專利名稱：：酪酸梭菌在制備防治類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎微生物制劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及酪酸梭菌的藥物新用途，具體涉及酪酸梭菌在制備預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎微生物制劑中的應(yīng)用，其中所述酪酸梭菌作為活性成份制成活菌制劑，屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoidarthritis,RA)和強(qiáng)直性脊柱炎(Ankylosingspondylitis,AS)是風(fēng)濕性疾病中發(fā)病率最高的兩種自身免疫性疾病，屬于關(guān)節(jié)的一種慢性、炎癥性和破壞性疾病，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，致殘率很高。病因至今尚未完全闡明，涉及遺傳、感染、免疫調(diào)節(jié)等多種因素，屬于難治性疾病。目前臨床上尚缺乏根治的方法以及預(yù)防本病的措施，治療本病的目的是①減輕或消除患者因關(guān)節(jié)炎引起的關(guān)節(jié)腫痛、壓痛、晨僵或關(guān)節(jié)外的癥狀；②控制疾病的發(fā)展，防止和減少關(guān)節(jié)骨的破壞，達(dá)到較長(zhǎng)時(shí)間的臨床緩解，盡可能保持受累關(guān)節(jié)的功能。目前治療RA和AS的藥物有非甾體類抗炎藥(NSAIDs)、改善病情抗風(fēng)濕藥(DMARDs)、免疫抑制劑、中成藥、糖皮質(zhì)激素等。這些藥物普遍存在的問(wèn)題是隨著用藥時(shí)間的延長(zhǎng)，副作用隨之暴露出來(lái)，有些品種還引發(fā)了較為嚴(yán)重的不良反應(yīng)事件。2004年1月份以來(lái)，5名曾服用過(guò)法國(guó)安萬(wàn)特公司愛(ài)諾華的日本人患上了間質(zhì)性肺炎和肺纖維癥，并最終不治身亡，其中有4人是年齡在57歲到71歲之間的中老年人。2004年10月1日起，默沙東公司開(kāi)始在全球范圍內(nèi)回收治療關(guān)節(jié)炎藥物"萬(wàn)絡(luò)"(藥品通用名為羅非昔布)，原因是該藥會(huì)增加服用者心臟病和中風(fēng)的發(fā)病幾率。2004年11月9日，F(xiàn)DA和雅培(Abbott)公司向醫(yī)藥人員發(fā)出信函，告知腫瘤壞死因子(TNF-a)阻斷劑的標(biāo)簽中加入警告標(biāo)示，這類藥物包括阿達(dá)木單抗(adalimumab)，警告稱使用TNF—a阻斷劑和白介素-l(IL-1)時(shí)有發(fā)生嚴(yán)重感染的潛在危險(xiǎn)。2005年4月7日，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)發(fā)布所有消炎止痛藥的最新用藥指導(dǎo)，就如何使用消炎止痛藥發(fā)表了聲明，聲明中指出綜合現(xiàn)有的研究數(shù)據(jù)，所有的非甾體消炎藥均有潛在的心血管風(fēng)險(xiǎn)，而這些藥中就包括我們比較常用的扶他林、芬必得、西樂(lè)葆等。SFDA己要求這些藥品生產(chǎn)廠家在其說(shuō)明書(shū)中加入黑框警示。由于RA和AS患者需要長(zhǎng)時(shí)間用藥，因此尋找毒副作用小，甚至沒(méi)有毒副作用的藥物顯得尤為重要，本發(fā)明的微生物制劑不但能緩解癥狀、減緩病情進(jìn)展，對(duì)于早期患者可以治愈，而且沒(méi)有任何毒副作用，可以長(zhǎng)時(shí)間服用，由于所選微生物菌種的獨(dú)有特性，其治療效果是其它微生物制劑所沒(méi)有的，特申請(qǐng)此發(fā)明專利。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人通過(guò)深入的基礎(chǔ)和臨床研究發(fā)明以酪酸梭菌為主要藥物活性成份制成藥物、保健食品或飲品，長(zhǎng)期應(yīng)用可以有效預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎，緩解癥狀、減緩病情進(jìn)展，對(duì)于早期患者可以治愈，而且酪酸梭菌屬于益生菌，沒(méi)有任何毒副作用，可以長(zhǎng)時(shí)間服用。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎均是由于體液免疫和細(xì)胞免疫異常，導(dǎo)致的免疫和炎癥損傷，酪酸梭菌主要是通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能恢復(fù)正常、下調(diào)炎癥因子過(guò)度表達(dá)來(lái)預(yù)防和治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎，療效顯著，具體作用機(jī)制主要為以下幾個(gè)方面1、調(diào)節(jié)免疫功能恢復(fù)正常，提高免疫系統(tǒng)耐受性研究表明RA和AS患者的淋巴細(xì)胞免疫功能紊亂，IgG表達(dá)水平升高。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)酪酸梭菌能使降低的T-淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率升高，使T-淋巴細(xì)胞免疫功能恢復(fù)正常，同時(shí)能下調(diào)IgG升高的表達(dá)水平，使IgG表達(dá)恢復(fù)正常。2、消除炎癥RA和AS患者TNF-a、IL-8等致炎癥因子水平高于正常人，使各關(guān)節(jié)處于慢性炎癥狀態(tài)，TNF-a更進(jìn)一步破壞關(guān)節(jié)軟骨和骨，結(jié)果造成關(guān)節(jié)畸形，目前開(kāi)發(fā)的抗TNF-a藥物治療RA和AS取得很好的療效，但有很大的副作用。酪酸梭菌通過(guò)分泌酪酸調(diào)控核因子-KB的活性，從而下調(diào)TNF-a、IL-8等致炎癥因子的過(guò)度表達(dá)，使之恢復(fù)到正常水平，且沒(méi)有任何副作用。3、分泌酪酸菌素，預(yù)防腸道感染感染與強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)生有密切關(guān)系，而感染中腸道感染又占有很重要的位置。有學(xué)者對(duì)20例強(qiáng)直性脊柱炎患者進(jìn)行纖維結(jié)腸鏡檢査及活體組織檢査，結(jié)果顯示強(qiáng)直性脊柱炎病人55%有明顯的腸道非特異性炎癥改變，其中伴隨腹瀉的占27.3%，結(jié)腸粘膜活檢示陽(yáng)性炎癥改變者達(dá)65%，病變部位累及結(jié)腸和直腸者占63.6%。而強(qiáng)直性脊柱炎骶髂關(guān)節(jié)的病變及脊柱上行性受累的病變位置恰好直接毗鄰直腸和結(jié)腸。腸道感染是強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病和病情進(jìn)展的重要誘因，酪酸梭菌能分泌酪酸菌素，抑制腸出血性大腸桿菌、痢疾志賀菌、傷寒沙門菌和金黃色葡萄球菌等腸道有害菌，預(yù)防腸道感染，從而預(yù)防強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病和減緩病情進(jìn)展。4、分泌酪酸(丁酸)，修復(fù)腸粘膜，改變腸粘膜通透性研究發(fā)現(xiàn)強(qiáng)直性脊柱炎患者的腸粘膜通透性高于正常人，并隨病情的加重而升高，因此，腸粘膜通透性的升高可能誘發(fā)了AS的發(fā)病或促進(jìn)了病情的進(jìn)展。腸粘膜所需能量的70%來(lái)源于酪酸，酪酸是腸粘膜細(xì)胞的主要能量來(lái)源和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，能為腸提供代謝能量，促進(jìn)腸上皮細(xì)胞增殖與粘膜生長(zhǎng)。同時(shí)，酪酸能刺激介導(dǎo)腸上皮細(xì)胞增殖和腸粘膜生長(zhǎng)的胃腸激素的生成，如胃泌素、腸高糖素、酪酪肽等。酪酸梭菌進(jìn)入腸道能分泌大量酪酸，從而改變腸粘膜的通透性，減少AS發(fā)病和病情進(jìn)展的誘發(fā)因素。5、提高機(jī)體免疫力感染因素與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病相關(guān)，包括細(xì)菌、支原體、病毒、原蟲(chóng)等感染之后，在機(jī)體內(nèi)作為持續(xù)存在的抗原引起連續(xù)的免疫反應(yīng)。酪酸梭菌能促進(jìn)單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬功能，增加血清溶血素的生成，升高白細(xì)胞等，提高機(jī)體免疫力，從而預(yù)防感染，減少發(fā)病和病情進(jìn)展的誘發(fā)因素。6、減少腸道毒素入血，避免對(duì)關(guān)節(jié)的進(jìn)一步損傷酪酸梭菌能分泌酪酸菌素，抑制腸出血性大腸桿菌、痢疾志賀菌、傷寒沙門菌和金黃色葡萄球菌等腸道有害菌，消除產(chǎn)毒源，減少腸道氨、胺、吲哚、糞臭素等腸道毒素，避免其吸收入血對(duì)關(guān)節(jié)造成進(jìn)一步損傷。本發(fā)明所述酪酸梭菌選自但不限于酪酸梭菌f67o^2^/i'鵬to^ri'c鵬入CGMCC、保存編號(hào)0313.1，其他的酪酸梭菌均可以。本發(fā)明所述的酪酸梭菌指活生物個(gè)體。本發(fā)明以酪酸梭菌為主要活性成份制成的制劑，可以是單獨(dú)以酪酸梭菌為活性成份制成相關(guān)劑型的活菌制劑，也可以是與其他活性成份組合制成相關(guān)劑型的活菌制劑，起到協(xié)同治療作用，以提高治療效果。本發(fā)明是以有效劑量的酪酸梭菌根據(jù)上面所述作為主要活性成份，按照一定的制劑工藝，加入常規(guī)的賦性劑、調(diào)味劑、崩解劑、防腐劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、黏合劑、溶劑、增稠劑、增溶劑等輔料，制成任何一種適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液體制劑、其他液體制劑或灌腸劑等所需劑型。本發(fā)明所指有效劑量是指以酪酸梭菌根據(jù)上面所述作為主要活性成份制成的最終固體活菌制劑包含的總活菌數(shù)一般不低于lX105CFU/g，一般在IX107CFU/g以上，最高可達(dá)到1X1012CFU/g或1X1012CFU/g以上。本發(fā)明所指有效劑量是指以酪酸梭菌根據(jù)上面所述作為主要活性成份制成的最終液體活菌制劑包含的總活菌數(shù)一般不低于lX105CFU/mL，一般在IX107CFU/mL以上，最高可達(dá)到1X1012CFU/mL或1X1012CFU/mL以上。本發(fā)明優(yōu)選的制劑工藝為，先在液體培養(yǎng)基中接種菌種，進(jìn)行培養(yǎng)或多級(jí)擴(kuò)增培養(yǎng)，然后將液態(tài)培養(yǎng)物離心，收集濕菌泥，并將所述菌泥干燥、粉碎，得到干燥菌粉。將所得干燥菌粉與藥用載體混合，制成最終劑型。由于本發(fā)明首次公開(kāi)了以酪酸梭菌為主要活性成份在制備預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎微生物制劑中的應(yīng)用，因此，以酪酸梭菌作為藥物活性成份與輔料組合制成藥劑，只要是該藥劑用于預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的酪酸梭菌在制成任何一種劑型時(shí)，均具有預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎的作用。任何藥劑，如果其組份中含有酪酸梭菌成份制備成藥，在其包裝或說(shuō)明書(shū)等標(biāo)識(shí)上或者在其他任何宣傳品上只要注明或提示具有預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎的作用，則落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的酪酸梭菌屬于益生菌。因此，也可以將酪酸梭菌制成保健食品或飲品。將酪酸梭菌制成的保健食品或飲品，如果在其包裝或說(shuō)明書(shū)等標(biāo)識(shí)上或者在其他任何宣傳品上只要注明或提示具有預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎的作用，則落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。具體實(shí)施方式藥物制備例說(shuō)明以酪酸梭菌為藥物活性成份制成膠囊劑為例，說(shuō)明制備方法。制備方法不只局限于以下的方法，公知的方法均可以。藥物制備實(shí)施例1、酪酸梭菌活菌菌粉制備取酪酸梭菌活菌菌種管一支，溶于已滅菌裝有10ml生理鹽水和玻璃珠的100ml三角瓶中，活化10分鐘，用1ml無(wú)菌吸管吸取1ml菌懸液接種裝有50ml擴(kuò)增培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，置搖擺床內(nèi)37i:恒溫振蕩(190rpm)培養(yǎng)24小時(shí)，轉(zhuǎn)接裝有450ml擴(kuò)增培養(yǎng)基2500ml檔板三角瓶中，37。C恒溫振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，鏡檢無(wú)雜菌后再轉(zhuǎn)接于裝有4.5L擴(kuò)增培養(yǎng)基的種子罐中，厭氧培養(yǎng)(充氣量3:1)24小時(shí)，鏡檢無(wú)雜菌后轉(zhuǎn)接有45L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，37。C氧培養(yǎng)24小時(shí)，鏡檢芽孢率達(dá)80%以上，停止培養(yǎng)。用連續(xù)離心機(jī)，12000rpm離心。收集濕菌泥，稱重，按l:1(w/v)添加適量脫脂奶粉等保護(hù)劑后，干燥，粉碎，常溫保存?zhèn)溆谩Ｋ幬镏苽鋵?shí)施例2、酪酸梭菌活菌膠囊制備將上述組份中13組中充分拌勻，然后利用常規(guī)灌裝膠囊技術(shù)按單位劑量制成膠囊。療效觀察試驗(yàn)例1、酪酸梭菌調(diào)節(jié)免疫和炎癥因子表達(dá)的研究1實(shí)驗(yàn)材料與方法l.l實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠，180-220g，購(gòu)自維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，清潔級(jí)，合格證號(hào)為SCXP(京)(2002)—0003。1.2實(shí)驗(yàn)藥物:酪酸梭菌(CGMCCNo.0313.1株，107CFU/ml)由青島東海藥業(yè)有限公司提供。1.3實(shí)驗(yàn)試劑弗氏完全佐劑(sigma)，MTT(sigma)，伴刀豆素球蛋白(ConA)(Sigma);脂多糖(LPS)(Sigma);MTT(Sigma)，購(gòu)自北京舒伯偉化工儀器有限責(zé)任公司；1640培養(yǎng)液(Gibco);牛結(jié)腸粘膜蛋白凍干粉(自制)；IL-8ELISA試劑盒(BD);TNF-aELISA試劑盒(Ebioscience);大鼠IgG參考血清；兔抗大鼠IgG抗血清，外購(gòu)。2實(shí)驗(yàn)方法2.1牛結(jié)腸粘膜蛋白凍干粉的制備取新生小牛結(jié)腸，刮取牛結(jié)腸粘膜，反復(fù)凍溶法獲取牛結(jié)腸粘膜蛋白，純化濃縮，真空凍干后于4"C保存?zhèn)溆谩?.2免疫異常性大鼠模型的建立取牛結(jié)腸粘膜蛋白與完全弗氏佐劑(1:1)制成完全抗原，選用體重在200±20g的SD大鼠，造模大鼠首次每只足跖內(nèi)注射抗原4mg，于第10、17、24、31天分別于足跖、背部、腹股溝、腹腔內(nèi)注射抗原6mg，最后l次注射不加佐劑，至血清IgG達(dá)到一定效價(jià)。2.3動(dòng)物分組及治療設(shè)正常對(duì)照組(8只)。造模成功后，將造模大鼠隨機(jī)分組，1)模型對(duì)照組(10只)，給予生理鹽水灌胃；2)酪酸梭菌(107CFU/ml)治療組(10只)。每次lml/100g—本重，l次/天，灌胃，連續(xù)給生理鹽水或治療藥21天。成份酪酸梭菌活菌菌粉微晶纖維素葡萄糖重量百分比20.00份40.00份40.00份2.4指標(biāo)測(cè)定給生理鹽水或藥物至第21天后，斷頭處死動(dòng)物，測(cè)定模型對(duì)照組和酪酸梭菌治療組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、IL-8、TNF-a和IgG等指標(biāo)。2.4.1淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率無(wú)菌環(huán)境下取大鼠腸系膜淋巴細(xì)胞，過(guò)200目細(xì)胞篩，無(wú)菌PBS洗漆兩次，1000rpm，5min。用完全1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為5X105個(gè)/ml，每孔100ul，接種于96孔圓底細(xì)胞板中，同時(shí)加ConA(終濃度為3ng/ml)或LPS(終濃度為5ug/ml)，100u1/孔。另設(shè)定空白對(duì)照孔(未加誘導(dǎo)劑)，37°C、5XC02孵育72h，培養(yǎng)結(jié)束前4h，加MTT(5mg/ml)20u1，培養(yǎng)結(jié)束后，領(lǐng)淀540nm處測(cè)定0D值，計(jì)算淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)。淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)(SI):刺激組OD值/未刺激組OD值藥物。2.4.2IL-8、TNF-(i和IgG斷頭處死大鼠，取血，4。C靜置過(guò)夜，3000rpm，20min離心，取上清，分裝，放于-20。C待測(cè)。使用ELISA試劑盒，按照說(shuō)明書(shū)，測(cè)定大鼠血清中大鼠IL-8及TNF-a的含量。使用單向免疫擴(kuò)散法測(cè)定血清中IgG的含量。2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理各組間的數(shù)據(jù)差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性檢驗(yàn)，用t-^w/e/7廣t檢驗(yàn)，差異顯著性界限為p〈0.05。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.l淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率建立免疫異常性大鼠模型成功后，B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率升高，但與正常對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，經(jīng)酪酸梭菌21天治療后B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率與模型對(duì)照組比較相對(duì)降低，但也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率降低，與正常對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P〈0.05)，經(jīng)酪酸梭菌21天治療后T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率均比模型對(duì)照組的顯著升高(P〈0.01)，見(jiàn)表l。表1酪酸梭菌對(duì)免疫異常性大鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率變化的影響(I±s)組別刺激指數(shù)(si)B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率正常對(duì)照組1.15±0.261.03±0.20模型對(duì)照組1.24±0.180.59±0.20酪酸梭菌治療組1.14±0.191.25±0.493.2血清IL-8含量模型對(duì)照組大鼠血清中的IL-8含量比正常對(duì)照組的顯著升高(P<0.05，)，酪酸梭菌治療組大鼠治療21天后血清中的IL-8含量與模型對(duì)照組相比顯著降低(P<0.05)，見(jiàn)表2。表2酪酸梭菌對(duì)免疫異常性大鼠血清IL-8含量變化的影響(歹土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>3.3血清TNF-a含量模型對(duì)照組大鼠血清中的TNF-a含量與正常對(duì)照組比較顯著升高(P〈0.05)，酪酸梭菌治療組大鼠治療21天后血清中的TNF-a含量與模型對(duì)照組相比顯著降低(P〈0.05)，見(jiàn)表3。表3酪酸梭菌對(duì)免疫異常性大鼠血清TNF-a含量變化的影響(叉土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>3.4血清IgG含量模型對(duì)照組大鼠血清中的IgG含量比正常對(duì)照組的顯著升高(P<0.05)，酪酸梭菌治療組大鼠治療21天后血清中的IgG含量與模型對(duì)照組相比顯著降低(P<0.05)，見(jiàn)表4。表4酪酸梭菌對(duì)免疫異常性大鼠血清IgG含量變化的影響(5F±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>4討論通過(guò)免疫的方法建立的免疫異常性大鼠模型相當(dāng)于人類的自身免疫性疾病，模型建立后淋巴細(xì)胞免疫功能紊亂，IgG、IL-8、TNF-a表達(dá)水平升高，與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎的變化趨勢(shì)一致，通過(guò)酪酸梭菌治療21天后升高的B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率降低，降低的T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率升高，IgG含量降低，IL_8、TNF-a等致炎癥因子含量降低，各項(xiàng)指標(biāo)由于治療時(shí)間短雖然沒(méi)有完全恢復(fù)到正常水平，但向正常趨勢(shì)變化，有的指標(biāo)經(jīng)酪酸梭菌治療后甚至接近正常水平，隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，一定會(huì)使免疫功能和致炎癥因子的表達(dá)調(diào)節(jié)到正常水平。免疫功能和致炎癥因子的表達(dá)恢復(fù)正常，可以緩解RA和AS患者的癥狀和減緩病情進(jìn)展，甚至使早期的RA和AS患者治愈。療效觀察試驗(yàn)例2、口服酪酸梭菌活菌膠囊治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎療效觀察1對(duì)象與方法1.1病例資料經(jīng)臨床明確診斷為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的患者，共8例，平均年齡40歲，病史在2年15年。臨床癥狀為關(guān)節(jié)腫脹、疼痛、晨僵或有關(guān)節(jié)摩擦音。1.2給藥方法口服酪酸梭菌活菌膠囊，每粒420mg(含酪酸梭菌活菌數(shù)不低于l.OX107cfu/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3粒/次，一天23次。以上療程均為1224周。1.3觀察方法設(shè)自身對(duì)照，觀察治療前后關(guān)節(jié)腫脹、疼痛、晨僵或關(guān)節(jié)摩擦音的改善情況。1.4療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(按國(guó)家中醫(yī)藥管理局1994年發(fā)布的《中醫(yī)病證診斷標(biāo)準(zhǔn)》)。痊愈關(guān)節(jié)疼痛腫脹消失、晨僵消除；好轉(zhuǎn)關(guān)節(jié)疼痛腫脹消失，偶有痛感，晨起稍有僵硬；無(wú)效關(guān)節(jié)疼痛腫脹、晨僵同治療前。2結(jié)果判定用口服酪酸梭菌活菌膠囊治療8例中，痊愈5例，好轉(zhuǎn)3例，無(wú)效0例，總有效率100%，且未見(jiàn)任何不良反應(yīng)。典型病例劉XX，女，55歲，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎合并慢性腹瀉10多年，慢性腹瀉可能是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的誘因。應(yīng)用非甾體類抗炎藥物緩解癥狀、減緩病情進(jìn)展，用藥時(shí)癥狀減輕，停藥就復(fù)發(fā)，并遭受抗炎藥副作用的折磨。后口服酪酸梭菌活菌膠囊治療，3粒/次，3次/天，共服用24周，慢性腹瀉治愈，關(guān)節(jié)疼痛腫脹消失、晨僵消除，且未發(fā)現(xiàn)任何不良反應(yīng)，停藥1個(gè)月后復(fù)査，無(wú)復(fù)發(fā)。3討論目前治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物很多，但均存在各種副作用制約臨床的應(yīng)用，有的副作用甚至可以導(dǎo)致死亡，尤其類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者需要長(zhǎng)時(shí)間服藥，病人很難耐受副作用。酪酸梭菌通過(guò)調(diào)節(jié)免疫和炎癥因子表達(dá)、預(yù)防感染等多個(gè)方面發(fā)揮作用，療效顯著，且沒(méi)有任何毒副作用，病人可以長(zhǎng)時(shí)間服用，并且酪酸梭菌除可以制成藥品外，還可以制成保健品或飲品應(yīng)用治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。療效觀察試驗(yàn)例3、口服酪酸梭菌活菌膠囊治療強(qiáng)直性脊柱炎療效觀察1對(duì)象與方法1.1病例資料經(jīng)臨床明確診斷為強(qiáng)直性脊柱炎的患者，共6例，平均年齡32歲，病史在1年10年。臨床癥狀為腰脊疼痛，遇寒加重，脊柱僵硬，俯仰不利，或有雙髖部痛，雙腿活動(dòng)受限，畏寒肢冷，乏力多汗。1.2給藥方法口服酪酸梭菌活菌膠囊，每粒420mg(含酪酸梭菌活菌數(shù)不低于1.0X107cfu/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3粒/次，一天34次。以上療程均為1224周。1.3觀察方法設(shè)自身對(duì)照，觀察治療前后腰脊疼痛、雙髖部痛等臨床癥狀的改善情況。1.4療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合研究會(huì)風(fēng)濕類疾病專業(yè)委員會(huì)1987年8月討論修訂的療效標(biāo)準(zhǔn)制定。顯著好轉(zhuǎn)經(jīng)治療后受累部位疼痛消失，活動(dòng)功能改善或恢復(fù)正常，血沉恢復(fù)正常，x線示骨質(zhì)病變有改善或無(wú)發(fā)展，恢復(fù)日常勞動(dòng)；好轉(zhuǎn)受累部位疼痛減輕，活動(dòng)范圍增大，血沉降低；無(wú)效經(jīng)治療3個(gè)療程(90天)以上，受累部位癥狀無(wú)改善。2結(jié)果判定用口服酪酸梭菌活菌膠囊治療6例中，顯著好轉(zhuǎn)4例，好轉(zhuǎn)2例，無(wú)效0例，總有效率100%，且未見(jiàn)任何不良反應(yīng)。3討論強(qiáng)直性脊柱炎病程長(zhǎng)病情重，需要長(zhǎng)時(shí)間吃藥，尚無(wú)根治的辦法，目前治療主要緩解癥狀，保持良好姿勢(shì)和減緩病情進(jìn)展。目前治療藥物雖很多，但均存在各種副作用制約臨床的應(yīng)用，有的副作用甚至可以導(dǎo)致死亡，因此目前療效好和沒(méi)有副作用的藥物是臨床最需要的。目前認(rèn)為強(qiáng)直性脊柱炎是遺傳因素和腸道因素相互作用所致，是腸道感染和腸粘膜通透性增加等因素在遺傳因素的基礎(chǔ)上引起免疫異常誘發(fā)強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病和使病情進(jìn)展。酪酸梭菌一方面，調(diào)節(jié)免疫恢復(fù)正常和下調(diào)炎癥因子表達(dá)，緩解癥狀；另一方面，抑制腸道有害菌，預(yù)防感染，分泌酪酸修復(fù)腸粘膜，改變腸粘膜通透性，恢復(fù)腸道健康，消除強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病和病情進(jìn)展的誘發(fā)因素。療效顯著，且沒(méi)有任何毒副作用，病人可以長(zhǎng)時(shí)間服用，并且酪酸梭菌除可以制成藥品外，還可以制成保健品或飲品應(yīng)用治療強(qiáng)直性脊柱炎。本發(fā)明在實(shí)施過(guò)程中所使用的微生物菌種已分別于1997年7月28日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所郵編100080)保藏，但本發(fā)明所述的酪酸梭菌并不局限于這種微生物菌株。分類命名酪酸梭菌67a^rA/z'，幻化rj'c，保存編號(hào)0313.1。上述微生物菌株經(jīng)該微生物中心檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果均為存活。權(quán)利要求1、酪酸梭菌在制備預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎微生物制劑中的應(yīng)用。2、按權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于酪酸梭菌包含但不限于酪酸梭菌CGMCC0313.1株。3、按權(quán)利要求l所述應(yīng)用，其特征在于將有效劑量的權(quán)利要求1所述的酪酸梭菌和藥學(xué)上可接受的不同載體制成所需要?jiǎng)┬汀?、按權(quán)利要求l所述應(yīng)用，其特征在于微生物制劑可以是酪酸梭菌單獨(dú)作為活性成份制成活菌制劑，也可以是酪酸梭菌與其他活性成份組合制成活菌制劑。5、按權(quán)利要求l所述應(yīng)用，其特征在于微生物制劑包含但不限于藥品、保健食品、飲品。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了酪酸梭菌的藥物新用途，具體涉及酪酸梭菌在制備預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎微生物制劑中的應(yīng)用，酪酸梭菌選自但不限于酪酸梭菌(Clostridiumbutyricum)、CGMCC、保存編號(hào)0313.1。酪酸梭菌以活菌的形式和藥學(xué)上可接受的不同載體制成片劑、膠囊劑、散劑、液體制劑等所需要的各種劑型，酪酸梭菌屬于益生菌，沒(méi)有任何毒副作用，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎患者可以通過(guò)口服等方式長(zhǎng)期應(yīng)用，緩解癥狀、減緩病情進(jìn)展和預(yù)防發(fā)病，對(duì)于早期患者甚至可以治愈。文檔編號(hào)A61K35/66GK101310730SQ20071010666公開(kāi)日2008年11月26日申請(qǐng)日期2007年5月27日優(yōu)先權(quán)日2007年5月27日發(fā)明者崔云龍,李洪福申請(qǐng)人:青島東海藥業(yè)有限公司;北京東方百信生物技術(shù)有限公司