專利名稱：：二氫楊梅素注射劑,粉針劑及其制備方法二氫楊梅素注射劑，粉針劑及其制備方法研究領域:本方面屬于治療肝炎、保肝護肝，鎮(zhèn)痛，降血脂，祛痰，抗菌消炎和提高免疫力的天然藥物領域。
背景技術：
：二氫楊梅素是一種已知的化合物(參見WalterKarrerr,BirkhauserVerlag,BasselundStuttgart(1958),P.652,NO:1640)。但該文獻沒有對二氫楊梅素的活性和用途進行研究。本申請人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素具有治療肝炎、保肝護肝，鎮(zhèn)痛，降血脂，祛痰，抗菌消炎和提高免疫力作用。二氫楊梅素可以從葡萄科植物中得到，也可以通過化學領域常規(guī)方法得到。本發(fā)明目的之一是提供含有二氫楊梅素和藥學可接受的附加劑、溶媒所制備的注射劑，可以是液體注射劑，也可以注射用粉針劑。本發(fā)明目的之一是提供一種二氫楊梅素注射劑的制備方法。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的通過各種溶劑(水和/或有機溶劑)煎煮葡萄科植物，煎煮一次或多次，煎煮液經(jīng)過濾，濃縮冷卻至浸膏，再用熱水溶解，乘熱過濾，濾液直接用色譜分離，得到二氫楊梅素溶液。洗脫液回收有機溶劑，調節(jié)適當?shù)膒H值，過濾，加入附加劑，過濾、罐裝，.滅菌；或在無菌條件下冷凍干燥，分裝，即得。本發(fā)明可以使用所有葡萄科植物，優(yōu)選使用蛇葡萄屬，更優(yōu)選粵蛇葡萄，棟葉玉葡萄，大葉蛇葡萄，顯齒蛇葡萄，白蘞，山葡萄和東北蛇葡萄等。煎煮所用溶液優(yōu)選水，醇類，酯類，酮類，醚類和強極性有機溶劑，更優(yōu)選低級鏈烷醇，低級脂肪酸酯，具有3—12個碳原子的酮和醚和/或水，最優(yōu)選甲醇，乙醇，丙醇，異丙醇，正丁醇，異丁醇，仲丁醇，叔丁醇，乙酸乙酯，乙酸甲酯，甲酸乙酯，丙酮，甲基乙基酮，乙醚，甲基乙基醚，甲基叔丁基醚，二氯甲烷，氯仿，四氯甲烷，二甲亞砜，二甲基甲酰胺和/或水等。色譜分離填料可以是聚酰胺，聚丙烯酰胺，大孔吸附樹脂，陽離子交換樹脂，陰離子交換樹脂，優(yōu)選聚酰胺，聚丙烯酰胺，大孔吸附樹脂，更優(yōu)選聚酰胺。色譜分離所使用的洗脫液可以是低級醇水溶液，低級酮水溶液，低級醚水溶液，低級酯水溶液，其中有機溶劑優(yōu)選甲醇，乙醇，正丙醇，異丙醇，丙酮，乙酸乙酯，甲酸乙酯或丙酯，乙酸甲酯，更優(yōu)選甲醇，乙醇，丙酮，乙酸乙酯?？梢允翘荻认疵摗Ｏ疵撍俣却蠹s10ml/min。由于二氫楊梅素在水中的溶解度低，又極易被氧化，所以采用現(xiàn)有的注射劑制備方法很難保證制劑的穩(wěn)定，制備的注射劑溶液顏色加深，有效成分結構發(fā)生改變。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)使用復合溶劑，即在注射用水中加入一定比例的非水溶劑，增加原料藥的溶解度，同時可增加有效成分的穩(wěn)定性。非水溶劑可以選擇PEG200，PEG400，PEG600，丙二醇，丙三醇中的一種或幾種。為了防止二氫楊梅素的氧化，可以在制劑中加入BHA,BHT，維生素C，維生素E中的一種或幾種作為抗氧化劑。同時，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，制劑的PH值對穩(wěn)定性有很關鍵的影響，經(jīng)過考察，pH值在3.50-4.00范圍內，才能保證溶液的穩(wěn)定。本發(fā)明目的之一是提供一種二氫楊梅素注射用粉針劑的制備方法。二氫楊梅素注射液的溶劑是采用復合溶劑保證制劑的穩(wěn)定性，由于復合溶劑會降低溶液的共熔點，使溶液難以凍干，故注射液中的復合溶劑在凍干粉針劑中不適合，需選擇增溶劑。本發(fā)明使用羥丙基e—環(huán)糊精(HPCD)包埋法增溶，即二氫楊梅素稱和HPCD，用適量的乙醇制備包合物，再加適量的甘露醇，凍干，即得。本發(fā)明的另一個目的是提供二氫楊梅素注射劑在治療肝炎，保肝護肝，鎮(zhèn)痛，降血脂，祛痰，抗菌消炎和提高免疫力的藥物中的用途。具體實施例下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實施例1:二氫楊梅素注射劑的制備取粵蛇葡萄干燥嫩莖葉2kg，用95%乙醇回流提取兩次，每次2小時，過濾，合并濾液，回收乙醇至干，加入1200毫升80。C熱水，使浸膏充分溶解，濾去黑色不溶物，濾液用聚酰胺柱分離，先用水洗，再用乙酸乙酯洗脫，回收乙酸乙酯，即得二氫楊梅素。稱取二氫楊梅素l份，丙二醇4份、PEG4002份和注射用水適量，60'C加熱使溶解，再加入維生素C0.04份，待其溶解后，加0.02份的活性炭振搖30min，用0.45m微孔濾膜過濾，控制其PH在3.50-4.00范圍內，加注射用水稀釋至處方量，通氮、灌封于棕色安瓿中、10(TC滅菌15min,質檢合格后印字包裝即得。實施例2:二氫楊梅素注射用凍干粉針劑的制備取顯齒蛇葡萄干燥嫩莖葉2kg，用水煎煮提取兩次，每次2小時，過濾，合并濾液，蒸發(fā)至干，加入1200毫升8(TC熱水，使浸膏充分溶解，濾去黑色不溶物，濾液用大孔吸附樹脂分離，先用水洗，再用乙醇洗脫，回收乙醇，即得二氫楊梅素。稱取5g二氫楊梅素1份，用10份無水乙醇溶解，另取5份HPCD，用20份水溶解，將含有二氫楊梅素的乙醇溶液緩慢加入到HPCD溶液中，邊加邊攪拌，繼續(xù)攪拌2h，于旋轉蒸發(fā)儀中除去乙醇至無醇味，取出置于50ml的容量瓶中，加5份甘露醇，溶解，用水稀釋至刻度，用0.45陶微孔濾膜過濾，分裝，凍干。實施例3:對四氯化碳引起的小鼠試驗性肝損傷的影響將小鼠隨機分為6組，每組10只陽性對照組、模型對照組、二氫楊梅素3組，二氫楊梅素組是將二氫楊梅素注射劑或凍干粉針劑用水稀釋至適當濃度待用。陽性對照組和模型對照組給予注射用水；陽性對照組為聯(lián)苯雙酯200mg/kg，po,聯(lián)苯雙酯為常用的肝炎治療藥，以聯(lián)苯雙酯治療模型動物，觀察療效，作為對照；模型對照組為檢驗藥效，動物必須先制成肝炎模型，使動物患肝炎；二氫楊梅素組是在上述模型基礎上，再給二氫楊梅素，以觀察療效，三組為腹腔注射給藥，每天分別給予50、100、200mg/kg。各組動物分組給藥，連續(xù)用藥6天，末次給藥后1小時腹腔注射1%四氯化碳油溶液0.2ml/只小鼠，隨即空腹20小時后眼眶靜脈采血，分離血清，測血清ALT、AST和T一BIL水平。結果見下表。表l:二氫楊梅素對四氯化碳引起的小鼠肝損傷影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>*P<0.05林P〈0.01與模型組比較從表1的數(shù)據(jù)可以看出，二氫楊梅素具有極好的治療肝炎的作用，以及降低T一BIL含量，顯示二氫楊梅素有明顯的降酶退黃的保肝作用。實施例4:二氫楊梅素在體外的抑菌、抗病毒實驗流感病毒的分離和鑒(滴)定目前常用雞胚進行分離流感病毒，接種途徑為雞胚的尿囊腔，3天后出現(xiàn)雞胚死亡的病變特征和出現(xiàn)血凝素，對此，我們采用此法進行對二氫楊梅素的鑒定。我們采用一定濃度的提取液和4個血凝單位的流感病毒1:1混合，讓二者于室溫作用20分鐘后再注射雞胚，注射量為每胚0.2ml。實驗采用8至11日齡的雞胚，進行尿囊腔接種，培養(yǎng)48小時后，于4'C放置過夜，然后無菌取其尿液，經(jīng)1000rpm離心IO分鐘后取上清，分裝，_2(TC存放，以備檢測之用，尿液的檢測分血凝和血抑兩種，使用的血細胞是來亨公雞，方法為常規(guī)法?？共《緦嶒炗貌煌瑵舛鹊亩錀蠲匪卦陔u胚中進行抗病毒實驗。表2:流感病毒血凝抑制試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>備注1、原液是將二氫楊梅素注射劑或凍干粉針劑用水稀釋至4mg/ml2、10_5和10—6指從二氫楊梅素原液進行藥的稀釋度3、判斷結果時按血凝強度分別以++++、+++、++、一表示;紅細胞呈細沙粒樣均勻鋪于孔(管)底者為++++，即100%凝集；紅細胞均勻鋪于孔(管)底，但邊緣不整而稍向孔(管)底集中者為+++，即75%凝集；紅細胞于孔(管)底形成一個環(huán)狀，四周有小凝集塊者為++，即50%凝集；紅細胞于孔(管)底形成圓團，但邊緣不夠光滑，四周稍有凝塊者為+,即25%凝集；紅細胞于孔(管)底形成圓團，邊緣光滑整齊者為一，即無凝集。實施例5:二氫楊梅素在體外抑菌效應試驗采用平板打孔法測定二氫楊梅素的抗菌效應。試管法和平板法進行嘗試后，確定了平板打孔法這一簡便易行且耗時較短的方法。采用五種實驗菌株金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎球菌、溶血鏈菌、卡他球菌進行效應試驗。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>卡他球菌——ll國原液是將二氫楊梅素注射劑或凍干粉針劑用水稀釋至4mg/ml實施例6:二氫楊梅素對小鼠體液免疫(血清凝集素)的影響1、陰性對照2、阿斯匹林組3、本發(fā)明二氫楊梅素劑量組(。.15g/kg,0.45g/kg,1.35g/kg)，二氫楊梅素組是將二氫楊梅素注射劑或凍干粉針劑用水稀釋至適當濃度待用。觀察凝集程度，分五組(0_4)，計算抗體，結果進行統(tǒng)計學處理，按下式計算抗體積數(shù)(抗體積數(shù)5:=S1+2S2+3S3+4S4……NSn)動物數(shù)抗體積數(shù)P值空白對照組1092.4±13.02阿斯匹林10115.00±17.12〈0.01二氫楊梅素0.15g/kg10103±11.02二氫楊梅素0.45g/kg10114±19.02<0,01二氫楊梅素1.35g/kg10103士7.02〈0.05結果證實中、高劑量組明顯增加血清中抗羊紅細胞凝集素值，有顯著性差異，二氫楊梅素對機體網(wǎng)體內系統(tǒng)吞噬功能有增強作用。實施例7:二氫楊梅素鎮(zhèn)痛試驗1、動物昆明小白鼠18—22g，雌雄各半。2、分組與溶液配制將小白鼠每組10只，分為4組a)注射用水組;b)高劑量組(l.2g/kg);C)中劑量組(0.6g/kg);C)低劑量組(0.3g/kg)。3、給藥方式連續(xù)3天腹腔注射，并在第三天給藥后60min，腹腔給予醋酸(0.5%)溶液0.2ml/只，觀察5—30min內動物掃體數(shù)。4、結果統(tǒng)計<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結果證明二氫楊梅素具有明顯的止痛作用。實施例8:二氫楊梅素對高血脂癥小鼠血脂的降脂作用<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>將動物隨機分為4組，正常對照組，陽性對照組，模型對照組，二氫楊梅素組(將二氫楊梅素注射劑或凍干粉針劑用水稀釋至適當濃度待用)。每組10只小鼠，一日一次，連續(xù)給藥10天，正常對照組不給任何藥。其他各組小鼠均給高脂乳劑0.5ml/只，形成實驗性高血脂。于10天用藥后禁食過夜。次日從小鼠眼眶取靜脈血，檢測血清中TC、TG、HDL—C值下降。結果表明，模型組TC，TG值明顯升高，HDL—C值下降。與模型組比較，二氫楊梅素組能明顯降低血清TC，TG值，還使HDL—C略有升高，說明二氫楊梅素能抑制高脂乳劑引起的小鼠血脂升高，具有降脂作用。實施例9:二氫楊梅素對小鼠酚紅祛痰試驗動物每日給藥(將二氫楊梅素注射劑或凍干粉針劑用水稀釋至適當濃度)一次，連續(xù)3天。陰性對照給予同樣體積注射用水，末次給藥前l(fā)天禁食，末次給藥后0.5小時腹腔注射25%酚紅溶液500mg/kg，再0.5小時后按頸處死動物分離氣管，插入注射針，用2ml生理鹽水沖洗，沖洗液加1MNaOH0.lml顯色，用722型分光光度計于546咖波長比色，直接讀出酚紅含量。從試驗結果表示，二氫楊梅素樣品，3天后增加小鼠呼吸道酚紅分泌量，提示樣品有祛痰作用。<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權利要求1.一種二氫楊梅素注射劑，特征在于含有2％至100％重量比的二氫楊梅素和藥學可接受的附加劑、溶媒。2.權利要求1的二氫楊梅素注射劑，特征在于可以是液體注射劑和/或注射用粉針劑。3.—種如權利要求l一2所述的二氫楊梅素注射劑制備方法，特征在于用水和/或有機溶劑煎煮葡萄科植物，煎煮一次或多次，過濾，合并濾液，蒸出溶劑，再用熱水溶解，乘熱過濾，濾液直接用色譜分離。洗脫液回收溶劑，調節(jié)PH值2—5，過濾，加入附加劑，過濾、罐裝，滅菌；或在無菌條件下冷凍干燥，分裝，即得。4.如權利要求1一3所述的二氫楊梅素注射劑，特征在于具有治療肝炎，保肝護肝，鎮(zhèn)痛，降血脂，祛痰，抗菌消炎和提高免疫力的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明提供一種含有二氫楊梅素注射劑和注射用凍干粉針劑的制備方法，含有2％至100％重量比的二氫楊梅素和藥學可接受的附加劑、溶媒。具有治療肝炎，保肝護肝，鎮(zhèn)痛，降血脂，祛痰，抗菌消炎和提高免疫力的藥物中的用途。文檔編號A61P11/00GK101327209SQ20071011121公開日2008年12月24日申請日期2007年6月18日優(yōu)先權日2007年6月18日發(fā)明者任啟生,宋新榮,陳黃實申請人:任啟生;宋新榮