專利名稱：細胞色素c納米脂質(zhì)體藥物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及細胞色素C納米脂質(zhì)體藥物及其制備方法。
背景技術：
細胞色素C，又稱為細胞色素丙，Cytochromum C，本藥是從豬心或者牛心中提取的細胞呼吸激活劑，為內(nèi)呼吸鏈組成成分之一。在內(nèi)呼吸鏈中起到傳遞電子的作用。在正常情況下，本藥不能透過細胞膜，但當組織缺氧時，細胞膜通透性增強，外源性制劑即能通過細胞膜進入細胞內(nèi)，從而發(fā)揮其糾正細胞呼吸和物質(zhì)代謝的作用。因而其可用于臨床各種缺氧的急救或輔助治療。如一氧化碳中毒、中樞抑制藥中毒、新生兒窒息、嚴重休克缺氧、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困難、高山缺氧、腦病及心臟病引起的缺氧等。
但是現(xiàn)有技術制備的此藥，存在兩大缺陷，一個是療效有時不穩(wěn)定，二是存在過敏性。由于療效及安全性考慮，大大影響了此藥在臨床上的應用。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有細胞色素C類藥物存在的上述缺陷，本發(fā)明提供一種細胞色素C納米脂質(zhì)體藥物。
本發(fā)明的技術方案如下本發(fā)明提供一種細胞色素C納米脂質(zhì)體藥物，包括如下重量份數(shù)的原料中性磷脂 40-80；谷甾醇 10-20；膽固醇 20-40；細胞色素C 10-30；
聚乙二醇 20-25；還原性谷胱甘肽5-10；維生素C 40-50。
具體講，所述中性磷脂是指雞蛋卵磷脂或氫化大豆卵磷脂與腦磷脂重量比1-3∶1的混合物，所述谷甾醇是指β-谷甾醇，所述聚乙二醇是指聚乙二醇4000。
氫化大豆卵磷脂與腦磷脂、谷甾醇、膽固醇混合，組成了本發(fā)明藥物特殊的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，聚乙二醇摻入脂質(zhì)體中，形成長循環(huán)脂質(zhì)體，谷胱甘肽是體內(nèi)抗氧劑兼細胞色素C的體內(nèi)激活劑，維生素C是賦形劑兼體外抗氧劑。
本發(fā)明還提供上述細胞色素C納米脂質(zhì)體藥物的制備方法，步驟如下(1)用磷酸鹽緩沖液溶解所述量的細胞色素C。聚乙二醇、還原性谷胱甘肽和維生素C，制成溶液；(2)將步驟(1)制得的溶液超濾過截留分子量13000道爾頓的濾膜，取濾液，除去分子量大于13000道爾頓的雜質(zhì)異性蛋白質(zhì)；(3)用2∶1體積混合的氯仿/甲醇混合液溶解所述量的中性磷脂、谷甾醇、膽固醇，制得溶液；(4)將步驟(3)制得的溶液濾過截留分子量5000道爾頓的濾膜，取濾液；(5)將步驟(4)制得的濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸干，制得脂質(zhì)體膜；(6)在氮氣保護下，取步驟(2)制備的濾液水化步驟(5)制備的脂質(zhì)體膜，用勻質(zhì)機反復擠壓，直至通過0.05μm核孔膜濾過，制成粒徑50-120nm的納米脂質(zhì)體藥物載體粒子分散液；(7)制成藥劑學上可以接收的劑型。
上述藥劑學上可以接收的劑型是指小容量注射劑或凍干針劑。
本發(fā)明提供的細胞色素C納米脂質(zhì)體藥物所實現(xiàn)的有益效果如下1.本發(fā)明藥物把細胞色素C制成納米脂質(zhì)體藥物，使細胞色素C進入體內(nèi)靶向于缺氧細胞，而磷脂是細胞膜的主要組成成分，所以，本發(fā)明所提供的藥物對細胞膜的通透性大大提高。
2.本發(fā)明藥物的納米脂質(zhì)體粒徑50-120nm之間，正好是缺氧組織毛細血管空隙尺寸，容易從循環(huán)體系進入缺氧細胞部位，增加了靶向性，提高了療效。
3.本發(fā)明藥物摻入了聚乙二醇，避免了在肝臟中被清除，稱為長循環(huán)脂質(zhì)體，可大部分進入缺氧細胞。
4.由于本發(fā)明藥物納米脂質(zhì)體藥物中摻入了還原型谷胱甘肽，消除了由于外源細胞色素C在體內(nèi)外氧化使外源性細胞色素C活性降低的弊端，同時，還原型谷胱甘肽還是細胞色素C的激活劑。
5.用截留分子量13000道爾頓的濾膜分離細胞色素C中的異性蛋白分子及其他雜質(zhì)，提高了純度并清除了熱源，降低了過敏性。
6.本發(fā)明藥物細菌內(nèi)毒素殘留量小，大大降低了其致敏性。
7.本發(fā)明藥物生產(chǎn)工藝采用膜分離技術，替代了現(xiàn)有工藝中的活性炭吸附細菌內(nèi)毒素工藝，消除了活性炭污染導致的致敏性。
8.本發(fā)明藥物制成納米脂質(zhì)體藥物載體，使細胞色素C被包封在脂質(zhì)體內(nèi)，降低了其致敏性。
9.本發(fā)明藥物加入了抗氧劑，避免了細胞色素C在體內(nèi)外的氧化，減少了副反應，從而降低了毒性和致敏性。
具體實施例方式
實施例1本實施例所采用的配方中，各原料及其重量份數(shù)如下中性磷脂 40；谷甾醇 20；膽固醇 20；細胞色素C30；聚乙二醇 20；
還原性谷胱甘肽10；維生素C 40。
所述中性磷脂是指氫化大豆卵磷脂與腦磷脂重量比1-3∶1的混合物，所述谷甾醇是指β-谷甾醇，所述聚乙二醇是指聚乙二醇4000。
氫化大豆卵磷脂與腦磷脂、谷甾醇、膽固醇混合，組成了本發(fā)明藥物特殊的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，聚乙二醇摻入脂質(zhì)體中，形成長循環(huán)脂質(zhì)體，谷胱甘肽是體內(nèi)抗氧劑兼細胞色素C的體內(nèi)激活劑，維生素C是賦形劑兼體外抗氧劑。
制備步驟如下(1)用磷酸鹽緩沖液溶解所述量的細胞色素C。聚乙二醇、還原性谷胱甘肽和維生素C，制成溶液；(2)將步驟(1)制得的溶液超濾過截留分子量13000道爾頓的濾膜，取濾液，除去分子量大于13000道爾頓的雜質(zhì)異性蛋白質(zhì)；(3)用2∶1體積混合的氯仿/甲醇混合液溶解所述量的中性磷脂、谷甾醇、膽固醇，制得溶液；(4)將步驟(3)制得的溶液濾過截留分子量5000道爾頓的濾膜，取濾液；(5)將步驟(4)制得的濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸干，制得脂質(zhì)體膜；(6)在氮氣保護下，取步驟(2)制備的濾液水化步驟(5)制備的脂質(zhì)體膜，用勻質(zhì)機反復擠壓，直至通過0.05μm核孔膜濾過，制成粒徑50-120nm的納米脂質(zhì)體藥物載體粒子分散液；(7)制成藥劑學上可以接收的劑型。
藥效驗證試驗如下將小白鼠置于密閉容器內(nèi)，通以96.2％氮氣和3.8％氧氣的混合氣體，直至小白鼠倒地，意識喪失為止，造成缺氧。治療組選擇用本發(fā)明藥物，劑量為以細胞色素C計，1.0mg/kg用量(治療組1)、0.5mg/kg用量(治療組2)各一組，每天給藥一次，腹腔注射給藥。對照組使用現(xiàn)有細胞色素C注射液藥物，1.0mg/kg用量(對照組1)、0.5mg/kg用量(對照組2)各一組，劑量和給藥次數(shù)同治療組。治療組及對照組每組設小白鼠30只，給藥時間3天，以小白鼠救活生存并回復正常活動能力為有效。
以上進行試驗的小白鼠，均是事先進行試驗所用藥物過敏性試驗合格的小鼠。在試驗過程中統(tǒng)計過敏發(fā)生率。
試驗結(jié)果如下

實施例2本實施例所采用的配方中，各原料及其重量份數(shù)如下中性磷脂 80；谷甾醇10；膽固醇40；細胞色素C 10；聚乙二醇 25；還原性谷胱甘肽5；維生素C 50。
所述中性磷脂是指氫化大豆卵磷脂與腦磷脂重量比1-3∶1的混合物，所述谷甾醇是指β-谷甾醇，所述聚乙二醇是指聚乙二醇4000。
氫化大豆卵磷脂與腦磷脂、谷甾醇、膽固醇混合，組成了本發(fā)明藥物特殊的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，聚乙二醇摻入脂質(zhì)體中，形成長循環(huán)脂質(zhì)體，谷胱甘肽是體內(nèi)抗氧劑兼細胞色素C的體內(nèi)激活劑，維生素C是賦形劑兼體外抗氧劑。
制備步驟如下(1)用磷酸鹽緩沖液溶解所述量的細胞色素C。聚乙二醇、還原性谷胱甘肽和維生素C，制成溶液；
(2)將步驟(1)制得的溶液濾過截留分子量13000道爾頓的濾膜，取濾液；(3)用2∶1體積混合的氯仿/甲醇混合液溶解所述量的中性磷脂、谷甾醇、膽固醇，制得溶液；(4)將步驟(3)制得的溶液濾過截留分子量5000道爾頓的濾膜，取濾液；(5)將步驟(4)制得的濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸干，制得脂質(zhì)體膜；(6)在氮氣保護下，取步驟(2)制備的濾液水化步驟(5)制備的脂質(zhì)體膜，制成粒徑50-120nm的納米脂質(zhì)體藥物載體粒子分散液；(7)制成藥劑學上可以接收的劑型。
藥效驗證試驗如下將小白鼠置于密閉容器內(nèi)，通以96.2％氮氣和3.8％氧氣的混合氣體，直至小白鼠倒地，意識喪失為止，造成缺氧。治療組選擇用本發(fā)明藥物，劑量為以細胞色素C計，1.0mg/kg用量(治療組1)、0.5mg/kg用量(治療組2)各一組，每天給藥一次，腹腔注射給藥。對照組使用現(xiàn)有細胞色素C注射液藥物，1.0mg/kg用量(對照組1)、0.5mg/kg用量(對照組2)各一組，劑量和給藥次數(shù)同治療組。治療組及對照組每組設小白鼠30只，給藥時間3天，以小白鼠救活生存并回復正常活動能力為有效。
以上進行試驗的小白鼠，均是事先進行試驗所用藥物過敏性試驗合格的小鼠。在試驗過程中統(tǒng)計過敏發(fā)生率。
試驗結(jié)果如下

實施例3
本實施例所采用的配方中，各原料及其重量份數(shù)如下中性磷脂 80；谷甾醇20；膽固醇40；細胞色素C 30；聚乙二醇 25；還原性谷胱甘肽10；維生素C 50。
所述中性磷脂是指氫化大豆卵磷脂與腦磷脂重量比1-3∶1的混合物，所述谷甾醇是指β-谷甾醇，所述聚乙二醇是指聚乙二醇4000。
氫化大豆卵磷脂與腦磷脂、谷甾醇、膽固醇混合，組成了本發(fā)明藥物特殊的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，聚乙二醇摻入脂質(zhì)體中，形成長循環(huán)脂質(zhì)體，谷胱甘肽是體內(nèi)抗氧劑兼細胞色素C的體內(nèi)激活劑，維生素C是賦形劑兼體外抗氧劑。
制備步驟如下(1)用磷酸鹽緩沖液溶解所述量的細胞色素C。聚乙二醇、還原性谷胱甘肽和維生素C，制成溶液；(2)將步驟(1)制得的溶液濾過截留分子量13000道爾頓的濾膜，取濾液；(3)用2∶1體積混合的氯仿/甲醇混合液溶解所述量的中性磷脂、谷甾醇、膽固醇，制得溶液；(4)將步驟(3)制得的溶液濾過截留分子量5000道爾頓的濾膜，取濾液；(5)將步驟(4)制得的濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸干，制得脂質(zhì)體膜；(6)在氮氣保護下，取步驟(2)制備的濾液水化步驟(5)制備的脂質(zhì)體膜，制成粒徑50-120nm的納米脂質(zhì)體藥物載體粒子分散液；(7)制成藥劑學上可以接收的劑型。
藥效驗證試驗如下
將小白鼠置于密閉容器內(nèi)，通以96.2％氮氣和3.8％氧氣的混合氣體，直至小白鼠倒地，意識喪失為止，造成缺氧。治療組選擇用本發(fā)明藥物，劑量為以細胞色素C計，1.0mg/kg用量(治療組1)、0.5mg/kg用量(治療組2)各一組，每天給藥一次，腹腔注射給藥。對照組使用現(xiàn)有細胞色素C注射液藥物，1.0mg/kg用量(對照組1)、0.5mg/kg用量(對照組2)各一組，劑量和給藥次數(shù)同治療組。治療組及對照組每組設小白鼠30只，給藥時間3天，以小白鼠救活生存并回復正?；顒幽芰橛行А?br> 以上進行試驗的小白鼠，均是事先進行試驗所用藥物過敏性試驗合格的小鼠。在試驗過程中統(tǒng)計過敏發(fā)生率。
試驗結(jié)果如下

實施例4本實施例所采用的配方中，各原料及其重量份數(shù)如下中性磷脂 80；谷甾醇20；膽固醇40；細胞色素C 30；聚乙二醇 25；還原性谷胱甘肽10；維生素C 50。
所述中性磷脂是指雞蛋卵磷脂，所述谷甾醇是指β-谷甾醇，所述聚乙二醇是指聚乙二醇4000。
氫化大豆卵磷脂與腦磷脂、谷甾醇、膽固醇混合，組成了本發(fā)明藥物特殊的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，聚乙二醇摻入脂質(zhì)體中，形成長循環(huán)脂質(zhì)體，谷胱甘肽是體內(nèi)抗氧劑兼細胞色素C的體內(nèi)激活劑，維生素C是賦形劑兼體外抗氧劑。
制備步驟如下(1)用磷酸鹽緩沖液溶解所述量的細胞色素C。聚乙二醇、還原性谷胱甘肽和維生素C，制成溶液；(2)將步驟(1)制得的溶液濾過截留分子量13000道爾頓的濾膜，取濾液；(3)用2∶1體積混合的氯仿/甲醇混合液溶解所述量的中性磷脂、谷甾醇、膽固醇，制得溶液；(4)將步驟(3)制得的溶液濾過截留分子量5000道爾頓的濾膜，取濾液；(5)將步驟(4)制得的濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸干，制得脂質(zhì)體膜；(6)在氮氣保護下，取步驟(2)制備的濾液水化步驟(5)制備的脂質(zhì)體膜，制成粒徑50-120nm的納米脂質(zhì)體藥物載體粒子分散液；(7)制成藥劑學上可以接收的劑型。
藥效驗證試驗如下將小白鼠置于密閉容器內(nèi)，通以96.2％氮氣和3.8％氧氣的混合氣體，直至小白鼠倒地，意識喪失為止，造成缺氧。治療組選擇用本發(fā)明藥物，劑量為以細胞色素C計，1.0mg/kg用量(治療組1)、0.5mg/kg用量(治療組2)各一組，每天給藥一次，腹腔注射給藥。對照組使用現(xiàn)有細胞色素C注射液藥物，1.0mg/kg用量(對照組1)、0.5mg/kg用量(對照組2)各一組，劑量和給藥次數(shù)同治療組。治療組及對照組每組設小白鼠30只，給藥時間3天，以小白鼠救活生存并回復正?；顒幽芰橛行А?br> 以上進行試驗的小白鼠，均是事先進行試驗所用藥物過敏性試驗合格的小鼠。在試驗過程中統(tǒng)計過敏發(fā)生率。
試驗結(jié)果如下

本發(fā)明提供的藥物，療效大大提高，同時致敏性大大降低。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明提供一種細胞色素C納米脂質(zhì)體藥物，包括如下重量份數(shù)的原料中性磷脂 40-80；谷甾醇 10-20；膽固醇 20-40；細胞色素C10-30；聚乙二醇 20-25；還原性谷胱甘肽 5-10；維生素C 40-50。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細胞色素C納米脂質(zhì)體藥物，其特征在于，所述中性磷脂是指雞蛋卵磷脂或氫化大豆卵磷脂與腦磷脂重量比1-3∶1的混合物，所述谷甾醇是指β-谷甾醇，所述聚乙二醇是指聚乙二醇4000。
3.制備權(quán)利要求1或2任意一項所述細胞色素C納米脂質(zhì)體藥物的方法，步驟如下(1)用磷酸鹽緩沖液溶解所述量的細胞色素C。聚乙二醇、還原性谷胱甘肽和維生素C，制成溶液；(2)將步驟(1)制得的溶液超濾過截留分子量13000道爾頓的濾膜，取濾液；(3)用2∶1體積混合的氯仿/甲醇混合液溶解所述量的中性磷脂、谷甾醇、膽固醇，制得溶液；(4)將步驟(3)制得的溶液濾過截留分子量5000道爾頓的濾膜，取濾液；(5)將步驟(4)制得的濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸干，制得脂質(zhì)體膜；(6)在氮氣保護下，取步驟(2)制備的濾液水化步驟(5)制備的脂質(zhì)體膜，制成粒徑50-120nm的納米脂質(zhì)體藥物載體粒子分散液；(7)制成藥劑學上可以接收的劑型。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，所述藥劑學上可以接收的劑型是指小容量注射劑或凍干針劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及細胞色素C納米脂質(zhì)體藥物及其制備方法。本發(fā)明提供一種細胞色素C納米脂質(zhì)體藥物，包括如下重量份數(shù)的原料中性磷脂40－80；谷甾醇10－20；膽固醇20－40；胞色素C 10－30；聚乙二醇20－25；還原性谷胱甘肽5－10；維生素C 40－50。本發(fā)明提供的脂質(zhì)體藥物可用于臨床各種缺氧的急救或輔助治療。
文檔編號A61P43/00GK101019836SQ20071008642
公開日2007年8月22日 申請日期2007年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月8日
發(fā)明者蔡海德 申請人:蔡海德