專利名稱：抗粘附碳水化合物的制作方法
本申請為國際申請PCT/EP01/01753于2002年8月16日進入中國國家階段、申請?zhí)枮?1805223.1、發(fā)明名稱為“抗粘附碳水化合物”的分案申請。
本發(fā)明涉及用于減少和/或阻斷病原物質(zhì)和生物粘附到真核細胞、特別是哺乳動物細胞上的藥物或食物制品，其含有至少一種在一端具有糖醛酸的抗粘附碳水化合物，本發(fā)明還涉及所述制品和其中所含碳水化合物針對所述目的的應(yīng)用。
病原生物和損傷細胞的物質(zhì)粘附到哺乳動物細胞表面是感染或損傷細胞的第一步，也是必不可少的前提條件。病原體與細胞間的相互作用是通過配體-受體作用形成的，因此是病原體具有毒力或毒性的重要因素。至少應(yīng)該理解細菌、病毒、真菌、單細胞寄生物或多細胞寄生物是病原體。在所述配體-受體作用中，糖結(jié)構(gòu)具有重要的作用。
完全阻止或至少降低所述配體-受體作用的一種可能在于阻斷細胞表面或配體上的各自受體。
使用特定的試驗系統(tǒng)，可顯示不同碳水化合物混合物減少或甚至完全阻止如微生物粘附到細胞表面，參見Kunz，C；Rudloff，S.ActaPaediatr.1993，82，903-912。由此推斷活性碳水化合物與受體或配體結(jié)構(gòu)有相當(dāng)大的相似性。在已描述的研究中，使用了多種來自動物和植物的碳水化合物以及植物多糖水解產(chǎn)物。
自然界中存在的碳水化合物以及如人奶碳水化合物的組成和結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜。而植物來源的碳水化合物以及植物多糖水解產(chǎn)物也同樣復(fù)雜。這表明在大多數(shù)情況下碳水化合物對抗病原體粘附到哺乳動物細胞的作用是由碳水化合物混合物產(chǎn)生的，而非由純化單一結(jié)構(gòu)產(chǎn)生。
由此知道，例如來自多種植物產(chǎn)物的水性提取物和漿汁對于由致病微生物引起的腸道和尿生殖道疾病具有抗病活性。PCT/EP 94/03006(WO 95/07084)描述了利用根據(jù)確定方法制備的胡蘿卜湯、貍藻茶湯(bladder tea)、椰奶等，大大減少致病微生物粘附于胃腸道和尿生殖道上皮細胞。推想是植物產(chǎn)物中存在的果膠產(chǎn)生上述作用，它們基本上是1，4-α-糖苷鍵合的半乳糖醛酸酐鏈。因此推想實際有活性的半乳糖醛酸酐符合多個標(biāo)準(zhǔn)，即確定的聚合度和甲基化程度。
本發(fā)明的目的在于顯示利用碳水化合物，通過其與配體和/或真核細胞、特別是哺乳動物細胞表面結(jié)構(gòu)相互作用，如何能有效減少或阻止病原體粘附。
根據(jù)權(quán)利要求所教導(dǎo)的內(nèi)容，實現(xiàn)了所述目的。
本發(fā)明的主題特別是一種用于藥物或食物制品，其含有至少一種在一端具有糖醛酸單元的抗粘附碳水化合物。眾所周知，碳水化合物至少具有兩個末端，當(dāng)具有支鏈時，甚至可具有三個或更多末端。根據(jù)本發(fā)明，直鏈碳水化合物和支鏈碳水化合物都可使用。在這些末端中的一個上面，存在具有可酯化末端COOH基團的所述糖醛酸。優(yōu)選的糖醛酸或糖醛酸單元是如下游離或酯化的酸半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、古洛糖醛酸、艾杜糖醛酸、甘露糖醛酸、核糖醛酸和阿卓糖醛酸，特別優(yōu)選半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸。
本發(fā)明制品含有至少一種抗粘附碳水化合物，即一種在一端具有糖醛酸單元的確定物質(zhì)。但本發(fā)明制品也可含有數(shù)種具有末端糖醛酸單元的抗粘附碳水化合物。本發(fā)明制品可適當(dāng)?shù)睾杏扇舾稍摽拐掣教妓衔锝M成的混合物。
應(yīng)理解在本文件中，抗粘附碳水化合物具有末端糖醛酸單元，且明確地說，不依賴于該糖醛酸單元是否具有雙鍵。換言之，術(shù)語“抗粘附碳水化合物”指具有以雙鍵為特征的糖醛酸的碳水化合物以及具有糖醛酸單元但不帶雙鍵的碳水化合物的總和。本發(fā)明的基本思想在于使用這樣的抗粘附碳水化合物，其具有最小量的帶雙鍵糖醛酸。
抗粘附碳水化合物可具有確定的聚合度，一般縮寫為DP，在本文中也如此。但通常存在不同聚合度的抗粘附碳水化合物，確定聚合度的抗粘附碳水化合物可能以多種方式組成。換言之，本發(fā)明制品含至少一種在一端具有糖醛酸單元的確定抗粘附碳水化合物。這種碳水化合物當(dāng)然具有確定的聚合度。此外，可存在若干具有相同聚合度的組成不同的抗粘附碳水化合物。另外，可存在具有不同聚合度的抗粘附碳水化合物，因此對于各聚合度，可存在一種或若干種抗粘附碳水化合物。
對在一端具有糖醛酸單元的上述抗粘附碳水化合物的具體定義中，不對構(gòu)成這些抗粘附碳水化合物的其他糖類單元或單體單元的性質(zhì)進行任何描述，除抗粘附碳水化合物只由一個單一單元(聚合度即DP為1)即一個糖醛酸單元構(gòu)成之外。當(dāng)抗粘附碳水化合物DP為1時它僅由該類一個糖醛酸單元構(gòu)成。如果抗粘附碳水化合物DP為2或更高，則與糖醛酸單元連接的其他糖類單元可為任何合乎需要的單元。
所述碳水化合物上的糖醛酸單元中10-100％必須帶有雙鍵。因此，％數(shù)值表示存在于所述碳水化合物一端上的所有帶雙鍵糖醛酸單元的數(shù)目，其中所述糖醛酸單元指在抗粘附碳水化合物一端上的帶雙鍵糖醛酸單元和可能存在的不帶雙鍵糖醛酸單元的總和。
順便提及，在抗粘附碳水化合物一端上的糖醛酸單元在此也稱作末端糖醛酸單元。
根據(jù)本發(fā)明使用的抗粘附碳水化合物在一端具有糖醛酸單元，它們在另一端(不帶支鏈的情況下)可能具有非還原性糖單元，也可能具有還原糖單元。帶末端糖醛酸單元的抗粘附碳水化合物中優(yōu)選10-100％在另一端(直鏈)或其他末端之一(帶支鏈情況)具有還原糖單元。換言之，10-100％末端糖醛酸單元位于非還原端。因此，所有末端糖醛酸單元都可能存在于非還原端。
50-100％的雙鍵優(yōu)選位于末端糖醛酸單元的C4-C5原子之間。在這種情況下，％數(shù)值表示雙鍵數(shù)目，與抗粘附碳水化合物的聚合度及形成這些抗粘附碳水化合物的糖單元無關(guān)?？稍?35nm下使用5500 l/molcm摩爾消光系數(shù)經(jīng)分光光度法測定雙鍵并由此測定帶雙鍵末端糖醛酸單元，參見TP Kravtchenko，I.Arnould，AGJ Voragen & W.PolnikCarbohydr.Polymer 1992，19，237-242。
帶還原端碳水化合物的測定根據(jù)如下文獻的描述用碘量法進行Analytical Chemistry of Carbohydrates，H.Scherz，G.Bonn，EditorThieme Organic Chemistry Monograph Series，Stuttgart，New York，Thieme Publishers 1998，第32頁。僅帶非還原端的碳水化合物的測定可使用常規(guī)分析方法如滲透壓測定法、質(zhì)譜分析法(例如MALDI-MS，ESI-MS)、色譜法(例如GPC、HPAEC，HPLC)和毛細管電泳或者這些方法的組合。
除末端糖醛酸單元外，根據(jù)本發(fā)明使用的抗粘附碳水化合物還可具有非還原端，即，例如還原端隨后轉(zhuǎn)化成非還原端。這可通過例如氧化、還原或?qū)⑦€原端連到其他分子上來實現(xiàn)。所述其他分子包括例如蛋白、脂質(zhì)和工業(yè)聚合物，通過它們得到(新)葡糖偶聯(lián)物。隨后對還原端的修飾不影響本發(fā)明使用的抗粘附碳水化合物的抗粘附作用。這些抗粘附碳水化合物由此也可通過“前”還原端固定到已知載體如常規(guī)載體上。
當(dāng)10-100％的末端糖醛酸單元具有雙鍵時，當(dāng)然還意味著0-90％的末端糖醛酸單元不具有雙鍵。抗粘附碳水化合物的末端糖醛酸單元中優(yōu)選有10-50％具有這樣的雙鍵。
與先前提及的WO 95/07084的教導(dǎo)不同，驚奇地發(fā)現(xiàn)即便是對于該文獻中描述的可能具有抗粘附作用的碳水化合物，聚合度和甲基化程度均不產(chǎn)生顯著抗粘附作用。而具有帶雙鍵末端糖醛酸單元的碳水化合物具有顯著抗粘附作用。但是，這些抗粘附碳水化合物，尤其是那些糖醛酸單元在C4和C5原子間存在雙鍵的抗粘附碳水化合物，不能根據(jù)WO 95/07084的教導(dǎo)獲得，這將在下文中具體討論。
根據(jù)本發(fā)明考慮指定聚合度的抗粘附碳水化合物時，可能只涉及一種單一的抗粘附碳水化合物。但也可考慮若干不同結(jié)構(gòu)的抗粘附碳水化合物，它們的共同特點其一是指定聚合度，其二是末端糖醛酸單元。
優(yōu)選本發(fā)明制品不但包括一種或若干具有指定DP的抗粘附碳水化合物，也包括若干不同聚合度的抗粘附碳水化合物。所使用的抗粘附碳水化合物的聚合度優(yōu)選為DP 2至DP 40，特別優(yōu)選DP 2至DP 10，最高為DP 100。優(yōu)選使用具有不同鏈長的抗粘附碳水化合物的混合物。在這種情況下，可考慮僅一種單一碳水化合物或若干碳水化合物，或者任何需要的抗粘附碳水化合物組合，其中所述抗粘附碳水化合物具有確定的鏈長或指定的聚合度。
特別是在非還原端具有末端糖醛酸單元并具有雙鍵的抗粘附碳水化合物具有增強的抗粘附作用。在本文件中，這些抗粘附碳水化合物也可指定為不飽和碳水化合物。
通過用酶切或化學(xué)切割酸性碳水化合物和優(yōu)選含糖醛酸碳水化合物可獲得本發(fā)明使用的抗粘附碳水化合物和不飽和抗粘附碳水化合物，并以此方式得到指示含量的含有雙鍵的糖醛酸單元。如下物質(zhì)可用作優(yōu)選的起始碳水化合物果膠、果膠酸鹽、藻酸鹽、軟骨素、透明質(zhì)酸、肝素、類肝素、細菌碳水化合物和其他含糖醛酸碳水化合物。在這種情況下優(yōu)選的原料是植物和/或植物的部分，例如胡蘿卜、柑橘類水果、甜菜和蘋果，參見C.Rolin，BU Nielsen & PE Glahn，《Polysaccharides》，S.Dimitriu，Marcel Dekker編輯，New York，1998。也可使用海藻、動物組織和細菌產(chǎn)物。
當(dāng)經(jīng)化學(xué)切割制備不飽和抗粘附碳水化合物時，上述情況也同樣適用，以便經(jīng)β-消除來引入雙鍵，例如在中性或弱堿性條件下裂解果膠，參見MJH Keijbets & W.Pilnik，Carbohydr.Res.1974，33，359-362。
酶切特別可通過裂解酶(例如果膠溶酶或果膠酸鹽裂解酶)或含裂解酶的酶制劑進行。
對于化學(xué)切割，在中性至堿性條件下進行，以便得到所需含量的雙鍵。通過適當(dāng)選擇其他參數(shù)如溫度、pH和緩沖液濃度，還可影響羧基和/或羥基的酯化程度。所用起始化合物(如果膠)的酯化程度較高時，在弱酸性范圍內(nèi)進行切割，可類似地獲得本發(fā)明使用的抗粘附碳水化合物，由此也可得到不飽和抗粘附碳水化合物。
當(dāng)羧基成甲酯以及形成乙酰酯時，例如在糖醛酸C-2和/或C-3原子上形成時，也可影響不飽和抗粘附碳水化合物的抗粘附作用。這特別適用于果膠的半乳糖醛酸。甲基化或乙?；潭葍?yōu)選為20-75％，特別優(yōu)選20-50％。
如前所述，特別位于非還原端的糖醛酸單元的雙鍵對于本發(fā)明優(yōu)選使用的抗粘附碳水化合物混合物特別重要。與帶雙鍵或甚至無雙鍵的所述糖醛酸單元相連的其他糖單元可僅為酸性碳水化合物單元，僅為中性碳水化合物單元，或者酸性和中性碳水化合物單元的混合物。也即中性碳水化合物單元影響不飽和抗粘附碳水化合物的抗粘附作用。因此，主要考慮鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖、葡萄糖、果糖和芹菜糖，它們可與feroyl殘基及酚類物質(zhì)相連。這特別使用于果膠。中性碳水化合物單元部分優(yōu)選達到最高50％，特別優(yōu)選為0-30％。
所用抗粘附碳水化合物或抗粘附碳水化合物混合物的抗粘附作用不依賴于終產(chǎn)物濃度，而依賴于所加的量。因此，本發(fā)明制品可僅由抗粘附碳水化合物或抗粘附碳水化合物混合物組成。為此，所述制品例如被制成片或食物增補劑。當(dāng)然，對于藥物制品，可使用常規(guī)可藥用載體、稀釋劑和/或輔藥。這些抗粘附碳水化合物也可摻入任何含其他成分的目的食物或藥物制品中。對于食物，可考慮脂肪、蛋白、礦物、微量元素、維生素和其他適合食品生產(chǎn)的材料。此外，可將本發(fā)明抗粘附碳水化合物與具有任何所需特性的其他碳水化合物一同使用。
根據(jù)優(yōu)選的實施方式，所涉及的其他碳水化合物是如WO00/08948和國際申請PCT/EP99/05878所述的益生素(prbiotische)碳水化合物混合物，因此涉及由兩種不同的基本可溶的碳水化合物組分A和B組成的益生素碳水化合物混合物，這兩種碳水化合物組分在胃腸道中保持不被消化，在到達大腸時是未被吸收的，其中所述碳水化合物組分A由至少一種單糖，或至少一種寡糖(二糖至六糖)，或者兩種或幾種這樣的糖的混合物組成，所述碳水化合物組分B由一種多糖(七糖以上)，或者兩種或幾種多糖的混合物組成，基于碳水化合物組分總和A+B(＝100重量％)，所述碳水化合物組分A為5-95重量％，所述碳水化合物組分B為5-95重量％，并且碳水化合物/碳水化合物組分A和B的糖類中至少80重量％具有益生素活性。但為本發(fā)明的目的，只有不為含糖醛酸抗粘附碳水化合物的碳水化合物才可構(gòu)成碳水化合物組分A和碳水化合物組分B。因此，組分A和B不屬于任何抗粘附碳水化合物。在下文中為簡化，將這些構(gòu)成碳水化合物組分A和碳水化合物組分B的碳水化合物稱為益生素碳水化合物，盡管這些碳水化合物中實際上只有一部分是具有益生素活性的。
碳水化合物組分A和B總計的稱為益生素的碳水化合物或糖類中至少80重量％具有益生素活性。優(yōu)選在碳水化合物組分A中至少80重量％稱為益生素的碳水化合物和在碳水化合物組分B中至少80重量％稱為益生素的碳水化合物具有益生素活性。換言之，在各種情況下，優(yōu)選在碳水化合物組分A和B中至少80重量％稱為益生素的碳水化合物或糖類在到達大腸時一定未被消化(因此在小腸中不可吸收)。換言之，在碳水化合物組分A和B中的碳水化合物或糖類在胃腸道中沒有被吸收和消化，在胃中沒有，在小腸中也沒有，并以此狀態(tài)到達大腸。
應(yīng)理解，室溫下濃度至少1g/l時，碳水化合物組分A和B中的可溶碳水化合物(例如根據(jù)Roempps Chemie Lexikon)從物理意義上可在水中形成均相溶液。
碳水化合物組分A和B中不具有益生素活性的碳水化合物或糖類部分最高占20重量％。這些碳水化合物或糖類確實是可溶的，但可以以未消化形式排泄。因其增加排泄物體積或因其具有水結(jié)合作用，這些碳水化合物可產(chǎn)生生理作用。
構(gòu)成碳水化合物組分A的益生素碳水化合物/糖類與構(gòu)成碳水化合物組分B的益生素碳水化合物/糖類優(yōu)選具有不同的結(jié)構(gòu)。更優(yōu)選碳水化合物組分A和B的益生素碳水化合物/糖類中至少有80重量％易受乳酸菌和/或雙歧桿菌的作用。在這種情況下，碳水化合物組分A的重量百分率優(yōu)選大于碳水化合物組分B的重量百分率?；贏+B＝100重量％，碳水化合物組分A構(gòu)成優(yōu)選為95-60重量％，特別優(yōu)選為約90重量％，而碳水化合物組分B構(gòu)成優(yōu)選為5-40重量％，特別優(yōu)選為約10重量％。碳水化合物組分A和B的益生素碳水化合物/糖類尤其不具有任何以α1-4和/或α1-6鍵合的葡萄糖單元。在這種情況下，碳水化合物組分B的益生素碳水化合物/糖類優(yōu)選由最多為100單糖單元構(gòu)成。
碳水化合物組分A的益生素碳水化合物/糖類還優(yōu)選有至少60重量％，特別優(yōu)選有80-100重量％屬于半乳寡糖，碳水化合物組分B的益生素碳水化合物/糖類優(yōu)選有至少60重量％，特別優(yōu)選有80-100重量％屬于果聚糖。
當(dāng)這類益生素碳水化合物混合物存在于本發(fā)明制品中時，抗粘附碳水化合物與益生素碳水化合物混合物的重量比優(yōu)選為1∶99至99∶1，特別優(yōu)選為1∶10至10∶1，更優(yōu)選為約1∶1。
此外，除了抗粘附碳水化合物和可能存在的益生素碳水化合物混合物，在本發(fā)明制品中還可存在任何所需種類的其他常規(guī)碳水化合物。在這種情況下可考慮不溶性碳水化合物、可溶并可消化的碳水化合物、主要用作營養(yǎng)目的的常規(guī)碳水化合物(例如淀粉、麥芽糖糊精、乳糖和蔗糖)或者一種或幾種所述這些碳水化合物的混合物。這些情況下使用的抗粘附碳水化合物構(gòu)成優(yōu)選為0.1-30重量％，特別優(yōu)選1-10重量％。
使用抗粘附寡糖，導(dǎo)致病原物質(zhì)不與哺乳動物細胞結(jié)合，或者使已結(jié)合的病原體脫附。加入益生素寡糖，可消除通常由病原體引起的腸道菌群功能障礙。此外，已均衡的腸道菌群經(jīng)全身性作用可抵抗在胃腸道以外其他地方的病原體，例如在尿生殖道、呼吸道、血液系統(tǒng)和皮膚中的病原體。
由于病原體粘附是其感染或毒害哺乳類生物所有細胞的必要前提，因此本發(fā)明使用的抗粘附碳水化合物不僅可用于預(yù)防或減輕胃腸道中的感染或損害，更可用于所有細胞中。
因此，本發(fā)明的主題也是將本發(fā)明制品和其中所含抗粘附碳水化合物用于防止或減少病原體粘附到真核細胞、特別是哺乳動物細胞。這些碳水化合物優(yōu)選用于治療胃腸道、血液系統(tǒng)、呼吸道、尿生殖道、鼻咽管感染，并用于治療毒素或重金屬陽離子對胃腸道、血液系統(tǒng)、呼吸道、尿生殖道、鼻咽管細胞的損害。因此，本發(fā)明的主旨也是將抗粘附碳水化合物用于制備上述治療用途的食物或藥物制品。
順便提及，所述應(yīng)用并不限于經(jīng)腸道給藥的食物或藥物制品。相反，本發(fā)明使用的抗粘附碳水化合物還可作為活性成分用在經(jīng)非腸道給藥的藥物制品中。因此，對于本發(fā)明制品，可考慮使用這樣的經(jīng)非腸道給藥的藥物產(chǎn)品。
本發(fā)明使用的抗粘附碳水化合物量，包括具有不帶雙鍵末端糖醛酸單元的碳水化合物及具有帶雙鍵末端糖醛酸單元的碳水化合物(不飽和碳水化合物)總計用量是至少8mg/kg體重·天，優(yōu)選8-20mg/kg體重·天，特別優(yōu)選約10mg/kg體重·天，其中所述具有帶雙鍵末端糖醛酸單元的碳水化合物中10-100％末端糖醛酸單元具有雙鍵。這一數(shù)據(jù)特別是針對僅優(yōu)選不飽和抗粘附碳水化合物的情況。
對于本文件中使用的范圍，例如％范圍或mg范圍，所有中間值即位于端點值之間的所有值，以及由這些范圍所覆蓋的所有較窄范圍也都已被公開并要求保護這些數(shù)值范圍。因此，所表示的8-20mg/kg覆蓋了所有的中間值，特別是整數(shù)值，例如9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19mg/kg。因此，所表示的范圍10-100％只是縮寫，表示所有可想象的中間值，特別是整數(shù)值11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98和99％。此用于例如帶雙鍵糖醛酸單元百分率的％表示法。該表示法還類似地覆蓋并公開了所有可想象的較窄范圍。所有涉及重量％、DP或其他單位的范圍表示法同樣適用。
在如下實施例中，描述了優(yōu)選的本發(fā)明制品。實施例1-7涉及含有至少10％帶雙鍵糖醛酸單元的抗粘附碳水化合物的制備。在這種情況下得到的產(chǎn)物是僅由抗粘附碳水化合物組成的制品。實施例8-13描述了不同重量比的抗粘附碳水化合物和益生素碳水化合物混合物的混合物。
實施例1(酶切)10g GENU果膠USP/100(Hercules Co.，Copenhagen，DK)溶于1升50mM NaOAc緩沖液(pH 5.0)中。向該溶液中加入10ml果膠溶酶液(Sigma，Deisenhofen)。在40℃轉(zhuǎn)化24小時。加熱至100℃保持10分鐘，使反應(yīng)終止。用50kDa濾膜濾除酶和未轉(zhuǎn)化的果膠。然后將濾液凍干。
實施例2(化學(xué)切割)10g GENU果膠USP/100(Hercules Co.，Copenhagen，DK)溶于1升0.2M的碳酸銨緩沖液(pH 6.8)中80℃加熱8小時。得到的寡半乳糖醛酸酐以金屬鹽形式(例如鋇鹽)沉淀，過濾，洗滌，干燥，利用DOWEX-50 H+離子交換劑轉(zhuǎn)化為游離酸，并凍干。
實施例3(酶切)10g Laboron果膠X-77 A(C.C.A.Klimmeck，Bad Zwischenahn)溶于1升50mM NaOAc緩沖液(pH 4.5)中。用1ml果膠溶酶液(Gist-Brocades Co.，Seclin，F(xiàn)rance)在45℃消化24小時。加熱至95℃保持5分鐘，使反應(yīng)終止。用BioGel P2或TosoHaas HW 40S凝膠過濾去除酶和未轉(zhuǎn)化的果膠。然后將寡糖級分凍干。
實施例4(酶切)10g Gruenband果膠(Obipektin，Bischofszell，Switzerland)溶于1升50mM NaOAc緩沖液(pH 4.5)中。加入2ml Pentinex 3XL(NovoNordisk Co.，Dittingen，Switzerland)。反應(yīng)液加熱至50℃保持24小時。隨后加熱至95℃保持5分鐘，使反應(yīng)終止。生成的寡半乳糖醛酸酐用乙醇沉淀，洗滌并干燥。
實施例5(化學(xué)切割)10g Gruenband果膠(Obipektin，Bischofszell，Switzerland)溶于1升0.1M的磷酸鈉緩沖液(pH 6.8)中加熱至90℃保持1小時。生成的寡半乳糖醛酸酐用乙醇沉淀，洗滌并干燥。
實施例6(化學(xué)切割)10g GENU果膠USP/100(Hercules Co.，Copenhagen，DK)溶于1升0.1M的磷酸鈉緩沖液(pH 6.8)中加熱至95℃保持1小時。長鏈聚合物用pH 2的鹽酸沉淀，離心后取出。含寡半乳糖醛酸酐的上清液凍干。
實施例7(酶切)10g藻酸鹽溶于1升50mM NaOAc緩沖液(pH 4.6)中。向該溶液中加入10ml藻酸鹽裂解酶液。在40℃切割24小時。加熱至100℃保持10分鐘，使反應(yīng)終止。用50kDa濾膜濾除酶和未轉(zhuǎn)化的果膠。然后將濾液凍干。
實施例8-13為制備除抗粘附碳水化合物外還含有益生素碳水化合物的制品，進行如下步驟根據(jù)實施例1、3、4和/或7中任一例酶切制得或者根據(jù)實施例2、5和/或6中任一例化學(xué)切割制得的10g寡半乳糖醛酸酐，在進行干燥前，按照下表中列出的重量比摻和到10g益生素碳水化合物混合物中并與之混合，所述混合物的組成為9份半乳寡糖(例如，Elixor，BorculoCo.，和Oligomate，Yakult Co.)和1份高分子菊粉(例如，Raftiline HP，Orafti Co.或Frutafit TEX或EXL.，Sensus Co.或Fibruline LC HAT，Cosucra Co.)。
除上述半乳寡糖和菊粉的益生素碳水化合物混合物外，還可使用由如下組分組成的碳水化合物混合物α-半乳寡糖和菊粉，β-半乳寡糖和半乳甘露聚糖，果寡糖和半乳甘露聚糖，果寡糖和阿拉伯半乳聚糖，β-半乳寡糖和阿拉伯半乳聚糖，以及木寡糖和半乳甘露聚糖。
權(quán)利要求
1.一種用于減少和/或阻斷病原物質(zhì)和生物粘附到真核細胞上的藥物制品，其含有一種或幾種在其一個末端上具有末端糖醛酸單元的抗粘附碳水化合物，所述制品的特征在于所述抗粘附碳水化合物的聚合度最大為DP 100，所述抗粘附碳水化合物上存在的末端糖醛酸單元中有10-100％帶有雙鍵，50-100％的所述雙鍵位于末端糖醛酸單元的C4和C5原子之間。
2.權(quán)利要求1的藥物制品，其特征在于具有末端糖醛酸單元的抗粘附碳水化合物中有10-100％包含還原端，并在另一端包含末端糖醛酸單元。
3.權(quán)利要求1的藥物制品，其特征在于抗粘附碳水化合物的末端糖醛酸單元中有10-50％具有雙鍵。
4.權(quán)利要求1的藥物制品，其特征在于其含有幾種具有末端糖醛酸單元的抗粘附碳水化合物，所述抗粘附碳水化合物具有不同的聚合度。
5.權(quán)利要求1的藥物制品，其特征在于所述抗粘附碳水化合物的聚合度為DP 2至DP 40。
6.權(quán)利要求5的藥物制品，其特征在于所述抗粘附碳水化合物的聚合度為DP 2至DP 10。
7.權(quán)利要求1的藥物制品，其特征在于抗粘附碳水化合物的含量以中性糖單元計最大為50％。
8.權(quán)利要求7的藥物制品，其特征在于抗粘附碳水化合物的含量以中性糖單元計為0-30％。
9.權(quán)利要求1的藥物制品，其特征在于所述抗粘附碳水化合物與甲醇酯化的程度至多為75％。
10.權(quán)利要求9的藥物制品，其特征在于所述抗粘附碳水化合物與甲醇酯化的程度為20-50％。
11.權(quán)利要求1的藥物制品，其特征在于除抗粘附碳水化合物之外，所述藥物制品含有由兩種不同的基本可溶的碳水化合物組分A和B組成的益生素碳水化合物混合物，這兩種碳水化合物組分在胃腸道中保持不被消化，在到達大腸時是未被吸收的，所述碳水化合物組分A由至少一種單糖、或至少一種二糖至六糖的寡糖、或者兩種或幾種這樣的糖的混合物組成，所述碳水化合物組分B由一種七糖以上的多糖或者兩種或幾種所述多糖的混合物組成，基于碳水化合物組分總和A+B＝100重量％，所述碳水化合物組分A為5-95重量％，所述碳水化合物組分B為5-95重量％，并且碳水化合物組分A和B的碳水化合物/糖類中至少80重量％具有益生素活性，且構(gòu)成碳水化合物組分A和碳水化合物組分B的碳水化合物不是所述抗粘附碳水化合物。
12.權(quán)利要求11的藥物制品，其特征在于抗粘附碳水化合物與益生素碳水化合物混合物的重量比為1∶99至99∶1。
13.權(quán)利要求12的藥物制品，其特征在于抗粘附碳水化合物與益生素碳水化合物混合物的重量比為1∶10至10∶1。
14.權(quán)利要求13的藥物制品，其特征在于抗粘附碳水化合物與益生素碳水化合物混合物的重量比為1∶1。
15.權(quán)利要求1的藥物制品，其特征在于所述真核細胞是哺乳動物細胞。
16.權(quán)利要求1的藥物制品，其特征在于其含有常規(guī)可藥用載體、稀釋劑和/或其他輔藥。
17.一種用于減少和/或阻斷病原物質(zhì)和生物粘附到真核細胞上的食物制品，其含有一種或幾種在其一個末端上具有末端糖醛酸單元的抗粘附碳水化合物，所述制品的特征在于所述抗粘附碳水化合物的聚合度最大為DP 100，所述抗粘附碳水化合物上存在的末端糖醛酸單元中有10-100％帶有雙鍵，50-100％的所述雙鍵位于末端糖醛酸單元的C4和C5原子之間。
18.權(quán)利要求17的食物制品，其特征在于具有末端糖醛酸單元的抗粘附碳水化合物中有10-100％包含還原端，并在另一端包含末端糖醛酸單元。
19.權(quán)利要求17的食物制品，其特征在于抗粘附碳水化合物的末端糖醛酸單元中有10-50％具有雙鍵。
20.權(quán)利要求17的食物制品，其特征在于其含有幾種具有末端糖醛酸單元的抗粘附碳水化合物，所述抗粘附碳水化合物具有不同的聚合度。
21.權(quán)利要求17的食物制品，其特征在于所述抗粘附碳水化合物的聚合度為DP 2至DP 40。
22.權(quán)利要求21的食物制品，其特征在于所述抗粘附碳水化合物的聚合度為DP 2至DP 10。
23.權(quán)利要求17的食物制品，其特征在于抗粘附碳水化合物的含量以中性糖單元計最大為50％。
24.權(quán)利要求23的食物制品，其特征在于抗粘附碳水化合物的含量以中性糖單元計為0-30％。
25.權(quán)利要求17的食物制品，其特征在于所述抗粘附碳水化合物與甲醇酯化的程度至多為75％。
26.權(quán)利要求25的食物制品，其特征在于所述抗粘附碳水化合物與甲醇酯化的程度為20-50％。
27.權(quán)利要求17的食物制品，其特征在于除抗粘附碳水化合物之外，所述食物制品含有由兩種不同的基本可溶的碳水化合物組分A和B組成的益生素碳水化合物混合物，這兩種碳水化合物組分在胃腸道中保持不被消化，在到達大腸時是未被吸收的，所述碳水化合物組分A由至少一種單糖、或至少一種二糖至六糖的寡糖、或者兩種或幾種這樣的糖的混合物組成，所述碳水化合物組分B由一種七糖以上的多糖或者兩種或幾種所述多糖的混合物組成，基于碳水化合物組分總和A+B＝100重量％，所述碳水化合物組分A為5-95重量％，所述碳水化合物組分B為5-95重量％，并且碳水化合物組分A和B的碳水化合物/糖類中至少80重量％具有益生素活性，且構(gòu)成碳水化合物組分A和碳水化合物組分B的碳水化合物不是所述抗粘附碳水化合物。
28.權(quán)利要求27的食物制品，其特征在于抗粘附碳水化合物與益生素碳水化合物混合物的重量比為1∶99至99∶1。
29.權(quán)利要求28的食物制品，其特征在于抗粘附碳水化合物與益生素碳水化合物混合物的重量比為1∶10至10∶1。
30.權(quán)利要求29的食物制品，其特征在于抗粘附碳水化合物與益生素碳水化合物混合物的重量比為1∶1。
31.權(quán)利要求17的食物制品，其特征在于所述真核細胞是哺乳動物細胞。
32.權(quán)利要求17的食物制品，其特征在于其含有常規(guī)食物成分。
33.權(quán)利要求32的食物制品，其特征在于所述常規(guī)食物成分選自維生素和微量元素。
34.一種具有末端糖醛酸單元的抗粘附碳水化合物在制備用于減少或防止病原體粘附到真核細胞的藥物中的應(yīng)用，所述抗粘附碳水化合物的聚合度最大為DP 100，所述抗粘附碳水化合物上存在的末端糖醛酸單元中有10-100％帶有雙鍵，50-100％的所述雙鍵位于末端糖醛酸單元的C4和C5原子之間。
35.權(quán)利要求34所述的應(yīng)用，其中所述藥物是用于治療胃腸道、血液系統(tǒng)、呼吸道、尿生殖道和鼻咽管感染，并用于治療由毒素或重金屬陽離子引起的胃腸道、血液系統(tǒng)、呼吸道、尿生殖道和鼻咽管細胞損傷的藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于減少和/或阻斷病原物質(zhì)和生物粘附到真核細胞、特別是哺乳動物細胞上的藥物或食物制品。所述制品含有至少一種在其一端具有糖醛酸單元的抗粘附碳水化合物。所述碳水化合物上的末端糖醛酸單元中10－100％帶有雙鍵，該雙鍵主要位于C
文檔編號A61K31/702GK101057853SQ200710100849
公開日2007年10月24日 申請日期2001年2月16日 優(yōu)先權(quán)日2000年2月16日
發(fā)明者貝恩德·施塔爾, 京特·伯姆 申請人:N.V.努特里西阿