專利名稱：一種治療奶牛乳房炎制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種治療奶牛乳房炎的藥物制劑，以及該種制劑的制備 方法。
技術(shù)背景乳腺炎是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)最嚴(yán)重的一類疾病。全世界約有5oy。的奶?；几鞣N類型的乳腺炎?；既橄傺椎哪膛?，奶產(chǎn)量和質(zhì)量下降。美國(guó)每年因奶牛乳腺炎造成的直接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)20億美元。奶牛乳腺炎造成的損失約7oy。是由隱性乳腺炎引起的產(chǎn)奶量下降，中國(guó)每年僅隱性乳腺炎造成的損失至少是1. 35億元人民幣。引起奶牛乳房炎的主要原因是病原微生物感染。因此，目前治療乳房炎的主要藥物是抗生素。由于抗生素長(zhǎng)期、廣泛、大劑量用于治療奶牛疾病已經(jīng)導(dǎo)致一系列不良后果。首先是食品公共衛(wèi)生問題用抗生素治療之后，潛在著牛奶 中藥物殘留的危險(xiǎn)，對(duì)人的健康產(chǎn)生不利影響；其次是耐藥菌株增加致病菌產(chǎn)生耐藥性， 使乳房炎變得越來越難治愈，牛場(chǎng)獸醫(yī)不得不加大抗生素的使用劑量，這又加重藥物殘留的 危險(xiǎn)；藥殘的其他危害還包括乳制品生產(chǎn)中的發(fā)酵過程受到抑制，導(dǎo)致產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量降 低。因此，長(zhǎng)期以來人們一直在尋找比抗生素更加安全有效的奶牛乳腺炎治療藥物。 有關(guān)這方面的研究，目前以中草藥和溶菌酶等制劑較多。在長(zhǎng)期的實(shí)踐中，中獸醫(yī)學(xué)對(duì)防治奶牛乳腺炎積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)及大量的中草藥方 劑，但這些方劑的有效成分及其含量不確定，質(zhì)量難以得到有效控制；傳統(tǒng)中草藥直接采用 原藥材，用藥量大，藥效不顯著；而且草藥成分復(fù)雜，應(yīng)用于乳房?jī)?nèi)灌注，具有刺激性。溶菌酶能通過裂解細(xì)胞壁，溶解及殺滅多種致病菌，以達(dá)到防治疾病的目的。但酶的滲 透作用不強(qiáng)，當(dāng)細(xì)菌在乳腺組織深部或寄生在細(xì)胞內(nèi)時(shí)，溶菌酶是沒有作用的。另外酶制劑 的穩(wěn)定性較差，質(zhì)量不易控制。根據(jù)報(bào)道，1970年Gross和Morell闡明了乳酸鏈球菌素(Nisin)分子的結(jié)構(gòu)。Nisin 是一種新型低聚肽，存在6種類型，分別為A、 B、 C、 D、 E和Z。其中對(duì)Nisin A和NisinZ 兩種類型的研究最活躍，兩者僅在27位氨基酸殘基有差別，其抗菌特性幾乎無差別。Nisin 一級(jí)結(jié)構(gòu)由34個(gè)氨基酸組成，分子末端有氨基和羧基，還有5個(gè)硫橋構(gòu)成內(nèi)環(huán)，其分子式是 C143H228N42037S7，平均分子量為3510。 Nisin活性分子常為二聚體和四聚體，分子量分別為7000 和14000。Nisin對(duì)微生物的作用機(jī)理有大量研究，Nisin能吸附G+菌的細(xì)胞膜，然后在細(xì)胞膜上 形成空洞，使胞內(nèi)物質(zhì)排出，導(dǎo)致細(xì)胞解體死亡。Nisin主要抑制大部分G+菌的生長(zhǎng)。常見 的奶牛乳房炎致病菌主要是G+菌，如金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌和乳房鏈球 菌等，研究表明，Nisin對(duì)這些致病菌的活性很高，而且對(duì)耐青霉素的致病菌也有較強(qiáng)的殺 滅作用。 Nisin是乳制品中所含的天然產(chǎn)物，若千年來，它隨著食品被人們攝入，并沒發(fā)現(xiàn)毒性 問題。現(xiàn)在己對(duì)Nisin的安全性問題進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，大鼠經(jīng)口服LD50約為7000mg / kg 體重。研究表明，Nisin對(duì)蛋白水解酶(如胰蛋白酶等)特別敏感，因此食用后在消化道中 即可很快被蛋白水解酶水解成氨基酸。人在攝入10min后，在唾液中就檢測(cè)不到Nisin的活 性，故不會(huì)在體內(nèi)殘留，也不會(huì)改變腸道正常菌群，是一種安全的防腐劑。1969年FAO/WHO 食品添加劑聯(lián)合專家委員會(huì)批準(zhǔn)Nisin作為食品添加劑使用；1990年3月29日我國(guó)衛(wèi)生部 將其列入GB2760 — 86的1990年增補(bǔ)品種中，可用于罐藏食品、植物蛋白食品、乳制品和肉 制品。目前己有50多個(gè)國(guó)家和地區(qū)批準(zhǔn)Nisin可以作為一種純天然食品防腐劑使用。美國(guó)專利US5762948和中國(guó)專利CN1186413公開了一種預(yù)防和治療奶牛乳腺炎的濕巾， 其成分為乳酸鏈球菌素。但該制劑僅能用于奶牛乳區(qū)外部的消毒，并不能用于乳房?jī)?nèi)注射， 中國(guó)專利CN03115388公幵了一種用于預(yù)防奶牛乳腺炎的殺菌制劑，其主要成分為一種合成的 抗菌肽和溶葡萄球菌酶，但目前尚未有任何國(guó)家批準(zhǔn)將該抗菌肽用于奶牛乳房炎治療。中國(guó) 專利公開了治療奶牛乳房炎用的含乳酸鏈球菌素的液體制劑(專利號(hào)2005100115222)和粉 針劑(專利號(hào)2005101176702 )。我們用該制劑治療奶牛乳房炎的時(shí)候發(fā)現(xiàn)，乳酸鏈球菌素 在乳房炎牛奶中的降解速度比在正常牛奶中快，在抗菌效價(jià)會(huì)大幅度下降。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種藥效比較持久的用于治療奶牛乳房炎的以乳酸鏈球菌素為主要 成分的藥物制劑。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述藥物制劑的制備方法。本發(fā)明的一種治療奶牛乳房炎制劑是包含乳酸鏈球菌素，維生素C和乙二胺二乙酸二鈉 (EDTA-Na2)的水或生理鹽水溶液；每毫升水或生理鹽水溶液中含乳酸鏈球菌素5-12. 5萬單 位，維生素C 4一10毫克以及EDTA-Na216-40毫克。上述治療奶牛乳房炎制劑的制備方法為將上述比例的乳酸鏈球菌素，維生素C和 EDTA-Na,無菌粉末混合，分裝，使用前將該無菌粉末溶解于水或生理鹽水，使每毫升溶液含 乳酸鏈球菌素5-12. 5萬單位的和維生素C 4一10毫克以及EDTA-Na216-40毫克。簡(jiǎn)要地說，本發(fā)明的一種治療奶牛乳房炎制劑是一種含乳酸鏈球菌素，維生素c和乙二 胺二乙酸二鈉(EDTA_Na2)的無菌粉末。使用前將該無菌粉末溶解于水或生理鹽水，使每毫 升溶液含乳酸鏈球菌素5-12. 5萬單位的和維生素C 4一10毫克以及EDTA-Na216-40毫克。列舉一例將該制劑的制備方法進(jìn)一步敘述如下用無菌方法將150克乳酸鏈球菌素(效價(jià)為1. 67萬國(guó)際單位/毫克)，200克維生素C和 800克EDTA-Na2混合均勻制備成一種無菌的粉末。將該混合粉末分裝在1000個(gè)容量為20毫 升滅菌安瓿中，使每安瓿含1. 15克混合粉末。治療前，在一個(gè)安瓿中注入20毫升的滅菌水 或生理鹽水，振搖，溶解。該溶液中乳酸鏈球菌素的效價(jià)為1.25萬單位/毫升，維生素CIO 毫克/毫升，EDTA-Na2 40毫克/毫升，溶液的pH值為2-3。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果在于由于在藥劑中加入了 EDTA-Na2，可以抑制牛奶中蛋白水 解酶的活性，使乳酸鏈球菌素在牛奶中降解速度變緩，藥物作用時(shí)間延長(zhǎng)，延長(zhǎng)了治療奶牛 乳房炎的療效。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1 EDTA-Na2作為乳酸球菌素的保護(hù)劑延長(zhǎng)乳酸球菌素在乳房炎牛奶中的作用時(shí)間研究(1) 在奶牛場(chǎng)選擇1個(gè)月內(nèi)未曾用抗生素治療剛發(fā)生臨床性乳腺炎的奶牛，從患病乳區(qū) 采集牛奶350ml。(2) 將牛奶以3500轉(zhuǎn)/分離心20分種，去上層脂肪，將脫脂乳分裝到3個(gè)錐形瓶中， 每瓶1GG毫升。(3) 在每個(gè)錐形瓶中加入乳酸球菌素100， 000 IU/100ml，然后再加入0. 5mol/L的EDTA 400u 1，混合均勻后在37'C水浴12小時(shí)。(4) 水浴結(jié)束后，參考國(guó)標(biāo)GB2760-86乳酸鏈球菌素效價(jià)檢査方法檢測(cè)3瓶脫脂乳(分 別含乳酸鏈球菌素、乳酸鏈球菌素+EDTA和EDTA)對(duì)藤黃微球菌的抑抗菌作用，用抑菌圈直 徑表示抑菌作用大小。(5) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，脫脂乳經(jīng)過12小時(shí)水浴之后，僅含EDTA的脫脂乳對(duì)藤黃微球菌無 抑菌作用，乳酸鏈球菌素和EDTA聯(lián)合應(yīng)用比乳酸鏈球菌素單獨(dú)應(yīng)用有更強(qiáng)的抑菌效果，見表 1。表1.乳酸鏈球菌素與EDTA聯(lián)合應(yīng)用的抑菌圈直徑(厘米)Nis inNisin + EDTAP值1. 861. 971. 861. 951. 871. 961. 881. 981. 861. 981. 881. 991. 881. 991. 871. 97P<0. 05實(shí)施例2(1) 以無菌操作方法將200克維生素C (為廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心產(chǎn) 品)，139克效價(jià)為18000單位/毫克乳酸鏈球菌素(浙江銀象生物工程有限公司產(chǎn)品)，和800 克EDTA-Na2充分混合；(2) 將(1)中的混合粉末，以每份l. 14克，用無菌操作方法分裝于1000個(gè)容量為20 毫升的滅菌玻璃安瓿中，即得。(3) 在1個(gè)安瓿中注入20毫升生理鹽水，振搖后可以使藥物充分溶解。該溶液的PH為 3，乳酸鏈球菌素的效價(jià)為12. 5萬單位/毫升，維生素C10毫克/毫升，EDTA-化2 40毫克/毫 升。實(shí)施例3(1) 以無菌操作方法將200克維生素C (為廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心產(chǎn) 品)，125克效價(jià)為20000單位/毫克乳酸鏈球菌素(浙江銀象生物工程有限公司產(chǎn)品)，和500 克EDTA-Na2充分混合；(2) 將(1)中的混合粉末，以每份0.83克，用無菌操作方法分裝于1000個(gè)容量為20 毫升的滅菌玻璃安瓿中，即得。(3) 在1個(gè)安瓿中注入20毫升生理鹽水，振搖后可以使藥物充分溶解。該溶液的pH為 3,乳酸鏈球菌素的效價(jià)為12. 5萬單位/毫升，維生素C 10毫克/毫升，EDTA-Na"0毫克/毫 升。
權(quán)利要求
1、一種治療奶牛乳房炎制劑，其特征在于包含乳酸鏈球菌素，維生素C和乙二胺二乙酸二鈉(EDTA-Na2)的水或生理鹽水溶液；每毫升水或生理鹽水溶液中含乳酸鏈球菌素5-12.5萬單位，維生素C4-10毫克以及EDTA-Na216-40毫克。
2、 如權(quán)利要求1所述治療奶牛乳房炎制劑的制備方法，其特征在于將上述比例 的乳酸鏈球菌素，維生素C和EDTA-Na2無菌粉末混合，分裝，使用前將該無菌 粉末溶解于水或生理鹽水，使每毫升溶液含乳酸鏈球菌素5-12. 5萬單位的和維 生素C 4一10毫克以及EDTA-Na216-40毫克。
全文摘要
一種治療奶牛乳房炎制劑及其制備方法，制劑為一種包含乳酸鏈球菌素，維生素C和乙二胺二乙酸二鈉(EDTA-Na₂)的水或生理鹽水溶液；每毫升水或生理鹽水溶液中含乳酸鏈球菌素5-12.5萬單位，維生素C 4-10毫克以及EDTA-Na₂ 16-40毫克。將上述比例的乳酸鏈球菌素，維生素C和EDTA-Na₂無菌粉末混合，分裝，使用前將該無菌粉末溶解于水或生理鹽水。實(shí)驗(yàn)證明由于在藥劑中加入了EDTA-Na₂，可以抑制牛奶中蛋白水解酶的活性，使乳酸鏈球菌素在牛奶中降解速度變緩，藥物作用時(shí)間延長(zhǎng)，延長(zhǎng)了治療奶牛乳房炎的療效。
文檔編號(hào)A61K38/16GK101209343SQ20071016481
公開日2008年7月2日 申請(qǐng)日期2007年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月24日
發(fā)明者胡松華 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)