專利名稱：：一種從中藥提取物中分離貝母堿類總生物堿的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥有效成分的提取分離方法，特別是涉及一種從中藥提取液中提取分離貝母堿類總生物堿的方法，屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：中藥生物堿是自然界中存在的一類重要物質(zhì)，目前已分離到700多種，它們是中藥中最大一類療效確切，用途廣泛的有效成分，尤其對癌癥、肝病及心腦血管、風(fēng)濕重大疾病等有獨特療效，如黃連中的小檗堿用于抗菌消炎，麻黃中的麻黃堿用于平喘，蘿芙木中的利血平用于降壓，石蒜中的加蘭他敏對小兒麻痹后遺癥有療效，罌粟果皮中所含的嗎啡堿是著名鎮(zhèn)痛劑；奎寧堿是有價值的解熱藥；辣椒堿具有許多生理活性和強而持久的消炎鎮(zhèn)痛作用；喜樹中的喜樹堿與長春花中的長春新堿用于抗腫瘤等。以西貝堿和貝母堿為代表的貝母堿類生物堿，多存在于百合科植物中，例如川貝母、浙貝母、伊貝母、平貝母、湖北貝母等，這類生物堿具有很強的化痰止咳作用，是一類臨床應(yīng)用價值很高的生物堿。目前，含中藥生物堿類藥材的提取，多根據(jù)生物堿的理化特性，采用適宜的溶劑如水、酸水、酸醇及堿醇等，利用浸漬、滲漉、煎煮、回流、超聲等技術(shù)將生物堿類成分提取出來，提取工藝己較完善，生物堿提取率能達到90%以上。但由于生物堿在中藥中的相對含量較低(多數(shù)含量為0.01%1%)，提取時勢必引入大量的雜質(zhì)類成份，如大量的淀粉、樹膠、果膠、粘液質(zhì)、色素等，給進一步的去粗取精帶來了很大的困難，因而真正的技術(shù)瓶頸就在于如何進一步純化富集提取出來的生物堿。目前，生物堿純化工藝中廣泛應(yīng)用的純化方法主要是堿化后有機溶劑萃取法及大孔吸附樹脂法(《中藥化學(xué)》，肖崇厚主編，1997年，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社；《中草藥中生物堿的提取與分離》，蔡艷華，四川化工，2005.(1)39)。有機溶劑萃取法是利用親脂性生物堿溶于親脂性有機溶劑，而其鹽溶于水的性質(zhì)，使生物堿酸堿轉(zhuǎn)化，利用有機溶劑(常用的如苯、三氯甲烷、乙醚等)萃取，去除大量的雜質(zhì)，有機溶劑萃取法應(yīng)用較為廣泛，但堿化后大量中性及非極性色素等雜質(zhì)易被帶入，因此分離效率和純度較低，且使用大量有機溶劑(一般萃取5次)，操作不便(萃取罐效率不高，且易乳化)安全性不佳(有機溶劑毒性大，且易燃易爆)，為實驗室工藝，不適合工業(yè)大生產(chǎn)。大孔吸附樹脂分離技術(shù)，選擇性吸附中藥提取液中有效成分，去除雜質(zhì)。與傳統(tǒng)的除雜方法和工藝相比，可縮小服藥劑量，提高了制劑的質(zhì)量，該法對水溶性較好的黃酮、皂苷等有良好的分離精制效果，如目前常用的銀杏類制劑及人參皂苷的制備等。但對于生物堿的精制來講，本法最大的不足在于首先是吸附困難，上樣藥液必須是稀溶液，堿度要適宜，堿度低則生物堿仍為離子化狀態(tài)，樹脂的吸附率低，堿度高，生物堿為游離型，大分子生物堿水溶性差而析出，仍然無法上柱，適用的生物堿范圍很小，品種太少；其次，大孔吸附樹脂的非極性靜電吸附原理對生物堿有效成份和脂溶性雜質(zhì)的分離選擇性太差，且在溶劑洗脫過程中由于沒有特異性的洗脫溶劑，生物堿和大量脂溶性雜質(zhì)往往一起被洗脫下來，最后精制得到的總生物堿純度不高。還有新興的離子交換樹脂分離技術(shù)，是通過離子交換反應(yīng)達到分離和純化的目的。目前在中藥領(lǐng)域所普遍采用的技術(shù)是，將含有生物堿的溶液過柱后，以氨液或NaOH溶液洗脫，收集洗脫液后再以有機溶劑萃取生物堿；或者將上過樣品的樹脂以堿液浸泡，然后再用有機溶劑回流提取生物堿。但該方法步驟繁瑣，有機溶劑萃取、將樹脂柱進行有機溶劑回流提取等步驟在工業(yè)上很難實現(xiàn)，且以堿液洗脫的效率很低，僅停留于實驗室制備小樣品的水平，也無法實現(xiàn)大生產(chǎn)。以上這些方法，普遍存在成本高、有機溶劑消耗大、選擇性差、總生物堿純度低和無法實現(xiàn)大生產(chǎn)等不足，因此，純化技術(shù)仍是中藥分離生物堿的"瓶頸"問題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種安全、低成本、高效率的提取分離貝母堿類總生物堿的方法。該發(fā)明目的是通過如下工藝實現(xiàn)的取含貝母堿類總生物堿的中藥提取液，調(diào)整pH值l至7，濾過，取濾液加于陽離子交換樹脂柱上，先以水洗脫除雜，再用0.5%15%酸液洗脫，收集洗脫液，加堿中和，經(jīng)脫鹽處理，即得貝母堿類總生物堿。在上述工藝過程中，將含有總生物堿的提取液調(diào)至合適的酸度后，生物堿電離成為陽離子，非堿性物質(zhì)不被電離，提取液過陽離子交換樹脂柱后，電離的生物堿有機離子與樹脂柱上的氫離子交換而被牢固地吸附于樹脂柱上。這里提取液的pH值不宜過高或過低，如果過高，提取液呈中性或堿性，生物堿不能電離，也就不能完成樹脂上的交換過程；如果過低，提取液中的氫離子濃度太高，阻礙了樹脂柱上的氫離子解離，同樣不能很好地完成樹脂交換過程，因而實驗中發(fā)現(xiàn)調(diào)整提取液的pH值為1至7是比較合適的。以水洗脫時，使用的是去離子水，以確保不引入新的離子干擾，洗脫時那些沒有被樹脂吸附的非堿性物質(zhì)就很容易被水洗脫下來，從而與被吸附在樹脂柱上生物堿有機離子分離了。此后再加較高濃度的酸液進行洗脫，由于此時酸液中的氫離子濃度很高，就會競爭性地與樹脂相結(jié)合，從而將吸附在樹脂柱上的生物堿有機離子交換下來，溶解在酸洗脫液中，流出樹脂柱，完成生物堿的富集過程。之后，在洗脫液中加入堿中和掉多余的酸，再經(jīng)常規(guī)脫鹽處理，即可得到純度較高的貝母堿類總生物堿了。該工藝過程與現(xiàn)有技術(shù)相比，工藝流程簡單，不使用有機溶劑、無樹脂單體成分殘留、生物堿轉(zhuǎn)移率高；其重要的貢獻還在于，打破了傳統(tǒng)理論認為的離子交換能力順序規(guī)律，艮P:Ca2+>K+"NH4+>Na+〉H+。正是在這一傳統(tǒng)理論的影響下，所有關(guān)于貝母堿類總生物堿的離子交換樹脂分離法屮都是堿液或氨液進行洗脫，或者先用堿液中和樹脂柱再用有機溶劑回流提取理論上已經(jīng)游離的生物堿，而實際應(yīng)用中的效果非常不理想且不適于大生產(chǎn)。在本發(fā)明的技術(shù)方案中，雖然氫離子的交換能力是最弱的，但通過提高酸洗脫液中氫離子的濃度，從而抵消了其交換能力弱的缺點，同時在酸性條件下，可以使交換下來的生物堿迅速溶解到酸液中，并被沖出柱子，由此保證了生物堿的洗脫效果。并且，以酸液進行洗脫，在洗脫的同時，也使陽離子交換樹脂柱得以再生，從而可以循環(huán)使用，減少了堿液洗脫后再生樹脂柱的過程，降低了成本。本發(fā)明的技術(shù)完全突破了現(xiàn)有技術(shù)中以堿液洗脫的傳統(tǒng)觀念和工藝過程，取得了意想不到的效果，極大的提高了貝母堿類總生物堿的得率，使陽離子交換樹脂在工業(yè)生產(chǎn)中用于精制分離貝母堿類總生物堿成為可能?；谏鲜龉に囘^程，發(fā)明人又進行了進一步的研究，細化各步驟的參數(shù)，篩選出最優(yōu)方案，具體內(nèi)容如下1、上柱前調(diào)整藥液的pH值范圍優(yōu)選為2至5，效果更加明顯。2、所用的陽離子交換樹脂可以是大孔型或凝膠型強酸型離子交換樹脂,在實際使用時可以根據(jù)情況處理成氫型、鈉型或銨型中的任一種。3、所用陽離子交換樹脂柱的柱徑與柱高之比并無一定之規(guī)，但考慮生產(chǎn)實際，柱徑柱高=1:51:IO時可以取得最好的效果。4、給樹脂柱上樣的藥液濃度為每ml相當(dāng)于生藥0.13g，具體情況可以根據(jù)藥液的前處理方式?jīng)Q定，如果是采用浸漬、滲漉等方式，得到的藥液就會比較?。欢绻腔亓魈崛?、煎煮等方式，尤其是經(jīng)過濃縮處理，藥液的濃度就會比較大，但只要是在這個范圍內(nèi)，都能實現(xiàn)上樣。同時，上樣速度也根據(jù)藥液的濃度進行適時調(diào)整，基本滿足在0.55倍柱體積/小時即可。5、上樣方式一般選擇為從柱上端上樣，藥液靠自流力而流過整個柱子；發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，如果逆流上樣，即將藥液從柱子底端上樣，通過一定的壓力，使藥液注滿整個柱子，這種上樣方式可以發(fā)揮柱子的最大交換效率，也避免了從上端上樣時由于生物堿交換不完全而發(fā)生的提前穿透問題。這一點也是發(fā)明人創(chuàng)造性的發(fā)現(xiàn)。6、洗脫所用的酸液優(yōu)選為鹽酸溶液或硫酸溶液，其濃度均優(yōu)選為3%6%。7、洗脫時洗脫液的流速不宜過快或過慢，如果過快，則氫離子與生物堿有機離子的交換不充分，酸液浪費較多；如果過慢，則解離下來的生物堿有機離子可能又重新吸附回樹脂柱上，影響洗脫效率。實驗發(fā)現(xiàn)，洗脫速度保持在26倍柱體積/小時為宜。進一步優(yōu)選，洗脫速度保持在46倍柱體積/小時最好。8、發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，如果想更高地提高洗脫效率，可以在水洗脫除雜后，不立即進行酸液洗脫，而是先在樹脂柱中充滿酸液并靜置2小時以上，一般不需超過12個小時，再進行洗脫。經(jīng)過靜置后，大量的生物堿有機離子已被氫離子交換下來，或者處于半吸附半解離的狀態(tài)，此時進行洗脫，生物堿富集效果明顯，洗脫效率明顯提高。9、為了進一步提高洗脫效率，還可以在洗脫用的酸液中加入少量NH4C1、NaCl或CaCl2，加入量不宜過少或過多，如果過少，則起不到作用；如果過多，則因鹽濃度過高易鹽析而影響生物堿有機離子的溶解度。實驗發(fā)現(xiàn)，洗脫液中以NH/、Na+或Ca2+濃度為0.1lmol/L時為佳，進一步優(yōu)選，NH4+、Na+或Ca"的濃度為0.10.3mol/L時最好。10、工藝中所說的脫鹽方法可以是透析法除鹽、膜濾過除鹽以及其他各種藥物生物領(lǐng)域常規(guī)的除鹽方法，目前這些方法都已經(jīng)比較成熟，并可以管道化生產(chǎn)。11、該方法中所說的中藥提取液可以通過浸漬、滲漉、超聲、微波或煎煮中的任一種方式提取制得，并且提取的溶媒可以是水、酸水、乙醇溶液、酸性乙醇溶液中的任一種，但都屬于目前中藥領(lǐng)域的常規(guī)提取方法。區(qū)別點在于，如果是用浸漬或滲漉方法制得，可以直接上樣；如果是用其他方法提取得到的，還要經(jīng)過醇沉、過濾或離心除雜等步驟，以保證上樣的順利。需要說明的是，上述優(yōu)選的技術(shù)參數(shù)，可以根據(jù)實際情況的需要，與基本工藝進行任意組合，均能取得良好的效果，解決技術(shù)問題，達到本發(fā)明的目的。下面通過對比實驗來說明本發(fā)明的優(yōu)點。一、實驗方案取浙貝母藥材5000g，加pH二3的酸水8倍量，浸泡一夜，滲漉，收集滲漉液至用硅鎢酸檢査無沉淀為止，合并滲漉液，離心，得上清液；將上清液均為五份，分別按下面五種方法進行生物堿的分離提純-(1)離子交換樹脂+酸溶液洗脫將上清液調(diào)節(jié)pH=3，上已處理好強陽離子交換樹脂001X7(氫型，徑高比為l:8)，上樣速度為3倍柱體積/小時，至流出液用硅鎢酸檢查有沉淀停止上樣，用水洗脫至洗脫液基本無色，再用3%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為4倍柱體積/小時的速度洗脫，洗脫液用硅鴿酸檢查有沉淀時開始接收，接收洗脫液至用硅鉤酸檢查無沉淀時至，合并洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，干燥，得浙貝母總生物堿。(2)離子交換樹脂+鹽的酸溶液洗脫將上清液調(diào)節(jié)pH=3，上已處理好強陽離子交換樹脂001X7(氫型，徑高比為l:8),上樣速度為3倍柱體積/小時，至流出液用硅鎢酸檢查有沉淀停止上樣，用水洗脫至洗脫液基本無顏色時停止，再用2%氯化鈣的0.5%的鹽酸溶液浸泡樹脂。再用2%氯化鈣的0.5%的鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為4倍柱體積/小時，洗脫液用硅鎢酸檢查有沉淀時開始接收，接收洗脫液至用硅鎢酸檢查無沉淀時至，合并洗脫液，用氫氧化鈣中和至pH-7左右，除鹽，濃縮干燥，得浙貝母總生物堿。(3)離子交換樹脂+回流提取將上清液調(diào)節(jié)pH-3，上已處理好強陽離子交換樹脂OOlX7(氫型，徑高比為1:8)，上樣速度為3倍柱體積/小時，至流出液用硅鎢酸檢查有沉淀停止上樣，用水洗脫至洗脫液基本無顏色時停止洗脫，將樹脂由柱中倒出，置瓷盤中晾干，加10%氨水適量，攪拌均勻，以手摸有潮濕感，但不沾手為宜。將此樹脂置索氏提取器中，以氯仿回流提取2小時，將氯仿液加無水Na2S04脫水后，回收氯仿至干糖漿狀，干燥得浙貝母總生物堿。(4)大孔吸附樹脂法將上清液調(diào)節(jié)PH=10，上已處理好的DF01型大孔吸附樹脂，上樣速度為4倍柱體積/小時，至流出液用硅鎢酸檢査有沉淀停止上樣，用水洗脫至洗脫液基本無顏色時停止洗脫。以乙醇一水(70:30)為洗脫劑，以2.5倍柱體積/小時的速度進行洗脫，洗脫液用硅鎢酸檢査有沉淀時開始接收，接收洗脫液至用硅鎢酸檢査無沉淀時至，合并洗脫液，回收乙醇，干燥，得浙貝母總生物堿。(5)有機溶劑萃取法將上清液調(diào)節(jié)PH40，先用IO倍量氯仿分三次萃取，再用10倍量乙酸乙酯萃取三次，合并所有萃取液，蒸干，得浙貝母總生物堿。二、結(jié)果計算分別稱量五種工藝所得總生物堿的重量，并與藥材量相除，得總生物堿的收率；分別采用酸堿滴定的定量方法，對五種方法所得總生物堿進行含量測定，計算總生物堿的純度。三、結(jié)果對比，見下表五種工藝的效果評價表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由以上對比結(jié)果可見，本發(fā)明的技術(shù)方案可以解決現(xiàn)有技術(shù)中的不足，并顯著地提高產(chǎn)品的質(zhì)量、降低成本、提高安全性和生產(chǎn)可行性，本發(fā)明達到了發(fā)明目的。本發(fā)明的技術(shù)方案適合于貝母堿類總生物堿有效部位的精制純化。川貝母收載于中國藥典藥典2005版一部141頁，系百合科(Liliaceae)川貝母FritillariacirrhosaD.Don、B音紫貝母FritillariaunibracteataHsiaoetK.C.Hsia、甘肅貝母FritillariaprzewalskiiMaxim.或梭砂貝母FritillariadelavayiFtanch.的干燥鱗莖。前三者按性狀不同分別習(xí)稱"松貝"和"青貝"，后者習(xí)稱"爐貝"，具有清熱潤肺、化痰止咳等功效。浙貝母，系百合科貝母屬植物浙貝母FritillatiathunbergiiMiq.的干燥鱗莖，具有清熱散結(jié)、化痰止咳等功效。平貝母，收載于中國藥典藥典2005版一部65頁，系百合科植物平貝母FritillariaussuriensisMaxim.的干燥鱗莖，具清熱潤肺、化痰止咳等功效。伊貝母，系為百合科植物新疆貝母FritillariawalujewiiRegel或伊犁貝母FritillariapallidifloraSchrenk的干燥鱗莖，具有清熱潤肺、化痰止咳等功效。湖北貝母，收載于中國藥典藥典2005版一部242頁，百合科植物湖北貝母Fritillariah叩ehensisHsiaoetK.C.Hsia的干燥鱗莖，具有清熱化痰、止咳、散結(jié)之功效。上述五種藥材均來源于百合科，所含化學(xué)成分也基本上相同，且多為甾體類生物堿。研究表明，它們各自的總生物堿是其主要有效部位，包括川貝母中的貝母丙素(Fritimine)、山民貝減(Minpeimine)、眠貝分減(Minpeiminine)、青貝減(Chinpeimine)、蘆貝堿(Fritiminine)等；浙貝母中的貝母堿(貝母素甲,peimine,verticine)、去氫貝母堿(貝母素乙，peimi-nine，verticinone)、浙貝寧(zhebeinine)、浙貝丙素(zheberine)、浙貝酮(zhebeinone)等；平貝母中的西貝素(sipeimine)等；伊貝母中的西貝素(sipeimine)等；湖北貝母中的湖北甲素(peimine)、湖北乙素(peiminine)、湖北貝母甲素(hupehenine)、湖貝乙素(h叩ehenirine)等生物堿成分。臨床貝母堿類總生物堿制劑已用于咳喘等的治療，顯示了良好的療效。經(jīng)大量試驗證實，陽離子交換樹脂酸水洗脫貝母堿類總生物堿的工藝，具有成本低、有機溶劑消耗少、選擇性高、總生物堿純度高以及有利于實現(xiàn)工業(yè)大生產(chǎn)等優(yōu)點，為中藥貝母堿類總生物堿制劑的生產(chǎn)研發(fā)創(chuàng)造了一個嶄新的平臺。具體實施方式實施例1:取川貝母飲片1000g，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時，合并煎煮液，離心，調(diào)節(jié)p^3，離心，上清液以4倍柱體積/小時通過陽離子交換樹脂(001X7，氫型，徑高比l:8)，水洗至流出液無顏色，加3%的硫酸洗脫，洗脫速度為2倍柱體積/小時，收集洗脫液，至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得〗11貝母總生物堿。實施例2-取川貝母飲片1000g,加pH4的酸水滲漉，合并滲漉液加水稀釋至10000ml，離心，調(diào)節(jié)pH-l，離心，上清液以5倍柱體積/小時通過陽離子交換樹脂(001X12，鈉型，徑高比l:5)，水洗至流出液無顏色，再用0.5%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為4倍柱體積/小時，洗脫2倍柱體積后浸泡5小時，再洗脫至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鴿酸無沉淀)，收集該部分洗脫液，用氫氧化鈣中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得川貝母總生物堿。實施例3:取川貝母飲片5kg，加70%乙醇超聲提取兩次，每次加5倍量，超聲0.5小時，合并提取液，離心，回收乙醇，加水至5000ml，調(diào)節(jié)p^2,離心，上清液以2倍柱體積/小時通過上陽離子交換樹脂(001X10，鈉型，徑高比l:7)，水洗至流出液無顏色，再用6%的鹽酸溶液(含lmol/L的CaCl2)洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時，收集洗脫液，至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得川貝母總生物堿。實施例4:取浙貝母飲片10kg，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.1(6(TC)，加乙醇至濃度為70%,靜置，上清液回收乙醇，加水至3000ml，調(diào)節(jié)pH-4，離心，上清液以3倍柱體積/小時通過上陽離子交換樹脂(011X6，氨型，徑高比l:9)，水洗至流出液無顏色，再用15%硫酸溶液洗脫，洗脫速度為6倍柱體積/小時，收集洗脫液，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得浙貝母總生物堿。實施例5:取平貝母飲片10kg，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.1(60°C)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇，加水至5000ml，調(diào)節(jié)p^5，離心，上清液以3倍柱體積/小時通過上陽離子交換樹脂(D001X4，氫型，徑高比l:10)，水洗至流出液無顏色，再用3%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為3倍柱體積/小時，收集洗脫液，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得平貝母總生物堿。實施例6:取伊貝母飲片10kg，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.1(6(TC)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇，加水至4000ml，調(diào)節(jié)pH-4，離心，上清液以0.5倍柱體積/小時通過上陽離子交換樹脂(001X18，氫型，徑高比l:6)，水洗至流出液無顏色，再用0.5%硫酸溶液(含O.lmol/L的氯化鈉)洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時，收集洗脫液，至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得伊貝母總生物堿。實施例7:取湖北貝母飲片10kg，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.1(6(TC)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇，加水至10000ml，調(diào)節(jié)pb3，離心，上清液以3倍柱體積/小時通過上陽離子交換樹脂(001X5，氫型，徑高比l:8)，水洗至流出液無顏色，再用15%鹽酸溶液(含0.3mol/L的氯化鈣)洗脫，洗脫速度為6倍柱體積/小時，收集洗脫液，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得湖北貝母總生物堿。實施例8:取川貝母飲片1000g，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.1(60°C)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇，加水至1000ml，調(diào)節(jié)p^3，離心，上清液以3倍柱體積/小時通過上陽離子交換樹脂(001X5，氫型，徑高比1:8)，水洗至流出液無顏色，再用6%硫酸溶液洗脫，洗脫速度為4倍柱體積/小時，收集洗脫液，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得川貝母總生物堿。實施例9:取浙貝母飲片2000g，加pH=3的鹽酸溶液，微波提取2次，每次加5倍體積微波提取0.5小時，濾過，濾液加水稀釋至1600ml，調(diào)節(jié)pH-6，離心，上清液以2倍柱體積/小時通過上陽離子交換樹脂(001X15，氫型，徑高比1:6)，水洗至流出液無顏色，再用5%鹽酸溶液(含0.2raol/L的氯化氨)洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時，收集洗脫液，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得浙貝母總生物堿。實施例10:取湖北貝母飲片5kg，加70%乙醇超聲提取兩次，每次加5倍量，超聲0.5小時，合并提取液，離心，回收乙醇，加水至5000ml，調(diào)節(jié)p^7，離心，上清液以2倍柱體積/小時通過上大孔型陽離子交換樹脂，水洗至流出液無顏色，再用4%的硫酸溶液(0.6mol/L的氯化氨)洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時，收集洗脫液，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得湖北貝母總生物堿。實施例11:取伊貝母飲片5kg，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.05(60°C)，加乙醇至濃度為80%,靜置，上清液回收乙醇，加水至2000ral，調(diào)節(jié)pH-4，離心，上清液以4倍柱體積/小時通過上陽離子交換樹脂(D001X7，鈉型，徑高比1:7)，水洗至流出液無顏色，再用3%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為3倍柱體積/小時，收集洗脫液，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得伊貝母總生物堿。權(quán)利要求1、一種從中藥提取液中分離貝母堿類總生物堿的方法，其特征在于該方法為取含有貝母堿類總生物堿的中藥提取液，調(diào)整pH值1至7，加于陽離子交換樹脂柱上，先以水洗脫除雜，再用0.5％～15％酸液洗脫，收集洗脫液，加堿中和，經(jīng)脫鹽處理，即得貝母堿類總生物堿。2、如權(quán)利要求1所述的分離貝母堿類總生物堿的方法，其特征在于上柱前調(diào)整藥液的pH值范圍為2至5。3、如權(quán)利要求1所述的分離貝母堿類總生物堿的方法，其特征在于所用陽離子交換樹脂可以是大孔型或凝膠型強酸型離子交換樹脂。4、如權(quán)利要求3所述的分離貝母堿類總生物堿的方法，其特征在于所用陽離子交換樹脂柱的柱徑柱高二l:51:10。5、如權(quán)利要求1所述的分離貝母堿類總生物堿的方法，其特征在于該方法中上樣藥液的濃度為每ml相當(dāng)于生藥0.13g，上樣速度為0.55倍柱體積/小時。6、如權(quán)利要求5所述的分離貝母堿類總生物堿的方法，其特征在于上樣方式優(yōu)選為逆流上樣。7、如權(quán)利要求l所述的分離貝母堿類總生物堿的方法，其特征在于該方法中洗脫用的酸液是3%6%的鹽酸溶液或3%6%的硫酸溶液。8、如權(quán)利要求7所述的分離貝母堿類總生物堿的方法，其特征在于洗脫速度為26倍柱體積/小時。9、如權(quán)利要求8所述的分離貝母堿類總生物堿的方法，其特征在于洗脫速度為46倍柱體積/小時。10、如權(quán)利要求1所述的分離貝母堿類總生物堿的方法，其特征在于在水洗脫除雜后，可以先在樹脂柱中充滿洗脫用酸液并靜置212個小時，再進行洗脫。11、如權(quán)利要求7所述的分離貝母堿類總生物堿的方法，其特征在于洗脫用的酸液中還可以加入0.1lraol/L的NH4C1、NaCl或CaCl2。12、如權(quán)利要求ll所述的分離貝母堿類總生物堿的方法，其特征在于酸液中鹽的濃度優(yōu)選為0.10.3mol/L。13、權(quán)利要求1-12中任何一項所述的方法制備的貝母堿類總生物堿。全文摘要本發(fā)明公開了一種分離中藥總生物堿的方法，尤其是一種從中藥提取液中分離貝母堿類總生物堿的方法，屬中藥領(lǐng)域。該方法包括如下技術(shù)方案取中藥提取液，調(diào)整pH值1至7，濾過，取濾液加于陽離子交換樹脂柱上，先以水洗脫除雜，再用0.5％～15％酸液洗脫，收集洗脫液，加堿中和，經(jīng)脫鹽處理，即得貝母堿類總生物堿。該方法克服了現(xiàn)有技術(shù)提取率低、有機溶劑用量大、工藝復(fù)雜、無法大生產(chǎn)等不足，可以高效率地從中藥提取液中分離高純度的貝母堿類總生物堿。文檔編號A61K36/88GK101491631SQ20071009844公開日2009年7月29日申請日期2007年4月18日優(yōu)先權(quán)日2007年4月18日發(fā)明者劉英輝,樸美善,王廣錄申請人:北京和潤創(chuàng)新醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司