專利名稱：：一種具有糖苷酶抑制作用的桑白皮提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥提取物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，特別涉及一種具有糖苷酶抑制作用的中藥提取物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。技術(shù)背景桑白皮為?？浦参锷３ニㄆさ母稍锔?，通常在秋末落葉至春發(fā)芽前采挖根部，刮去黃色栓皮，縱向剖開，剝?nèi)「?，曬干入藥。桑白皮中含有?-脫氧野尻霉素(DNJ)及衍生物等多種生物堿類物質(zhì)，是作用明確的a-葡萄糖苷酶抑制劑。在申請?zhí)枮?1113191.8，
專利名稱：為"具有a-葡萄糖苷酶的抑制活性的中藥提取物、其制備方法及用途"的專利文獻中公開了一種制備桑白皮總生物堿的方法，其工藝為藥材經(jīng)過提取后，通過濃縮、醇沉、絮凝等步驟，除去部分雜質(zhì)，上清液再通過離子交換樹脂純化，收集得到總生物堿；在申請?zhí)枮?3116817.5，
專利名稱：為"一種具有降糖作用的含桑白皮、苦蕎麥的中藥復(fù)方制劑及其制備方法"的專利文獻中公開了一種具有降糖作用的中藥復(fù)方制劑，其中所涉及的桑白皮提取物的制備工藝為藥材經(jīng)過乙醇提取后，直接噴霧干燥；在申請?zhí)枮?00410018677.4，
專利名稱：為"具有a-葡萄糖苷酶的抑制活性的藥物組合物及其用途"的專利文獻中公開了一種從桑葉、桑白皮制備的由總生物堿和總黃酮組成的藥物組合物。上述幾份專利所涉及的桑白皮提取物的制備工藝中均未涉及到使用弱酸型陽樹脂來純化桑白皮中DNJ的方法，其質(zhì)量控制指標均為總生物堿，沒有涉及以l-脫氧野尻霉素(DNJ)為質(zhì)量控制指標，且未見1-脫氧野尻霉素(DNJ)含量大于50%的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種具有a-葡萄糖苷酶抑制作用的桑白皮提取物；本發(fā)明的另一目的是提供一種具有a-葡萄糖苷酶抑制作用的桑白皮提取物的制備方法；本發(fā)明的另一目的是提供一種具有a-葡萄糖苷酶抑制作用的桑白皮提取物的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)本發(fā)明提取物中1-脫氧野尻霉素的含量為500mg/g900mg/g。本發(fā)明提取物的制備方法為原料藥材桑白皮經(jīng)過切制后，以水或10%30%的乙醇溶液作為溶劑提取24次，每次13小時，提取溫度為室溫9(TC，總?cè)軇┝繛樯０灼ぴ纤幉闹亓康?530倍；提取液在50。C80。C下減壓濃縮后離心，取上清液，通過活性碳柱除去色素或直接上強酸型陽離子交換樹脂柱，用去離子水洗脫至PH值為56，再用210倍柱體積的濃度為0.21.0M的氨水洗脫，將氨水洗脫液減壓濃縮揮盡氨水，PH值為810，濃縮液上強堿型陰離子交換樹脂柱，并水洗至中性，PH值為1114的上柱流出液和水洗液串聯(lián)上弱酸型陽離子交換樹脂柱，收集從弱酸型陽離子交換樹脂柱流下來的PH值為89的流出液，水洗并收集至2-3個柱體積水洗液，合并上柱流出液和水洗液，常壓、減壓干燥、冷凍干燥或噴霧干燥得桑白皮提取物。其中，上述本發(fā)明提取物的制備方法中的強酸型陽離子交換樹脂可選用001*1、001*2、001*3、001*4、001*7等凝膠型陽離子交換樹脂或D072、D061、D001CC等大孔型陽離子交換樹脂；強堿型陰離子交換樹脂可選用201*2、201*4、202*7等凝膠型陰離子交換樹脂或D090、D096、D201、D261等大孔型陰離子交換樹脂；弱酸型陽離子交換樹脂可選用110、D151、D152、D113、WK40、WK20等凝膠型或大孔型陽離子交換樹脂。本發(fā)明提取物的優(yōu)選制備方法為原料藥材桑白皮經(jīng)過切制后，以水作為溶劑提取3次，提取時間分別為2小時、1小時、1小時，提取溫度為50°C,溶劑量分別為桑白皮原料藥材重量的7倍、5倍、5倍，提取液合并，在6(TC下減壓濃縮后離心，取上清液，上001*7凝膠型陽離子交換樹脂柱，(上柱液的PH值為45，流出液PH值下降為12，說明有效成分已交換到樹脂上)，用去離子水洗脫至PH值為56，再用46倍柱體積的0.5M氨水洗脫，將氨水洗脫液減壓濃縮揮盡氨水，ra值為810，濃縮液上201*4凝膠強堿型陰離子交換樹脂柱，并水洗至中性，PH值為1314的上柱流出液和水洗液串聯(lián)上D151大孔弱酸型陽離子交換樹脂柱，水洗并收集至2個柱體積水洗液,收集從弱酸型陽離子交換柱下來的PH值為89的流出液和水洗液，減壓干燥得到桑白皮提取物。本發(fā)明提取物的優(yōu)選制備方法為原料藥材桑白皮經(jīng)過切制后，以15%的乙醇溶液作為溶劑提取4次，提取時間分別為3小時、2小時、l小時、l小時，提取溫度為8(TC，溶劑量分別為桑白皮原料藥材重量的8倍、6倍、5倍、5倍；提取液合并，在55'C下減壓濃縮后離心，取上清液，上001*7凝膠型陽離子交換樹脂柱，上柱液的PH值為45，流出液PH值下降為12，用去離子水洗脫至PH值為56，再用24倍柱體積的l.OM氨水洗脫，將氨水洗脫液減壓濃縮揮盡氨水，PH值為9，濃縮液上D201大孔強堿型陰離子交換樹脂柱，并水洗至中性，PH值為1314的上柱流出液和水洗液串聯(lián)上110凝膠弱酸型陽離子交換樹脂柱，水洗并收集至2個柱體積水洗液，收集從弱酸型陽離子交換樹脂柱下來的PH值為89的流出液和水洗液，噴霧干燥得到桑白皮提取物。本發(fā)明提取物的優(yōu)選制備方法為原料藥材桑白皮經(jīng)過切制后，以水作為溶劑提取2次，提取時間分別為3小時、2小時，提取溫度為3(TC，溶劑量分別為桑白皮原料藥材重量的10倍、8倍；提取液合并，在7(TC下減壓濃縮后離心，取上清液，通過活性碳柱，除去色素，用15%的乙醇洗脫，15%的乙醇洗脫液上001*4型陽離子交換樹脂柱，上柱液的PH值為6，流出液PH值下降為12，用去離子水洗脫至PH值為56，再用68倍柱體積的0.2M的氨水洗脫，將氨水洗脫液減壓濃縮揮盡氨水，PH值為9，濃縮液上201*4凝膠強堿型陰離子交換樹脂柱，并水洗至中性，PH值為1314的上柱流出液和水洗液串聯(lián)上WK40大孔弱酸型陽離子交換樹脂柱,水洗并收集至2個柱體積水洗液，收集從弱酸型陽離子交換柱下來的PH值為89的流出液和水洗液，冷凍干燥得到桑白皮提取物。本發(fā)明提取物的質(zhì)量控制方法如下照高效液相色譜法測定-a色譜條件用十八烷基硅垸鏈合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%乙酸溶液=40-60:60-40為流動相，流速1.0ml/min，柱溫25'C;熒光檢測器激發(fā)波長254nm，發(fā)射波長322nm，進樣量10nl;b對照品溶液的制備精密稱取1-脫氧野尻霉素2-4mg，置10ml容量瓶中，加重蒸水至溶解并稀釋到刻度，搖勻；精密量取0.30-0.50ml，置5ml容量瓶中加重蒸水到刻度，搖勻；用重蒸水將母液稀釋成上述不同濃度的標準溶液系列，精密量取10ul標準溶液，按下面步驟進行衍生化和液相色譜分析，以標準溶液濃度對色譜峰面積進行線性回歸，繪制標準曲線。c樣品溶液的制備精密稱取提取物0.03-0.06g，置10ml容量瓶中，加入0.05~0.15mol/L的鹽酸溶液，超聲使其溶解并稀釋到刻度，搖勻，精密量取0.30-0.60ml，置100ml容量瓶中加去離子水到刻度，搖勻，備用；d衍生化過程:精密量取上述提取液或不同濃度的標準溶液10^1置1.5ml具塞離心管中，精密加入10lilPH值為8-9的硼酸鈉緩沖液，搖勻；精密加入20ul氯甲酸-9-藥甲酯(9—fluorenylmethylchloroformate即FM0C-Cl)，搖勻；放入20-30。C循環(huán)水浴中恒溫10-20分鐘，取出；加入10u10.1M甘氨酸，搖勻；加入0.95ml的0.1%乙酸，搖勻，用一次性針頭過濾器過濾，取10u1進樣分析；按外標法計算樣品濃度，提取物中1-脫氧野尻霉素的含量在500mg/g900mg/g之間。本發(fā)明提取物的質(zhì)量控制方法優(yōu)選如下照高效液相色譜法測定a色譜條件用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑(C18柱250咖*4.6mm，5um);以乙腈-0.1%乙酸溶液=55:45為流動相，流速1.Oml/min，柱溫25'C;熒光檢測器激發(fā)波長254nm，發(fā)射波長322nm，進樣量10ul;b對照品溶液的制備精密稱取1-脫氧野尻霉素2.29mg，置10ml容量瓶中，加重蒸水至溶解并稀釋到刻度，搖勻；精密量取0.40ml，置5ml容量瓶中加重蒸水到刻度，搖勻；用重蒸水將母液稀釋成不同濃度的標準溶液系列，精密量取10ul標準溶液，按下面步驟進行衍生化和液相色譜分析；c樣品溶液的制備精密稱取提取物0.05g，置10ml容量瓶中，加入0.05mol/L的鹽酸溶液，超聲使其溶解并稀釋到刻度，搖勻，精密量取0.50ml，置IOOml容量瓶中加去離子水到刻度，搖勻，備用；d衍生化過程精密量取上述提取液或不同同濃度的標準溶液10u1置1.5ml具塞離心管中，精密加入IOPlPH值為8.5的硼酸鈉緩沖液，搖勻；精密加入20u1氯甲酸-9-芴甲酯(9一fluorenylmethylchloroformate)，搖勻；放入3(TC循環(huán)水浴中恒溫10分鐘，取出；加入IOul0.1M甘氨酸，搖勻；加入O.95ml0.1%乙酸，搖勻，用一次性針頭過濾器過濾，取10ul進樣分析，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算樣品濃度，本發(fā)明提取物中1-脫氧野尻霉素的含量在500mg/g900mg/g之間。圖1:桑白皮提取物對ICR小鼠口服淀粉耐量實驗的影響。本發(fā)明提取物的制備方法選用三種離子交換樹脂對本發(fā)明提取物進行純化，主要活性成分l-脫氧野尻霉素DNJ的含量大幅度提高；本發(fā)明提取物具有抑制a—葡萄糖苷酶活性作用。下面實驗例及實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。實驗例1不同制備方法所得桑白皮提取物的出膏率和1-脫氧野尻霉素(DNJ)含量比較實驗本實驗例比較采用以下幾種方法制備桑白皮提取物中1-脫氧野尻霉素(DNJ)含量的高低，結(jié)果見表hA、水提取法100克桑白皮加藥材重量7倍的水在7(TC下提取兩次，提取時間分別為2小時、l小時，提取液濃縮干燥；B、醇提取法100克桑白皮加藥材重量7倍的30%的乙醇在70'C下加熱回流提取兩次，提取時間分別為2小時、l小時，提取液濃縮干燥；C、水提醇沉法100克桑白皮加藥材重量7倍的水在70'C下提取兩次，提取時間分別為2小時、1小時，提取液濃縮至300ml，加900ml的95%的乙醇醇沉，放置過夜，離心，上清夜?jié)饪s干燥；D、醇提水沉法100克桑白皮加藥材重量7倍的30%的乙醇回流提取兩次，提取時間分別為2小時、1小時，提取液濃縮至150ml，加1200ml的水沉淀，放置過夜，離心，上清夜?jié)饪s干燥；E、提取液過陽離子交換樹脂法100克桑白皮加藥材重量7倍的水在7(TC下提取兩次，提取時間分別為2小時、1小時，提取液濃縮，離心，取上清液200ml上強酸型陽離子交換樹脂柱，如001*7型，以300ml0.5M濃度氨水洗脫，洗脫液濃縮干燥；F、提取液過陽陰離子交換樹脂法100克桑白皮加藥材重量7倍的水在7(TC下提取兩次，提取時間分別為2小時、l小時，提取液濃縮，離心，取上清液200ml上強酸型陽離子交換樹脂柱，如001*7型，以300ml0.5M濃度氨水洗脫，氨水洗脫液濃縮揮盡氨水后上201*4凝膠強堿型陰離子交換樹'脂柱，收集上柱流出液和水洗液(水洗至中性)，干燥得到桑白皮提取物；G、水醇提取液過活性碳柱法100克桑白皮加藥材重量7倍的水在70。C下提取兩次，提取時間分別為2小時、l小時，提取液^k縮，離心，取上清液300ml過活性碳柱，用1000ml15%的乙醇洗脫，收集洗脫液濃縮干燥；H、本發(fā)明制備方法100克桑白皮加藥材重量7倍的水在7(TC下提取兩次，提取時間分別為2小時、l小時，提取液濃縮，離心，取上清液200ml上陽離子交換樹脂，如001*7型，以300ml0.5M濃度氨水洗脫，將氨水洗脫液減壓濃縮揮去氨水后，PH至8，濃縮液上201*4凝膠強堿型陰離子交換樹脂柱，上柱流出液和水洗液串聯(lián)上D151或D113大孔弱酸型陽離子交換柱，收集從弱酸型陽離子交換柱下來的PH為89的流出液和水洗液，通過減壓干燥得到本發(fā)明提取物；表1不同制備方法所得本發(fā)明提取物的出膏率和DNJ含量比較本發(fā)明提取物制備方法ABCDEFGH出膏量(g)提取物中DNJ含量(mg/g)15.1512.8311.3313.947.6719.257.1817.961.88143.940.79258.263.4666.230.38780.54從上述實驗結(jié)果分析，不同制備方法所得桑白皮提取物出膏率和DNJ含量均有較大的差別，本發(fā)明所采用的方法與其它制備方法相比較，出膏率大大減少，提取物中的l-脫氧野尻霉素DNJ含量高于其它制備方法。實驗例2用實施例1制備的本發(fā)明提取物對ICR小鼠口服淀粉耐量實驗1、實驗試劑的配制0.15g/ml可溶性淀粉的配制稱取可溶性淀粉22.5g，加飲用水120ml，充分混勻后置于10(TC的沸水浴中加熱，邊加熱邊攪拌，趁熱定容至150ml，待溫度下降至室溫時用水補足150ml;拜糖蘋的配制取拜糖蘋一片，溶于100ml的0.15g/ml可溶性淀粉中，充分混勻；用實施例1制備的本發(fā)明提取物配制試劑方法如下提取物大劑量組(給藥劑量15mg/kg)的配制方法取提取物27mg，溶于20ml的0.15g/ml可溶性淀粉中，充分混勻；提取物小劑量組(給藥劑量10mg/kg)配制方法取大劑量溶液5ml，加5ml的0.15g/ml可溶性淀粉中，充分混勻；2、實驗方法正常ICR小鼠，體重30士2g，禁食不禁水12小時，分為4組，每組IO只對照組、拜糖蘋組和本發(fā)明提取物的兩個劑量組，將陽性藥和受試藥分別以一定的比例與糊化后的淀粉溶液充分混合(淀粉溶液的給藥劑量為3g/kg)后灌胃給藥，并立即記時，分別在0分鐘、30分鐘、60分鐘、90分鐘尾靜脈取血測定血糖水平，實驗結(jié)果見表2和圖1:表2本發(fā)明提取物對ICR小鼠口服淀粉耐量實驗的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>**P<0,01(n=10)從上述實驗結(jié)果分析，本發(fā)明提取物對正常ICR小鼠的餐后血糖有較好的抑制作用，從0120min本發(fā)明的兩個劑量組與對照組相比均未出現(xiàn)明顯的血糖峰值，說明本發(fā)明提取物有較為明顯的糖苷酶抑制作用，大劑量組抑制血糖的效果明顯優(yōu)于小劑量組與拜糖蘋組。下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果。具體實施方式實施例1:本發(fā)明提取物的制備方法原料藥材10kg桑白皮經(jīng)過切制后，以水作為溶劑提取3次，提取時間分別為2小時、l小時、l小時，提取溫度為5(TC，加水量分別為桑白皮原料藥材重量的70L、50L、50L倍；提取液合并，在6(TC下減壓濃縮后離心，得上清液約40L，上001*7凝膠型陽離子交換樹脂柱，柱體積為5L，上柱液的PH值為45，流出液PH下降為12，用去離子水洗脫至PH值為56，再用25L濃度為0.5M的氨水洗脫，將氨水洗脫液減壓濃縮揮盡氨水，PH為89，濃縮液上201*4凝膠強堿型陰離子交換樹脂柱，柱體積為4L，水洗至中性，PH至1314的上柱流出液和水洗液串聯(lián)上D151大孔弱酸型陽離子交換樹脂柱，柱體積為5L，水洗至約2個柱體積，收集從弱酸型陽離子交換柱下來的PH為89的流出液和水洗液，噴霧干燥，得到桑白皮提取物35g，經(jīng)過HPLC檢測，提取物中1-脫氧野尻霉素含量為750mg/g。實施例2:本發(fā)明提取物的制備方法原料藥材桑白皮lkg經(jīng)過切制后，以15%的乙醇溶液作為溶劑提取4次，提取時間分別為3小時、2小時、l小時、l小時，提取溫度為8(TC，溶劑量分別為桑白皮原料藥材重量的8L、6L、5L、5L;提取液合并，在55°。下減壓濃縮后離心，得3L上清液，上001*7凝膠型陽離子交換樹脂柱，柱體積為O.4L，上柱液的PH值為45，流出液PH下降為12，用去離子水洗脫至PH為56，再用1.2L濃度為1.0M的氨水洗脫，將氨水洗脫液減壓濃縮揮盡氨水，ra值為9,濃縮液上D201大孔型強堿型陰離子交換樹脂柱，柱體積為0.3L，水洗至中性，PH至1314的上柱流出液和水洗液串聯(lián)上110凝膠型弱酸型陽離子交換樹脂柱，柱體積為0.4L，水洗至約3個柱體積，收集從弱酸型陽離子交換樹脂柱下來的PH為89的流出液和水洗液，減壓干燥，得到桑白皮提取物4g，經(jīng)過HPLC檢測，提取物中1-脫氧野尻霉素含量為720mg/g。實施例3:本發(fā)明提取物的制備方法原料藥材桑白皮lkg經(jīng)過切制后，以水作為溶劑提取2次，提取時間分別為3小時、2小時，提取溫度為30'C,溶劑量分別為桑白皮原料藥材重量的10倍、8倍；提取液合并，在70。C下減壓濃縮后離心，得上清液3L，通過活性碳柱，除去大部分色素，用8L的15。/。乙醇洗脫，15%的乙醇洗脫液上001*4型強酸陽離子交換樹脂柱，柱體積為O.5L，上柱液的PH值為6，流出液ra下降為12，用去離子水洗脫至ra為56，再用4.OL濃度為0.2M的氨水洗脫，將氨水洗脫液減壓濃縮揮盡氨水，PH為9，濃縮液上201*4凝膠型強堿型陰離子交換樹脂柱，水洗至中性，PH值為1314的上柱流出液和水洗液串聯(lián)上WK40大孔型弱酸型陽離子交換柱，水洗至約3個柱體積，收集從弱酸型陽離子交換柱下來的PH為89的流出液和水洗液，冷凍干燥得到桑白皮提取物2.8g，經(jīng)過HPLC檢測，提取物中1-脫氧野尻霉素含量為900mg/g。實施例4:實施例1制備的本發(fā)明提取物的質(zhì)量控制方法照高效液相色譜法測定a色譜條件用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑(C18柱250mm*4.6mm，5um);以乙腈-O.1%乙酸溶液=55:45為流動相，流速1.Oml/min，柱溫25'C;熒光檢測器激發(fā)波長254nm，發(fā)射波長322nm，進樣量10ul;b對照品溶液的制備精密稱取1-脫氧野尻霉素2.29mg，置10ml容量瓶中，加重蒸水至溶解并稀釋到刻度，搖勻；精密量取0.40ml，置5ml容量瓶中加重蒸水到刻度，搖勻；用重蒸水將母液稀釋成不同濃度的標準溶液系列，精密量取10ul標準溶液，按下面步驟進行衍生化和液相色譜分析；c樣品溶液的制備精密稱取提取物0.05g，置IOml容量瓶中，加入0.05mol/L的鹽酸溶液，超聲使其溶解并稀釋到刻度，搖勻，精密量取0.50ml，置IOOml容量瓶中加去離子水到刻度，搖勻，備用；d衍生化過程精密量取上述提取液或不同同濃度的標準溶液10u1置1.5ml具塞離心管中，精密加入IOulPH值為8.5的硼酸鈉緩沖液，搖勻；精密加入20w1氯甲酸-9-芴甲酯(9—fluorenylmethylchloroformate)，搖勻；放入30。C循環(huán)水浴中恒溫10分鐘，取出；加入IO"10.1M甘氨酸，搖勻；加入O.95ml0.1%乙酸，搖勻，用一次性針頭過濾器過濾，取lOul進樣分析，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算樣品濃度，按外標法以峰面積計算樣品濃度，按本方法進行檢測實施例1所得桑白皮提取物中卜脫氧野尻霉素的含量在750mg/g。權(quán)利要求1、一種具有糖苷酶抑制作用的桑白皮提取物的制備方法，其特征在于該提取物的制備方法如下原料藥材桑白皮經(jīng)過切制后，以水或10％～30％的乙醇溶液作為溶劑提取2～4次，每次1～3小時，提取溫度為室溫～90℃，總?cè)軇┝繛樯０灼ぴ纤幉闹亓康?5～30倍；提取液在50℃～80℃下減壓濃縮后離心，取上清液，通過活性碳柱除去色素或直接上強酸型陽離子交換樹脂柱，用去離子水洗脫至PH值為5～6，再用2～10倍柱體積的濃度為0.2～1.0M的氨水洗脫，將氨水洗脫液減壓濃縮揮盡氨水，PH值為8～10，濃縮液上強堿型陰離子交換樹脂柱，并水洗至中性，PH值為11～14的上柱流出液和水洗液串聯(lián)上弱酸型陽離子交換樹脂柱，收集從弱酸型陽離子交換樹脂柱流下來的PH值為8～9的流出液，水洗并收集至2-3個柱體積水洗液，合并上柱流出液和水洗液，常壓、減壓干燥、冷凍干燥或噴霧干燥得桑白皮提取物。2、如權(quán)利要求l所述的桑白皮提取物的制備方法，其特征在于其中的強酸型陽離子交換樹脂選用001*1、001*2、001*3、001*4或001*7凝膠型陽離子交換樹脂或D072、D061或D001CC大孔型陽離子交換樹脂；強堿型陰離子交換樹脂選用201*2、201*4或202*7凝膠型陰離子交換樹脂或D090、D096、D201或D261大孔型陰離子交換樹脂;弱酸型陽離子交換樹脂選用110、D151、D152、D113、WK40或WK20凝膠型或大孔型陽離子交換樹脂。3、如權(quán)利要求1所述的桑白皮提取物的制備方法，其特征在于該提取物的制備方法如下原料藥材桑白皮經(jīng)過切制后，以水作為溶劑提取3次，提取時間分別為2小時、l小時、l小時，提取溫度為50'C，溶劑量分別為桑白皮原料藥材重量的7倍、5倍、5倍，提取液合并，在6(TC下減壓濃縮后離心，取上清液，上001*7凝膠型陽離子交換樹脂柱，上柱液的PH值為45，流出液PH值下降為12，說明有效成分已交換到樹脂上，用去離子水洗脫至ra值為56，再用46倍柱體積的0.5M氨水洗脫，將氨水洗脫液減壓濃縮揮盡氨水，PH值為810，濃縮液上201*4凝膠強堿型陰離子交換樹脂柱，并水洗至中性，PH值為1314的上柱流出液和水洗液串聯(lián)上D151大孔弱酸型陽離子交換樹脂柱，水洗并收集至2個柱體積水洗液，收集從弱酸型陽離子交換柱下來的PH值為89的流出液和水洗液，減壓千燥得到桑白皮提取物。4、如權(quán)利要求1所述的桑白皮提取物的制備方法，其特征在于該提取物的制備方法如下原料藥材桑白皮經(jīng)過切制后，以15%的乙醇溶液作為溶劑提取4次，提取時間分別為3小時、2小時、l小時、l小時，提取溫度為80'C，溶劑量分別為桑白皮原料藥材重量的8倍、6倍、5倍、5倍；提取液合并，在55r下減壓濃縮后離心，取上清液，上001*7凝膠型陽離子交換樹脂柱，上柱液的PH值為45，流出液PH值下降為12，用去離子水洗脫至PH值為56，再用24倍柱體積的1.0M氨水洗脫，將氨水洗脫液減壓濃縮揮盡氨水，PH值為9，濃縮液上D201大孔強堿型陰離子交換樹脂柱，并水洗至中性，PH值為1314的上柱流出液和水洗液串聯(lián)上110凝膠弱酸型陽離子交換樹脂柱，水洗并收集至2個柱體積水洗液，收集從弱酸型陽離子交換樹脂柱下來的ra值為89的流出液和水洗液，噴霧干燥得到桑白皮提取物。5、如權(quán)利要求1所述的桑白皮提取物的制備方法，其特征在于該提取物的制備方法如下原料藥材桑白皮經(jīng)過切制后，以水作為溶劑提取2次，提取時間分別為3小時、2小時，提取溫度為30"C,溶劑量分別為桑白皮原料藥材重量的IO倍、8倍；提取液合并，在7(TC下減壓濃縮后離心，取上清液，通過活性碳柱，除去色素，用15%的乙醇洗脫，15%的乙醇洗脫液上001*4型陽離子交換樹脂柱，上柱液的PH值為6，流出液PH值下降為12，用去離子水洗脫至PH值為56，再用68倍柱體積的0.2M的氨水洗脫，將氨水洗脫液減壓濃縮揮盡氨水，PH值為9，濃縮液上201*4凝膠強堿型陰離子交換樹脂柱，并水洗至中性，PH值為1314的上柱流出液和水洗液串聯(lián)上WK40大孔弱酸型陽離子交換樹脂柱，水洗并收集至2個柱體積水洗液，收集從弱酸型陽離子交換柱下來的PH值為89的流出液和水洗液，冷凍干燥得到桑白皮提取物。6、由權(quán)利要求1-2所述的制備方法制成的桑白皮提取物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法如下照高效液相色譜法測定a色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%乙酸溶液=40-60:60-40為流動相，流速1.0ml/min，柱溫25。C;熒光檢測器激發(fā)波長254nm，發(fā)射波長322nm，進樣量10ul;b對照品溶液的制備精密稱取1-脫氧野尻霉素2-4mg，置10ml容量瓶中，加重蒸水至溶解并稀釋到刻度，搖勻；精密量取0.30-0.50ml，置5ml容量瓶中加重蒸水到刻度，搖勻；用重蒸水將母液稀釋成不同濃度的標準溶液系列，精密量取10ul標準溶液，按下面步驟進行衍生化和液相色譜分析，以標準溶液濃度對色譜峰面積進行線性回歸，繪制標準曲線；c樣品溶液的制備精密稱取提取物0.03-0.06g，置IOml容量瓶中，加入0.05-0.15mol/L的鹽酸溶液，超聲使其溶解并稀釋到刻度，搖勻，精密量取0.30-0.60ml，置100ml容量瓶中加去離子水到刻度，搖勻，備用；d衍生化過程:精密量取上述提取液或不同濃度的標準溶液lOli1置1.5ml具塞離心管中，精密加入10ulPH值為8-9的硼酸鈉緩沖液，搖勻；精密加入20iil氯甲酸-9-芴甲酯，搖勻；放入20-3(TC循環(huán)水浴中恒溫10-20分鐘，取出；加入10ul0.1M甘氨酸，搖勻；加入0.95ml0.1%乙酸，搖勻，用一次性針頭過濾器過濾，取10U1進樣分析；按外標法計算樣品濃度，提取物中1-脫氧野尻霉素的含量在500mg/g900mg/g之間。7、如權(quán)利要求6所述的桑白皮提取物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法如下照高效液相色譜法測定a色譜條件用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%乙酸溶液=55:45為流動相，流速1.Oml/min，柱溫25。C;熒光檢測器激發(fā)波長254nm，發(fā)射波長322nm，進樣量10iil;b對照品溶液的制備精密稱取1-脫氧野尻霉素2.29mg，置10ml容量瓶中，加重蒸水至溶解并稀釋到刻度，搖勻；精密量取0.40ml，置5ml容量瓶中加重蒸水到刻度，搖勻；用重蒸水將母液稀釋成不同濃度的標準溶液系列，精密量取10ul標準溶液，按下面步驟進行衍生化和液相色譜分析；c樣品溶液的制備精密稱取提取物0.05g，置10ml容量瓶中，加入0.05mol/L的鹽酸溶液，超聲使其溶解并稀釋到刻度，搖勻，精密量取0.50ml,置IOOml容量瓶中加去離子水到刻度，搖勻，備用；d衍生化過程精密量取上述提取液或不同同濃度的標準溶液10u1置1.5ml具塞離心管中，精密加入10u1PH值為8.5的硼酸鈉緩沖液，搖勻；精密加入20u1氯甲酸-9-芴甲酯，搖勻；放入30。C循環(huán)水浴中恒溫10分鐘，取出；加入10ul的0.1M甘氨酸，搖勻；加入O.95ml0.1%乙酸，搖勻，用一次性針頭過濾器過濾，取10nl進樣分析，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算樣品濃度，提取物中1-脫氧野尻霉素的含量在500mg/g900mg/g之間。8、一種1-脫氧野尻霉素的含量為500mg/g900mg/g的桑白皮提取物。全文摘要本發(fā)明公開了一種具有糖苷酶抑制作用的桑白皮提取物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，該提取物在制備時采用提取、濃縮、離心并通過三種不同種類的陰陽離子交換樹脂柱、干燥等方法，使有效藥物充分提取并高度富集；同時本發(fā)明還提供了對該提取物進行含量測定的質(zhì)量控制方法。文檔編號A61K125/00GK101297863SQ20071009898公開日2008年11月5日申請日期2007年4月30日優(yōu)先權(quán)日2007年4月30日發(fā)明者樊利青,段震文,郭樹仁申請人:北京北大維信生物科技有限公司