專利名稱：：含聚乙二醇降纖酶的藥物組合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術領域：
，具體地涉及含有聚乙二醇降纖酶的藥物組合物及其制備方法。
背景技術：
：聚乙二醇降纖酶為來源于蛇毒的天然絲氨酸蛋白酶——降纖酶的聚乙二醇修飾物，其藥理作用及作用特點與降纖酶相同。中國專利ZL200410017779.4對聚乙二醇降纖酶及其制備方法作了詳細介紹。其具體作用為抑制血栓的形成、抑制血小板的聚集、降低全血及血漿的粘度、改善腦缺血模型的行為學缺陷評分、降低腦壞死百分率并具有神經保護等作用。在保留了降纖酶的生物活性的同時，聚乙二醇降纖酶還能夠有效降低降纖酶的免疫原性，延長降纖酶的體內半衰期，并增加了降纖酶在體內的穩(wěn)定性。因此，聚乙二醇降纖酶的出現為臨床上治療血栓栓塞性疾病提供了一種更好的選擇。為滿足臨床上的需要，提供一種穩(wěn)定的聚乙二醇降纖酶藥物組合物是必須的。與降纖酶類似，聚乙二醇降纖酶在藥物組合物中的含量也非常少，每支注射劑約含510單位(相當于510微克)，因此，也面臨著降纖酶制劑所面臨的問題高度稀釋后，在制劑的制備及儲存過程中，效價會明顯下降。實際使用中，考慮到效價的下降，在制備降纖酶制劑時往往都按照標示量的130200%投料，但這一方面帶來實際生產成本的增加，另一方面因效價下降的幅度不確定而使實際效價難以確定，影響產品合格率，給生產帶來很大的麻煩，更重要的是大量異源蛋白的引進使免疫源性及過敏性反應發(fā)生的幾率大大增加，從而影響臨床用藥的安全性。為了克服這一缺陷，人們進行了大量的實驗摸索，提出了一些較好的方法。中國專利ZL01108025.6的實施例中公開了一種以右旋糖酐或甘露醇為賦形劑的降纖酶凍干粉針劑，但該專利中并沒有公開此種降纖酶制劑的效價保留'瞎況和長期穩(wěn)定性等數據。本發(fā)明人試圖按照該專利公開的方法，采用右旋糖酐做為賦形劑，制備聚乙二醇降纖酶凍干粉針劑，經測定，該凍干粉針劑的效價僅為聚乙二醇降纖酶原料效價的80%。另外，近年來不斷有文獻報道右旋糖酐能引起過敏反應，因此，右旋糖酐不適合用作注射用聚乙二醇降纖酶組合物的賦形劑。此外，發(fā)明人還嘗試采用甘露醇或與其類似的小分子糖類如蔗糖、葡萄糖等作為賦形劑，來制備聚乙二醇降纖酶凍干粉針劑，結果顯示以甘露醇為賦形劑和以蔗糖為賦形劑的凍干制劑的效價分別為聚乙二醇降纖酶原料效價的12%和16%，制備過程中效價降低現象非常嚴重。因此，小分子糖類也不適合作為聚乙二醇降纖酶藥物組合物的賦形劑。專利申請CN03131652.2中公開了以人血白蛋白作為保護劑的降纖酶組合物，其中不同處方組成的組合物在40'C條件下保留5天后的效價數據顯示處方中加入人血白蛋白作為保護劑的藥物組合物的穩(wěn)定性明顯增加。但是，當制劑中包含人血白蛋白時，制劑被感染性病原體如免疫缺陷病毒(HIV)和乙型肝炎病毒(HBV)潛在污染的可能性較高，而且人血白蛋白也可能誘發(fā)某些人的免疫反應，因此，近年來已不推薦在制劑中使用人血白蛋白。專利申請CN200410021558.4中公開了以氯化鈉為穩(wěn)定劑的降纖酶水針制劑，發(fā)明人試圖采用同樣的方法制備聚乙二醇降纖酶注射劑，結果顯示以氯化鈉為保護劑的聚乙二醇降纖酶水針劑，一旦放置超過24小時，效價即明顯降低;而制備得到的凍干粉針劑，制劑的效價僅為聚乙二醇降纖酶原料效價的50%左右。因此，采用氯化鈉作為輔料也不能夠得到長期穩(wěn)定的聚乙二醇降纖酶藥物組合物。此外，發(fā)明人還嘗試采用降纖酶制劑中常用的保護劑——小分子氨基酸作為輔料，如甘氨酸和丙氨酸等，同樣不能得到穩(wěn)定的聚乙二醇降纖酶組合物。綜上所述，由于聚乙二醇降纖酶與降纖酶在結構上的差異，以及現有技術中降纖酶的處方組成及制備工藝所存在的不足，有必要繼續(xù)研究，發(fā)明一種穩(wěn)定的聚乙二醇降纖酶組合物，該組合物不但在制備過程中能最大程度地保留聚乙二醇降纖酶的活性，而且能夠滿足長期儲存的需要。
發(fā)明內容本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種穩(wěn)定的聚乙二醇降纖酶藥物組合物，該組合物不但在制備過程中能最大程度地保留聚乙二醇降纖酶的活性，而且能夠滿足長期儲存的需要。為解決上述技術問題，本發(fā)明一方面提供一種供注射用的聚乙二醇降纖酶藥物組合物，其中非活性成分為羥乙基淀粉；所使用的羥乙基淀粉的平均分子量為80160kDa;優(yōu)選為130kDa。本發(fā)明所提供的注射用聚乙二醇降纖酶藥物組合物，其中聚乙二醇降纖酶的含量為510單位/支，折合成重量相當于510pig/支。本發(fā)明所提供的注射用聚乙二醇降纖酶藥物組合物為凍干粉針制劑，其中活性成分聚乙二醇降纖酶與非活性成分羥乙基淀粉的重量比為1:500-25000;優(yōu)選為l:2000-8000;最優(yōu)選為l:3000。本發(fā)明另一方面提供所述聚乙二醇降纖酶凍干粉針劑的制備方法，包括以下步驟(1)將羥乙基淀粉溶于水配制成合適濃度的水溶液，加熱，活性炭吸附后脫炭，放冷，再加入聚乙二醇降纖酶配制成均勻藥液；(2)將上述藥液過濾、分裝；(3)冷凍干燥階段預凍溫度為一50一l(TC，再干燥溫度不超過1530°C。其中，步驟(1)所述的合適的羥乙基淀粉濃度為0.56%。本發(fā)明再一方面提供羥乙基淀粉作為聚乙二醇降纖酶的保護劑和賦形劑的用途。由于聚乙二醇降纖酶是在降纖酶分子中引入聚乙二醇進行修飾的產物，其理化性質相比降纖酶發(fā)生了很大變化，因此，通常適合于降纖酶的保護劑和賦形劑并不適合聚乙二醇降纖酶，而本發(fā)明人經過長期大量的實驗摸索，發(fā)現采用羥乙基淀粉作為聚乙二醇降纖酶的保護劑和賦形劑效果要明顯優(yōu)于其它常用于降纖酶及其它蛋白質藥物的各種保護劑和賦形劑。本發(fā)明所提供的注射用聚乙二醇降纖酶藥物組合物可用作治療和/或預防血栓栓塞性疾病的藥物和神經保護藥物。所述的血栓栓塞性疾病包括急性腦梗死、腦血栓、腦栓塞，短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)、以及腦梗死再復發(fā)；心肌梗死、不穩(wěn)定性心絞痛以及心肌梗死再復發(fā)；四肢血管病，如股動脈栓塞、血栓閉塞性脈管炎、雷諾氏病和肺栓塞等。本發(fā)明采用羥乙基淀粉作為保護劑和賦形劑來制備供注射用的穩(wěn)定的聚乙二醇降纖酶藥物組合物?，F有技術中沒有公開過羥乙基淀粉可以用作聚乙二醇降纖酶的保護劑和賦形劑，也沒有公開過羥乙基淀粉可用作降纖酶的保護劑和賦形劑的情況。本發(fā)明所提供的聚乙二醇降纖酶藥物組合物最大程度地保留了聚乙二醇降纖酶原料的活性。下面通過將本發(fā)明提供的聚乙二醇降纖酶藥物組合物與采用本領域中常用于降纖酶的其它輔料制備得到的聚乙二醇降纖酶凍干粉針劑的效價保留情況進行比較，來說明本發(fā)明的有益效果。表1采用不同輔料制得的聚乙二醇降纖酶凍干粉針劑的效價保留情況<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注效價保留率=(凍干后效價/凍干前效價)X100%具體實施例方式下面以具體實施例來詳細說明本發(fā)明所提供的一種供注射用的聚乙二醇降纖酶藥物組合物及其制備方法，以下非限制性實施例的目的是為了更好地說明本發(fā)明的內容，并不意味著對本發(fā)明的任何限制。本發(fā)明中使用的聚乙二醇降纖酶采用中國專利ZL200410017779.4中公開的方法制備；使用的羥乙基淀粉130/0.4(平均分子量為130kDa，取代級為0.4)為市售產品；本發(fā)明中所提到的水，是指注射用水。評價聚乙二醇降纖酶藥物組合物的效價采用國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的國家藥品標準中注射用降纖酶的生物效價測定方法；聚乙二醇降纖酶的重量測定方法采用中國藥典2005年版三部附錄附錄VIB第二法，本發(fā)明中使用的聚乙二醇降纖酶lmg相當于1000單位左右；評價該組合物的長期穩(wěn)定性的方法為取3批樣品，分別于6匸±2'C條件下放置，在放置前和放置期間的第3個月、6個月、9個月、12個月、18個月和24個月末取樣，檢查3批樣品的外觀、pH值、溶液的澄清度與顏色、無菌和效價等各項參數。外觀、pH值、溶液的澄清度與顏色、無菌的檢測方法均按照中國藥典規(guī)定的方法進行。實施例l處方組成每iooo支用量聚乙二醇降纖酶5000單位(體積約5ml，聚乙二醇降纖酶重量約5呢)羥乙基淀粉130/0.415g制備方法配制與分裝稱取處方量的羥乙基淀粉，加水溶解并配制成濃度為1.5%的羥乙基淀粉溶液，加熱煮沸后加入適量活性炭，保溫吸附30分鐘，脫炭，放冷，加入5ml聚乙二醇降纖酶，混合均勻后，將溶液過濾除菌，按每支5單位分裝半壓塞，進箱。冷凍干燥預凍溫度一30'C，升華階段控制產品溫度不超過共晶點，真空度控制在15士5Pa左右，再干燥溫度不超過25。C，制品溫度至20±5°C以后停止真空控制，直至干燥結束。壓塞，出箱，軋蓋。實施例2不同分子量的羥乙基淀粉作為輔料時制得的聚乙二醇降纖酶藥物組合物的比較分別用羥乙基淀粉40(平均分子量為40kDa)和羥乙基淀粉200/0.5(平均分子量為200kDa，取代級為0.5)代替實施例1中的羥乙基淀粉130/0.4，按照實施例1所述的制備方法，制備聚乙二醇降纖酶凍干粉針劑，分別得到樣品1和樣品2，與實施例l的凍干粉針劑(作為樣品3)進行比較，評價三種凍干制劑的效價保留率、用lml水復溶時的復溶時間等參數，結果如下表2所示。表2不同分子量的羥乙基淀粉作為輔料的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實驗結果表明作為本發(fā)明的供注射用的聚乙二醇降纖酶組合物的保護劑型和賦形劑，羥乙基淀粉的分子量過低或者過高都不合適，其分子量過低，得到的凍干制劑的效價保留率較低(只有78%);其分子量過高，則凍干制劑的復溶時間比較長；平均分子量為130kDa的羥乙基淀粉是比較理想的選擇。實施例3不同濃度的羥乙基淀粉作為輔料時制得的聚乙二醇降纖酶組合物的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>制備方法同實施例l，具體為-配制與分裝分別稱取上述處方量的羥乙基淀粉，分別加水溶解配制成濃度為0.75%、1.5%、3%和6%的羥乙基淀粉溶液，加熱煮沸后加入適量活性炭，保溫吸附30分鐘，脫炭，放冷，加入處方量的聚乙二醇降纖酶，混合均勻后，將溶液分別過濾除菌，按每支5單位分裝，半壓塞，進箱。冷凍干燥預凍溫度一3(TC。升華階段控制產品溫度不超過共晶點，真空度控制在15土5Pa左右。再干燥溫度上限25。C，制品溫度至20±5°C以后停止真空控制，直至干燥結束。壓塞，出箱，軋蓋。分別測定四種樣品凍干前后的效價情況，以及凍干后的外觀和加入lml水復溶時的復溶時間，結果如下表3所示。表3不同濃度羥乙基淀粉作輔料的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實驗結果表明各組凍干樣品的效價保留率沒有明顯的差異，均在95%以上，但是樣品制備過程中，藥液過濾速度明顯不同，當羥乙基淀粉的濃度達到6%時過濾速度已經非常緩慢，因此，從制備工藝的可操作性來看，羥乙基淀粉的濃度不能超過6%;同時，不同濃度羥乙基淀粉作為輔料時，制得的凍干制劑的外觀差異較大，且向凍干制劑中加入l.Oml水復溶時，溶解速度有較大的差異，0.75%和1.5%組樣品在1分鐘內全部溶解，3.0%組樣品需2分鐘才能溶解，6.0%組的樣品需5分鐘才能完全溶解。因此，從制備和使用的角度考慮，在本凍干制劑的配制過程中，維持羥乙基淀粉的濃度為1.5%左右是最佳的選擇。實施例4長期穩(wěn)定性實驗按照實施例1制備3批樣品A、B、C，分別于6。C士2。C條件下放置，在放置前，放置3個月、6個月、9個月、12個月、18個月和24個月末取樣，檢查3批樣品的外觀以及用lml水復溶后溶液的pH值、澄清度、顏色、可見異物、無菌和效價等各項指標。實驗數據顯示，本品穩(wěn)定性良好可控，在6。C土2'C條件下放置兩年后仍然穩(wěn)定。10表4注射用聚乙二醇降纖酶凍干粉針劑長期穩(wěn)定性實驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>權利要求1、一種供注射用的藥物組合物，包含活性成分聚乙二醇降纖酶和非活性成分羥乙基淀粉。2、權利要求1所述的供注射用的藥物組合物，其中羥乙基淀粉的平均分子量為80160kDa。3、權利要求2所述的供注射用的藥物組合物，其中羥乙基淀粉的平均分子量為130kDa。4、權利要求1、2或3所述的供注射用的藥物組合物，其中聚乙二醇降纖酶的含量為510單位/支。5、權利要求4所述的供注射用的藥物組合物，其為凍干粉針劑，其中聚乙二醇降纖酶與羥乙基淀粉的重量比為1:500-25000。6、權利要求5所述的供注射用的藥物組合物，其中聚乙二醇降纖酶與羥乙基淀粉的重量比為1:20008000。7、一種權利要求5或6所述的藥物組合物的制備方法，包括以下步驟(1)將羥乙基淀粉溶于水配制成合適濃度的水溶液，加熱，活性炭吸附后脫炭，放冷，再加入聚乙二醇降纖酶配制成均勻藥液；(2)將上述藥液過濾、分裝；(3)冷凍干燥階段預凍溫度為一50一l(TC，再干燥溫度不超過153(rC。8、權利要求7所述的制備方法，其中歩驟(1)所述的羥乙基淀粉的合適濃度為0.56°%。9、羥乙基淀粉作為聚乙二醇降纖酶的保護劑和賦形劑的用途。10、權利要求1所述的注射用藥物組合物在制備治療和/或預防血栓栓塞性疾病的藥物以及神經保護藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及一種供注射用的含有聚乙二醇降纖酶的藥物組合物及其制備方法，該組合物采用羥乙基淀粉作為保護劑和賦形劑，具體地采用平均分子量為80～160kDa的羥乙基淀粉。該組合物中聚乙二醇降纖酶的含量為5～10單位/支。聚乙二醇降纖酶和非活性成分羥乙基淀粉的重量比在1∶500～25000范圍，優(yōu)選為1∶2000～8000。本發(fā)明所提供的聚乙二醇降纖酶藥物組合物不但在制備過程中能最大程度地保留聚乙二醇降纖酶的活性，而且能夠滿足長期儲存的需要，能夠滿足臨床需求。文檔編號A61K38/43GK101376022SQ20071013093公開日2009年3月4日申請日期2007年8月31日優(yōu)先權日2007年8月31日發(fā)明者軍馮,張喜全,張來芳,朱裕輝,程艷菊,薛春佳,偉趙申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司