專利名稱：一種制備刺五加提取液/物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說涉及刺五加提取液/物的制備方法。
背景技術(shù)：
刺五加(Radix Acanthopanacis Senticosi)為五加科落葉灌木，高1-6m。枝上常密生針狀向下的細(xì)刺。掌狀復(fù)葉，小葉5，橢圓狀倒卵形或長(zhǎng)圓形，邊緣有重鋸齒。傘形花序單個(gè)頂生或2-6個(gè)聚生，花瓣黃白色或紫色。果球形，成熟時(shí)黑色。分布于東北地區(qū)和河北、山西，生于海拔800m以下(東北)至1500-2000m(華北)處的針闊混交林內(nèi)。朝鮮半島、前蘇聯(lián)、日本也有分布。藥用價(jià)值近似人參。國(guó)家三級(jí)保護(hù)漸危種。
刺五加注射液是刺五加經(jīng)過提取制得的滅菌注射液，被收載于中國(guó)藥典一部，具有平補(bǔ)肝腎，益精壯骨的功能。用于肝腎不足所致的短暫性腦缺血發(fā)作，腦動(dòng)脈硬化，腦血栓形成，腦栓塞等。
刺五加制劑的常規(guī)制備方法為水提醇沉，但一般僅提取2次，醇沉1次。并不能完全將其有效成分提出，大幅度地去除雜質(zhì)。專利文獻(xiàn)94107718.7采用的是水提醇沉提取法提取后經(jīng)大孔樹脂柱脫色，用乙酸乙酯萃取，得到刺五加提取物。但萃取過程會(huì)減少有效成分的回收，且乙酸乙酯毒性大，又屬易燃物，會(huì)對(duì)人體造成極大的傷害。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)上述不足提供刺五加提取液/物的制備方法。
本發(fā)明制備方法包括如下步驟采用水提醇沉法制備刺五加藥物浸膏；將浸膏加水稀釋，用石灰乳調(diào)節(jié)pH至10.00～12.00，攪拌均勻后用硫酸調(diào)節(jié)pH至4.5～6.5，靜置，抽取上清液過濾，濃縮，醇沉，冷藏靜置除雜，得刺五加提取液；或濃縮減壓干燥得刺五加提取物。
本發(fā)明利用石灰乳調(diào)堿，使總黃酮類與之形成鰲合物，再加硫酸調(diào)酸，使總黃酮類成分溶于溶液中，而雜質(zhì)成分沉淀，此法增加了總黃酮的溶出，且能更有效地去除雜質(zhì)。
更具體地，將浸膏用水稀釋至15倍體積以上，攪拌均勻，待溫度降至50℃以下，加1 0-30％新鮮石灰乳，調(diào)pH值至10.00～12.00，攪拌均勻后，再用10-30％硫酸調(diào)pH值至4.5～6.5，繼續(xù)攪拌5～10分鐘后，冷卻至室溫，靜置4～6小時(shí)，抽取上清液過濾，再經(jīng)醇沉進(jìn)一步提高除雜的效果。這里醇沉的方法是，將濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.08～1.17(80℃測(cè))，待溫度降至40℃以下時(shí)，緩慢加入乙醇使含醇量達(dá)82～85％，沉淀12～36小時(shí)。
上述水提醇沉法制備藥物浸膏的方法是將刺五加桿切成碎片，加水至少提取2次，每次加入2～10倍量水，煎煮30～60分鐘，合并濾液濃縮，2次醇沉，靜置，過濾，回收乙醇至無醇味，即得藥物浸膏。
更具體地，可以通過下述方法制備浸膏取刺五加桿，切制成1～3cm的碎片，煎煮2～4次，每次加4～8倍量水，煎煮30～60分鐘，合并煎液，濃縮至相對(duì)密度1.08～1.17(80℃測(cè))，待溫度降至40℃以下時(shí)，加入乙醇使含醇量達(dá)到65～75％，攪拌均勻后靜置6-1 8小時(shí)，過濾，殘?jiān)右掖际购剂窟_(dá)到75～85％，靜置4～12小時(shí)，過濾，殘?jiān)x心過濾，收集濾液，回收乙醇至無醇味，得濃浸膏。
本發(fā)明進(jìn)行冷藏靜置的目的在于進(jìn)一步除雜，冷藏靜置的方法是取醇沉上清液過濾，殘?jiān)x心過濾，回收乙醇至無醇味并濃縮至相對(duì)密度1.05～1.20(80℃測(cè))，加入注射用水稀釋至5g(生藥)/ml，滅菌，冷凍，緩化，冷藏，過濾。
更具體地，可以通過下述方法冷藏靜置除雜取上清液過濾，殘?jiān)x心過濾，回收乙醇至無醇味并濃縮至相對(duì)密度1.08～1.17(80℃測(cè))，加入注射用水稀釋至5g(生藥)/ml，115℃滅菌40分鐘，于-20℃～-10℃下冷凍12小時(shí)以上，緩化，冷藏七天以上，藥液經(jīng)0.45μm濾膜過濾。
本發(fā)明制備工藝優(yōu)點(diǎn)總黃酮和紫丁香苷的含量高，雜質(zhì)少，工藝簡(jiǎn)單，合理，成本低，污染少。
1)多次反復(fù)醇沉，能有效去除大分子蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。
2)先加石灰乳調(diào)堿，使總黃酮類成分與之形成鰲合物，再加硫酸調(diào)酸，使總黃酮類成分溶于溶液中，而雜質(zhì)成分沉淀，增加了總黃酮的溶出，且能更有效的去除雜質(zhì)。
可以進(jìn)一步地將上述方法制備得到的刺五加提取液/物與藥用輔料制備成各種劑型，包括注射液、凍干粉針劑、輸液劑、口服液、膠囊劑、顆粒劑以及片劑等。所述的藥用輔料包括葡萄糖、乙醇(95％)，甘露醇，右旋糖酐，乳糖，氯化鈉，聚山梨酯80等。當(dāng)該制劑為注射液時(shí)，每1ml該注射液含有總黃酮為1.8-5.5mg；含有紫丁香苷應(yīng)為0.20-2.0mg。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體的實(shí)施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不能限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例1刺五加提取液的制備取刺五加桿，切制成1～3cm的碎片。煎煮三次，第一次加5倍量水煎煮30分鐘；第二次加6倍量水煎煮40分鐘；第三次加10倍量水煎煮30分鐘。合并煎液，濃縮至相對(duì)密度1.10(80℃測(cè))，待溫度降至40℃以下時(shí)，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，攪拌均勻后靜置10小時(shí)，過濾，殘?jiān)右掖际购剂窟_(dá)到80％，靜置8小時(shí)，過濾，殘?jiān)x心過濾，收集濾液，回收乙醇至無醇味，得濃浸膏。補(bǔ)加純化水至濃浸膏15倍體積，攪拌均勻，待溫度降至50℃以下，加20％新鮮石灰乳，調(diào)pH值至11.00，攪拌均勻后，再用20％硫酸調(diào)pH值至5.5，繼續(xù)攪拌8分鐘后，冷卻至室溫，靜置5小時(shí)，抽取上清液過濾，減壓濃縮至相對(duì)密度1.15(80℃測(cè))，待溫度降至40℃以下時(shí)，緩慢加入乙醇使含醇量達(dá)85％，沉淀24小時(shí)，取上清液過濾，殘?jiān)x心過濾，回收乙醇至無醇味并濃縮至相對(duì)密度1.05(80℃測(cè))。加入注射用水稀釋至5g(生藥)/ml，115℃滅菌40分鐘。于-10℃下冷凍12小時(shí)，緩化，冷藏七天。藥液經(jīng)0.45μm濾膜過濾，即得刺五加提取液。
實(shí)施例2刺五加提取物的制備取刺五加桿，切制成1～3cm的碎片。煎煮2次，第一次加4倍量水煎煮40分鐘；第二次加8倍量水煎煮60分鐘。合并煎液，濃縮至相對(duì)密度1.08(80℃測(cè))，待溫度降至40℃以下時(shí)，加入乙醇使含醇量達(dá)到75％，攪拌均勻后靜置18小時(shí)，過濾，殘?jiān)右掖际购剂窟_(dá)到85％，靜置12小時(shí)，過濾，殘?jiān)x心過濾，收集濾液，回收乙醇至無醇味，得濃浸膏。補(bǔ)加純化水至濃浸膏18倍體積，攪拌均勻，待溫度降至50℃以下，加10％新鮮石灰乳，調(diào)pH值至12.00，攪拌均勻后，再用10％硫酸調(diào)pH值至6.5，繼續(xù)攪拌10分鐘后，冷卻至室溫，靜置6小時(shí)，抽取上清液過濾，減壓濃縮至相對(duì)密度1.17(80℃測(cè))，待溫度降至40℃以下時(shí)，緩慢加入乙醇使含醇量達(dá)82％，沉淀36小時(shí)，取上清液過濾，殘?jiān)x心過濾，回收乙醇至無醇味并濃縮至相對(duì)密度1.08(80℃測(cè))。加入注射用水稀釋至5g(生藥)/ml，115℃滅菌40分鐘。于-15℃下冷凍16小時(shí)，緩化，冷藏十天。藥液經(jīng)0.45μm濾膜過濾，濃縮減壓干燥即得刺五加提取物。
實(shí)施例3刺五加提取液的制備取刺五加桿，切制成1～3cm的碎片。煎煮3次，第一次加5倍量水煎煮30分鐘；第二次加6倍量水煎煮40分鐘；第三次加4倍量水煎煮50分鐘。合并煎液，濃縮至相對(duì)密度1.17(80℃測(cè))，待溫度降至40℃以下時(shí)，加入乙醇使含醇量達(dá)到65％，攪拌均勻后靜置6小時(shí)，過濾，殘?jiān)右掖际购剂窟_(dá)到75％，靜置4小時(shí)，過濾，殘?jiān)x心過濾，收集濾液，回收乙醇至無醇味，得濃浸膏。補(bǔ)加純化水至濃浸膏15倍體積，攪拌均勻，待溫度降至50℃以下，加30％新鮮石灰乳，調(diào)pH值至10.00，攪拌均勻后，再用30％硫酸調(diào)pH值至4.5，繼續(xù)攪拌5分鐘后，冷卻至室溫，靜置4小時(shí)，抽取上清液過濾，減壓濃縮至相對(duì)密度1.17(80℃測(cè))，待溫度降至40℃以下時(shí)，緩慢加入乙醇使含醇量達(dá)84％，沉淀12小時(shí)，取上清液過濾，殘?jiān)x心過濾，回收乙醇至無醇味并濃縮至相對(duì)密度1.17(80℃測(cè))。加入注射用水稀釋至5g(生藥)/ml，115℃滅菌40分鐘。于-20℃下冷凍20小時(shí)，緩化，冷藏十五天。藥液經(jīng)0.45μm濾膜過濾，即得刺五加提取液。
實(shí)施例4注射液的制備取實(shí)施例1的提取液，用40％的NaOH溶液調(diào)pH值至5.5，攪拌均勻后加熱，加入0.2％的活性炭，煮沸吸附15分鐘，冷卻至50℃以下用40％的NaOH溶液調(diào)pH值至5.5，補(bǔ)加新鮮注射用水至原體積。經(jīng)0.45μm濾膜過濾至澄清，灌裝，115℃高壓滅菌40分鐘。冷凍，緩化后冷藏15天，常溫放置3個(gè)月。0.65μm濾芯過濾，加注射用水至原體積，調(diào)pH值至5.5，加入活性炭脫色，過濾，調(diào)pH值至5.5，補(bǔ)加注射用水至原體積，經(jīng)0.45μm、0.22μm濾芯精濾，灌封，115℃30分鐘滅菌，即得。
經(jīng)檢驗(yàn)，本注射液每1ml含總黃酮，以無水蘆丁(C27H30O16)計(jì)為2.0mg，含紫丁香苷0.20mg。
實(shí)施例5注射液的制備取實(shí)施例2的提取物，加注射用水使溶解，用40％的NaOH溶液調(diào)pH值至5.5，攪拌均勻后加熱，加入0.2％的活性炭，煮沸吸附15分鐘，冷卻至50℃以下用40％的NaOH溶液調(diào)pH值至5.7，補(bǔ)加新鮮注射用水至含生藥5g/ml。經(jīng)0.45μm濾膜過濾至澄清，灌裝，115℃高壓滅菌40分鐘。冷凍，緩化后冷藏20天，常溫放置3.5個(gè)月。0.65μm濾芯過濾，加注射用水至含生藥5g/ml，調(diào)pH值至5.0，加入活性炭脫色，過濾，調(diào)pH值至5.0，補(bǔ)加注射用水至含生藥5g/ml，分別經(jīng)0.45μm、0.22μm濾芯精濾，灌封，115℃30分鐘滅菌，即得。
經(jīng)檢驗(yàn)，本注射液每1ml含總黃酮，以無水蘆丁(C27H30O16)計(jì)為5.1mg，含紫丁香苷2.0mg。
實(shí)施例6注射液的制備取實(shí)施例3的提取液，用40％的NaOH溶液調(diào)pH值至5.5，攪拌均勻后加熱，加入0.2％的活性炭，煮沸吸附15分鐘，冷卻至50℃以下用40％的NaOH溶液調(diào)pH值至5.3，補(bǔ)加新鮮注射用水至原體積。經(jīng)0.45μm濾膜過濾至澄清，灌裝，115℃高壓滅菌40分鐘。冷凍，緩化后冷藏25天，常溫放置4個(gè)月。0.65μm濾芯過濾，加注射用水至原體積，調(diào)pH值至6.0，加入活性炭脫色，過濾，調(diào)pH值至6.0，補(bǔ)加注射用水至原體積，分別經(jīng)0.45μm、0.22μm濾芯精濾，灌封，115℃30分鐘滅菌，即得。
經(jīng)檢驗(yàn)，本注射液每1ml含總黃酮，以無水蘆丁(C27H30O16)計(jì)為3.3mg，含紫丁香苷0.85mg。
權(quán)利要求
1.一種制備刺五加提取液/物的方法，其包括步驟1)采用水提醇沉法制備刺五加藥物浸膏；2)將浸膏加水稀釋，用石灰乳調(diào)節(jié)pH至10.00～12.00，攪拌均勻后用硫酸調(diào)節(jié)pH至4.5～6.5，靜置，抽取上清液過濾，濃縮，醇沉；3)冷藏靜置除雜得刺五加提取液；或濃縮減壓干燥得刺五加提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟1)為將刺五加桿切成碎片，加水至少提取2次，每次加入2～10倍量水，煎煮30～60分鐘，合并濾液濃縮，2次醇沉，靜置，過濾，回收乙醇至無醇味，得藥物浸膏。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟1)為取刺五加桿，切制成1～3cm的碎片，煎煮2～4次，每次加4～8倍量水，煎煮30-60分鐘，合并煎液，按檢測(cè)溫度80℃濃縮至相對(duì)密度1.08～1.17，待溫度降至40℃以下時(shí)，加入乙醇使含醇量達(dá)到65～75％，攪拌均勻后靜置6-18小時(shí)，過濾，殘?jiān)右掖际购剂窟_(dá)到75～85％，靜置4-12小時(shí)，過濾，殘?jiān)x心過濾，收集濾液，回收乙醇至無醇味，得藥物浸膏。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟2)中醇沉的方法是將濾液減壓按檢測(cè)溫度80℃濃縮至相對(duì)密度1.08～1.17，待溫度降至40℃以下時(shí)，緩慢加入乙醇使含醇量達(dá)82～85％，沉淀12～36小時(shí)。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述石灰乳為重量百分比10-30％的新鮮石灰乳，所述硫酸為重量百分比10-30％的硫酸。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟3)中冷藏靜置除雜的方法是取上清液過濾，殘?jiān)x心過濾，回收乙醇至無醇味并按檢測(cè)溫度80℃濃縮至相對(duì)密度1.05～1.20，加入注射用水稀釋至5g生藥/ml，滅菌，于-20℃～-10℃下冷凍12小時(shí)以上，緩化，冷藏七天以上，過濾。
7.一種含有刺五加提取液/物的制劑，其特征在于，所述的刺五加提取液/物通過權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)制備方法制得。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制劑，其特征在于，該制劑為注射液、凍干粉針劑、輸液劑、口服液、膠囊劑、顆粒劑或片劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制劑，其特征在于，該制劑為注射液，每1ml該注射液含有總黃酮為1.8-5.5mg；含有紫丁香苷為0.20-2.0mg。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種制備刺五加提取液/物的方法，該方法包括步驟1)采用水提醇沉法制備刺五加藥物浸膏；2)將浸膏加水稀釋，用石灰乳調(diào)節(jié)pH至10.00～12.00，攪拌均勻后用硫酸調(diào)節(jié)pH至4.5～6.5，靜置，抽取上清液過濾，濃縮，醇沉；3)冷藏靜置除雜，得刺五加提取液；或濃縮減壓干燥得刺五加提取物。本發(fā)明方法制備工藝簡(jiǎn)單，除雜效果好，純度高。
文檔編號(hào)A61P7/02GK101084953SQ200710117640
公開日2007年12月12日 申請(qǐng)日期2007年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月20日
發(fā)明者方同華 申請(qǐng)人:黑龍江省珍寶島制藥有限公司