專利名稱：：治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥物組合物及其制備方法，具體為主要源于植物藥的具有治療和預防呼吸系統(tǒng)感染作用的藥物組合物及其可工業(yè)上應(yīng)用的制備方法。技術(shù)背景呼吸系統(tǒng)病毒感染的臨床表現(xiàn)主要為發(fā)熱，頭痛、身痛，咽喉腫痛、咳喘、肺部感染等上、中、下呼吸道炎癥，因而理想的治療呼吸系統(tǒng)病毒感染的藥物應(yīng)該同時具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌和抗病毒的作用。已有抗呼吸道病毒作用的專利(申請)中CN03100188.2沒有抗炎、鎮(zhèn)痛作用，其抗病毒譜較窄，只抗流感病毒甲、乙型；CN00100617.7沒有具體的抗病毒藥理實驗依據(jù)，僅有幾例臨床治療病例，而且這些病例缺少支持，所治病例沒有病毒感染的診斷學依據(jù)，沒有實驗數(shù)據(jù)支持，所治病例，沒有統(tǒng)計學處理；CN03118301.8中僅提出具有"抗病毒"作用，沒有公開具體抗哪些病毒；CN02128077.0的說明書中僅有組方、制法，沒有公開抗病毒藥效學數(shù)據(jù)，"中藥不傳之秘在于量"，量的規(guī)律是組方的基本規(guī)律之一，在不同的量變規(guī)律指導下，幾百味常用中藥，可以演變出數(shù)千萬首湯方，而該專利的申請說明中恰恰沒有提到組方的計量問題；CN03113857.8專利說明書第4頁記載其"對流感病毒感染的小鼠肺病變與肺指數(shù)沒有表現(xiàn)出明顯的作用，體外對呼吸系統(tǒng)10株致病菌作用不明顯"；CN94115927.2主要用于風寒感冒，未提到抗病毒的藥理作用；CN01129177.X僅具有解熱、抗炎作用CN96110520.8的說明書第3頁僅提及"長于抗流感病毒"，但未見具體的實驗數(shù)據(jù)支持。橙皮苷(Hesperidin)，異名陳皮甙、桔皮甙。物化性質(zhì)白色或淺黃色粉末。幾乎不溶于水，微溶于甲醇，易溶于稀堿液和吡啶；6(TC時溶于甲酰胺和二甲基甲酰胺；微溶于甲醇、熱冰乙酸。橙皮苷可源于陳皮、蕓香科植物化州橘C/z^asre"c^ateBlanco及其栽培變種的干燥成熟果實]、青皮[蕓香科植物化州橘。'^7/sre"c^ateBlanco及其栽培變種的干燥幼果或未成熟果實的果皮]、枳實[蕓香科植物酸橙a"i"a/7"鵬L.及其栽培變種或甜橙0'tr^w'/7e/7^'s0sbeck的干燥幼果]、枳殼[蕓香科植物酸橙。'tnw犯/v3/2"咖L.及其栽培變種或甜橙si;e;7W、0sbeck的干燥果皮]、化橘紅[蕓香科植物化州柚"fi"〃s^ra/70^'Tomentosa'或柚。.加s^r朋必s(L.)0sbeck的未成熟或近成熟的干燥外層果，茜草科植物栗豬殃殃地上部分，蕓香科植物佛手果實、蕉柑果實、枸橘果實、檸檬果實、藜檬果皮、枸櫞成熟果實等藥材和植物中。橙皮苷是3-羥基-3-甲基戊二酰基CoA(HMG-CoA)還原酶抑制劑，可以降低毛細血管的脆性及通透性，用于高血壓病及毛細血管出血性疾患的輔助治療。射干苷(Tectoridin)源于鳶尾科鳶尾屬植物鳶尾i^'s^c&r鵬Maxim.鳶尾科植物鳶尾的干燥莖根，射干[為鳶尾科植物射干"eJa/zcs"血C力/77MW^(L.)DC.的干燥根莖]中也含有射干苷。功能是清熱解毒、消痰利咽、消積，用于咽喉腫痛、痰咳氣喘等癥。川射干中總異黃酮較藥典其他射干品種高，射干苷是其中的一個主要活性成分。黃芩苷(Baicalin)源于黃芩。黃芩是唇形科植物黃芩5"c"eL^ris力a/^7朋WsGeorgi的干燥根。藥理作用具有抗病原微生物，增強機體免疫力、解熱、鎮(zhèn)靜、降壓、降血脂、保肝利膽及解痙、抗氧化等多種作用。用于濕溫、暑濕胸悶嘔惡、濕熱痞滿，瀉痢，黃疽，肺熱咳嗽，高熱煩渴，癰腫瘡毒，胎動不安。葛根素(puerarin)源于野葛。野葛為豆科植物野葛尸"eran'a7otete(Willd.)0hwi的干燥根。葛根[豆科植物葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi根]中也含有葛根素。葛根中含多種黃酮類成份，主要活性成份為大豆素(daidzein)、大豆甙(daidzin)、葛根素(puerarin)、葛根素-7-木糖甙(puerarin-7-xyloside)等。葛根素有心血管作用(擴張血管)、受體阻斷效應(yīng)、抗心律失常、治療高血壓和心絞痛。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是篩選研究治療和預防呼吸道病毒感染的藥物組合物，具體為同時具有確切的抗病毒、抗菌、解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛作用的主要源于植物藥的藥物組合物。本發(fā)明還要研究該藥物組合物適于工業(yè)化應(yīng)用的制備工藝。為解決上述問題，本發(fā)明提供技術(shù)方案如下一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，該藥物組合物的藥效原料按重量計為橙皮苷1-4份、黃芩苷2-8份、葛根素l-4份、射干苷1-6份。優(yōu)選該藥物組合物的藥效原料按重量計為橙皮苷2-3份、黃芩苷3-4份、葛根素2-3份、射干苷2-3份。一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，該藥物組合物的藥效原料按重量計為橙皮苷提取物l-4份、黃芩苷提取物2-8份、葛根素提取物l-4份、射干苷提取物I-6份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量10-卯％,黃芩苷提取物中黃芩苷含量10-卯％，葛根素提取物中葛根素含量5-20%，射干苷提取物中射干苷含量10-90%。優(yōu)選該藥物組合物的藥效原料按重量計為橙皮苷提取物2-3份、黃芩苷提取物3-4份、葛根素提取物2-3份、射干苷提取物2-3份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量50-65%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量50-85%，葛根素提取物中葛根素含量10-15%,射干苷提取物中射干苷含量50-70%。一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，該藥物組合物的藥效原料按重量計為含橙皮苷的植物l-4份、黃芩2-8份、含葛根素的植物l-4份、含射干苷的植物l-6份；優(yōu)選含橙皮苷的植物2-3份、黃芩3-4份、含葛根素的植物2-3份、含射干苷的植物2-3份；含橙皮苷的植物選自陳皮、青皮、枳實、枳殼、化橘紅、蕓香科植物佛手果實、蕉柑果實、枸橘果實、檸檬果實、藜檬果皮、枸櫞成熟果實、蘆柑皮和蘆柑皮渣中的一種或幾種混合物；含葛根素的植物選自野葛和/或葛根，含射干苷的植物選自鳶尾和/或射干。一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物的制備方法，包括如下步驟取藥效原料蘆柑皮或戸柑皮渣、鳶尾、黃芩、野葛；用水和/或乙醇作溶劑，加熱提取上述藥效原料，得提取液；將提取液濃縮后，得濃縮物，向該濃縮物中加入水，濾取沉淀物。所述藥物組合物的制備方法，包括用50-80%乙醇分別提取上述藥效原料，得提取液;分別濃縮提取液后，得到相應(yīng)濃縮物，分別向這些濃縮物中加水，分別濾取沉淀物，干燥沉淀物，得到粗制的橙皮苷提取物、黃芩苷提取物、葛根素提取物和射干苷提取物；該橙皮苷提取物中橙皮苷含量不低于10%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量不低于10%，葛根素提取物中葛根素含量不低于5%，射干苷提取物中射干苷含量不低于10%。所述藥物組合物的制備方法，優(yōu)選用60-70%乙醇分別提取上述藥效原料；所述粗制的橙皮苷提取物、黃芩苷提取物和射干苷提取物可用常規(guī)加堿溶解、加酸沉淀方法精制；橙皮苷提取物中橙皮苷含量20-90%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量20-90%，葛根素提取物中葛根素含量10-20%，射干苷提取物中射干苷含量20-90%;按重量計稱取橙皮苷提取物1-4份、黃芩苷提取物2-8份、葛根素提取物l-4份、射干苷提取物l-6份，與藥學上可接受輔料或載體混合。所述藥物組合物的制備方法中，橙皮苷提取物的精制方法是取粗制的橙皮苷提取物加入含2。/。NaOH的5(T/。乙醇溶解，過濾，將濾液加鹽酸調(diào)PH至7左右，靜置24h后，濾取沉淀，干燥；黃芩苷提取物的精制方法是取粗制的黃芩苷提取物加相當于藥材3倍體積的水分散均勻，用40^NaOH調(diào)節(jié)PH7左右，用加入等體積的95%乙醇攪拌使溶解，靜置12h，濾過，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)PH2左右，60'C保溫60min，靜置24h后，濾取沉淀，先用稀乙醇洗滌沉淀，再用水洗滌沉淀至中性，減壓干燥；射干苷提取物的精制方法是將60-70%乙醇提取液濃縮后，加入水，用鹽酸調(diào)PH到12，靜置10小時后，濾取沉淀；于酸水液加入2%NaOH液調(diào)到PH至8~9，繼續(xù)濃縮，濃縮到原體積的1/2，然后加鹽酸調(diào)PH到12，靜置10小時后，濾取沉淀；合并兩次沉淀物，然后用抽濾漏斗將沉淀抽干，得射干苷的粗提物，向射干苷粗提物中加入無水乙醇(藥材重量g:乙醇體積mH7:10)，攪拌均勻后，濾取沉淀物，干燥。所述藥物組合物的最優(yōu)選制備方法，其中按重量計稱取橙皮苷提取物2-3份、黃芩苷提取物3-4份、葛根素提取物2-3份、射干苷提取物2-3份:橙皮苷提取物中橙皮苷含量50-65%，黃苳苷提取物中黃芩苷含量50-85%，葛根素提取物中葛根素含量10-15%，射干苷提取物中射干苷含量50-70%，與口服制劑輔料混合，制成膠囊劑、分散片、普通片、顆粒劑、口服液。一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，該藥物組合物的藥效原料按重量計為含橙皮苷的原料l-4份、含黃芩苷的原料2-8份、含葛根素的原料l-4份、含射干苷的原料l-6份;含橙皮苷的原料中橙皮苷含量不低于10%,含黃芩苷的原料中黃芩苷含量不低于10%,含葛根素的原料中葛根素含量不低于5%，含射干苷的原料中射干苷含量不低于10%。優(yōu)選含橙皮苷的原料中橙皮苷含量10-90%，含黃芩苷的原料中黃芩苷含量10-90%,含葛根素的原料中葛根素含量5-20%，含射干苷的原料中射干苷含量10-90%。更優(yōu)選該藥物組合物的藥效原料按重量計為含橙皮苷的原料2-3份、含黃芩苷的原料3-4份、含葛根素的原料2-3份、含射干苷的原料2-3份；含橙皮苷的原料中橙皮苷含量50-65%，含黃芩苷的原料中黃芩苷含量50-85%,含葛根素的原料中葛根素含量10-15%，含射干苷的原料中射干苷含量50-70%。所述原料選自①含相應(yīng)有效成分的植物，或者②有效成分(單體化合物)，或者③含有效成分的提取物(植物的有效部位)。即含橙皮苷的原料包括含橙皮苷的植物、橙皮苷提取物或橙皮苷；含橙皮苷的植物選自蘆柑皮(包括蘆柑皮渣)、陳皮、青皮、枳實、枳殼、化橘紅、蕓香科植物佛手果實、蕉柑果實、枸橘果實、檸檬果實、藜檬果皮和枸櫞成熟果實中的一種或幾種混合物；含黃芩苷的原料包括黃芩、黃芩提取物和黃芩苷；含葛根素的原料包括野葛或葛根、葛根素提取物和葛根素；含射干苷的原料包括鳶尾或射干、射干苷提取物和射干苷。本發(fā)明藥物組合物包括①橙皮苷、黃芩、葛根素和射干苷組成的混合物；②橙皮苷提取物、黃芩苷提取物、葛根素提取物和射干苷提取物組成的混合物(即四個提取物的混合物，簡稱"CYHG藥物"，"提取物"即"有效部位"或簡稱"部位")；③含橙皮苷的植物、黃芩、含葛根素的植物和含射干苷的植物組成的混合物以及④本發(fā)明所述提取物與原料藥粉末和/或有效成分組成的混合物，例如可用橙皮苷提取物與黃芩苷、射干苷及葛根粉末組成的藥物組合物。所述含橙皮苷的植物有蘆柑皮(包括蘆柑皮渣)、陳皮、青皮、枳實、枳殼、化橘紅、蕓香科植物佛手果實、蕉柑果實、枸橘果實、檸檬果實、藜檬果皮和枸櫞成熟果實；含葛根素的植物是葛根和野葛；含射干苷的植物有鳶尾和射干；含黃芩苷的植物有黃芩。優(yōu)選蘆柑皮、黃芩、野葛和鳶尾組成的混合物。更優(yōu)選蘆柑皮中的橙皮苷提取物、黃芩中的黃芩苷提取物、野葛中葛根素提取物和鳶尾中射干苷提取物組成的藥物組合物。本發(fā)明藥物組合物的抗病毒譜和藥效作用強度優(yōu)于目前市場具有抗病毒優(yōu)勢的的雙黃連口服液。本發(fā)明包括研究該藥物組合物組方中起到核心和關(guān)鍵作用的"CYHG藥物"。CYHG藥物是組方藥材中相應(yīng)的活性部位提取物的組合物，相對于目前的抗呼吸道病毒感染的藥物有以下特點和優(yōu)勢用量小、抗病毒譜廣、藥效作用強(強于陽性對照藥雙黃連口服液)、低毒等特點。含橙皮苷的中藥傳統(tǒng)用于理氣化痰，現(xiàn)代研究表明^f心腦血管疾病有輔助治療作用，而本發(fā)明發(fā)現(xiàn)用橙皮苷、含橙皮苷的部位以及含橙皮苷的植物(尤其是蘆柑皮或蘆柑皮渣)可有效地治療病毒性感染的呼吸系統(tǒng)疾病。CYHG藥物中，優(yōu)選蘆柑皮、盧柑皮渣作為原料提取橙皮苷提取物。蘆柑皮屬于可循環(huán)再生資源(每年收獲蘆柑果實，必然可以回收到蘆柑皮，不破壞資源、不耗費資源、該資源可以循環(huán)再生，以蘆柑皮為原料開發(fā)的產(chǎn)品，有可持續(xù)發(fā)展性)。蘆柑(全果，連皮)榨汁之后產(chǎn)生的蘆柑皮渣，原本是農(nóng)副產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的廢料。本發(fā)明用蘆柑皮(可循環(huán)再生資源)、蘆柑皮搾(廢物利用)作為提取橙皮苷有效部位的原料，屬于開發(fā)可循環(huán)再生資源和廢物利用。本發(fā)明用蘆柑皮、蘆柑皮渣作原料開發(fā)出來的新藥產(chǎn)品，顯著降低了生產(chǎn)成本，有可持續(xù)發(fā)展性。本發(fā)明提取有效部位的全部工藝中，不用柱層析分離，不用正丁醇萃取，完全用水和/乙醇作溶劑提取，通過調(diào)節(jié)酸堿性，得到富集有效成分的有效部位。工藝簡單，安全，成本較低，利于工業(yè)化生產(chǎn)。具體實施方式第一部分一組方篩選研究實驗l.組方研究的因素水平的確定我們選擇橙皮苷部位、射干苷部位、葛根素部位、黃芩苷部位(是四個部位的混合物。橙皮苷部位、射干苷部位、黃芩苷部位、葛根素部位各分別按實施例一l、2、3、4制備。見實施例一'制法1)。本發(fā)明進行了二輪組方篩選研究正交實驗。第一輪初步確定較好組方范圍，第二輪確定了最優(yōu)組方。下面列出最優(yōu)組方篩選實驗的具體步驟與實驗結(jié)果。表h各組方篩選的因素水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.組方篩選研究的1-9組L9(34)正交工作安排表表2:組方篩選1-9組L9(34)正交工作安排表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>3.組方篩選研究的實驗方法和結(jié)果(1).l-9組的組方藥物的制備按表2的規(guī)定的量，稱取由橙皮苷部位、射干苷部位、葛根素部位、黃芩苷部位4個部位組成的1-9組的組方藥物；分別配制成濃度為10mg/ml的水溶液。(2).小鼠腹腔毛細血管通透性抗炎實驗取2024g健康雄性小鼠110只隨機分為11組，分別給予1-9組的組方藥物，給藥的劑量均為0.20g/kg(每20g小鼠給藥0.4ml);陽性對照組雙黃連口服液7.5ml/kg(相當于11.25g生藥/kg);空白對照組給予等容量生理鹽水；連續(xù)給藥6d,ig給藥。在末次給藥lh后，各鼠均靜注0.5%伊文思藍生理鹽水溶液0.1ml/10g，隨即腹腔注射0.6%醋酸0.20ml/只，20min后頸椎脫位處死小鼠，用6ml生理鹽水分三次洗滌腹腔，吸出洗滌^^，合并后用入生理鹽水定容至10ml。定容液于3000轉(zhuǎn)離心15min，取上清液，于5卯nm處比色測定光密度，結(jié)果填入表l。(3).實驗結(jié)果將各組實驗結(jié)果的平均值代入表2，進行極差分析。二輪組方篩選研究表明優(yōu)選組方是按重量計橙皮苷部位l-4份、黃芩苷部位2-8份、葛根素部位l-4份、射干苷部位l-6份；最優(yōu)組方是按重量計橙皮苷部位2份、射干苷部位3份、黃芩苷部位4份、葛根素部位2份。.二.最佳組方與藥材組方、純品組方、單一的橙皮苷部位、射干苷部位、葛根素部位、黃芩苷部位比較實驗1.實驗樣品藥液的制備最佳組合即為CYHG藥物(見實施例一制法制備CYHG藥物，再制備成10mg/ml的水溶液，即為CYHG藥物組樣品液)；藥材組方組[分別取蘆柑皮2份、鳶尾3份、黃芩4份、野葛2份，加入藥物重量10倍量、8倍量、8倍量的水(w/v)，分別直火煎煮l小時、40分鐘、30分鐘，分別得到三次煎煮液，合并，減壓濃縮至小體積，以水定容為0.5g/ml的水溶液，即為藥材組方組樣品液];純品組方組即為CYHG純品-混合物(見實施例二制備CYHG純品-混合物，再制備成10mg/ml的水溶液，即為CYHG純品-混合物組樣品液)；橙皮苷部位(實施例一1制備橙皮苷部位，再制備成10mg/ml的水溶液，即為橙皮苷部位組樣品液)；射干苷部位(實施例一2制備射干苷部位，再制備成10mg/ml的水溶液，即為射干苷部位組樣品液)；葛根素部位(實施例一3制備葛根素部位，再制備成10mg/ml的水溶液，即為葛根素部位組樣品液)；黃芩苷部位(實施例一4制備黃芩苷部位，再制備成10mg/ml的水溶液，即為黃芩苷部位組樣品液)。2.小鼠腹腔毛細血管通透性抗炎實驗取2024g健康雄性小鼠90只隨機分為.9組，分別給予l-9組的組方藥物，給藥的劑量均為0.20g/kg(每20g小鼠給藥0.4ml);陽性對照組雙黃連口服液7.5ml/kg(相當于II.25g生藥/kg);空白對照組給予等容量生理鹽水；連續(xù)給藥6d,ig給藥。具體方法見組方篩選研究實驗的3.2項下。3.小鼠腹腔毛細血管通透性抗炎實驗結(jié)果具體實驗結(jié)果見表2。表2.各組藥物對腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增高的比較研究(X土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注各用藥組與空白對照組比較*P<0.05**P<0.014.結(jié)論CYHG藥物、藥材組方組、純品組方組、橙皮苷部位、射干苷部位、黃芩苷部位、陽性對照組與空白對照組比較均具有抗炎的顯著作用(*P<0.05**P<0.01);其中CYHG藥物作用最強，明顯優(yōu)于單獨的各個部位。第二部分-藥效學及毒性試驗實驗材料l.試藥.(1).CYHG藥物(是四個部位的混合物。橙皮苷部位、射干苷部位、黃芩苷部位、葛根素部位各分別按實施例一l、2、3、4制備。見實施例一"制法l)。(2).CYHG膠囊(見實施例一.制法2)。(3).CYHG純品-混合物(分別稱取橙皮苷2g、射干苷3g、黃芩苷4g、葛根素2g，混合均勻后，即為CYHG純品-混合物。其中葛根素(含量90%-95%,陜西天潤植物化工有限公司提供)；射干苷(按本發(fā)明提取分離方法，反復精制純化，用HPLC測定，用中國藥品生物制品檢定所的標準品對照，用歸一劃法計算純度達95%)，黃芩苷(含量90%,惠州東方植物保健科技有限公司提供)；橙皮苷(購于南京青澤醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司)。見實施例二。(4).CYHG純品-膠囊(見實施例三)。2.陽性對照藥雙黃連口服液來源河南太龍藥業(yè)股份有限公司，批號06051201規(guī)格10mlxl0支/盒；功能主治清熱解毒，祛痰止咳。用于上呼吸道感染。用法用量口服，一次2支，一日3次。3.實驗試劑(1)冰醋酸來源南京市化工試劑廠批號020821規(guī)格500ml/瓶。(2)酵母來源湖北安琪酵母股份有限公司，批號0607042規(guī)格100g/瓶。4.實驗動物(1)昆明種小鼠體重1826g,雌雄兼用，SPF級，來源于南通大學實驗動物中心,合格證號SCXK(蘇)2003—0002。(2)SD雄性大鼠，體重200~240g，SPF級，來源于南通大學實驗動物中心,合格證號—SCXK(蘇)2003—0002。5.儀器722分光光度計，離心機，大鼠肛溫計，秒表，精密電子天平。(一)抗炎試驗小鼠腹腔毛細血管通透性實驗取2024g健康雄性小鼠50只隨機分為5組，分別是CYHG藥物高劑量組0.25g/kg(相當于生藥3.7088g/kg)，(此處0.25g是CYHG藥物，是四個部位混合物，按實施例一項下制法1制備)。CYHG藥物中劑量組0.20g/kg(相當于生藥2.967g/kg)，CYHG藥物低劑量組0.15g/kg(相當于生藥2.225g/kg),陽性對照組雙黃連口服液7.5ml/kg(相當于11.25g生藥/kg)，空白對照組給予等容量生理鹽水，連續(xù)給藥6d，ig給藥。在末次給藥lh后，各鼠均靜注0.5%伊文思藍生理鹽水溶液0.1ml/1Og，隨即腹腔注射0.6%醋酸0.20ml/只，20min后頸椎脫位處死小鼠，用6ml生理鹽水分三次洗滌腹腔，吸出洗滌液，合并后用入生理鹽水定容至10ml。定容液于3000轉(zhuǎn)離心15min,取上清液，于590mn處比色測定光密度，以平均光密度值做t檢驗。結(jié)果見表4。表4.對腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增高的影響(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注各用藥組與空白對照組比較*P<0.05**P<0.01實驗結(jié)果CYHG藥物各劑量組及陽性對照組與空白對照組組間t檢驗，CYHG藥物各劑量組及陽性對照組與空白對照組組間差異有顯著意義，檢驗結(jié)果分別為P〈0.05，P〈0.01?？寡讓嶒灲Y(jié)論與雙黃連口服液對照組比較，CYHG藥物組給藥劑量小、抗炎用強。(二)止痛試驗小鼠醋酸扭體法取2024g健康雄性小鼠50只隨機分為5組，分別是CYHG藥物高劑量組0.25g/kg(相當于生藥3.7088g/kg)，(此處0.25g是CYHG藥物，是四個部位混合物，按實施例一項下制法1制備)。CYHG藥物中劑量組0.20g/kg(相當于生藥2.967g/kg)，CYHG藥物低劑量組0.15g/kg(相當于生藥2.225g/kg),陽性對照組雙黃連口服液7.5ml/kg(相當于11.25g生藥/kg，空白對照組給予等容量生理鹽水，連續(xù)給藥6d，ig給藥。末次給藥0.5h后腹腔注射0.6%醋酸0.21111/只。觀察20min內(nèi)各鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)次數(shù)，結(jié)果見表5。表5.CYHG藥物、雙黃連口服液對小鼠醋酸反應(yīng)次數(shù)的影響(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注各用藥組與空白對照組比較*P<0.05**P<0.01實驗結(jié)果CYHG藥物各劑量組及陽性對照組與空白對照組組間用t檢驗，CYHG藥物各劑量組及陽性對照組與空白對照組組間差異有顯著意義，結(jié)果分別為P〈0.05，P<0.01。鎮(zhèn)痛實驗結(jié)論與雙黃連口服液對照組比較，CYHG藥物組給藥劑量小、鎮(zhèn)痛作用強。(三)解熱試驗酵母法取體重150200g，雌雄各半大鼠，用體溫計間隔lh測直腸體溫兩次，以平均值作為基礎(chǔ)體溫。選取體溫變化不超過0.3'C者50只，將其隨機分為5組，每組10只。即CYHG藥物高劑量組0.20g/kg(相當于生藥2.967g/kg)，CYHG藥物中劑量組0.15g/kg(相當于生藥2.22528&8),CYHG藥物低劑量組0.1g/kg(相當于生藥1.4835g/kg)，陽性對照組雙黃連口服液12ml/kg，空白對照組給予等容量生理鹽水。采用灌胃給藥，連續(xù)7d。末次給藥0.5h后各小鼠于背部皮下注射20%酵母混懸液10ml/kg，于第0.5、1、2、4、6、8、10及12h各測大鼠體溫l次。結(jié)果見表6。求出A'C值，并進行T檢驗。表6.CYHG藥物、雙黃連口服液對酵母致大鼠發(fā)熱的影響實驗(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注各用藥組ZVC與空白對照組厶'C比較*P<0.05**P<0.01實驗結(jié)果CYHG藥物各劑量組及陽性對照組與空白對照組組間t檢驗顯示，CYHG藥物高、中劑量組與空白對照組比較從致熱lh開始直到12h結(jié)束，有顯著的降溫作用,P〈0.05,P<0.01;低劑量組與空白對照組比較從致熱lh開始直到8h結(jié)束，有顯著的降溫作用P〈0.05，P<0.01。陽性對照組從4h到8h都有降溫作用,P〈0.01,P〈0.05。解熱實驗結(jié)論與雙黃連口服液對照組比較，CYHG藥物組給藥劑量小、起效快、持續(xù)藥效時間長、解熱作用強。參考文獻《新藥審批辦法》國家藥品監(jiān)督局2002.12;《藥理實驗方法》人民衛(wèi)生出版社，徐淑云2002，《中藥藥理研究方法學》人民衛(wèi)生出版社，陳奇1994，《新藥西藥臨床前指導原則》衛(wèi)生部藥監(jiān)局1993。(四)體外抑菌實驗1.材料(1)藥物CYHG藥物(是四個部位混合物，按實施例一項下制法l制備)。(2)菌種試驗所采用的菌株均為臨床分離株，由江蘇省人民醫(yī)院檢驗科和南京市第一醫(yī)院檢驗科提供并鑒定。(3)培養(yǎng)基MH培養(yǎng)基由北京三藥科技開發(fā)公司生產(chǎn)，肺炎鏈球菌采用血培養(yǎng)基，即在MH培養(yǎng)基中加入5%脫纖維羊血制成。2.方法(1)藥物配制準確稱取一定量的CYHG藥物，加入到20ml滅菌生理鹽水中，攪拌20min使其溶解，配制成終濃度為10mg/ml的藥物溶液。用滅菌生理鹽水倍比稀釋上述藥物溶液，配制成下列濃度梯度，即10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125和0.15625mg/ml。(2)含藥物平板制備吸取1.5ml稀釋好的不同濃度的藥物置無菌平皿中，分別于每個平皿中加入恒溫于45"左右的滅菌MH培養(yǎng)基，混勻冷卻制成一系列藥物濃度梯度的藥物平板，即1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/ml和0(空白對照)mg/ml。(3)菌懸液制備將冷凍保藏的菌株(甘油管)接種于新鮮瓊脂斜面培養(yǎng)基，37'C恒溫培養(yǎng)24小時，再分別接種于lml肉湯中，37'C恒溫培養(yǎng)12小時。肺炎鏈球菌的肉湯培養(yǎng)中含5%脫纖維羊血清。上述細菌培養(yǎng)液濃度約為108~109CFU/ml，分別用滅菌生理鹽水稀釋至107CFU/ml左右。采用多點接種儀將上述稀釋的菌懸液接種至不同濃度的藥物平板，接種量約為104105CFU/點。試驗菌于37'C恒溫倒置培養(yǎng)16~18小時，觀察結(jié)果，并記錄MIC值。CYHG藥物對臨床致病菌的MIC值如表6所示。試驗結(jié)果表明，CYHG藥物對金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌、金黃色葡，球菌(ATCC25923)、大腸埃希菌(ATCC25922)、綠膿桿菌(ATCC27853)等具有一定的抑制作用。表7.CYHG膠囊內(nèi)容物對臨床致病菌的MIC值<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>抗菌實驗結(jié)論CYHG藥物對金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌(ATCC25923)、大腸埃希菌(ATCC25922)、綠膿桿菌(ATCC27853)等具有抑制作用。(五)體外抗病毒實驗藥物CYHG藥物(是四個部位混合物，按實施例一項下"制法1"制備)。14.835g生藥/lg制劑，以蒸餾水配制成lg生藥/ml(67.4mg/ml)，隔水煮沸20分鐘滅菌用于體外抗病毒和抑菌試驗。對照藥雙黃連口服液，1.5g生藥/ml(河南太龍藥業(yè)股份有限公司批號06051201),以蒸餾水配制成lg生藥/ml，隔水煮沸20分鐘滅菌，用于體外抗病毒和抑菌試驗。病毒流感病毒甲3型(A3)、副流感病毒1型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(ADV3)、腺病毒7型(ADV7)、單純皰疹病毒1型(HSV-1)，用于體外試驗；流感病毒鼠肺適應(yīng)株FM1，用于體內(nèi)試驗。均購自中國預防醫(yī)學科學院病毒學研究所，本實驗室傳代后保存于-6(TC冰箱備用。細胞人喉癌傳代細胞Hep-2株，購自國家藥品生物制品檢定所。細胞培養(yǎng)液含10%小牛血清、0.29mg谷氨酰胺/ml、100u/ml青、鏈霉素的Eagle'sMEM(日本日水制藥株式會社出品)。.細胞維持液除所含小牛血清為2%外，其他含量均同培養(yǎng)液。細菌培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，批號060114，營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，批號060112，均由中國藥品生物制品檢定所監(jiān)制。儀器C02培養(yǎng)箱，日本Yamato科學株式會社生產(chǎn)。倒置顯微鏡，OLYMPUS牌。1、對Hep-2培養(yǎng)細胞的毒性試驗試驗方法按常規(guī)試驗操作，將瓶中Hep-2細胞消化下來，接種于96孔細胞培養(yǎng)板中，置37'C5XC02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，長成單層細胞后,進行試驗將培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液傾去，將試藥以維持液連續(xù)2倍稀釋11個濃度，加入板中200p1/孔，每稀釋度加4孔，第12列不加藥液作正常細胞對照。將培養(yǎng)板置37°C5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，每日用倒置顯微鏡觀察藥液對細胞的影響。若毒性為"1"及其以下"一"，則視為陰性，可認為此濃度藥樣對細胞無中毒現(xiàn)象，其余的"2"及其以上各級，均視為陽性，即所試藥樣在此濃度對細胞有中毒作用。利用Reed-Muench法計算50%毒性濃度(TC50)。按上述方法取得試驗結(jié)果利用Reed-Muench法計算50%毒性濃度(TC50)如下CYHG藥物的TC50=6.80mg生藥/ml，TC0=1.74生藥mg/ml，雙黃連口服液的TC50二5.24mg生藥/ml，TC0=1.36mg生藥/ml。選擇對細胞生長無影響的最大無毒濃度TC0及其以下濃度作抗病毒試驗。2、對病毒致細胞病變作用的影響實驗方法取已長成單層細胞的培養(yǎng)板，倒掉培養(yǎng)液，接種100TCID50的不同病毒液100ul于細胞孔，每一塊細胞板接種二種病毒(各加6列)，留第8行不接種病毒作正常細胞對照。置37'C5e/。C02培養(yǎng)箱中吸附2小時，倒掉病毒液，用不含小牛血清的Eagle's維持液洗細胞面l次后，加入從最大無毒濃度TC0起倍比稀釋5個濃度的藥液(15行)200u1/孔，各濃度加3孔。第6行加l/4TC50(0.714/4=0.197mg/ml)Ribavirin，第7行不加藥液作病毒對照，第8行為未感染未加藥的正常細胞對照。置37'C5^C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，每日在倒置顯微鏡下鏡檢CPE進展。根據(jù)以上細胞病變五級標準判斷，利用Reed-Muench法計算50°/。有效濃度(EC50),并求出治療指數(shù)(TI=TC50/EC50)，TI值越高，表明藥效作用越強。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注表中EC50單位為mg生藥/ml;EC50為50%有效濃度；TI為治療指數(shù)TI=TC50/EC50。第1次、第2次分別指第1次實驗結(jié)果和第2次實驗結(jié)果的意思。實驗結(jié)果按上述方法通過兩次試驗結(jié)果表明，CYHG藥物對流感病毒甲3型(A3)、副流感病毒l型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(ADV3)均顯示具有抑制作用，其中CYHG藥物對副流感病毒抑制作用較強。抗病毒實驗結(jié)論CYHG藥物與對照藥雙黃連口服液對流感病毒甲3型(A3)、副流感病毒1型(HVJ〉、呼吸道合胞病毒(RSV)均顯示具有抑制作用；與對照藥雙黃連口服液比較，CYHG藥物對上述三種病毒的抑制作用強，治療指數(shù)(TI);對照藥雙黃連口服液對腺病毒3型(ADV3)沒有抑制作用，而CYHG藥物對腺病毒3型(ADV3)具有較強的抑制作用。抗病毒實驗結(jié)論CYHG藥物比對照藥雙黃連口服液的抗病毒譜寬、抑制病毒的治療指數(shù)高；尤其是對呼吸道重要的致病病毒腺病毒3型(ADV3)CYHG藥物具有獨特的藥效。總的藥效實驗結(jié)論CYHG膠囊具有抗呼吸系統(tǒng)流感病毒甲3型(A3)、副流感病毒l型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(ADV3)作用，具有抗菌、消炎、解熱作用。其藥理作用優(yōu)于對照藥雙黃連口服液。(六)CYHG藥物的急性毒性實驗(最大耐受量實驗)以CYHG藥物(按實施例一項下"制法1"制備)30%濃度，一日內(nèi)一次灌胃給藥，每次0.8ml/20g，劑量為12g/kg，沒有測出LD5。。故進行最大耐受量實驗以30%濃度的CYHG藥物，一日內(nèi)2次，灌胃給藥，每次0.8ml/20g,給藥后，觀察7日，記錄結(jié)果。最大給藥量為24gCYHG藥物/kg(相當于356.04g組方生藥/kg),相當于臨床人最高劑量(0.05g/kg)的480倍時，實驗動物未出現(xiàn)毒性反應(yīng)。目的觀察CYHG藥物一日內(nèi)2次灌胃給藥，所可能產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，為臨床安全用藥提供參考依據(jù)。實驗方法取體重19-21g昆明種小鼠20只，雌雄各10只。飼養(yǎng)2曰，實驗前禁食8小時，不禁水，67。/。CYHG藥物，一日內(nèi)兩次灌胃給藥，每次0.8ml/20g，給予各鼠灌胃，藥后正常給水喂養(yǎng)，觀察7日內(nèi)小鼠死亡數(shù)目及各鼠有無行為活動異常，皮毛、二便、飲食狀態(tài)等不佳表現(xiàn)。實驗結(jié)果以CYHG藥物的最大體積(0.8ml/20g)、最高濃度(30%)，一日內(nèi)2次灌胃給藥，給藥后觀察7日，20只小鼠均狀態(tài)'良好，未出現(xiàn)任何不適現(xiàn)象，皮毛光亮、活動正常、攝食正常、無腹瀉發(fā)生，測定結(jié)果，最大給藥量為24gCYHG藥物/kg(相當于356.04g組方生藥/kg),相當于臨床人最高劑量(0.05g/kg)的480倍(計算公式如下)。實驗表明本發(fā)明藥物組合物即CYHG藥物毒性低微。最大給藥量倍數(shù)=(每只小鼠給藥量/小鼠平均體重)X(成人平均體重/成人每日用量)=(0.3X0.8X2/20)X(60000/3)=480(倍)第三部分實施例一處方:橙皮苷部位86.58g、射干苷部位129.87g、黃芩苷部位173.16g、葛根素部位86.58g。制法1:分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法見本實施例下述1、2、3、4.)，混合均勻后，即為CYHG藥物。制法2:分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法見本實施例下述l、2、3、4.)與淀粉適量，混合均勻后，常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號硬膠囊。制成CYHG膠囊。用法用量口服，一次l-2粒，一日3次。規(guī)格0.5g/粒。'1、橙皮苷部位(即橙皮苷提取物，全文同)提取工藝流程及質(zhì)量標準橙皮苷部位提取工藝取蘆柑皮(或蘆柑皮渣)[蕓香科柑橘屬植物蘆柑Crtruschinensis(L.)0sbeck的成熟干燥外層果皮]適當粉碎，用10倍量(70%的乙醇為水和乙醇v/v混合，全文同)，先浸泡lh后，于85'C水浴條件下回流連續(xù)提取藥材4次，每次l小時，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇至無醇味，并將提取物用適量蒸餾水(藥材總體積=1§:2ral)轉(zhuǎn)移至燒杯中，靜置過夜，抽濾，干燥(65°C、0.08Mpa)，得粗提物(母液反復3次沉淀粗提物，每次沉淀時都要將體積濃縮為原體積的1/2)。取粗提物加入含2%NaOH的50°/。乙醇溶解[粗提物與2%NaOH的50%乙醇比例關(guān)系為1:10(w/v)]，過濾，將濾液加鹽酸調(diào)PH至7，靜置24h待析出沉淀后抽濾，得純化物，65'C減壓真空干燥48h。研磨成粉，得純化物。橙皮苷部位質(zhì)量標準參照中國藥典2005版相關(guān)內(nèi)容進行實驗操作。HPLC色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗填充劑十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相甲醇-醋酸-水(35:4:61);檢測波長283nm，柱溫30'C。對照品溶液精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液。供試品溶液取純化物精密稱重3mg，置于10ml容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度,得供試液樣品測定方法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定。純化物中橙皮苷含量(w/w)為65%以上。橙皮苷部位的提取率得到橙皮苷部位5.5g/100g藥材?？捎藐惼?、青皮、枳實、枳殼、化橘紅、'蕓香科植物佛手果實、蕉柑果實、枸橘果實、擰檬果實、藜檬果皮或枸櫞成熟果實作原料，參照本發(fā)明上述方法提取橙皮苷部位，亦可參見其它文獻方法，如"微波法提取陳皮中橙皮苷"，孫秀利等；中藥材,2007年06期；"正交試驗優(yōu)選枳實中橙皮苷提取工藝"，楊志學等；懷化醫(yī)專學報2007年01期。2、射干苷部位(即射干苷提取物，全文同)提取工藝流程及質(zhì)量標準射干苷部位提取工藝取鳶尾(鳶尾科鳶尾屬植物鳶尾ir^te"or咖Maxim.的干燥莖根，)粗顆粒，加入70%醇提取了3次，每次2小時，每次分別加入IO、8、8倍量乙醇，85'C水浴回流提取，提取液用8層紗布自然過濾，合并三次提取液，水浴減壓濃縮至無醇味體(濃縮過程中可加入少量堿)，并將提取物用適量蒸餾水(藥材總體積-lg:2ml)轉(zhuǎn)移至燒杯中，用鹽酸調(diào)PH到12，靜置10小時，待沉淀完全后，分離得沉淀于酸水液加入2e/。NaOH液調(diào)到PI^89,繼續(xù)濃縮，濃縮到原體積的1/2，然后加鹽酸調(diào)PH到12,靜置10小時，待沉淀完全后，分離得沉淀；于酸水液加入2。/。NaOH液調(diào)至PH^9，繼續(xù)濃縮至原體積的1/2,然后加鹽酸調(diào)PH到1~2，靜置IO小時，待沉淀完全后，分離沉淀物，合并3次沉淀物，然后用抽濾漏斗將沉淀抽干，得射干苷的粗提物。將射干苷粗提物置于容器中，加入無水乙醇(藥材重量g:乙醇體積mH7:10),攪拌均勻后抽濾，取沉淀物，干燥，即得射干苷部位。射干苷部位質(zhì)量標準照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件色譜柱KromasilC18柱，150mmX4.6mm，5wn;流動相流動相水甲醇=80:20(Onin)-40:60(10nin)-20:80(30nin);流速lml/min;柱溫3(TC;檢測波長266nm;按射干苷色譜峰計算，理論塔板數(shù)不低于2500。對照品溶液配制精密稱取射干苷標準品1.124mg至10ml容量瓶中，甲醇溶解后定容至刻度，為射千苷對照品溶液(0.1124mg/ml)。對照藥材溶液制備(按藥典)取鳶尾粉末過50目篩0.4992g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70M乙醇25ml,密塞超聲處理(50HZ)1小時，過濾后不經(jīng)過旋干直接定容到100ml容量瓶中，再從中用移液管轉(zhuǎn)移出2ml到10ml容量瓶中(1:500)，超聲，待測。供試品溶液的制備稱取0.75倍量無水乙醇洗得到的沉淀物干燥后，稱取27.4mg定容于25ml容量瓶中，超聲10分鐘，用移液管出2ml定容于10ml容量瓶中，超聲，微孔濾膜過濾后進HPLC測定含量。測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ul注入液相色譜儀,測定,即得。射干苷提取物中射干苷的含量(w/w)為70%。射干苷部位的提取率得到射干苷部位4g/100g藥材。3、黃芩苷部位(即黃芩苷提取物，全文同)提取工藝流程及質(zhì)量標準黃芩苷部位提取工藝取黃芩(唇形科植物黃芩5b"te7Jaria6aicW朋s/sGeorgi的干燥根)分別加入I2倍、10倍、8倍60%乙醇提取3次，每次1.5小時。提取液減壓濃縮至藥材體積4g:5ml后，鹽酸調(diào)節(jié)PH2，8(TC保溫30min(可提高黃芩苷的含度)，取出，放置24h。抽濾，抽濾后所得沉淀，加相當于藥材3倍體積的水分散均勻，用40%NaOH調(diào)節(jié)PH二7，用加入等體積的95%乙醇攪拌使溶解，靜置12h，濾過，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)PH=2，6(TC保溫60min(可提高黃芩苷的含度，黃芩苷可以在這個溫度條件下析出沉淀，而雜質(zhì)在此溫度條件下保留在溶液中，而達到分離雜質(zhì)的目的)，靜置24h，抽濾，沉淀先用稀乙醇洗，再用水洗至中性，50'C減壓干燥，即得。所得黃芩提取物的含量平均百分率為87.81%,轉(zhuǎn)移率為72.77%。黃苳苷部位質(zhì)量標準照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件色譜柱KromasilC18柱，150mmX4.6mm，5um;流動相甲醇水(0.4%磷酸)=47:53;流速lml/min;柱溫33°C;檢測波長280nm;按黃芩苷色譜峰計算，理論塔板數(shù)不低于2500。樣品溶液制備，對照品及標準曲線制備精密稱取黃芩苷標準品3.3mg至50ml容量瓶中，甲醇溶解后定容至刻度，為黃芩苷對照品溶液(66ug/ml)。供試樣品溶液制備水煎煮精密稱取樣品9.3mg至25ml容量瓶中，用甲醇溶解后，定容至刻度，再從中精密吸取5ml至25ml容量瓶中，甲醇定容，從中吸取4ml至5ml量瓶中，甲醇定容，搖勻，0.45um微孔濾膜過濾后待測。進樣20ul。乙醇提取精密稱取樣品9.3mg至25ml量瓶中，甲醇溶解后，定容至刻度，再從中精密吸取5ml至25ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻，0.45mn微孔濾膜過濾后待測。進樣20ul。樣品中黃芩苷的含量(w/w)為85%。黃芩苷部位的提取率得到黃芩苷部位8g/100g藥材。4、葛根素部位(即葛根素提取物，全文同)提取工藝流程及質(zhì)量標準葛根素部位提取工藝將葛根(野葛，豆科植物野葛A/eraria7otete(Willd.)Ohwi的干燥根)適當粉碎，分別用8倍量70%乙醇回流提取3次，每次1.5小時。將乙醇提取液減壓回收乙醇(607(TC，-0.08Mpa)，將提取濃縮液置減壓干燥器中，調(diào)節(jié)干燥溫度為60±5'C，真空度為-0.08MPa，干燥后，取出干燥物觀察其性狀，并粉碎成細粉，備用。葛根素部位質(zhì)量標準采用HPLC法對葛根提取物中的葛根素進行含量測定。色譜條件以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以甲醇一水(25:75)為流動相；檢測波長250nm;理論板數(shù)按葛根素峰計算不得低于4000。供試品溶液的制備稱取葛根提取物約30mg，精密稱定，置50ml量瓶中，以30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，過微孔濾膜，備用。對照品溶液的制備稱取葛根素對照品約2mg，精密稱定，置25ml量瓶中，以30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；再精密吸取5ml置10ml量瓶中，以30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，備用。測定法分別精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液各20ul注入液相色譜儀，測定，即得。含量限量本品含葛根素(C21H2()09)不得少于10%(w/w)。葛根素部位的提取率得到葛根素部位4g/100g藥材。實施例二CYHG純品-混合物的制備處方橙皮苷2g、射干苷3g、黃芩苷4g、葛根素2g所用原料均為市購，植物中提取的或化學合成的原料藥均可使用，含量不低于卯％;如果需要可按常規(guī)方法純化到90%以上，比如95%，制法分別稱取上述處方量藥物，混合均勾后，即為CYHG純品-混合物。實施例三CYHG純品-膠囊的制備處方橙皮苷86.58g、射干苷129.87g、黃芩苷173.16g、葛根素86.58g。制法分別稱取上述處方量藥物(組方藥物均系市場購買)與淀粉適量，混合均勻后,常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號硬膠囊。制成CYHG純品-膠囊。用法用量口服，一次l-2粒，一日3次。規(guī)格0.5g/粒。實施例四處方橙皮苷部位20g、射干苷部位40g、黃芩苷部位40g、葛根素部位20g。制法分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法參見實施例一下述1、2、3、4.)與淀粉適量，混合均勻后，常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號硬膠囊。實施例五處方橙皮苷部位30g、射干苷部位30g、黃芩苷部位40g、葛根素部位30g。制法分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法參見實施例一下述1、2、3、4.)與淀粉適量，混合均勻后，常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號硬膠囊。實施例六處方橙皮苷部位20g、射干苷部位30g、黃芩苷部位40g、葛根素部位20g。橙皮苷提取物中橙皮苷含量70%,黃芩苷提取物中黃芩苷含量90%，葛根素提取物中葛根素含量20%，射干苷提取物中射干苷含量50%。制法分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法參見實施例一下述1、2、3、4.)與淀粉適量，混合均勻后，常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號硬膠囊。實施例七處方橙皮苷部位40g、射干苷部位60g、黃芩苷部位80g、葛根素部位40g。橙皮苷提取物中橙皮苷含量65%,黃芩苷提取物中黃芩苷含量85%，葛根素提取物中葛根素含量10%，射干苷提取物中射干苷含量70%。制法分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法參見實施例一下述1、2、3、4.)與淀粉適量，混合均勻后，常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號硬膠囊。實施例八處方橙皮苷部位10g、射干苷部位10g、黃芩苷部位20g、葛根素部位10g。橙皮苷提取物中橙皮苷含量50%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量50%，葛根素提取物中葛根素含量10%，射干苷提取物中射干苷含量70%。制法分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法參見實施例一下述1、2、3、4.)與淀粉適量，混合均勻后，常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號硬膠囊。實施例九處方橙皮苷部位20g、射干苷部位30g、黃芩苷30g、野葛30g。橙皮苷提取物中橙皮苷含量50%，黃芩苷含量測定為卯％，野葛(粉末)中葛根素含量5%,射干苷提取物中射干苷含量70%。制法分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法參見實施例一下述1、2、3、4.)混合均勻后，裝制成1000粒0號硬膠囊。權(quán)利要求1、一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的藥效原料按重量計為橙皮苷1-4份、黃芩苷2-8份、葛根素1-4份、射干苷1-6份。2、權(quán)利要求l的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的藥效原料按重量計為橙皮苷2-3份、黃芩苷3-4份、葛根素2-3份、射干苷2-3份。3、一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的藥效原料按重量計為橙皮苷提取物1-4份、黃芩苷提取物2-8份、葛根素提取物1-4份、射干苷提取物1-6份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量10-90%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量10-90%，葛根素提取物中葛根素含量5-20%，射干苷提取物中射干苷含量10-90%。4、權(quán)利要求3的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的藥效原料按重量計為橙皮苷提取物2-3份、黃芩苷提取物3-4份、葛根素提取物2-3份、射干苷提取物2-3份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量50-65%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量50-85%，葛根素提取物中葛根素含量10-15%，射干苷提取物中射干苷含量50-70%。5、一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的藥效原料按重量計為含橙皮苷的植物l-4份、黃芩2-8份、含葛根素的植物l-4份、含射干苷的植物l-6份；含橙皮苷的植物選自陳皮、青皮、枳實、枳殼、化橘紅、蕓香科植物佛手果實、蕉柑果實、枸橘果實、檸檬果實、藜檬果皮、枸櫞成熟果實、蘆柑皮和蘆柑皮渣中的一種或幾種混合物；含葛根素的植物選自野葛和/或葛根，含射干苷的植物選自鳶尾和/或射干。6、一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物的制備方法，包括如下步驟取藥效原料蘆柑皮或蘆柑皮渣、鳶尾、黃芩、野葛；用水和/或乙醇作溶劑，加熱提取上述藥效原料，得提取液；將提取液^^縮后，得濃縮物，向該濃縮物中加入水，濾取沉淀物。7、權(quán)利要求6藥物組合物的制備方法，其特征在于用50-80%乙醇分別提取上述藥效原料，得提取液；分別濃縮提取液后，得到相應(yīng)濃縮物，分別向這些濃縮物中加水，分別濾取沉淀物，干燥沉淀物，得到粗制的橙皮苷提取物、黃芩苷提取物、葛根素提取物和射干苷提取物；該橙皮苷提取物中橙皮苷含量不低于10%,黃芩苷提取物中黃芩苷含量不低于10%，葛根素提取物中葛根素含量不低于5%，射干苷提取物中射干苷含量不低于10%。8、權(quán)利要求7藥物組合物的制備方法，其特征在于用60-70%乙醇分另"提取上述藥效原料；所述粗制的橙皮苷提取物、黃芩苷提取物和射干苷提取物可用常規(guī)加堿溶解、加酸沉淀方法精制；橙皮苷提取物中橙皮苷含量20-90%,黃芩苷提取物中黃芩苷含量20-90%，葛根素提取物中葛根素含量10-20%，射干苷提取物中射干苷含量20-90%;按重量計稱取橙皮苷提取物l-4份、黃芩苷提取物2-8份、葛根素提取物l-4份、射干苷提取物l-6份，與藥學上可接受輔料或載體混合。9、權(quán)利要求8藥物組合物的制備方法，所述橙皮苷提取物的精制方法是:取粗制的橙皮苷提取物加入含2n/。NaOH的50°/。乙醇溶解，過濾，將濾液加鹽酸調(diào)PH至7左右，靜置24h后，濾取沉淀，干燥；黃芩苷提取物的精制方法是取粗制的黃芩苷提取物加相當于藥材3f咅體積的水分散均勻，用40XNaOH調(diào)節(jié)PH7左右，用加入等體積的95%乙醇攪拌使溶解，靜置12h，濾過，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)PH2左右，60'C保溫60min，靜置24h后，濾取沉淀，先用稀乙醇洗漆沉淀，再用水洗滌沉淀至中性，減壓干燥；射干苷提取物的精制方法是將60-70%乙醇提取液濃縮后，加入水，用鹽酸調(diào)PH到12，靜置10小時后，濾取沉淀；于酸水液加入2。/。NaOH液調(diào)到PH至89,繼續(xù)濃縮，濃縮到原體積的1/2，然后加鹽酸調(diào)PH至U12,靜置10小時后，濾取沉淀；合并兩次沉淀物，然后用抽濾漏斗將沉淀抽干，得射干苷的粗提物，向射干苷粗提物中加入無水乙醇(藥材重量g:乙醇體積ml-7:10)，攪拌均勻后，濾取沉淀物，干燥。10、權(quán)利要求8藥物組合物的制備方法，其中按重量計稱取橙皮苷提取物2-3份、黃苳苷提取物3-4份、葛根素提取物2-3份、射干苷提取物2-3份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量50-65%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量50-85%,葛根素提取物中葛根素含量10-15%，射干苷提取物中射干苷含量50-70%,與口服制劑輔料混合，制成膠囊劑、分散片、普通片、顆粒劑、口服液。11、一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的藥效原料按重量計為含橙皮苷的原料l-4份、含黃芩苷的原料2-8份、含葛根素的原料l-4份、含射干苷的原料1-6份；含橙皮苷的原料中橙皮苷含量不低于10%，含黃芩苷的原料中黃零苷含量不低于10%,含葛根素的原料中葛根素含量不低于5%，含射干苷的原料中射干苷含量不低于10%;所述含橙皮苷的原料包括含橙皮苷的植物、橙皮苷提取物或橙皮苷；含橙皮苷的植物選自陳皮、青皮、枳實、枳殼、化橘紅、蕓香科植物佛手果實、蕉柑果實、枸橘果實、檸檬果實、藜檬果皮、枸櫞成熟果實、戸柑皮和盧柑皮渣中的一種或幾種混合物；含黃苳苷的原料包括黃芩、黃芩提取物和黃芩苷；含葛根素的原料包括野葛或葛根、葛根素提取物和葛根素；含射干苷的原料包括鳶尾或射干、射干苷提取物和射干苷。全文摘要一種治療呼吸系統(tǒng)感染的含橙皮苷提取物、黃芩苷提取物、葛根素提取物和射干苷提取物的藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物具有解熱、鎮(zhèn)痛、消炎、抗菌和抗病毒的作用，尤其適宜防治上呼吸道感染。文檔編號A61K31/7042GK101152202SQ200710132670公開日2008年4月2日申請日期2007年9月29日優(yōu)先權(quán)日2007年9月29日發(fā)明者楊中林申請人:中國藥科大學