專利名稱：：一種過逸型氣虛證候動(dòng)物模型的建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中醫(yī)藥評(píng)價(jià)領(lǐng)域，具體涉及一種建立氣虛證候動(dòng)物模型的方法。
背景技術(shù)：
：證候研究一直是中醫(yī)藥評(píng)價(jià)研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域，其規(guī)范化與標(biāo)準(zhǔn)化是傳統(tǒng)中醫(yī)藥邁向現(xiàn)代化的必由之路，而自上世紀(jì)60年代中醫(yī)證候動(dòng)物模型的引入則為此進(jìn)程架起了一座橋梁。氣虛證是中醫(yī)臨床常見基本證候，近年來中醫(yī)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)發(fā)展了多種不同的氣虛動(dòng)物模型的造模方法，包括限日攝食量法、單純?yōu)a下法、疲勞法、煙熏法、化療藥物、X線照射、耗氣破氣、苦寒渴下加耗氣破氣降氣、手術(shù)法、失血法等等，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物多采用大鼠或小鼠。綜觀這些方法，總體上仍以疲勞法為主，正如《素問，舉痛論》云"勞則氣耗""勞則喘急汗出，內(nèi)夕卜皆越，故氣耗也"，勞力過度則傷氣，此法符合中醫(yī)理論，在疲勞的基礎(chǔ)上加用卩艮食；《靈柩.玉版篇》云"人之所以受氣者，谷也，，；《靈柩，無味篇》云"谷不入半日則氣衰，一日則氣少矣"；瀉下(以大黃、芒硝、番瀉葉等瀉下藥物為主)的方法使氣之生成更加不足，氣虛證候更加明顯。結(jié)合臟腑辯證，脾氣虛癥的造模方法最多，有疲勞加飲食失節(jié)或?yàn)a下法，偏食苦味或酸味，耗氣破氣或苦寒瀉下加耗氣破氣等；心氣虛動(dòng)物模型的制作常在疲勞、控食等的基礎(chǔ)上使用心得安或垂體后葉素這兩種藥物；肺氣虛的造模方法比較單純，主要采用一氧化硫、香煙、鋸末等進(jìn)行煙熏以傷肺臟，耗損肺氣；腎氣虛動(dòng)物模型的研究相對(duì)較少。在現(xiàn)有的氣虛動(dòng)物的造模方法中存在著許多問題，如(1)造模方法大多復(fù)雜；利用多因素造模較多，在實(shí)驗(yàn)過程中不利于操作和推廣；(2)有些造模因素與臨床不貼近，如偏食苦味造模、食用過量醋造模等，不是臨床上常見的導(dǎo)致氣虛的原因；(3)—些方法所造的模型是否屬于氣虛證還存在著爭(zhēng)論，如瀉下法所用藥物大黃、番瀉葉等苦性寒，不能排除造成脾陽虛的可能；(4)有一些方法盡管類似，但所用強(qiáng)度和時(shí)間都不同，各有不同的標(biāo)準(zhǔn)，不夠統(tǒng)一；(5)模型大多偏重一些臟腑的氣虛，單純氣虛證較少。如上所述，疲勞法是制備氣虛證模型的主要方法，所謂"勞則氣耗"，與之相反，過逸是否也可以造成氣虛證的產(chǎn)生呢？過逸，即過度安逸，包括體力過逸和腦力過逸等。清代醫(yī)家陸九芝說逸之為病，正不少也，逸乃逸豫，安逸之所生病，與勞相反，，；《素問，宣明五氣篇》云"久臥傷氣"；《醫(yī)學(xué)入門》也強(qiáng)調(diào)久臥久坐"尤傷人也"；張介賓云"久臥則陽氣不申，故傷氣；久坐則血脈滯于四肢，故傷肉"。人體每天需要適當(dāng)?shù)幕顒?dòng)，氣血才能流暢，陽氣才得以振奮，若較長時(shí)間少動(dòng)安閑，或者臥床過久或者長期用腦過少等，可使人體臟腑經(jīng)絡(luò)及精氣血神的失調(diào)而導(dǎo)致病理變化。過逸致病的特點(diǎn)主要表現(xiàn)在三個(gè)方面一是安逸少動(dòng)，氣機(jī)不暢。如果長期運(yùn)動(dòng)減少，則人體氣機(jī)失于暢達(dá)，可以導(dǎo)致脾胃等臟腑的功能活動(dòng)呆滯不振，出現(xiàn)食少、胸悶、腹脹、肢閑、肌肉軟弱、或發(fā)胖臃腫等(脾氣虛的表現(xiàn))；二是陽氣不振，正氣虛弱。過度安逸或長期臥床，陽氣失于振奮，以致臟腑組織功能減退，體質(zhì)虛弱，正氣不足，抵抗力下降等。故過逸致病，常見動(dòng)則心悸，氣喘出汗等(心氣虛的表現(xiàn))，或抗邪無力，易感外邪致病(肺氣虛的表現(xiàn))；三是長期用腦過少，加之陽氣不振，可致神氣衰弱，常見精神萎靡、健忘、反應(yīng)遲鈍等(腎氣虛的表現(xiàn))?？梢娺^逸可致機(jī)體整體的生理功能減退，導(dǎo)致氣的生成不足或運(yùn)行不暢，從而導(dǎo)致氣虛證的發(fā)生，且并不偏重于某一臟腑。臨床上部分人群，尤其是肥胖群體，由于生活習(xí)慣過于安逸，飲食嗜食肥甘厚味，且日常缺乏勞動(dòng)及體育鍛煉，往往可致氣虛證候的產(chǎn)生。但是，目前卻沒有關(guān)于過逸致氣虛證候動(dòng)物模型的相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道，因此，對(duì)相應(yīng)藥物的評(píng)價(jià)也缺少規(guī)范、標(biāo)準(zhǔn)、科學(xué)的方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種新的建立過逸型氣虛證候動(dòng)物模型的方法。本發(fā)明中的過逸型氣虛證候的"過逸"主要是指高脂飲食復(fù)合久臥引起的氣虛證候。本發(fā)明建立過逸型氣虛證候動(dòng)物模型的方法為將大鼠置于代謝籠中，伺以高脂飼料，自由飲水，經(jīng)過8-10周造模時(shí)間的培養(yǎng)即得。本發(fā)明中使用的高脂飼料可以在本發(fā)明的啟示下采用本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)進(jìn)行配制，以使大鼠產(chǎn)生過逸型氣虛證候?yàn)槟康摹１景l(fā)明中高脂飼料優(yōu)選包含以下成分，以100份基礎(chǔ)祠料計(jì)全脂奶粉10-15份、豬油3-5份、蛋黃40-50份、黃豆10-15份、魚肝油0.2-0.5份、膽酸鈉0.5份；優(yōu)選以100份基礎(chǔ)飼料計(jì)全脂奶粉15份、豬油5份、蛋黃50份、黃豆15份、魚肝油0.35份、膽酸鈉0.5份。為了更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，本發(fā)明中大鼠使用的代謝籠為單籠，籠內(nèi)空間以保持大鼠基本安靜、且能夠轉(zhuǎn)身移動(dòng)為標(biāo)準(zhǔn)，籠內(nèi)空間隨大鼠的生長狀況可進(jìn)^f于調(diào)整。本發(fā)明過逸型氣虛證候動(dòng)物才莫型中，造模時(shí)間優(yōu)選為10周；大鼠優(yōu)選為清潔級(jí)Wistar雄性大鼠，體重在160-180g之間。為更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明選用以下方法對(duì)過逸型氣虛大鼠模型進(jìn)行評(píng)價(jià)經(jīng)過8-10周造模時(shí)間培養(yǎng)的大鼠，按觀察指標(biāo)觀察大鼠的生物學(xué)表征，其生物學(xué)表征半定量評(píng)分應(yīng)在4分以上。中醫(yī)證候模型是利用動(dòng)物的某些生物體征來模擬人體證候特征的一類生物表征模型，在證候自身的生物學(xué)基礎(chǔ)病理生理依據(jù)還沒有完全被揭示的今天，不能一味追尋生物化學(xué)、病理或病理生理指標(biāo)為證候動(dòng)物模型成立的依據(jù)。癥狀在中醫(yī)證候的臨床診斷中起著最重要的作用，因此，中醫(yī)證〃陵動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)以癥狀為主，以動(dòng)物體表特征如舌象、唇象、爪象、耳輪、尾尖、眼球、毛皮以及動(dòng)物行為等表現(xiàn)為依據(jù)。本發(fā)明過逸型氣虛證候動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)中，優(yōu)選了精神狀況、皮膚及毛發(fā)、耳尾顏色和糞便四類生物學(xué)表征作為觀察指標(biāo)，并制定了相應(yīng)的半定量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，其中，按精神狀況不同分為活潑好動(dòng)為0分，反應(yīng)稍有遲鈍、自主活動(dòng)減少為1分，倦怠懶動(dòng)、精神萎頓、四肢蜷縮、行動(dòng)遲緩為2分，精神萎靡不振、攻擊性、對(duì)抗性行為消失為3分；按皮膚及毛發(fā)不同分為皮膚與脂肪連接緊密、柔韌有彈性、毛發(fā)光亮柔順為0分，皮膚略松弛、松軟、張力減少、毛發(fā)枯黃無光澤為1分，皮膚松弛、少許脂肪、易抓取、毛發(fā)干枯或結(jié)穗打巻、無光澤為2分，皮膚松弛、皮下無脂肪、抓之觸骨、全身毛發(fā)枯槁、稀疏脫落為3分；按耳尾顏色不同分為紅潤光澤為0分，淡紅少澤為l分，淡白少澤為2分，蒼白或透青色為3分；按糞便不同分為糞便干、成形為0分，糞便粘軟有形為l分，糞便不成形、但不稀溏為2分，糞便稀溏、綠褐粘膩惡臭為3分。為更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明更進(jìn)一步優(yōu)選選用以下方法對(duì)過逸型氣虛大鼠模型進(jìn)行評(píng)價(jià)按觀察指標(biāo)觀察大鼠的生物學(xué)表征之后，再釆用力竭游泳的方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，其中力竭游泳的具體方法包括使大鼠在游泳釭中強(qiáng)迫負(fù)重游泳，游泳至力竭為止時(shí)，統(tǒng)計(jì)游泳時(shí)間，其游泳時(shí)間與相同條件下正常大鼠游泳時(shí)間相比應(yīng)縮短^1/3。乏力為氣虛證的代表癥狀之一，而力竭游泳由于能使動(dòng)物全身的肌肉參與運(yùn)動(dòng)，比爬竿實(shí)驗(yàn)或攀網(wǎng)實(shí)驗(yàn)更能體現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的耐力情況，因此本發(fā)明同時(shí)還采用了大鼠力竭游泳實(shí)驗(yàn)的方法對(duì)過逸型氣虛模型進(jìn)行驗(yàn)證。本發(fā)明大鼠游泳優(yōu)選在25-27。C水溫的專用游泳缸中，強(qiáng)迫負(fù)重游泳，采用兩次游泳法，前后相差10分鐘，游泳至力竭為止；其中游泳至力竭的標(biāo)準(zhǔn)為游泳范圍逐漸縮小，動(dòng)作明顯失調(diào)、慌張、鼻部在水面上下浮動(dòng)，頭部沒入水面下3秒不能上浮。大鼠4吏用的游泳缸優(yōu)選為60cmx40cmx100cm的專用泳缸，j旦并不限于上述規(guī)格的游泳缸，還可以是其它常用的泳缸；其中在負(fù)重游泳時(shí)，每只大鼠的負(fù)重優(yōu)選為按每只大鼠自身體重的5%計(jì)算。本發(fā)明解決了目前沒有過逸型氣虛證候動(dòng)物模型的不足，為規(guī)范、標(biāo)準(zhǔn)、科學(xué)的評(píng)價(jià)中醫(yī)藥提供了一種新方法，具有造模方法簡(jiǎn)單、易于操作和推廣，貼近臨床的特點(diǎn)。具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的闡述，但本發(fā)明并不受限于此。實(shí)施例1、模型制備材料及方法1.1、動(dòng)物清潔級(jí)的Wistar;維性大鼠，體重160-180g,購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限/>司，許可證編號(hào)SCXK(京)2007—0001。1.2、藥物人參凍干粉，由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供，為淡黃色凍干劑,使用前取102.86mg干粉加入100ml0.5簡(jiǎn)C-Na中,相當(dāng)于0.12g生藥/ml，4。C保存?zhèn)溆谩?.3、高脂飲料的配制每100g基礎(chǔ)飼料中加入全脂奶粉15g，豬油5g,蛋黃50g,黃豆15g,魚肝油10滴(約0.35g)，膽酸鈉0.5g;1.4、儀器代謝籠，大鼠專用泳缸；1.5、實(shí)驗(yàn)分組及其方法，清潔級(jí)Wistar雄性大鼠45只，隨機(jī)分為3組空白對(duì)照組、氣虛模型組、人參干預(yù)組，每組15只；空白對(duì)照組大鼠分別置于代謝籠中(單籠)，飼以普通飼料，自由飲水;氣虛模型組大鼠分別置于經(jīng)改造的代謝籠中(單籠)，籠內(nèi)的空間以保持其基本安靜、且能夠轉(zhuǎn)身移動(dòng)為標(biāo)準(zhǔn)(空間據(jù)大鼠的生長狀況可隨時(shí)調(diào)整)，祠以高脂肪飼料，自由飲水；人參干預(yù)組大鼠于實(shí)驗(yàn)開始按lml/100g給予人參凍干粉CMC-Na混懸溶液灌胃(1.2g生藥/kg/d),l次/天，其它處理同氣虛模型組。實(shí)驗(yàn)共計(jì)10周。1.6、觀察指標(biāo)及^企測(cè)方法1.6.1、大鼠生物學(xué)表征觀察制定半定量評(píng)分表(見表1)于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)大鼠生物學(xué)表征進(jìn)行觀察。表l、實(shí)驗(yàn)大鼠生物學(xué)表征半定量評(píng)分觀察表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1.6.2、力竭游泳實(shí)一驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每只大鼠在25-27。C水溫的專用游泳缸(60cmx40cmx100cm)中，被強(qiáng)迫負(fù)重(每只大鼠的負(fù)重按自身體重的5°/。計(jì)算)游泳，采用兩次游泳法，前后相差10分鐘，游泳至力竭為止，以最大限度耗竭動(dòng)物體力(力竭標(biāo)準(zhǔn)游泳范圍逐漸縮小，動(dòng)作明顯失調(diào)、慌張、鼻部在水面上下浮動(dòng)，頭部沒入水面下3秒不能上浮為力竭標(biāo)準(zhǔn))。1.7、統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS12.0軟件統(tǒng)計(jì)，采用單因素方差分析法，組間兩兩比較用LSD法檢驗(yàn)，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(；±s)的形式表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1、各組大鼠生物學(xué)表征評(píng)分結(jié)果見表2。表2、實(shí)驗(yàn)各組大鼠生物學(xué)表征觀察評(píng)分結(jié)果(；±s)組別N(只)分值空白7于照紐_151.00±0.50氣虛模型組154.25±1.21*人參口服組152.08±0.90#注與空白對(duì)照組比4交，*P<0.01;與氣虛模型組比較，#P<0.01;實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組大鼠活潑好動(dòng)，反應(yīng)靈敏，氣虛才莫型組大鼠則表現(xiàn)^巻怠懶動(dòng)，精神萎頓、四月支蜷縮，行動(dòng)遲緩，甚則迷眼、縮肩拱背；皮膚^弛，背部毛色無光澤；尾、鼻顏色淡白少潤；大<更稀軟但有形，生物學(xué)表征評(píng)分與空白組比較顯著升高(P<0.Ol),人參口服組大鼠反應(yīng)稍有遲鈍，自主活動(dòng)少，皮膚略松弛，松軟，尾、鼻顏色淡紅少潤；大便干燥、有形、生物學(xué)表征評(píng)分與氣虛模型組比較顯著降低(P<0.01)。2.2、各組大鼠力竭游泳時(shí)間，結(jié)果見表3表3、實(shí)驗(yàn)各組大鼠力竭游泳時(shí)間比較結(jié)果(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注與空白對(duì)照組比較，*P<0.01;與氣虛模型組比較，#P<0.01;實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，氣虛才莫型組大鼠力竭游泳時(shí)間明顯縮短，統(tǒng)計(jì)有顯著性差異(P<0.01);與氣虛模型組比較，人參口服組大鼠力竭游泳時(shí)間明顯延長，統(tǒng)計(jì)有顯著性差異(P<0.01)。由上述試驗(yàn)結(jié)果可以看出，氣虛模型組大鼠評(píng)分顯著升高，其表征改變基本可以體現(xiàn)臨床神疲、懶言、氣短、乏力的氣虛證候表現(xiàn)；同時(shí)，氣虛模型大鼠力竭游泳時(shí)間顯著縮短，也表明其整體運(yùn)動(dòng)耐力降低，乏力癥狀明顯。其次、治療作用的反證也是衡量模型是否成功的一個(gè)重要標(biāo)志。人參是中醫(yī)典型的補(bǔ)氣藥之一，本發(fā)明將人參用于氣虛證候模型的治療，結(jié)果顯示其可顯著改善模型大鼠的生物學(xué)表征，延長大鼠的力竭游泳時(shí)間，從而反正了氣虛證候模型的成功建立。權(quán)利要求1、一種建立過逸型氣虛證候動(dòng)物模型的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟將大鼠置于代謝籠中，飼以高脂飼料，自由飲水，經(jīng)過8-10周造模時(shí)間的培養(yǎng)即得。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述高脂飼料的配方含以下成分，以100份基礎(chǔ)飼料計(jì)全脂奶粉10-15份、豬油3-5份、蛋黃40-50份、黃豆10-15<分、魚肝油0.2-0.5<分、膽酸鈉0.5份。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述高脂飼料的配方含以下成分，以100份基礎(chǔ)飼料計(jì)全脂奶粉15份、豬油5份、蛋黃50份、黃豆15份、魚肝油0.35份、膽酸鈉0.5份。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述代謝籠為單籠，籠內(nèi)空間以保持大鼠基本安靜、且能夠轉(zhuǎn)身移動(dòng)為標(biāo)準(zhǔn)，籠內(nèi)空間隨大鼠的生長狀況可進(jìn)^f于調(diào)整。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述造模時(shí)間為10周。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述大鼠為Wistar雄性大鼠,體重在160-180g。全文摘要本發(fā)明公開了一種建立過逸型氣虛證候動(dòng)物模型的方法，其包括將大鼠置于代謝籠中，飼以高脂飼料，自由飲水，經(jīng)過8-10周造模時(shí)間的培養(yǎng)即得，本發(fā)明解決了目前沒有過逸型氣虛證候動(dòng)物模型的不足，為中醫(yī)藥評(píng)價(jià)提供了一種新方法。文檔編號(hào)A61K49/00GK101427938SQ20071016610公開日2009年5月13日申請(qǐng)日期2007年11月7日優(yōu)先權(quán)日2007年11月7日發(fā)明者吳以嶺,袁國強(qiáng)申請(qǐng)人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司