專利名稱：水飛薊素口服固體制劑質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及以水飛薊素為主要成分的益肝靈口服固體制劑尤其是以水飛薊素為主要成分的益肝靈滴丸質(zhì)量控制方法，其特征是采用高效液相色譜法檢測(cè)水飛薊素含量，以乙醇溶液或稀鹽酸溶液為溶出介質(zhì)、紫外分光光度法檢測(cè)水飛薊素溶出度。
背景技術(shù)：
水飛薊素系由菊科植物水飛薊屬水飛薊Silybum marianum(L)Gaertn的果實(shí)經(jīng)提取精制所得的黃酮類化合物，主要成分為水飛薊賓，在稀堿溶液中易溶，溶于丙酮，在熱甲醇中溶解，略溶于乙醇，在醋酸乙酯中微溶，在水中不溶。以水飛薊素為主要成分的口服固體制劑有益肝靈滴丸、益肝靈片、益肝靈膠囊、益肝靈顆粒、益肝靈丸等，具有改善肝功能、保護(hù)肝細(xì)胞膜的作用，用于急、慢性肝炎。
由于水飛薊素不溶于水，因此溶出度和含量控制成為評(píng)價(jià)水飛薊素口服固體制劑處方工藝和質(zhì)量穩(wěn)定性的重要指標(biāo)。但是，目前尚未見(jiàn)水飛薊素口服固體制劑溶出度檢測(cè)方法的報(bào)道，含量測(cè)定主要采用紫外分光光度法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度及精確度和靈敏度高，操作簡(jiǎn)便的含量和溶出度檢測(cè)方法，為客觀評(píng)價(jià)和有效控制以水飛薊素為主要成分的益肝靈口服固體制劑尤其是益肝靈滴丸的工藝質(zhì)量提供依據(jù)。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)以水飛薊素為主要成分的益肝靈口服固體制劑尤其是益肝靈滴丸中水飛薊素含量和溶出度質(zhì)量控制方法，具體實(shí)施方法如下1.含量測(cè)定方法照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-0.5mol/L磷酸二氫鉀溶液(10∶10∶1)(用0.2mol/L磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.0)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為288nm。理論板數(shù)按水飛薊賓峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
對(duì)照品溶液的制備 取在105℃干燥至恒重的水飛薊賓對(duì)照品10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(頻率為40KHZ，功率為120W)20min使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取5ml，置25ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 取樣品適量(約相當(dāng)于水飛薊素24mg)，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(功率為120W，頻率為40KHZ)20min使溶解，加甲醇稀釋至刻度，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液，5ml置25ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，依法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
2.溶出度檢測(cè)方法取樣品，照溶出度測(cè)定法(中國(guó)藥典2005年版藥典二部附錄XC)，以稀鹽酸溶液或乙醇溶液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘50/100轉(zhuǎn)，依法操作。經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取經(jīng)105℃干燥至恒重的水飛薊賓對(duì)照品約10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(頻率為40KHZ，功率為120W)20min使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取3ml置50ml量瓶中，加稀鹽酸溶液或乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取供試品溶液與對(duì)照品溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算溶出量，即得。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1高效液相法測(cè)定含量的流動(dòng)相、測(cè)定波長(zhǎng)選擇及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)流動(dòng)相選擇以甲醇∶水∶0.5mol/L磷酸二氫鉀溶液(10∶10∶1)(用0.2mol/L磷酸調(diào)節(jié)pH4.0)。
測(cè)定波長(zhǎng)選擇水飛薊賓的流動(dòng)相溶液在288nm波長(zhǎng)處有最大吸收。
系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇∶水∶0.5mol/L磷酸二氫鉀溶液(10∶10∶1)(用0.2mol/L磷酸調(diào)節(jié)pH4.0)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為288nm，檢測(cè)理論板數(shù)按水飛薊賓計(jì)算為5894。
實(shí)施例2高效液相法測(cè)定含量的線性試驗(yàn)及最低檢測(cè)限試驗(yàn)線性試驗(yàn)取水飛薊賓對(duì)照品約10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(頻率為40KHZ，功率為120W)20min使溶解，并稀釋至刻度。精密吸取上述溶液3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml分別置25ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密吸取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1.含量測(cè)定線性試驗(yàn)結(jié)果(n＝5)

以對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程得A＝27300.52C-1405.57，r＝0.9999。表明在24.41～56.95μg/ml范圍內(nèi)濃度與色譜峰面積線性良好。
最低檢測(cè)限試驗(yàn)當(dāng)信噪比為2∶1時(shí)，最低檢測(cè)濃度為0.24μg/ml。
實(shí)施例3高效液相法含量測(cè)定溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)取線性試驗(yàn)項(xiàng)下濃度為40μg/ml的溶液，在上述色譜條件下分別于0、2、4、6、8小時(shí)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定溶液放置8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果見(jiàn)表2。
表2.含量測(cè)定溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)施例4高效液相法含量測(cè)定重現(xiàn)性試驗(yàn)取益肝靈滴丸一批，照含量測(cè)定項(xiàng)下方法檢測(cè)水飛薊素含量，表明方法重現(xiàn)性良好，結(jié)果見(jiàn)表3。
表3.含量測(cè)定重現(xiàn)性試驗(yàn)(n＝6)

實(shí)施例5高效液相法含量測(cè)定精密度試驗(yàn)取益肝靈滴丸一批分5次不同時(shí)間重復(fù)上述操作，表明方法精確度良好，結(jié)果見(jiàn)表4。
表4.含量測(cè)定精密度試驗(yàn)結(jié)果(n＝5)

實(shí)施例6高效液相法含量測(cè)定回收率試驗(yàn)按處方比例準(zhǔn)確稱取一定量的水飛薊賓對(duì)照品與輔料混合，照含量測(cè)定方法操作，進(jìn)行回收率試驗(yàn)，表明方法準(zhǔn)確度良好，結(jié)果見(jiàn)表5。
表5.含量測(cè)定回收率試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)施例7高效液相色譜法檢測(cè)益肝靈滴丸中水飛薊素含量取益肝靈滴丸樣品三批，照含量測(cè)定方法檢測(cè)水飛薊素含量，結(jié)果見(jiàn)表6。
表6.益肝靈滴丸含量測(cè)定結(jié)果

實(shí)施例8溶出度檢測(cè)溶出介質(zhì)篩選試驗(yàn)對(duì)照品溶液制備取經(jīng)105℃干燥至恒重的水飛薊賓對(duì)照品約10mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(頻率為40KHZ，功率為120W)20min使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液3.0ml，置50ml量瓶中，加5％乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液(1)。
取經(jīng)105℃干燥至恒重的水飛薊賓對(duì)照品約10mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(頻率為40KHZ，功率為120W)20min使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液3.0ml，置50ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液(2)。
試驗(yàn)方法與結(jié)果取樣品，照溶出度測(cè)定法(中國(guó)藥典2005年版二部附錄XC第三法)，分別以0.1mol/L鹽酸溶液、5％乙醇溶液250ml～400ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘50/100轉(zhuǎn)，依法操作，分別經(jīng)15、30、45、60分鐘時(shí)，取溶液10ml，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
取對(duì)照品溶液與供試品溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)，在288nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算溶出量，結(jié)果見(jiàn)表7。
表7.溶出介質(zhì)篩選試驗(yàn)結(jié)果 實(shí)施例9溶出度檢測(cè)波長(zhǎng)選擇試驗(yàn)取水飛薊賓對(duì)照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(頻率為40KHZ，功率為120W)20min使溶解，，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取3ml，置50ml量瓶中，加5％乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在288nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為288nm。
實(shí)施例10溶出度檢測(cè)線性試驗(yàn)取經(jīng)105℃干燥至恒重的水飛薊賓對(duì)照品約5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加10ml乙醇，超聲處理(頻率為40KHZ，功率為120W)20min使溶解，加水稀釋至刻度，精密量取0.5ml，1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置25ml量瓶中，加5％乙醇溶液稀釋至刻度，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算回歸方程式及相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表8。
表8.溶出度檢測(cè)線性試驗(yàn)結(jié)果

以溶液濃度為橫坐標(biāo)、吸收度為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，線性方程為A＝0.039c-0.0357，r＝0.9999表明在2.16μg/ml～21.04μg/ml范圍內(nèi)濃度與吸收度呈良好線性關(guān)系。
實(shí)施例11溶出度檢測(cè)測(cè)定溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取上述濃度為12μg/ml對(duì)照品溶液，照上述方法分別于0、2、4、6、8小時(shí)測(cè)定吸收度，表明測(cè)定溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果見(jiàn)表9。
表9.溶出度檢測(cè)溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)施例12溶出度檢查方法選擇試驗(yàn)對(duì)照品溶液制備取經(jīng)105℃干燥至恒重的水飛薊賓對(duì)照品約10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(頻率為40KHZ，功率為120W)20min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取3ml，置50ml量瓶中，加5％乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。
方法 取樣品，分別照溶出度測(cè)定法[中國(guó)藥典2005年版二部附錄XC第一法(籃法)和第二法(漿法)]，以5％乙醇溶液為溶出介質(zhì)400ml，轉(zhuǎn)速為每分鐘50/100轉(zhuǎn)，經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)在288nm波長(zhǎng)處測(cè)吸收度(A)，計(jì)算溶出量，結(jié)果見(jiàn)表10。
表10.溶出度檢查方法試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)施例13溶出度檢測(cè)方法回收率試驗(yàn)按處方比例準(zhǔn)確稱取水飛薊賓對(duì)照品與輔料，混勻，制成模擬樣品，照上述溶出度檢查方法測(cè)定水飛薊賓含量，進(jìn)行回收率試驗(yàn)，表明方法準(zhǔn)確度良好，結(jié)果見(jiàn)表11。
表11.溶出度檢測(cè)方法回收率試驗(yàn)結(jié)果(n＝9)

實(shí)施例14溶出均一性試驗(yàn)取益肝靈滴丸，照溶出度測(cè)定法(中國(guó)藥典2005年版藥典二部附錄XC第一法)，以5％乙醇溶液400ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，依法操作，分別經(jīng)2、5、10、20、30、45、60分鐘時(shí)，取溶液10ml(及時(shí)補(bǔ)液)，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取經(jīng)105℃干燥至恒重的水飛薊賓對(duì)照品約10mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(頻率為40KHZ，功率為120W)20min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取3.0ml，置50ml量瓶中，加5％乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取供試品溶液與對(duì)照品溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算溶出率，表明溶出均一性良好，結(jié)果見(jiàn)表12。
表12.益肝靈滴丸溶出均一性試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)施例15溶出試驗(yàn)取益肝靈滴丸三批與益肝靈片一批照上述溶出度檢查方法進(jìn)行溶出試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表13。
表13.益肝靈滴丸與益肝靈片溶出試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)施例16溶出度檢測(cè)取益肝靈滴丸五批，照溶出度測(cè)定(中國(guó)藥典2005年版二部附錄X C第一法)，以5％乙醇溶液400ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘50/100轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取經(jīng)105℃干燥至恒重的水飛薊賓對(duì)照品約10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(頻率為40KHZ，功率為120W)20min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取3ml，置50ml量瓶中，加5％乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。分別取對(duì)照品溶液與供試品溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算每丸的溶出量，結(jié)果見(jiàn)表14。
表14.益肝靈滴丸溶出度檢測(cè)結(jié)果

權(quán)利要求
1.以水飛薊素為主要成分的益肝靈口服固體制劑尤其是以水飛薊素為主要成分的益肝靈滴丸質(zhì)量控制方法，其特征在于它是采用高效液相色譜法檢測(cè)水飛薊素含量，以乙醇溶液或稀鹽酸溶液為溶出介質(zhì)、紫外分光光度法檢測(cè)水飛薊素溶出度的方法。
2.權(quán)利要求1所述的以水飛薊素為主要成分的益肝靈口服固體制劑尤其是以水飛薊素為主要成分的益肝靈滴丸質(zhì)量控制方法，其特征是照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D高效液相色譜法檢測(cè)水飛薊素含量的方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-0.5mol/L磷酸二氫鉀溶液(10∶10∶1)(用0.2mol/L磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.0)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為288nm，理論板數(shù)按水飛薊賓峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備 取在105℃干燥至恒重的水飛薊賓對(duì)照品10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(頻率為40KHZ，功率為120W)20min使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得；供試品溶液的制備 取樣品適量(約相當(dāng)于水飛薊素24mg)，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(功率為120W，頻率為40KHZ)20min使溶解，加甲醇稀釋至刻度，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液，5ml置25ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法 精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，依法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
3.權(quán)利要求所述的以水飛薊素為主要成分的益肝靈口服固體制劑尤其是以水飛薊素為主要成分的益肝靈滴丸質(zhì)量控制方法，其特征是照中國(guó)藥典2005年版二部附錄X C溶出度測(cè)定法檢測(cè)水飛薊素溶出度的方法取樣品，照溶出度測(cè)定法(中國(guó)藥典2005年版藥典二部附錄X C)，以稀鹽酸溶液或乙醇溶液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘50/100轉(zhuǎn)，依法操作；經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取經(jīng)105℃干燥至恒重的水飛薊賓對(duì)照品約10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(頻率為40KHZ，功率為120W)20min使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取3ml置50ml量瓶中，加稀鹽酸溶液或乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；取供試品溶液與對(duì)照品溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄V A)，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算溶出量，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及以水飛薊素為主要成分的益肝靈口服固體制劑尤其是以水飛薊素為主要成分的益肝靈滴丸質(zhì)量控制方法，其特征是采用高效液相法檢測(cè)水飛薊素含量，以乙醇溶液或稀鹽酸溶液為溶出介質(zhì)、紫外分光光度法檢測(cè)水飛薊素溶出度；該方法具有專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度及精確度和靈敏度高、操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，對(duì)有效控制以水飛薊素為主要成分的益肝靈口服固體制劑工藝質(zhì)量具有重要意義。
文檔編號(hào)A61P1/16GK101062031SQ20071010662
公開日2007年10月31日 申請(qǐng)日期2007年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月22日
發(fā)明者錢進(jìn), 陶琳, 林亞倫, 劉冬梅, 鄺振英, 劉孝樂(lè) 申請(qǐng)人:南昌弘益科技有限公司