專利名稱：治療與視黃醇有關(guān)的疾病的方法、分析和組合物的制作方法
治療與纟見黃醇有關(guān)的疾病的方法、分析和組合物本申請是申請日為2005年12月7日、申請?zhí)枮?00580041886.3的發(fā)明名稱和本申請相同的發(fā)明專利申請的分案申請。 有關(guān)申請本發(fā)明要求(a)2004年12月8日提交的美國臨時申請序列號 60/634,449， (b)2005年3月10日提交的美國臨時申請序列號 60/660,924, (c)2005年3月11日提交的美國臨時申請序列號 60/660,904, (d)2005年4月18日提交的美國臨時申請序列號 60/672,405和(e)2005年7月11日提交的美國臨時申請序列號 60/698,512的權(quán)益；在此將上述專利申請以整體引入本文作為參考。技術(shù)領(lǐng)域本文所述的方法和組合物涉及在患者中治療與視黃醇有關(guān)的疾 病，包括在患者中調(diào)節(jié)視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)和運甲狀腺素蛋白(TTR) 的活性或利用率。
背景技術(shù)：
類視黃醇對于維持正常生長、發(fā)展、免疫、再生、視力和其他 生理過程是重要的。相反地，類視黃醇的產(chǎn)生或作用異常與疾病過 程的表現(xiàn)有關(guān)。例如，全世界超過1億的兒童缺乏維生素A,導致這些兒童發(fā) 生失明和死亡。在耙器官和組織，例如眼中維生素-A水平過量也會 在許多視網(wǎng)膜疾病，包括黃斑變性中導致失明。很多種的病癥，一 般稱作玻璃體視網(wǎng)膜疾病，可以作用于位于眼睛背面部分的玻璃體
和-現(xiàn)網(wǎng)膜，這些疾病包括:規(guī)網(wǎng)膜病和黃斑變性和營養(yǎng)不良。黃斑變 性是一組眼部疾病，是美國55歲及以上的人群中首要的治盲原因， 影響了超過1000萬美國人。
一些研究表明，在下個十年新的黃斑變 性的病例數(shù)將會增加6倍，具有了流行的特性。與年齡有關(guān)的黃斑 變性或營養(yǎng)不良(一種特別地使人虛弱的疾病)導致視力逐漸喪 失，并最終嚴重損害中央視覺。異常水平的維生素A,和/或與其結(jié)合的運輸?shù)鞍?視黃醇結(jié)合蛋 白(RBP)和運甲狀腺素蛋白(TTR))也與其他疾病包括代謝性疾病的 表現(xiàn)有關(guān)。 一個例子是在糖尿病中觀察到的，其中異常水平的視黃 醇在I型和II型糖尿病患者中都可以見到，但在正常的患者中觀察 不到。其他疾病包括腦假瘤(PTC)、自發(fā)性顱內(nèi)高壓(IIH)、和與骨有 關(guān)的疾病包括頸推病、脊骨肥厚和彌漫性特發(fā)性骨肥厚(DISH)。此 外，維生素A和/或與其結(jié)合的運輸?shù)鞍?，特別是TTR在蛋白質(zhì)錯 折疊和聚集性疾病，例如阿爾茨海默病和系統(tǒng)'f生淀粉樣變性中發(fā)揮 作用。與視黃醇有關(guān)的生理學表現(xiàn)有關(guān)的疾病仍然是世界性的 一 個問 題。因此，需要提供一種治療這些疾病的方法和組合物。發(fā)明簡述本文描述的鑒定和^r測試劑的方法和組合物，其中該試劑在哺 乳動物中調(diào)節(jié)視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)或運甲狀腺素蛋白(TTR)水平或 活性。同時本文描述的是鑒定化合物和治療劑的分析法，以及通過 施用化合物或治療劑治療患視黃醇有關(guān)的疾病的患者或病人的方法 和組合物，其中所述施用導致在所述患者或病人中調(diào)節(jié)了 RBP或 TTR水平或活性。同時本文也描述了治療患有與視黃醇有關(guān)的疾病 的患者的方法，包括通過施用這些化合物在患者中調(diào)節(jié)RBP或TTR 水平或活性。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物 中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次有
效量的在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR轉(zhuǎn)錄的試劑，其中所述 RB P或TTR水平或活性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中全反式視黃醛的 產(chǎn)生。在一個實施方案中，該試劑可以選自RXR/RAR激動劑、 RXR/RAR拮抗劑、雌激素激動劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪 酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕酮拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松 拮抗劑、反義寡核苷酸、siRNA、脂肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激 動劑、C/EBP拮抗劑、HNF-1激動劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3激動 劑、HNF-3拮抗劑、HNF-4激動劑、HNF-4拮抗劑、HNF-6激動劑、 HNF-6拮抗劑、適體、鋅指結(jié)合蛋白、核酶和單克隆抗體。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動 物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次 有效量的RBP或TTR翻譯抑制劑，其中所述RBP或TTR水平或活 性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中全反式視黃醛的產(chǎn)生。該試劑可以選 自RXR/RAR激動劑、RXR/RAR拮抗劑、雌激素激動劑、雌激素 拮抗劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕酮拮抗劑、地 塞米松激動劑、地塞米松拮抗劑、反義寡核苷酸，siRNA，脂肪酸結(jié) 合蛋白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP拮抗劑、HNF-1激動劑、HNF-1 拮抗劑、HNF-3激動劑、HNF-3拮抗劑、HNF-4激動劑、HNF-4拮 抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6拮抗劑、適體、核酶和單克隆抗體。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物 中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次有 效量的調(diào)節(jié)哺乳動物中RBP與TTR結(jié)合的試劑，其中所述RBP或 TTR水平或活性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中全反式視黃醛的產(chǎn)生。 該調(diào)節(jié)劑可以結(jié)合到RBP或TTR上，以抑制哺乳動物中RBP和 TTR的結(jié)合。該調(diào)節(jié)劑也可以拮抗RBP與視黃醇的結(jié)合，以抑制 RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。該調(diào)節(jié)劑可以選自視黃基 衍生物、多卣化的芳香烴、甲狀腺激素激動劑、曱狀腺激素拮抗劑、 雙氯芬酸、雙氯芬酸類似物、小分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、 黃酮類、非甾體抗炎藥、二價抑制劑、強心劑、擬肽、適體和抗體。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物中的;f見黃基^汙生 物是具有下列結(jié)構(gòu)的化合物，或其活性代謝物、或藥學可接受的前 藥或溶劑化物其中X!選自NR2、 O、 S、 CHR2; R,是(CHR2)x-LLr3,其中x 是0、 1、 2或3; 1^是單鍵或畫C(0)-; 112是選自H、 (C廣C4)烷基、F、 (d-C4)氟代烷基、(C廣CO烷氧基、-C(O)OH、 -C(0)-NH2、扁(C廣C4)烷基胺、-<:(0)畫((:1誦(:4)烷基、-c(oHd-co氟代烷基、-c(o)-(c廣c4)烷基胺、和-C(O)-(C,- C4)烷氧基的部分；和R 是H或是任選被1-3個獨立選擇的取代基取代的部分，所述取代基選自(C2-C7)烯基、 (C2-C7)炔基、芳基、(C3-C7)環(huán)烷基、(Cs-C7)環(huán)烯基、和雜環(huán)。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物中的視黃基衍生 物是具有下列結(jié)構(gòu)的化合物，或其活性代謝物、或藥學可接受的前藥或溶劑化物其中X、自NR2、 O、 S、 CHR2; R1是(CHR2)x陽L、R3，其中x 是0、 1、 2,或3; 〃是單鍵或-C(0)-; R2是選自H、 (C廣C4)烷基、 F、 (Cr Q)氟代烷基、(d- Q)烷氧基、-C(O)OH、 -C(0)-NH2、國(C廣C4)烷基胺、-c(OHd-C4)烷基、-<:(0)-(<:1-(:4)氟代烷基、-QOHd-c^)烷基胺和-C(O)-(C,- C4)烷氧基的部分；和R 是H或是任選被1-3個獨立選擇的取代基取代的部分，所述取代基選自(C2-C7)烯基、(C2-C7) 炔基、芳基、(C3-C7)環(huán)烷基、(Cs-C7)環(huán)烯基和雜環(huán)。在進一步的實施方案中，(a)X1是NR2，其中R"是H或(C廣C4) 烷基；(b)x是0; (c)x是l并且L1是-C(O)-; (d)R 是任選取代的芳
基；(e)RS是任選取代的雜芳基；(f)X'是NH并且R^是任選取代的芳 基，包括在進一步的實施方案中，(i)芳基具有1個取代基，(ii)芳基 具有1個選自鹵素、OH、 0(C廣C4)烷基、NH(C廣C0烷基、0(C廣C4) 氟代烷基、和N[(d- C0烷基]2的取代基，(iii)芳基具有1個OH取代 基，(v)芳基是苯基，或(vi)芳基是萘基；(g)該化合物是或其活性代謝物、或藥學可接受的前藥或溶劑化物；(h)該化合 物是4-羥苯基視黃酰胺，或其活性代謝物、或藥學可接受的前藥或 溶劑化物；(i)該化合物是4-甲氧苯基視黃酰胺，或(j)4-氧代芬維A 胺，或其活性代謝物、或藥學可接受的前藥或溶劑化物。在進一步的實施方案中，施用通式(II)的化合物是用于治療眼部 病癥，包括降低在患者體內(nèi)降低血清視黃醇的水平。在進一步的實 施方案中，(a)有效量的該化合物是系統(tǒng)性施用于該哺乳動物；(b)有 效量的該化合物是口服施用于該哺乳動物；(c)有效量的該化合物是 靜脈施用于該哺乳動物；(d)有效量的該化合物是經(jīng)眼施用于該哺乳 動物；(e)有效量的該化合物是通過離子電滲療法施用的；或(f)有效 量的該化合物是通過注射施用于該哺乳動物。在進一步的實施方案中，該哺乳動物是人，所包括的實施方案， (a)該人是Stargardt病的突變ABCA4基因的載體或該人是Stargardt 病的突變ELOV4基因的載體，或在與年齡有關(guān)的黃斑變性有關(guān)的補 體因子H中具有遺傳變異，或(b)該人具有眼部疾病或特征，其中眼 部疾病或特征選自Stargardt病、隱性;現(xiàn)網(wǎng)膜色素變性、地圖狀萎縮(其 中盲點是一個非限制性的例子)、光感受器變性、干性AMD、隱性 錐體-桿營養(yǎng)不良、滲出性(或濕性)與年齡有關(guān)的黃斑變性、錐體-桿 營養(yǎng)不良和視網(wǎng)膜色素變性。在一個進一步的實施方案中，該哺乳 動物是視網(wǎng)膜變性的動物模型。
在進一步的實施方案中，該方法包括多次施用有效量的在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié)合的試劑，包括的進一步實施方案，其中 (i)多次施用之間的時間是至少 一周；(ii)多次施用之間的時間是至少 一天；和(iii)該化合物是基于每日施用于該哺乳動物；或(iv)該化合 物是每12小時施用于該哺乳動物。在進一步的或可替代的實施方案 中，該方法包括休藥期，其中暫時停止藥物的施用或暫時減少要施 用的化合物的劑量；在休藥期結(jié)束時，恢復化合物的劑量。休藥期 的長度可以是2天到1年不等。
在進一步的實施方案中，該方法包括施用至少一種其他試劑， 選自一氧化氮產(chǎn)生的誘導物、抗炎劑、生理可接受的抗氧化劑、生 理可接受的礦物質(zhì)、帶負電荷的磷脂、類癌瘤、他汀類、抗血管生 成藥、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、13-順式-維甲酸(包括13-順式-維曱 酸的衍生物)、ll-順式-維曱酸(包括ll-順式-維甲酸的衍生物)、9-順 式-維甲酸(包括9-順式-維甲酸的衍生物)、和視黃胺的衍生物。在進 一步的實施方案中，
(a) 其他試劑是一氧化氮產(chǎn)生的誘導物，包括的實施方案，其中 一氧化氮產(chǎn)生的誘導物選自瓜氨酸、鳥氨酸、硝基化的L-精氨酸、 亞硝基化的L-精氨酸、硝基化的N-羥基-L-精氨酸、亞硝基化的N-羥基-L-精氨酸、硝基化的L-高精氨酸和亞硝基化的L-高精氨酸；
(b) 其他試劑是抗炎劑，包括的實施方案，其中抗炎劑選自非甾 體抗炎藥、脂肪氧合酶抑制劑、潑尼松、地塞米松、和環(huán)氧合酶抑 制劑；
(c) 其他試劑是至少一種生理可接受的抗氧化劑，包括其中生理 可接受的抗氧化劑選自維生素C、維生素E、 |3-胡蘿卜素、輔酶Q、 和4-羥基-2，2，6，6-四甲基哌啶-N-氧基的實施方案，或以下實施方案， 其中(i)至少一種生理可接受的抗氧化劑是與在所述哺乳動物中調(diào)節(jié) RBP與TTR結(jié)合的試劑施用，或(ii)至少兩種生理可接受的抗氧化劑 是與在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié)合的試劑施用；
(d) 其他試劑是至少一種生理可接受的礦物質(zhì)，包括其中生理可
接受的礦物質(zhì)選自鋅(n)化合物、銅(n)化合物、和硒(n)化合物的實 施方案，或進一步包含給哺乳動物施用生理可接受的抗氧化劑的實 施方案；(e) 其他試劑是帶負電荷的磷脂，包括其中帶負電荷的磷脂是磷 脂酰甘油的實施方案；(f) 其他試劑是類胡蘿卜素，包括其中類胡蘿卜素選自葉黃素和 玉米黃素的實施方案；(g) 其他試劑是他汀類，包括其中他汀類選自羅蘇伐他汀、普伐 他汀、辛4戈〗也汀、普^U也汀、西立^U也汀、美4戈他汀、velostatin、 氟伐他汀、康帕丁、洛伐他汀、達伐他汀、fluindostatin、阿伐他汀、 阿伐他汀4丐、和二氫康帕丁的實施方案；(h) 其他試劑是抗血管生成藥，包括其中抗血管生成藥是Rhufab V2、色氨?；?tRNA合成酶、抗-VEGF peg化適體、角鯊胺、乙酸 阿奈司他、考布他汀A4前藥、MacugenTM、米非司酮、subtenon曲 安奈德、玻璃體內(nèi)晶體曲安奈德、AG3340、氟輕松、和VEGF-Trap 的實施方案；(i) 其他試劑是基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑，包括其中基質(zhì)金屬蛋白 酶抑制劑是金屬蛋白酶組織抑制劑、a2-巨球蛋白、四環(huán)素、氧肟酸 鹽、螯合劑、合成的MMP片段、琥珀酰巰嘌呤、磷酰胺、和羥氨基 酸的實施方案；(j)其他試劑是補體抑制劑，僅僅用于舉例，包括C1、 C2、 C3、 C4、C5、C6、C7、C8、和C9的抗體，例如在U.S. 5,635,178; 5,843,884; 5,847,082; 5,853,722;和Rollins等人；Transplantation, 60: 1284-(k)其他試劑是魚油，僅僅用于舉例，包;舌co3脂肪酸； (l)其他試劑是13-順式-維甲酸(包括13-順式-維甲酸的衍生物)，11-順式-維甲酸(包括11-順式-維曱酸的衍生物)、或9-順式-維甲酸(包括9-順式-維曱酸的衍生物)；(m)其他試劑是視黃胺的衍生物，包括全-反式-視黃胺的衍生物、 13-順式-視黃胺的衍生物、11-順式-視黃胺的衍生物、或9-順式視黃胺的4汙生物；(n)施用其他試劑(i)在施用在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)rbp與ttr 結(jié)合的試劑之前，(ii)在施用在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié) 合的試劑之后，(iii)與施用在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié)合 的試劑同時，或(iv)在施用在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié)合 的試劑之前和之后，或(o)其他試劑和在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié)合的試劑 是在相同的藥物組合物中施用的。在進一 步的實施方案中，該方法包括給哺乳動物施用體外的流 變療法(rheopheresis)。在進一步的實施方案中，該方法包括給哺 乳動物施用一種治療方法，選自限制性視網(wǎng)膜易位、光動力學療法、 5皮璃疣激光法、黃斑裂洞手術(shù)、黃斑易位手術(shù)、Phi-運動、質(zhì)子束療 法、-觀網(wǎng)膜剝離和玻璃體手術(shù)、鞏膜彎曲、黃斑下手術(shù)、瞳孔熱療 法、光系統(tǒng)I療法、微電流刺激、抗炎劑、RNA干擾、施用眼部藥 物例如碘依可酯或二乙氧磷酰硫膽堿或碳酸酐酶抑制劑、微芯片移 植、干細胞療法、基因替代療法、核酶基因療法、光感受器/視網(wǎng)膜 細胞移植、和針灸。在進一步的實施方案中，該方法包括使用激光光凝術(shù)從哺乳動 物的眼中除去玻璃疣。在進一步的實施方案中，該方法包括給哺乳動物施用至少一次 有效量的在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié)合的第二試劑，其中 第 一化合物與第二化合物不同。在進一步的實施方案中，提供一種能4企測和/或定量#見黃醇 -RBP-TTR復合物形成的裝置，其中至少一部分的TTR是熒光標記 的。在一個實施方案中，該視黃基衍生物是N-(4-羥基苯基)視黃酰胺 (也稱"HPR"或"芬維A胺"或"4-羥苯基視黃酰胺"或"羥基苯基視黃酰 胺")、N-(4-曱氧基苯基)視黃酰胺("mpr"; hpr最常見的代謝產(chǎn)物)、
或乙基視黃酰胺。在另一個實施方案中，多囟化的芳香烴是羥基化 的多卣化芳香烴代謝產(chǎn)物。羥基化的多卣化芳香烴代謝產(chǎn)物可以是 羥基化的多氯聯(lián)苯代謝產(chǎn)物。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物中的雙氯芬酸類似物可以選自2-[(2，6-二氯苯基)氨基] 苯曱酸；2-[(3，5-二氯苯基)氨基]苯甲酸；3,5，-二氯-4- [(4-硝基苯基) 氨基]苯曱酸；2-[(3，5-二氯苯基)氨基]苯乙酸和2-[(2，6- 二氯-4-羧酸-苯基)氨基]苯乙酸。在其他實施方案中，本文所述的方法和組合物中的非甾體抗炎 劑可以是氟芬那酸、二氟尼柳、二氟尼柳類似物、二氯芬那酸、吲 哚美辛、尼氟酸或舒林酸。在一個實施方案中，二氟尼柳類似物可 以是3'，5'- 二氟聯(lián)苯-3-羥基；2',4'-二氟聯(lián)苯-3-羧酸；2'，4'-二氟聯(lián)苯 -4-羧酸；2'-二氟聯(lián)苯-3-羧酸；2'-二氟聯(lián)苯-4-羧酸；3', 5'-二氟聯(lián)苯-3-羧酸；3'，5'-二氟聯(lián)苯-4-羧酸；2'，6'-二氟聯(lián)苯-3-羧酸；2'， 6'- 二氟聯(lián) 苯-4-羧酸；聯(lián)苯-4-羧酸；4'氟-4-羥基聯(lián)苯-3-羧酸；2'-氟-4-羥基聯(lián)苯 -3-羧酸；3',5'-二氟-4-羥基聯(lián)苯-3-羧酸；2',4'-二氯-4-羥基聯(lián)苯-3-羧 酸；4-羥基聯(lián)苯-3-羧酸；3'5'- 二氟-4'羥基聯(lián)苯-3-羧酸；3'，5'- 二氟 -4'羥基聯(lián)苯-4-羧酸；3 ',5'- 二氯-4'羥基聯(lián)苯-3-羧酸；3 '，5'- 二氯-4' 羥基聯(lián)苯-4-羧酸；3'，5'-二氯-3-甲酰聯(lián)苯；3 ' ，5 '-二氯-2-曱酰聯(lián) 苯；2 ' ，4 ' -二氯聯(lián)苯-3 -羧酸；2',4'-二氯聯(lián)苯-4-羧酸；3'，5'-二氯聯(lián) 苯-3-基-曱醇；3',5'- 二氯聯(lián)苯-4-基-曱醇；或3 ' ，5 '-二氯聯(lián)苯-2-基-曱醇。在其他的實施方案中，本文所述的方法和組合物中的黃酮類可 以是3-甲基-4'，6-二羥基-3',5'-二溴黃酮或3',5'-二溴-2'，4,4'，6-四羥基 橙酮。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物中的強心劑 是米利酮。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物中的小分子是 N-苯基鄰氨基苯甲酸、甲基紅、媒染橙I、 二芳胺、N-芐基-對氨基 苯甲酸、呋塞米、芹菜配基、白藜蘆醇、二芳胺或二苯并呋喃。在 一個實施方案中，甲狀腺激素類似物可以是曱狀腺素-丙酸、甲狀腺
素-乙酸或SKF94901。本文所述的方法和組合物也用于在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR 水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次有效量的在所述哺乳 動物中提高RBP或TTR清除率的試劑，其中所述調(diào)節(jié)RBP或TTR 水平或活性減少了哺乳動物眼中全反式視黃醛的產(chǎn)生。在一個實施 方案中，該試劑可以選自視黃基衍生物、多囟化的芳香烴、曱狀 腺激素激動劑、甲狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙氯芬酸類似物、 小分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾體抗炎藥、二價 抑制劑、強心劑、擬肽、適體和抗體。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物中的一見黃基書亍生 物是具有下列結(jié)構(gòu)的化合物，或其活性代謝物、或藥學可接受的前 藥或溶劑化物其中Xi選自NR2、 O、 S、 CHR2; R！是(CHR2)x-I^-R3，其中x 是0、 1、 2或3; U是單鍵或-C(0)-; 112是選自H、 (C廣CO烷基、F、 (C廣C4)氟代烷基、(d國Q)烷氧基、-C(O)OH、 -C(0)-NH2、 -(C廣C4)烷基胺、-<:(0)-((:1-(:4)烷基、-(:(0)-(<:1-(:4)氟代烷基、-c(o)-(c廣c4)烷基胺、和-C(O)-(d- CO烷氧基的部分；和R 是H或是任選被1-3個獨立選擇的取代基取代的部分，其中取代機選自(C2-C7)烯基，、 (CVC7)炔基、芳基、(C3-C )環(huán)烷基、(C5-C )環(huán)烯基、和雜環(huán)。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物中的一見黃基衍生 物是具有下列結(jié)構(gòu)的化合物，或其活性代謝物、或藥學可接受的前藥或溶劑化物 其中x!選自nr2、 o、 s、 chr2; r1是(CHR2)x-LLr3，其中x 是0、 1、 2,或3; U是單鍵或-c(0)-; R2是選自h、 (d-CO烷基、 f、 (c廣C0氟代烷基、(c廣c》烷氧基、國c(o)oh、 -c(0)-nh2、 -(c廣c4) 烷基胺、-C(0)-(CrC4)烷基、-C(O)-(d-C0氟代烷基、-C(O)國(C廣C4) 烷基胺、和-C(O)-(Cr CO烷氧基的部分；和R3是H或是任選被1-3個獨立選擇的取代基取代的部分，其中取代基選自(C2-C7)烯基，、 ((VC7)炔基、芳基、(CVC7)環(huán)烷基、(Cs-C7)環(huán)烯基、和雜環(huán)。在進一步的實施方案中，(a)Xi是NR2,其中！^是h或(d-C4) 烷基；(b)x是0; (c)x是l并且I^是-c(0)-; (d)R 是任選取代的芳 基；(e)I^是任選取代的雜芳基；(f)Xi是NH并且ie是任選取代的芳 基，包括在進一步的實施方案中，(i)芳基具有1個取代基，(ii)芳基 具有1個選自鹵素、OH、 0(d-C4)烷基、NH(C廣C4)烷基、0(C廣C4) 氟代烷基、和N[(C廣C4)烷基]2的取代基，(iii)芳基具有1個OH取代 基，(v)芳基是苯基，或(vi)芳基是萘基；(g)該化合物是或溶劑化物；(h)該化合物是4-羥苯基視黃酰胺，或其活性代謝物、 或藥學可接受的前藥或溶劑化物；(i)該化合物是4-甲氧苯基視黃酰 胺，或(j)4-氧代芬維A胺，或其活性代謝物、或藥學可接受的前藥 或溶劑化物。在進一步的實施方案中，施用通式(II)的化合物是用于治療眼部 病癥，包括降低在患者體內(nèi)降低血清視黃醇的水平。在進一步的實 施方案中，(a)有效量的該化合物是系統(tǒng)性施用于該哺乳動物；(b)有，或其活性代謝物、或藥學可接受的前藥
效量的該化合物是口服施用于該哺乳動物；(c)有效量的該化合物是 靜脈施用于該哺乳動物；(d)有效量的該化合物是經(jīng)眼施用于該哺乳 動物；(e)有效量的該化合物是通過離子電滲療法施用的；或(f)有效 量的該化合物是通過注射施用于該哺乳動物。在進一步的實施方案中，該哺乳動物是人，所包括的實施方案， (a)該人是Stargardt病的突變ABCA4基因的載體或該人是Stargardt 病的突變ELOV4基因的載體，或在與年齡有關(guān)的黃斑變性有關(guān)的補 體因子H中具有遺傳變異，或(b)該人具有眼部疾病或特征，其中疾 病或特征選自Stargardt病、隱性視網(wǎng)膜色素變性、地圖狀萎縮(其中 盲點是一個非限制性的例子)、光感受器變性、干性AMD、隱性錐 體-桿營養(yǎng)不良、滲出性(或濕性)與年齡有關(guān)的黃斑變性、錐體-桿營 養(yǎng)不良和視網(wǎng)膜色素變性。在一個進一步的實施方案中，該哺乳動 物是視網(wǎng)膜變性的動物模型。在進一步的實施方案中，該方法包括多次施用有效量的在哺乳 動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié)合的試劑，包括的進一步實施方案，其中 (i)多次施用之間的時間是至少 一周；(ii)多次施用之間的時間是至少 一天；和(iii)該化合物是基于每日施用于該哺乳動物；或(iv)該化合 物是每12小時施用于該哺乳動物。在進一步的或可替代的實施方案 中，該方法包括休藥期，其中暫時停止藥物的施用或暫時減少要施 用的化合物的劑量；在休藥期結(jié)束時，恢復化合物的劑量。休藥期 的長度可以是2天到l年不等。在進一步的實施方案中，該方法包括施用至少一種其他試劑， 選自一氧化氮產(chǎn)生的誘導物、抗炎劑、生理可接受的抗氧化劑、生 理可接受的礦物質(zhì)、帶負電荷的磷脂、類癌瘤、他汀類、抗血管生 成藥、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、13-順式-維甲酸(包括13-順式-維甲 酸的衍生物)、ll-順式-維甲酸(包括ll-順式-維甲酸的衍生物)、9-順 式-維曱酸(包括9-順式-維甲酸的衍生物)、和視黃胺的衍生物。在進 一步的實施方案中，(a)其他試劑是一氧化氮產(chǎn)生的誘導物，包括其中 一氧化氮產(chǎn)生 的誘導物選自瓜氨酸、鳥氨酸、硝基化的L-精氨酸、亞硝基化的L-精氨酸、硝基化的N-羥基-L-精氨酸、亞硝基化的N-羥基-L-精氨酸、 硝基化的L-高精氨酸和亞硝基化的L-高精氨酸的實施方案；(b) 其他試劑是抗炎劑，包括其中抗炎劑選自非甾體抗炎藥、脂 肪氧合酶抑制劑、潑尼松、地塞米松、和環(huán)氧合酶抑制劑的實施方 案；(c) 其他試劑是至少 一 種生理可接受的抗氧化劑，包括其中生理 可接受的抗氧化劑選自維生素C、維生素E、 (3-胡蘿卜素、輔酶Q、 和4-羥基-2,2,6，6-四甲基哌啶-N-氧基的實施方案，或以下實施方 案，其中(i)至少一種生理可接受的抗氧化劑是與在所述哺乳動物中 調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié)合的試劑施用，或(ii)至少兩種生理可接受的抗 氧化劑是與在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié)合的試劑施用；(d) 其他試劑是至少一種生理可接受的礦物質(zhì)，包括其中生理可 接受的礦物質(zhì)選自鋅(II)化合物、Cu(II)化合物、和頓(II)化合物的實 施方案，或進一步包含給哺乳動物施用生理可接受的抗氧化劑的實 施方案；(e) 其他試劑是帶負電荷的磷脂，包括其中帶負電荷的磷脂是磷 脂酰甘油的實施方案，；(f) 其他試劑是類胡蘿卜素，包括其中類胡蘿卜素選自葉黃素和玉米黃素的實施方案，；(g) 其他試劑是他汀類，包括其中他汀類選自羅蘇伐他汀、匹伐4也汀、辛〗戈〗也汀、普4戈4也汀、西立伐J也汀、美^f戈《也汀、velostatin、 氟伐他汀、康帕丁、洛伐他汀、達伐他汀、fluindostatin、阿伐他汀、 阿伐他汀釣、和二氫康帕丁的實施方案，；(h) 其他試劑是抗血管生成藥，包括其中抗血管生成藥是Rhufab V2、色氨?；?tRNA合成酶、抗-VEGF peg化適體、角鯊胺、乙酸 阿奈司他、考布他汀A4前藥、MacugenTM、米非司酮、subtenon曲 安奈德、玻璃體內(nèi)晶體曲安奈德、AG3340、氟輕松、和VEGF-Trap 的實施方案； (i)其他試劑是基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑，包括其中基質(zhì)金屬蛋白 酶抑制劑是金屬蛋白酶組織抑制劑、(x2-巨球蛋白、四環(huán)素、氧將酸鹽、螯合劑、合成的MMP片段、琥珀酰巰噪呤、磷酰胺、和羥氨基 酸的實施方案；(j)其他試劑是補體抑制劑，僅僅用于舉例，包括C1、 C2、 C3、 C4、C5、C6、C7、C8、和C9的抗體，例如在U.S. 5，635，178; 5,843,884; 5,847,082; 5，853，722;和Rollins等人；Transplantation, 60: 1284-些;(k)其他試劑是魚油，僅僅用于舉例，包括w3脂肪酸； (l)其他試劑是13-順式-維甲酸(包括13-順式-維曱酸的衍生物)，11 -順式-維甲酸(包括11 -順式-維曱酸的衍生物)、或9-順式-維甲酸(包括9-順式-維甲酸的衍生物)；(m)其他試劑是視黃胺的衍生物，包括全-反式-視黃胺的衍生物、13-順式-視黃胺的衍生物、11-順式-視黃胺的衍生物、或9-順式視黃胺的衍生物；(n)施用其他試劑(i)在施用在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR 結(jié)合的試劑之前，(ii)在施用在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié) 合的試劑之后，(iii)與施用在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié)合 的試劑同時，或(iv)在施用在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié)合 的試劑之前和之后，或(o)其他試劑和在所述哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP與TTR結(jié)合的試劑 是在相同的藥物組合物中施用的。
在進一步的實施方案中，該方法包括給哺乳動物施用體 外的流變療法。在進一步的實施方案中，該方法包括給哺乳動物施 用一種治療方法，選自限制^L網(wǎng)膜易位、光動力學療法、玻璃疣激 光法、黃斑裂洞手術(shù)、黃斑易位手術(shù)、Phi-運動、質(zhì)子束療法、視網(wǎng) 膜剝離和玻璃體手術(shù)、鞏膜彎曲、黃斑下手術(shù)、瞳孔熱療法、光系 統(tǒng)I療法、；微電流刺激、抗炎劑、RNA干擾、施用眼部藥物例如石典 依可酯或二乙氧磷酰硫膽堿或碳酸酐酶抑制劑、微芯片移植、肝細 胞療法、基因替代療法、核酶基因療法、光感受器/視網(wǎng)膜細胞移植 和針灸。在進一步的實施方案中，該方法包括使用激光光凝術(shù)從哺乳動 物的眼中除去玻璃疣。在進一步的實施方案中，該方法包括給哺乳動物施用至少一次有效量的在所述哺乳動物中提高RBP或TTR清除率的第二試劑，其 中第 一化合物與第二化合物不同。在進一步的實施方案中，提供一種能檢測和/或定量視黃醇 -RBP-TTR復合物形成的裝置，其中至少一部分的TTR是熒光標記的。在一個實施方案中，該視黃基衍生物是N-(4-羥基苯基)視黃酰胺 (也稱"HPR"或"芬維A胺"或"4-羥苯基視黃酰胺"或"羥基苯基視黃酰 胺")、N-(4-甲氧基苯基)視黃酰胺("MPR"; HPR最常見的代謝產(chǎn)物) 或乙基視黃酰胺。在另一個實施方案中，多囟化的芳香烴是羥基化 的多卣化芳香烴代謝產(chǎn)物。羥基化的多鹵化芳香烴代謝產(chǎn)物可以是 羥基化的多氯聯(lián)苯代謝產(chǎn)物。本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物中調(diào)節(jié)RB P或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次有效量的RBP或TTR轉(zhuǎn) 錄抑制劑，其中所述RBP或TTR水平或活性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物 眼中N-亞視黃基-N-視黃基乙醇胺的產(chǎn)生。在一些實施方案中，該試 劑可以選自RXR/RAR激動劑、RXR/RAR拮抗劑、雌激素激動劑、 雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕酮拮抗 劑、地塞米松激動劑、地塞米松拮抗劑、反義寡核苷酸、siRNA、脂 肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP拮抗劑、HNF-1激動 劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3激動劑、HNF-3拮抗劑、HNF-4激動劑、 HNF-4拮抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6拮抗劑、適體、鋅指結(jié)合蛋白、核酶和單克隆抗體。本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水 平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次有效量的RBP或TTR翻 譯抑制劑，其中所述RBP或TTR水平或活性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物 眼中N-亞視黃基-N-視黃基乙醇胺的產(chǎn)生。在一些實施方案中，該試 劑可以選自RXR/RAR激動劑、RXR/RAR拮抗劑、雌激素激動劑、 雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕酮拮抗 劑、地塞米松激動劑、地塞米松拮抗劑、反義寡核苷酸、siRNA、脂 肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP拮抗劑、HNF-1激動 劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3激動劑、HNF-3拮抗劑、HNF-4激動劑、 HNF-4拮抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6拮抗劑、適體、鋅指結(jié)合蛋 白、核酶和單克隆抗體。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物 中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次有 效量的調(diào)節(jié)哺乳動物中RBP與TTR結(jié)合的試劑，其中所述RBP或 TTR水平或活性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中N-亞視黃基-N-視黃基 乙醇胺的產(chǎn)生。該調(diào)節(jié)劑可以結(jié)合到RBP或TTR上，以抑制哺乳動 物中RBP和TTR的結(jié)合。該調(diào)節(jié)劑也可以拮抗RBP與視黃醇的結(jié) 合，以抑制RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。該調(diào)節(jié)劑可以選 自視黃基衍生物、甲狀腺激素激動劑、曱狀腺激素拮抗劑、雙氯 芬酸、雙氯芬酸類似物、小分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮 類、非甾體抗炎藥、二價抑制劑、強心劑、擬肽、適體和抗體。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物 中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次有 效量的在所述哺乳動物中提高RBP或TTR清除率的試劑，其中所述 RBP或TTR水平或活性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中N-亞視黃基-N-一見黃基乙醇胺的產(chǎn)生。在一些實施方案中，該試劑可以選自 一見黃 基衍生物、曱狀腺激素激動劑、甲狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙 氯芬酸類似物、小分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾 體抗炎藥、二價抑制劑、強心劑、擬肽、適體和抗體。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物
中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次有 效量的RBP或TTR轉(zhuǎn)錄抑制劑，其中所述RBP或TTR水平或活性 的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中脂褐素的產(chǎn)生。該試劑可以選自 RXR/RAR激動劑、RXR/RAR拮抗劑、雌激素激動劑、雌激素拮抗 劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕酮拮抗劑、地塞米 松激動劑、地塞米松拮抗劑、反義寡核苷酸、siRNA、脂肪酸結(jié)合蛋 白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP拮抗劑、HNF-1激動劑、HNF-1 拮抗劑、HNF-3激動劑、HNF-3拮抗劑、HNF-4激動劑、HNF-4拮 抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6拮抗劑、適體、鋅指結(jié)合蛋白、核酶 和單克隆抗體。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動 物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次 有效量的RBP或TTR翻譯抑制劑，其中所述RBP或TTR水平或活 性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中脂褐素的產(chǎn)生。該試劑可以選自 RXR/RAR激動劑、RXR/RAR拮抗劑、雌激素激動劑、雌激素拮抗 劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕酮拮抗劑、地塞米 松激動劑、地塞米松拮抗劑、反義寡核苷酸、siRNA、脂肪酸結(jié)合蛋 白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP拮抗劑、HNF-1激動劑、HNF-1 拮抗劑、HNF-3激動劑、HNF-3拮抗劑、HNF-4激動劑、HNF-4拮 抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6拮抗劑、適體、鋅指結(jié)合蛋白、核酶 和單克隆抗體。在其他的實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動 物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次 有效量的調(diào)節(jié)哺乳動物中RBP與TTR結(jié)合的試劑，其中所述RBP 或TTR水平或活性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中脂褐素的產(chǎn)生。該調(diào) 節(jié)劑可以結(jié)合到RBP或TTR上，以抑制哺乳動物中RBP和TTR 的結(jié)合。該調(diào)節(jié)劑也可以拮抗視黃醇與RBP的結(jié)合，以抑制RBP 或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。該調(diào)節(jié)劑可以選自視黃基衍生物、 甲狀腺激素激動劑、甲狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙氯芬酸類似 物、小分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾體抗炎藥、 二1"介抑制劑、強心劑、擬肽、適體和抗體。在另 一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次 有效量的在所述哺乳動物中提高RB P或T TR清除率的試劑，其中所 述RBP或TTR水平或活性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中脂褐素的產(chǎn) 生。該試劑可以選自視黃基衍生物、甲狀腺激素激動劑、甲狀腺 激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙氯芬酸類似物、小分子化合物、內(nèi)分泌 激素類似物、黃酮類、非甾體抗炎藥、二價抑制劑、強心劑、擬肽、 適體和抗體。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物 中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次有 效量的RBP或TTR轉(zhuǎn)錄抑制劑，其中所述RBP或TTR水平或活性 的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中玻璃疣的產(chǎn)生。在一些實施方案中，該 試劑可以選自RXR/RAR激動劑、RXR7RAR拮抗劑、雌激素激動 劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕酮 拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松拮抗劑、反義寡核苷酸、siRNA、 脂肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP拮抗劑、HNF-1激 動劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3激動劑、HNF-3拮抗劑、HNF-4激動 劑、HNF-4拮抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6拮抗劑、適體、鋅指結(jié) 合蛋白、核酶和單克隆抗體。在另 一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動 物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次 有效量的RBP或TTR翻譯抑制劑，其中所述RBP或TTR水平或活 性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中玻璃疣的產(chǎn)生。在一些實施方案中， 該試劑可以選自RXR/RAR激動劑、RXR/RAR拮抗劑、雌激素激 動劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕 酮拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松拮抗劑、反義寡核苷酸、siRNA、 脂肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP拮抗劑、HNF-1激
動劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3激動劑、HNF-3拮抗劑、HNF-4激動 劑、HNF-4拮抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6拮抗劑、適體、鋅指結(jié) 合蛋白、核酶和單克隆抗體。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物 中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次有 效量的調(diào)節(jié)哺乳動物中RBP與TTR結(jié)合的試劑，其中所述RBP或 TTR水平或活性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中玻璃疣的產(chǎn)生。該調(diào)節(jié) 劑可以結(jié)合到RBP或TTR上，以抑制哺乳動物中RBP和TTR的 結(jié)合。該調(diào)節(jié)劑也可以拮抗4見黃醇與RBP的結(jié)合，以抑制RBP或 RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。該調(diào)節(jié)劑可以選自視黃基衍生物、 甲狀腺激素激動劑、曱狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙氯芬酸類似 物、小分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾體抗炎藥、 二價抑制劑、強心劑、擬肽、適體和抗體。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動 物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次 有效量的在所述哺乳動物中提高RBP或TTR清除率的試劑，其中所 述RBP或TTR水平或活性的調(diào)節(jié)減少了哺乳動物眼中玻璃疣的產(chǎn) 生。在一些實施方案中，該試劑可以選自視黃基衍生物、曱狀腺 激素激動劑、甲狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙氯芬酸類似物、小 分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾體抗炎藥、二價抑 制劑、強心劑、擬肽、適體和抗體。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物 中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次有 效量的RBP或TTR轉(zhuǎn)錄抑制劑，其中所述RBP或TTR水平或活性 的調(diào)節(jié)預防哺乳動物眼中的與年齡有關(guān)的黃斑變性或營養(yǎng)不良。在 該實施方案中，該試劑可以選自RXR/RAR激動劑、RXR/RAR拮 抗劑、雌激素激動劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、 孕酮激動劑、孕酮拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松拮抗劑、反 義寡核苷酸、siRNA、脂肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP 拮抗劑、HNF-1激動劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3激動劑、HNF-3拮 抗劑、HNF-4激動劑、HNF-4拮抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6拮抗 劑、適體、鋅指結(jié)合蛋白、核酶和單克隆抗體。在另 一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動 物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次 有效量的RBP或TTR翻譯抑制劑，其中所迷RBP或TTR水平或活 性的調(diào)節(jié)預防哺乳動物眼中的與年齡有關(guān)的黃斑變性或營養(yǎng)不良。 在一個實施方案中，該試劑可以選自RXR/RAR激動劑、RXR/RAR 拮抗劑、雌激素激動劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、 孕酮激動劑、孕酮拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松拮抗劑、反 義寡核苷酸、siRNA、脂肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP 拮抗劑、HNF-1激動劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3激動劑、HNF-3拮 抗劑、HNF-4激動劑、HNF-4拮抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6拮抗 劑、適體、鋅指結(jié)合蛋白、核酶和單克隆抗體。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動 物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次 有效量的調(diào)節(jié)哺乳動物中RBP與TTR結(jié)合的試劑，其中所述RBP 或TTR水平或活性的調(diào)節(jié)預防哺乳動物眼中的與年齡有關(guān)的黃斑變 性或營養(yǎng)不良。該調(diào)節(jié)劑可以結(jié)合到RBP或TTR上，以抑制哺乳動 物中RBP和TTR的結(jié)合。該調(diào)節(jié)劑也可以拮抗視黃醇與RBP的結(jié) 合，以抑制RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。該調(diào)節(jié)劑可以選 自視黃基衍生物、曱狀腺激素激動劑、甲狀腺激素拮抗劑、雙氯 芬酸、雙氯芬酸類似物、小分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮 類、非甾體抗炎藥、二價抑制劑、強心劑、擬肽、適體和抗體。本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水 平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次有效量的在所述哺乳動 物中提高RBP或TTR清除率的試劑，其中所述RBP或TTR水平或 活性的調(diào)節(jié)預防哺乳動物眼中的與年齡有關(guān)的黃斑變性或營養(yǎng)不 良。在該實施方案中，該試劑可以選自—見黃基書1"生物、甲狀腺激
素激動劑、曱狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙氯芬酸類似物、小分 子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾體抗炎藥、二價抑制 劑、強心劑、擬肽、適體和抗體。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物中調(diào)節(jié)RB P或T T R水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少 一 次有 效量的RBP或TTR轉(zhuǎn)錄抑制劑，其中所述RBP或TTR水平或活性 的調(diào)節(jié)保護哺乳動物的眼睛免受光的損害。在另一個實施方案中， 該試劑可以選自RXR/RAR激動劑、RXR/RAR拮抗劑、雌激素激 動劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕 酮拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松拮抗劑、反義寡核香酸、siRNA、 脂肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP拮抗劑、HNF-1激 動劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3激動劑、HNF-3拮抗劑、HNF-4激動 劑、HNF-4拮抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6拮抗劑、適體、鋅指結(jié) 合蛋白、核酶和單克隆抗體。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動 物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次 有效量的RBP或TTR翻譯抑制劑，其中所述RBP或TTR水平或活 性的調(diào)節(jié)保護哺乳動物的眼睛免受光的損害。在一些實施方案中， 該試劑可以選自RXR/RAR激動劑、RXR/RAR拮抗劑、雌激素激 動劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕 酮拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松拮抗劑、反義寡核苷酸、siRNA、 脂肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP拮抗劑、HNF-1激 動劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3激動劑、HNF-3拮抗劑、HNF-4激動 劑、HNF-4拮抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6拮抗劑、適體、鋅指結(jié) 合蛋白、核酶和單克隆抗體。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動 物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次 有效量的調(diào)節(jié)哺乳動物中RBP與TTR結(jié)合的試劑，其中所述RBP 或TTR水平或活性的調(diào)節(jié)保護哺乳動物的眼睛免受光的損害。該調(diào)
節(jié)劑可以結(jié)合到RBP或TTR上，以抑制哺乳動物中RBP和TTR 的結(jié)合。該調(diào)節(jié)劑也可以拮抗一見黃醇與RBP的結(jié)合，以抑制RBP 或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。在該實施方案中，該調(diào)節(jié)劑可以選 自視黃基衍生物、曱狀腺激素激動劑、曱狀腺激素拮抗劑、雙氯 芬酸、雙氯芬酸類似物、小分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮 類、非甾體抗炎藥、二價抑制劑、強心劑、擬肽、適體和抗體。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動 物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給該哺乳動物施用至少一次 有效量的在所述哺乳動物中提高RBP或TTR清除率的試劑，其中所 述RBP或TTR水平或活性的調(diào)節(jié)保護哺乳動物的眼睛免受光的損 害。在一些實施方案中，該試劑可以選自視黃基衍生物、甲狀腺 激素激動劑、甲狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙氯芬酸類似物、小 分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾體抗炎藥、二價抑 制劑、強心劑、擬肽、適體和抗體。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物 中調(diào)節(jié)視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)或運甲狀腺素蛋白(TTR)水平或活性， 包括給該哺乳動物至少一次有效量的至少一種選自RBP轉(zhuǎn)錄抑制 劑、TTR轉(zhuǎn)錄抑制劑、RBP翻譯抑制劑、TTR翻譯抑制劑、RBP 清除劑、TTR清除劑、RBP拮抗劑、RBP激動劑、TTR拮抗劑和TTR 激動劑的化合物。在一些實施方案中，RBP轉(zhuǎn)錄抑制劑選自RXR/RAR激動劑、 RXR/RAR拮抗劑、雌激素激動劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪 酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕酮拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松 拮抗劑、反義寡核苷酸，siRNA、 HNF-4激動劑、HNF-4拮抗劑、適 體、Zn-指結(jié)合蛋白、核酶和單克隆抗體。在其他的實施方案中，TTR 轉(zhuǎn)錄抑制劑選自脂肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP拮 抗劑、反義寡核苷酸、siRNA、 HNF-1激動劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3 激動劑、HNF-3拮抗劑、HNF-4激動劑、HNF-4拮抗劑、HNF-6激 動劑、HNF-6拮抗劑、適體、鋅指結(jié)合蛋白、核酶和單克隆抗體。
在其他的實施方案中，RBP翻"^斧抑制劑選自RXR/RAR激動劑、 RXR/RAR拮抗劑、雌激素激動劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪 酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕酮拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松 拮抗劑、反義寡核苷酸、siRNA、 HNF-4激動劑、HNF-4拮抗劑、適 體，核酶和單克隆抗體。在其他的實施方案中，TTR翻譯抑制劑選 自脂肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP拮抗劑、反義寡 核苷酸、siRNA、 HNF-1激動劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3激動劑、 HNF-3拮抗劑、HNF-4激動劑、HNF-4拮抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6 拮抗劑、適體、核酶和單克隆抗體。在另一個實施方案中，RBP清除劑選自視黃基衍生物、甲狀 腺激素激動劑、甲狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙氯芬酸類似物、 小分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾體抗炎藥、二價 抑制劑、強心劑、擬肽、適體、和抗體。在另一個實施方案中，TTR 清除劑選自甲狀腺激素激動劑、曱狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、 雙氯芬酸類似物、小分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非 甾體抗炎藥、二1"介抑制劑、強心劑、擬肽、適體、和抗體。在另一個實施方案中，RBP激動劑或拮抗劑是視黃基衍生物。 在另一個實施方案中，TTR激動劑或拮抗劑選自甲狀腺激素激動劑、 曱狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙氯芬酸類似物、小分子化合物、 內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾體抗炎藥、二價抑制劑、強心劑、 擬月太、適體和抗體。本文所述的方法和組合物也用于治療與年齡有關(guān)的黃斑變性或 營養(yǎng)不良，包括給哺乳動物施用至少一次有效量的第一化合物，其 中所述第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR的水平或活性。在 一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中抑制RBP或TTR轉(zhuǎn)錄。 在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中抑制RBP或TTR 翻譯。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中提高RBP或 TTR的清除率。在另一個實施方案中，第一化合物抑制RBP與TTR 結(jié)合。這樣的試劑能夠與RBP或TTR結(jié)合，以在哺乳動物中抑制RBP與TTR結(jié)合。此外，該試劑也可以拮抗視黃醇與RBP的結(jié)合， 以抑制RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。本文所述的方法和組合物也用于減少哺乳動物眼中全反式視黃 醛的產(chǎn)生，包括給哺乳動物施用至少一次有效量的第一化合物，其 中所述第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR的水平或活性。在 一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中抑制RBP或TTR轉(zhuǎn)錄。 在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中抑制RBP或TTR 翻譯。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中提高RBP或 TTR的清除率。在另一個實施方案中，第一化合物抑制RBP與TTR 結(jié)合。這樣的試劑能夠與RBP或TTR結(jié)合，以在哺乳動物中抑制 RBP與TTR結(jié)合。此外，該試劑也可以拮抗視黃醇與RBP的結(jié)合， 以抑制RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物也用于減少哺乳 動物眼中N-亞視黃基-N-視黃基乙醇胺的產(chǎn)生，包括給哺乳動物施用 至少 一次有效量的第 一化合物，其中所述第 一化合物在哺乳動物中 調(diào)節(jié)RBP或TTR的水平或活性。在一個實施方案中，第一化合物在 哺乳動物中抑制RBP或TTR轉(zhuǎn)錄。在另一個實施方案中，第一化 合物在哺乳動物中抑制RBP或TTR翻譯。在另一個實施方案中， 第一化合物在哺乳動物中提高RBP或TTR的清除率。在另 一個實施 方案中，第一化合物抑制RBP與TTR結(jié)合。這樣的試劑能夠與RBP 或TTR結(jié)合，以在哺乳動物中抑制RBP與TTR結(jié)合。此外，該試 劑也可以拮抗視黃醇與RBP的結(jié)合，以抑制RBP或RBP-試劑復合 物與TTR結(jié)合。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物也用于減少哺 乳動物眼中脂褐素的產(chǎn)生，包括給哺乳動物施用至少一次有效量的 第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR的 水平或活性。在一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中抑制 RBP或TTR轉(zhuǎn)錄。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中 抑制RBP或TTR翻譯。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳 動物中提高RBP或TTR的清除率。在另一個實施方案中，第一化合 物抑制RBP與TTR結(jié)合。這樣的試劑能夠與RBP或TTR結(jié)合， 以在哺乳動物中抑制RBP與TTR結(jié)合。此外，該試劑也可以拮抗 視黃醇與RBP的結(jié)合，以抑制RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物也用于減少哺 乳動物眼中玻璃疣的產(chǎn)生，包括給哺乳動物施用至少一次有效量的 第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR的 水平或活性。在一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中抑制 RBP或TTR轉(zhuǎn)錄。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中 抑制RBP或TTR翻譯。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳 動物中提高RBP或TTR的清除率。在另一個實施方案中，第一化合 物抑制RBP與TTR結(jié)合。這樣的試劑能夠與RBP或TTR結(jié)合， 以在哺乳動物中抑制RBP與TTR結(jié)合。此外，該試劑也可以拮抗 視黃醇與RBP的結(jié)合，以抑制RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物也用于保護哺乳 動物的眼免受光的損害，包括給哺乳動物施用至少一次有效量的第 一化合物，其中所述第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR的水 平或活性。在一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中抑制RBP 或TTR轉(zhuǎn)錄。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中抑制 RBP或TTR翻譯。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中 提高RBP或TTR的清除率。在另一個實施方案中，第一化合物抑制 RBP與TTR結(jié)合。這樣的試劑能夠與RBP或TTR結(jié)合，以在哺乳 動物中抑制RBP與TTR結(jié)合。此外，該試劑也可以拮抗視黃醇與 RBP的結(jié)合，以抑制RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物也用于治療與 視黃醇有關(guān)的疾病，包括給哺乳動物施用至少一次有效量的至少一 種選自下組的化合物RBP轉(zhuǎn)錄抑制劑、TTR轉(zhuǎn)錄抑制劑、RBP翻 譯抑制劑、TTR翻譯抑制劑、RBP清除劑、TTR清除劑、RBP拮抗 劑、RBP激動劑、TTR拮抗劑、TTR激動劑和一見黃醇結(jié)合受體拮抗
劑。在一個實施方案中，RBP轉(zhuǎn)錄抑制劑選自RXR/RAR激動劑、 RXR/RAR拮抗劑、雌激素激動劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪 酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕酮拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松 拮抗劑、反義寡核苷酸、siRNA、脂肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激 動劑、C/EBP拮抗劑、HNF-1激動劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3激動 劑、HNF-3拮抗劑、HNF-4激動劑、HNF-4拮抗劑、HNF-6激動劑、 HNF-6拮抗劑、適體、鋅指結(jié)合蛋白、核酶和單克隆抗體。在另一個實施方案中，TTR轉(zhuǎn)錄抑制劑選自RXR/RAR激動劑、 RXR/RAR拮抗劑、雌激素激動劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪 酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕酮拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松 拮抗劑、反義寡核苷酸，siRNA、 HNF-4激動劑、HNF-4拮抗劑適體、 Zn-指結(jié)合蛋白、核酶和單克隆抗體。在另一個實施方案中，RBP翻 譯抑制劑選自RXR/RAR激動劑、RXR/RAR拮抗劑、雌激素激動 劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、孕酮激動劑、孕酮 拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松拮抗劑、反義寡核苷酸，siRNA、 HNF-4激動劑、HNF-4拮抗劑、適體，核酶和單克隆抗體。在另一 個實施方案中，RBP翻譯抑制劑選自RXR/RAR激動劑、RXR/RAR 拮抗劑、雌激素激動劑、雌激素拮抗劑、睪酮激動劑、睪酮拮抗劑、 孕酮激動劑、孕酮拮抗劑、地塞米松激動劑、地塞米松拮抗劑、反 義寡核苷酸、siRNA、脂肪酸結(jié)合蛋白拮抗劑、C/EBP激動劑、C/EBP 拮抗劑、HNF-1激動劑、HNF-1拮抗劑、HNF-3激動劑、HNF-3拮 抗劑、HNF-4激動劑、HNF-4拮抗劑、HNF-6激動劑、HNF-6拮抗 劑、適體、核酶和單克隆抗體。在一個實施方案中，RBP清除劑選自視黃基衍生物、多鹵化 的芳香烴、甲狀腺激素激動劑、曱狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙 氯芬酸類似物、小分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾 體抗炎藥、二價抑制劑、強心劑、擬肽、適體和抗體?？商娲兀?視黃基衍生物是N-(4-羥基苯基)視黃酰胺(也稱"HPR"或"芬維A胺" 或"4-羥苯基視黃酰胺"或"羥基苯基視黃酰胺")、N-(4-甲氧基苯基)視黃酰胺("MPR"; HPR最常見的代謝產(chǎn)物)或乙基視黃酰胺。在另一個 實施方案中，多鹵化的芳香烴是羥基化的多面化芳香烴代謝產(chǎn)物， 具體地有多氯化聯(lián)苯代謝產(chǎn)物。在另一個實施方案中，TTR清除劑選自曱狀腺激素激動劑、 甲狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙氯芬酸類似物、小分子化合物、 內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾體抗炎藥、二價抑制劑、強心劑、 擬肽、適體和抗體。在另一個實施方案中，RBP激動劑或拮抗劑可以是視黃基衍生 物例如N-(4-羥基苯基)視黃酰胺(也稱"HPR"或"芬維A胺"或"4-羥苯 基視黃酰胺"或"羥基苯基視黃酰胺")、N-(4-甲氧基苯基)視黃酰胺 ("MPR"; HPR最常見的代謝產(chǎn)物)或乙基視黃酰胺。在另一個實施方 案中，TTR激動劑或拮抗劑選自多卣化的芳香烴、曱狀腺激素激 動劑、甲狀腺激素拮抗劑、雙氯芬酸、雙氯芬酸類似物、小分子化 合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾體抗炎藥、二價抑制劑、 強心劑、擬肽、適體和抗體。在一個實施方案中，該小分子化合物 可以是白藜蘆醇或二芳胺。在另一個實施方案中，視黃醇結(jié)合蛋白 受體拮抗劑可以是棕櫚酸視黃酯水解酶的抑制劑，更特別地棕櫚酸 視黃酯水解酶抑制劑可以是3,4,3'，4'-四氯二苯。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物用于施用第二 化合物，其中第二化合物選自一氧化氮產(chǎn)生的誘導物、抗氧化劑、 抗炎劑、礦物質(zhì)、抗氧化劑、類胡蘿卜素、帶負電荷的磷脂和他汀 類。在一些實施方案中，與視黃醇有關(guān)的疾病可以是糖尿病、骨肥 厚、自發(fā)性顱內(nèi)高壓、淀粉樣變性病、阿爾茨海默病和 Alstr6m-Hallgren綜合征。本文所述的方法和組合物也用于在哺乳動物中治療I型或II型 糖尿病，包括給哺乳動物施用至少一次有效量的第一化合物，其中 所述第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR的水平或活性。在一 個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中抑制RBP或TTR轉(zhuǎn)錄。 在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中抑制RBP或TTR 翻譯。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或 TTR的清除。在另一個實施方案中，第一化合物調(diào)節(jié)RBP與TTR 結(jié)合。這樣的試劑能夠與RBP或TTR結(jié)合，以在哺乳動物中抑制 RBP與TTR結(jié)合。此外，該試劑也可以拮抗視黃醇與RBP的結(jié)合， 以抑制RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合物還包括施用第二 化合物，其選自(a)降低葡萄糖的激素或擬激素(例如，胰島素、GLP-1 或aGLP-l類似物、exendin-4或liraglutide), (b)降低葡萄糖的磺酰 脲(例如，醋酸己脲、氯磺丙脲、曱苯磺丁脲、妥拉磺脲、格列美脲、 格列吡。秦、格列本脲、微粉化的格列本脲或格列齊特)，(c)降低葡萄 糖的雙胍(二曱雙胍)，(d)降低葡萄糖的氯茴苯酸(例如，那格列奈或 瑞格列奈)，(e)降低葡萄糖的噻唑烷二酮或其他的PPAR-y激動劑(例 如，吡格列酮、羅格列酮、曲格列酮或isagitazone), (f)降低葡萄糖 的對PPAR-y和PPAR-a都具有親和力的雙作用PPAR激動劑(例 如，BMS-298 585和tesaglitazar)， (g)降低葡萄糖的a-葡糖苷酶抑制 劑(例如，阿卡波糖或米格列醇)，(h)不靶向于葡萄糖-6-磷酸酶轉(zhuǎn)位 酶的降低葡萄糖的反義化合物，(i)抗肥胖的食欲抑制劑(例如苯丁 胺)，(j)抗肥胖的脂肪吸收抑制劑例如奧利斯特，(k)睫狀節(jié)神經(jīng)細胞 營養(yǎng)因子的抗肥胖修飾形式，其抑制刺激食欲的饑餓信號，(l)降脂 的膽酸鹽螯合樹脂(例如，考來烯胺、考來替泊和鹽酸考來維侖)，(m) 降脂的HMGCoA-還原酶抑制劑(例如，洛伐他汀、西立伐他汀、普 伐他汀、阿伐他汀、辛伐他汀和氟伐他汀)，(n)煙酸，(o)降脂的纖維 酸衍生物(例如，氯貝丁酯、吉非貝齊、非諾貝特、苯扎貝特和環(huán)丙 貝特)，(p)包括普羅布考、新霉素、右旋曱狀腺素的試劑，(q)植物-睪醇酯，(r)膽固醇吸收抑制劑(例如，依則替米貝)，(s)CETP抑制劑 (例如torcetrapib和JTT- 705), (t)MTP抑制劑(例如，英普他派)，(u) 膽酸轉(zhuǎn)運體(頂端的鈉依賴性膽酸轉(zhuǎn)運體)的抑制劑，(v)肝CYP7a的 調(diào)節(jié)劑，(w)ACAT抑制劑(例如，阿伐麥布)，(x)降脂的雌激素替代 治療劑(例如，tamoxigen), (y)合成的HDL(例如，ETC-216),或(z) 降脂的抗炎劑(例如，糖皮質(zhì)激素)。當?shù)诙衔锞哂胁煌陌液?或通過與本文所述的試劑(即調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的那些)不 同的作用方式發(fā)揮作用時，期望聯(lián)合施用(例如同時、連續(xù)或分別施 用)這兩種試劑可以為糖尿病患者提供加和和/或協(xié)同的治療益處。為 了相同的原因，相對于不存在組合時各試劑的劑量，期望這兩種試 劑的聯(lián)合施用(例如同時、連續(xù)或分別施用)可以降低每種或其中 一種 的劑量，同時仍然能達到期望的治療益處，包括(僅用作舉例)，降低 血糖和控制HbAlc。在一個實施方案中，第一化合物施用于患II型糖尿病的哺乳動 物。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中提高RBP或TTR 的清除。在另一個實施方案中，第一化合物抑制RBP與TTR結(jié)合。 在一些實施方案中，第一化合物可以是視黃基衍生物，其中視黃基 衍生物是N-(4-羥基苯基)視黃酰胺(也稱"HPR"或"芬維A胺"或"4-羥 苯基視黃酰胺"或"羥基苯基視黃酰胺")、N-(4-甲氧基苯基)視黃酰胺 ("MPR"; HPR最常見的代謝產(chǎn)物)或乙基視黃酰胺。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物也用于在哺乳 動物眼中治療自發(fā)性顱內(nèi)高壓，包括給哺乳動物施用至少一次有效 量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或 TTR的水平或活性。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物 中降低RBP或TTR翻譯。在另一個實施方案中，第一化合物在哺 乳動物中提高RBP或TTR的清除。在另一個實施方案中，第一化合 物抑制RBP與TTR結(jié)合。這樣的試劑能夠與RBP或TTR結(jié)合， 以在哺乳動物中抑制RBP與TTR結(jié)合。此外，該試劑也可以拮抗 視黃醇與RBP的結(jié)合，以抑制RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。 在一些實施方案中，第一化合物可以是視黃基衍生物，其中視黃基 衍生物是N-(4-羥基苯基)視黃酰胺(也稱"HPR"或"芬維A胺"或"4-羥 苯基視黃酰胺"或"羥基苯基視黃酰胺")、N-(4-曱氧基苯基)視黃酰胺 ("MPR"; HPR最常見的代謝產(chǎn)物)或乙基纟見黃酰胺。本文所述的方法 和組合物也進一步包括施用第二化合物，其中第二化合物選自 一氧
化氮產(chǎn)生的誘導物、抗氧化劑、抗炎劑、礦物質(zhì)、抗氧化劑、類胡 蘿卜素、帶負電荷的磷脂和他汀類。本文所述的方法和組合物也用于在哺乳動物中治療骨肥厚，包 括給哺乳動物施用至少 一 次有效量的第 一 化合物，其中所述第 一 化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR的水平或活性。在一個實施方案 中，第一化合物在哺乳動物中抑制RBP或TTR轉(zhuǎn)錄。在另一個實 施方案中，第一化合物在哺乳動物中抑制RBP或TTR翻譯。在另 一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中提高RBP或TTR的清除。 在另一個實施方案中，第一化合物抑制RBP與TTR結(jié)合。這樣的 試劑能夠與RBP或TTR結(jié)合，以在哺乳動物中抑制RBP與TTR 結(jié)合。此外，該試劑也可以拮抗視黃醇與RBP的結(jié)合，以抑制RBP 或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。在一些實施方案中，第一化合物可 以是視黃基衍生物，其中視黃基衍生物是N-(4-羥基苯基)視黃酰胺 (也稱"HPR"或"芬維A胺"或"4-羥苯基視黃酰胺"或"羥基苯基視黃酰 胺")、N-(4-甲氧基苯基)視黃酰胺("MPR"; HPR最常見的代謝產(chǎn)物) 或乙基視黃酰胺。本文所述的方法和組合物也進一步包括施用第二 化合物，其中第二化合物選自一氧化氮產(chǎn)生的誘導物、抗氧化劑、 抗炎劑、礦物質(zhì)、抗氧化劑、類胡蘿卜素、帶負電荷的磷脂和他汀 類。本文所述的方法和組合物也用于在哺乳動物中治療淀粉樣變性 病，包括給哺乳動物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述 第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR的水平或活性。在一個實 施方案中，第一化合物在哺乳動物中抑制RBP或TTR轉(zhuǎn)錄或翻譯。 在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中提高RBP或TTR的 清除。在另一個實施方案中，第一化合物抑制RBP與TTR結(jié)合。 這樣的試劑能夠與RBP或TTR結(jié)合，以在哺乳動物中抑制RBP與 TTR結(jié)合。此外，該試劑也可以拮抗視黃醇與RBP的結(jié)合，以抑制 RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。在一些實施方案中，第一化 合物可以是視黃基衍生物，其中視黃基衍生物是N-(4-羥基苯基)視黃
酰胺(也稱"HPR"或"芬維A胺"或"4-羥苯基視黃酰胺"或"羥基苯基視 黃酰胺")、N-(4-甲氧基苯基)視黃酰胺("MPR"; HPR最常見的代謝產(chǎn) 物)或乙基視黃酰胺。文所述的方法和組合物也進一步包括施用第二 化合物，其中第二化合物選自一氧化氮產(chǎn)生的誘導物、抗氧化劑、 抗炎劑、礦物質(zhì)、抗氧化劑、類胡蘿卜素、帶負電荷的磷脂和他汀 類。本文所述的方法和組合物也用于在哺乳動物中治療阿爾茨海默 病，包括給哺乳動物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述 第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR的水平或活性。在一個實 施方案中，第一化合物在哺乳動物中增強RBP或TTR轉(zhuǎn)錄。在另 一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中增強RBP或TTR翻譯。 在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中降低RBP或TTR的 清除。在另一個實施方案中，第一化合物促進RBP與TTR結(jié)合。 這樣的試劑能夠與RBP或TTR結(jié)合，以在哺乳動物中抑制RBP與 TTR結(jié)合。此外，該試劑也可以拮抗視黃醇與RBP的結(jié)合，以抑制 RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。在一些實施方案中，第一化 合物可以是視黃基衍生物，其中視黃基衍生物是N-(4-羥基苯基)視黃 酰胺(也稱"HPR"或"芬維A胺"或"4-羥苯基視黃酰胺"或"羥基苯基視 黃酰胺")、N-(4-曱氧基苯基)視黃酰胺("MPR"; HPR最常見的代謝 產(chǎn)物)或乙基視黃酰胺。本文所述的方法和組合物也進一步包括施用 第二化合物，其中第二化合物選自一氧化氮產(chǎn)生的誘導物、抗氧化 劑、抗炎劑、礦物質(zhì)、抗氧化劑、類胡蘿卜素、帶負電荷的磷脂和 #/汀類。本文所述的方法和組合物也用于在哺乳動物中治療 Alstr6m-Hallgren綜合征，包括給哺乳動物施用至少一次有效量的第 一化合物，其中所述第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR的水 平或活性。在一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP 或TTR轉(zhuǎn)錄。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中調(diào)節(jié) RBP或TTR翻"^。在另一個實施方案中，第一化合物在哺乳動物中
調(diào)節(jié)RBP或TTR的清除。在另一個實施方案中，第一化合物調(diào)節(jié) RBP與TTR結(jié)合。這樣的試劑能夠與RBP或TTR結(jié)合，以在哺乳 動物中抑制RBP與TTR結(jié)合。此外，該試劑也可以拮抗視黃醇與 RBP的結(jié)合，以抑制RBP或RBP-試劑復合物與TTR結(jié)合。在一些 實施方案中，第一化合物可以是視黃基衍生物，其中視黃基衍生物 是N-(4-羥基苯基)視黃酰胺(也稱"HPR"或"芬維A胺"或"4-羥苯基視 黃酰胺"或"羥基苯基視黃酰胺")、N-(4-曱氧基苯基)視黃酰胺 ("MPR"; HPR最常見的代謝產(chǎn)物)或乙基視黃酰胺。本文所述的方法 和組合物也進一步包括施用第二化合物，其中第二化合物選自 一氧 化氮產(chǎn)生的誘導物、抗氧化劑、抗炎劑、礦物質(zhì)、抗氧化劑、類胡 蘿卜素、帶負電荷的磷脂和他汀類。在其他的實施方案中，本文所述的方法和組合物中的有效量的化合物可以系統(tǒng)性施用于該哺乳動物。在一些實施方案中，該化合 物可以口服施用于該哺乳動物。在其他的實施方案中，該化合物可 以靜脈施用于該哺乳動物；在其他的實施方案中，該化合物可以經(jīng) 眼施用于該哺乳動物。在另一個實施方案中，該化合物可以通過注 射施用于該哺乳動物。在上述任意的實施方案中，本文所述的方法和組合物中的哺乳 動物是人。在其他的實施方案中，本文所述的方法和組合物可以包 括多次施用有效量的該化合物。在一些實施方案中，多次施用之間 的時間是至少一周。在其他的實施方案中，多次施用之間的時間是 至少一天。在另一個實施方案中，化合物是基于每日施用于該哺乳 動物的。本文所述的方法和組合物也可以進一步包括給哺乳動物施用一 氧化氮產(chǎn)生的誘導物。在其他的實施方案中，本文所述的方法和組 合物可以進一步包括給哺乳動物施用抗炎劑。在一個實施方案中， 本文所述的方法和組合物可以進一步包括給哺乳動物施用至少一種 抗氧劑。本文所述的方法和組合物中的抗氧劑可以選自維生素C、 維生素E、 P-胡蘿卜素、輔酶Q和4-羥基-2,2，6,6-四甲基哌啶-N-氧基。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物可以進一步包 括施用至少一種抗氧劑和本文所公開的化合物。在另一個實施方案 中，本文所述的方法和組合物可以進一步包括給哺乳動物施用至少一種礦物質(zhì)。在該實施方案中，礦物質(zhì)可以選自鋅(n)化合物、銅(n) 化合物和硒(n)化合物。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組 合物中的礦物質(zhì)可以進一 步與至少 一種抗氧劑施用。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物可以進一步包 括給哺乳動物施用類胡蘿卜素。在該實施方案中類胡蘿卜素可以選 自葉黃素和玉米黃素。在一個實施方案中，本文所述的方法和組合 物可以進一步包括給哺乳動物施用帶負電荷的磷脂。在該實施方案 中，帶負電荷的磷脂可以是磷脂酰甘油。在另一個實施方案中，本 文所述的方法和組合物可以進一步包括給哺乳動物施用他汀類。在 本文所述的方法和組合物中他汀類可以選自羅蘇伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西立伐他汀、美伐他汀、velostatin、氟伐他 汀、康帕丁、》各^U也汀、達卩戈4也汀、fluindostatin、阿^U也汀、阿4戈 他汀釣和二氫康帕丁 。在其他的實施方案中，本文所述的方法和組合物中的化合物可 以每12小時施用于哺乳動物。在一些實施方案中，本文所述的方法 和組合物進一步包括給哺乳動物施用流變療法。在另一個實施方案 中，本文所述的方法和組合物進一步包括檢測哺乳動物眼中玻璃疣 的產(chǎn)生。在另一個實施方案中，本文所述的方法和組合物進一步包 括測定哺乳動物眼中脂褐素的水平。在另一個實施方案中，本文所 述的方法和組合物進一步包括測定哺乳動物眼睛的視力。在一個實 施方案中，本文所述的方法和組合物進一步包括測定A2E和A2E前體的自發(fā)性熒光。在一些實施方案中，黃斑變性是Stargardt病。在其他的實施方 案中，黃斑變性是干性與年齡有關(guān)的黃斑變性。在一個實施方案中， 人是Stargardt病基因的載體。所述的方法和組合物也可以進一步包括確定哺乳動物是否是Stargardt病基因的載體。在一些實施方案中，治療黃斑變性的藥物組合物可以包含本文 所述的方法和組合物中的化合物和藥學可接受的載體。在一個實施 方案中，藥學可接受的載體是適合眼部施用的。本文所述的方法和組合物的其他目的、特征和優(yōu)點通過下文的 詳述將會變得更清楚。但是，應當理解，這些詳述和具體實施例， 是說明具體的實施方案，僅僅是用于解釋說明，因為從該詳述出發(fā)， 在本發(fā)明精神和范圍內(nèi)的各種改變和變更對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是 顯而易見的。在本說明書中提及的所有出版物和專利申請都通過參考以相同 的程度引入本文，就如同分別具體地將每篇出版物或?qū)＠暾埻ㄟ^ 參考引入本文。


本文所述的方法和組合物的新的特征將會用權(quán)利要求的細節(jié)列 出。通過參考下面描述說明性實施方案的詳述和附圖將會更好地理 解本發(fā)明的特征和優(yōu)點，其中在詳述中利用了本文所述的原理附圖1表示的是用本文所述的方法和組合物治療與視黃醇有關(guān) 和/或玻璃體視網(wǎng)膜疾病的流程圖。附圖2表示的是血清HPR水平與血清視黃醇水平和眼部類視黃 醇和A2E水平的關(guān)系。附圖3表示的是給野生型小鼠施用HPR對(A)血清視黃醇水平 和(B)眼部類視黃醇水平的效果。附圖4表示的是在HPR不存在或存在的條件下RBP-TTR復合 物得到的FRET譜的例子，其中TTR已經(jīng)用熒光部分來標記。附圖5表示的是用本文所述的FRET法確定的HPR與視黃醇 -RBP-TTR復合物形成的劑量依賴性抑制作用的例子。附圖6表示的是使用HPR、13-順式-維甲酸和全反式維甲酸用本 文所述的FRET法確定的抑制^L黃醇-RBP-TTR復合物形成的比較。附圖7a:c表示的是血清的乙腈提取物的各種反相LC分析。給 小鼠施用DMSO(附圖7a)、 10 mg/kg N-4-(羥基苯基)視黃酰胺 (HPR)(FIG 7b)、或20 mg/kg HPR(附圖7c)14天得到血清。附圖8表示的是血清視黃醇作為芬維A胺濃度的函數(shù)的關(guān)系。附圖9a表示的是通過熒光猝滅測定的視黃醇和視黃醇結(jié)合蛋 白質(zhì)之間相互作用的對照結(jié)合分析。附圖9b表示的是在HPR(2 nM)存在下，通過熒光猝滅測定的視 黃醇和視黃醇結(jié)合蛋白質(zhì)之間相互作用的結(jié)合分析。附圖10a表示的是在abca4無效突變小鼠中，HRP對于 A2PE-H2生物合成的作用。附圖10b表示的是在abca4無效突變小鼠中，HRP對于A2E 生物合成的作用。附圖11表示的是通過焚光猝滅測定的N-4-(甲氧基苯基)視黃酰 胺(MPR)與視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)的結(jié)合。附圖12表示的是通過體積排阻色譜和UV/可見分光光度法測 定的TTR與RBP-MPR結(jié)合的調(diào)節(jié)。附圖13表示的是A2PE-H2和A2E的水平作為芬維A胺劑量和 治療時間(圖A-F)的函數(shù)和在ABCA4無效突變小鼠中脂褐素自發(fā)熒 光作為芬維A胺治療(圖A-F)的函數(shù)的分析。附圖14表示的是芬維A胺濃度與在ABCA4無效突變小鼠中視 黃醇、A2PE-H2和A2E降低的關(guān)系。附圖15表示的是類視黃醇組合物，在光適應的DMSO-和HPR-處理的小鼠(圖A)中；HPR對視覺生色團再生的作用(圖B); HPR 對漂白的生色團再生的作用(圖C);以及桿功能(圖D)、桿和錐體功 能(圖E)和從光漂白中再生(圖F)的電生理學測定。附圖16表示的是DMSO-和HPR-處理的動物的視網(wǎng)膜的光學顯 微鏡檢查。附圖17表示的是在12天的休藥期后，對照小鼠的洗眼環(huán)提取
物的吸收和熒光光語(圖A)，和先前保持在HPR療法中的小鼠的吸 收和熒光光譜(圖B);在28天的休藥期后，對照小鼠的洗眼環(huán)提取 物的吸收和熒光光譜(圖C),和先前保持在HPR療法中的小鼠的吸 收和熒光光語(圖D);直方圖表示的是在圖A-D中所述的小鼠的相 對A2E水平。附圖18表示3個月大的三個系的小鼠的A2E、A2PE和A2PE-H2的相對濃度。
具體實施方式
現(xiàn)在將會針對本文所述的方法和組合物中的實施方案進行詳細 的描述。下列的實施例部分說明的是實施方案的例子。除非另有定義，在本文中使用的所有技術(shù)和科技術(shù)語都與本發(fā) 明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員的一般性理解具有相同的含義。在此將本文涉及的所有專利和出版物引入作為參考。如本文所使用，術(shù)語"ABCA4基因"是指編碼rim蛋白或RmP的基因。ABCA4基因也稱作是ABCR基因。如本文所使用，術(shù)語"抗氧劑，，是指預防、延遲或以其他方式抑 制化合物或生物物質(zhì)氧化的合成或天然的物質(zhì)。如本文所使用，術(shù)語"去巻積"是指將數(shù)據(jù)、信息和/或圖像轉(zhuǎn)換 成(至少部分地)構(gòu)成組分的方法。例如，特征是復波形式的熒光或吸 收光謙可以在數(shù)學上去巻積成包含復波形式的單個的吸收或熒光 峰。適當?shù)臄?shù)學方法和算法是本領(lǐng)域公知的，去巻積數(shù)據(jù)、信息和/ 或圖像的適當?shù)能浖巧虡I(yè)可用的。如本文所使用，術(shù)語"視覺循環(huán)的分裂，，等等是指直接或間接調(diào) 節(jié)與視覺循環(huán)有關(guān)的至少 一種酶的活性。如本文所使用，術(shù)語"分散"是指在另 一種介質(zhì)中分散一種物質(zhì)。 分散可以包括均勻化、分級、打碎、流化、或減小物質(zhì)尺寸的步驟， 以促進懸浮步驟。如本文所使用，視黃基衍生物是指一種通過各種順式或反式視 黃醛異構(gòu)體中一種與其他化合物或系列化合物反應產(chǎn)生的化合物。如本文所使用，術(shù)語"與年齡有關(guān)的黃斑變性或營養(yǎng)不良，，或"ARMD"是指一種使人虛弱的疾病，其包括干或濕性ARMD。占 總數(shù)約90%的干性ARMD也稱作萎縮性、非滲出性或玻璃疚性黃斑 變性。對于干性ARMD,玻璃疣典型地蓄積于視網(wǎng)膜色素上皮細月包 (RPE)組織下/在布魯赫膜內(nèi)。當玻璃疣影響到黃斑中的光感受器的功 能時，然后就會發(fā)生視覺損害。干性ARMD導致在很多年內(nèi)視覺的 逐步損害。干性ARMD可以導致濕性ARMD。濕性ARMD可以快 速發(fā)展，導致對中央視覺的嚴重損害。黃斑營養(yǎng)不良包括Stargardt 病，也稱作Stargardt黃斑營養(yǎng)不良或黃點狀眼底，其是青少年最多 發(fā)的黃斑營養(yǎng)不良。如本文所使用，術(shù)語"哺乳動物"是指所有的哺乳動物，包括人。 哺乳動物包括(僅僅用于舉例)人、非人的靈長類、牛、狗、貓、山羊、 綿羊、豬、大鼠、小鼠和兔。如本文所使用，術(shù)語"生物樣品，，是指血漿、血液、尿、糞便、 組織、粘液、淚或唾液。如本文所使用，術(shù)語"有效量"是指在藥物制劑或方法中治療劑 的總量，足以對患者或病人顯示有意義的益處。如本文所使用，術(shù)語"調(diào)節(jié)，，是指提高或降低濃度或者增加或減 少核酸或多肽的表達，增強或減弱核酸或多肽結(jié)合或其他功能性特 性。如本文所^f吏用，術(shù)語"眼部疾病或病癥"是指涉及眼睛或有關(guān)組 織的任何疾病或病癥。非限制性的例子包括涉及視網(wǎng)膜和/或黃斑變 性的疾病或病癥，包括^見網(wǎng)膜和/或黃斑營養(yǎng)不良，和視網(wǎng)膜和/或黃 斑變性。如本文所使用，術(shù)語"固定"是指化學或生物類物質(zhì)共價或非共價地附著到載體上。如本文所使用，術(shù)語"靈長類，，是指最高等的哺乳動物，例如人、 猿和猴。
如本文所使用，術(shù)語"玻璃體視網(wǎng)膜疾病"是指與玻璃體或視網(wǎng) 膜有關(guān)的任何疾病或病癥，包括(僅用于舉例)糖尿病性視網(wǎng)膜病、黃 斑變性、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病和視網(wǎng)膜色素變性。如本文所使用，術(shù)語"與視黃醇有關(guān)的疾病"是指與維生素A、視 黃醇或其有關(guān)運輸?shù)鞍桩惓Ｋ接嘘P(guān)的任何疾病或病癥，包括在患 者中與視黃醇結(jié)合蛋白和運甲狀腺素蛋白有關(guān)的疾病。如本文所使用，術(shù)語"危險"是指發(fā)生某一事件的可能性。視覺循環(huán)脊推動物的視網(wǎng)膜包含兩種類型的光感受器細胞。桿狀細胞是 專門用于暗光條件下的視覺。錐體細胞敏感性較差，提供非常短暫 和很高的空間分辨率的視覺，并提供色覺。在日光條件下，桿狀細 胞應答飽和，視覺完全是由錐體細胞介導的。這兩種類型的細胞都 包含一種含有很多膜狀盤的外節(jié)結(jié)構(gòu)。視覺換能的反應發(fā)生在這些 膜狀盤的表面上。在視覺中第一個步驟是通過視蛋白-色素分子吸收 光子，該步驟包括視黃醛生色團的11-順式到全反式異構(gòu)化作用。在 恢復光敏性前，所得到的全反式視黃醛必須從視蛋白脫輔基蛋白中 分離出來并異構(gòu)成11-順式視黃醛。全反式視黃醛是一種視覺循環(huán)的類視黃醇，其與磷脂酰乙醇胺 縮合產(chǎn)生二視黃醛類N-視黃亞基-N-視黃基乙醇胺。11-順式-視黃醛 是視紫質(zhì)的光敏部分，當主動吸收帶中的光的光子攻擊該分子時， 其轉(zhuǎn)變成全反式視黃醛。該方法是通過11-順式視黃醛到全反式視黃 醛異構(gòu)化的一系列的化學反應進行的。在一系列的化學步驟中，與 特定的桿狀細胞或錐體細胞結(jié)合的神經(jīng)纖維遇到了在腦中作為視覺 信號感知的刺激物。視紫質(zhì)再生的視覺循環(huán)視紫質(zhì)是一種G蛋白偶聯(lián)受體，具有兩種生理學途徑光轉(zhuǎn)導和/或從漂白中恢復(將激活的組分恢復到黑暗狀態(tài))和類視黃醇循環(huán)(產(chǎn)生11-反式-視黃醛。脊推動物的光轉(zhuǎn)導是由光化學反應引發(fā)的， 其中與其視蛋白部分結(jié)合(視紫質(zhì)=視蛋白+ ll-反式-視黃醛)的 ll-反式-視黃醛經(jīng)過異構(gòu)化成為全反式視黃醛，在視蛋白中發(fā)生構(gòu)象 改變。在脊推動物中，光敏受體構(gòu)象的恢復(恢復成黑暗狀態(tài))需要通 過類視黃醇循環(huán)從全反式視黃醛生成11-反式-視黃酪。在人體中異 構(gòu)化和色素再生的整個循環(huán)，對于視紫質(zhì)是以分鐘為單位的，顯著 地快于錐體色素。全反式視黃醛到全反式視黃醇的還原發(fā)生在光感 受器的外節(jié)中，而所有其他反應，包括異構(gòu)化發(fā)生在視網(wǎng)膜色素上皮細胞(RPE)中。全反式.-視黃亞基Schiff i咸和全反式視黃醛從與寺見 蛋白結(jié)合袋中分離，以及導致其中視蛋白-結(jié)合袋中釋放的分子步驟 仍然不能完整地解釋。全反式視黃醛從盤中的移出可以通過ATP-結(jié) 合盒運輸體(ABCA4)來促進，其中的突變是一系列視網(wǎng)膜疾病，包 括Stargardt's病、推-桿營養(yǎng)不良、視網(wǎng)膜色素變性和可能的黃斑變 性的病因。此外，全反式視黃醛通過NADPH-依賴性全反式視黃醇脫氫酶 還原成全反式視黃醇，其中NADPH-依賴性全反式視黃醇脫氫酶是 一種屬于大基因家族的短鏈醇脫氫酶(SCAD)的膜相關(guān)的酶。全反式 -現(xiàn)黃醇經(jīng)難以確定的過程轉(zhuǎn)移到RPE中，該過程可能涉及在光感受 器間基質(zhì)(IPM)中存在類似于IRBP和RBP的組分，或RPE中由捕獲 性類微維生素A(例如不溶性脂肪酸視黃酯)驅(qū)動的被動擴散。在RPE 中的酯化作用涉及?；鶑穆蚜字D(zhuǎn)移到視黃醇上并通過卵磷脂視 黃醇?；D(zhuǎn)移酶(LRAT)催化。這些酯可以是未知酶一稱作異構(gòu)體水 解酶一的底物，該酶利用視黃酯水解的能量，以將全反式視黃醇轉(zhuǎn) 變成11-順式-視黃醇，因此，驅(qū)動反應進行?？商娲?，這兩種反 應可以單獨進行，即可以首先通過視黃基酯水解酶水解該酯，然后 通過中間體異構(gòu)成11-順式一見黃醇。然后在NAD-和NADP-依賴性11-反式視黃醇脫氫酶(另 一種短鏈脫氫酶家族成員)催化的反應下將11-順式-視黃醇氧化成11-順式-視黃醛。最后，11-順式-視黃醛以IRBP -依賴性或非依賴性形式移動到桿狀光感受器的背面，其與視蛋白結(jié)
合以再生S見覺色素。與脊推動物眼睛的解剖學結(jié)構(gòu)、視紫質(zhì)再生的視覺循環(huán)和A2E-環(huán)氧乙烷生物合成有關(guān)的進一步信息在2005年6月10日提交的U.S. 專利申請11/150,641、 2005年8月17日提交的PCT專利申請US 2005/29455和2004年10月25曰提交的U.S.臨時專利60/622,213中 提供，將上迷專利的公開內(nèi)容以整體引入本文作為參考。黃斑或視網(wǎng)膜變性和營養(yǎng)不良。黃斑變性(也稱作視網(wǎng)膜變性)是一種涉及視網(wǎng)膜的中心部分一 黃斑退化的疾病。約85%到90%的黃斑變性病例是"干"(萎縮的或 非滲出性)性。在千性黃斑變性中，視網(wǎng)膜的退化與黃斑下小的黃色 沉積物，即玻璃疣的形成有關(guān)；此外，在RPE中脂褐素的蓄積會導 致地圖狀萎縮。該現(xiàn)象導致黃斑變細和脫水。在^L網(wǎng)膜中由玻璃疣 導致的變細的區(qū)域和程度與中央視覺的損害直接有關(guān)。視網(wǎng)膜的色 素層的變性和光感受器上的玻璃疣變成萎縮的并可以導致中央視覺 的緩慢損害。在"濕性，，黃斑變性中，形成新的血管(即新血管形成)以改善視 網(wǎng)膜組織，特別是黃斑下的血液供應，其中黃斑下是一見網(wǎng)膜的一部 分，其負責我們敏銳的中央視覺。新的血管容易被損壞，有時會破 裂，導致出血和對周圍組織的損害。盡管濕性黃斑變性只占所有黃 斑變性病例的10%，但它導致了約90。/。的與黃斑變性有關(guān)的失明。 新血管形成可以導致視覺的快速損害、視網(wǎng)膜組織最終瘢痕化和眼 內(nèi)出血。該瘢痕組織和血在視覺中產(chǎn)生了黑的變形的區(qū)域，通常眼 睛正常性失明。濕性黃斑變性通常是從視覺的中央?yún)^(qū)域的畸變開始。 直線變成波浪狀。許多患黃斑變性的人也報告視力模糊和在他們視 覺區(qū)域有黑色斑點。生長促進蛋白，稱作血管內(nèi)皮生長因子或VEGF， 靶向于觸發(fā)眼內(nèi)的異常血管生長。該發(fā)現(xiàn)引發(fā)了對抑制或阻斷VEGF 的實驗藥物的積極研究。研究已經(jīng)表明，抗-VEGF劑可以用于阻斷 和預防異常的血管生長。這些抗-VEGF劑阻止或抑制了 VEGF刺激，
這樣血管較少生長。這些抗-VEGF劑也可以成功地抗血管生成抑制 或阻斷VEGF誘導視網(wǎng)膜下血管生長的能力，以及血管滲漏。Stargardt病是一種黃斑營養(yǎng)不良，其顯示為一種在兒童中發(fā)生 的隱性黃斑變性。見例如，Allikmets等人，Science, 277 : 1805-07(1997); Lewis等人，Am. J. Hum. Genet.， 64: 422-34(1999); Stone等人，Nature Genetics, 20: 328-29(1998); Allikmets, Am. J. Hum. Gen" 67: 793-799(2000); Klevering,等人，Ophthalmology, 111: 546-553(2004)。 Stargardt病的臨床特征是中央視覺的逐步損害和黃 斑上的RPE的逐漸萎縮。在人ABCA4基因中的Rim蛋白(RmP)突變 對Stargardt病負責。在疾病過程的早期，患者顯示暗適應延遲，但 其他的桿狀細胞功能正常。組織學上，Stargardt病與RPE細胞中脂 褐素色素顆粒的沉積有關(guān)。ABCA4的突變也涉及到隱性視網(wǎng)膜色素變性，參見例如， Cremers等人，Hum. Mol. Genet., 7: 355-62(1998)，隱性錐體-桿莊營 養(yǎng)不良，參見上文，和非滲出性與年齡有關(guān)的黃斑變性，參見例如， Allikmets等人，Science, 277: 1805-07(1997); Lewis等人，Am. J. Hum. Genet., 64: 422-34(1999)，盡管在AMD中ABCA4突變的發(fā)生率是 不確定的。參見Stone等人，Nature Genetics, 20: 328-29(1998); Allikmets, Am. J. Hum. Gen" 67: 793-799(2000); Klevering,等人, Ophthalmology, 111: 546-553(2004)。與Stargardt病類似，這些疾病 與桿狀細胞暗適應延遲有關(guān)。參見Stdnmetz等人，Brit. J. Ophthahn.， 77: 549-54(1993)。脂褐素在RPE細胞中的沉積也可以在AMD中顯 著地發(fā)現(xiàn)，參見Kliffen等人，Microsc. Res. Tech.，36: 106-22(1997), 以及發(fā)現(xiàn)一些視網(wǎng)膜色素變性病例。參見Bergsma等人，Nature, 265: 62-67(1977)。此外，有幾種類型的黃斑變性影響兒童、青少年或成人，其一 般稱作早期發(fā)作性或少年性黃斑變性。這些類型中的許多都是遺傳 的，應看作是黃斑營養(yǎng)不良，而不是變性。黃斑營養(yǎng)不良的一些例 子包括錐體-桿狀營養(yǎng)不良、角膜營養(yǎng)不良、Fuch's營養(yǎng)不良、Sorsby's黃斑營養(yǎng)不良、貝斯特病和青年性視網(wǎng)膜劈裂癥及Stargardt 病。在此階段檢查患者的眼科醫(yī)生可以注意到這些玻璃疣的存在， 盡管大多數(shù)人沒有這類癥狀。當玻璃疣在檢查中注意到時，需要隨 時間而進行監(jiān)測。許多超過60歲的人會有一些玻璃疣。代謝性疾病代謝性疾病包括I和II型糖尿病，也與視黃醇水平異常有關(guān)。 I型糖尿病(胰島素依賴型糖尿病)I型糖尿病是一種嚴重性的糖尿病。如果不加以治療，I型糖尿 病會導致患者的酮病和快速退化。約10-20%的糖尿病患者歸為I型， 主要包括青年個體。非肥胖患者也包含I型糖尿病患者，盡管數(shù)量 不多。I型糖尿病是一種分解代謝的疾病，其中胰島素的循環(huán)水平是大 量缺失的，血漿高血糖素水平升高。據(jù)信，I型糖尿病具有自身免疫 源，可能是在受影響個體中由于胰B細胞的傳染性或毒性環(huán)境發(fā)作 而導致的。為了支持自身免疫的理論，已經(jīng)在I型糖尿病患者中檢測 了胰島素和胰島細胞，并與非糖尿病個體對比。在未成年人中，較低水平的視黃醇，和觀測到視黃醇結(jié)合蛋白 (RBP)水平降低和RBP尿分泌物增加，與I型糖尿病有關(guān)。參見Basu， TK，等人Am. J. Clin. Nutr. 50: 329-331(1989); Durbey, SW等人，糖 尿病Care 20: 84-89(1997)。較低水平的視黃醇和RBP伴隨著鋅代 謝的伴隨性降低，鋅是肝細胞中RBP合成必需的因子。參見 Cunningham, JJ,等人Metabolism 42: 1558-1562(1994)。相反地，在 I型糖尿病患者中生育酚或維生素E的水平?jīng)]有改變。參見Basu，TK 等人(1989).盡管在肝儲藏細胞中維生素A的水平升高，但觀測到的視黃醇 水平較低。參見TuitoekPJ,等人Br. J. Nutr. 75: 615-622(1996).。揭 示維生素A的狀態(tài)和胰島素分泌之間的聯(lián)系的研究表明，只有胰島素治療可以在I型糖尿病患者中減輕維生素A水平受到的抑制。 Tuitoek， PJ等人，J. Clin. Biochem. Nutr. 19: 165-169(1996)。相反地， 維生素A的食品添加劑不會使維生素A的代謝有效性正?；Ｍ?。這些研究表明維生素A和胰島素的相互關(guān)系調(diào)節(jié)了葡萄糖載體 進入肌肉和脂肪細胞。進一步的研究通過表明正常胰島素分泌需要 維生素A而強化了這種關(guān)系。參見Chertow， BS，等人，J. Clin. Invest. 79: 163-169(1987)。視黃醇是胰島素從維生素A-缺乏的灌注的胰島 細胞中釋放所必需的。同上。體內(nèi)試驗表明，維生素A-缺乏的大鼠 損害了葡萄糖誘導的急性胰島素釋放，其僅僅用充足的維生素A才 能得到改善。同上。維生素A可以在胰島素分泌中通過在胰島和胰 島素分泌細胞中活化轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶而發(fā)揮其作用，參見DriscollHK， 等人，Pancreas 15: 69-77(1997),并且是胎兒的胰島發(fā)展和在成人中 預防葡萄糖耐受不良所需要的，參見Matthews, KA等人，J. Nutr. 134: 1958- 1963(2004),在糖尿病患者中進一步強化了維生素A和 視黃醇在胰島素釋放和血糖水平的調(diào)節(jié)中的作用。II型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病)II型糖尿病包含一個不同種類組的輕型糖尿病。n型糖尿病通常發(fā)生在成年人中，但偶爾也會發(fā)生在兒童期。II型糖尿病經(jīng)典地表現(xiàn)為胰島素對血漿葡萄糖水平的不敏感性。 高達85%的II性糖尿病是肥胖者，對內(nèi)源性胰島素的不敏感性肯定 與脂肪的腹部分布有關(guān)。胰島素不敏感性的原因與胰島素作用中后-受體的缺陷有關(guān)。這與過度膨脹的細胞內(nèi)儲藏所(例如膨脹的脂肪細 胞和過度營養(yǎng)的肝或肌細胞)有關(guān)，并降低了餐后從循環(huán)中清除營養(yǎng) 物的能力。隨后的高胰島素血癥也會導致細胞內(nèi)胰島素感受器的進 一步向下調(diào)節(jié)。此外，在連續(xù)作用下葡萄糖載體蛋白(例如GLUT4) 也向下調(diào)節(jié)，導致患者中高血糖的情況惡化。與I型糖尿病相反，II型糖尿病患者表現(xiàn)為RBP水平選擇性升 高，觀測到視黃醇為正常到升高的水平。；參見Sasaki, H等人，"Am. J. Med. Sci, 310: 177-82(1995); Basualdo CG，等人J. Am Coll. Nutr. 16: 39-45(1997); Abahausain， MA等人，Eur. J. Clin. Nutr. 53: 630-635 (1999)。在II型糖尿病患者中維曱酸(全反式RA和13-順式RA)水 平也降低 。Yamakoshi, Y等人，Biol. Pharm. Bull 25 : 1268-1271(2002)。其他維生素，包括維生素E(生育酚)和類胡蘿卜素 的水平在糖尿病和對照組中均不變，已知會影響維生素A代謝的鋅、 白蛋白和TTR水平也不變。同上。在II型糖尿病中RBP水平的選擇性升高，和在I型糖尿病中RBP 的選擇性降低支持了 RBP和維生素A在胰島素控制血糖水平中的 作用。RBP水平的升高的原因在于糖尿病患者的胰島素水平升高(高 胰島素血癥)。Basualdo等人(1997)。 RBP水平與患者的高血糖的嚴 重性有關(guān)。同上。先前已經(jīng)證明了類視黃醇增強了人的胰島素敏感 性。參見Hartmann， D.等人Eur. J. Clin. Pharmacol. 42: 523-8(1992)。 在I和II型糖尿病中RBP水平與胰島素lt感度的逆相關(guān)表明了這是 一種在哺乳動物患者中控制胰島素敏感性的治療方法。自發(fā)性顱內(nèi)高壓(OS)IIH,也稱作腦假瘤(PTC),是一種在沒有可鑒定的致病因子的情 況下在腦周圍液體中高壓的病癥。這種病癥主要出現(xiàn)在分娩年齡的 婦女中。癥狀通常在體重增加的時期開始出現(xiàn)或惡化。典型的癥狀 包括頭痛、脈沖同步耳鳴和視覺問題(視乳頭水腫)，在未治療的病例 中其可以導致嚴重和永久性的視覺損害。盡管IIH的病因未知，但研究者已經(jīng)考慮到過量的維生素A水 平作為候選者，因為維生素A過多癥的癥狀和標志與IIH相仿。研 究表明，在IIH患者中血清視黃醇水平顯著高于對照組，盡管在兩 組中維生素A攝取或視黃酯濃度并沒有顯著性差異。參見Jacobson, DM等人，Neurology, 54: 2192-3(1999)。與骨有關(guān)的疾病骨肥厚是一種骨發(fā)生過度生長的病癥。該病癥導致從正常骨中
伸出的物質(zhì)形成，這在很多的肌肉與骨骼疾病中可以見到。彌散性自發(fā)性骨骼骨肥厚(DISH)是一種類型的骨肥厚，特征是錐體的流動 性鈣化作用和骨化作用。在DISH患者中放射照相的異常情況是在胸 推中最常觀測到的，導致了在脊柱前存在不透射線的盾。除了頸髓 中間物作為骨肥厚或脊柱韌帶骨化的結(jié)果，后縱韌帶(OPLL)的骨化 也與DISH的患者的頻率增加有關(guān)。骨肥厚或DISH患者伴隨的其它 疾病包括急性骨折和脊柱的假關(guān)節(jié)。盡管DISH和OPLL發(fā)病機制現(xiàn)在仍然未知，但這兩種疾病都與 血清視黃醇和RBP的高水平有關(guān)。參見Kodama， T等人，In vivo 12: 339-344(1998); Kilcoyne, RF, J. Am. Acad. Dermatol. 19: 212-216(1988) 提示DISH和OPLL發(fā)病機制中維生素A的可能作用。其他研究表 明在骨肥厚患者中發(fā)生先天性功能性RBP缺乏和視黃醇和RBP的異 常水平。DeBandt,M.，等人，J. Rheumatol. 22: 1395-8(1995)。醫(yī)學說 明也報道了在老年患者中發(fā)生了維生素A過多癥和變性關(guān)節(jié)病。參 見Romero, JB等人，Bull Hosp.Jt.Dis. 54: 169-174(1996)。蛋白質(zhì)錯折疊和聚集疾病蛋白質(zhì)錯折疊和聚集與幾種疾病有關(guān)， 一般稱作淀粉樣變性病， 包括阿爾茨海默病、帕金森病和全身性淀粉樣變性病。這些疾病伴 隨次級蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的錯折疊而發(fā)生，其中正常的可溶性蛋白質(zhì)形成 了富含(3-層結(jié)構(gòu)的不溶性細胞細胞外原纖維，稱作淀粉樣纖維，會 導致器官功能障礙。在人淀粉樣變性病已經(jīng)描述了 20種不同的纖維 蛋白，包括運曱狀腺素蛋白(TTR)，每一種都具有不同的臨床現(xiàn)象。野生型TTR蛋白與老年人系統(tǒng)性淀粉樣變性病有關(guān)，后者是由 心臟組織中TTR纖維的沉積而引起的一種散發(fā)病癥。相反地，突變 TTR蛋白與家族性淀粉樣多神經(jīng)病和心肌病有關(guān)，該沉積物主要作 用于外周性和自助神經(jīng)系統(tǒng)以及心臟。負責組織選擇性沉積的機制 現(xiàn)在并不知道。在淀粉樣變性病產(chǎn)生中，TTR與單體形式的纖維產(chǎn) 生有關(guān)。促進TTR四聚體穩(wěn)定化的化合物，例如小分子白藜蘆醇和 二芳胺，在體外抑制了淀粉樣纖維形成。參見Reixach， N.等人，PNAS
101: 2817-2822(2004)。運曱狀腺素蛋白也與阿爾茨海默病有關(guān)，但與淀粉樣變性病中 淀粉樣纖維的產(chǎn)生相反，TTR在體外和體內(nèi)抑制了淀粉樣(3蛋白的 形成。參見Schwartzman， AL等人，Amyloid. 11: 1-9(2004); Stein, TD 和Johnson, JA， J. Neurosci. 22: 7380-7388(2002)。維生素A也顯示 了體外抗淀粉樣遺傳和淀粉樣--p纖維失穩(wěn)定作用。參見Ono, K.， 等人，Exp. Neurol. 189: 380 -392(2004).;Alstr6m-Hallgren綜合;[正Alstr6m-Hallgren綜合征(也稱作Alstr6m綜合征)是一種在非常 小的年齡時影響兒童的罕見的常染色體隱性疾病。癥狀包括失明或 與錐體-桿狀營養(yǎng)不良有關(guān)的嬰兒的嚴重視力障礙、耳聾、在第一年期間發(fā)生肥胖、II型糖尿病的發(fā)展和嚴重的胰島素耐受、黑棘皮病(皮 膚黑斑的發(fā)展)、促性腺激素過多性性腺功能減退和甲狀腺缺乏。與Alstr6m綜合征有關(guān)的突變集中于染色體2p中的14.9 cM區(qū) 域。Collin，GB等人，Hum.MoI.Gen. 6: 213-219(1997)。與治療個體 疾病的癥狀表現(xiàn)不同，當前對于Alstr6m綜合4正患者沒有有效的治 療方法。維生素A水平的調(diào)節(jié)維生素A(全反式視黃醇)是重要的細胞營養(yǎng)素，其不能從頭合 成，因此必須從食物來源獲得。維生素A是一種總稱，其命名的是 具有視黃醇的生理活性，包括結(jié)合活性的任意化合物。 一種視黃醇 等價物(RE)相當于1 |ig的全反式視黃醇(3,33 IU)或6 |ig(10 IU)的 (3-胡蘿卜素的特異性生物學活性。(3-胡蘿卜素、視黃醇和視黃醛(維 生素A醛)都具有有效的和可靠的維生素A活性。這些化合物中的每 一種都是來自植物前體分子，胡蘿卜素(一族稱作類胡蘿卜素A的分 子中的一個成員)。包括在它們?nèi)┗┒诉B接2個分子的視黃醛的P-胡蘿卜素也稱作原維生素型的維生素A。攝取的p-胡蘿卜素在腸的內(nèi)腔通過|3胡蘿卜素雙氧合酶分裂得
到寺見黃醛。
一見黃醛通過纟見黃醛還原酶還原成一見黃醇，所述酶是在腸內(nèi)NADPH需要的酶，其后酯化成棕櫚酸。在攝取后，在食物中視黃醇運輸?shù)礁沃薪Y(jié)合到脂類聚集物上。 參見Bellovino等人，Mol. Aspects Med., 24: 411-20(2003)。當在肝 中時，視黃醇與視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)形成了復合物，然后分泌到血 液循環(huán)中。在視黃醇-RBP全蛋白質(zhì)遞送到肝外的靶組織例如眼中前， 它必須與運甲狀腺素蛋白(TTR)結(jié)合。Zanotti和Berni, Vitam. Horm.， 69: 271-95(2004)。它是次級復合物，允許視黃醇較長時間保留在循 環(huán)中。與TTR結(jié)合促進了 RBP從肝細胞中釋放，并阻止RBP-視黃 醇復合物的腎過濾。視黃醇-RBP-TTR復合物遞送到吸收一見黃醇的輩巴 組織中，并用于各種細胞過程。視黃醇經(jīng)由RBP-TTR復合物通過循 環(huán)遞送到細胞中是細胞和組織獲得視黃醇的主要途徑。通過將RBP結(jié)合到靶細胞的細胞感受器上以從復合的視黃醇 -RBP-TTR型的視黃醇攝取到細胞中。該相互作用導致了 RBP-感受 器復合物的胞吞作用和視黃醇隨后從復合物中釋放，或視黃醇結(jié)合 到細胞的視黃醇結(jié)合蛋白(CRBP)上，并隨后apoRBP通過細胞釋放 到血漿中。其他途徑試圖使用可替代的機制使視黃醇進入到細胞中， 包括單獨攝取視黃醇進入細胞中。參見Blomhoff(W9"的綜述。本文所述的方法和組合物可以用于在哺乳動物患者中調(diào)節(jié)維生 素A的水平。特別地，可以通過在哺乳動物中調(diào)節(jié)視黃醇結(jié)合蛋白 (RBP)和運甲狀腺素蛋白(TTR)的利用率或活性來調(diào)節(jié)維生素A的水 平。本文所述的方法和組合物用于在哺乳動物患者中調(diào)節(jié)RBP和 TTR的水平或活性，接著調(diào)節(jié)維生素A的水平。在患者中提高或降 低維生素A的水平可以影響視黃醇在靶器官和組織中的利用率。因 此，提供一種調(diào)節(jié)視黃醇或視黃醇衍生物利用率的方法，可以相應 地調(diào)節(jié)由于靶器官和組織內(nèi)局部一見黃醇或視黃醇衍生物缺乏或過量 而導致的疾病狀況。例如，A2E是脂褐素的主要熒光團，其是在黃斑或視網(wǎng)膜變性 或營養(yǎng)不良，包括與年齡有關(guān)的黃斑變性和Stargardt病中形成的，原因在于視覺循環(huán)中類視黃醇、全反式^見黃醛(A2E的一種前體)的過 量產(chǎn)生。因此，在視網(wǎng)膜中維生素A和全反式視黃醛的減少將會有 利于減少A2E和脂褐素的產(chǎn)生，有利于與年齡有關(guān)的黃斑變性的治 療。研究已經(jīng)證實，降低血清視黃醇對減少RPE中的A2E和脂褐素 具有有益效果。例如，維持缺乏維生素A的飲食的動物顯示了脂褐 素聚積顯著減少。Katz等人，Mech. Ageing Dev., 35: 291-305(1986); Katz等人，Mech. Ageing Dev., 39: 81-90(1987); Katz等人，Biochim. Biophys. Acta, 924: 432-41(1987)。降低維生素A水平可以有利于黃 斑變性和營養(yǎng)不良發(fā)展的進一步證據(jù)是Radu和他的同事提供的， 其中眼部維生素A水平的減少導致了脂褐素和A2E都減少。Radu 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100: 4742-7(2003); Radu等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101: 5928-33(2004)。施用維曱酸類似物、N-4-(幾基苯基)視黃酰胺(HPR或芬維A胺) 已經(jīng)表明可以導致血清視黃醇和RBP降低。Formelli等人，Cancer Res. 49: 6149-52(1989); Formelli等人，J. Clin Oncol., U: 2036-42(1993); Torrisi等人，Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev.， 3: 507-10(1994)。體 外研究證明，HPR干擾了 TTr與RBP之間的正常作用。Malpeli等 人，Biochim. Biophys. Acta 1294: 48-54(1996); Holven等人，Int. J. Cancer 71: 654-9(1997)。因此，通過阻止視黃醇與apo RBP或holo RBP(RBP +視黃醇) 與其運輸?shù)鞍捉Y(jié)合，或增加RBP和TTR腎臟排泄來抑制視黃醇遞送 到細胞中的調(diào)節(jié)劑(例如HPR)可以用于降低血清維生素A水平和在 耙組織例如眼中^L黃醇和其^f汙生物的產(chǎn)生。類似地，降低視黃醇運輸?shù)鞍?、視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)和運曱狀和i耙組織例如眼中視黃"和其衍口生物的產(chǎn)生:例如，據(jù)顯示，TTR 是玻璃疣組成中的一個組分，提示TTR和與年齡有關(guān)的黃斑變性直 接有關(guān)。Mullins，RF,FASEB J. 14: 835-846(2000); Pfeffer BA，等人， Molecular Vision 10: 23-30(2004)。
希望通過在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP和/或TTR水平或活性的相同 途徑可以發(fā)現(xiàn)治療代謝性疾病的應用，其中代謝性疾病是例如I型或 II型糖尿病、IIH、與骨有關(guān)的疾病例如骨肥厚、蛋白質(zhì)錯折疊和聚 集性疾病例如系統(tǒng)性淀粉樣變性和阿爾茨海默病、和 Alstr6m-Hallgren綜合^正。因此本文所述的方法和組合物中的一個實施方案用于在哺乳動 物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，包括給哺乳動物施用至少一次有 效量的至少一種選自RBP轉(zhuǎn)錄抑制劑、TTR轉(zhuǎn)錄抑制劑、RBP翻譯 抑制劑、TTR翻譯抑制劑、RBP清除劑、TTR清除劑、RBP拮抗劑、 RBP激動劑、TTR拮抗劑、TTR激動劑和視黃醇結(jié)合蛋白受體拮抗 劑的化合物。視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)和運甲狀腺素蛋白(TTR)視黃醇結(jié)合蛋白或RBP是一個多肽單鏈，分子量約為21 kD。 已經(jīng)克隆出了 RBP和其序列，并確定了氨基酸序列。Colantuni等人, Nuc. Acids Res.， 11: 7769-7776(1983)。 RBp的三維結(jié)構(gòu)顯示了專門 的疏水口袋，以用于結(jié)合和保護脂溶性的維生素視黃醇。Newcomer 等人，EMBOJ.，3: 1451-1454(1984)。在體外試驗中，培養(yǎng)的肝細胞 顯示了可以合成和分泌RBP。 Blaner, W.S.， Endocrine Rev" 10: 308-316(1989)。隨后的實驗證明許多細胞包含RBP的mRNA,提示 RBP合成在整個身體內(nèi)具有廣泛的分布。參見Blaner(1989)。大多 數(shù)肝分泌的RBP包含1: l摩爾比的視黃醇，并且正常的RBP分泌 需要結(jié)合到RBP上的視黃醇。在細胞中，RBP與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中高濃度的視黃醇緊密結(jié)合。視黃醇 與RBp的結(jié)合啟動了視黃醇-RBP從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)向高爾基復合體的易位， 然后從細胞中分泌出視黃醇-RBP。從肝細胞中分泌的RBP也有助于 視黃醇從肝細胞易位到星形細胞，其中發(fā)生了視黃醇-RBP直接分泌 到血漿中。在血漿中，約95%的血漿RBP與運甲狀腺素蛋白(TTR)按1: 1 摩爾/摩爾比結(jié)合，其中基本上全部的血漿維生素A都結(jié)合到RBP 上。TTR是一種性質(zhì)良好的血漿蛋白質(zhì)，包含4個相同的亞單元， 分子量為54,980。通過X射線衍射說明的完整三維結(jié)構(gòu)顯示了廣闊 的四面體排列的|3_層。Blake等人，J. Mol. Biol.， 121: 339-356(1978)。 一個通道通過四聚體的中心，在其中設置有兩個甲狀腺素的結(jié)合位 點。但是，由于負協(xié)同性僅有1個曱狀腺素分子可以正常地結(jié)合到 TTR上。據(jù)認為，TTR與RBP-視黃醇的絡合作用減少了視黃醇的腎 小球過濾，因此，將視黃醇和RBP的血漿半衰期延長了 3倍。TTR和RBP轉(zhuǎn)錄和翻譯的調(diào)節(jié)缺乏RBP的小鼠其視黃醇功能和維生素A的利用率受到損害。 Quardro，L,等人EMBO J. 18: 4633-4644(1999),在此通過參考將其 以整體引入本文。盡管RBP-/-小鼠可以在肝細胞中獲得和儲藏視黃 醇，但它們?nèi)狈訂T這些肝視黃醇儲藏物的能力，導致維生素A稀 少的狀態(tài)，使小鼠完全依賴于有規(guī)律地攝取飲食中的維生素A。 Quardro(1999)。類似地，在缺乏運曱狀腺素蛋白的小鼠中視黃醇水 平也受到了抑制，只具有低水平的循環(huán)視黃醇和RBP, Epiksopou, V.， 等人Proc. Natl. Acad. Sci 90: 2375-2379(1993);額Be露kum， A.M., 等人，J. Biol. Chem. 276: 1107-1113(2001),證明了TTR維持了血漿 中視黃醇和視黃醇代謝物的正常水平。因此，在患者中調(diào)節(jié)RBP或TTR的方法和組合物直接影響一見 黃醇的結(jié)合，和隨后視黃醇向眼中的遞送。如果一種試劑減少了患 玻璃體視網(wǎng)膜疾病例如視網(wǎng)膜病和黃斑變性的患者眼中的視黃醇的 遞送，然后會在眼中產(chǎn)生少量的全反式視黃醛，在相同的眼中也會 產(chǎn)生少量的A2E。由于A2E對眼睛的細胞，特別是對眼睛的視網(wǎng)膜 包含的細胞具有毒性，因此，在患玻璃體視網(wǎng)膜疾病的患者的眼中 A2E的量降低期望可以提供益處。因此，調(diào)節(jié)(特別是向下調(diào)節(jié))RBP 和TTR的血清水平期望可以給各種玻璃體視網(wǎng)膜病癥和疾病包括但 不限于視網(wǎng)膜病和黃斑變性的患者提供益處。此外，期望這種調(diào)節(jié) 可以對例如治療代謝性疾病例如I型或II型糖尿病、IIH、與骨有關(guān)
的疾病例如骨肥厚、蛋白質(zhì)錯折疊和聚積疾病例如系統(tǒng)性淀粉樣變性和阿爾茨海默病、和Alstr6m-Hallgren綜合征的患者產(chǎn)生益處。促 進TTR和RBP血清水平降低的方法包括(僅僅是舉例)，向下調(diào)節(jié) TTR和/或RBP的轉(zhuǎn)錄、向下調(diào)節(jié)TTR和/或RBP的翻譯、抑制 TTR和/或RBP的翻譯后修飾、促進TTR和/或RBP的細胞內(nèi)降 解、抑制TTR和/或RBP的細胞外分泌、和/或提高TTR和/或RBP 的血清清除率。本文所述的方法和組合物中的一個實施方案是通過任意的影響 TTR或RBP轉(zhuǎn)錄的方法調(diào)節(jié)TTR或RBP的水平或活性，因此影響 細胞內(nèi)各自的mRNA轉(zhuǎn)錄的表達。因此，RBP或TTR受體的表達 向下調(diào)節(jié)，例如，通過編碼RBP或TTR的反義寡核苷酸到mRNA, 或通過該mRNA轉(zhuǎn)錄的向下調(diào)節(jié)、或通過mRNA轉(zhuǎn)運、處理、分 解的調(diào)節(jié)等等。這種向下調(diào)節(jié)或調(diào)節(jié)可以使用本領(lǐng)域已知的方法， 例如通過使用轉(zhuǎn)錄的抑制劑。也可以調(diào)節(jié)視黃醇結(jié)合蛋白受體從RBP和TTRmRNA的翻譯， 以作為向下調(diào)節(jié)該蛋白質(zhì)表達的方法。這種向下調(diào)節(jié)或調(diào)節(jié)可以使 用本領(lǐng)域已知的方法，例如通過使用RBP或TTR翻譯的非特異性或 特異性抑制劑。例如，通過施用RBP轉(zhuǎn)錄或翻譯的特異性或非特異性抑制劑可 以調(diào)節(jié)RBP轉(zhuǎn)錄或翻譯。已經(jīng)克隆出了人RBP的5'-轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)并 進行了測序。參見D'Onofrio， C，等人EMBO J. 4: 1981-1989(1985); Colontuoni， V.，等人，EMBO J. 6: 631-636(1987)，將這兩篇文獻都通 過參考引入本文。小鼠RBP表達可以通過維甲酸來調(diào)節(jié)，其中全反 式維甲酸和9-順式維曱酸顯示出了以劑量和時間依賴性的方式誘導 RBP mRNA表達。Jessen， KA,和Satre, MA， Mol. Cell Biochem. 211: 85-94(2000)。因此，本文所述的一個實施方案是維曱酸激動劑和拮 抗劑，例如RXR和RAR拮抗劑、或視黃基甲酯(參見Sani，BP,等人 Biochem. Biophys. Res. Commun., 223: 293-298(1996)，通過參考引 入本文)在細胞中調(diào)節(jié)RBP轉(zhuǎn)錄或翻譯的應用。RBP的其他轉(zhuǎn)錄和翻 譯調(diào)節(jié)劑包括雌激素、孕酮、睪酮和地塞米松(參見Eberhardt, DM, 等人，Biol. Reprod. 60: 714誦720(999); Bucco RA，等人，Endocrinology 37: 3111-3122(1996); McKearin， D.M"等人，J. Biol. Chem 263: 3261-3265(1988))。 HNF-4是鋅指結(jié)合蛋白家族中的一 員，也調(diào)節(jié)RBP 和TTR的表達。Duncan, S.A.，等人Development 124: 279-287(1997); Hayashi， Y.,等人,J. Clin. Pathol.: Mol. Pathol. 52: 19-24(1999)，將這 兩篇文獻都通過參考引入本文。因此，HNF-4激動劑和拮抗劑以及 鋅指結(jié)合蛋白可以用于調(diào)節(jié)RBP或TTR的轉(zhuǎn)錄和翻譯。TTR是由各種肝特異性轉(zhuǎn)錄因子包括肝核因子(HNF)l 、 HNF-3、 HNF-4和HNF-6調(diào)節(jié)的。參見Hayashi, Y，等人，J. Clin. Pathol.: Mol. Pathol. 52: 19-24(1999); Samadani, U.，等人,Mol. Cell Biol. 16: 6273-6284(1996),將這兩篇文獻都通過參考以整體引入本文。 CC A AT/增強子結(jié)合蛋白(C/EBP)和脂肪酸結(jié)合蛋白也與在肝細胞的 TTR反式激活中發(fā)揮作用有關(guān)。參見Hayashi(1999); Puskas， L.G.， 等人Proc. Natl. Acad. Sci. 100: 1580-1585(2003),通過參考以整體 引入本文。RBP或TTR轉(zhuǎn)錄或翻譯的其他轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)節(jié)劑包括siRNA、 核酶、抗體、反義寡核苷酸或適體。在一個實施方案中，短鏈干擾RNAs(siRNAs)可以通過RNA干 擾(RNAi)或轉(zhuǎn)錄后基因沉默(PTGS)調(diào)節(jié)RBP或TTR轉(zhuǎn)錄或翻譯(參 見例如Ketting等人(2001)Genes Develop. 15: 2654-2659)。 SiRNA 分子可以通過在siRNA分子跨越的區(qū)域內(nèi)分裂mRNA分子而耙向 于同源mRNA分子的破壞。因此，siRNAs能靶向和分裂同源TTR 或RBPmRNA，并因此用于在患者中調(diào)節(jié)TTR或RBP水平或活性。在另一個實施方案中，核酶可以用于調(diào)節(jié)RBP或TTR轉(zhuǎn)錄或翻 譯。核酶是酶的RNA分子，能夠催化RNA的特異性分裂。核酶作 用的機制包括與靶RNA互補的核酶分子的序列特異性水解，然后發(fā) 生核內(nèi)水解分裂。核酶分子的組合物必須包括一種或多種與靶基因 mRNA互補的序列，必須包括負責分裂mRNA的公知的催化序列。
對于該序列，參見例如U.S. 5,093,246。當在識別特異性位點識別序 列中分裂mRNA的核酶用于石皮壞編碼RBP或TTR的mRNAs時， 也可以使用雙髻鯊核酶。雙髻鯊核酶在與靶mRNA形成互補堿基對 的側(cè)翼區(qū)所指示的位置分裂mRNAs 。這種獨特的要求是耙mRNA 具有2種堿的下列序列5'-UG-3'。雙髫篁核酶的構(gòu)造和制備是本領(lǐng) 域公知的。本文所述的核酶也包括RNA內(nèi)切酶(下作"Cech-型核酶")， 例如在嗜熱四膜(Tetrahymena thermophilia)蟲中天然存在的那種(稱 作IVS，或L-19IVSRNA)。 Cech-型核酶具有八個石威基對作用位點， 其中在發(fā)生靶RNA分裂后，水解成靶RNA序列。本文所述的方法 和組合物包括Cech-型核酶，其靶向于編碼RBP或TTR的基因中 存在的八個堿基對活性位點序列。在另一個實施方案中，可以在患者中使用抗體來調(diào)節(jié)TTR或RBP轉(zhuǎn)錄或翻譯。本文使用的術(shù)語"抗體"是指一種多肽，包含特 異性結(jié)合和識別抗原的免疫球蛋白基因或片段的框架區(qū)。所識別的 免疫球蛋白基因包括k、 X、 a、 y、 S、 s和[i恒定區(qū)，以及無數(shù)的免 疫球蛋白可變區(qū)基因。輕鏈分為k或人。重鏈分為y、 n 、 a、 5或s, 它們依次分別定義了免疫球蛋白的種類IgG、 IgM、 IgA、 IgD和IgE。 在每種IgG類中，有不同的亞型(例如，IgG!、 IgG2等)。典型地， 抗體的抗體結(jié)合區(qū)對于確定結(jié)合的特異性和親和力是最為關(guān)鍵的。示例性的免疫球蛋白(抗體)結(jié)構(gòu)單位包含四聚體。每個四聚體由 兩對相同的多肽鏈組成，每對具有一個輕鏈(約25 kD)和一個重鏈(約 50-70 kD)。每個鏈的N-末端定義為約100-110或更多個氨基酸的可 變區(qū)，其主要負責抗原識別。術(shù)語"可變的輕鏈"(vo和可變的重鏈(Vh)分別是指這些輕和重鏈。制備抗體的方法是本領(lǐng)域公知的。參見，例如，Kohler & Milstein(1975)Nature 256: 495-497; Harlow & Lane(l988)Antibodies: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Lab" Cold Spring Harbor, N.Y.)。編碼感興趣的抗體的重和輕鏈的基因可以從細胞中克隆，例 如，編碼單克隆抗體的基因可以從雜交瘤中克隆并用于制備重組 克隆抗體。編碼單克隆抗體的重和輕鏈的基因文庫可以由雜交瘤和 漿細胞來產(chǎn)生。這些重和輕鏈基因產(chǎn)物的隨機合并產(chǎn)生了大量的具有不同的抗原特異性的抗體。制備單鏈抗體或重組抗體的技術(shù)(u.s. 4,946,778; U.S.4，816,567)適于制備在融合蛋白和本發(fā)明的方法中使 用的抗體。同時，轉(zhuǎn)基因小鼠或其它生物體例如哺乳動物表達人或 人源化抗體。另外，噬菌體展示技術(shù)可以用于鑒定與所選擇的抗原 特異性結(jié)合的抗體和異側(cè)Fab片段。優(yōu)選抗體的篩選和選擇可以通過本領(lǐng)域已知的各種方法來進 行。對靶抗原具有特異性的單克隆抗體存在的起始篩選可以通過使 用例如基于ELISA的方法來進行。次級篩選優(yōu)選是鑒定和選擇所需 的單克隆抗體，以用于構(gòu)建多重特異性的本發(fā)明的融合蛋白。次級 篩選可以用本領(lǐng)域已知的任意適當方法來進行。本文所述的調(diào)節(jié)劑也可以包含一種或多種反義化合物，包括反 義RNA和反義DNA,其僅是舉例性的，能夠降低患者內(nèi)RBP或TTR 的內(nèi)源水平。因此，包括能夠在細胞內(nèi)降低RBP或TTR表達水平而 降低外源性TTR或RBP水平或活性的調(diào)節(jié)劑。優(yōu)選地，反義化合物 包含與RBP或TTR核酸互補的序列。在一個實施方案中，該反義化合物包含低聚物反義化合物，特 別是寡核苷酸。反義化合物特別地與一種或多種編碼RBP或TTR的 核酸雜交。如本文所^使用，術(shù)語"編碼RBP或TTR的核酸"包括編碼 RBP或TTR的DNA、從這些DNA轉(zhuǎn)錄的RNA(包括前-mRNA和 mRNA)和來自這些RNA的cDNA。低聚物化合物和其靶核酸的特異性雜交干擾了核酸的正常功 能。通過特異性與靶核酸雜交的化合物對靶核酸功能的調(diào)節(jié) 一般稱 作"反義"。被干擾的DNA的功能包括復制和轉(zhuǎn)錄。被干擾的RNA 的功能包括所有生命功能，例如，RNA向蛋白質(zhì)翻譯位點的易位、 從RNA向蛋白質(zhì)的翻譯、RNA向獲得一種或多種mRNA的剪接， 和在RNA內(nèi)進行的或由RNA促進的催化活性。這些干擾靶核酸的 全部效果是調(diào)節(jié)了視黃醇結(jié)合蛋白受體或維甲酸合成酶(包括視黃醇
脫氫酶和視黃酪脫氫酶)的表達。反義構(gòu)造的詳述參見U.S.6，100，090(Monia等人)，和Neckers等人，1992， Crit Rev Oncog 3(1-2): 175-231，其中的教導都通過參考特別地引入本文。在另一個實施方案中，適體(aptamers)用于調(diào)節(jié)患者體內(nèi)RBP或 TTR轉(zhuǎn)錄或翻譯。適體涉及在組合庫(典型地體外)中選擇而產(chǎn)生的試 劑，其中靶分子一般雖然不只是蛋白質(zhì)或核酸，但其用于從分子的 組合庫中自選；雖然不只是寡核苷酸，但是是能與靶分子結(jié)合的那 些。這些選擇的試劑被確定為初級適體。術(shù)語"適體"不僅包括其 最初形式的初級適體，也包括來自初級適體(即通過最小化和/或修飾) 的次級適體。因此，適體必須作為配體來發(fā)揮作用，與它們的靶分 子結(jié)合。參見 Stull和 Szoka, Pharmaceutical Res. 12(4): 465-483(1995)。在本文所述的方法和組合物中，與涉及轉(zhuǎn)錄或翻譯、 調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄或翻譯的核酸或蛋白質(zhì)結(jié)合的適體可以用于在患者體內(nèi)調(diào)節(jié)RBP或TTR轉(zhuǎn)錄或翻i奪?？梢允褂脙煞N或更多調(diào)節(jié)劑的組合，例如RBP調(diào)節(jié)劑和TTR轉(zhuǎn) 錄或翻譯調(diào)節(jié)劑的組合。這些多重療法可以同時或連續(xù)施用，例如， 4侖流施用。在患者中RBP或TTR結(jié)合或清除的調(diào)節(jié)在與RBP結(jié)合的視黃醇被運輸?shù)窖髦幸赃f送到眼中時，其必 須與TTR復合。它是次級復合物，允許視黃醇在循環(huán)中保留較長的 時間。當不存在TTR時，視黃醇-RBP復合物會快速從尿中排出。類 似地，當不存在RBP時，視黃醇在血流中運輸和通過細胞吸收將會 減少。因此，本發(fā)明的另一個實施方案是通過調(diào)節(jié)RBP或TTR的結(jié)合 性質(zhì)或清除率，來調(diào)節(jié)RBP或TTR的利用率以與血流中的視黃醇或 視黃醇-RBP復合，如上所述，TTR與RBP全蛋白質(zhì)的結(jié)合降低了 RBP和—見黃醇的清除率。因此，通過調(diào)節(jié)RBP或TTR的利用率或 活性，同樣可以在需要的患者中調(diào)節(jié)視黃醇的水平。例如視黃醇與RBP結(jié)合的拮抗劑可以在本文所述的方法和組合 物中使用。視黃醇與RBP結(jié)合的拮抗劑可以包括與視黃醇竟爭性結(jié)合RBP的視黃醇衍生物或類似物。可替代地，拮抗劑可以包含與天 然RBP竟爭性地結(jié)合視黃醇但不會將視黃醇遞送到細胞中的RBP片 段。這可以包括對RBP與視黃醇結(jié)合蛋白受體在細胞上結(jié)合很重要 的片段?？商娲?，或除此以外，也可以使用例如在細胞表面上能 與RBP或其它蛋白質(zhì)結(jié)合的免疫球蛋白，只要它能干擾RBP結(jié)合視 黃醇和/或通過RBP與視黃醇結(jié)合蛋白受體結(jié)合而吸收視黃醇的能 力。如上，免疫球蛋白可以是單克隆或多克隆抗體。如上所述，可以調(diào)節(jié)RBP與視黃醇結(jié)合的方法是與RBP激動 劑或拮抗劑例如視黃醇類似物竟爭性結(jié)合。因此，本文所述的方法 和組合物的一個實施方案是提供調(diào)節(jié)RBP水平或活性的RBP激動 劑或RBP拮抗劑。例如，施用維曱酸類似物N-4-(羥基苯基)視黃酰 胺(HPR或芬維A胺)已經(jīng)顯示其導致了血清視黃醇和RBP較大程度 的降低。Formelli等人，Cancer Res. 49: 6149-52(1989); Formelli等 人，J. Clin Oncol" 11: 2036- 42(1993); Torrisi等人，Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev., 3: 507-10(1994)。體外研究表明，HPR千擾TTR 與RBP的正常的相互作用。參見Malpeli等人，Biochim. Biophys. Acta 1294: 48-54(1996); Holven等人，Int. J. Cancer 71: 654-9(1997)。RBP水平或活性的可能的調(diào)節(jié)劑的其他例子包括維生素A的衍 生物，例如維曱酸(全反式維曱酸)和異維曱酸(13-順式-維甲酸)，它 們用于治療痤瘡和某些其他的皮膚疾病。其他衍生物包括乙基視黃 酰胺。在本文所述的方法和組合物的一些方面，可以單獨使用視黃 醇的衍生物、視黃基衍生物和有關(guān)的類視黃醇，或與其它的視黃醇 衍生物或有關(guān)的類視黃醇組合使用。
RBP水平或活性的進一步可能的調(diào)節(jié)劑包括具有通式(I) 和(II)結(jié)構(gòu)的視黃基衍生物，或其活性代謝物、或藥學可接受的前藥 或溶劑化物 <formula>formula see original document page 61</formula>式(I)其中Xi選自NR2、 O、 S、 CHR2; 是(CHR2)x畫L、R3，其中x 是0、 1、 2或3; !^是單鍵或-C(0)-;仗2是選自H、 (C廣C4)烷基、F、 (C廠C4)氟代烷基、(d-Q)烷氧基、-C(O)OH、 -C(0)-NH2、國(C廣C4) 烷基胺、-C(O)畫(C廣Q)烷基、-C(O)-(C廣Q)氟代烷基、-C(0)-(CVC4) 烷基胺、和-C(O)-(d- CO烷氧基的部分；和R"是H或是任選被1-3 個獨立選擇的取代基取代的部分，其中取代基選自(CVC7)烯基，、(C2-C7)炔基、芳基、(Q-C7)環(huán)烷基、(Cs-C7)環(huán)烯基、和雜環(huán)；或<formula>formula see original document page 61</formula>式(II)其中X〗選自NR2、 O、 S、 CHR2; R1是(CHR2)x-L'-R3,其中x 是0、 1、 2，或3; L'是單鍵或國C(0)-; R"是選自H、 (C廣Q)烷基、 F、 (Cr Q)氟代烷基、(Q- C0烷氧基、畫C(O)OH、 -C(0)-NH2、 -(C廣C4) 烷基胺、-C(0)-(C廣C4)烷基、-C(0)-(d國C4)氟代烷基、-C(O)-(C廣C4) 烷基胺、和-C(O)-(d- C0烷氧基的部分；和R"是H或是任選被1-3 個獨立選擇的取代基取代的部分，其中取代基選自(CVC7)烯基,、 (C2-C7)炔基、芳基、(CVC7)環(huán)烷基、(Cs-C7)環(huán)烯基、和雜環(huán)；或其 活性代謝物、或藥學可接受的前藥或溶劑化物。芬維A胺(下文稱作羥基苯基視黃酰胺)是具有通式(II)結(jié)構(gòu)的化 合物的一個例子，特別適用于本文所述的組合物和方法。如下文所 解釋，芬維A胺可以用作視黃醇-RBP結(jié)合的調(diào)節(jié)劑。在本文所述的 方法和組合物的一些方面，芬維A胺的衍生物可以用于替代芬維A 胺或與芬維A胺聯(lián)合使用。如本文所所使用，"芬維A胺衍生物"
是指化學結(jié)構(gòu)是由芬維A胺化學衍生得到的化合物。在一些實施方案中，可以使用的芬維A胺的衍生物包括但不限 于N-(4-羥基苯基)視黃酰胺-0-葡萄糖醛酸苷的C-糖苷和芳酰胺類似 物，包括但不限于4-(視黃氨基)苯基-C-葡萄糖醛酸苷，4-(視黃氨基) 苯基-C-葡萄糖苷、4-(視黃氨基)苯基-C-木糖苷、4-(視黃氨基)節(jié)基-(:-葡萄糖醛酸苷、4-(視黃氨基)爺基-C-葡萄糖苷、4-(視黃氨基)千基-0 木糖苷；和視黃基(3-葡萄糖醛酸苷類似物，例如l-(P-D-葡萄吡喃 糖基)視黃酰胺和l-(D-葡萄吡喃糖尿基)視黃酰胺，如U.S. 5,516,792、 5,663,377 、 5,599,953 、 5,574,177和Bhatnagar等人，Biochem. Pharmacol., 41: 1471-7(1991)所述，將上述每一篇都通過參考引入本 文。，在其他的實施方案中，其他維生素A衍生物可以包括在U.S. 4,743,400中所述的那些，通過參考引入本文。這些類視黃醇包括例 如，全反式視黃氯、全反式-4-(甲氧基苯基)視黃酰胺(曱氧基苯基視 黃酰胺)、13-順式-4-(羥基苯基)視黃酰胺和全反式-4-(乙氧基苯基)視 黃酰胺。通過參考引入本文的U.S. 4，310,546描述了 N-0-酰氧基苯 基)-全反式視黃酰胺，例如，N-(4-乙酰氧基苯基)-全反式-視黃酰胺、 N-(4-丙酰氧基苯基)-全反式-視黃酰胺和1^-(4-正丁酰氧基苯基-)-全 反式-視黃酰胺，所有這些都可以考慮用于某些實施方案中。其他維生素A書f生物或代謝產(chǎn)物，例如N-(lH-四唑-5-基)視黃 酰胺、N-乙基視黃酰胺、13-順式-N-乙基視黃酰胺，N-丁基視黃酰 胺、依維曱酸(阿昔曲丁)、依曲替酯、維曱酸(全反式-維曱酸)或異維 曱酸(13-順式-維曱酸)都可以考慮用于某些實施方案中。參見U.S. 臨時專利申請60/582,293和60/602,675;并參見Turton等人，Int. J. Exp. Pathol., 73: 551-63(1992),所有文獻都通過參考引入本文。類似地，TTR結(jié)合的調(diào)節(jié)可以與TTR配體結(jié)合的竟爭性結(jié)合劑 例如甲狀腺素或三碘甲狀腺素或它們各自的類似物，或在TTR上 RBP結(jié)合的竟爭性結(jié)合劑一起發(fā)生。TTR是一種四聚體蛋白質(zhì)，包 含相同的127個氨基酸(3-層夾層亞單元，其三維構(gòu)型是已知的。 Blake, C,等人，J. Mol. Biol. 61: 217-224(1971); Blake， C.等人，J. Mol. Biol. 121: 339-356(1978)。 TTR與全-RBP復合，并通過阻止RBP和 視黃醇的腎小球過濾而延長了視黃醇和RBP的半衰期。因此，調(diào)節(jié) TTR與全-RBP的結(jié)合可以通過降低這些組合物的半衰期來調(diào)節(jié)RBP和牙見黃醇水平。與全-RBP復合的TTR的三維結(jié)構(gòu)顯示了， TTR的天然配體， 甲狀腺素不會干擾與RBP全蛋白質(zhì)的結(jié)合。Monaco, H丄.，等人 Science, 268: 1039-1041(1995)。但是，涉及曱狀腺結(jié)合的竟爭性抑 制劑的研究表明，可以發(fā)生TTR-RBP全蛋白質(zhì)復合物的分裂，導致 患者血漿視黃醇水平降低。例如,，代謝產(chǎn)物3，4，3 '，4'-四氯聯(lián)苯減少 了 TTR上的RBP結(jié)合位點，抑制了 TTR-RBP全蛋白質(zhì)復合物的產(chǎn) 生。參見Brouwer， A.，等人Chem. Biol. Interact., 68: 203-17(1988); Brouwer， A.，等人，Toxicol. Appl. Pharmacol. 85: 310-312(1986)。因此， 本文所述的方法和組合物的一個實施方案包括羥基化多卣化的芳香 烴代謝物在調(diào)節(jié)TTR或RBP利用率中的應用。僅僅是舉例，其他的TTR調(diào)節(jié)劑包括雙氯芬酸、雙氯芬酸類似 物、小分子化合物、內(nèi)分泌激素類似物、黃酮類、非甾體抗炎藥、 二《介抑制劑、強心劑、擬肽、適體和抗體。在一個實施方案中，非甾體抗炎藥可以用作TTR調(diào)節(jié)劑，包括 但不限于氟芬那酸、甲芬那酸、甲氯芬那酸、二氟尼柳、雙氯芬酸、 舒林酸或吲咮美辛。參見Peterson, S.A.，等人，Proc. Natl. Acad. Sci. 95: 12956- 12960(1998); Purkey， H.E.，等人，Proc. Natl. Acad. Sci. 98: 5566-5571(2001)，將這兩篇都通過參考以整體引入本文。雙氯芬酸類似物可以與本文所述的方法和組合物聯(lián)合使用。雙 氯芬酸類似物的一些例子包括2-[(2,6-二氯苯基)氨基]苯甲酸；2-[(3,5-二氯苯基)氨基]苯曱酸；3，5，-二氯-4-[(4-硝基苯基)氨基]苯曱酸； 2-[(3，5- 二氯苯基)氨基]苯乙酸和2-[(2,6-二氯-4-羧酸-苯基)氨基]苯 乙酸。參見Oza，V.B.等人，J.Med. Chem. 45: 321-332(2002,通過參 考以整體引入本文。類似地，二氟尼柳類似物與本文所述的方法和
組合物聯(lián)合使用。二氟尼柳類似物的例子包括3',5'- 二氟聯(lián)苯-3-醇； 2',4'-二氟聯(lián)苯-3-羧酸；2'，4'-二氟聯(lián)苯-4-羧酸；2'-二氟聯(lián)苯-3-羧酸； 2'-二氟聯(lián)苯-4-羧酸；3'， 5'-二氟聯(lián)苯-3-羧酸；3'，5'-二氟聯(lián)苯-4-羧酸； 2',6'-二氟聯(lián)苯-3-羧酸；2'6'- 二氟聯(lián)苯-4-羧酸；聯(lián)苯-4-羧酸；4'氟-4-羥基聯(lián)苯-3-羧酸；2'-氟-4-羥基聯(lián)苯-3-羧酸；3'，5'-二氟-4-羥基聯(lián)苯-3-羧酸；2',4'-二氯-4-羥基聯(lián)苯-3-羧酸；4-羥基聯(lián)苯-3-羧酸；3'5'- 二氟 -4'輕基聯(lián)苯-3-羧酸；3',5'- 二氟-4'羥基聯(lián)苯-4-羧酸；3 ',5'- 二氯-4' 羥基聯(lián)苯-3國羧酸；3 '，5'- 二氯腸4'羥基聯(lián)苯-4-羧酸；3 ' , 5 ' -二氯國3畫 曱酰聯(lián)苯；3 ' ,5 '-二氯-2-甲酰聯(lián)苯;2 ' ，4 '-二氯聯(lián)苯-3 -羧酸；2',4'-二氯聯(lián)苯-4-羧酸；3'，5'-二氯聯(lián)苯-3-基-甲醇；3'，5'- 二氯聯(lián)苯-4-基-曱醇；或3 ' ,5 ' -二氯聯(lián)苯-2-基-甲醇。參見Adamski-Werner， S丄.， 等人，J. Med. Chem. 47: 355-374(2004)，其教導通過參考以整體引入 本文。與小分子類似物連接成一個化合物的二價抑制劑可以與本文 所述的方法和組合物聯(lián)合使用。Green， N.S.，等人，J. Am. Chem. Soc， 125: 13404-13414 (2003)。黃酮類和有關(guān)的化合物也顯示與曱狀腺素竟爭性地結(jié)合TTR。 僅僅是舉例，可以與本文所述的方法和組合物聯(lián)合使用的一些黃酮 類包括3-甲基-4'，6-二羥基-3'，5'-二溴黃酮或3',5'-二溴-2'，4，4',6-四羥調(diào)節(jié)劑。此外，強心劑也顯示與甲狀腺素竟爭性地結(jié)合TTR。參見 Pedraza， P.,等人，Endocrinology 137: 4902-4914(1996),通過參考引 入本文。僅僅是舉例，這些試劑包括米利酮和氨吡酮。參見Davis， PJ, 等人，Biochem. Pharmacol. 36: 3635-3640(1987); Cody, V., Clin. Chem. Lab. Med. 40: 1237- 1243(2002)。此外，激素類似物、激動劑和拮抗劑顯示了是甲狀腺激素包括 甲狀腺素和三碘甲狀腺素的有效的竟爭性抑制劑。例如 一 種雌激素 拮抗劑己烯雌酚顯示可以結(jié)合并抑制甲狀腺素結(jié)合。參見 Morais-de畫Sa， E.，等人,J. Biol. Chem. Epub.(Oct. 6， 2004),通過參考以 整體引入本文。甲狀腺素-丙酸、曱狀腺素乙酸和SKF-94901是可以 作為TTR結(jié)合的調(diào)節(jié)劑的甲狀腺素類似物的一些例子。參見Cody,素蛋白結(jié)合。Smith, TJ，等人，Biochim. Biophys. Acta, 1199: 76(1994)。其他實施方案包括使用小分子抑制劑作為TTR結(jié)合的抑制劑。 一些例子包括N-苯基鄰氨基苯曱酸、甲基紅、媒染橙I、 二芳胺、 N-千基-對氨基苯曱酸、呋塞米、芽菜配基、白藜,醇、二苯并呋喃、 尼氟酸或舒林酸。參見Baures， P.W.，等人Bioorg. & Med. Chem. 6: 1389-1401(1998)，通過參考引入本文。在本文中使用的調(diào)節(jié)劑也意欲包括蛋白質(zhì)、多肽或肽，包括但 不限于結(jié)構(gòu)蛋白、酶、細胞因子(例如干擾素和/或白細胞介素)、抗 生素、多克隆或單克隆抗體或其有效部分，例如Fv片段(其抗體或 其部分可以是天然的、合成的或來自人的)、多肽激素、受體、信號 分子或其他蛋白質(zhì)；核酸，如下定義但不限于寡核苷酸或修飾寡核 苷酸、反義寡核苷酸或修飾反義寡核苷酸、cDNA、染色體DNA、 人造或天然的染色體(例如酵母人工染色體)或其一部分、RNA包括 mRNA、 tRNA、 rRNA或核酶，或核酸肽(PNA);病毒或病毒樣顆粒； 核苷酸或核糖核苷酸或其合成類似物，其可以是修飾的或未修飾的； 氨基酸或其類似物，其可以是修飾的或未修飾的；非肽(例如，甾類) 激素；蛋白多糖；脂類；或糖類。也包括小分子，其包括無機和有 機化學物，結(jié)合并占據(jù)了多肽的活性位點，因此使得催化部位難以 接近底物，而使正常的生理學活動被阻斷。小分子的例子包括但不 限于小肽或肽樣分子。調(diào)節(jié)活性的纟企測本文所述的化合物和組合物可以用于通過常失見方法檢測對RBP或TTR利用率千擾的分析。例如，可以用本文所述的任意化合物或 組合物治療患者，并用常規(guī)技術(shù)定量RBP或TTR水平。參見 Sundaram， M.,等人，Biochem. J. 362: 265-271(2002)。例如，典型的非 竟爭性夾層分析是在U.S. 4,486,530中所述的分析法，通過參考引入
本文。在該方法中，夾層復合物，例如免疫復合物是在分析培養(yǎng)基 中形成的。該復合物包含被分析物、第一抗體或與被分析物結(jié)合的 結(jié)合成員，和第二抗體，或與被分析物或被分析物與第一抗體的復 合物結(jié)合的結(jié)合成員，或結(jié)合成員。隨后，檢測該夾層復合物，并 涉及在樣品中被分析物的存在和/或量。由于在復合物中存在標記物， 其中第一抗體和第二抗體之一或兩者、或結(jié)合成員中包含標記物或 能與標記物結(jié)合的取代物。樣品可以是血漿、血、糞便、組織、肌肉、淚、唾液或尿，例如4企測對RBP或TTR清除率的調(diào)節(jié)。對該方 法更詳細的描述，參見U.S. Re 29,169和4,474,878，將其有關(guān)內(nèi)容 通過參考引入本文。在上述夾層分析的變化方法中，在適當培養(yǎng)基中的夾層與標記 的抗體或被分析物的結(jié)合成員接觸，并培養(yǎng)較長的時間。然后，將 培養(yǎng)基同與第二抗體結(jié)合的載體或被分析物的結(jié)合成員接觸。在培 養(yǎng)期過后，從培養(yǎng)基中分離載體并洗滌除去未結(jié)合的試劑。檢查載 體或培養(yǎng)基是否存在標記物，其與被分析物的存在或量有關(guān)。對該 方法更詳細的描述，參見U.S. 4,098,876,將其有關(guān)內(nèi)容通過參考引 入本文。
本文所述的調(diào)節(jié)劑也可以用于體外分析，以檢測RBP或TTR活 性的干擾。例如，調(diào)節(jié)劑可以加入到包含RBP、 TTR和視黃醇的樣 品中以檢測復合物分裂?？梢詷擞浺环N組分，例如RBP、 TTR、視 黃醇或調(diào)節(jié)劑以確定是否發(fā)生復合物形成的分裂。可以通過常規(guī)方 法，例如上述的夾層分析來檢測和/或測定復合物形成和隨后的分裂。 其他檢測系統(tǒng)例如RBP-TTR-視黃醇復合物形成的FRET檢測可以用 于檢測對RBP或TTR結(jié)合的調(diào)節(jié)。參見U.S.臨時專利申請No.60/625,532 "Fluorescence Assay for Modulators of retinol Binding", 通 過參考以整體引入本文。
體外基因表達分析可以用于檢測本文所述的調(diào)節(jié)劑對RBP或 TTR轉(zhuǎn)錄或翻譯的調(diào)節(jié)。例如，如Wodicka等人，Nature Biotechnology 15(1997)，(通過參考以整體引入本文)所述，因為mRNA雜交與基因
表達水平有關(guān)，因此可以比較雜交模式來確定不同的基因表達。作 為 一 個非限制性的例子，可以用調(diào)節(jié)劑處理的樣品的雜交模式與沒 有進行處理或用其他化合物或不同量的相同化合物處理的樣品的雜交模式進行比較。用DNA排列技術(shù)來分析這些樣品，參見U.S. Patent No. 6，040，138，通過參考以整體引入本文。也可以通過在體外分析中 分析由RBP或TTR啟動子區(qū)驅(qū)動的凈艮告蛋白的表達，用重組DNA 技術(shù)來分析RBP或TTR活性的基因表達分析。參見，例如，Rapley 和Walker， Molecular Biomethods Handbook(1998); Wilson和Walker， Principals和Techniques of Practical Biochemistry(2000)， 通過參考以 整體引入本文。也可以使用體外翻i奪分析來檢測本文所述的RBP或TTR調(diào)節(jié)或 翻譯。僅僅是舉例，調(diào)節(jié)劑對翻譯的調(diào)節(jié)可以通過使用無細胞的蛋 白翻譯系統(tǒng)來檢測，例如大腸桿菌提取物、兔網(wǎng)織紅細胞裂解物和 麥胚4是耳又物，參見 Spirin, A. S.， Cell-free protein synthesis bioreactor(1991)，通過參考以整體引入本文，包括在存在或不存在本 文所述的調(diào)節(jié)劑的條件下比較蛋白質(zhì)的翻譯。調(diào)節(jié)劑對蛋白質(zhì)翻譯 的影響也可以用蛋白質(zhì)膠電泳或免疫復合分析來檢測以確定在加入調(diào)節(jié)劑后質(zhì)和量的差異。此外，包括但不限于小分子、多肽、核酸和抗體的其他可能的 調(diào)節(jié)劑也可以用上述的體外檢測法來篩選。例如，根據(jù)上述的教導， 本文所述的方法和組合物可以用于篩選小分子庫、核酸庫、肽庫或 抗體庫。篩選庫例如組合庫或上述所列的其他庫的方法，可以參見 U.S.5,591,646; 5,866,341;和6,343,257，通過參考以整體引入本文。調(diào)節(jié)劑活性的體內(nèi)檢測除了上述的體外方法，本文所述的方法和組合物也可以與體內(nèi) 檢測和/或?qū)TR或RBP利用率的調(diào)節(jié)活性的定量結(jié)合使用。例如， 將標記的TTR或RBP注射到患者中，其中候選的調(diào)節(jié)劑是在注射標 記的TTR或RBP之前、其間或之后加入?；颊呖梢允遣溉閯游铮?如人；但是也可以使用其他哺乳動物，例如靈長類、馬、狗、綿羊、
山羊、兔、小鼠或大鼠。然后從患者中移出生物樣品，檢測標記物以確定TTR或RBP的利用率。生物樣品可以包含但不限于血漿、血、 尿、糞<更、；i幾肉、組織、淚或唾液。才艮據(jù)標記物的性質(zhì)，本文所述 的對標記試劑的監(jiān)測可以用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任意常規(guī)方 法來進行。檢測化學發(fā)光、放射性標記或其他標記的化合物的監(jiān)測 裝置的例子在U.S. . 4,618,485; 5,981,202中有記載，其有關(guān)內(nèi)容通 過參考引入本文。治療方法、劑量和聯(lián)合治療法。術(shù)語"治療"是指預防性和/或治療性療法。在治療性應用中， 該組合物以組以確4呆或至少部分i也阻止疾病、病癥或病況的癥狀的 量施用于已經(jīng)患有疾病、病況或病癥的患者。對該應用有效的量將 取決于疾病、病癥或病況的嚴重度和病程、先前的治療、患者的健 康情況和對藥物的應答、治療醫(yī)生的判斷。認為通過常規(guī)試驗(例如， 劑量遞增的臨床試驗)確定治療有效量是在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)。在預防性應用中，包含本文所述的化合物的組合物施用于對特 定疾病、病癥或病況敏感或有危險的患者。該量定義為"預防有效 量或劑量，，。在該應用中，精確的劑量也取決于患者的健康情況、 體重等等。認為通過常規(guī)試驗(例如，劑量遞增的臨床試驗)確定治療 預防有效量是在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)。術(shù)語"增強"或"提高"是指增加或延長所需效果的效力或持 續(xù)時間。因此，當增強治療劑的效果時，術(shù)語"增強"是指增加或 延長效力或持續(xù)時間、其他治療機對系統(tǒng)的效果。本文使用的"增 強有效量，，是指某 一 劑量足以增強其他治療劑對期望的系統(tǒng)的效果。 當在患者中使用時，對該應用有效的量將取決于疾病、病癥或病況 的嚴重度和病程、先前的治療、患者的健康情況和對藥物的應答、 治療醫(yī)生的判斷。在患者的情況沒有改善的情況中，醫(yī)生慎重施用該化合物可以 是長期施用，也即施用較長的時間，包括在患者整個一生，以改善
或控制或限制患者的疾病或病況。
在患者的情況改善的情況中，醫(yī)生慎重施用該化合物可以是連 續(xù)給予或暫時中止一段較長的時間(即"休藥期")。
當患者的情況已經(jīng)改善時，如果必要施用維持劑量。隨后，可 以降低作為癥狀函數(shù)的施用劑量或頻率或兩者皆降到 一 定水平保持 改善的疾病、病癥或病況。但是，當癥狀有任何復發(fā)時，患者可以 要求進行基于長期的間歇療法。
符合該量的給定試劑的量將會由于各自因素而不同，例如特定 的化合物、疾病的情況和其嚴重度、需要治療的患者或宿主的性質(zhì)(例 如體重)，但盡管如此，可以根據(jù)該情況周圍的特定情況包括例如， 所施用的具體試劑、給藥途徑、要治療的疾病、和要治療的患者或 宿主，使用本領(lǐng)域已知的方法進行常規(guī)確定。但是一般地，成人治療所使用的劑量典型地是每日0.02-5000 mg優(yōu)選每日1-1500 mg。 方便地，所需劑量可以在單劑量或者同時(或在較短時間內(nèi))或間隔適 當間期，例如每日2, 3, 4或更多亞劑量施用的多劑量中。
在一些情況中，施用至少一種本文所述的化合物(或其藥學可接 受的鹽、酯、酰胺、前藥或溶劑化物)與另一種治療劑的組合是適當 的。僅僅是舉例，如果接受本文的一種化合物的患者發(fā)生的一種副 作用是炎癥，那么施用抗炎劑和起始的治療劑是適當?shù)??；蛘?，僅 僅是舉例，通過施用佐劑(即佐劑本身僅具有很小的治療益處，但與 其他治療劑組合時增強了患者總的治療益處)增強了本文所述的 一 種 化合物的治療有效性。或者，僅僅是舉例，可以通過施用本文所述 的化合物和另 一種也具有治療益處的治療劑(其也包括治療法)來增 強患者的益處。僅僅是舉例，在施用本文所述的化合物治療黃斑變 性時，可以通過給患者提供另 一 種治療劑或黃斑變性療法來得到增 強的治療益處。在任何情況下，不管要治療的是什么疾病、病癥或 病況，患者所具有的總益處將簡單地是兩種治療劑的加和，或患者 可以得到協(xié)同性益處。具體地，可能的聯(lián)合治療的非限制性例子包括使用至少 一種調(diào)
節(jié)RBP或TTR水平或活性的化合物以及一氧化氮(NO)誘導物、他 汀類、帶負電荷的磷脂、抗氧化劑、礦物質(zhì)、抗炎劑、抗血管生成 藥、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑和類胡蘿卜素。在一些情況中，適當?shù)?組合試劑可以完全落在多個范圍內(nèi)(僅僅是舉例，葉黃素是抗氧化劑 和類胡蘿卜素)。此外，調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的化合物也可 以與其他為患者提供益處的試劑一起施用，包括但不僅限于環(huán)孢霉 素A。此外，調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的化合物也可以與為患者 提供加和或協(xié)同性益處的方法聯(lián)合使用，包括但不僅限于使用體外 流變療法(也稱作膜差異過濾)、使用可植入的微型望遠鏡、玻璃疣的 激光光凝術(shù)和微刺激療法。使用抗氧化劑也會對患黃斑變性和營養(yǎng)不良的患者顯示益處。 參見，例如，Arch. Ophthalmol., 119: 1417-36(2001); Sparrow,等人，J. Biol. Chem., 278: 18207-13(2003)。可以與調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或 活性的至少 一種化合物聯(lián)合使用的適當?shù)目寡趸瘎┑睦影ňS生 素C、維生素E、 (3-胡蘿卜素和其它類胡蘿卜素、輔酶Q、和4-羥基 -2，2，6，6-四甲基哌啶-N-氧基(也稱Tempol)、葉黃素、丁基化羥基甲 苯、白藜蘆醇、trolox類似物(PNU-83836-E)和覆盆子提取物。使用某些礦物質(zhì)也會對患黃斑變性和營養(yǎng)不良的患者顯示益 處。參見，例如，Arch. Ophthalmol" 119: 1417-36(2001)?？梢耘c調(diào) 節(jié)RBP或TTR水平或活性的至少一種化合物聯(lián)合使用的適當?shù)牡V 物質(zhì)的例子包括包含銅的礦物質(zhì)，例如氧化銅(僅僅是舉例)；包含鋅 的化合物，例如氧化鋅(僅僅是舉例)；和包含硒的化合物。使用某些帶負電荷的磷脂也會對患黃斑變性和營養(yǎng)不良的患者顯示益處。參見，例如，Shaban & Richter， Biol. Chem" 383: 537-45(2002); Shaban，等人，Exp. Eye Res.， 75: 99-108 (2002)?？梢耘c調(diào) 節(jié)RBP或TTR水平或活性的化合物聯(lián)合使用的適當?shù)膸ж撾姾傻?磷脂的例子包括心磷脂和磷脂酰甘油。當與調(diào)節(jié)RBP或TTR水平 或活性的化合物聯(lián)合施用時，帶正電荷和/或中性磷脂也可以對患黃
斑變性和營養(yǎng)不良的患者顯示益處。使用某些類胡蘿卜素與在光感受器細胞中維持必需的光保護有 關(guān)。類胡蘿卜素是天然產(chǎn)生的萜類的黃色到紅色的色素，其可以在 植物、藻類、細菌或某些動物例如鳥類和貝類中發(fā)現(xiàn)。類胡蘿卜素 是一大類分子，其中已經(jīng)鑒定出了超過600種天然產(chǎn)生的類胡蘿卜 素。類胡蘿卜素包括烴類(胡蘿卜素)和它們氧合、醇化的衍生物(葉黃素)。它們包括actinioerythrol、蝦青素、斑蝥素、辣椒黃素、辣椒 紅素、|3-8'-脫輔基胡蘿卜素醛(apo-胡蘿卜素醛)、(3-12'-脫輔基胡蘿卜 素醛、a-胡蘿卜素、(3-胡蘿卜素、"胡蘿卜素"(a和(3-胡蘿卜素的混 合物)、y-胡蘿卜素、(3 —cyrptoxanthin、葉黃素、番茄紅素、violerythrin、 玉米黃素、和其包含羥基或羧基成員的酯。許多自然中產(chǎn)生的類胡 蘿卜素是順式-和反式異構(gòu)體的形式，而合成的化合物通常是外消旋 混合物。在人中，視網(wǎng)膜選擇性主要蓄積兩種類胡蘿卜素玉米黃素和 葉黃素。認為這兩種類胡蘿卜素是保護視網(wǎng)膜的，因為它們強烈地 抗氧化和吸收藍光。用鵪鶉的研究確認了，用缺乏類胡蘿卜素的飲 食培養(yǎng)的組具有低濃度玉米黃素的視網(wǎng)膜，受到嚴重的光損害，這 通過非常高數(shù)量的光感受器細胞的細胞凋亡得到證實，而高濃度的 玉米黃素的組只有4艮小的損害?？梢耘c調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活 性的至少 一種化合物聯(lián)合使用的適當?shù)念惡}卜素的例子包括葉黃 素和玉米黃素，以及上述任意的類胡蘿卜素。適當?shù)囊谎趸T導物包括在體內(nèi)刺激內(nèi)源性NO或提高內(nèi)源 性內(nèi)皮細胞衍生舒張因子(EDRF)水平的化合物或是一氧化氮合成酶 的底物。這些化合物包括L-精氨酸，L-高精氨酸、和N-羥基-L-精氨 酸、包括它們的硝基化和亞硝基化類似物(例如，硝基化的L-精氨酸、 亞硝基化的L-精氨酸、硝基化的N-羥基-L-精氨酸、亞硝基化的N-羥基-L-精氨酸、硝基化的L-高精氨酸和亞硝基化的L-高精氨酸)、 L-精氨酸的前體和/或生理學可接受的鹽，包括例如，瓜氨酸、鳥氨 酸、谷氨酰胺、賴氨酸、包含這些氨基酸中的至少一個的多肽、精
氨酸酶的抑制劑(例如，N-羥基-L-精氨酸和2(S)-氨基-6-硼己酸)和 一氧化氮合成酶的底物、細胞因子、阿糖腺苷、緩激肽、4丐網(wǎng)織蛋 白、雙醋苯啶和酚酞。EDRF是一種內(nèi)皮分泌的血管舒張因子，已被 鑒定為一氧化氮或與其緊密相關(guān)的衍生物(Palmer等人，Nature, 327: 524-526(1987); Ignarro等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA， 84: 9265-9269(1987))。他汀類可以作為降脂劑和/或適當?shù)囊谎趸T導物。此外，已 經(jīng)證明了使用他汀和延遲黃斑變性發(fā)生或發(fā)展之間的關(guān)系。G. McGwin等人，British Journal of Ophthalmology, 87: 1121-25(2003)。 因此，當與調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的至少一種化合物聯(lián)合施 用時，他汀類可以為患有眼部病癥(例如黃斑變性和營養(yǎng)不良、視網(wǎng) 膜營養(yǎng)不良)的患者提供益處適當?shù)乃?，僅僅是舉例，包括羅蘇伐 他汀、匹伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西立伐他汀、美伐他汀、 velostatin、氟^U也汀、康帕丁、洛4戈^(也汀、達4戈{也汀、fluindostatin、 阿伐他汀、阿伐他汀鈣(其是阿伐他汀的半鈣鹽)和二氫康帕丁 ?？梢耘c調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的至少一種化合物一起使 用的抗炎劑包括但不僅限于阿司匹林和其他水楊酸鹽、色苷酸鈉、 奈多羅米、茶堿、齊留通、扎魯司特、孟魯司特、普侖司特、吲哚 美辛和脂氧合酶抑制劑；非甾體抗炎藥(NSAIDs)(例如布洛芬和萘普 生)；潑尼松、地塞米松、環(huán)氧合酶抑制劑(即，COX-l和/或COX-2 抑制劑，例如Naproxen ,或Celebrex );他汀類(僅僅是舉例，羅 蘇伐他汀、匹伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西立伐他汀、美伐他 汀、velostatin、氟伐他汀、康帕丁 、洛伐他汀、達伐他汀、fluindostatin、阿伐他汀、阿伐他汀鈣(其是阿伐他汀的半鈣鹽)和二氫康帕丁)；和 分離的類固醇。適當?shù)幕|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)也可以與調(diào)節(jié)RBP或TTR水平 或活性的化合物聯(lián)合施用，以治療眼部疾病或與黃斑或視網(wǎng)膜變性 有關(guān)的癥狀。已知MMPs水解細胞外基質(zhì)的大部分組分。這些蛋白 酶在許多生物過程例如正常組織改造、胚胎發(fā)生、傷口愈合合和血 管發(fā)生中發(fā)揮主要作用。但是，在許多疾病狀態(tài)包括黃斑變性中觀測到MMp的過度表達。已經(jīng)鑒定了許多MMP，其中大多數(shù)是多區(qū) 域鋅內(nèi)肽酶。已知多種金屬蛋白酶抑制劑(參見例如Whittaker M. 等人，Chemical Reviews 99(9): 2735-2776 (1999)對MMP抑制劑的綜 述)。MMP抑制劑的代表性例子包括金屬蛋白酶的組織抑制劑(TIMPs) (例如，TIMP-1、 TIMP-2、 TIMP-3、或TMP畫4)、 012-微球蛋白、四 環(huán)素類(例如四環(huán)素、米諾環(huán)素、多西環(huán)素)、氧肟酸鹽(例如，巴馬司 他、MARIMISTAT和托卡特)、螯合劑(例如，EDTA、半胱氨酸、乙 酰半胱氨酸、D-青霉胺和金鹽)、合成的MMP片段、琥珀酰巰嘌呤、 磷酰胺和羥甲酸?？梢耘c調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的化合物聯(lián)合 使用的MMP抑制劑的例子包括上述任意的抑制劑。使用抗血管生成或抗-VEGF藥也顯示了對患黃斑變性和營養(yǎng)不 良的患者提供益處。與調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的化合物聯(lián)合使 用的適當?shù)目寡苌苫蚩?VEGF藥的例子包括Rhufab V2 (LucentisTM)、色氨?；?tRNA合成酶(TrpRS)、 Eye001(抗-VEGF Peg 化適體)、角鯊胺，RetaaneTMl5mg(長效混懸的乙酸阿奈司他；Alcon， Inc.)、考布他汀A4前藥(CA4P)、 MacugenTM、 Mifeprex (米非司酮 -ru486)、 subtenon曲安奈德、玻璃體內(nèi)晶體曲安奈德、普啉司他 (AG3340 -合成的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑，Pfizer)、氟輕松(包括氟 輕+>眼內(nèi)植入劑，Bausch & Lomb/控制遞送系統(tǒng))、VEGFR抑制劑 (Sugen)和VEGF國Trap (Regeneron/Aventis)。其他用于緩解視力損傷的藥物治療劑可以與至少 一種調(diào)節(jié)RBP 或TTR水平或活性的化合物聯(lián)合使用。這些治療劑包括但不限于試 劑Visudyne 并使用非熱能激光、PKC 412、 Endovion (NeuroSearch A/S)、神經(jīng)營養(yǎng)因子包括例如膠質(zhì)細胞衍生的神經(jīng)營養(yǎng)因子和睫狀 節(jié)神經(jīng)細胞營養(yǎng)因子、diatazem、多佐胺、Phototrop、 9-順式-視黃醛、 眼睛藥物(包括Echo Therapy)包括石典依可酯或二乙氧膦酰石克膽石咸或 碳酉臾肝酵^卩制劑、AE-941 (AEterna Laboratories, Inc.)、 Sirna-027 (Sirna Therapeutics, Inc.)、 pegaptanib (NeXstar Pharmaceuticals/Gilead Sciences),神經(jīng)營養(yǎng)因子(僅僅是舉例，包括NT-4/5、 Genentech)、 Cand5 (Acuity Pharmaceuticals) 、 ranibizumab (Genentech)、 INS-37217(InspirePharmaceuticals)、整聯(lián)蛋白拮抗劑(包括來自Jerini AG和Abbott Laboratories的那些)、EG-3306 (Ark Therapeutics Ltd.)、 BDM-E (BioDiem Ltd.)、沙利度胺(如果4吏用，是例如由EntreMed, Inc. 生產(chǎn)的)、cardiotrophin國l (Genentech) 、 2-甲氧基雌二醇 (Allergan/Oculex)、 DL-8234 (Toray Industries)、 NTC-200 (Neurotech)、 四4克鉬酸鹽(University of Michigan) 、 LYN-002 (Lynkeus Biotech)、樣吏 藻化合物 (Aquasearch/Albany， Mera Pharmaceuticals) 、 D-9120 (Celltech Group pic)、 ATX畫SIO (Hamamatsu Photonics) 、 TGF畫卩2 (Genzyme/Celtrix)、酪氨酸激酶抑制劑(Allergan， SUGEN, Pfizer)、 NX-278-L (NeXstar Pha醒ceuticals/Gilead Sciences)、 Opt-24 (OPTIS France SA、視網(wǎng)膜細胞神經(jīng)節(jié)神經(jīng)保護劑(Cogent Neurosciences)、 N-硝基吡唑衍生物(Texas A&M University System) 、 K-P- 102 (Krenitsky Pharmaceuticals)和環(huán)孢霉素A。參見U.S.專利申請公開 號20040092435。為了治療糖尿病，本文所述的方法和組合物進一步包括施用第 二化合物，其選自(a)降低葡萄糖的激素或擬激素(例如，胰島素、 GLP國l或aGLP-1類似物、exendin-4或liraglutide), (b) p爭低葡萄糖 的磺酰脲(例如，醋酸己脲、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、格 列美脲、格列吡嗪、格列本脲、微粉化的格列本脲或格列齊特)，(c) 降低葡萄糖的雙胍(二甲雙胍)，(d)降低葡萄糖的氯茴苯酸(例如，那 格列奈或瑞格列奈)，(e)降低葡萄糖的噻唑烷二酮或其他的PPAR-y 激動劑(例如吡格列酮、羅格列酮、曲格列酮或isagitazone)， (f)降 低葡萄糖的對PPAR-y和PPAR-a都具有親和力的雙作用PPAR激 動劑(例如，BMS-298585和tesaglitazar)， (g)降低葡萄糖的a-葡糖苷 酶抑制劑(例如，阿卡波糖或米格列醇)，(h)不靶向于葡萄糖-6-磷酸 酶轉(zhuǎn)位酶的降低葡萄糖的反義化合物，(i)抗肥胖的食欲抑制劑(例如 苯丁胺)，(j)抗肥胖的脂肪吸收抑制劑例如奧利斯特，(k)睫狀節(jié)神經(jīng)
細胞營養(yǎng)因子的抗肥胖修飾形式，其抑制刺激食欲的饑餓信號，(1) 降脂的膽酸鹽螯合樹脂(例如，考來烯胺、考來替泊、和鹽酸考來維侖)，(m)降脂的HMGCoA-還原酶抑制劑(例如，洛伐他汀、西立伐 他汀、普伐他汀、阿伐他汀、辛伐他汀和氟伐他汀)，(n)煙酸，(o) 降脂的纖維酸衍生物(例如氯貝丁酯、吉非貝齊、非諾貝特、苯扎 貝特和環(huán)丙貝特)，(p)包括普羅布考、新霉素、右旋甲狀腺素的試 劑，(q)植物-睪醇酯，(r)膽固醇吸收抑制劑(例如，依則替米貝)， (s)CETP抑制劑(例如torcetrapib和JTT- 705), (t) MTP抑制劑(例 如英普他派)，(u)膽酸轉(zhuǎn)運體(頂端的鈉依賴性膽酸轉(zhuǎn)運體)的抑制 劑，(v)肝CYP7a的調(diào)節(jié)劑，(w)ACAT抑制劑(例如阿伐麥布)， (x)降脂的雌激素替代治療劑(例如tamoxigen)， (y)合成的HDL (例 如，ETC-216),或(z)降脂的抗炎劑(例如糖皮質(zhì)激素)。當?shù)诙?合物具有不同的靶和/或通過與本文所述的試劑(即調(diào)節(jié)RBP或TTR如同時、連續(xù)或分別施用)這兩種試劑可以為糖尿病患者4是供加和 和/或協(xié)同的治療益處。為了相同的原因，相對于不存在組合時各試 劑的劑量，期望這兩種試劑的聯(lián)合施用(例如同時、連續(xù)或分別施 用)可以降低每種或其中一種的劑量，同時仍然能達到期望的治療 益處，包括(僅用作舉例)降低血糖和控制HbAlc。在任何情況中，多種治療劑(其中一種是本文所述的化合物) 可以以任意順序或甚至同時施用。如果是同時，多種治療劑可以以 單一、統(tǒng)一的形式，或以多種形式(僅僅是舉例，作為單一藥丸或2 個分開的藥丸)。 一種治療劑可以以多劑量給予，或兩種都是以多 劑量給予。如果不同時，多劑量之間的時間可以從超過O周到小于4 周不等。此外，聯(lián)合方法、組合物和制劑并不限于僅使用兩種試劑； 我們預測可以使用多種的治療組合。僅僅是舉例，調(diào)節(jié)RBP或TTR 水平或活性的化合物可以與至少 一 種抗氧化劑和至少 一 種帶負電荷 的磷脂一起提供；或調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的化合物可以與 至少 一種抗氧化劑和至少 一種 一氧化氮產(chǎn)生的誘導物 一起提供；或 調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的化合物可以與至少一種一氧化氮產(chǎn) 生的誘導物和至少一種帶負電荷的磷脂一起提供；等等。此外，調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的化合物可以與為患者提 供加和或協(xié)同益處的方法聯(lián)合使用。已知的、目的或被認為是緩解 視力受損的方法包括但不限于"限制視網(wǎng)膜易位，，、光動力學療法(僅 用作舉例包括，靶向于受體的PDT、 Bristol-Myers Squibb, Co.;與 PDT注射的卟吩姆鈉；維替泊芬，QLT Inc.;羅替泊芬與PDT, Miravent Medical Technologies; 4tk4立泊芬與PDT, Nippon Petroleum; 莫凈爭沙、 芬镥，Pharmacyclics，， Inc.)、反義寡核香酉吏(包4舌，例如，Novagali Pharma SA試驗的產(chǎn)品和ISIS-13650， Isis Pharmaceuticals),激光光 凝術(shù)、玻璃疣激光法、黃斑裂洞手術(shù)、黃斑易位手術(shù)、可植入的微 型望遠鏡、Phi-運動血管造影術(shù)(也稱顯微-激光療法和進料導管療 法)、質(zhì)子束療法、微刺激療法、視網(wǎng)膜剝離和玻璃體手術(shù)、鞏膜彎 曲、黃斑下手術(shù)、瞳孔熱療法、光系統(tǒng)I療法、使用RNA千擾(RNAi)、 體外流變療法(也稱做膜差異過濾和電療法)、微芯片移植、干細 胞療法、基因替代療法、核酶基因療法(包括低氧應答元素的基因 療法,Oxford Biomedica; Lentipak， Genetix; PDEF基因療法， GenVec)、光感受器/視網(wǎng)膜細胞移植(包括可移植的視網(wǎng)膜上皮細胞， Diacrin, Inc.; 一見網(wǎng)膜細胞移植，Cell Genesys， Inc.)和針灸。可以使用使個體受益的進一 步的組合包括使用基因試驗來確定 個體是否是突變基因的載體，其中已知突變基因與某些眼部病癥有 關(guān)。僅用作舉例，在人體內(nèi)ABCA4基因的缺乏被認為是與五種不同 的視網(wǎng)膜表型包括Stargardt病、錐-桿營養(yǎng)不良、與年齡相關(guān)的黃 斑變性和視網(wǎng)膜色素變性有關(guān)。參見例如，Allikmets等人，Science, 277: 1805-07 (1997); Lewis等人，Am. J. Hum. Genet" 64: 422-34 (1999); Stone等人，Nature Genetics, 20: 328-29 (1998); Allikmets, Am. J. Hum. Gen.， 67: 793-799 (2000); Klevering，等人，Ophthalmology, 111: 546-553 (2004)。這些患者有望在本文所述的方法中獲得治療性 和/或預防性益處。
除了上述的成分，本文公開的制劑進一步包括一種或多種任選 的在藥物制劑領(lǐng)域使用的附加成分，即稀釋劑、緩沖劑、調(diào)味劑、 著色劑、粘合劑、表面活性劑、增稠劑、潤滑劑、懸浮劑、防腐劑 (包括抗氧化劑)等等。該化合物也可以多次施用于患者，多次施用之間的時間包括至 少數(shù)小時，或1天，或長達l周或更長時間。該化合物也可以每12 小時、每天、每兩天、每三天、每一周或其他任何適當?shù)目梢杂行д{(diào)節(jié)維生素A水平的時間施用。在施用上述化合物的同時，也可以檢測患者的與視黃醇相關(guān)的 疾病過程的生理學現(xiàn)象。例如，可以檢測患者與年齡相關(guān)的黃斑變 性或營養(yǎng)不良的生理學現(xiàn)象，例如在患者眼中玻璃疣的形成、測定 患者眼中脂褐素的水平、測定A2E和A2E的前體的自發(fā)熒光，和測 定患者眼中N-視黃亞基-N-視黃基乙醇胺的水平。此外，也可以檢測 患者維生素A水平的改變或干擾，以及生物樣品中的RBP和TTR 水平或活性。實施例下列實施本文所述方法的成分、過程和方法與上述的那些相對 應。下面的方法用細節(jié)描述了當前檢測和篩選視黃醇結(jié)合的調(diào)節(jié)劑 的方法的優(yōu)選實施方案。任何未具體描述的方法、材料、試劑或賦 形劑是分析和篩選領(lǐng)域技術(shù)人員普遍知道的和可獲得的。實施例1:抑制TTR的基因表達的化合物的鑒定 可以將受試化合物施用于用TTR表達構(gòu)造轉(zhuǎn)染的人細胞的培養(yǎng) 基，并在37。C下培養(yǎng)10到45分鐘。將沒有轉(zhuǎn)染的相同類型細胞的 培養(yǎng)基在沒有受試化合物的情況下培養(yǎng)相同的時間，以提供陰性對照。然后根據(jù)Chirgwin等人，Biochem. 18， 5294-99， ( 1979 )所述從 兩種培養(yǎng)基中分離RNA。用20到30叫總RNA制備NorthernRNA 印跡，并與32P標記的TTR-特異性探針雜交。先前已經(jīng)描述了檢測 TTRmRNA轉(zhuǎn)錄的探針。相對于沒有受試化合物時得到的信號降低 了 TTR-特異性信號的受試化合物即鑒定為TTR基因表達的抑制劑。實施例2:與RBP結(jié)合和/或抑制RBP的基因表達的化合物 可以將受試化合物施用于用RBP表達構(gòu)造轉(zhuǎn)染的人細胞的培養(yǎng) 基，并在37。C下培養(yǎng)10到45分鐘。將沒有轉(zhuǎn)染的相同類型細胞的 培養(yǎng)基在沒有受試化合物的情況下培養(yǎng)相同的時間，以提供陰性對照。然后根據(jù)Chirgwin等人，Biochem. 18， 5294-99， ( 1979 )所述從 兩種培養(yǎng)基中分離RNA。用20到30嗎總RNA制備Northern RNA 印跡，并與32P標記的RBP-特異性探針雜交。相對于沒有受試化合 物時得到的信號降低了 RBP-特異性信號的受試化合物即鑒定為RBP 基因表達的抑制劑。實施例3:檢測A2E和/或前體的存在在abcrT和野生型小鼠中，通過HPLC確定在RPE中A2E的水 平，通過使用共焦激光掃描檢眼鏡并測定它們在430 nm處的吸收可 以確定A2E的水平。實施例4:測定對纟見力受損的保護下面研究是根據(jù)Sieving, P.A.，等人，Proc. Natl. Acad. Sci., 98: 1835-40 (2001)進行的。對于長期的曝光研究，將7周大的 Sprague-Dawley雄性大白鼠放置于5 lux熒光白光的12: 12小時亮/ 暗循環(huán)中。對于急性曝光研究，在暴露于漂白光之前，將大鼠進行 暗適應過夜，然后進行ERG測定。將大鼠暴露于2,000 lux白色熒光 中48小時。記錄隨后7天的ERGs，立即進行組織學研究。處死大鼠，取出眼睛并切片。在兩個半J求上每200 測定外核 層厚度和桿狀外節(jié)(ROS)長度上的柱細胞數(shù)，平均該數(shù)得到整個視網(wǎng) 膜上細胞改變的測定值。通過HPLC確定在RPE中A2E的水平，通 過4吏用共焦激光掃描4企眼4竟并測定它們在430 nm處的吸收可以確定 A2E的水平。實施例5:;險測眼部治療、療法或藥物的有效性評價對黃斑或視網(wǎng)膜變性和營養(yǎng)不良有作用的治療、療法或藥 物的有效性可以是三個步驟，其包括l)患者的起始測定，例如患者 眼中玻璃疣的形成，患者眼中地圖狀萎縮的大小和數(shù)目、通過測定 A2E或脂褐素或A2E的前體的自發(fā)熒光測定患者眼中的脂褐素水 平、或測定患者眼中N-視黃亞基-N-視黃基乙醇胺水平。2)給患者 提供治療、療法或藥物，3)在步驟(2)后測定患者眼中玻璃疣的 形成，患者眼中地圖狀萎縮的大小和數(shù)目、通過測定A2E或脂褐素 或A2E的前體的自發(fā)熒光測定患者眼中的脂褐素水平、或測定患者 眼中N-視黃亞基-N-視黃基乙醇胺水平，評估結(jié)果，其將表明治療、 療法或藥物可能具有需要的效果。需要的效果可以包括玻璃疣形成 的減少或中止，患者眼中的脂褐素水平、A2E或A2E的前體的自發(fā) 熒光、或患者眼中的N-視黃亞基-N-視黃基乙醇胺水平?？梢栽谟谢?沒有非治療間隔的情況下重復施用步驟2-3 ?；颊呖梢园ǖ幌抻?小鼠和/或大鼠和/或人類患者。實施例6:檢測TTR或RBP調(diào)節(jié)劑對糖尿病患者的有效性 TTR或RBP調(diào)節(jié)劑可以在良好確定的老鼠模型中測定，包括 (非肥胖性糖尿病)老鼠，以及Biobreeding (BB)和鏈脲霉素-誘導的 糖尿病大鼠。參見U.S. 6,770,272,以整體引入本文，和Tuitoek， PJ， 等人，Int. J. Vitam. Nutr. Res. 66: 101-5 (1996)?？梢栽谛∈蠡虼笫笾?再次測定化合物對抗糖尿病產(chǎn)生的作用，或?qū)⒃摶衔锸┯糜诰哂?已確定的糖尿病癥狀的小鼠。簡言之，在糖尿病癥狀產(chǎn)生前，通過腹腔內(nèi)注射將TTR或RBP 施用到6周大的小鼠中。在25周大時檢查該小鼠，其中在對照動物 和治療組中糖尿病發(fā)病率的降低表明其在糖尿病治療中的可能的治 療候選者。TTR或RBP調(diào)節(jié)劑也可以施用于人類患者來抑制糖尿病的發(fā) 展。該化合物可以在藥學可接受的載體(例如，鹽水)中配制成用 于口服、靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、經(jīng)皮或吸入施用。當發(fā)現(xiàn)葡萄糖代 謝中抗-(3細胞自身免疫和/或細微的前糖尿病癥狀的改變時，治療組 合物可以施用于患者(即，早期的鈍性i.v.葡萄糖耐受試驗)，并根 據(jù)患者的應答，以每天或低至每周1次的頻率重復施用?？梢杂脴?準方法檢測在要治療的人的葡萄糖耐受實驗中葡萄糖水平、抗-(3細 胞自身抗體水平或異常情況來確定該調(diào)節(jié)劑的優(yōu)選劑量。實施例7:血清HPR水平與血清—見黃醇，和眼睛類^見黃醇與 A2E水平的關(guān)系的體內(nèi)分析為了探求在視循環(huán)中HPR的作用，檢查小鼠中HPR的體內(nèi)作用。 因此，將HPR施用于ABCA4無效突變小鼠(5 - 20 mg/kg, ， i.p.在 DMSO中)，共28天。對照小鼠僅接受DMSO載體。在治療期結(jié)束 后，測定在眼組織中類視黃醇含量以及血清中視黃醇和HPR的濃度。 觀測到血清視黃醇的極大降低是血清HPR升高的函數(shù)。該作用與眼 的類視黃醇和A2E (—種毒性的基于類視黃醇的熒光團)的同等程 度的降低有關(guān)。因此，測定的類視黃醇和A2E的各個計算的降低百 分數(shù)幾乎相等(參見附圖2)。這些結(jié)果表明，由于系統(tǒng)施用HPR而引 起的眼的類視黃醇和A2E的降低是由血清視黃醇水平的降低引起 的。為了確保在ABCA4無效小鼠中所觀測到的HPR的作用不是由 基因突變造成的，給野生型小鼠施用5天的HPR (20 mg/kg， i.p.在 DMSO中)。對照小鼠僅接受DMSO載體。在HPR治療的最后一天， 將小鼠暴露于不變的光照中(1000 lux , 10分鐘)，以"刺激，，視循 環(huán)產(chǎn)生視覺熒光團。在光照期后立即處死小鼠，確定血清和眼組織 中類視黃醇的濃度。數(shù)據(jù)(參見附圖3)顯示，對視黃酯或視覺熒光團 的合成沒有顯著的抑制。如上述研究，HPR導致了血清視黃醇( 55%)、眼部視黃醇(~40%)和眼部視黃醛( 30%)顯著降低。盡管HPR 在治療期沒有在眼組織內(nèi)蓄積( 5 jiM)。但沒有觀測到對LRAT或 Rpe65異構(gòu)酶活性的作用。用RBP4一小鼠和ABCA4一小鼠的遺傳雜交來檢查RBP在血清和 眼組織中對視黃醇水平的介導的作用。當施用劑量為10mg/kg時， 在HPR研究中觀測到該雜交的第一代小鼠(即RBP4/ABCA4 + /-)中 RBP4見黃醇降低的水平相當(血清RBP-視黃醇降低 50-60%)。此 外，RBP4/ABCA4 + 、鼠顯示了眼部視黃醇的同等程度地降低(降低 60%)。這些發(fā)現(xiàn)與用HPR對RBP-視黃醇的藥理調(diào)節(jié)期間得到的數(shù) 據(jù)相符，因此，強烈表明基于A2E的熒光團將會成比例地減少。在 接受急性或慢性劑量的HPR的小鼠中沒有觀測到LRAT活性的抑 制。實施例8: 4企測RBP/TTR相互作用的高通量分析 血清視黃醇和RBP的降低與毒性脂褐素熒光團的伴隨降低相 關(guān)。因為影響RBP-TTR相互作用的化合物將會直接影響眼中的熒 光團水平，發(fā)展出了預防RBP與TTR相互作用的小分子的高通量篩 選。該篩選使用RBP和TTR的探針標記的形式，其中當復合時其 參與到獨特的焚光共振能轉(zhuǎn)移(FRET)事件中。干擾RBP-TTR相互 作用的化合物預防了 FRET。在附圖4中顯示了在該類型的分析過程 中得到的樣品譜。這些數(shù)據(jù)表明在不存在(實線)和存在(虛線) HPR (1 (iM)時RBP-TTR (0.5 pM未標記的RBP + 0.5 pM Alexa 430-TTR)的相互作用。將該樣品在37。C下培養(yǎng)30分鐘，然后用330 nm光照射。所示的發(fā)射光譜范圍是400 - 600 nm。 HPR與RBP結(jié)合， 并阻止了與TTR的相互作用，因此HPR的此性質(zhì)用于確iU亥篩選枱r 測對RBP-TTR相互作用抑制作用的能力。HPR的存在與視黃醇和 TTR-探針的熒光的顯著降低有關(guān)，表明復合作用喪失。此外，該分 析的設計允許區(qū)別與RBP干擾的化合物和干擾TTR的化合物。因此， 通過使用兩種不同的激發(fā)能(對蛋白質(zhì)和視黃醇分別是280 nm和 330 nm)和實現(xiàn)對視黃醇和TTR-探針的熒光的同時檢測，可以容易 地確定預定的小分子的"靶"。實施例9:分析確認和與常規(guī)技術(shù)的比較如色譜法和分光光度測定技術(shù)所示，HPR是RBP-TTR相互作 用的有效抑制劑(參見，例如，Radu RA, Han Y， Bui TV， Nusinowitz S, Bok D， Lichter J3 Widder K， Travis GH和Mata NL; Reductions in Serum Vitamin A Arrest Accumulation of Toxic Retinal Fluorophores: A Potential Therapy for Treatment of Lipofuscin-based Retinal Diseases: Invest Ophthalmol. Vis Sci， in press (2005))。因此，HPR可以用作陰 性對照來確認高通量分析檢測RBP-TTR相互作用的抑制劑的能 力。因此，HPR可以不同的濃度(0-4pM)使用，使用如實施例7指 定的條件來評價高通量分析。如附圖5所示，高通量分析可以有效 地檢測類似于HPR的抑制RBP-TTR相互作用的化合物。在生理學上，RBP-一見黃醇必須與TTR復合，以實現(xiàn)RBP-一見黃 醇的高穩(wěn)態(tài)濃度。該相互作用建立了較大分子的復合物，該復合物 可以耐受腎小球過濾并允許視黃醇遞送到肝外的靶組織。RBP-TTR 相互作用的抑制導致循環(huán)RBP降低，因為相對較小的RBP-配體復合 物將會通過腎小球過濾而失去。然后循環(huán)RBP的降低導致了循環(huán)視 黃醇的降低。數(shù)名研究者已經(jīng)確定了體內(nèi)HPR的這種作用。該體內(nèi) 作用也可以用全反式和13-順式維曱酸來觀測(參見，例如，BerniR， Clerici M，Malpeli G， Cleris L， Formelli F; Retinoids: in vitro interaction with retinol-binding proteinand influence on plasma retinol， FASEB J. (1993) 7: 1179-84)。該作用的作用^L制可以通過RBP- TTR相互作用的分裂來解釋。 為了探求該可能性和進一步確認RBP-TTR篩選，用分析HPR的特 定條件檢查全反式維曱酸和13-順式維曱酸的作用。所獲得的數(shù)據(jù)(參 見附圖6)與體內(nèi)數(shù)據(jù)完全符合。該發(fā)現(xiàn)進一步確認了該分析檢測 RBP-TTR相互作用的已知的生理學抑制劑的能力。 實施例10:試驗調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的化合物治療黃 斑變性的效力-芬維A胺作為說明性的化合物為了預試，所有人類患者進行常規(guī)的眼部檢查，包括焚光素血 管造影術(shù)、測定視力、電生理學參數(shù)和生物化學和流變參數(shù)。包括 的標準如下至少一只眼睛的視力在20/160和20/32之間，AMD的 標志例如玻璃疣、細的萎縮、色素凝集、色素上皮脫離或視網(wǎng)膜下 新血管形成。該研究排除懷孕或積極母乳喂養(yǎng)兒童的患者。將診斷為黃斑變性或在眼中逐漸形成A2E、脂褐素或玻璃疣的 200名人類患者分成約IOO名患者的對照組和IOO名患者的試驗組。 將芬維A胺每日施用于試驗組。按與芬維A胺施用于試驗組相同的 方法給對照組施用安慰劑。芬維A胺或安慰劑給患者的施用可以是口服或胃腸外以有效抑 制黃斑變性的發(fā)展或復發(fā)的量施用。有效劑量的范圍是約1-4000 mg/m2,高達每日三次。在對照和試驗組中測定黃斑變性進展的 一 種方法是用線性評估 和強迫選擇法通過早期糖尿病性視網(wǎng)膜病研究(ETDRS)表 (Lighthouse, Long Island, NY)測定最好的校正視力(Ferris等人Am J Ophthalmol, 94: 97-98 (1982))。視力是以logMAR記錄。在ETDRS表 上一條線的改變相當于0.1 logMAR。在對照和試^r組中測定黃斑變 性進展的另 一種方法包括使用視野檢查，包括但不限于Humphrey視 野檢查，和測定/檢測患者眼中N-視黃亞基-磷脂酰乙醇胺、二氫-N-視黃亞基-N-視黃基-磷脂酰乙醇胺、N-視黃亞基-N-視黃基-磷脂酰乙 醇胺、二氫-N-視黃亞基-N-視黃基-乙醇胺、和/或N-視黃亞基-磷脂 酰乙醇胺的自發(fā)熒光或吸收光譜。用各種設備，包括但不限于共焦 激光掃描4企眼鏡來測定自發(fā)熒光。參見Bindewald，等人，Am. J. Ophthalmol., 137: 556-8 (2004)。在對照和試驗組中測定黃斑變性進展的其他方法包括進行眼底 照相、用Heidelberg視網(wǎng)膜血管照影照片觀測自發(fā)熒光隨時間的改 變(或可替代地，在M. Hammer,等人Ophthalmologe 2004 Apr. 7中描述的技術(shù))，和隨訪時在基線、三、六、九 和十二月時進行熒光素血管照影照片。形態(tài)變化的項目包括下列的 改變(a)玻璃疣大小、性質(zhì)和分布；(b)脈絡膜新生血管的發(fā)展和進 展；(c)其他間隔期的眼底變化或異常情況；(d)閱讀速度和/或閱讀 敏度；(e)暗點大??；或(f)地圖狀萎縮區(qū)域的大小和數(shù)目。此外， 任選施用阿姆斯勒方格表試驗和顯色試驗。為了評估藥物施用期間視力的統(tǒng)計學改善，檢查者使用ETDRS (LogMAR)表和標準折射和視力記錄。在整個可用的治療后間隔期訪 問期間從極限開始的平均ETDRS (LogMAR)最佳矯正視力(BCVA) 的評估目的是確定視力的統(tǒng)計學改善。為了評價對照和試驗組的ANOVA (各組之間的方差分析)，在 整個可用的治療后間隔期訪問期間從極限開始的ETDRS (LogMAR) 視力的平均改變用兩組ANOVA，與用SAS/STAT軟件(SAS Institutes Inc， Gary, North Carolina)測定的具有未確定共方差的重復測定分初-比較。在開始研究后，毒性評價包括在下一年每三個月，在該年以后 每四個月，隨后每六個月一次。也可以在這些訪問中評估芬維A胺 及其代謝產(chǎn)物N-(4-甲氧基苯基)-視黃酰胺的血漿水平。毒性評價包 括使用芬維A胺的患者以及對照組的患者。實施例11:試驗調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性以減少A2E產(chǎn)生 效力的化合物治療黃斑變性的效力-芬維A胺作為說明性化合物如實施例1所述相同的實驗設計，包括預試、施用、劑量和毒 性評價實驗也可以用于測定調(diào)節(jié)RBP和TTR水平或活性的化合物在 降低或以其他方式限制患者眼中A2E產(chǎn)生中的效力。測定或檢測A2E的產(chǎn)生的方法，包括使用自發(fā)熒光測定患者眼 中的N-視黃亞基-磷脂酰乙醇胺、二氫-N-視黃亞基-N-視黃基-磷脂酰 乙醇胺、N-視黃亞基-N-視黃基-磷脂酰乙醇胺、二氫-N-視黃亞基-N-一見黃基-乙醇胺和/或N4見黃亞基-磷脂酰乙醇胺。用各種設備包4舌
但不限于共焦激光掃描檢眼鏡(參見Bindewald, et ah， Am. J. Ophthalmol, 137: 556-8 (2004)),或如實施例1的自發(fā)熒光或吸收 光譜測定技術(shù)測定自發(fā)熒光。其他可以用作特定治療效力的替代性 標志的其他試驗包括如實施例1所述，使用視力和一見野;險查、閱讀 速度和/或閱讀敏度才全查、測定暗點和/或地圖狀萎縮區(qū)地大小和數(shù) 目。^使用實施例1所述的統(tǒng)計分析。實施例12:測定調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的化合物對減少 脂褐素產(chǎn)生的效力-芬維A胺作為例證性化合物如實施例1所述相同的實驗設計，包括預試、施用、劑量和毒 性評價實驗也可以用于測定調(diào)節(jié)RBP和TTR水平或活性的化合物在 減少或以其他方式限制患者眼中脂褐素產(chǎn)生中的效力。使用實施例1 所述的統(tǒng)計分析。其他可以用作特定治療效力的替代性標志的其他試驗包括如實 施例1所述，使用視力和視野檢查、閱讀速度和/或閱讀敏度檢查、 測定暗點和/或地圖狀萎縮區(qū)地大小和數(shù)目、和測定/檢測某些化合物 的在患者眼中的自發(fā)熒光。實施例13:測定調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性的化合物對減少 玻璃疣產(chǎn)生的效力-芬維A胺作為例證性化合物如實施例1所述相同的實驗設計，包括預試、施用、劑量和毒 性評價實驗也可以用于測定調(diào)節(jié)RBP和TTR水平或活性的化合物在 減少或以其他方式限制患者眼中玻璃疣產(chǎn)生中的效力。也使用實施 例1所述的統(tǒng)計分析。在對照和試驗組中測定黃斑變性累積產(chǎn)生的方法包括進行眼底 照相、和隨訪時在基線、三、六、九和十二月時進行熒光素血管照 影照片。形態(tài)變化的項目包括下列的改變(a)玻璃疣大小、性質(zhì)和分 布；b)脈絡膜新生血管的發(fā)展和進展；(c)其他間隔期的眼底變化 或異常情況；。其他可以用作特定治療效力的替代性標志的其他試 驗包括如實施例1所述， <吏用—見力和^見野4全查、測定暗點和/或地圖 狀萎縮區(qū)地大小和數(shù)目、和測定/檢測某些化合物的在患者眼中的自 發(fā)熒光。實施例14: abca4無效突變的小鼠中芬維A胺對于脂褐素(和/ 或A2E)蓄積的效力I相-計量應答和對血清視黃醇的作用也可以意識到，HPR降低動物和人類患者的血清^L黃醇的作用 引導我們?nèi)ヌ角笃浣档椭炙睾投拘远?類視黃醇共軛物、A2E的可 能性。該途徑的理論是基于2條獨立路線的科學證據(jù)1)通過抑 制已知的視循環(huán)酶(11 -順式視黃醇脫氫酶)降低了視循環(huán)中維生素A 的濃度，導致脂褐素和A2E極大地降低；2)維持缺乏維生素A飲 食的動物顯示其脂褐素蓄積引入注目的降低。因此，本實施例的目 的是才企-瞼在動物^t型中HPR的作用，其表明脂褐素和A2E在abca4 無效突變小鼠的眼組織中大量蓄積。通過檢查HPR對血清視黃醇的作用開始初期研究。將動物分成 3組，給予DMSO、 10mg/kgHPR或20mg/kgHPR14天。在研究期 結(jié)束時，從動物中收集血，制備血清，通過反相LC/MS分析血清的 乙腈提取物。進行UV-可見光譜和質(zhì)量/電荷分析來確定對洗脫峰的 鑒定。從這些分析得到的樣品色譜圖如所示附圖7a,接受HPR載 體DMSO的abca4無效突變小鼠的提取物；附圖7b. - 10 mg/kg HPR; 附圖7c. - 20 mg/kg HPR。該數(shù)據(jù)清楚地表明血清—見黃醇劑量依賴性 低降低。定量數(shù)據(jù)表明，對于10 mg/kg HPR, 全反式視黃醇降低 了 40%,參見附圖8。對于20mg/kgHPR，血清視黃醇降低了 72%, 參見附圖8。視黃醇和HPR在血清中的穩(wěn)態(tài)濃度(20mg/kg HPR)分 別確定為2.11 fiM和1.75 jiM。基于這些發(fā)現(xiàn)，我們試圖進 一 步探求在HPR治療期間視黃醇降 低的機制。 一個站得住腳的假設是HPR可以通過竟爭RBP上的視黃 醇結(jié)合位點而取代—見黃醇。與視黃醇類似，HPR在蛋白質(zhì)熒光區(qū)吸 收(猝滅)光能；但與視黃醇不同的是HPR不會發(fā)射熒光。因此， 可以通過觀測蛋白質(zhì)(340 nm)和視黃醇(470 nm)焚光的減少來測定 取代視黃醇對RBP全蛋白質(zhì)的取代。我們用類似與上述確定的20 mg/kg HPR時的14天試驗類似的RBP- 一見黃醇/HPR濃縮物進行了 竟爭型結(jié)合分析。從這些分析獲得的數(shù)據(jù)表明，在生理溫度下，HPR 有效地取代RBP-視黃醇全蛋白中的視黃醇，參見附圖9b。 HPR與 RBP的竟爭型結(jié)合是劑量依賴性的和可飽和的。在對照分析中，視 黃醇熒光的降低與蛋白質(zhì)熒光的并發(fā)性升高有關(guān)，參見附圖9a。確 定該作用是由于溫度效應，因為在37。C下RBP-視黃醇解離常數(shù)隨著 時間的增加而提高(降低親和力)?？傊@些數(shù)據(jù)提示，相對于 RBP全蛋白質(zhì)(例如1.0 (iMHPR、 0.5pMRBP)，超過等摩爾當量的 HP R的增加將導致產(chǎn)生體內(nèi)取代RB P的顯著份數(shù)的視黃醇。實施例15: abca4無效突變小鼠中芬維A胺對于脂褐素(和/或 A2E)蓄積的效力II相-abca4無效突變小鼠的長期治療我們開始一個月的研究來評價HPR對abca4無效突變小鼠中 A2E和A2E前體降低的作用。每日給abca4無效突變小鼠(BL6/129， 2月大)施用在DMSO中的HPR (20 mg/kg, ip),共28天。對照的年 齡/品系相配的小鼠僅接受DMSO載體。在0、 14和28天采集小鼠 的樣品(n-3/組)，摘除眼睛，提取氯仿可溶的組分(脂類、類視黃 醇和脂類-類視黃醇共輒物)。通過頸脫位法處死小鼠，摘除眼睛，分別在冰凍管中冰凍折斷。然后通過具有在線熒光檢測的HPLC分 析樣品提取物。該研究的結(jié)果表明，A2E前體、A2PE-H2值得注意 地在早期降低，參見附圖10a,并且隨后A2E降低，參見附圖10b。 定量分析表明在HPR治療28天后，A2PE-H2降低了 70%, A2E降 低了 55%?？梢赃M行類似的研究以確定HPR治療對于視網(wǎng)膜電描記 法和形態(tài)學表型的作用。實施例16: MPR與視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)結(jié)合的熒光猝滅研
在室溫下在PBS中分別用0、 0.25、 0.5、 1和2^M的MPR培 養(yǎng)0.5 pM的Apo-RBP 1小時。作為對照，用1 jiM的HPR或1 pM 的atROL培養(yǎng)相同濃度的Apo-RBP 。所有混合物包含0.2%乙醇 (v/v)。用280 nm激發(fā)波長和3 nm帶通在290 nm到550 nm測定發(fā)射光譜。如附圖ll所示，MPR表現(xiàn)出對RBP熒光的濃度依賴性猝滅。 在1 的MPR下，0.5 的RBP猝滅飽和。由于所觀察到的熒 光猝滅可能是由于蛋白質(zhì)芳香殘基和所連接的MPR分子之間的熒光 共振能轉(zhuǎn)移產(chǎn)生的，計劃將MPR與RBP結(jié)合。通過MPR猝滅的程 度小于atROL和HPR，后兩者是與RBP結(jié)合的另外兩種配體。實施例17:運曱狀腺素蛋白(TTR)與RBP結(jié)合的大小排除研咒在室溫下在PBS中用50 |iM的MPR培養(yǎng)10 的Apo-RBP 1 小時。然后向該溶液中加入IOiiM的TTR,并將混合物在室溫下再 培養(yǎng)1小時。通過BioRad Bio-Sil SEC125凝膠過濾柱(300x7.8 mm) 分析包含或不包含TTR的50^1樣品。在對照實^r中，以相同方式 分析atROL-RBP和atROL- RBP-TTR的混合物。如附圖12a所示，MPR-RBP樣品顯示了在360 nm處具有強吸 收的RBP洗脫峰(在11 ml),表明RBP與MPR結(jié)合；在用TTR培 養(yǎng)后，該360 nm處的吸收保留在了 RBP洗脫峰中，而TTR洗脫峰(在 8.6 ml)沒有包含明顯的360 nm處的吸收(參見附圖12b)，表明 MPR-RBP沒有與TTR結(jié)合。在atROL-RBP對照實驗中，RBP洗脫 峰顯示了強烈的330 nm處的吸收(參見附圖12c);在與TTR培養(yǎng)后， 超過一半的330 nm吸收移動到TTR洗脫峰上(參見附圖12d)，表明 atROL-RBP與TTR結(jié)合。因此，MPR抑制了 TTR與RBP的結(jié)合。實施例18:作為HPR濃度函數(shù)的血清視黃醇的分析 每日給予ABCA4無效突變小鼠指定劑量的在DMSO中的
HPR(i.p.),共28天(n = 4只小鼠/劑量組)。在研究期結(jié)束時，采 集血樣并制備血清。在用乙腈沉淀血清蛋白后，通過LC/MS從可溶 相確定視黃醇和HPR的濃度(參見附圖8)。通過UV-vis吸收光譜和 用可信標準的樣品共洗脫證實對所洗脫化合物的鑒定。實施例19:在ABCA4無效突變小鼠中HPR濃度與視黃醇、 A2PE-H2和A2E降低的關(guān)系標繪在實施例25 ( 28天的時間點)的附圖13的圖A-G中所示 的數(shù)據(jù)的組平均數(shù)，表明了血清HPR升高和血清視黃醇降低之間的 密切關(guān)系(參見附圖14)。血清視黃醇降低與A2E和前體化合物 (A2PE-H2)降低之間高度相關(guān)。當血清視黃醇僅降低20%時，觀測到 在2.5 mg/kg劑量組中A2PE-H2顯著降低( 47%)。該不成比例的降 低的原因在于與其它組相比，該組中2個月大的動物內(nèi)在的眼部 類視黃醇含量較低。如果這些動物在2.5mg/kg劑量維持較長時間， 可能將會實現(xiàn)A2E更大的降低。實施例20: HPR對類視黃醇、A2E熒光團和視網(wǎng)膜生理穩(wěn)態(tài) 濃度的作用作為HPR-(每日10 mg/kg, 28天)處理的結(jié)果，在光適應的 DMSO-和HPR-治療的小鼠中對類視黃醇組合物的分析(附圖15 , 圖A)表明視循環(huán)類視黃醇降低了約50%。附圖15的圖B和C顯 示了在這些小鼠中HPR不影響視覺生色團的再生(圖B是視覺生色 團的生物合成，圖C是漂白的生色團再循環(huán))。附圖15的圖D-F 是桿狀功能(圖D)、桿和錐體功能(圖E)和從光漂白中恢復(圖F) 的電生理測定。在HPR-治療的小鼠中僅有的值得注意的差別是延遲 了暗適應。每日給予ABCA4無效突變小鼠指定劑量的在DMSO中的HPR 或僅給予DMSO ,共28天(n^16小鼠/治療組)。在研究開始時， 2.5 mg/kg組的小鼠是2個月大，在其它組的小鼠是3個月大。在指 定時間，從每組取代表性的小鼠(11 = 4)以分析A2E前體化合物(參
見附圖13， A2PE-H2，圖A、 C和E)和A2E(參見附圖13,圖B、 D 和F)。摘除眼睛，對半切開，通過氯仿/甲醇-水相分配法從后極中提 取脂溶性組分。通過LC分析樣品提取物。通過UV-vis吸收光鐠和 用可信標準的樣品共洗脫證實對所洗脫化合物的鑒定。注意在10 mg/kg組中適當?shù)哪挲g和品系-相配的小鼠的局限性導致難以在14-天間隔中分析。該數(shù)據(jù)表明在研究期間A2PE-H2和A2E的劑量-依賴 性降低。
在附圖13中圖G-1顯示的形態(tài)學/組織學證據(jù)表明在abcr無 效突變小鼠的RPE中脂褐素自發(fā)熒光顯著降低(Stargardt's動物模 型)。治療情況如上所述。在HPR治療的動物中自發(fā)熒光的水平與年 齡相配的野生型動物相當。附圖16顯示的是DMSO-和HPR-治療的 動物視網(wǎng)膜的光學顯微鏡檢查。在視網(wǎng)膜細胞結(jié)構(gòu)中沒有觀測至'J畸 形的形態(tài)或?qū)ν暾缘膿p害。
脂褐素在視網(wǎng)膜色素上皮細胞中的蓄積是在視網(wǎng)膜的各種變性 疾病中觀測到的共同的病理學特征。存在于脂褐素顆粒中的毒性的 基于維生素A的熒光團(A2E)與RPE和光感受器細胞的死亡有關(guān)。 在這些實驗中，我們使用了動物模型，其通過證明脂褐素蓄積加速 來評價根據(jù)血清維生素A(視黃醇)的降低的治療途徑的效力。芬維A 胺有效地和可逆地降低了血清視黃醇。給Stargardt's病基因(ABCA4) 具有無效突變的小鼠施用HPR導致血清視黃醇/視黃醇結(jié)合蛋白大 幅降低，阻止了 RPE中A2E和脂褐素自發(fā)熒光的蓄積。從生理學上 講，由于適當?shù)匮舆t了暗適應，因此HPR-誘導的視覺生色團的降低 是明顯的；生色團再生的動力學是正常的。重要地，也鑒定了 HPR 對維生素A酯化作用和生色團動員的特異性細胞內(nèi)作用。這些發(fā)現(xiàn) 表明A2E生物合成對維生素A-的依賴性并證實了容易地可轉(zhuǎn)移到患 基于脂褐素的視網(wǎng)膜疾病的人類患者的治療途徑。
實施例21 :在休藥期堅持HPR療法的益處
每日給ABCA4-/-小鼠施用HPR (10 mg/kg在DMSO中)，共
28天。對照ABCA4-A小鼠僅在相同時期接受DMSO。 28天治療后 的A2E前體(A2PE-H。和A2E的生化(HPLC)分析表明在HPR治 療的小鼠眼中這些熒光團減少(附圖13)。通過熒光顯微術(shù)進一步分 析確認生化數(shù)據(jù)，并顯示在HPR治療的ABCA4-/-小鼠中脂褐素自 發(fā)熒光水平與未治療的野生型小鼠中觀測到的相當(附圖13)。通過 光學顯微鏡進行的組織學檢查表明視網(wǎng)膜細胞結(jié)構(gòu)或形態(tài)沒有改變 (附圖16)。重要的是，在停止HPR治療后，所觀測到的脂褐素自發(fā) 焚光的降低持續(xù)了較長的時間。在28天治療后停止施用HPR (10 mg/kg)或DMSO，在2周和4周后再評價。我們通過HPLC檢查了洗眼杯提取物，通過吸收和熒光測定進 行了檢測。通過在線光譜分析和用可信標準的共洗脫證實了對指定 峰的鑒定。數(shù)據(jù)表明，在不接受HPR劑量12天后(即，12天的休 藥期)在先前維持HPR治療(附圖17,圖A)動物中，A2E和前體 (A2PE-H2和A2PE)水平相對于對照小鼠(附圖17,圖B)顯著地降 低。在28天休藥期后的小鼠中觀測到了類似的結(jié)果A2E和前體 (A2PE-H2和A2PE)水平相對于對照小鼠顯著地降低(比較附圖17圖 C治療的小鼠，和附圖17圖D對照小鼠)。進一步地，在12或28 天休藥期后A2E和前體(A2PE-H2和A2PE)水平保持在28天治療后 立即測定的水平上或與之接近(即，相對于對照組降低了約50%)， 盡管在28天休藥期后A2E和前體(A2PE-Eb和A2PE)的量相對于l2 天休藥期的水平提高了幾個百分點。盡管在HPR休藥期動物眼中 A2E和前體(A2PE-H2和A2PE)的水平持續(xù)降低，但我們在28天休 藥期未能檢測到HPR或HPR代謝產(chǎn)物(例如，MPR)。附圖17的圖 C和D中的跡線表明自發(fā)熒光的強度與所指定的峰有關(guān)。清楚地， 峰的熒光反映的是A2E 、 A2PE和A2PE-H2的豐富程度。在臨床試驗期間，通過將患者保持在較低劑量的HPR中，然后 在較高劑量下證實臨床效力，這些數(shù)據(jù)與毒性有關(guān)。該分析可以避 免通過顯微鏡再證實的需要。根據(jù)我們的知識，該作用在其它治療 選自Stargardt病、干性與年齡相關(guān)的黃斑變性、基于脂褐素的視網(wǎng)
膜變性、光感受器變性和地圖狀萎縮的眼部病癥或特征的方法中沒 有觀測到。而且在降低哺乳動物眼中N-視黃亞基-N-視黃基乙醇胺的 產(chǎn)生的方法，或降低哺乳動物眼中脂褐素產(chǎn)生的方法中也沒有觀測到。HPR降低了血清視黃醇水平，導致所治療動物的眼中一見黃醇水 平的降低。 一旦眼中的視黃醇水平降低，在隨后的眼中視黃醇水平 升高之間有一個時間延遲。單獨或聯(lián)合地，盡管在血清或眼中不存 在HPR，但眼中的A2E、 A2PE和A2PE-H2產(chǎn)生保持低水平。實施例22:確i^RBP對于A2E值得注意的蓄積的治療靶 我們已經(jīng)探求了降低脂褐素熒光團的非藥理學方法以證實我們 在患者中基于降低RBP水平的治療途徑，在該研究中，通過基因操 作降低了 RBP蛋白質(zhì)水平。已經(jīng)產(chǎn)生了兩種新品系的表達視黃醇結(jié) 合蛋白(RBP4)雜交突變的小鼠。第一品系攜帶僅位于RBP部位的 雜交突變(RBP+/-);第二品系攜帶在AB CA4和RBP部位的基因突變 (ABCA4+/-/RBP4+/-)。因此，兩個品系都實現(xiàn)了 RBP表達和血清視 黃醇降低 50%。 RBP+/-小鼠在ABCA4部位是野生型的，因此， 不會蓄積過量的A2E熒光團。但是，ABCA4+/-小鼠將會蓄積A2E 熒光團，其水平是在ABCA4-/-(無效純合)小鼠中所觀測到的約 50%。有爭論的是在ABCA4+/-/RBP+/-小鼠中RBP的表達降低是否 對A2E熒光團的蓄積有作用。已經(jīng)在三個月的時間里每月檢測這些小鼠中A2E和前體熒光團 (A2PE和A2PE-H2)的水平，并與ABCA4+/-小鼠的熒光團水平比較。 該數(shù)據(jù)提供了在三個月大的三個品系的小鼠中的熒光團水平(附圖 18)?？偟膩碚f，ABCA4+/-/RBP+/-小鼠總熒光團水平相對于 ABCA4+/-小鼠先前的水平降低了 70% 。事實上，在 ABCA4+/-/RBP+/-小鼠中測定的熒光團水平與RBP+/-小鼠中觀測 到的水平接近。這些數(shù)據(jù)證明了 RBP可以作為治療靶降低眼中的熒 光團水平。進一步地，這些數(shù)據(jù)表明在患者中抑制RBP轉(zhuǎn)錄或翻譯 的試劑或方法也會(a)降低患者的血清視黃醇水平，和(b)為本文所述的與視黃醇有關(guān)的疾病提供治療益處。進一步地，增強患者RBP 清除的試劑或方法也會產(chǎn)生這樣的作用和益處。根據(jù)本文公開，不需要過多的試驗即可實施并完成本文公開或 要求保護的所有方法。對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見地，可以使用各 種變化而不脫離本發(fā)明的概念、精神和范圍。尤其顯而易見地，某 些涉及化學和生物學的試劑可以耳又代本文所述的試劑，同時還達到 了相同或相似的結(jié)果。所有這些對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的類似 的替代方式和變更都在附屬的權(quán)利要求定義的本發(fā)明的精神、范圍 和概念內(nèi)。
權(quán)利要求
1.有效量的第一化合物在制備治療哺乳動物中I型或II型糖尿病的系統(tǒng)配制藥物中的用途，其中所述第一化合物能在哺乳動物中調(diào)節(jié)RBP或TTR水平或活性，其中所述第一化合物具有通式(II)的結(jié)構(gòu)其中X1選自NR2、O、S、CHR2；R1是(CHR2)x-L1-R3，其中x是0、1、2，或3；L1是單鍵或-C(O)-；R2是選自H、(C1-C4)烷基、F、(C1-C4)氟代烷基、(C1-C4)烷氧基、-C(O)OH、-C(O)-NH2、-(C1-C4)烷基胺、-C(O)-(C1-C4)烷基、-C(O)-(C1-C4)氟代烷基、-C(O)-(C1-C4)烷基胺和-C(O)-(C1-C4)烷氧基的部分；和R3是H或是任選被1-3個獨立選擇的取代基取代的部分，所述取代基選自(C2-C7)烯基、(C2-C7)炔基、芳基、(C3-C7)環(huán)烷基、(C5-C7)環(huán)烯基和雜環(huán)；或其活性代謝物、或藥學可接受的前藥或溶劑化物。
2. 權(quán)利要求1所述的用途，其中所述第一化合物抑制視黃醇與 RBP結(jié)合。
3. 權(quán)利要求l所述的用途，其中所述第一化合物能抑制哺乳動 物中RBP或TTR的轉(zhuǎn)錄。
4. 權(quán)利要求1所述的用途，其中所述第一化合物能抑制哺乳動 物中RBP或TTR的翻譯。
5. 權(quán)利要求1所述的用途，其中所述第一化合物能增加哺乳動 物中RBP或TTR的清除。
6. 權(quán)利要求1所述的用途，其中第一化合物抑制RBP與TTR 結(jié)合。
7. 權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物進一步包括選自下列 的第二化合物(a)降低葡萄糖的激素或擬激素，(b)降低葡萄糖的磺酰脲，(C)降低葡萄糖的雙胍，(d)降低葡萄糖的氯茴苯酸，(e)降低葡 萄糖的噻唑烷二酮或其他的PPAR- Y激動劑，(f)降低葡萄糖的對 PPAR-y和PPAR-a都具有親和力的雙作用PPAR激動劑，(g)降低葡 萄糖的a-葡糖苷酶抑制劑，(h)不靶向于葡萄糖-6-磷酸酶轉(zhuǎn)位酶的降 低葡萄糖的反義化合物，(i)抗肥胖的食欲抑制劑，(j)抗肥胖的脂肪 吸收抑制劑例，(k)睫狀節(jié)神經(jīng)細胞營養(yǎng)因子的抗肥胖修飾形式，其 抑制刺激食欲的饑餓信號，(l)降脂的膽酸鹽螯合樹脂，(m)降脂的 HMG CoA-還原酶抑制劑，(n)煙酸，(o)降脂的纖維酸纟汙生物，(p)選 自普羅布考、新霉素、右旋甲狀腺素的試劑，(q)植物-睪醇酯，(r) 膽固醇吸收抑制劑，(s)CETP抑制劑，(t)MTP抑制劑，(u)膽酸轉(zhuǎn)運 體的抑制劑，(v)肝CYP7a的調(diào)節(jié)劑,(w)ACAT抑制劑，(x)降脂的 雌激素替代治療劑，(y)合成的HDL，或(z)降脂的抗炎劑，其中所述 第二化合物適合與權(quán)利要求1所述的第一化合物同時、分別或相繼 施用。
8. 權(quán)利要求l所述的用途，其中所述藥物是為口腔、靜脈、離 子電滲施用或注射施用而系統(tǒng)配制的。
9. 權(quán)利要求l所述的用途，其中該哺乳動物是人。
10. 權(quán)利要求1所述的用途，其中所述第一化合物具有通式(n)的結(jié)構(gòu)，且X1是NR2, R"是H或(d-C4)烷基。
11. 權(quán)利要求1所述的用途，其中所述第一化合物具有通式(II) 的結(jié)構(gòu)，且x是0。
12. 權(quán)利要求1所述的用途，其中所述第一化合物具有通式(n)的結(jié)構(gòu)，且R 是任選取代的芳基。
13. 權(quán)利要求1所述的用途，其中所述第一化合物具有通式(II) 的結(jié)構(gòu)，且乂1是1^仏R 是任選取代的芳基。
14. 權(quán)利要求13所述的用途，其中所述芳基具有選自鹵素、OH、 O(C廣Q)烷基、NH(C廣Q)烷基、O(d- d)氟代烷基和N[(C廣d)烷 基]2的一個取代基。
15. 權(quán)利要求l所述的用途，其中所述第一化合物是N-(4-羥基 苯基)視黃酰胺或N-(4-甲氧基苯基)視黃酰胺。
16. —種系統(tǒng)配制的藥物，其包含權(quán)利要求l - 15任一項中所述的化合物。
全文摘要
本文描述了通過調(diào)節(jié)運甲狀腺素蛋白(TTR)和視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)在患者中的利用率來治療某些與視黃醇有關(guān)的疾病和病癥的方法和組合物。例如，該方法和組合物提供作治療劑來治療和/或預防與年齡相關(guān)的黃斑變性和/或營養(yǎng)不良、代謝性疾病、自發(fā)性顱內(nèi)高壓、骨肥厚和蛋白質(zhì)錯折疊和聚集疾病。所述的組合物可以用作單試劑治療或與其他試劑或療法聯(lián)合使用。此外，本文描述了選擇適當?shù)目梢哉{(diào)節(jié)TTR和RBP在患者中的利用率的試劑的方法和分析法。
文檔編號A61K45/06GK101129344SQ200710147758
公開日2008年2月27日 申請日期2005年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月8日
發(fā)明者J·利希特, K·威德 申請人:西來昂診療公司