專利名稱：：無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其醫(yī)藥用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及具有強效抗乙肝病毒活性和較低細胞毒性的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物，其制備方法及其用于制備治療乙肝病毒感染的藥物的用途。
背景技術：
：乙型病毒性肝炎是威脅人民生命健康的重大疾病，治療乙肝的根本途徑是抗病毒治療。目前臨床有效的抗乙肝病毒藥物主要為干擾素和拉米夫定。但是，干擾素治療的有效率只有30-50%,而且具有劑量限制性的毒副作用。例如，拉米夫定具有確切的抗乙肝病毒作用，但是，長期使用易產生耐藥性，連續(xù)用藥2年后，耐藥性的發(fā)生率高達40-50%，由此可引發(fā)肝炎的急性發(fā)作等嚴重后果。核苷酸類似物在細胞內毋需磷酸化，因此能夠克服拉米夫定的耐藥性，而且自身不產生耐藥性。其代表性藥物阿德福韋酯已在歐美獲準上市。但是，阿德福韋酯有一定的細胞毒性，臨床應用能夠產生腎臟毒性；而且，與拉米夫定相似，阿德福韋酯治療在停藥后，會出現乙肝病毒復制的反跳，引起乙肝的復發(fā)。根據抗HIV藥物研究的成功經驗，通過聯合用藥的COCKTAIL的療法，能夠有效克服抗藥性，加快病毒的清除。乙肝感染的人數是HIV感染人數的IO多倍，但是與抗HIV藥物相比，臨床有效的抗乙肝病毒藥物還屈指可數。歐洲專利EP0785208公開了結構如下的一系列無環(huán)核苷膦酸酯化合物其中，R!代表烷氧基，烷基等單取代基；R2代表氫或烷基，R3和R4代表氫，烷基等。其中化合物2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-[2—[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠丙基]-嘌呤(MCC-478)已經進入臨床研究。仍然迫切需要研究和開發(fā)新的具有不同結構特點和作用機理的抗乙肝藥物，
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供具有抗乙肝病毒活性的式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽，水合物或溶劑合物其中，嘌呤環(huán)6位的巰基連接于五元雜芳環(huán)上的不同位置，X代表S或0原子；Y代表五元雜芳環(huán)上不同位置上取代的甲基、曱氧基或面原子，R"戈表H或甲基；各R2各自獨立地代表H、CH2CF3、CH2-0C0R3或CH2OCOOR3;113代表C廠C6烷基或取代烷基，所述的取代基選自曱基，乙基，丙基，丁基，異丙基，異丁基或特丁基等。因此，本發(fā)明的一個方面涉及式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物，及其非毒性藥學上可接受的鹽，水合物或溶劑合物Y其中，噪呤環(huán)6位的巰基連接于五元雜芳環(huán)上的不同位置，X代表S或0原子；Y代表五元雜芳環(huán)上不同位置上取代的甲基、甲氧基或卣原子，R"戈表H或曱基；各R2各自獨立地代表H、CH2CF3、CH廣0C0R3或CH2OCOOR3;R3代表C廣C6烷基或取代烷基，所述的取代基選自甲基，乙基，丙基，丁基，異丙基，異丁基或特丁基等。本發(fā)明的另一個方面涉及上述式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽，水合物或溶劑合物的制備方法。本發(fā)明的另一個方面涉及包含上述式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽，水合物或溶劑合物以及一或多種藥物載體或賦形劑的藥物組合物。本發(fā)明的再一個方面涉及上述式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽，水合物或溶劑合物用于制備治療乙肝病毒感染的藥物的用途。根據本發(fā)明，優(yōu)選的化合物選自2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(3-甲基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-甲基噻吩-2-基-)疏基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-曱氧基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(4-曱氧基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-甲氧基呋喃-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-氯噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-呤Ua-9);2-氨基-6-(4-氯噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦酰基甲氧基]乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-(2-膦?；籽趸一?-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-(2-膦酰基曱氧基乙基)-嘌呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-(2-膦酰基甲氧基乙基)-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基曱氧基)膦?；籽趸一鵠-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基曱氧基)膦?；鶗跹趸一鵠-噤呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基曱氧基)膦酰基甲氧基乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-雙(異丙氧基羰基氧基甲氧基)膦?；籽趸?乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-雙(異丙氧基羰基氧基曱氧基)膦?；鶗跹趸?乙基]-噤呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基-曱基)膦?；籽趸?乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2,2，2-三氟乙基)膦?；籽趸鵠丙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基)膦酰基甲氧基]丙基]-嘌呤；和2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基)膦?；籽趸鵠丙基]-嘌呤。本發(fā)明的式I化合物可通過如下合成路線來制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>具體來說，首先使三氟乙醇于三氯化磷在80－90。C攪拌反應4小時，分餾，制得三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯；使2-氯乙醇或2-氯丙醇與多聚曱醛在冰浴冷卻下與干燥氯化氫作用下，生成2-氯乙基氯曱醚或2-氯丙基氯曱醚；然后使2-氯乙基氯甲醚或2-氯丙基氯曱醚與上述制得的三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯于160。C攪拌反應5小時反應，得到二(2，2，2-三氟乙基)亞磷?；一然蚨?2，2，2-三氟乙基)亞磷酰基丙基氯，其再與2-氨基-6-氯-嘌呤在80X:-1001C攪拌反應，得到關鍵中間體ffl;接下來使中間體ffl與取代或未取代的2/3-巰基噻吩或2/3-巰基呋喃在80°C-1201C攪拌反應得到R2為三氟乙基的目標化合物Ia;將Ia與三甲基溴硅烷在室溫攪拌反應，使三氟乙酯水解后，得到目標化合物的游離酸Ib，Ib再與烷酰氧基甲基氯或烷氧羰基氧基甲基氯在室溫反應，即可得到R2為CH2-0C0R3或CH20COOR3的目標化合物Ic，其中R3如前述式I中定義。因此，本發(fā)明式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽的制備可描述為(a)使三氟乙醇與三氯化磷反應，制得三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯CF3CH2OH+PCI3-P(OCH2CF3)3(b)使2-氯乙醇(R產H)或2-氯丙醇(R產CH3)與多聚甲醛在干燥氯化氫作用下，生成2-氯乙基氯甲醚或2-氯丙基氯曱醚CICH2(j:H-OH+(CH20)3-CICH2(j)H-OCH2CI、(c)使步驟(b)得到的2-氯乙基氯曱醚或2-氯丙基氯甲醚與步驟(a)制得的三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯反應，得到二(2，2，2-三氟乙基)亞磷?；一然蚨?2，2，2-三氟乙基)亞磷?；萈(OCH2CF3)3+CICH^H-OCH2CI-^CICH2H-OCH2P(OCH2CF3)2(d)使步驟(c)的產物與2-氨基-6-氯-嘌呤反應，得到關鍵中間體III:NLlV、NT》+CICH2(jH-OCH2P(OCH2CF3)2--^N^^N^N-CH2CF3H2N人N^"^H2NN^^Ov"1CH2CF3III(e)使步驟(d)得到的中間體IE與取代或未取代的2/3-巰基噻吩或2/3-巰基呋喃反應得到式I化合物的特例式Ia化合物叉^V。VP、=?？?~~^義丄29-TQXHN,、N^^丫23,&0-CH2CF3其中R2為三氟乙基；(f)使式Ia化合物的三氟乙酯水解后，得到式I化合物的另一個特例式Ib游離酸l3lb(CH3)^BroHI-Ho-ploo-Rs.義H:(g)使式Ib化合物再與烷酰氧基曱基氯或烷氧羰基氧基甲基氯反應，即可得到式I化合物的另一個特例式Ic化合物其中，112為CH2-OCOR3或CH20COOR3，R3如前述式I中定義。本發(fā)明中的術語"可藥用鹽"可以是與無機酸形成的藥用鹽，例如硫酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽；也可以是與有機酸形成藥用鹽，例如乙酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、葡萄糖酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、對甲苯磺酸鹽、曱磺酸鹽、苯曱酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽等。本發(fā)明式I中具有酸性基團的化合物可以與堿金屬或堿土金屬如鈉離子、鉀離子、銨離子、釣離子、鋅離子、鎂離子等形成藥用鹽，優(yōu)選但不限于鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或鈣鹽。本發(fā)明化合物或其可藥用鹽可以形成溶劑化物，例如水合物、醇合物等。上述化合物還可以是前藥或可在體內代謝代謝后釋放出所述活性成分的形式。選擇和制備適當的前藥衍生物是本領域技術人員公知技術。如上所述，本發(fā)明化合物可用于制備治療乙肝病毒感染的藥物。本發(fā)明化合物或其可藥用鹽可以單獨或以藥物組合物的形式給藥。本發(fā)明藥物組合物可根據給藥途徑配成各種適宜的劑型。使用一種或多種生理學上可接受的載體，包含賦形劑和助劑，它們有利于將活性化合物加工成可以在藥學上使用的制劑。適當的制劑形式取決于所選擇的給藥途徑，可以按照本領域熟知的常識進行制造。給藥途徑可以是口服、非腸道或局部給藥，優(yōu)選口服和注射形式給藥?？梢钥诜乃幬镏苿┌z嚢劑和片劑等。病人吞咽有困難時，也可以釆用舌下片或者其他非吞咽的方式給藥。本發(fā)明化合物也可以配制用于腸胃外給藥或者透皮給藥或者經粘膜給藥。本領域技術人員可以理解，本發(fā)明化合物可以采用合適的藥物釋放系統(tǒng)(DDS)以得到更有利的效果。另外需要指出，本發(fā)明化合物使用劑量和使用方法取決于諸多因素，包括患者的年齡、體重、性別、自然健康狀況、營養(yǎng)狀況、化合物的活性強度、服用時間、代謝速率、病癥的嚴重程度以及診治醫(yī)師的主觀判斷。優(yōu)選的使用劑量介于0.01-100mg/kg體重/天。具體實施例方式下述實施例用于具體地解釋本發(fā)明，然而本發(fā)明的范圍并不限于下述實施例。反應中所用到的所有原料和試劑均可通過商購獲得。實施例12-氨基-6-(噻吩-2-基-)疏基-9-[2_[雙(2，2，2_三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤Ua-l)1.12-巰基噢吩的合成將2.86g鎂屑懸浮于48ml無水乙醚中，在氮氣下，于1小時內滴加16克2-溴噻吩。滴加完畢，再回流反應3小時。然后，將反應液冷卻到-45tl，加入3.16g粉末硫，于-45C攪拌反應1.5小時，再于室溫攪拌反應1.5小時，加入5ral水和36.8ml6M鹽酸。用乙醚提取3次，4Qml/次，合并有機層，用飽和鹽水洗，再用硫酸鎂千燥。減壓蒸干，分餾，得4.5g，沸點120X3/0.1鵬Hg。1.22-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)-膦?；籽趸鵠-乙基氯的合成在46克三氟乙醇中，加入21克三氯化磷，在80-90X:攪拌反應4小時。分級蒸餾，得三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯41克，130-131■C/74-78nimHg。將26克2-氯乙醇和IO克多聚甲醛懸浮于50ml二氯甲烷中，冰浴冷卻；攪拌下，于(TC通干燥氯化氫10小時，分去水層，將有機層用無水氯化鈣干燥，濾去固體后蒸餾，得到氯乙基氯甲醚24克，沸點78-82X:/30mmHg將18克氯乙基氯甲醚與40克三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯混合，于160t;攪拌反應5小時。減壓蒸去溶劑后，分餾得到二(2，2，2-三氟乙基)-膦酰基乙基氯，沸點125-128匸/3mmHg。1.32-氨基-6-氯-9-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)-膦?；鶗跹趸鵠乙基-嘌呤(III,)的合成將30克2-氨基-6-氯嘌呤和27mlDBU加于700ml二甲基曱酰胺中，于80X:攪拌1小時。再加入二(2，2，2-三氟乙基)膦?；一?3克，于IOO'C攪拌5小時，冷卻后減壓蒸干。以硅膠柱層析分離，用氯仿/甲醇(1:0.05)洗脫，得到Hh25.6克，熔點102-103X:。^-NMR:5(ppm，CDC13):7.82(s，1H);5.18(b，2H);4.40(m，4H);4.30(t，2H);3.95(m，4H)。1.42-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦酰基甲氧基]乙基]-嘌呤()的合成在100ml二甲基甲酰胺中，加入7.8克m!、2,2ml三乙胺和4克2-巰基噻吩，于ioox:攪拌2小時，冷卻，減壓蒸干。殘留物用硅膠柱層析分離，用氯仿/曱醇(1:0.05)洗脫。收集所需組分，減壓蒸干，得到化合物Ia-13.41克，產率37.4%。^一NMR:5(ppm，CDC13):7.73(s，1H);7.58-7.60(dd，1H);7.35(dd，1H);7.12-7.14(dd，1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)。實施例22-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-噤呤(Ia-2)用3-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照l.1的方法，制備3-巰基瘞吩。參照1.4的方法，用3-巰基痿吩代替2-巰基瘞吩與IIIi反應，制備I廣2，產率34.6%。力-NMR:S(ppm，CDC13):7.78(s，1H);7.55-7.59(d，1H);7.35(d，1H);7.03(s，1H);4.92(b，2H);4.33—4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)。實施例32-氨基-6-(3-曱基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤(Ia-3)用3-甲基-2-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照1.1的方法，制備3-甲基-2-巰基瘞吩。參照1.4的方法，用3-甲基-2-巰基噻吩代替S-巰基噻吩與IIh反應，制備Ir3,產率28.2%。力-服R:S(ppm，CDC13):7.78(s，1H);7.50-7.54(d，1H);7.25-7.30(d，1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H);2.37(s，3H)。實施例42-氨基-6-(5-曱基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤Ua-4)用5-甲基-2-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照1.1的方法，制備5-曱基-2-巰基噻吩。參照1.4的方法，用5-曱基-2-巰基噻吩代替2-巰基噻吩與IIh反應，制備L-4,產率20.6%。^-NMR:5(ppm，CDCh):7.78(s，1H);7.54(s，1H);7.23(s,1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H);2.31(s，3H)。實施例52-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2,2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤(Ia-5)用3-溴呋喃代替2-溴潘吩，參照1.1的方法，制備3-巰基呋喃。參照1.4的方法，用3-巰基呋喃代替2-巰基噻吩與IIh反應，制備Ia-5，產率30.5%。力-職5(pp邊，CDC13):7.78(s，1H);7.25(d，1H);7.13(d，1H);6.64(m，1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4,28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)。實施例62-氨基-6-(5-甲氧基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤(Ia-6)6.12-甲氧基-5-溴噻吩的合成將5克2-甲氧基噻吩溶于6.6毫升二氯甲烷中，室溫攪拌下，滴加6.5克溴。滴加完畢，再攪拌1小時。加入5毫升飽和的亞硫酸氫鈉溶液終止反應。分出水層，將有機層用IO亳升水洗，再用無水疏酸鈉干燥。過濾，蒸干得3.42克2-曱氧基-5-溴噻吩。6.22-氨基-6-(5-曱氧基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤(Ia-6)的合成用2-曱氧基-5-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照l.l的方法，制備2-甲氧基-5-巰基噻吩。參照1.4的方法，用2-曱氧基-5-巰基噻吩代替2-巰基噻吩與Hh反應，制備Ia-6，產率18.1%。力-NMR:5(ppm，CDC13):7.73(s，1H);7.55(d，1H);7.32(d，1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m,4H);4,26-4=28(t，2H);3.92-3.94(m,4H)，3.86(s，3H)。實施例72-氨基-6-(4-甲氧基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2,2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤Ua-7)用3-甲氧基噻吩代替2-甲氧基噻吩，參照6.1的方法，制備3-甲氧基-5-溴噻吩。用3-曱氧基-5-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照1.1的方法，制備3-甲氧基-5-巰基噻吩。參照1.4的方法，用3-曱氧基-5-巰基噻吩代替2-巰基瘞吩與in!反應，制備1「7，產率12.8%。力-匿5(ppm，CDCh):7.73(s，1H);7.30(s，1H);7.16(s，1H);4.92(b,2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H);3.86(s，3H)。實施例82-氨基-6-(5-甲氧基呋喃-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤(Ia-8)用2-曱氧基呋喃代替2-甲氧基噻吩，參照6.1的方法，制備3-甲氧基-5-溴呋喃。用3-甲氧基-5-溴呋喃代替2-溴噻吩，參照1.1的方法，制備3-甲氧基-5-巰基呋喃。參照1.4的方法，用3-甲氧基-5-巰基呋喃代替2-巰基噻吩與m!反應，制備Ia-8，產率30.5%。力-NMR:5(ppm，CDCh):7.78(s，1H);7.25(d，1H);7.13(d，1H);6.64(m，1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)，3.84(s，3H)。實施例92-氨基-6-(5-氯噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2,2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-呤(K-9)用2-氯噻吩代替2-甲氧基噻吩，參照6.1的方法，制備2-氯-5—溴漆喻。用2-氯-5-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照l.l的方法，制備2-氯—5-巰基參吩。參照1.4的方法，用2-氯-5-巰基噻吩代替2-巰基噻吩與in,反應，制備Ia-9，產率17.5%。^-NMR:S(ppm，CDC13):7.73(s，1H);7.52(d，1H);7.25(d，1H);4.92(b,2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)。實施例102-氨基-6-(4-氯噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤(Ia-10)用3-氯噻吩代替2-曱氧基噻吩，參照實施例6.1的方法，制備3-氯-5-溴噻吩。用3-氯-5-溴噻吩代替2-溴噻吩，參照實施例1.1的方法，制備3-氯-5-巰基漆汾。參照實施例1.4的方法，用3-氯-5-巰基噻吩代替2-巰基噻吩與IIh反應，制備Ia-lO,產率13.4%。H-NMR:S(ppm，CDC13):7.73(s，1H);7.32(s，1H);7.14(s，1H);4.92(b，2H);4.33-4.42(m，4H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)'實施例112-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-(2-膦酰基曱氧基乙基)-嘌呤(Ib-l)在氮氣下，將Ia-12g懸浮于20ml無水乙氰中，加入7g三甲基溴硅烷，室溫攪拌16小時，硅膠薄層檢測原料消失。減壓旋干溶劑，得殘留物，加入10ml水，產生白色沉淀，加入12ml丙酮，室溫攪拌14小時。過濾，將濾餅5ml丙酮洗2次，用5ml無水乙醚洗l次，得Ib-l1.2g，熔點210'C(分解)，產率85.7%。力-NMR:S(ppm，CDC13):7.82(s，1H);7.51-7.56(dd，1H);7.32(dd，1H);7.06-7.10(dd，1H);4.79(b，2H);4.23-4.25(t，2H);3.91-3.93(m，4H)。。實施例122-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-(2-膦?；鶗跹趸一?-噤呤(Ib-2)參照實施例11的方法，用Ia-2代替Ia-l與三甲基溴硅烷反應，制備1「2，熔點215'C(分解)，產率76.4%。'H-NMR:5(ppm，CDCh):7.75(s，1H);7.55-7.59(d，1H);7.35(d，1H);7.03(s，1H);4.92(b，2H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)。實施例132-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-(2-膦酰基甲氧基乙基)-噤呤(Ib-3)參照實施例11的方法，用Ia-5代替Ia-1與三甲基溴硅烷反應，制備Ib-3，熔點215X:(分解)，產率70.6%。'H-NMR:5(ppm，CDCh):7.78(s，1H);7.25(d，1H);7.13(d,1H);6.64(m，1H);4.92(b，2H);4.26-4.28(t，2H);3.92-3.94(m，4H)。實施例142-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基甲氧基)膦酰基曱氧基乙基]-嘌呤Uc-l)在氮氣下，向反應器中依次加入5ml干燥的乙腈，0.5gIb-1，lgN，-二環(huán)己基-4-嗎啉脒及1.3g新戊酰氯甲酯，于室溫攪拌24小時。將反應混合物減壓蒸干，以硅膠柱層析分離，用二氯曱烷/甲醇(95:5)洗脫，得L-l0.32g。，H-NMR:S(ppm，CDC13):7.76(s，1H);7.51—7.56(dd，1H);7.32(dd，1H);7.06-7.10(dd,1H);5.65(m，4H);5.02(b,2H);4.11(t，2H);3.80(t，2H);3.52(d，2H);2.52(s，3H);1.21(s，18H)。實施例152-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基曱氧基)膦酰基甲氧基乙基]-噤呤(L-2)參照實施例14的方法，用Ib-2代替If1與新戊酰氯曱酯反應，制備1。-2，產率24%。工H-NMR:5(ppm，CDC13):7.76(s，1H);7.55-7.59(d，1H);7.35(d，1H);7.03(s，1H);5.65(m，4H);5.02(b，2H);4.11(t，2H);3.80(t，2H);3.52(d，2H);2.52(s，3H);1.21(s，18H)。實施例162-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基曱氧基)膦?；籽趸一鵠-嘌呤(1。-3)參照實施例14的方法，用Ib-3代替I「1與新戊酰氯甲酯反應，制備I廣3，產率20.9%。^-NMR:S(ppm，CDC13):7.78(s，1H);7.25(d，1H);7.13(d，1H);6.64(m，1H);5.65(m，4H);5.02(b，2H);4.11(t，2H);3.80(t，2H);3.52(d，2H);2.52(s，3H);1.21(s，18H)。實施例172-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-雙(異丙氧基羰基氧基甲氧基)膦?；籽趸?乙基]-嘌呤(1。_4)在氮氣下，將O.5gIb-l加到10ml二曱基甲酰胺中，然后加入0.4g三乙胺，0.6g氯甲基異丙基碳酸酯，于50"C油浴中攪拌24小時。將反應混合物減壓蒸干，以硅膠柱層析分離，用二氯甲烷/異丙醇(95:5)洗脫，得L-40.23g。H-NMR:5(ppm，CDC13):7.76(s，1H);7.51-7.56(dd，1H);7.32(dd，1H);7.06-7.10(dd，1H);5.9(b，2H);5.55-5.7(m，4H);4.82-5.02(m，2H);4.36(dd,1H);4.14(dd，2H);3.9-3.99(m，2H);3.7(dd，1H);1.29-1.32On.12H);1.17(d，3H)。實施例182-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-雙(異丙氧基羰基氧基甲氧基)膦?；鶗跹趸?乙基]-嘌呤U。-5)參照實施例17的方法，用1「2代替1「1與氯曱基異丙基碳酸酯反應，制備1。-5，產率10.6%。力-NMR:5(ppm，CDC13):7.76(s，1H);7.55-7.59(d,1H);7.35(d，1H);7.03(s，1H);5.9(b，2H);5.55-5.7(m，4H);4.82-5.02(m，2H);4.36(dd，lH);4.14(dd,2H);3.9-3.99(m，2H);3.7(dd，1H);1.29-1.32(m.12H);1.17(d，3H)。實施例192-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基-甲基)膦酰基甲氧基-乙基]-嘌呤(Ie-6)參照實施例17的方法，用1「3代替1廣1與氯甲基異丙基碳酸酯反應，制備1。-6，產率18%。力-NMR:5(ppm，CDC13):7.76(s，1H);7.25(d，1H);7.13(d，1H);6.64(m，lH);5.9(b，2H);5.55-5.7(m，4H);4.82-5.02(m:2H);4.36(dd，lH);4.14(dd，2H);3.9-3.99(m，2H);3.7(dd，1H);1.29-1.32(m.12H);1.17(d，3H)。實施例202-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基)膦酰基甲氧基]丙基]-嘌呤(Ia-ll)的合成參照方法1.2，由1-氯-2-丙醇代替2-氯乙醇與三聚甲醛反應得到1-氯-2-氯甲氧基丙基，后者與三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯反應，得到二(2，2，2-三氟乙基)-膦?；?，沸點80-841C/25-30mmHg。參照方法1.3，二(2，2，2-三氟乙基)-膦?；扰c2-氨基_6-氯嘌呤縮合得到2-氨基-6-氯-9-[雙(2，2,2-三氟乙基)-膦?；籽趸鵠丙基-嘌呤1112，熔點119-120r。力-NMR:5(ppm，CDCh):7.85(s，1H);5.20(b，2H);4.35-4.40(m，4H);4.96-4.06(m，2H);3.78—3.82(m，1H);3.53-3.57(d，2H)，1.28-1.30(d，3H)。參照方法1.4，用IIl2代替IIL與2-巰基噻吩反應，得到Ia-ll，產率11.8%。丄H-NMR:5(ppm，CDC13):7.58-7.60(dd，1H);7.35(dd，1H);7.12-7.14(dd，1H);4.85(b，2H);4,42-4.48(m，4H);4.00-4.03(m，2H);3.90(s，3H);3.86(s，3H);3.76-3.80(m，1H);3.51-3.55(d,2H)，1.27-1.29(d，3H)。實施例212-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基)膦?；鶗跹趸鵠丙基]-嘌呤(Ia-12)的合成參照方法1.4，用lll2代替ffl,與3-巰基噻吩反應，得到18-12，產率12.4%。H-NMR:5(ppm，CDC13):7.78(s，1H);7.55-7.59(d，1H);7.35(d，1H);7.03(s，1H);4.85(b，2H);4.42—4.48(m，4H);4.00-4.03(m，2H);3.90(s，3H);3.86(s，3H);3.76-3.80(m，1H);3.51-3.55(d，2H)，1.27-1.29(d，3H)。實施例222-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基)膦?；鶗跹趸鵠丙基]-嘌呤(Ia-13)的合成參照方法i.4，用m2代替n^與3-巰基呋喃反應，得到Ia-13,產率14%。^一NMR:5(ppm，CDC13):7.78(s，1H);7.25(d，1H);7,13(d，1H);6.64(m，1H);4.85(b，2H);4.42-4.48(m，4H);4.00-4.03(m，2H);3.90(s，3H);3.86(s,3H);3.76-3.80(m，1H);3.51-3.55(d，2H),1.27-1.29(d，3H)。實施例23生物活性測定用HepG2.2.15細胞體外試驗法測定了目標化合物對HBVDM的抑制作用和細胞毒性。實驗方法通過定量PCR法測定目標化合物對HBVDNA的抑制作用HepG2.2.15細胞培養(yǎng)于含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，在5%C02培養(yǎng)箱中孵育。然后將細胞接種于96孔板中，細胞數3X104，繼續(xù)培養(yǎng)，當細胞密度達到80%左右，棄去舊培養(yǎng)液，加入含不同濃度藥物的新培養(yǎng)液，設置3個平行孔；每隔2天更換培養(yǎng)液。在給藥后第10天，取100m1上清，通過定量pcr的方法，測定hbvdna的含量，計算50%抑制濃度，即為ICs。值。通過MTT法測定目標化合物的細胞毒性HepG2細胞培養(yǎng)于含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，在5%0)2培養(yǎng)箱中孵育。然后將細胞接種于96孔板中，細胞數5X104，繼續(xù)培養(yǎng)3天，加入含不同濃度藥物的新培養(yǎng)液，設置3個平行孔；在給藥后第3天，加入MTT至7.5mg/ml，繼續(xù)培養(yǎng)2小時，棄去上清，加入含10%吐溫X-IOO異丙醇，120p1/孔，再加入O.4pl/孔，用酶聯儀測定540nin處的吸收，計算50%抑制濃度，即為CCs。值。結果見表l。表1.本發(fā)明化合物的ICs。值和CCs。值<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>權利要求1.式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽，水合物或溶劑合物其中，嘌呤環(huán)6位的巰基連接于五元雜芳環(huán)上的不同位置，X代表S或O原子；Y代表五元雜芳環(huán)上不同位置上取代的甲基、甲氧基或鹵原子，R1代表H或甲基；各R2各自獨立地代表H、CH2CF3、CH2-OCOR3或CH2OCOOR3；R3代表C2-C6烷基或取代烷基，所述的取代基選自甲基，乙基，丙基，丁基，異丙基，異丁基或特丁基等。2.權利要求l的化合物，其選自2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基氧基)膦酰基甲氧基]乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦酰基甲氧基]乙基]-噪呤；2-氨基-6-(3-甲基噻吩-2-基-)硫基-9-U-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-甲基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-噤呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)疏基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-甲氧基噻吩-2-基-)疏基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；鶗跹趸鵠乙基]-噪呤；2-氨基-6-(4-甲氧基噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-甲氧基呋喃-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(5-氯噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦酰基甲氧基]乙基]-呤；2-氨基-6-(4-氯噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基氧基)膦?；籽趸鵠乙基]-噪呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-(2-膦酰基曱氧基乙基)-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-(2-膦?；籽趸一?-嘌呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-(2-膦?；籽趸一?-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基甲氧基)膦?；籽趸一鵠-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2_雙(新戊酰氧基甲氧基)膦?；籽趸一鵠-嘌呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-雙(異丙氧基羰基氧基甲氧基)膦?；籽趸?乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-雙(異丙氧基羰基氧基甲氧基)膦?；鶗跹趸?乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-雙(新戊酰氧基-曱基)膦?；鶗跹趸?乙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-2-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2,2-三氟乙基)膦?；籽趸鵠丙基]-嘌呤；2-氨基-6-(噻吩-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2,2，2-三氟乙基)膦?；鶗跹趸鵠丙基]-噤呤；和2-氨基-6-(呋喃-3-基-)硫基-9-[2-[雙(2，2，2-三氟乙基)膦?；鶗跹趸鵠丙基]-嘌呤。3.式I代表的無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽，水合物或溶劑合物的制備方法，該方法包括(a)使三氟乙醇與三氯化磷反應，制得三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯CF3CH2OH+PCI3-P(OCH2CF3)3(b)使2-氯乙醇或2-氯丙醇與多聚曱醛在干燥氯化氫作用下，生成2-氯乙基氯曱醚或2-氯丙基氯甲醚<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(c)使步驟(b)得到的2-氯乙基氯甲醚或2-氯丙基氯甲醚與步驟(a)制得的三-(2，2，2-三氟乙基)亞磷酸酯反應，得到二(2，2，2-三氟乙基)亞磷?；一然蚨?2,2，2-三氟乙基)亞磷?；?lt;formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(d)使步驟(c)的產物與2-氨基-6-氯-嘌呤反應，得到關鍵中間體<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(e)使步驟(d)得到的中間體III與取代或未取代的2/3-巰基噻吩或2/3-巰基咬喃反應得到式I化合物的特例式Ia化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>,義,、，、i/Q—CH,CF，H，N'、N'M丫23O—CH2CF3la其中R2為三氟乙基;(f)使式Ia化合物的三氟乙酯水解后，得到式I化合物的另一個特例式Ib游離酸lalb(g)使式lb化合物再與烷酰氧基曱基氯或烷氧羰基氧基曱基氯反應，即可得到式I化合物的另一個特例式Ic化合物lb其中，R2為CH2-OCOR3或CH2OCOOR3，R3如前述式I中定義。(CH3)^BrCH2CF33CH2CF3CICH,OCOR,P=0orCICH2OCOOR3OH4.藥物組合物，其包含權利要求1所述的式I無環(huán)核苷膦酸酯衍生物，其非毒性藥學上可接受的鹽，水合物或溶劑合物以及一或多種可藥用載體或賦形劑。5.權利要求1所述的式I無環(huán)核苷膦酸酯衍生物，其非毒性藥學上可接受的鹽，水合物或溶劑合物用于制備治療乙肝病毒感染的藥物的用途。全文摘要本發(fā)明涉及式I無環(huán)核苷膦酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽，水合物或溶劑合物，其中，各取代基的定義如說明書所述。本發(fā)明還涉及所述式I化合物的制備方法，含有該化合物的藥物組合物，及其用于制備治療乙肝病毒感染的藥物的用途。文檔編號A61P31/12GK101293899SQ200710097600公開日2008年10月29日申請日期2007年4月28日優(yōu)先權日2007年4月28日發(fā)明者仲伯華,狄吳,廖明陽,?？∑?陳蘭福,馬華智申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所