專利名稱：一種單克隆抗體的制劑的制作方法
一種單克隆抗體的制劑本發(fā)明涉及制劑生產領域。更具體地，本發(fā)明提供了一種新型免疫抑制劑— 抗CD25嵌合單克隆抗體水針劑，以及相應的生產方法，包括有關的的輔料篩選 和凍干工藝。
背景技術：
器官移植是治療終末期器官疾病的最有效的治療手段。以腎移植為例，同 種異體腎移植是目前治療末期腎病的最有效的方法。腎移植是我國臨床開展最 早、例數(shù)最多、技術最成熟的大器官移植，已成為治療終末期.腎病的常規(guī)手術。 近年來，器官移植病例數(shù)不斷增長。以腎移植手術為例至2001年底，我國腎 移植的累積總數(shù)達40393例。我國腎移植水平已進入國際先進行列。供體腎臟移植到患者體內，擔任體內衛(wèi)兵的T細胞等免疫系統(tǒng)將會對外源的 腎臟展開進攻，也就是產生移植排斥反應。在這個過程中，L細胞受IL-l作用 后增生，'并且釋放IL-2。 IL-2可進而促進L細胞增生并為CTL細胞(CD8 +細 胞毒性T細胞)的分化提供輔助信號。CTL細胞與HLA-1抗原結合后可引起分化， 成為成熟的CTL，溶解移植組織。由此可見，阻斷IL-2因子與其受體的結合對 于器官移植的排斥反應相當重要。器官移植后的急性排斥反應較常見，這種反應可能會引起移植腎臟的壞死或 者移植腎功能衰退。因此，能夠降低和減弱這類反應的藥物對于器官移植的成功與否至^重要。臨床上一般采用免疫抑制劑對器官移植病人進行治療，拘制移植 排斥反應的發(fā)生或減輕反應程度。因此，接受腎移植者不得不終身服用免疫抑制 藥物以達到l.合理應用以預防和治療排斥反應(保護異己的腎臟)；2.保持患 者適度的免疫抵抗力(保護患者本身)。
新的免疫抑制劑的研制，使臨床腎移植得到更為廣泛的并展，腎移植數(shù)量急 劇增長，效果明顯提高，腎移植一年存^率在先進的移植中心已超過85%，術后 大多數(shù)患者恢復正常生活和工作。其中免疫抑制劑在預防和治療腎移植排斥反應 中起了關鍵作用。然而，迄今應用于臨床的免疫W制劑并沒有達到非常滿意的效 果。卜雖然移植的腎一年存活率達80-90%，但急性排斥反應發(fā)生率仍高達50、。目前，臨床上使用較多的免疫抑制劑有化學藥物他克羅姆(Neural)，他可 莫司(PK506)或普樂可復、驍悉(畫F)、雷帕霉素(RAPA)及新一代單克隆抗 體藥物ZenapaxTM、 Simulec^與0KT3 。臨床試驗表明單克隆抗體類藥物的療效 較化學類藥物好，但費用相當昂貴，以ZenapaxTM為例， 一個療程每人就需要花 約人民幣30萬元的藥費。并且，現(xiàn)有單克隆抗體產品存在一些主要的問題1. 鼠源性單克隆抗體為異種蛋白，進入人體會引起機體的排異反應，針對需要多 次重復治療的鼠源性單克隆抗體的抗體可將其快速從體內清除，這是限制鼠源性 單克隆抗體治療性臨床應用的最大障礙。同時，鼠源性單克隆抗體激活人體其他 免疫系統(tǒng)如補體系統(tǒng)的能力差，從而影響其臨床治療效果。為解決上述問題，嵌合性和人源化單克隆抗體應運而生。人源化單克隆抗 體的結構中有90%與人的抗體結構相同，從而降低了產品的異源性。2. 高人源化單克隆抗體在進行抗體工程的處理過程中常常會失去對靶抗原的親 合力和穩(wěn)定性，同時也存在生產細胞建株困難，產量低等難點，且一直缺乏有效 的解決方法。因此，本領域迫切需要開發(fā)新的安全有效、產量高的新型免疫抑制劑。新 型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克隆抗體為一種免疫抑制劑，通過結合與和封閉 IL-2受&，特異性阻斷IL-2與其受體的結合，從而減少急性排異反應的發(fā)生， 與三聯(lián)免疫抑制劑合用，可顯著減少急性器官移植排異反應的發(fā)生。但是，由于 注射用Lotact-l是個全新的蛋白，在國內還沒有上市的產品，所以，急需一種高 效、簡便、低成本，適用于.產業(yè)化生產的生產方法。本發(fā)明通過選擇適合的劑型、輔料、生產工藝，通過控制關鍵的工藝條件
使制得的產品保持了很高的活性和穩(wěn)定性。中試研究表明，產品制造工藝穩(wěn) 定，操作簡單，周期短，成木低。適合產業(yè)化牛產。發(fā)明內容木發(fā)明的目的就是提供一種新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克隆抗體水針劑木發(fā)明的另一目的就是提供一種高效和/或簡便的生產新型免疫抑制劑一抗 CD25嵌合單克隆抗體水針劑的方法。在木發(fā)明的第一方面，就是提供了一種新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克 隆抗體水針劑，它是一種磷酸緩沖溶液，含有新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單 克隆抗體，吐溫80， NaCl。在木發(fā)明的第二方面，提供了一種新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克隆抗 體水針劑的方法，該方法包括步驟a. 將新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克隆抗體與輔料混合；b. 加入合適的緩沖溶液；c. 以合適的制劑規(guī)格分裝；在另一優(yōu)選例中，所述的輔料是0.15M NaCl， 0.2mg/ml吐溫80。 在另一優(yōu)選例中，所述的緩沖溶液是20mM磷酸緩沖溶液，pH6.9。 在木發(fā)明的另一優(yōu)選例中，新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克隆抗體水針 劑澄明度好，穩(wěn)定性可達2年。木發(fā)明的優(yōu)點在于(1) 選用的輔料和緩沖溶液易得，廉價，適合產業(yè)化生產。(2) 優(yōu)化后的牛產工藝穩(wěn)定，操作簡單，效率高，成木低，適合產業(yè)化生產。(3) 由于采用水針劑，臨床使用便捷，通過控制關鍵的牛產工藝條件，澄 明度好，穩(wěn)定性可達2年。
具體實施方式
本發(fā)吸人通過深入而廣泛的研究，通過對輔料、緩沖溶液等因素的篩選和優(yōu) 化，生產新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克隆抗體水針劑，獲得高穩(wěn)定和高活 性的水針劑，實現(xiàn)了新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克隆抗體水針劑規(guī)?；?產，在此基礎上完成了本發(fā)明。本發(fā)明根據(jù)相關資料的查詢整理總結，通過對輔料、緩沖溶液和生產工藝 的篩選和摸索，以澄明度、活性變化等參數(shù)為指標優(yōu)化工藝，方法概要如下表。 表1方法概要步驟試驗名稱取點工作基礎要獲得的參數(shù)單次試驗時間試驗l輔料種類3-5種，濃度 5-15%文獻、溶解性能外觀、活性變化第1周試驗2輔料濃度l-2種，濃度細化試驗1外觀、活性變化第2周'試驗3初步穩(wěn)定 ,、， 性試驗數(shù) 據(jù)"2種試驗:'3外觀、活性變化第4周開始，約 2個月試驗4中試放大1種.試驗3外觀、活性變化試驗5中試優(yōu)化1種試驗3外觀、活性變化、 產業(yè)化價值在本發(fā)明的一個實例中，進行了緩沖溶液及其pH的篩選。保證了樣品的活 性和穩(wěn)定性。 .在本發(fā)明的另一個實例中，進行了輔料種類及其濃度的篩選，進一步保證了 新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克隆抗體活性和穩(wěn)定性。在本發(fā)明的另一個實例中，進行了新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克隆抗 體水針劑的初步穩(wěn)定性試驗，結果表明該水針劑穩(wěn)定。通過以上方法，得到優(yōu)化的工藝，通過此工藝制得新型免疫抑制劑一抗CD25 嵌合單克'隆抗體'注射用水針劑。中試研究表明，產品制造工藝穩(wěn)定，操作簡單，周期短，成本低，適合產業(yè) 化生產。下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明 本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法， 通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克隆實驗室手冊(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建 議的條件。實施例l.初步穩(wěn)定性實驗輔料為氯化鈉0.15MNad,加速穩(wěn)定性實驗結果顯示，一2(TC條件下，保存3個月，在燈下用肉眼觀察新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克隆抗體水針澄明 度良好，電泳檢測結果顯示，此產品具有很好的穩(wěn)定性。
權利要求
1.一種新型免疫抑制劑-抗CD25嵌合單克隆抗體水針劑，其特征在于，它由新型免疫抑制劑-抗CD25嵌合單克隆抗體，合適的輔料和合適的緩沖體系組成。
2. 如權利要求1所述M水針'劑，其特征在于，所述的輔料為0.Q,1-0.5M NaCl氯化鈉， 0.01-0.5mg/ml吐溫§0，較佳地，0.15MNaCl氯化鈉，0.2mg/ml吐溫80。
3. 如權利要求1所述的水針劑，其特征在于，所述的緩沖體系是10-100mM磷酸緩沖溶 液，pH5-8。較佳地，20mM磷酸緩沖溶液，pH6.9。
4. 一種新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克隆抗體水針劑的制備方法，其特征在于，該方 法包括步驟a. 將新型免疫抑制劑一抗CD25嵌合單克隆抗體與輔料混合；b. 加入合適的緩沖溶液；c. 按合適的規(guī)格分裝。
5. 如權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(a)所述的輔料是0.01-0.5MNacl氯化 鈉，0.01-0.5mg/ml吐溫80，較佳地，0.15MNacl氯化鈉，0,2mg/ml吐溫§0。
6.如權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(b)所述的緩沖溶液是10-100mM磷酸 緩沖溶液，pH5-8。較佳地，20mM磷酸緩沖溶液，pH6.9。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新型免疫抑制劑-抗CD25嵌合單克隆抗體水針劑，及其生產方法。通過新型免疫抑制劑-抗CD25嵌合單克隆抗體與合適的輔料混合，并通過凍干程序、工藝優(yōu)化的摸索和研究后，得到了一套新型免疫抑制劑-抗CD25嵌合單克隆抗體水針劑的生產方法。用本法，可得到高活性、高穩(wěn)定性的抗CD25嵌合單克隆抗體嵌合體水針品。本發(fā)明高效、簡便、低成本，適用于產業(yè)化生產。
文檔編號A61K39/395GK101152572SQ20071014708
公開日2008年4月2日 申請日期2007年9月5日 優(yōu)先權日2006年9月6日
發(fā)明者軍 任, 瑤 張, 湯志清, 駿 蔡, 郭學彥, 黃陽濱 申請人:上海新生源生物醫(yī)藥有限公司