麥冬皂苷B、假葉樹皂苷元、β-谷甾醇、葡萄糖、五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素及五味子酯甲、五味子酯乙、黃芪對照藥材、乙酰黃芪苷I、黃芪苷I、黃芪苷II、黃芪苷III、黃芪甲苷、異黃芪苷I、異黃芪苷II、黃芪皂苷乙、環(huán)黃芪醇、大豆皂苷I、芒柄花黃素、毛蕊異黃酮、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、鼠李檸檬素苷元、異槲皮苷、棉毛黃芪甲苷、棉毛黃芪苷VI、棉毛黃芪苷II、丹參對照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、隱丹參酮、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹酚酸D、丹酚酸E、丹酚酸G、丹酚酸H、丹酚酸I、丹酚酸J、四甲基丹酸酸F、異丹酚酸C、迷迭香酸、紫草酸、丹參醌A、丹參醌B、丹參醌C、丹參素、丹參酸乙、川芎對照藥材、川芎嗪、阿魏酸、腺嘌呤、腺苷、川芎內(nèi)酯、川芎酚、丁叉苯肽內(nèi)酯、苯乙酸甲酯、香草醛、山楂對照藥材、金絲桃苷、牡荊素、齊墩果酸、熊果酸、延胡索酸、琥珀酸、豆甾醇、胡蘿卜苷中的全部或部分品種作為該中藥制劑的質(zhì)量控制的檢測指標。
本發(fā)明所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，是將人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參對照藥材、麥冬皂苷D、麥冬皂苷B、麥冬對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙、五味子對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、黃芪對照藥材、葡萄糖、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙、丹參對照藥材、川芎嗪、阿魏酸、腺嘌呤、腺苷、香草醛、川芎對照藥材、金絲桃苷、牡荊素、齊墩果酸、熊果酸、延胡索酸、山楂對照藥材中的全部或部分品種作為該中藥制劑的鑒別方法、含量測定方法的檢測指標。
本發(fā)明所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，對于鑒別技術(shù)，采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法對于人參的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以人參對照藥材、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb3、人參皂苷Re中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后精制再濃縮的方法，展開劑可以為三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以2-30％硫酸乙醇、或噴以1-10％印三酮乙醇等溶液顯色的方法；對于麥冬的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元、薯蕷皂苷元、麥冬皂苷B、假葉樹皂苷元、β-谷甾醇、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法；對于五味子的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10％磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于黃芪的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法；對于丹參的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以丹參對照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10％磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；
對于川芎的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以川芎對照藥材、川芎嗪、阿魏酸、腺嘌呤、腺苷、香草醛中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10％磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于山楂的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以山楂對照藥材、金絲桃苷、牡荊素、齊墩果酸、熊果酸、延胡索酸中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以1～10％三氯化鐵乙醇溶液、變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10％磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法。
本發(fā)明所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，對于鑒別技術(shù)，還可以采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法對于人參的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Ra1、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；對于麥冬的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元、薯蕷皂苷元、麥冬皂苷B、假葉樹皂苷元、β-谷甾醇、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；對于五味子的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯醋或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)合適的比例條件下為流動相，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子內(nèi)素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；對于黃芪的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；對于丹參的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以丹參對照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；對于川芎的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以川芎對照藥材、川芎嗪、阿魏酸、腺嘌呤、腺苷、香草醛中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；對于山楂的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以山楂對照藥材、金絲桃苷、牡荊素、齊墩果酸、熊果酸、延胡索酸中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)。
本發(fā)明所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，對于鑒別技術(shù)，最好選用的方法是采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法對于人參的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.5～20μl，以人參皂苷Rb1、Re、Rg1中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理是以三氯甲烷-乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┨崛『笤贊饪s方法，再用正丁醇、水提取精制的方法，展開劑為三氯甲烷、甲醇、水按照常規(guī)比例配制而成，檢視條件為噴以2～30％硫酸乙醇顯色后紫外下檢視的方法；對于麥冬的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G為薄層板，點樣量為0.5～20μl，以麥冬對照藥材作為對照品，樣品前處理是以甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醚、丙酮、三氯甲烷、二氯甲烷、石油醚、正丁醇、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┨崛『笤贊饪s方法，展開劑為三氯甲烷、丙酮按照常規(guī)比例配制而成，檢視條件為噴以2～30％硫酸乙醇顯色后紫外下檢視的方法液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液溶液顯色的方法；對于五味子的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠GF254薄層板，點樣量為0.5～20μl之間某一體積，以五味子對照藥材、五味子甲素作為對照品，樣品前處理是三氯甲烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、甲酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┨崛『笤贊饪s方法，展開劑為石油醚、甲酸乙酯、甲酸的上層液，檢視條件為紫外光燈下254nm檢視。
對于黃芪的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.5μl～30μl之間某一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷作為對照品，樣品前處理是三氯甲烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、甲酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┨崛‰s質(zhì)，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┨崛『笤贊饪s方法，再用正丁醇、水、氨試液提取精制的方法，展開劑為三氯甲烷、甲醇、水的按照常規(guī)比例配制而成，檢視條件為噴以2～30％硫酸乙醇顯色后紫外下檢視的方法；對于丹參的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.5μl～30μl之間某一體積，以丹參對照藥材、丹參素、丹酚酸B、丹參酮IIA中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理是以三氯甲烷、乙醚、石油醚單獨使用或者是按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┤芙獾姆椒ǎ归_劑為苯、甲苯、醋酸乙酯，檢視條件為日光下檢視。
對于川芎的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.5μl～30μl之間某一體積，以川芎對照藥材、阿魏酸中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理是以三氯甲烷、乙醚、石油醚單獨使用或者是按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┤芙獾姆椒ǎ归_劑為正己烷、醋酸乙酯，檢視條件為紫外光燈下365nm檢視。
對于山楂的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.5μl～30μl之間某一體積，以山楂對照藥材、熊果酸、金絲桃苷、牡荊素中全部或部分品種作為對照品，以醋酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷、正丁醇、甲醇、乙醇、丙酮、水中的一種或它們?nèi)我饣旌先軇┨崛『笤贊饪s方法，展開劑為環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，檢視條件為紫外光燈或日光下檢視。
本發(fā)明所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，對于含量測定技術(shù)，采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法方法1以可見紫外分光光度法測定本品中的總皂苷含量，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，測定波長為200～600nm中某一波長，采用標準曲線法或?qū)φ掌贩y定，常用對照品為Rg1、黃芪甲苷；方法2以可見紫外分光光度法測定本品中的總黃酮含量，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，測定波長為200～600nm中某一波長，采用標準曲線法或?qū)φ掌贩y定，常用對照品為蘆丁、槲皮素、槲皮苷；方法3以可見紫外分光光度法測定本品中的總糖含量，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，測定波長為200～650nm中某一波長，采用標準曲線法或?qū)φ掌贩y定，常用對照品為葡萄糖；方法4以高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Ra1、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酷或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；方法5采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元、薯蕷皂苷元、麥冬皂苷B、假葉樹皂苷元、β-谷甾醇中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；方法6采用高效液相色譜法測定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酷甲、五味子酷乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；方法7采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；
方法8采用薄層色譜法測定本品中黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30ul之間任一體積，以黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色后用薄層掃描儀進行掃描的方法；方法9采用高效液相色譜法測定本品中丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；方法10、采用高效液相色譜法或采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中川芎嗪、阿魏酸、腺嘌呤、腺苷、香草醛中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；方法11、采用高效液相色譜法測定本品中金絲桃苷、牡荊素、齊墩果酸、熊果酸、延胡索酸中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；本發(fā)明所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，對于含量測定技術(shù)，還可以采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法方法1、對于人參的含量測定方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以人參對照藥材、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb3、人參皂苷Re中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后精制再濃縮的方法，展開劑可以為三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，顯色方法包括噴以2-30％硫酸乙醇或噴以1-10％印三酮乙醇溶液，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為500～750nm；
方法2、對于麥冬的鑒別方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元、薯蕷皂苷元、麥冬皂苷B、假葉樹皂苷元、β-谷甾醇、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮，加酸水解的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，顯色方法包括噴以硫酸乙醇溶液或濃硫酸水溶液或茴香醛硫酸溶液或10％硫酸溶液或5％三氯化鐵乙醇溶液，斑點在薄層掃描儀上采用單波長定點掃描，掃描波長為500～700nm；方法3、對于五味子的鑒別方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，置紫外光燈下或采用包括噴以變色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸氣或10％磷鉬酸乙醇溶液的方法，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為200～400nm；方法4、對于黃芪的鑒別方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以水或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再用層析分離精制的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，顯色包括噴以硫酸乙醇溶液或濃硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或10％硫酸溶液或5％三氯化鐵乙醇溶液的方法，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為500～750nm；方法5、對于丹參的鑒別方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以丹參對照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以水或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，置紫外光燈下或采用氨氣熏后再置紫外光燈下或噴以變色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸氣或10％磷鉬酸乙醇溶液顯色的方法，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為400～750nm；方法6、對于川芎的鑒別方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以川芎對照藥材、川芎嗪、阿魏酸、腺嘌呤、腺苷、香草醛中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是乙醇或甲醇或水或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為三氯甲烷、甲醇、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，置紫外光燈下或采用氨氣熏后再置紫外光燈下檢視或噴以變色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸氣或10％磷鉬酸乙醇溶液顯色的方法，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為200～400nm；方法7、對于山楂的鑒別方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以山楂對照藥材、金絲桃苷、牡荊素、齊墩果酸、熊果酸、延胡索酸中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為三氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，顯色包括噴以1～10％三氯化鐵乙醇溶液或變色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸氣或10％磷鉬酸乙醇溶液的方法，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為450～750nm。
本發(fā)明所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，對于含量測定技術(shù)，最好采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法方法1采用高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re，樣品前處理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用氫氧化鉀、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精制的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙腈、磷酸、水在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm；方法2采用高效液相色譜法測定本品中丹酚酸B，樣品前處理以甲醇、乙醇、水提取的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以甲醇、乙腈、甲酸、水在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長為286nm；方法3采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中黃芪甲苷，樣品前處理以氫氧化鉀、甲醇按一定的比例混合溶劑提取，然后用水、醋酸乙酯、正丁醇、氨試液精制的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水在常規(guī)的合適比例條件下為流動相。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的質(zhì)量控制方法能更好的控制一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，保證用藥的安全性，使用本發(fā)明后，從生產(chǎn)開始、選用原材料，到每一個生產(chǎn)過程的工藝步驟均必須嚴格按照工藝規(guī)程執(zhí)行，能夠保證藥物制成品的質(zhì)量；我們在進行試驗時發(fā)現(xiàn)采用本發(fā)明就會要求選用人參、黃芪、丹參、麥冬、五味子、川芎、山楂藥材的等級必須達到一級以上，否則制成品會出現(xiàn)不合格的情況；這樣更有利于指導生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴格合理，讓消費者全面認識產(chǎn)品品質(zhì)、放心使用這類藥品。本發(fā)明選取的含量測定指標成分是該產(chǎn)品按照中醫(yī)理論君、臣、佐、使排序的君藥和臣藥的有效活性成分，對控制藥品質(zhì)量是十分必要的，作為含量控制的指標很理想。在研究中發(fā)現(xiàn)本方中的人參、黃芪、麥冬、山楂含有大量的苷類物質(zhì)，并且五味子、黃芪、人參、麥冬都含有多糖，由于苷類物質(zhì)為一類極性較大、結(jié)構(gòu)復雜的化合物，它無紫外吸收，無專一顯色劑，再加上皂苷測定經(jīng)常受糖的干擾，采用常規(guī)技術(shù)條件測定時，由于紫外檢測末端吸收時靈敏度低，噪音影響大，且有干擾峰，很難使用，因此，本申請人經(jīng)過流動相等測定條件的一系列考察，最終人參的含量測定是在0.1％磷酸-乙腈(80∶20)的流動相洗脫條件下，分別考察了在不同波段典型波長203、210、230、254下的色譜峰情況，結(jié)果顯示，在203nm下人參及益心舒制劑樣品中色譜峰較多，峰形較好，故選用203nm作為檢測波長；而丹參的含量測定在甲醇-乙腈-0.5％甲酸水溶液的流動相洗脫條件下，分別考察了在不同波段典型波長224、254、286、300下的色譜峰情況，結(jié)果顯示，在286nm下丹參及益心舒制劑樣品中色譜峰較多，峰形較好，故選用286nm作為檢測波長；故選用286nm作為檢測波長；由于黃芪甲苷僅在201nm處有弱的末端吸收，因此噪音較大，分離度重現(xiàn)性較差，本申請人采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器法進行黃芪中黃芪甲苷的含量測定，結(jié)果分離度好、重現(xiàn)性好、回收率高，得到的圖譜能夠很好的檢測產(chǎn)品質(zhì)量。所以本發(fā)明選定了一系列的成分和方法作為控制、檢測產(chǎn)品質(zhì)量的技術(shù)手段，使益心舒中藥制劑的生產(chǎn)技術(shù)有了保障，得到的制劑更加可靠，達到了發(fā)明的目的。
為證明利用本發(fā)明提供的質(zhì)量控制方法能更好的控制一種生益心舒中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，得到的藥物具有有效的效果，申請人進行了一系列實驗；實驗例1 人參皂苷Rg1、Re含量測定的方法學考察益心舒膠囊由人參、麥冬、五味子、黃芪、丹參、川芎和山楂等七味藥材組成，人參是方中君藥，據(jù)報道，人參中主要含皂苷類化合物，已鑒定了29種皂苷成分人參皂苷(Ginsenoside)；丙二酰基人參皂苷；三七皂苷(Notogindenoside)；西洋參皂苷(Quinqueoside)。全部皂苷成分分成3種類型，即A型，包括人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd，水解后生成人參萜二醇(Panaxadiol)；B型，包括人參皂苷Re、Rf、Rg1、Rg2，水解后生成人參萜三醇(Panaxtriol)；C型，人參皂苷Ro，是齊墩果酸(Oleanolic acid)的衍生物。人參中化學成分的含量測定，文獻報道較多的是人參皂苷Rg1、Rb1、Re等皂苷類的含量測定，測定的方法多為高效液相色譜法，薄層掃描法等。本申請人對益心舒中藥制劑中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re含量進行了測定，并對測定的方法學進行了研究。
1.1儀器 Waters高效液相色譜儀，2693輸液泵柱溫箱自動進樣裝置；2487紫外檢測器；Millennium32色譜工作站。HP1100色譜儀，Chem Station色譜工作站，二級管陳列檢測器；恒溫柱箱；TCQ-250超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備二廠)。
1.2試藥 甲醇(色譜純、分析純)、磷酸(分析純)、氫氧化鉀(分析純)、乙醚(分析純)、氯仿(分析純)、正丁醇(分析純)、氨水(分析純)、磷酸二氫鉀(分析純)、水為純凈水；人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，人參皂苷Rg1的批號0703-200221，人參皂苷Re的批號0754-200217)。樣品益心舒膠囊及陰性空白樣品(貴州信邦制藥有限公司)。
1.3色譜條件 色譜柱迪瑪，C18(4.6×200mm)；流動相0.1％磷酸溶液-乙腈(80∶20)；檢測波長203nm；流速1ml/min；進樣量10μl。
1.4系統(tǒng)適用性試驗分別取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品溶液、供試品溶液和缺人參藥材的陰性空白溶液注入液相色譜儀，記錄色譜(見

圖1～3)。從圖中可見，人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的保留時間分別為44分鐘和47分鐘，陰性空白色譜圖在人參皂苷Rg1、人參皂苷Re位置處均無峰，人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和其相近的其它峰分離完全(分離度＞1.5)，即本試驗條件下人參皂苷Rg1、人參皂苷Re與其他組分分離完全。理論板數(shù)對照品中人參皂苷Rg1、Re分別為7952和7836；理論板數(shù)樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re分別為7889和7451。人參皂苷Rg1、人參皂苷Re與其他組分峰的分離度大于1.5。(見圖4～5)故定理論板數(shù)以人參皂苷Re峰計算，應(yīng)不低于2500。
1.5線性關(guān)系考察1.5.1標準溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品適量，加甲醇溶解，制成每1ml含人參皂苷Rg10.5188mg人參皂苷Re0.4268mg的混合對照品溶液。
1.5.2標準曲線的繪制 精密吸取上述混合對照品溶液4μl、8μl、12μl、16μl、20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜(見表1)，以峰面積A對質(zhì)量數(shù)(μg)進行線性回歸計算，得線性回歸方程為人參皂苷Rg1A＝325872X-14655，r＝0.9999(人參皂苷Rg1在2.0752～10.376μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。)人參皂苷ReA＝292726X-111543，r＝0.9999(人參皂苷Re在1.7072～8.5360μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。)表1 人參皂苷Rg1、Re線性關(guān)系考察

1.6供試品溶液提取時間的選擇 提取方法回流提取，測定結(jié)果見表2。
表2 不同提取時間的考察

從表2中可見，提取時間60分鐘即可將制劑中的人參皂苷Rg1、Re提取完全，故選擇加熱回流1小時。
1.7精密度試驗取人參皂苷Rg1、Re對照品溶液，重復進樣5次，測定峰面積，結(jié)果見表3，人參皂苷Rg1、Re的平均峰面積分別為1632643、1142200；RSD分別為0.98％、2.2％。
表3 人參皂苷測定的精密度試驗

1.8重復性試驗取本品(批號20020509)內(nèi)容物，按質(zhì)量標準(修訂)正文中含量測定項下供試液的制備方法，平行制備5份供試溶液，分別進樣10μl，測定峰面積，計算結(jié)果列入表4，人參皂苷Rg1、Re的平均含量分別為0.1035％和0.0696％，RSD分別為2.41％、1.91％。
表4 益心舒膠囊中人參皂苷的重現(xiàn)性試驗

1.9穩(wěn)定性試驗取本品(批號20020509)內(nèi)容物，按質(zhì)量標準(修訂)正文中含量測定項下供試液的制備方法制備供試液，分別于0、1、2、4、8、12小時進樣測定人參皂苷峰面積，結(jié)果列入表5，人參皂苷Rg1、Re平均峰面積分別為1643149、1091529，RSD分別為0.78％和0.73％，說明供試液在12小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
表5 益心舒膠囊中人參皂苷的穩(wěn)定性試驗

1.10回收率試驗采用加樣回收法，分別精密稱取5份已測定含量的樣品(人參皂苷Rg1、Re的含量分別為0.1036％和0.0696％)約2g，精密加入人參皂苷Rg1(0.5064mg/ml)、Re(0.4084mg/ml)的對照品混合溶液4.0ml，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1∶1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2％氫氧化鉀甲醇溶液50ml，加熱回流1小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘渣3次，合并洗液和濾液，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加水50ml溶解瓶轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液分別用氨試液、水、1％磷酸二氫鉀溶液各洗滌1次，每次40ml，棄去洗滌液，正丁醇液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解，并移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，測定，結(jié)果見表6、7。
表6 益心舒膠囊中人參皂苷Rg1的回收率試驗

表7 益心舒膠囊中人參皂苷Re的回收率試驗

1.11樣品測定按質(zhì)量標準(修訂)制備供試品和對照品溶液，分別進樣10μl，記錄色譜，測定峰面積，按下式計算含量

式中Ai供試品溶液峰面積 W供試品稱樣(g)As對照品溶液峰面積 W1平均粒重(g)Cs對照品溶液濃度(mg/ml)
10批樣品中人參皂苷總量測定結(jié)果見表8。
表8 10批樣品中人參皂苷總量測定結(jié)果

根據(jù)10批樣品測定結(jié)果，人參皂苷Rg1與人參皂苷Re總量在0.243～0.954mg/粒范圍內(nèi)，故暫定本品每粒含人參以人參皂苷Rg1(C42H72O14)和人參皂苷(C48H82O18)的總量計算，不得少于0.20mg。
實驗例2 丹酚酸B含量測定的方法學考察2.1儀器條件島津高效液相色譜儀，LC-2010A HT。
2.2試藥甲醇(色譜純、分析純)，乙腈(色譜純)，甲酸(分析純)，水為高純水；丹酚酸B對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用)，樣品益心舒膠囊(貴州信邦制藥有限公司)。
2.3色譜條件色譜柱VP-ODS；流動相甲醇-乙腈-0.5％甲酸水溶液(28∶8∶64)柱溫30℃；檢測波長286nm；流速1ml/min；進樣量10ul。
2.4系統(tǒng)適應(yīng)性試驗分別取丹酚酸B對照品，益心舒膠囊供試品(批號20051201)溶液缺丹參藥材的陰性空白溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，從圖中看，丹酚酸B的保留時間為16.1分鐘，陰性空白色譜圖在丹酚酸B位置處無峰，丹酚酸B與其相近的其他峰分離度完全(分離度＞1.5)，即本實驗條件下丹酚酸B與其他組分分離完全。理論塔板數(shù)對照品中為2952；理論塔板數(shù)樣品中丹酚酸B為2965；丹酚酸B與其他組分峰的分離度大于1.5。故理論塔板數(shù)以丹酚酸B峰計算，應(yīng)不低于2000。
2.5線性關(guān)系考察2.5.1標準溶液的制備精密取丹酚酸B對照品適量，加甲醇溶解，制成每1ml含丹酚酸B0.1392mg的對照品溶液。
2.5.2標準曲線的繪制精密吸取上述對照品溶液1ul、2ul、4ul、8ul、12ul、16ul、20ul。分別注入液相色譜儀，記錄色譜結(jié)果見表9，以峰面積A對質(zhì)量數(shù)X(μg)進行線性回歸計算，得線性回歸方程為丹酚酸BA＝1015012X-28940，r＝0.9995(丹酚酸B在0.1392μg～2.784μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好)。
表9 丹酚酸B線性關(guān)系考察

2.6供試品溶液提取時間的選擇 提取方法回流提取(75％甲醇)，測定結(jié)果表10。
表10 不同時間提取考察(樣品益心舒膠囊20051201)

結(jié)果從表10中可見，提取60分鐘即可將制劑中的丹酚酸B提取完全，故選擇加熱回流提取1小時。
2.7精密度試驗取丹酚酸B對照品10ul，重復進樣6次，測定峰面積，求平均峰面積和相對平均標準偏差(RSD)。結(jié)果見表11表11 丹酚酸B測定的精密度試驗

2.8穩(wěn)定性試驗取本品(批號20051201)內(nèi)容物，置具塞錐形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，取出放冷，用75％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。分別于0、1、2、4、8、12小時進行測定，結(jié)果列入表12，丹酚酸B平均峰面積為528853，RSD為1.69％，說明供試品溶液在12小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
表12 益心舒膠囊中丹酚酸B測定穩(wěn)定性試驗

2.9重復性試驗取本品(批號20051201)內(nèi)容物，制備方法同前，平行制備5份供試液，分別進樣10μl，測定峰面積，計算結(jié)果見表13，丹酚酸B的平均含量為2.35mg/g，RSD為1.56％。
表13 益心舒膠囊中丹酚酸B測定重復性試驗

2.10回收率試驗采用加樣回收法，分別精密稱取6份已測定含量的樣品(丹酚酸的含量為2.35mg/g)約0.5g，精密加入丹酚酸B(0.2304mg/ml)對照液5ml，置具塞錐形瓶中，加入75％甲醇至50ml，稱定重量，加熱回流1小時，取出放冷，用75％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。分別精密吸取上述供試液各10μl，注入色譜儀，測定，即得。結(jié)果見表14。
表14 益心舒膠囊(批號20051201)中丹酚酸B測定回收率試驗

2.11樣品測定按前述方法制備供試液和對照溶液，分別進樣10μl，記錄色譜圖，測定峰面積，按外標法計算含量，10個批樣品中丹酚酸B含量測定結(jié)果見表15。
表15 10批樣品中丹酚酸B含量測定結(jié)果

實驗例3 黃芪甲苷含量測定的方法學考察3.1儀器條件島津高效液相色譜儀，LC-2010A HT；蒸發(fā)光散射檢測ELSD20003.2試藥乙腈為色譜純，甲醇、醋酸乙酯、正丁醇、氨水均為分析純，氫氧化鉀為化學純，水為重蒸水；黃芪甲苷(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用)，樣品益心舒膠囊(貴州信邦制藥有限公司)。
3.3色譜條件色譜柱美國Phenomenex公司C18柱；流動相乙腈-水(37∶63)柱溫25℃；流速0.5ml/min；ELSD漂移管溫度100℃；載氣流速2.7L/min；進樣量10ul。
3.4系統(tǒng)適應(yīng)性試驗分別取黃芪甲苷對照品，益心舒膠囊供試品(批號20051201)溶液缺黃芪藥材的陰性空白溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，從圖中看，黃芪甲苷的保留時間為16.1分鐘，陰性空白色譜圖在黃芪甲苷位置處無峰，黃芪甲苷與其相近的其他峰分離度完全(分離度＞1.5)，即本實驗條件下丹酚酸B黃芪甲苷與其他組分分離完全。
3.5標準曲線及線性范圍精密稱取黃芪甲苷對照品19.8mg，加50ml甲醇制成0.396mg/ml的對照品溶液，作為對照品貯備液。分別精密吸取上述對照品溶液1ml、3ml、5ml、7ml、9ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進樣10(ul)，以進樣量(ug)的常用對數(shù)值為橫坐標，以峰面積的常用對數(shù)值為縱坐標，作標準曲線，得回歸方程為Y＝4.9358+1.4956X，r＝0.9995，進樣量在0.396~3.564ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。因該標準曲線不過原點，樣品測定采用外標兩點法算。
3.6精密度實驗取同一份供試品溶液，連續(xù)重復進樣6次，每次進樣10ul，測定峰面積，RSD為0.48％。
3.7穩(wěn)定性試驗取供試品溶液，分別在0h、2h、4h、6h、8h、24h、進樣，進行穩(wěn)定性試驗，測定結(jié)果表明，在24h之內(nèi)黃芪甲苷色譜峰面積無明顯改變。RSD為1.1％。
3.8重現(xiàn)性試驗取同一樣品按供試品溶液的制備方法制備6份供試液，分別進樣，測定黃芪甲苷的峰面積，計算含量，RSD為1.15％。
3.9回收率試驗精密稱取18.8mg黃芪甲苷對照品置200ml量瓶中，加2％KOH-甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備溶液。精密稱取樣品0.15g，精密加入對照品貯備溶液5ml，按“3”項下的方法制成供試品溶液，每次進樣量為10ul。平均回收率為97.94％，RSD為0.68％。
3.10樣品的含量測定取10批樣品，按含量測定項下方法制備供試液，進行測定結(jié)果見表16表16 10批樣品中黃芪甲苷含量測定結(jié)果

具體實施例實施例1 一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥膠囊劑的質(zhì)量控制方法，主要包括鑒別、含量測定等項目。
1、處方人參 200g麥冬 200g五味子 133g黃芪 200g丹參 267g川芎 133g山楂200g
2、制法以上七味，取人參粉碎成細粉后后備用。五味子、丹參用85％乙醇回流提取二次，第一次3小時，第二次1.5小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度1.12～1.15(80℃)，得醇浸膏。其余麥冬等加水煎煮二次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.36(80℃)，得水提浸膏。將上述二種浸膏合并后，加入人參細粉及適量淀粉，混合均勻，干燥，粉碎，過100目篩，裝膠囊，制成1000粒，即得。
3、鑒別(1)對于人參的鑒別，取本品內(nèi)容物5g，加氯仿-乙醚(1∶1)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rb1、Re、Rg1中全部或部分品種作為對照品，對照品加甲醇制成每1ml含2mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述對照品溶液各10μl，供試品溶液15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(3∶7∶2)，10℃以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。
(2)對于麥冬的鑒別，取本品內(nèi)容物20g，加硅藻土20g，加水50ml攪拌均勻，在80℃干燥20分鐘，加乙酸乙酯120ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取麥冬對照藥材1g，加水100ml煎煮15分鐘，濾過，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH至1，用乙醚30ml振搖提取一次，乙醚液揮干，殘渣加乙醇1ml溶解，作為對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。
(3)對于五味子的鑒別，取本品內(nèi)容物10g，加氯仿20ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加1ml氯仿使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對照藥材10g，同法制得對照藥材溶液。再取五味子甲素對照品，加甲醇制得每1ml含1mg的對照品溶液。吸取上述對照藥材、對照品溶液各4μl，供試品溶液10μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30-60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的熒光斑點。
(4)對于山楂的鑒別，取本品內(nèi)容物20g，加甲醇50ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品制成每1ml含1mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶20∶1)為展開劑，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，在105℃加熱至斑點清晰。展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
(5)對于黃芪的鑒別取本品內(nèi)容物5g，加氯仿-乙醚(1∶1)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材同法制成對照藥材溶液。再取黃芪甲苷對照品加甲醇制成每1ml含2mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述對照品溶液10μl，供試品溶液15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)，10℃以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。
(6)對于丹參的鑒別取本品內(nèi)容物2g，加乙醚20ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取丹參酮IIA對照品，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯(19∶1)為展開劑展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗紅色斑點。
(7)對于川芎的鑒別取本品內(nèi)容物20g，加乙酸乙酯60ml，回流提取30min，濾過，濾液用5％NaHNO3溶液萃取3次，合并堿水層，用稀硫酸酸化至pH1，用乙醚萃取3次，合并乙醚層，回收至干，加甲醇1m使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材按上述方法制備對照藥材溶液。再另取阿魏酸對照品，加甲醇配制成每1ml中含0.5mg的對照品溶液。分別吸取上述溶液各10μl，點于同一塊硅膠G-CMC薄層板上，以苯-乙酸乙酯-冰乙酸(4∶1∶0.3)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
4、含量測定(1)對于人參的含量測定，采用高效液相色譜法測定。
色譜條件系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.1％磷酸-乙腈(80∶20)為流動相；流速1ml/min；檢測波長203nm。理論板數(shù)以人參皂苷Re峰計算應(yīng)不低于2500。
對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品12.5mg、人參皂苷Re10mg，加甲醇分別制成每1ml含人參皂苷Rg10.5mg、人參皂苷Re0.4mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品30粒的內(nèi)容物，精密稱定，混勻，取4g，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1∶1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2％氫氧化鉀醇液50ml，加熱回流1小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘渣3次，合并洗液和濾液，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加水50ml溶解瓶移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。
測定法 分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品含人參皂苷Rg1(C42H72O14)和人參皂苷Re(C48H82O18的總量不得少于0.5mg/g。
(2)對于丹參的含量測定，采用高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相甲醇-乙腈-0.5％甲酸水溶液(28∶8∶64)；流速1ml/min；檢測波長286nm。理論踏板數(shù)以丹酚酸B峰計算不低于2000。
對照品溶液制備 精密稱取丹酚酸B對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.14mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75％甲醇50ml。稱定重量，加熱回流1小時，取出，放冷，再稱定重量，用75％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取上述對照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測定，即得。
本品含丹酚酸B(C36H30O16)不得少于1.0mg/g。
(3)對于黃芪的含量測定，采用高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相乙腈-水(37∶63)；流速0.5ml/min；蒸發(fā)光散射檢測ELSD漂移管溫度100℃；載氣流速2.7L/min；進樣量10ul。
對照品溶液制備 精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入2％KOH-甲醇50ml，回流1h，甲醇提取液蒸至盡干，加水20ml使溶解后，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml；合并醋酸乙酯液，加水15ml洗滌，合并水液；用水飽和正丁醇提取4次，每次20ml；合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次20ml；棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇使溶解轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，即得。
測定法 分別精密吸取上述對照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測定，即得。
本品含黃芪甲苷(C11H68O14)不得少于0.125mg/g。
實施例2 一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥膠囊劑的質(zhì)量控制方法，主要包括鑒別、含量測定等項目。
1、處方人參 200g麥冬 200g五味子 133g黃芪 200g丹參 267g川芎 133g山楂200g2、制法以上七味，取人參粉碎成細粉后后備用。五味子、丹參用85％乙醇回流提取二次，第一次3小時，第二次1.5小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度1.12～1.15(80℃)，得醇浸膏。其余麥冬等加水煎煮二次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.36(80℃)，得水提浸膏。將上述二種浸膏合并后，加入人參細粉及適量淀粉，混合均勻，干燥，粉碎，過100目篩，裝膠囊，制成1000粒，即得。
3、鑒別(1)對于人參的鑒別，取本品內(nèi)容物20g，用正丁醇回流提取30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加硫酸的45％乙醇溶液20ml，加熱回流1小時，揮去乙醇，用三氯甲烷10ml振搖提取三氯甲烷，用水洗至中性，用適量無水硫化鈉脫水，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取人參對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。再取人參二醇對照品、人參三醇對照品中全部或部分品種作為對照品，對照品加無水乙醇制成每1ml含1mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述各溶液10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮(2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸甲醇溶液，在105℃加熱約10分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
(2)對于麥冬的鑒別，取本品內(nèi)容物20g，用甲醇回流提取30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加20ml水使溶解，用乙醚洗滌兩次，每次10ml，棄去，繼續(xù)用水飽和的正丁醇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨試液洗2次，每次10ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣用5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。另取麥冬對照藥材，同法制成對照藥材溶液。再另取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥的麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1ml含麥冬皂苷D 0.2mg的溶液，作為對照品溶液。精密吸取上述各溶液20μl，分別注入高效液相色譜儀中，流速1.0ml/min，柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度98℃，氣體流量2.8L；理論板數(shù)按麥冬皂苷D峰計不低于3000。供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)的保留時間，顯相同的色譜峰。
(3)對于五味子的鑒別，取本品內(nèi)容物5g，加乙醚20ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加1ml甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對照藥材2g，同法制得對照藥材溶液。再取五味子酯甲、五味子醇甲對照品，分別加甲醇制得每1ml含0.5mg的對照品溶液。吸取上述對照藥材、對照品溶液各10μl，供試品溶液20μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯(9∶4)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的斑點。
(4)對于山楂的鑒別，取本品內(nèi)容物20g，用50ml、30ml無水乙醇分別超聲提取30min、20min后，濾過，合并濾液，濾液加入20％的鹽酸25ml，水浴加熱40min，放冷至室溫，揮干，殘渣加流動相溶解，作為供試品溶液。另取山楂對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。再取牡荊素對照品加流動相制成每1ml含0.25mg的溶液作為對照品溶液。精密吸取上述各溶液20μl，分別注入高效液相色譜儀中，流動相乙腈-3％醋酸溶液(10∶90)；流速1.0ml/min；檢測波長270nm。供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)的保留時間，顯相同的色譜峰。
(5)對于黃芪的鑒別取本品內(nèi)容物5g，加氯仿-乙醚(1∶1)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材同法制成對照藥材溶液。再取黃芪甲苷對照品加甲醇制成每1ml含2mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述對照品溶液10μl，供試品溶液15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(3∶7∶2)，10℃以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。
(6)對于丹參的鑒別取本品內(nèi)容物2g，加水40ml，超聲處理30分鐘，用鹽酸調(diào)節(jié)PH至1～2，用乙醚振搖提取2次，每次25ml，合并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取丹參素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述三種溶液各8μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(20∶4∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗斑點。
(7)對于川芎的鑒別取本品內(nèi)容物20g，加入20ml甲醇，超聲提取20min，過濾，藥渣再加入甲醇20ml按上述方法超聲提取1次，濾過，濾液合并，甲醇定容至50ml，備用。另取對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。再取川芎內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。精密吸取上述各溶液20μl，分別注入高效液相色譜儀中，流動相甲醇-5％異丙醇水溶液(55∶45)；檢測波長為280nm；流速為1ml/min；柱溫為25℃。供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)的保留時間，顯相同的色譜峰。
4、含量測定(1)對于人參的含量測定，采用薄層掃描法測定。
取本品約5g，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，用水飽和的正丁醇提取3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，加7％硫酸和45％乙醇的混合溶液20ml，置50ml圓底燒瓶內(nèi)，置水浴中水解2小時，水浴上蒸發(fā)除去乙醇，移入60ml分液漏斗中，用水和氯仿適量分別洗凈蒸發(fā)皿并入。用氯仿提取3次，每次10ml，氯仿層用蒸餾水洗1次，水層用10ml氯仿提取一次，合并氯仿，回收至干，殘渣加氯仿溶解，定量轉(zhuǎn)移至2ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取人參二醇對照品加氯仿制成每1ml含1mg溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液5μl、10μl及對照品溶液3μl、5μl分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙醚(1∶2.5)為展開劑，展開，取出，涼干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱10min，至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，至薄層掃描儀進行描儀，波長λS＝530nm，λR＝700nm，測量供試品吸光度積分值與對照品吸光度積分值，計算，即得本品含人參二醇(C42H72O14)不得少于1.0mg/粒。
(2)對于丹參的含量測定，采用高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相甲醇-水(15∶5)，檢測波長270nm。理論踏板數(shù)以丹參酮IIA峰計算不低于2000。
對照品溶液制備 精密稱取丹參酮IIA對照品10mg，置50ml棕色瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取2ml，置棕色瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每ml含丹參酮IIA 16μg)。
供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物10粒，傾出內(nèi)容物，研細，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，密塞，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取上述對照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測定，即得。
本品每粒含丹參酮IIA(C19H18O3)計，不得少于0.10mg。
(3)對于黃芪的含量測定，采用薄層掃描法測定。
取本品1.75g，精密稱取，置具塞錐形瓶，精密加水25ml，密塞，振搖使溶解，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次(25，20，20，20ml)，合并正丁醇液，用氨試液提取3次(20，20，20ml)，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水3～5ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去40％乙醇液，繼用70％乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶內(nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年一部附錄VIB)試驗，精密吸取供試品溶液5μl，對照品溶液2μl與4μl，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(30∶10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(中國藥典2005年一部附錄VIB薄層掃描法)進行掃描，波長λS＝530nm，λR＝700nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，即得。
本品含黃芪按黃芪甲苷(C41H68O14)計，每粒不得少于0.3mg。
權(quán)利要求
1.一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，主要包括鑒別、含量測定等項目，其特征在于它是將人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂貳Rd、人參皂苷Ra1、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3、麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元、薯蕷皂苷元、麥冬皂苷B、假葉樹皂苷元、β-谷甾醇、葡萄糖、五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素及五味子酯甲、五味子酯乙、黃芪對照藥材、乙酰黃芪苷I、黃芪苷I、黃芪苷II、黃芪苷III、黃芪甲苷、異黃芪苷I、異黃芪苷II、黃芪皂苷乙、環(huán)黃芪醇、大豆皂苷I、芒柄花黃素、毛蕊異黃酮、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、鼠李檸檬素苷元、異槲皮苷、棉毛黃芪甲苷、棉毛黃芪苷VI、棉毛黃芪苷II、丹參對照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、隱丹參酮、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹酚酸D、丹酚酸E、丹酚酸G、丹酚酸H、丹酚酸I、丹酚酸J、四甲基丹酸酸F、異丹酚酸C、迷迭香酸、紫草酸、丹參醌A、丹參醌B、丹參醌C、丹參素、丹參酸乙、川芎對照藥材、川芎嗪、阿魏酸、腺嘌呤、腺苷、川芎內(nèi)酯、川芎酚、丁叉苯肽內(nèi)酯、苯乙酸甲酯、香草醛、山楂對照藥材、金絲桃苷、牡荊素、齊墩果酸、熊果酸、延胡索酸、琥珀酸、豆甾醇、胡蘿卜苷中的全部或部分品種作為該中藥制劑的質(zhì)量控制的檢測指標。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于將人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參對照藥材、麥冬皂苷D、麥冬皂苷B、麥冬對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙、五味子對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、黃芪對照藥材、葡萄糖、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙、丹參對照藥材、川芎嗪、阿魏酸、腺嘌呤、腺苷、香草醛、川芎對照藥材、金絲桃苷、牡荊素、齊墩果酸、熊果酸、延胡索酸、山楂對照藥材中的全部或部分品種作為該中藥制劑的鑒別方法、含量測定方法的檢測指標。
3.按照權(quán)利要求1或2所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于鑒別技術(shù)，采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法對于人參的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以人參對照藥材、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb3、人參皂苷Re中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后精制再濃縮的方法，展開劑可以為三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以2-30％硫酸乙醇、或噴以1-10％印三酮乙醇等溶液顯色的方法；對于麥冬的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元、薯蕷皂苷元、麥冬皂苷B、假葉樹皂苷元、β-谷甾醇、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法；對于五味子的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10％磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于黃芪的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法；對于丹參的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以丹參對照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10％磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于川芎的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以川芎對照藥材、川芎嗪、阿魏酸、腺嘌呤、腺苷、香草醛中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10％磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于山楂的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以山楂對照藥材、金絲桃苷、牡荊素、齊墩果酸、熊果酸、延胡索酸中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以1～10％三氯化鐵乙醇溶液、變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10％磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法。
4.按照權(quán)利要求1或2所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于鑒別技術(shù)，采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法對于人參的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Ra1、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；對于麥冬的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元、薯蕷皂苷元、麥冬皂苷B、假葉樹皂苷元、β-谷甾醇、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；對于五味子的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯醋或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)合適的比例條件下為流動相，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；對于黃芪的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；對于丹參的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以丹參對照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；對于川芎的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以川芎對照藥材、川芎嗪、阿魏酸、腺嘌呤、腺苷、香草醛中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；對于山楂的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以山楂對照藥材、金絲桃苷、牡荊素、齊墩果酸、熊果酸、延胡索酸中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)。
5.按照權(quán)利要求3或4所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于鑒別技術(shù)，采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法對于人參的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.5～20μl，以人參皂苷Rb1、Re、Rg1中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理是以三氯甲烷-乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┨崛『笤贊饪s方法，再用正丁醇、水提取精制的方法，展開劑為三氯甲烷、甲醇、水按照常規(guī)比例配制而成，檢視條件為噴以2～30％硫酸乙醇顯色后紫外下檢視的方法；對于麥冬的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G為薄層板，點樣量為0.5～20μl，以麥冬對照藥材作為對照品，樣品前處理是以甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醚、丙酮、三氯甲烷、二氯甲烷、石油醚、正丁醇、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┨崛『笤贊饪s方法，展開劑為三氯甲烷、丙酮按照常規(guī)比例配制而成，檢視條件為噴以2～30％硫酸乙醇顯色后紫外下檢視的方法液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液溶液顯色的方法；對于五味子的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠GF254薄層板，點樣量為0.5～20μl之間某一體積，以五味子對照藥材、五味子甲素作為對照品，樣品前處理是三氯甲烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、甲酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┨崛『笤贊饪s方法，展開劑為石油醚、甲酸乙酯、甲酸的上層液，檢視條件為紫外光燈下254nm檢視。對于黃芪的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.5μl～30μl之間某一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷作為對照品，樣品前處理是三氯甲烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、甲酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┨崛‰s質(zhì)，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┨崛『笤贊饪s方法，再用正丁醇、水、氨試液提取精制的方法，展開劑為三氯甲烷、甲醇、水的按照常規(guī)比例配制而成，檢視條件為噴以2～30％硫酸乙醇顯色后紫外下檢視的方法；對于丹參的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.5μl～30μl之間某一體積，以丹參對照藥材、丹參素、丹酚酸B、丹參酮IIA中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理是以三氯甲烷、乙醚、石油醚單獨使用或者是按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┤芙獾姆椒?，展開劑為苯、甲苯、醋酸乙酯，檢視條件為日光下檢視。對于川芎的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.5μl～30μl之間某一體積，以川芎對照藥材、阿魏酸中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理是以三氯甲烷、乙醚、石油醚單獨使用或者是按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┤芙獾姆椒?，展開劑為正己烷、醋酸乙酯，檢視條件為紫外光燈下365nm檢視。對于山楂的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.5μl～30μl之間某一體積，以山楂對照藥材、熊果酸、金絲桃苷、牡荊素中全部或部分品種作為對照品，以醋酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷、正丁醇、甲醇、乙醇、丙酮、水中的一種或它們?nèi)我饣旌先軇┨崛『笤贊饪s方法，展開劑為環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，檢視條件為紫外光燈或日光下檢視；
6.按照權(quán)利要求1或2所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于含量測定技術(shù)，采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法方法1以可見紫外分光光度法測定本品中的總皂苷含量，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，測定波長為200～600nm中某一波長，采用標準曲線法或?qū)φ掌贩y定，常用對照品為Rg1、黃芪甲苷；方法2以可見紫外分光光度法測定本品中的總黃酮含量，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，測定波長為200～600nm中某一波長，采用標準曲線法或?qū)φ掌贩y定，常用對照品為蘆丁、槲皮素、槲皮苷；方法3以可見紫外分光光度法測定本品中的總糖含量，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，測定波長為200～650nm中某一波長，采用標準曲線法或?qū)φ掌贩y定，常用對照品為葡萄糖；方法4以高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Ra1、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酷或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；方法5采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元、薯蕷皂苷元、麥冬皂苷B、假葉樹皂苷元、β-谷甾醇中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；方法6采用高效液相色譜法測定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酷甲、五味子酷乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；方法7采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；方法8采用薄層色譜法測定本品中黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30ul之間任一體積，以黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色后用薄層掃描儀進行掃描的方法；方法9采用高效液相色譜法測定本品中丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；方法10、采用高效液相色譜法或采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中川芎嗪、阿魏酸、腺嘌呤、腺苷、香草醛中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；方法11、采用高效液相色譜法測定本品中金絲桃苷、牡荊素、齊墩果酸、熊果酸、延胡索酸中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)；
7.按照權(quán)利要求1或2所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于含量測定技術(shù)，采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法方法1、對于人參的含量測定方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以人參對照藥材、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb3、人參皂苷Re中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后精制再濃縮的方法，展開劑可以為三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，顯色方法包括噴以2-30％硫酸乙醇或噴以1-10％印三酮乙醇溶液，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為500～750nm；方法2、對于麥冬的鑒別方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元、薯蕷皂苷元、麥冬皂苷B、假葉樹皂苷元、β-谷甾醇、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮，加酸水解的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，顯色方法包括噴以硫酸乙醇溶液或濃硫酸水溶液或茴香醛硫酸溶液或10％硫酸溶液或5％三氯化鐵乙醇溶液，斑點在薄層掃描儀上采用單波長定點掃描，掃描波長為500～700nm；方法3、對于五味子的鑒別方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，置紫外光燈下或采用包括噴以變色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸氣或10％磷鉬酸乙醇溶液的方法，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為200～400nm；方法4、對于黃芪的鑒別方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以水或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再用層析分離精制的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，顯色包括噴以硫酸乙醇溶液或濃硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或10％硫酸溶液或5％三氯化鐵乙醇溶液的方法，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為500～750nm；方法5、對于丹參的鑒別方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以丹參對照藥材、丹參酮I、丹參酮II A、丹參酮II B、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以水或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，置紫外光燈下或采用氨氣熏后再置紫外光燈下或噴以變色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸氣或10％磷鉬酸乙醇溶液顯色的方法，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為400～750nm；方法6、對于川芎的鑒別方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以川芎對照藥材、川芎嗪、阿魏酸、腺嘌呤、腺苷、香草醛中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是乙醇或甲醇或水或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為三氯甲烷、甲醇、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，置紫外光燈下或采用氨氣熏后再置紫外光燈下檢視或噴以變色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸氣或10％磷鉬酸乙醇溶液顯色的方法，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為200～400nm；方法7、對于山楂的鑒別方法采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30μl之間任一體積，以山楂對照藥材、金絲桃苷、牡荊素、齊墩果酸、熊果酸、延胡索酸中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為三氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，顯色包括噴以1～10％三氯化鐵乙醇溶液或變色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸氣或10％磷鉬酸乙醇溶液的方法，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為450～750nm。
8.按照權(quán)利要求7所述的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于含量測定技術(shù)，采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法方法1采用高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re，樣品前處理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用氫氧化鉀、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精制的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙睛、磷酸、水在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm；方法2采用高效液相色譜法測定本品中丹酚酸B，樣品前處理以甲醇、乙醇、水提取的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以甲醇、乙腈、甲酸、水在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長為286nm。方法3采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中黃芪甲苷，樣品前處理以氫氧化鉀、甲醇按一定的比例混合溶劑提取，然后用水、醋酸乙酯、正丁醇、氨試液精制的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水在常規(guī)的合適比例條件下為流動相。
全文摘要
本發(fā)明是一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，屬于藥品的技術(shù)領(lǐng)域。益心舒中藥制劑是以人參、黃芪、丹參、麥冬、五味子、川芎、山楂等七味藥組成，具有益氣復脈，活血化瘀，養(yǎng)陰生津的功效，用于氣陰兩虛，心悸脈結(jié)代，胸悶不舒、胸痛及冠心病心絞痛見有上述癥狀者，目前臨床上廣泛用于治療心絞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心絞痛患等。本發(fā)明提供了一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒中藥制劑的質(zhì)量控制方法，這種方法向有關(guān)的生產(chǎn)、檢測機構(gòu)提供了檢測的指標、檢測的手段、技術(shù)方法等等；以便更好的控制該中藥制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產(chǎn)品品質(zhì)。
文檔編號A61P9/00GK101036748SQ20071007772
公開日2007年9月19日 申請日期2007年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月18日
發(fā)明者張觀福 申請人:貴州信邦制藥股份有限公司