專利名稱：：表沒食子兒茶素沒食子酸酯在制備防治膽石癥的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及表沒食子兒茶素沒食子酸酯的新的醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
：膽石癥是一種嚴(yán)重危害人類健康的常見病，流行病學(xué)研究表明，近年來膽石癥患者急劇增加，每十年增加約2倍。美國膽石癥患者約占總?cè)丝诘?0%，德國約占總?cè)丝诘?0%-15%。隨著我國人民生活水平的逐步提高，飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，膽石癥的發(fā)病率正在迅速上升。膽石癥可發(fā)生于膽囊、肝內(nèi)膽管和膽總管，其患病率因種族、遺傳、地理、飲食等因素而異。膽結(jié)石臨床可分為膽固醇結(jié)石、膽紅素結(jié)石、膽固醇膽紅素混合結(jié)石、碳酸鹽結(jié)石、磷酸鹽結(jié)石、脂肪酸結(jié)石、黑色色素結(jié)石等幾大類，黑色色素結(jié)石也是膽色素結(jié)石的一種。其中以膽固醇結(jié)石和膽色素結(jié)石最為多見，占全部病例的95%。膽石病往往引起膽道梗阻、感染甚至癌變等并發(fā)癥，而梗阻、感染是急性胰腺炎、急性化膿性膽管炎、中毒性休克、膽砂性血栓和彌散性血管內(nèi)凝血等嚴(yán)重并發(fā)癥的病理基礎(chǔ)。膽囊結(jié)石與膽囊癌的密切關(guān)系已成為共識(shí)。膽結(jié)石可以通過動(dòng)手術(shù)治療去除，但大多數(shù)病人仍希望通過藥物來治療，仍以藥物治療為主。治療膽石病，無論是消炎利膽、解痙止痛、抗菌藥物、膽囊切除、膽總管切開取石，還是膽腸內(nèi)引流、肝臟部分切除，都只是針對膽石引起的并發(fā)癥，只是"舍本求末'的對癥治療而己。惟有找到膽石病的病因，預(yù)防膽石形成、結(jié)石攜帶癥狀發(fā)作和膽石清除后復(fù)發(fā)，才是從根本上防治膽石病徹底有效的辦法。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是從中國綠茶中提取的一種成份，它是綠茶主要的活性和水溶性成份，是兒茶素中含量最高的組分，占綠茶毛重的9%-13%。因?yàn)榫哂刑厥獾牧Ⅲw化學(xué)結(jié)構(gòu)，EGCG具有非常強(qiáng)的抗氧化功能和自由基捕獲能力，在抗癌和心血管疾病方面擔(dān)當(dāng)了重要的角色(朱發(fā)偉茶葉中表沒食子兒茶素沒食子酸酯的研究進(jìn)展，中草藥，2005年8期)；同時(shí)，EGCG還具有抗菌消炎和降血脂的作用，能作為抗腫瘤藥物的增效劑，用作腫瘤多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)劑，能夠改善癌細(xì)胞對化療的敏感性并減輕對心臟的毒性(李奕等:表沒食子兒茶素沒食子酸酯抗白血病的分子機(jī)制，國外醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)地理分冊，2004年4期)?，F(xiàn)有技術(shù)中沒有EGCG用于防治膽石癥的文獻(xiàn)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于以降低體內(nèi)結(jié)石形成為目的，尋找一種無毒性、安全可靠，能防治膽色素和膽結(jié)石形成的物質(zhì)，從根本上徹底有效地防治膽石病。本發(fā)明基于發(fā)明人發(fā)現(xiàn)表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)不僅能降低膽色素結(jié)石的形成率，亦能降低膽固醇結(jié)石形成的易感性，從而完成并實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明。本發(fā)明涉及的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)具有如下化學(xué)結(jié)構(gòu)式本發(fā)明涉及的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)的分子式為C22H180，分子量為458.4。本發(fā)明涉及的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)的提取方法在現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)公開，譬如，高彥華等在"鮮茶葉中表沒食子兒茶素沒食子酸酯的高效提取技術(shù)研究"(植物研究，2006年26巻4期，P486-489)中公開的采用鮮磨勻漿提取、負(fù)壓空化混懸組合技術(shù)對新鮮老齡茶葉中的沒食子酸酯(EGCG)進(jìn)行了高效提取。本發(fā)明涉及的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)在市場上能方便地購買獲得，譬如杭州禾田生物技術(shù)有限公司(HangzhouGosunBiotechnologiesCo.，Ltd.)生產(chǎn)的純度為90%、95%、98%和99%的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG);美國sigma公司生產(chǎn)的純度為98%的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatecchingal1ate，EGCG)，等等。本發(fā)明涉及的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)用于制備防治膽石癥的藥物，可制成膠囊或片劑，直接口服，成人用藥濃度范圍為0.5-100mg/kg/天。后續(xù)動(dòng)物試驗(yàn)證明EGCG應(yīng)用于膽石病防治中，可以降低膽色素和膽固醇結(jié)石的形成率，具有良好的應(yīng)用前景。圖1是EGCG對豚鼠膽色素結(jié)石形成的影響圖。圖2是EGCG對C57BL/6小鼠膽固醇結(jié)石形成的影響圖。具體實(shí)施例方式本
發(fā)明內(nèi)容通過附圖和以下實(shí)施例作進(jìn)一步說明。實(shí)施例l(EGCG對豚鼠體內(nèi)膽色素結(jié)石形成的影響)藥品及試劑鹽酸林可霉素(SPECTIN0MYCINDihydmchloride)，注射液，上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，使用前半小時(shí)以生理鹽水新鮮配置成30mg/ml溶液。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(印igallocatecchingallate，EGCG):美國sigma公司產(chǎn)品，純度98%，用雙蒸水分別配制成2.5mg/ml濃度的藥液，置于(HTC冰箱中備用。雄性豚鼠購自上海市奉賢縣泰日鎮(zhèn)銀根養(yǎng)兔室。32只雄性豚鼠，體重450-500g，隨機(jī)分為4組正常對照組、膽色素結(jié)石模型組、EGCG高濃度組、EGCG低濃度組，每組8只。模型組、EGCG(高)組和EGCG(低)組用林可霉素60mg/kg/day劑量大腿根部皮下連續(xù)注射7天，同時(shí)，EGCG(高)組和EGCG(低)組用EGCG分別采用50mg/kg/天和25mg/kg/天劑量罐胃，治療10天；期間正常組、模型組生理鹽水灌胃。EGCG治療后的第11天(即最后一劑EGCG后24小時(shí))，戊巴比妥麻醉下腹主動(dòng)脈采血。術(shù)前動(dòng)物禁食12小時(shí)。完整切下膽囊，觀察成石情況，按照下述公式計(jì)算成石抑制率。成石率=患有膽結(jié)石的小鼠數(shù)(只)/每組小鼠數(shù)(只)X100。/。結(jié)果如表l顯示在膽色素結(jié)石模型中，成石率分別為對照組為12.5%，模型組為100%，EGCG高濃度組和EGCG低濃度組分別為37.5%和62.5%。表1.EGCG對豚鼠膽色素結(jié)石形成率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>以上實(shí)施例說明，表沒食子兒茶素沒食子酸酯對于膽色素結(jié)石的形成具有良好的抑制效果，而且這種抑制效果還具有劑量依賴性，如圖1所示。實(shí)施例2(EGCG對C57BL/6小鼠體內(nèi)膽固醇結(jié)石形成的影響)藥品及試劑表沒食子兒茶素沒食子酸酯(印igallocatecchingallate，EGCG):美國sigma公司產(chǎn)品，純度98%，用雙蒸水分別配制成2.5mg/ml濃度的藥液，置于0-4。C冰箱中備用。10周齡C57BL/6小鼠購自上海市奉賢縣泰日鎮(zhèn)銀根養(yǎng)兔室。48只10周齡C57BL/6小鼠，體重20土2g，隨機(jī)分為4組正常對照組、膽固醇結(jié)石模型組、EGCG高濃度組、EGCG低濃度組，每組12只。模型組、EGCG(高)組和EGCG(低)組喂以致石飼料，正常組喂以普通詞料。同時(shí)，EGCG(高)組和EGCG(低)組用EGCG分別采用80mg/kg/天和40rag/kg/天劑量罐胃；期間正常組、模型組生理鹽水灌胃。實(shí)驗(yàn)期間，動(dòng)物不限飲食。造模第六周后脫頸椎處死動(dòng)物。術(shù)前動(dòng)物禁食12小時(shí)。完整切下膽囊，觀察成石情況，計(jì)算成石抑制率。致石詞料的配方普通嚙齒科動(dòng)物詞料加入1.25%膽固醇、15%脂肪、0.5%膽酸(由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供)。成石率=患有膽結(jié)石的小鼠數(shù)(只)/每組小鼠數(shù)(只)xiooy。結(jié)果如表2顯示在膽色素結(jié)石模型中，成石率分別為對照組為O，模型組為83.3%，EGCG高濃度組和EGCG低濃度組分別為33.33%和41.67%。表2.EGCG對C57BL/6小鼠膽固醇結(jié)石形成率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>以上實(shí)施例說明，表沒食子兒茶素沒食子酸酯對于膽固醇結(jié)石的形成具有良好的抑制效果，而且這種抑制效果還具有劑量依賴性，如圖2所示。權(quán)利要求1、表沒食子兒茶素沒食子酸酯在制備防治膽石癥的藥物中的應(yīng)用。2、權(quán)利要求1所述的用途，其特征是，表沒食子兒茶素沒食子酸酯制成膠囊劑或片劑。3、權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征是，成人用藥濃度范圍為0.5-100mg/kg/天。全文摘要本發(fā)明公開了表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)在制備防治膽石癥的藥物中的應(yīng)用。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)應(yīng)用于膽石癥的防治中能降低膽色素結(jié)石及膽固醇結(jié)石的形成率。文檔編號(hào)A61K31/352GK101428014SQ20071009420公開日2009年5月13日申請日期2007年11月7日優(yōu)先權(quán)日2007年11月7日發(fā)明者于有軍,劉建文,葉依依,孫麗娟,山冬梅,張靜喆,房一時(shí),方邦江,朱培庭,李長龍,梁曉強(qiáng),勁王,芳王,章學(xué)林,苗同國,鄧皖利,顧宏剛,馬恩偉申請人:上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院;華東理工大學(xué)