專利名稱：：具有防輻射、抗氧化以及保護(hù)dna作用的組合物及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種具有防輻射、抗氧化以及保護(hù)DNA作用的組合物及用途，具體來說是靈芝多糖和從海洋魚類中提取的海洋蛋白肽配伍劑及在制備防輻射藥物、防輻射保健食品或防輻射食品中的應(yīng)用。屬醫(yī)藥和食品保健領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：-近年來，由于科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，核原子能、"Coy、X射線、放射性同位素等的應(yīng)用；通訊設(shè)備、電器、電磁場(chǎng)、微波等新技術(shù)、新產(chǎn)品的開發(fā)；輻射在礦產(chǎn)等資源探測(cè)中的不斷使用；以及放射療法在腫瘤治療中的廣泛應(yīng)用等，導(dǎo)致世界范圍內(nèi)的放射性污染程度在不斷擴(kuò)大，給生物界帶來了潛在的、慢性的副作用和急性傷害。急性大劑量輻射損傷可引起嚴(yán)重的急性放射病或綜合癥(acuteradiationsyndrome,ARS)，急性全身照射在劑量低于1Gy時(shí)，少數(shù)人可出現(xiàn)頭暈、乏力、食欲下降等輕微癥狀，血象暫時(shí)性改變等。慢性放射損傷是指在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)分散接受一定劑量的照射。慢性放射有五大危害一是使紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板和血紅蛋白減少，造血細(xì)胞受損而導(dǎo)致造血障礙；二是引起眼睛白內(nèi)障，是最早發(fā)生和最常見病癥；三是遠(yuǎn)期預(yù)后可能導(dǎo)致脫發(fā)、早衰、誘發(fā)細(xì)胞遺傳學(xué)改變，白血病及其它惡性腫瘤；四是使生育能力下降，甚至導(dǎo)致精子和卵子中染色體畸變和基因突變，引起不育或后代畸形；五是可能導(dǎo)致生長(zhǎng)發(fā)育障礙，嚴(yán)重時(shí)引起壽命縮短。輻射對(duì)人體的損害，主要有兩條作用途徑一是，可以直接作用于細(xì)胞的大分子上，引起電離激發(fā)化學(xué)鍵斷裂，使分子變性和細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，如作用于胞核或胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)DNA、RNA等，或細(xì)胞膜脂質(zhì)、酶系等，使其直接受到損傷；二是，可以作用于機(jī)體內(nèi)水分子，使其發(fā)生電離和激發(fā)，產(chǎn)生大量的具有強(qiáng)氧化性能的自由基和活化分子，H+、*0H、H202、H20、等。這些自由基及活化分子化學(xué)性質(zhì)活躍，很容易與細(xì)胞、組織中大分子受體作用，使生物大分子受到間接損傷。生物分子損傷，可導(dǎo)致細(xì)胞代謝失常，功能和結(jié)構(gòu)破壞甚至死亡。細(xì)胞的損傷和死亡可引起組織和器官原發(fā)損傷，或通過神經(jīng)和體液的作用引起機(jī)體的繼發(fā)損傷，一些大分子細(xì)胞和器官有時(shí)具有一定修復(fù)、再生和代償能力，有些細(xì)胞因此可能改變結(jié)構(gòu)，如基因突變，染色體畸變等，遠(yuǎn)期效應(yīng)還可誘發(fā)癌癥。眾所周知，癌癥是當(dāng)今危害人類生命健康最嚴(yán)重的疾病之一。在癌癥綜合治療中，70%80%的患者需要放射治療和化學(xué)治療，而放療中會(huì)產(chǎn)生大量的a、e和Y射線電離輻射，在殺死癌細(xì)胞的同時(shí)，也大量損傷人體的正常細(xì)胞和組織，使患者免疫功能下降，白細(xì)胞大量減少，胃腸功能紊亂及產(chǎn)生活性氧類(ROS)和自由基等副作用，致使患者不能繼續(xù)進(jìn)行有效治療并影響患者治療后的康復(fù)。此外，隨著科技和生產(chǎn)的發(fā)展，各種產(chǎn)生放射性物質(zhì)的儀器、裝置、電腦和電視大量涌現(xiàn)，亦會(huì)給直接長(zhǎng)期接觸或使用上述產(chǎn)品的人們身體造成損傷。由此可見，輻射損傷已經(jīng)嚴(yán)重危害到人類的健康，對(duì)其防護(hù)的研究具有深遠(yuǎn)以及現(xiàn)實(shí)的意義。輻射的防護(hù)除了應(yīng)加強(qiáng)嚴(yán)格的管理措施外，另一個(gè)重要的方面是開發(fā)防輻射的藥物及功能食品，通過對(duì)新功能食品的經(jīng)常服用，達(dá)到減少輻射損傷或?qū)椛鋼p傷進(jìn)行有效的修復(fù)。目前，輻射防護(hù)劑多為巰基類化合物，在有效劑量時(shí)普遍毒性較大。生物活性肽是指具有特殊生理功能的肽類物質(zhì)。肽與蛋白質(zhì)都是氨基酸以酰胺鍵互相連接在一起形成的化合物，不同的是肽的氨基酸聚合度小，蛋白質(zhì)的聚合度大。在結(jié)構(gòu)上，肽處于氨基酸和蛋白質(zhì)的中間位置，但它具有氨基酸與蛋白質(zhì)所不能替代的功能。長(zhǎng)期以來，人們僅僅把食物蛋白質(zhì)當(dāng)作一種營養(yǎng)豐富的成分，認(rèn)為蛋白質(zhì)只有水解成游離氨基酸后才能被吸收。但是近年來的研究發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)經(jīng)消化道酶促水解后，主要以10個(gè)或10個(gè)以下氨基酸組成的寡肽形式被吸收。寡肽比單個(gè)氨基酸的吸收更有效，并能直接參與蛋白質(zhì)的合成，因此提高了機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的利用率。自然界中存在著大量的生物活性肽，它們?cè)谏锘顒?dòng)中起著非常重要的作用，分別具有改善和提高礦物質(zhì)吸收、抗氧化、抗菌、抗腫瘤、保護(hù)心血管、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老等作用。應(yīng)用這些活性肽可以作為藥物、疫苗以及保健品等。大量研究證明，當(dāng)人體內(nèi)缺乏一些調(diào)節(jié)生理功能的肽時(shí)，會(huì)導(dǎo)致人體機(jī)能的改變。因此從營養(yǎng)學(xué)的角度出發(fā)，在食物結(jié)構(gòu)調(diào)整以滿足人體必需氨基酸需要的同時(shí)，適當(dāng)補(bǔ)充某些生物活性肽對(duì)增強(qiáng)防病、抗病能力以及延緩衰老都具有深遠(yuǎn)意義。目前，開發(fā)和研究生物活性肽類食品在國際保健品行業(yè)中已成為一個(gè)焦點(diǎn)。許多天然的生物活性肽具有改善和提高礦物質(zhì)吸收的特性，它們有特異、安全和較高的活性，這類生物制劑具有重要的應(yīng)用價(jià)值。海洋是地球上資源最豐富的領(lǐng)域，由于海洋生物物種的生態(tài)環(huán)境比陸生生物復(fù)雜得多，其賦予海洋生物的某些特異的化學(xué)結(jié)構(gòu)是陸地生物體內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)的，這使得海洋成為創(chuàng)新藥物與功能性保健食品的資源寶庫。自20世紀(jì)70年代以來，人們已經(jīng)從海洋生物中分離出數(shù)十萬種化學(xué)結(jié)構(gòu)新穎及特異的高活性、高藥效的生物活性物質(zhì)，包括肽類、蛋白質(zhì)類、多糖類、生物堿類、萜類、大環(huán)聚酯類等。海洋生物活性物質(zhì)中肽類是數(shù)量最龐大的一類化合物，達(dá)數(shù)萬種之多，浙江海氏生物科技有限公司生產(chǎn)的海洋蛋白肽(企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為Q/HSBS3-2006,浙江舟山市技術(shù)監(jiān)督局備案號(hào)為Q330900.X20.1123—2006，衛(wèi)生許可證是浙衛(wèi)食證字2006第33090310003號(hào))就是其中之一。海洋蛋白肽是以來源廣泛的海洋魚類(三文魚、大馬哈魚、羅非魚等)的魚肉為原料，通過水解制造出分子量在1002000的寡肽混合物，具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點(diǎn)，目前只作為補(bǔ)充蛋白質(zhì)的食品營養(yǎng)添加劑。迄今為止，還沒有關(guān)于海洋蛋白肽，尤其是海洋蛋白肽與靈芝多糖配伍制劑在抗輻射藥品、防輻射保健食品以及抗輻射食品中應(yīng)用的任何報(bào)導(dǎo)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的輻射防護(hù)劑毒性較大的技術(shù)問題，提供一種容易吸收、吸收快、低粘度及水溶性好的具有抗輻射、抗氧化以及保護(hù)DNA作用的組合物及用途。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種具有防輻射、抗氧化以及保護(hù)DNA作用的組合物，其特征在于由海洋蛋白肽和靈芝多糖按重量比為18:1的比例配制而成。所述的靈芝多糖是取靈芝孢子粉置于低溫條件下，按常規(guī)物理抗氧化破壁法提取精華，純度達(dá)80%以上。一種具有防輻射、抗氧化以及保護(hù)DNA作用的組合物作為制備防輻射藥物、或防輻射食品的用途。所述防輻射藥物、防輻射保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑或口服液。所述防輻射食品為淀粉制品、乳及乳制品、豆制品或烘焙制品。本發(fā)明是以現(xiàn)有的海洋蛋白肽為原料，并以靈芝孢子粉為原料在低溫條件下，按常規(guī)物理抗氧化破壁法提取精華，制造出純度達(dá)80%以上的靈芝多糖，將海洋蛋白肽與靈芝多糖按重量比為18:1進(jìn)行配伍，所得制劑具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點(diǎn)。本發(fā)明制劑對(duì)輻照小鼠30d存活率和平均存活時(shí)間、外周血白細(xì)胞數(shù)、骨髓細(xì)胞DNA含量、血清中超氧化物歧化酶(SOD)以及半數(shù)溶血值(HC5Q)均有所提高，具有防輻射的功效，且其防輻射效果優(yōu)于單獨(dú)給予靈芝多糖。將其應(yīng)用于制備防輻射藥物、防輻射保健食品或防輻射食品，可解決現(xiàn)有巰基類化合物所普遍存在的毒性較大的問題，為通過飲食減少輻射損傷或?qū)椛鋼p傷進(jìn)行有效修復(fù)提供一種新途徑。該產(chǎn)品適合電腦前工作者、手機(jī)人群、放射工作室醫(yī)務(wù)人員及暴露在射線、電磁輻射下的廣大人群以及放療患者等。具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例以浙江海氏生物科技有限公司生產(chǎn)的海洋蛋白肽(企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為Q/HSBS3-2006，浙江舟山市技術(shù)監(jiān)督局備案號(hào)為Q330900.X20.1123—2006)為原料，取靈芝孢子粉置于低溫條件下，按常規(guī)物理抗氧化破壁法提取精華，制成純度達(dá)80%以上的靈芝多糖。將海洋蛋白肽和靈芝多糖按重量比為18:1的比例配制而成，所生產(chǎn)的配伍制劑可在制備防輻射藥物、防輻射保健食品或防輻射食品中的應(yīng)用，與其他藥用或食用輔料制成的防輻射藥物和防輻射保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑、口服液等；防輻射食品是將海洋蛋白肽與靈芝多糖添加到淀粉制品、乳及乳制品、豆制品、烘焙制品中等。本發(fā)明制劑防輻射的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。1.實(shí)驗(yàn)方法清潔級(jí)ICR健康雌性小鼠，體重1822g，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)后，按體重隨機(jī)分6組空白對(duì)照組、輻射對(duì)照組、4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，即靈芝多糖組(GLP)、海洋蛋白肽(MPP)和靈芝多糖配伍(MPP+GLP)高、中和低劑量組，劑量分別為0.025g/kgBW、0.475g/kgBW、0.2375g/kgBW和0.12375g/kgBW，海洋蛋白肽(MPP)和靈芝多糖配伍(MPP+GLP)高、中和低劑量組的劑量分別相當(dāng)于人每天用量的30、10和5倍。受試物按不同比例摻于飼料中，空白對(duì)照組和輻射對(duì)照組給予正常飼料。每周稱鼻體重以及進(jìn)食量，實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水。2.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容2.1小鼠30天存活實(shí)驗(yàn)除空白對(duì)照組外，其余5組于喂養(yǎng)不同飼料第14天，用^CoY射線對(duì)動(dòng)物進(jìn)行一次性全身照射(吸收的總劑量為8Gy)，輻射后，繼續(xù)給予飼料，記錄小鼠30d存活數(shù)量和死亡小鼠平均活存時(shí)間。2.2外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)除空白對(duì)照組外，其余5組于喂養(yǎng)不同伺料第14天，一次性全身照射(吸收的總劑量為4.5Gy)后的第3天和第14天，測(cè)定外周血白細(xì)胞數(shù)。2.3骨髓細(xì)胞DNA含量測(cè)定除空白對(duì)照組外，其余5組于喂養(yǎng)不同飼料第14天，一次性全身照射(吸收的總劑量為4.5Gy)后的第3天，測(cè)定骨髓細(xì)胞DNA含量。2.4血中超氧化物歧化酶(SOD)活性實(shí)驗(yàn)除空白對(duì)照組外，其余5組于喂養(yǎng)不同飼料第14天，一次性全身照射(吸收的總劑量為4.5Gy)后，繼續(xù)喂養(yǎng)14天后，測(cè)定血清超氧化物歧化酶(SOD)水平。2.5血清溶血素實(shí)驗(yàn)除空白對(duì)照組外，其余5組于喂養(yǎng)不同飼料第30滅，一次性全身照射(吸收的總劑量為6Gy)24h后，測(cè)定血清半數(shù)溶血值(HC50)。3.結(jié)果3.1本發(fā)明制劑對(duì)輻照小鼠30d存活率和平均存活時(shí)間的影響由表1可見，全身一次性照射^CoY射線(8Gy)后，與輻射對(duì)照組比較，MPP+GLP高劑量組的30d存活率顯著提高，MPP+GLP高和中劑量組的平均存活時(shí)間與輻射對(duì)照組比較顯著延長(zhǎng)(P<0.01)，且MPP+GLP高劑量組的效果優(yōu)于GLP組。表1本發(fā)明制劑對(duì)輻照小鼠30d存活率和平均存活時(shí)間的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>GLP組10466025.5士6.31bMPP+GLP高10388027.5士5.52bMPP+GLP中10466024.3土7.65bMPP+GLP{氐10644019.3士9.53aa:與空白對(duì)照組比較，PO.01;b:與輻射對(duì)照組比較，P<0.013.2本發(fā)明制劑對(duì)輻射小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)的影響由表2可見，全身一次性照射^CoY射線(4.5Gy)后3天，各輻照組白細(xì)胞數(shù)均顯著低于空白對(duì)照組(PO.Ol)，表明輻射損傷模型成立。GLP、MPP+GLP高劑量組與輻射對(duì)照組比較，升高白細(xì)胞作用有顯著性(P<0.05)，且MPP+GLP高劑量組的效果優(yōu)于GLP組。照射后14天，GLP、MPP+GLP高、中和低劑量組與輻射對(duì)照組比較，升高白細(xì)胞作用均有顯著性(P<0.05)，且MPP+GLP高和低劑量組的效果優(yōu)于GLP組。表2海洋蛋白肽對(duì)輻射小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)的影響S~~照射前白細(xì)胞照射后3天白細(xì)胞照射后14天白細(xì)數(shù)數(shù)(X109/L)數(shù)(X1。9/L)胞數(shù)(X1()9/L)空白對(duì)照組108.40土0.967.68±1.71b4.05±1.25b輻射對(duì)照組108.50±0.710.77±0.13a0.83±0.16aGLP組107.58±0.921.66士0.31ab1.94±0.68abMPP+GLP高108.41±0.741.81±0.28ab2.15±1.16abMPP+GLP中108.07±1.571.15±0.18aL74士0.54abMPP+GLP低107.80±1.06U7土0.15a1.99±0.70aba:與空白對(duì)照組比較，PO.01;b:與輻射對(duì)照組比較，PO.053.3本發(fā)明制劑對(duì)對(duì)輻射小鼠骨髓細(xì)胞DNA含量的影響由表3可見，全身一次性照射^CoY射線(4.5Gy)后3天，各輻射組骨髓細(xì)胞DNA含量均顯著低于空白對(duì)照組(P<0.01)。與輻射對(duì)照組比較，GLP、MPP+GLP高劑量組的骨髓細(xì)胞DNA含量有顯著提高(P<0.05)，且MPP+GLP高劑量組的效果優(yōu)于GLP組。表3本發(fā)明制劑對(duì)輻射小鼠骨髓細(xì)胞DNA含量的影響組別只數(shù)骨髓細(xì)胞DNA含量(OD260nm)空白對(duì)照組101.16±0.228b輻射對(duì)照組100.31±0.098aGLP組100.40±0.068abMPP+GLP高劑it組100.42±0.094abMPP+GLP中劑lt組100.37±0.062aMPP+GLP《氐齊lji!組100.35±0.071aa:與空白對(duì)照組比較，P<0.01;b:與輻射對(duì)照組比較，P<0.053.4本發(fā)明制劑對(duì)輻射小鼠血超氧化物歧化酶(SOD)活力的影響由表4可見，全身一次性照射^CoY射線(4.5Gy)后14天，與輻射對(duì)照組比較，GLP、MPP+GLP高、中劑量組小鼠血清中超氧化物歧化酶SOD含量有顯著提高(P<0.05)，且MPP+GLP高劑量組的效果優(yōu)于GLP組。表4本發(fā)明制劑對(duì)輻射小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力的影響組別只數(shù)照射后14天血清SOD含量(U/ml)空白對(duì)照組10446.48±22.13b輻射對(duì)照組10398.45±20.98aGLP組10425.21±16,03abMPP+GLP高齊Uit組10434.30士12.29bMPP+GLP中劑i!組10419.23±19.65abMPP+GLP低劑it組10413.59±20.77aa:與空白對(duì)照組比較，P<0.05;b:與輻射對(duì)照組比較，PO.053.5本發(fā)明制劑對(duì)輻射小鼠血清溶血素的影響由表5可見，全身一次性照射^CoY射線(6Gy)24h后，與輻射對(duì)照組比較，GLP、MPP+GLP高和中劑量組對(duì)小鼠血清中半數(shù)溶血值有顯著提高作用(PO.Ol)，且MPP+GLP高劑量組的效果優(yōu)于GLP組。表5本發(fā)明制劑對(duì)輻射小鼠血清半數(shù)溶血值(HC5())的影響組別只數(shù)照射后14天血清半數(shù)溶血值(HC50)空白對(duì)照組10138.22±6.22b輻射對(duì)照組1075.87±6.91aGLP組1092.38±5.62abMPP+GLP高齊lji隨1096.34±6.21abMPP+GLP中齊Uii組1088.04±6.62abMPP+GLP低齊Ui!組1079.52±6.02aa:與空白對(duì)照組比較，P<0.01;b:與輻射對(duì)照組比較，P<0.014.結(jié)論結(jié)果顯示，本發(fā)明制劑一海洋蛋白肽和靈芝多糖配伍劑，對(duì)輻照小鼠30d存活率和平均存活時(shí)間、外周血白細(xì)胞數(shù)、骨髓細(xì)胞DNA含量、血清中超氧化物歧化酶(SOD)以及半數(shù)溶血值(HC5。)均有所提高，具有防輻射、增強(qiáng)免疫、保護(hù)DNA以及抗氧化的作用，且配伍劑的效果優(yōu)于單獨(dú)給予靈芝多糖的效果，按照衛(wèi)生部《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》對(duì)輻射危害有輔助保護(hù)功能的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，其對(duì)輻射危害有輔助保護(hù)功能的作用。權(quán)利要求1.一種具有防輻射、抗氧化以及保護(hù)DNA作用的組合物，其特征在于由海洋蛋白肽和靈芝多糖按重量比為18∶1的比例配制而成。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有防輻射、抗氧化以及保護(hù)DNA作用的組合物，其特征在于所述的靈芝多糖是取靈芝孢子粉置于低溫條件下，按常規(guī)物理抗氧化破壁法提取精華，純度達(dá)80%以上。3.—種如權(quán)利要求1所述的具有防輻射、抗氧化以及保護(hù)DNA作用的組合物作為制備防輻射藥物、防輻射保健食品或防輻射食品的用途。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述具有防輻射、抗氧化以及保護(hù)DNA作用的組合物作為制備防輻射藥物、防輻射保健食品或防輻射食品的用途，其特征在于所述防輻射藥物或防輻射食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑或口服液。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述具有防輻射、抗氧化以及保護(hù)DNA作用的組合物作為制備防輻射藥物、防輻射保健食品或防輻射食品的用途，其特征在于所述防輻射食品為淀粉制品、乳或乳制品、豆制品或烘焙制品。全文摘要本發(fā)明公開一種具有防輻射、抗氧化以及保護(hù)DNA作用的組合物，是由海洋蛋白肽和靈芝多糖按重量比為18∶1的比例配制而成，作為制備防輻射藥物、防輻射保健食品或防輻射食品的用途。所得制劑具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點(diǎn)。本發(fā)明制劑對(duì)輻照小鼠30d存活率和平均存活時(shí)間、外周血白細(xì)胞數(shù)、骨髓細(xì)胞DNA含量、血清中超氧化物歧化酶(SOD)以及半數(shù)溶血值(HC₅₀)均有所提高，具有防輻射的功效，且其防輻射效果優(yōu)于單獨(dú)給予靈芝多糖。將其應(yīng)用于制備防輻射藥物、防輻射保健食品或防輻射食品，可解決現(xiàn)有巰基類化合物所普遍存在的毒性較大的問題。文檔編號(hào)A61K38/17GK101168047SQ20071015764公開日2008年4月30日申請(qǐng)日期2007年10月24日優(yōu)先權(quán)日2007年10月24日發(fā)明者勇李,楊睿悅,蔡木易申請(qǐng)人:珍奧集團(tuán)股份有限公司