專利名稱：：提高人凝血酶原復合物穩(wěn)定性fvii得率的工藝方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是凍干人凝血酶原復合物的生產(chǎn)工藝方法。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)有的人凝血酶原復合物的制造方法包括以下工序新鮮低溫冰凍健康人的血漿—去除冷沉淀—澄清過濾—凝膠吸附—洗滌、洗脫—超濾—S/D病毒滅活—凝膠吸附—洗滌、洗脫—超濾—除菌過濾、分裝—凍干—干熱滅活。該工藝在制造階段經(jīng)過S/D和千熱兩步病毒滅活，病毒滅活比較徹底，各項指標均符合《中華人民共和國藥典》標準。但采用此工藝生產(chǎn)制造出的人凝血酶原復合物vn因子、n因子、x因子、K因子收率較低。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種提高vn因子、n因子、x因子、K因子收率的凍千人凝血酶原復合物的生產(chǎn)工藝。能有效提高FVn的吸附率，達到FK的100%以上。本發(fā)明所述的凍千人凝血酶原復合物的生產(chǎn)工藝，包括(1)低溫冰凍人血漿，酒精消毒血漿袋表面后，注射用水化漿，混漿溫度(2)離心去除冷沉淀，澄清過摔、；(3)調(diào)整離子強度；(4)^吸附；(5)洗滌、洗脫，收集洗脫液，加入穩(wěn)定劑；(6)超濾濃縮、脫鹽；(7)S/D病毒滅活；(8)調(diào)整離子強度；(9)凝膠吸附；(10)洗滌、洗脫，收集洗脫液，加入穩(wěn)定劑；(11)超濾濃縮、脫鹽；(12)配制、無菌分裝、凍干；(13)干熱滅活病毒。本發(fā)明在兩次凝膠吸附前分別調(diào)整其離子強度；使電導控制在2_12ms/cm,增加凝血因子與凝膠的結(jié)合力，從而提高VII因子、n因子、X因子、IX因子的收率。尤其能有效提高FVn的吸附率，達到FIX的100%以上。洗滌、洗脫和超濾沖洗液配方除了氯化鈉，增加穩(wěn)定劑枸櫞酸鈉，在整個洗滌洗脫過程中均勻加入,其中枸櫞酸根離子能與血漿中的釣離子絡合形成一種難解離的可溶性絡合物-枸櫞酸4丐，使血中鉤離子減少，凝血過程受到抑制，進而抑制凝血因子的激活，減少了活化的凝血因子的產(chǎn)生。枸櫞酸鈉在洗滌洗脫液中的終濃度為10-25mmol/L。本方案的有益效果可根據(jù)對上述方案的敘述得知，由于在兩次凝膠吸附前都調(diào)節(jié)了離子強度，在洗滌液、洗脫液增加了穩(wěn)定劑，提高了因子的收率，尤其是VII因子的收率提高顯著，其中FVII的吸附率，達到FIX的100%以上。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例進一步說明本發(fā)明。實施例1凍干人凝血酶原復合物的制造工藝包括以下步驟(1)-301:水凍人血漿400kg,酒精消毒血漿袋表面后，注射用水化漿，混漿溫度0-5。C;(2)離心去除冷沉淀，上清澄清過濾得液體體積395L;(3)調(diào)整其離子強度10-50轉(zhuǎn)/分鐘低速攪拌上清液，以不高于5L/分鐘的流速向其中加入10-25。C注射用水，調(diào)整其離子強度，使電導控制在2-12ms/cmj(4)凝膠吸附加入溶脹完畢的DEAE-SephadexA-50濕膠12kg吸附45-60分鐘；(5)分別用濃度0.15陽0,25mol/L的氯化鈉40-60L、濃度0,01-0.02mol/L的枸櫞酸鈉40-60L洗滌凝膠2-5個體積，收集洗脫液；(6)超濾濃縮、脫鹽；(7)S/D病毒滅活按1:9加入S/D母液，在25±2。C條件下緩慢攪拌滅活6小時；(8)調(diào)整其離子強度10-50轉(zhuǎn)/分鐘低速攪拌滅活后液體，以不高于5L/分鐘的流速向其中加入10-25。C注射用水，調(diào)整其離子強度，使電導控制在2-12ms/cm;(9)凝膠吸附加入溶脹完畢的DEAE-SephadexA-50濕膠4-8kg吸附45-60分鐘；(10)分別用濃度0.5-1.5mol/L的氯化鈉60-亂、濃度0.01-0.02mol/L的枸櫞酸鈉60-80L洗脫凝膠2-8個體積，收集得到洗脫液20-50L;(11)超濾濃縮、脫鹽，得體積6000ml，其IX因子效價為25IU/ml,VII因子效價為29IU/ml,IX因子比活性大于0.7IU/mg蛋白；(12)配制、無菌分裝、凍干；(13)干熱滅活病毒。調(diào)整離子強度后，各因子收率對比如下<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從上表可以發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所述工藝提高了因子的收率，尤其是vn因子的收率提高顯著，其中FVII的吸附率，達到FIX的100%以上。權(quán)利要求1.一種凍干人凝血酶原復合物的生產(chǎn)工藝，包括以下工序新鮮低溫冰凍健康人的血漿、去除冷沉淀、澄清過濾、凝膠吸附、洗滌、洗脫、超濾、S/D病毒滅活、凝膠吸附、洗滌、洗脫、超濾、除菌過濾、分裝、凍干、干熱滅活，其特征是兩次凝膠吸附前分別調(diào)整離子強度，洗滌洗脫過程中加入穩(wěn)定劑。2.如權(quán)利要求1所述的凍千人凝血酶原復合物的生產(chǎn)工藝，其特征是調(diào)整離子強度后，電導為2_12ms/cm。3.如權(quán)利要求1或2所述的凍干人凝血酶原復合物的生產(chǎn)工藝，其特征是所述穩(wěn)定劑為枸櫞酸鈉，枸櫞酸鈉在洗滌洗脫液中的終濃度為10-25mmol/L。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是一種提高人凝血酶原復合物穩(wěn)定性FVII得率的工藝方法。包括以下工序新鮮低溫冰凍健康人的血漿→去除冷沉淀→澄清過濾→調(diào)整離子強度→凝膠吸附→洗滌、洗脫→超濾→S/D病毒滅活→凝膠吸附→洗滌、洗脫→超濾→除菌過濾、分裝→凍干→干熱滅活。文檔編號A61P7/04GK101439047SQ20071011470公開日2009年5月27日申請日期2007年11月20日優(yōu)先權(quán)日2007年11月20日發(fā)明者劉欣晏,吳春濤,孫永長,師秀梅,張順龍,杜濟良,菅長永申請人:山東泰邦生物制品有限公司