專利名稱：：一種具有益氣養(yǎng)血作用的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，特別是涉及一種具有益氣養(yǎng)血作用的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
：人會生病，所以就有了疾病與健康之分。健康者無病也，有病者就是不健康。健指軀體上上的健全、強盛，康指心態(tài)上的歡樂安康。病指軀體上的形態(tài)傷害和缺損。但現(xiàn)代社會卻出現(xiàn)了一種無軀體形態(tài)上病變的證據(jù)，而卻有軟弱無力，精疲力竭，食不思，飯不香，睡不寧，無精打采。說他病，無證據(jù)，說他健康，卻不符標準。這時一個新的概念出現(xiàn)了，這就是亞健康。世界衛(wèi)生組織認為健康是一種身體、精神和交往上的完美狀態(tài)，而不只是身體無病。根據(jù)這一定義，經(jīng)過嚴格的統(tǒng)計學統(tǒng)計，人群中真正健康(第一狀態(tài))和患病者(第二狀態(tài))不足2/3，有1/3以上的人群處在健康和患病之間的過度狀態(tài)，世界衛(wèi)生組織稱其為"第三狀態(tài)"，國內(nèi)常常稱之為"亞健康"狀態(tài)。"第三狀態(tài)"狀態(tài)處理得當，則身體可向健康轉(zhuǎn)化；反之，則患病。因此，對亞健康狀態(tài)的研究，是下個世紀生命科學研究的重要組成部分。廣州醫(yī)學院人文社會科學研究所董玉整教授說。據(jù)世界衛(wèi)生組織一項全球性調(diào)査結(jié)果表明，全世界真正健康的人僅占5%，經(jīng)醫(yī)生檢査、診斷有病的人也只占20%，75%的人處于亞健康狀態(tài)。"亞健康"是一個新的醫(yī)學概念。本世紀70年代末，醫(yī)學界依據(jù)疾病譜的改變，將過去單純的生物醫(yī)學模式，發(fā)展為生物-心理-社會醫(yī)學模式。1977年，世界衛(wèi)生組織(WHO)將健康概念確定為"不僅僅是沒有疾病和身體虛弱，而是身體、心理和社會適應(yīng)的完滿狀態(tài)"。80年代以來，我國醫(yī)學界對健康、與疾病也展開了一系列的研究，其結(jié)果表明，當今社會有一龐大的人群，身體有種種不適，而上醫(yī)院檢查又未能發(fā)現(xiàn)器質(zhì)性病變，醫(yī)生沒有更好的辦法來治療，這種狀態(tài)稱為"亞健康狀態(tài)"?！秲?nèi)經(jīng)》日:"圣人不治已病治未病，夫病已成而后藥之，亂已成而后治之，譬猶渴而穿井，斗而鑄兵，不亦晚乎？"由此可見我們的祖先早已認識到所謂"未雨綢纓、防患未然"的重要性。現(xiàn)在發(fā)明一種針對虛極欲脫、脈微欲絕、肢冷、自汗、陰虛內(nèi)熱、肺虛咳喘、氣短無力、神志不安、失眠、頭昏、精神疲乏、食少泄瀉、中氣下陷、內(nèi)臟下垂、口渴多飲、肢體浮腫、面色蒼黃、食欲不振、體弱、易感冒者、心悸、月經(jīng)不調(diào)、便秘、舌紅少苔、心腦血管疾病、糖尿病、記憶力減退、心肌營養(yǎng)不良、冠狀A(yù)粥樣硬化、神經(jīng)官能癥、慢性潰瘍等多種身體不適現(xiàn)象有緩解、治療作用的中藥組合物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種具有益氣養(yǎng)血作用的中藥組合物；本發(fā)明目的還在于提供一種具有益氣養(yǎng)血作用的中藥組合物制備方法；本發(fā)明目的還在于提供一種具有益氣養(yǎng)血作用的中藥組合物的質(zhì)量控制方法'本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明所述的具有益氣養(yǎng)血作用的中藥組合物是由如下重量比的原料藥制黃茛30-160重量份當歸10-90重量份五味子10-90重量份地骨皮10-90重量份成的人參2-16重量份麥冬20-100重量份地黃10-90重量份陳皮10-90重量份淫羊藿20-120重量份；上述原料優(yōu)選配比為黃芪40重量份當歸20重量份五味子80重量份地骨皮15重量份30-120重量份白術(shù)10-90重量份制何首烏10-90重量份1-9重量份人參地黃陳皮淫羊;14重量份90重量份23重量份73重量份30重量份；50重量份白術(shù)80重量份制何首烏20重量份鹿茸7重量份上述原料優(yōu)選配比為人參4重量份麥冬90重量份地黃80重量份陳皮20重量份淫羊藿100重量份；本發(fā)明所述的組合物可按常規(guī)工藝加入輔料制成片劑、膠囊、口服液、滴丸、噴霧劑、顆粒劑等臨床可接受的劑型；所述輔料包括溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑、潤滑劑、基質(zhì)等。本發(fā)明所述的中藥組合物口服液制劑的制備方法為制法:鹿茸切片，加水煎煮2-3次，每次5-9倍量，每次2-4小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至15-30。C相對密度1.10—1.35，力口2-4倍量乙醇，沉淀，濾過，回收乙醇，備用；其余原料藥加水煎煮2-4次，每次2-4小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至15-3(TC相對密度1.10—1.35，與上述備用液合并，加入蔗糖133重量份、煉蜜267重量份，煎煮30分鐘，冷卻后加入香精、對羥基苯甲酸乙酯適量，調(diào)整總量至1000體積份，攪勻，即得。本發(fā)明所述的中藥組合物口服液制劑的制備方法優(yōu)選為制法:鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.20—1.25(20°C)，加3倍量乙醇，沉淀，濾過，回收乙醇，備用；其余黨參等十二味，加水煎煮二次，第一次3小時，第二次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度U9(2(TC),與上述備用液合并，加入蔗糖133重量份、煉蜜267重量份，煎煮30分鐘，冷卻后加入香精、對羥基苯甲酸乙酯適量，調(diào)整總量至1000體積份，攪勻，即得。本發(fā)明所述的組合物中重量份/體積份與g/ml相對應(yīng)。本發(fā)明藥物組合物質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別(1)取相當所述組合物原料藥10-14g的組合物制劑,加入甲醇20-30ml,超聲20-40分鐘，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱上，用30-50%甲醇40-60ml洗脫，黃芪130重量份當歸15重量份五味子20重量份地骨皮80重量份黨參30重量份白術(shù)30重量份制何首烏80重量份鹿耷3重量份收集洗脫液，蒸干，殘渣加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取2-3次，每次10-20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2-4次，每次8-12ml;棄去水層，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品、淫羊藿苷對照品，分別加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述對照品溶液1(^1，供試品溶液5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以13-16:35-45:20-25:8-13的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水于5-l(TC放置10-14小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取相當所述組合物原料藥22-26g的組合物制劑，以水飽和的正丁醇提取2-4次，正丁醇液以氨試液提取2-4次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化鋁柱上，以30-50%甲醇洗脫，洗脫液水浴蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10pl、對照品溶液5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以13-16:36-43:20-24:8-13氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水8-12"C以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以8-12%硫酸乙醇溶液，于IO(TC加熱8-13分鐘；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以70-80:25-30的水-乙腈為流動相；檢測波長為270nm，理論塔板數(shù)按淫羊藿苷計算應(yīng)不低于1500;對照品溶液的制備精密稱定淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每lml含10(^g的溶液；供試品溶液的制備精密量取本品5ml于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，搖勻,稱定重量，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜濾過，即得；測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10pl，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明藥物組合物質(zhì)量控制方法優(yōu)選如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種10鑒別(1)取相當所述組合物原料藥12.5g的組合物制劑,加入甲醇25ml,超聲30分鐘，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內(nèi)徑10-15mm)上，用40%甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2次，每次10ml;棄去水層，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品、淫羊藿苷對照品，分別加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述對照品溶液10nl，供試品溶液5^1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇_水于5-10。C放置12小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取相當所述組合物原料藥25g的組合物制劑，以水飽和的正丁醇提取3次，正丁醇液以氨試液提取3次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g,內(nèi)徑10-15mm)上，以40%甲醇洗脫，洗脫液水浴蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10pl、對照品溶液5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水10。C以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于IOO'C加熱IO分鐘；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以73:27的水-乙腈為流動相；檢測波長為270nm，理論塔板數(shù)按淫羊藿苷計算應(yīng)不低于1500;對照品溶液的制備精密稱定淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每lml含100pg的溶液；供試品溶液的制備精密量取相當于所述組合物原料藥2.5g的組合物制劑置于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，搖勻,稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得；測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10pl，注入液相色譜儀，測定，即得。上述質(zhì)量控制方法可用于各種制劑，不同劑型質(zhì)量控制時，供試品溶液制備所選取的制劑量均折合為相同的原料藥量。本發(fā)明組合物具有很好的藥效，相比現(xiàn)有制劑川芎石膏飲表現(xiàn)出很好的藥效。本發(fā)明所提供的中藥組合物的質(zhì)量控制方法，是通過大量具體創(chuàng)造性試驗篩選后得到，鑒別方法中通過對樣品處理方法的篩選，展開劑的選擇，使得鑒別專屬性很好，而且方法經(jīng)濟適用、結(jié)果快速，并且對不同的薄層板都能應(yīng)用。含量測定方法中通過對樣品、供試品處理方法的篩選，展開劑的選擇，使得含量測定方法可以很有效的對產(chǎn)品進行質(zhì)量控制，并且用該方法測定的產(chǎn)品要相比其他方法測定的產(chǎn)品在藥理效果上表現(xiàn)的更為穩(wěn)定。下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。實驗例1:藥物組I(川芎210g、白芷105g、羌活95g、細辛45g、防風55g、薄荷520g、荊芥210g、甘草105g)對照組市售復(fù)方參花顆粒本發(fā)明藥物組對機體免疫功能的影響1本發(fā)明藥物組對NIH小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響1.1試驗材料(1)受試藥物本發(fā)明藥物組，每ml相當于原生藥0.7g，實驗以生藥量計。川芎石膏飲，購市售；(2)實驗動物MH小鼠，18-20克，雌雄兼用，為一級實驗動物；(3)5X雞紅血球(CRBC)，購市售公雞一只，本實驗組制備。1.2試驗方法取50只小鼠，隨機分成5組，每組10只，雌雄各半，本發(fā)明藥物組三個劑量組分別為60mg、120mg、240mg(生藥材量)/kg，川芎石膏飲組270mg/kg，對照組為同等劑量生理鹽水，藥物按劑量用生理鹽水配制，每只動物每天灌胃2ml，連續(xù)給藥8天。第七天每鼠腹腔注射0.8X肝糖元lml，24hr后腹腔注射5%雞紅血球0.5ml，3hr后頸椎脫臼法處死小鼠，立即腹腔注射阿氏液(Alsever's)lml，按摩腹部后取腹腔液滴片，每只鼠2片，溫育30分鐘，用4%姬姆薩-瑞士染色3-5分鐘，漂洗、涼干，在油鏡下每片計數(shù)巨噬細胞200個，按下式計算吞噬百分率和吞噬指數(shù)吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)吞噬百分率=-xioo%200個巨噬細胞被吞噬的雞紅細胞數(shù)吞噬指數(shù)=-X100%200個巨噬細胞與對照組比較本發(fā)明藥物組的三個劑量組60mg、120mg、240mg(生藥量)/kg都能顯著地提髙NIH小鼠的腹腔巨噬細胞的吞噬功能，并有量效關(guān)系，陽性對照組川芎石膏飲都有顯著作用(見表l)。1.3結(jié)果表1本發(fā)明藥物組對NIH小鼠腹腔巨噬細胞吞噬細胞吞噬功能的影響(X士SD)組別齊糧(mg/kg)動物數(shù)(只)吞噬百分率(%)吞噬指數(shù)對照-1029.4±4.700.502±0.021川芎石膏飲2701054.7±6.81**0.868±0.209**本發(fā)明藥物組601058.4±5.50**0.993±0.118**本發(fā)明藥物組1201055.2±4.32**0.957±0.143**本發(fā)明藥物組2401049.6±7.20*0.701±0.215*注*P<0.05**P<0.01與對照組比較2本發(fā)明藥物組對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響2.1材料與方法(1)本發(fā)明藥物組原制品加水再煎后，形成相當于原制品50%濃度的煎劑。(2)小白鼠20只，體重18-22克，由湖北醫(yī)科大學附屬二院動物房提供。(3)實驗方法將20只小白鼠隨機分為2組，一組灌胃給予本發(fā)明藥物組煎劑每日l毫升(12.5g(生藥)/kg)對照組給予等量生理鹽水，連續(xù)5天，末次給藥后40分鐘，每只小鼠腹腔內(nèi)注射2%雞血球懸液1毫升，30分鐘后，頸椎脫臼處死動物，仰位固定于鼠板上，正中剪開腹壁的皮膚，經(jīng)腹膜注入生理鹽水l毫升，轉(zhuǎn)動鼠板l分鐘，然后吸出腹腔洗液l毫升，平均分滴于4片載玻片上，放入濕盆中37'C孵育30分鐘。孵畢，于生理鹽水中漂洗，以除去未貼片的細胞，晾下，染色，在顯微鏡下査200個巨噬細胞吞噬雞血球數(shù)，計算出每百個巨噬細胞的吞噬指數(shù)。2.2結(jié)果見表2表2本發(fā)明藥物組對小鼠腹腔巨噬細胞的影響(X士SD)組別小鼠數(shù)吞噬率吞噬指數(shù)P值對照組1031.92±14.31680.6606±0.28958實驗組1046.835±12.730.98075±0.2304PO.05該實驗用雞血球作為異物，注入小鼠腹腔后，引起小鼠腹腔內(nèi)巨噬細胞的吞噬，與未服用本發(fā)明藥物組的小鼠比較，其吞噬百分率和吞噬指數(shù)都有明顯提高，P<0.05，證明本發(fā)明藥物組能增強巨噬細胞的吞噬功能，有提高機體免疫作用。3本發(fā)明藥物組對ConA誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)淋巴細胞增殖作用的影響3.1實驗材料(1)受試藥物本發(fā)明藥物組(2)實驗動物雄性NIH小鼠18-20g，為一級動物，由四川抗菌素工業(yè)研究所提供。(3)誘導(dǎo)劑刀豆素A(ConA)，四川大學生物系生化教研室提供，批號930411。3.2實驗方法取雄性小鼠60只，隨機分為6組，每組10只，本發(fā)明藥物組設(shè)三個劑量組即240mg、120mg、60mg(生藥)/kg;—個對照組，一個為空白組對照，給溶劑(0.5%CMC)，另一個給予溶劑加誘導(dǎo)劑ConA。各組每日每只鼠灌服0.4ml，連續(xù)8天，給藥的第一天同時每鼠肌肉注射ConA2mg/kg(空白組除外)，連續(xù)三天。第8天末次給藥后3小時，動物剪尾采血涂片，瑞士染色，油鏡下計數(shù)200個淋巴細胞中淋巴母細胞和過濾態(tài)細胞的百分率，同時摘眼球處死動物，解剖取出脾臟，稱取體重和脾重、計算脾指數(shù)。3.3實驗結(jié)果口服本發(fā)明藥物組每日240mg、120mg、60mg(生藥)/kg以及川芎石膏飲270mg/kg都能使小鼠對ConA剌激的轉(zhuǎn)化反應(yīng)增強，淋巴母細胞百分率與對照組比較均有顯著性提高，說明本發(fā)明藥物組能提高T淋巴細胞的應(yīng)答功能即提高細胞免疫功能。見表3<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注*:PO.05**:P<0.01與對照組比較脾指數(shù)檢査結(jié)果如表4，實驗組與對照組有顯著性差異與陽性組相當，說明本發(fā)明藥物組能增加ConA誘導(dǎo)的脾細胞增殖效應(yīng)。表4本發(fā)明藥物組對小鼠脾臟重量的影響(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注*:PO.05**:PO.01與加ConA對照組比較4本發(fā)明藥物組對病人淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗的影響為了了解本發(fā)明藥物組對機體免疫功能方面的影響，我們進行了本發(fā)明藥物組對淋巴細胞轉(zhuǎn)化的試驗。4.1材料與方法對照組(1)正常人的淋巴細胞+PNA(2)SLE患者的淋巴細胞+PHA實驗組(1)正常人的淋巴細胞+PNA+本發(fā)明藥物組(2)SLE患者的淋巴細胞+PHA+本發(fā)明藥物組本發(fā)明藥物組自制成無菌的液體，分裝安瓶，每毫升約含原制品0.1克。實驗方法無菌采血，收集淋巴細胞，調(diào)整細胞濃度2xl0Vml，在細胞培養(yǎng)板中，加入PHA、淋巴細胞及上述本發(fā)明藥物組的稀釋液，置37i:培養(yǎng)72小時，染色，讀片。4.2結(jié)果與討論T淋巴細胞與PHA—起體外培養(yǎng)，可以轉(zhuǎn)化成淋巴母細胞，在這個實驗中，我們分別用正常人和SLE患者的血淋巴細胞與PNA刺激，并加以本發(fā)明藥物組共同培養(yǎng)，同時設(shè)立不加本發(fā)明藥物組的對照，了解淋巴細胞轉(zhuǎn)化的情況。結(jié)果表明，PHA誘導(dǎo)正常人加入本發(fā)明藥物組與不加本發(fā)明藥物組的淋巴細胞轉(zhuǎn)化的影響，其P值遠遠大于0.05，而誘導(dǎo)SLE患者的淋巴細胞轉(zhuǎn)化率，其P值小于0.05，即本發(fā)明藥物組對正常人的淋巴細胞轉(zhuǎn)化率無明顯作用，而對SLE患者(免疫功能低下)的淋巴細胞轉(zhuǎn)化則有調(diào)節(jié)作用。從而證明，本發(fā)明藥物組有一定的增強免疫功能的作用。(附表5、6)表5正常人對PHA刺激的淋巴細胞轉(zhuǎn)化率<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表6SLE患者對PHA刺激的淋巴細胞轉(zhuǎn)化率<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>5本發(fā)明藥物組對SLE患者外周血淋巴細胞IL-2釋放的影響我們用夾心法、ELISA進行了本發(fā)明藥物組對SLE患者外周血淋巴細胞IL-2釋放的影響。5.1材料與方法(1)外周血淋巴細胞的來源本院皮膚科已確診為SLE住院病人的血。(2)本發(fā)明藥物組自制成品，經(jīng)再次煎，制成含原制品濃度10-2、10-3、10-4、10-5的無菌液體，分裝安瓶、備用。(3)IL-2:比利時進口，包括R-H、M-H。(4)ABC試劑。(5)本發(fā)明藥物組對患者周圍血淋巴細胞IL-2釋放的影響的實驗方法將不同濃度的本發(fā)明藥物組分別與患者的血淋巴細胞共同培養(yǎng)，并設(shè)立不加本發(fā)明藥物組的對照組，置37'C二氧化碳孵箱中培養(yǎng)72小時。(6)Sandwich法ELISA測培養(yǎng)上清中的IL-2水平的實驗方法IL-2R-H作為抗包板，二抗IL-2M-H，生物素化抗鼠IgG作為橋抗，再加入混合后的ABC試劑，最后用OPD進行底物反應(yīng)，在波長429nm處讀光密度。并計算IL-2釋放的抑制率。5.2結(jié)果與討論見表7表7本發(fā)明藥物組對SLE患者外周血淋巴細胞IL-2釋放的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>這一試驗，初步證明，本發(fā)明藥物組能抑制PHA刺激后SLE患者的單一核白細胞介素II的釋放使其分泌減少。6本發(fā)明藥物組對小鼠血清溶菌酶的影響6.1實驗材料(1)實驗藥物本發(fā)明藥物組。(2)實驗動物NIH小鼠，18-20克，雌雄兼用，為一級實驗動物，由四川抗菌素工業(yè)研究所實驗動物室提供，動物證號川動管002353。(3)標準溶菌酶中科院上海生化所東風生化技術(shù)公司生產(chǎn)，活性單位10000單位/mg，批號9305133。(4)底物指示菌黃色微球菌(Microeeuslysodekticus)，由北京中科院微生物所菌種室提供，菌號1.634。6.2實驗方法取小鼠50只，隨機分成5組，每組10只，雌雄各半，本發(fā)明藥物組三個劑量組和川芎石膏飲組均每只小鼠每只灌胃0.4ml藥液，對照組動物給予同體積的溶劑(0.5XCMC)，連續(xù)8天。末次給藥后2小時，眼眶后靜脈采血，分離血清備用。瓊脂平板打孔法測定溶菌酶活性稱取瓊脂加入PH6.4的0.067mol/LPBS溶液中，配成1%瓊脂緩沖液，再在50-6(TC加入刮取的新鮮微球菌，配成濁懸液，用72型分光光度計波長60nm測定，調(diào)整其濃度達到透光率30-40%，倒入9cm直徑的平皿內(nèi)，凝固后用玻璃管打孑L，直徑2.5mm，孔距15mm,厚度3-4mm;同時新鮮配制溶菌酶標準液，用PH6.4PBS稀釋成10，20，40，80，100，200,300,400，500，800ng/ml濃度試液。測定時用微量進樣器分別吸取每只鼠的血清20pl注入含菌瓊脂平皿的孔中，標準液也吸20W測量，每個樣品滴3孔，溫育(24-26。C)18小時后，用游標卡尺(精確到0.02mm)測量溶菌環(huán)直徑，用半對數(shù)紙繪制標準曲線，從線上査出血清樣品所含溶菌酶的嗎數(shù)。6.3實驗結(jié)果NIH小鼠口服本發(fā)明藥物組8天后，測得血清溶菌酶含量如表12所示，以與對照組進行統(tǒng)計分析比較，口服本發(fā)明藥物組240mg(生藥)/kgXday組極顯著地提高血清溶菌酶的含量，與川芎石膏飲相同，口服270mg/kgXday組與對照比較也有顯著意義地提高，本發(fā)明藥物低劑量組60mg(生藥)/kgXday提高程度不顯著。實驗結(jié)果表明，小鼠灌服本發(fā)明藥物能顯著地提高血清溶酶的含量。與劑量增加成平行關(guān)系。表8本發(fā)明藥物組對NIH小鼠血清溶菌酶含量的影響(X士SD)組別齊懂(mg/kg)動物數(shù)(只)血清溶菌酶含量對照-10390±26川芎石膏飲27010456±38**本發(fā)明藥物組24010570±53**本發(fā)明藥物組12010470±39*本發(fā)明藥物組6010438±45注*:P<0.05**:PO.01與對照組比較6.4結(jié)論體外抑制病毒試驗結(jié)果表明，本發(fā)明藥物組對HIV和HBV均有一定抑制作用，而細胞毒性不大。本發(fā)明藥物組對人和動物免疫功能影響試驗結(jié)果表明，能提高淋巴細胞轉(zhuǎn)化率；抑制PHA刺激患者的單一白細胞介素II釋放使其分泌減少增強巨噬細胞吞噬功能和提高溶菌酶的生成。證實本發(fā)明藥物組有一定修飾免疫功能作用。197.本發(fā)明藥物組的免疫增強作用對13例患者在治療后第9、10個月的全血進行了CD4、CD8、CD4/CDs的定量檢測，免疫細胞CD4增加^50cells4U者6人；增加1-49cells/pl者3人下降不足50cells/pl者2人；下降超過50cells/pl者2人。原安慰劑對照組的17例患者接受本發(fā)明藥物組治療2.5、3.5個月全血中CD4、CD8、CD4/CD8的定量檢測結(jié)果是CD4增加^50cells/iil者7人；增加0-49cells/^者l人；下降不足50cells4il者3人；下降超過50cells/pl者6人。研究表明本發(fā)明藥物組有增強fflV/AIDS患者的免疫，減緩CD4細胞的破壞的作用。詳見以下圖表服用本發(fā)明藥物組10月fflV-lRNA、CD4變化一覽表<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>下述實施例均能夠?qū)崿F(xiàn)上述實驗例所述的效果具體實施方式黨參75g白術(shù)(炒)33.3g制何首烏30g鹿茸1.7g實施例l:軟膠囊人參(去蘆)8.3g黃芪83.4g麥冬50g當歸33.3g地黃33.3g五味子25g陳皮33.3g地骨皮25g淫羊藿50g制法:以上十三味，鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.20—L25(20'C)，加3倍量乙醇，沉淀，濾過，回收乙醇，備用；其余黨參等十二味，加水煎煮二次,第一次3小時，第二次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.19(20°C),減壓干燥，粉碎成細粉，加入植物油及上述備用液，混勻，制成100粒，即得。黨參75g白術(shù)(炒)33.3g制何首烏30g鹿茸1.7g實施例2:滴丸人參(去蘆)8.3g黃芪83.4g麥冬50g當歸33.3g地黃33.3g五味子25g陳皮33.3g地骨皮25g淫羊藿50g制法:以上十三味，鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.20—L25(2(TC)，加3倍量乙醇，沉淀，濾過，回收乙醇，備用；其余黨參等十二味，加水煎煮二次，第一次3小時，第二次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.19(20。C),與上述備用液合并，加入全部熔融的聚乙二醇，攪拌均勻，由上往下，滴入液體石蠟133g，即得。實施例3:泡騰劑人參14g黃芪40g黨參50g麥冬90g當歸20g白術(shù)80g地黃23g五味子80g制何首烏20g陳皮73g地骨皮15g鹿茸7g淫羊藿30g;制法:以上十三味，鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.20—L25(20。C)，加3倍量乙醇，沉淀，濾過，回收乙醇，備用；其余黨參等十二味，加水煎煮二次，第一次3小時，第—次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.19(20'C),與上述備用液合并，減壓干燥成干膏，粉碎成細粉，加入適量碳酸氫鈉、枸櫞酸和蔗糖133g、甜菊素26g，制成顆粒，干燥，加入上述揮發(fā)油，混勻，制成460g，即得。實施例4:口服液人參4g黃芪130g黨參30g麥冬90g當歸15g白術(shù)30g地黃80g五味子20g制何首烏80g陳皮20g地骨皮80g鹿茸3g淫羊藿100g;制法:以上十三味，鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.20—1.25(20°C)，加3倍量乙醇，沉淀，濾過，回收乙醇，備用；其余黨參等十二味，加水煎煮二次，第一次3小時，第二次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.19(20。C),與上述備用液合并，加入蔗糖133g、煉蜜267g，煎煮30分鐘，冷卻后加入香精、對羥基苯甲酸乙酯適量，調(diào)整總量至1000ml，攪勻，即得。實施例5:人參4g黃芪130g黨參30g麥冬90g當歸15g白術(shù)30g地黃80g五味子20g制何首烏80g陳皮20g地骨皮80g鹿茸3g淫羊藿100g;制法:以上十三味，鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.20—1.25(20°C)，加3倍量乙醇，沉淀，濾過，回收乙醇，備用；其余黨參等十二味，加水煎煮二次，第一次3小時，第二次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.19(20。C)，與上述備用液合并，加入蔗糖133g、煉蜜267g，煎煮30分鐘，冷卻后加入香精、對羥基苯甲酸乙酯適量，調(diào)整總量至1000ml，攪勻，即得。質(zhì)量控制方法鑒別(1)取本品25ml,加入甲醇25ml,超聲30分鐘，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內(nèi)徑10-15mm)上，用40%甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2次，每次10ml;棄去水層，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品、淫羊藿苷對照品，分別加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述對照品溶液lOpl,供試品溶液5^1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水于5-l(TC放置12小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取本品50ml，以水飽和的正丁醇提取3次，正丁醇液以氨試液提取3次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內(nèi)徑10-15mm)上，以40%甲醇洗脫，洗脫液水浴蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10W、對照品溶液5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水l(TC以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于IO(TC加熱10分鐘；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈(73:27)為流動相；檢測波長為270nm,理論塔板數(shù)按淫羊藿苷計算應(yīng)不低于1500;對照品溶液的制備精密稱定淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每lml含10(Hig的溶液；供試品溶液的制備精密量取本品5ml于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，搖勻,稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得；測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10pl，注入液相色譜儀，測定，即得。黃芪83.4g當歸33.3g五味子25g地骨皮25g黨參75g白術(shù)(炒)33.3g制何首烏30g鹿茸1.7g實施例6:口服液人參(去蘆)8.3g麥冬50g地黃33.3g陳皮33.3g淫羊藿50g制法:以上十三味，鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.20—1.25(2(TC)，加3倍量乙醇，沉淀，濾過，回收乙醇，備用；其余黨參等十二味，加水煎煮二次，第一次3小時，第二次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.19(20'C),與上述備用液合并，加入蔗糖133g、煉蜜267g，煎煮30分鐘，冷卻后加入香精、對羥基苯甲酸乙酯適量，調(diào)整總量至1000ml，攪勻，即得；鑒別(1)取本品20ml,加稀硫酸5ml,煮沸5分鐘，放冷，濾過，取濾液加乙醚15ml，振搖提取，提取液濃縮至2ml,加20%氫氧化鈉溶液lml，振搖，放置，堿液層顯紅色，醚液層轉(zhuǎn)為無色；(2)取本品25ml,加入甲醇25ml，超聲30分鐘，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內(nèi)徑10-15mm)上，用40%甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2次，每次10ml;棄去水層，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品、淫羊藿苷對照品，分別加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述對照品溶液l(HU，供試品溶液5nl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水于5-l(TC放置12小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑占."、、，(3)取本品50ml，以水飽和的正丁醇提取3次，正丁醇液以氨試液提取3次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內(nèi)徑10-15mm)上，以40%甲醇洗脫，洗脫液水浴蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10pl、對照品溶液5nl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水l(TC以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于IO(TC加熱IO分鐘；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；水-乙腈(73:27)為流動相；檢測波長為270nm,理論塔板數(shù)按淫羊藿苷計算應(yīng)不低于1500;對照品溶液的制備精密稱定淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每lml含100ng的溶液；供試品溶液的制備精密量取本品5ml于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，搖勻,稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得；測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10pl，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每支含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H4Q015)計，不得少于l.Omg。功能主治:益氣養(yǎng)血。用于身體虛弱，氣短心悸，面色不華。用法用量:口服，一次1520ml,—日3次。規(guī)格:每支10ml權(quán)利要求30-120重量份白術(shù)10-90重量份制何首烏10-90重量份1-9重量份1、一種具有益氣養(yǎng)血作用的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為黃芪30-160重量份當歸10-90重量份五味子10-90重量份地骨皮10-90重量份人參2-16重量份麥冬20-100重量份地黃10-90重量份陳皮10-90重量份淫羊藿20-120重量份。2、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物中的原料藥組成中黃芪40重量份當歸20重量份五味子80重量份地骨皮15重量份人參14重量份麥冬90重量份地黃23重量份陳皮73重量份淫羊藿30重量份。3、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組50重量份白術(shù)80重量份制何首烏20重量份7重量份黃芪130重量份當歸15重量份五味子20重量份地骨皮80重量份30重量份白術(shù)30重量份制何首烏80重量份3重量份成為人參4重量份麥冬90重量份地黃80重量份陳皮20重量份淫羊藿100重量份。4、如權(quán)利要求1-3所述的任一種藥物組合物，其特征在于該藥物組合物按常規(guī)工藝加入輔料制成片劑、膠囊、口服液、滴丸、顆粒劑。5、如權(quán)利要求4所述的藥物組合物的口服液制備方法，其特征在于該方法為鹿茸切片，加水煎煮2-3次，每次5-9倍量，每次2-4小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至15-30。C相對密度1.10—1.35，力Q2-4倍量乙醇，沉淀，濾過，回收乙醇，備用；其余原料藥加水煎煮2-4次，每次2-4小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至15-30'C相對密度1.10—1.35，與上述備用液合并，加入蔗糖133重量份、煉蜜267重量份，煎煮30分鐘，冷卻后加入香精、對羥基苯甲酸乙酯適量，調(diào)整總量至1000體積份，攪勻，即得。6、如權(quán)利要求5所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.20—L25(20。C)，加3倍量乙醇，沉淀，濾過，回收乙醇，備用；其余黨參等十二味，加水煎煮二次，第一次3小時，第二次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.19(2(TC),與上述備用液合并，加入蔗糖133重量份、煉蜜267重量份，煎煮30分鐘，冷卻后加入香精、對羥基苯甲酸乙酯適量，調(diào)整總量至1000體積份，攪勻，即得。7、如權(quán)利要求1-3所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別(1)取相當所述組合物原料藥10-14g的組合物制劑,加入甲醇20-30ml,超聲20-40分鐘，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱上，用30-50%甲醇40-60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取2-3次，每次10-20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2-4次，每次8-12ml;棄去水層，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品、淫羊藿苷對照品，分別加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述對照品溶液10pl，供試品溶液5]il，分別點于同一硅膠G薄層板上，以13-16:35-45:20-25:8-13的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水于5-10匸放置10-14小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取相當所述組合物原料藥22-26g的組合物制劑，以水飽和的正丁醇提取2-4次，正丁醇液以氨試液提取2-4次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化鋁柱上，以30-50%甲醇洗脫，洗脫液水浴蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液1(^1、對照品溶液5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以13-16:36-43:20-24:8-13氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水8-12'C以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以8-12%硫酸乙醇溶液，于100'C加熱8-13分鐘；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以70-80:25-30的水-乙腈為流動相；檢測波長為270nm，理論塔板數(shù)按淫羊藿苷計算應(yīng)不低于1500;對照品溶液的制備精密稱定淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每lml含100ng的溶液；供試品溶液的制備精密量取相當于所述組合物原料藥2.5g的組合物制劑置于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，搖勻,稱定重量，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(濾過，即得；測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各lOpl,注入液相色譜儀，測定，即得。8、如權(quán)利要求7所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別(l)取相當所述組合物原料藥10-14g的組合物制劑，加入甲醇25ml，超聲30分鐘，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100-120目，5g，內(nèi)徑10-15mm)上，用40%甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2次，每次10ml;棄去水層，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品、淫羊藿苷對照品，分別加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述對照品溶液iow，供試品溶液5nl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15:40:22:lO氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水于5-10。C放置12小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取相當所述組合物原料藥22-26g的組合物制劑，以水飽和的正丁醇提取3次，正丁醇液以氨試液提取3次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化鋁柱上，中性氧化鋁柱為100-120目，5g，內(nèi)徑10-15mm，以40%甲醇洗脫，洗脫液水浴蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10pl、對照品溶液5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水l(TC以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10°/。硫酸乙醇溶液，于IOO'C加熱IO分鐘；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以73:27的水-乙腈為流動相；檢測波長為270nm，理論塔板數(shù)按淫羊藿苷計算應(yīng)不低于1500;對照品溶液的制備精密稱定淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每lml含100pg的溶液；供試品溶液的制備精密量取相當于所述組合物原料藥2.5g的組合物制劑置于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得；測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10^1,注入液相色譜儀，測定，即得。9、如權(quán)利要求7所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法包括如下步驟鑒別(l)取相當所述組合物原料藥10-14g的組合物制劑,加入甲醇25ml,超聲30分鐘，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱上，中性氧化鋁柱為100-120目，5g，內(nèi)徑10-15mm，用40%甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水15ml溶解，水溶液用水飽和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗2次，每次10ml;棄去水層，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品、淫羊藿苷對照品，分別加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述對照品溶液10pl，供試品溶液5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水于5-l(TC放置12小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取相當所述組合物原料藥22-26g的組合物制劑，以水飽和的正丁醇提取3次，正丁醇液以氨試液提取3次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化鋁柱上，中性氧化鋁柱為100-120目，5g，內(nèi)徑10-15mm，以40%甲醇洗脫，洗脫液水浴蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液l(Hil、對照品溶液5^1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水l(TC以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于IO(TC加熱IO分鐘；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以73:27的水-乙腈為流動相；檢測波長為270nm,理論塔板數(shù)按淫羊藿苷計算應(yīng)不低于1500;對照品溶液的制備精密稱定淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每lml含100ng的溶液；供試品溶液的制備精密量取相當于所述組合物原料藥2.5g的組合物制劑置于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，搖勻,稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得；測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10pl，注入液相色譜儀，測定，即得。全文摘要本發(fā)明公開了一種具有益氣養(yǎng)血作用的藥物組合物及制備方法和質(zhì)量控制方法。本發(fā)明的藥物組合物原料藥組成為人參、黃芪、黨參、麥冬、當歸、白術(shù)、地黃、五味子、制何首烏、陳皮、地骨皮、鹿茸、淫羊藿組成，制備方法為鹿茸切片，加水煎煮，濾過，濾液濃縮，加3倍量乙醇，沉淀，濾過，回收乙醇，備用；其余黨參等加水煎煮合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.19(20℃)，與上述備用液合并，加入蔗糖133g、煉蜜267g，煎煮30分鐘，冷卻后加入香精、對羥基苯甲酸乙酯適量，調(diào)整總量至1000ml，攪勻，即得。本發(fā)明采用高效液相色譜法對淫羊藿進行含量測定。本發(fā)明藥物組合物具有顯著的益氣養(yǎng)血作用。文檔編號A61K35/32GK101310751SQ20071009950公開日2008年11月26日申請日期2007年5月23日優(yōu)先權(quán)日2007年5月23日發(fā)明者付建家,付立家申請人:北京亞東生物制藥有限公司