專利名稱：：一種化合物及其組合物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物學(xué)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種具有升高白細(xì)胞作用的化合物及其組合物的新用途。
背景技術(shù)：
：人外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)持續(xù)低于正常值(4xl07L)時(shí)稱為白細(xì)胞減少，最常見是由中性粒細(xì)胞減少所致。病人可無癥狀或有非特異性癥狀，如乏力、納差、體力減退，并有易感染傾向。是否合并感染視粒細(xì)胞減少程度。感染部位以肺、尿路、皮膚等多見。白細(xì)胞減少可分為遺傳性和獲得性兩種，其中獲得性占多數(shù)。藥物、放射線、感染、毒素等均可使白細(xì)胞減少，藥物引起者最常見。治療時(shí)應(yīng)仔細(xì)査找引起白細(xì)胞減少的原因，根據(jù)病因選擇相應(yīng)的治療措施。目前針對各類白細(xì)胞減少癥主要采用藥物治療，包括多種中藥制劑，如人參、當(dāng)歸、黃芪、阿膠、白術(shù)、補(bǔ)骨脂、刺五加、枸杞子等組成的復(fù)方制劑；西藥制劑，如維生素B4、輔酶A、脫氧核糖核酸、鯊肝醇、利血生、升白安、肌苷、升白欣等，但療效均欠佳，停藥后，白細(xì)胞往往會重新跌落。近年來，新的生物制劑如粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)廣泛應(yīng)用于臨床，但價(jià)格昂貴，給患者帶來巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。染料木素(genistein，GEN)為大豆異黃酮的一種，其結(jié)構(gòu)與雌二醇非常相似，但活性僅為雌二醇的10—3-10—2，是一種天然植物雌激素。已有研究證實(shí)，GEN對多種腫瘤細(xì)胞如乳腺癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞等的生長具有顯著的抑制作用。大量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，染料木素還可防止骨質(zhì)流失，增加骨密度(孫紀(jì)元，謝艷華，王四旺，等.染料木素膠囊對骨質(zhì)疏松癥大鼠骨質(zhì)代謝影響的比較研究.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2003，13(3):146-149)。染料木素還對高脂血癥、心血管疾病等具有良好的防治作用(FANGYC，CHENBH，HUANGRF,etal.Effectofgenisteinsupplementationontissuegenisteinandlipidperoxidationofserum,liverandlow—densitylipoproteininhamsters.JNutrBiochem，2004，15(3):142-148)，且對人體無明顯的毒副作用。但它是否在提高免疫力、提高白細(xì)胞等方面具有作用，還不得而知。芹菜素(Apigenin)屬黃酮類化合物，目前的研究表明，它能抑制致癌物質(zhì)的致癌活性，可作為治療HIV和其它病毒感染的抗病毒藥物，可作為MAP激酶的抑制劑，可作為抗氧化劑，并可治療各種炎癥。但對于它是否具有提高免疫力、提高白細(xì)胞等的作用卻沒有報(bào)道。因此，本領(lǐng)域臨床仍然缺乏療效顯著、價(jià)格低廉、使用方便的升高白細(xì)胞的藥物。本發(fā)明旨在提供一種如式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯的新用途。本發(fā)明的另一個(gè)目的，是提供一種含有如式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯的組合物，或是含有如式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯的植物提取物的組合物，或是含有如式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯的原料藥材的組合物。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種如式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯在制備預(yù)防或治療白細(xì)胞減少的組合物中的用途，其中R5，R6，R7，R8，R9分別選自氫原子、C卜2烷基、囟素原子、羥基、d-4垸氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表d—4烷基；
發(fā)明內(nèi)容式中，W代表如式VII所示的化合物:X代表氧原子、硫原子、氨基；Y代表氫原子、d-2烷基、鹵素原子、羥基、羧基、d-3酯基；Z代表氧原子、硫原子；R'，R2，R3，R4分別選自氫原子、d—2烷基、鹵素原子、羥基、C,—4垸氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表C卜4烷基；并且W和Y的位置可互換。在另一優(yōu)選例中，所述的白細(xì)胞減少選自下組白細(xì)胞減少癥、粒細(xì)胞減少癥；所述的粒細(xì)胞減少癥選自慢性粒細(xì)胞減少癥或周期性粒細(xì)胞減少癥。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物能預(yù)防或治療骨髓抑制引起的白細(xì)胞減少。在另一優(yōu)選例中，所述的如式I所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯選自下組IIIIVV;或OH0在另一優(yōu)選例中，所述的藥學(xué)上可接受的鹽或酯是如式I所示的化合物與選自下組的酸所形成氫氯酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富馬酸、馬來酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、或羥乙磺酸；所述的藥學(xué)上可接受的鹽是如式I所示的化合物與選自下組的堿或堿土金屬所形成鈉、鉀、鈣或鎂。在本發(fā)明的第二方面，提供了一種如式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯在制備預(yù)防或治療免疫抑制的組合物中的用途，R1R4式中，W代表如式VII所示的化合物:R8VII其中R5，R6，R7，R8,R9分別選自氫原子、C卜2垸基、鹵素原子、羥基、C卜4烷氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表C卜4垸基；X代表氧原子、硫原子、氨基；Y代表氫原子、C,-2烷基、鹵素原子、羥基、羧基、C,-3酯基；Z代表氧原子、硫原子；R',R2,R3，R4分別選自氫原子、C卜2烷基、鹵素原子、羥基、C,-4浣氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表C卜4浣基；并且W和Y的位置可互換。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物能預(yù)防或治療白細(xì)胞減少引起的免疫抑制。在另一優(yōu)選例中，所述的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯來源于植物或原料藥材，所述的植物物或原料藥材選自豆科植物或傘形科植物；所述的豆科植物優(yōu)選染料木、大豆、槐、黃羽扁豆或尼泊爾黃花木；所述的傘形科植物優(yōu)選旱芹。在本發(fā)明的第三方面，提供了一種組合物，它含有(a)作為主要活性成分的0.05-99wt。/。的如式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R5，R6，R7，R8，R9分別選自氫原子、d—2烷基、鹵素原子、羥基、C-4垸氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表C卜4垸基；X代表氧原子、硫原子、氨基；Y代表氫原子、d—2烷基、鹵素原子、羥基、羧基、d-3酯基；Z代表氧原子、硫原子；R'，R2，R3,R4分別選自氫原子、C卜2垸基、鹵素原子、羥基、C,」烷氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表d-4垸基；并且W和Y的位置可互換；(b)有效量的選自下組的一種或多種含量為0.0001—20wty。的輔助活性成分維生素B4、輔酶A、脫氧核糖核酸、鯊肝醇、集落刺激因子、重組人類粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)、粒細(xì)胞一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF);和(c)藥學(xué)上可接受的載體。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物是藥物組合物、食品組合物或飲食補(bǔ)充劑；所述的組合物選自片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、口服液、醑劑、式中，W代表如式VII所示的化合物:酊劑、氣霧劑、粉霧劑、注射劑、注射用無菌粉末、栓劑。在本發(fā)明的第四方面，提供了一種體外有效升高白細(xì)胞的方法，所述方法包括，給予需要的患者有效量的如式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯其中R5,R6,R7，R8，R9分別選自氫原子、C卜2烷基、鹵素原子、羥基、C,—4烷氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表C,—4垸基；X代表氧原子、硫原子、氨基；Y代表氫原子、d-2烷基、鹵素原子、羥基、羧基、C卜3酯基；Z代表氧原子、硫原子；R'，R2，R3，R4分別選自氫原子、C,—2烷基、鹵素原子、羥基、C卜4烷氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表d-4垸基；并且W和Y的位置可互換。據(jù)此，本發(fā)明提供了療效顯著、價(jià)格低廉、使用方便的升高白細(xì)胞的藥物。具體實(shí)施例方式本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，發(fā)現(xiàn)如式I所示的化合物，或者含有該類化合物的植物提取物，或者含有該類化合物的原料藥材具有明顯的升高白細(xì)胞的作用，因而可用于治療各種原因引起的白細(xì)胞減少，特別是有效改善放療、化療后病人白細(xì)胞減少的癥狀，有效對抗化療藥物引起的免疫抑制，提高機(jī)體的免疫反應(yīng)。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。式中，W代表如式VII所示的化合物:如本文所用，本發(fā)明化合物，或稱染料木素類化合物，或稱芹菜素類化合物，都是指式I化合物其中R5,R6,R7，R8，R9分別選自氫原子、C卜2烷基、鹵素原子、羥基、d-4烷氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表C,—4烷基；X代表氧原子、硫原子、氨基；Y代表氫原子、C,-2烷基、鹵素原子、羥基、羧基、d—3酯基；Z代表氧原子、硫原子；R'，R2，R3，R4分別選自氫原子、C卜2烷基、鹵素原子、羥基、C,—4烷氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表C卜4垸基；并且W和Y的位置可互換。優(yōu)選R'代表羥基、鹵素原子、d—4烷氧基，更優(yōu)選羥基、氟、氯、甲氧基，最優(yōu)選羥基。優(yōu)選R3代表羥基、鹵素原子、C卜4烷氧基，更優(yōu)選羥基、氟、氯、甲氧基，最優(yōu)選羥基。優(yōu)選R7代表羥基、鹵素原子、C卜4垸氧基，更優(yōu)選羥基、氟、氯、甲氧基，最優(yōu)選羥基。特別優(yōu)選R'代表羥基、氟、氯、甲氧基，R3代表羥基、氟、氯、甲氧基，以及R7代表羥基、氟、氯、甲氧基。式I化合物可由植物中提取或化學(xué)合成、半合成、生物轉(zhuǎn)化的方式獲得，例如從豆科植物染料木Ce/i5^s"'M"oria、大豆67/c_z'/e歷a,".Jyl/err.的禾中子、槐5"o;力araya;a^'caZ.的果實(shí)、黃羽扁豆Z"/i/7〃s2〃te〃51Z,式中，W代表如式VII所示的化合物:12的根、尼泊爾黃花木/^'/^a/^/ms/7epa7e/7W、(^bo1Z."o/的莖、傘形科植物旱斧^w'，^rareo7e/^rar.c^/7ce的葉中提取獲得的?？蓪⒑惺絀化合物的原料藥材或原料藥材的有效部位直接給藥；或者可將式I化合物的植物提取物進(jìn)行提純和加工，制成純凈形式的式I化合物、或各種形式的式I化合物的制劑后，用于給藥。本發(fā)明的化合物可以以藥學(xué)或生理學(xué)上可接受的鹽或酯的形式使用。這些鹽或酯包括(但不限于)與如下酸形成的鹽或酯氫氯酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富馬酸、馬來酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、羥乙磺酸。鹵化物的鹽同樣適用。其他鹽包括與堿金屬或堿土金屬(如鈉、鉀、鈣或鎂)形成的鹽，以及以其他常規(guī)的"前體藥物"形式存在的鹽(當(dāng)以這種形式給藥時(shí)，在體內(nèi)可轉(zhuǎn)化成活性部分)。含有式I化合物的提取物也可用于本發(fā)明。通常，在提取物中式I化合物的純度按重量計(jì)應(yīng)在0.05%-99.9%，更佳地為20-98%。用途和組合物本發(fā)明提供的如式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，或者含式I所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯的植物提取物，或者含式I所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯的原料藥材可用于治療白細(xì)胞減少其中R5，R6，R7，R8，R9分別選自氫原子、C卜2烷基、鹵素原子、羥基、C卜4垸氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表d—4烷基；X代表氧原子、硫原子、氨基；式中，W代表如式VII所示的化合物:Y代表氫原子、d—2垸基、鹵素原子、羥基、羧基、C,-3酯基；Z代表氧原子、硫原子；R'，R2，R3，R4分別選自氫原子、C卜2垸基、鹵素原子、羥基、C卜4垸氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表d—4垸基；并且W和Y的位置可互換。其中優(yōu)選的如式I所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯選自下組<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>。所述的白細(xì)胞減少是指由化學(xué)毒物、遺傳因素、放射線、細(xì)胞毒藥物、感染等因素引起的外周血白細(xì)胞數(shù)下降相關(guān)的疾病，包括白細(xì)胞減少癥、粒細(xì)胞減少癥、慢性粒細(xì)胞減少癥、周期性粒細(xì)胞減少癥。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)染料木素類或芹菜素類化合物能有效改善放、化療后病人白細(xì)胞減少的癥狀，能有效對抗放療以及化療藥物如環(huán)磷酰胺、卡鉑、氟尿嘧啶等引起的骨髓抑制，升高白細(xì)胞，提高機(jī)體的免疫反應(yīng)。該發(fā)現(xiàn)為本發(fā)明人的研究成果，國內(nèi)外文獻(xiàn)均未記載染料木素類化合物或芹菜素類化合物在治療白細(xì)胞減少方面的用途。所用活性成分的有效劑量可隨給藥模式和待治療疾病的嚴(yán)重程度而變化。然而，通常當(dāng)本發(fā)明的化合物每天以約0.5-500mg/kg動物體重的劑量給予時(shí)，能得到令人滿意的效果，較佳地每天以2-4次分開的劑量給予，或以緩釋形式給藥。對大部分大型哺乳動物而言，每天的總劑量約為l-100mg。適用于內(nèi)服的劑量形式，包含與固態(tài)或液態(tài)藥學(xué)上可接受的載體混合的約0.5-500mg的活性化合物?？烧{(diào)節(jié)此治療方案以達(dá)到最佳治療效果。例如，可根據(jù)治療狀況的需要，每天若干次分開給藥，或?qū)┝堪幢壤郎p少。通常，成人口服臨床劑量的范圍為l-1000mg/日，優(yōu)選為10-200mg/日，成人非口服的劑量為0.1-100mg/日，優(yōu)選1-100mg/日。在使用本發(fā)明化合物或含有該類化合物的提取物或含有該類化合物的原料藥材治療白細(xì)胞減少時(shí)，還可與其他治療劑聯(lián)用。例如與選自下組的一種或多種輔助活性成分聯(lián)用維生素B4、輔酶A、脫氧核糖核酸、鯊肝醇、利可君、升白安、肌苷、升白欣、集落刺激因子、重組人類粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，染料木素類或芹菜素類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯與這些輔助活性成分聯(lián)用可顯著提高療效。本發(fā)明還包括升高白細(xì)胞的方法，它包括給哺乳動物施用藥物有效量的本發(fā)明化合物。"藥學(xué)上可接受的載體"是適用于人和/或動物而無過度不良副反應(yīng)(如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))即有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比的物質(zhì)。"藥學(xué)上可接受的載體"是用于將本發(fā)明的染料木素化合物或其生理上可接受的鹽傳送給動物或人的藥學(xué)上或食品上可接受的溶劑、懸浮劑或賦形劑。載體可以是液體或固體。通常，當(dāng)本發(fā)明化合物用于上述用途時(shí)，它們可與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑混合制成不同給藥途徑的藥物劑型，如注射劑、注射用無菌粉末、片劑、膠囊、醑劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、酊劑、氣霧劑、粉霧劑、栓劑等。上述劑型中可經(jīng)口服給藥的劑型為片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、醑劑。固態(tài)載體包括淀粉、乳糖、磷酸氫鈣、微晶纖維素、蔗糖、白陶土、微粉硅膠、滑石粉、低取代羥丙基纖維素、羧甲基淀粉鈉、聚乙烯吡咯烷酮。而液態(tài)載體包括無菌水、乙醇、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)。在制備藥物組合物的過程中通常使用的佐劑包括調(diào)味劑、著色劑、防腐劑(如羥苯烷基丁酯、苯甲酸鈉、山梨酸)和抗氧化劑(如維生素E、維生素C、焦亞硫酸鈉和二丁基羥基甲苯)。上述劑型中可用于注射途徑給藥的劑型包括注射劑、注射用無菌粉末，它們是將藥物與一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑混合制成以供注射給藥的形式。溶劑包括無菌水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇。此外，還需加入抑菌劑(如苯甲醇、羥苯丁酯、硫柳汞)、等滲調(diào)節(jié)劑(如氯化鈉、葡萄糖)、助懸劑(如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素)、增溶劑(吐溫-SO、卵磷酯)、抗氧化劑(如維生素E、維生素C、焦亞硫酸鈉)和填充劑(如乳糖、甘露醇)。上述劑型中可經(jīng)胃腸道外途徑給藥的有氣霧劑、粉霧劑、栓劑。粉霧劑中適合的載體實(shí)例包括乳糖、葡聚糖、阿拉伯膠、甘露、葡萄糖和十二烷基硫酸鈉。氣霧劑中適合的溶劑為無菌水、乙醇、植物油、油酸。適合的拋射劑為三氯一氟甲垸、二氯二氟甲烷、丙烷、異丁烷、二氧化碳、氮?dú)狻Ｋ▌┑闹苽淇蓪⑺幬锱c一種適合的無刺激性賦形劑混合而成，賦形劑包括可可脂、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000、羥苯乙酯、甘油。從易于制備和給藥的立場看，優(yōu)選的藥物組合物是固態(tài)組合物，尤其是片劑和固體填充或液體填充的膠囊。優(yōu)選口服給藥。本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本案說明書所揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所揭示的各個(gè)特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所揭示的特征僅為均等或相似特征的一般性例子。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于1、首次揭示染料木素類或芹菜素類化合物具有明顯的升高白細(xì)胞的作用，因而可用于治療各種原因引起的白細(xì)胞減少，特別是有效改善放療、化療后病人白細(xì)胞減少的癥狀，有效對抗化療藥物引起的免疫抑制，提高機(jī)體的免疫反應(yīng)。2、所述的染料木素類或芹菜素類化合物可以從天然植物中獲得，對人體沒有毒副作用。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分比和份數(shù)按重量計(jì)。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。實(shí)施例l三種染料木素類化合物的合成路線1染料木素類似物l(AG-1，式III)式m化合物的制備方法1、無水無氧處理的50ml的圓底三頸燒瓶中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加入新蒸餾的三氟化硼乙醚25ml、間苯二酚(5mmo1)和對羥基苯乙酸(5mmo1)，油浴加熱至60-90'C，電磁攪拌，反應(yīng)8-10小時(shí)后，冷卻至室溫；2、加入8ml的無水N，N-二甲基甲酰胺，重新加熱至5(TC，緩慢加入l.2ml甲垸磺酰氯與2mlN，N-二甲基甲酰胺的混合液，繼續(xù)加熱至60-7(TC，反應(yīng)8-10小時(shí)，冷卻至室溫；3、將反應(yīng)產(chǎn)物分批傾倒于冷卻的100-200ml的10。/。乙酸鈉水溶液中，過濾，收集固體粗產(chǎn)物，柱層析得純品(式III化合物)，產(chǎn)率為60-75%。染料木素類似物2(AG-2，式IV)式IV化合物的制備方法1、無水無氧處理的50ml的圓底三頸燒瓶中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加入新蒸餾的三氟化硼乙醚25ml、間苯三酚(5關(guān)o1)和苯乙酸(5mmo1)，油浴加熱至60-90°C，電磁攪拌，反應(yīng)8-IO小時(shí)后，冷卻至室溫；2、加入8ml的無水N，N-二甲基甲酰胺，重新加熱至5(TC，緩慢加入l.2ml甲烷磺酰氯與2mlN，N-二甲基甲酰胺的混合液，繼續(xù)加熱至60-7(TC，反應(yīng)8-10小時(shí)，冷卻至室溫；3、將反應(yīng)產(chǎn)物分批傾倒于冷卻的100-200ml的10。/。乙酸鈉水溶液中，過濾，收集固體粗產(chǎn)物，柱層析得純品(式IV化合物)，產(chǎn)率為60-75%。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>染料木素類似物3(AG-3，式V)式V化合物的制備方法1、無水無氧處理的50ml的圓底三頸燒瓶中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加入新蒸餾的三氟化硼乙醚25ml、間苯三酚(5順o1)和對氯苯乙酸(5mmo1)，油浴加熱至60-90。C，電磁攪拌，反應(yīng)8-IO小時(shí)后，冷卻至室溫；2、加入8ml的無水N，N-二甲基甲酰胺，重新加熱至50。C，緩慢加入l.2ml甲垸磺酰氯與2mlN，N-二甲基甲酰胺的混合液，繼續(xù)加熱至60-7CTC，反應(yīng)8-10小時(shí)，冷卻至室溫；3、將反應(yīng)產(chǎn)物分批傾倒于冷卻的100-200ml的10。/。乙酸鈉水溶液中，過濾，收集固體粗產(chǎn)物，柱層析得純品(式V化合物)，產(chǎn)率為60-75%。實(shí)施例2染料木素類化合物對環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少的治療作用實(shí)驗(yàn)動物雄性SPF級C57BL/6小鼠80只，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司，體重為22-24g。SPF級動物房飼養(yǎng)，12小時(shí)光照/12小時(shí)黑暗，自由攝取飼料和水。實(shí)驗(yàn)藥品染料木素(式n化合物)，純度為98%，購自南京青澤醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司；AG-1、AG-2、AG-3(實(shí)施例l制備得到)；利可君為江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；注射用環(huán)磷酰胺，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)方法1、造模方法動物隨機(jī)分為8組，除正常對照組外，其余各組小鼠均給予腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg，每日1次，連續(xù)3天，造成白細(xì)胞減少癥模型。2、給藥情況(1)正常組，(2)模型組，(1)(2)組小鼠分別給予體積為O.lml/10g的生理鹽水；(3)(4)組分別為利可君高、低劑量組小鼠分別給予劑量為40mg/kg、10mg/kg的利可君；(5)(6)(7)(8)組分別為染料木素組、AG-1組、AG-2組、AG-3組給藥劑量均為100mg/kg。以上各組均為造模前提前3天灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10天。本實(shí)驗(yàn)通過環(huán)磷酰胺造模前提前3天給藥，從而使藥物在血液中的濃度明顯升高，達(dá)到治療有效量。末次給藥24小時(shí)后，摘眼球取血，檢測血中白細(xì)胞總數(shù)(WBC),并計(jì)算升白率=[(給藥組白細(xì)胞數(shù)-模型組白細(xì)胞數(shù))/模型組白細(xì)胞數(shù)]X100%,結(jié)果見表l。表l染料木素類化合物對環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少的影響(X±SD,n=10)組別數(shù)量(只)劑量(mg/kg)WBC(X109/L)升白率(％)正常組10—7.78±1.26—模型組10—2.Ol士O.53A-利可君高劑量組10402.30±0.8514.43利可君低劑量組10104.ll士l.24*104.48染料木素組101004.89±1.12*143.28AG-l組101003.81±1.35*89.55<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>*表示;7<0.05,與模型組相比，有顯著性差異；a表示p〈0.05，與正常組相比，有顯著性差異。結(jié)果表明，模型組小鼠的白細(xì)胞數(shù)(2.01±0.53)與正常組(7.78±1.26)相比具有顯著差異(;X0.05)，表明造模成功。染料木素組、AG-1組、AG-2組、AG-3組小鼠的白細(xì)胞數(shù)(4.89±1.12，3.81±1.35，4.07±1.61，4.42±1.12)明顯高于模型組(2.Ol土O.53)，差異有顯著性(/K0.05)。而陽性藥-利可君低劑量組的藥效反而優(yōu)于高劑量組，說明其安全性有待進(jìn)一步考察。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，染料木素類化合物對環(huán)磷酰胺所致外周血白細(xì)胞數(shù)減少有明顯的保護(hù)、治療作用，且未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用，安全性好。實(shí)施例3芹菜素對環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少的治療作用實(shí)驗(yàn)動物雄性SPF級C57BL/6小鼠60只，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司，體重為18-22g。SPF級動物房飼養(yǎng)，12小時(shí)光照/12小時(shí)黑暗，自由攝取詞料和水。實(shí)驗(yàn)藥品芹菜素(式VI化合物)，純度為98%，購自南京青澤醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司；鯊肝醇為江蘇鵬鷂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；注射用環(huán)磷酰胺，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)方法1、造模方法動物隨機(jī)分為6組，除正常對照組外，其余各組小鼠均給予腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg，每日1次，連續(xù)3天，造成白細(xì)胞減少癥模型。2、給藥情況(1)正常組，(2)模型組，(1)(2)組小鼠分別給予體積為O.lml/10g的蒸餾水；(3)鯊肝醇組小鼠給予劑量為100mg/kg的鯊肝醇；(4)(5)(6)組分別為芹菜素高、中、低劑量組小鼠分別給予劑量為100mg/kg、25mg/kg、5mg/kg的芹菜素。以上各組均為造模前提前3天灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10天。本實(shí)驗(yàn)通過環(huán)磷酰胺造模前提前3天給藥，從而使藥物在血液中的濃度明顯升高，達(dá)到治療有效量。末次給藥24小時(shí)后，摘眼球取血，并檢測血中白細(xì)胞總數(shù)(WBC)，并計(jì)算升白率吋(給藥組白細(xì)胞數(shù)-模型組白細(xì)胞數(shù))/模型組白細(xì)胞數(shù)]xiooy。，結(jié)果見表2。表2開菜素對環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少的影響(X土SD，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>結(jié)果表明，模型組小鼠的白細(xì)胞數(shù)(2.12±0.58)與正常組(7.23±2.31)相比具有顯著差異(/X0.05)，表明造模成功。芹菜素高、中劑量組小鼠的白細(xì)胞數(shù)(4.88±1.87，3.98±1.56)明顯高于模型組(2.12±0.58)，差異有顯著性(/K0.05)。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芹菜素對環(huán)磷酰胺所致外周血白細(xì)胞數(shù)減少有明顯的保護(hù)、治療作用。實(shí)施例4染料木素類化合物對6°(:0-y所致小鼠骨髓損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)動物雄性SPF級ICR小鼠80只，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司，體重為22-24g。SPF級動物房飼養(yǎng)，12小時(shí)光照/12小時(shí)黑暗，自由攝取飼料和水。實(shí)驗(yàn)藥品染料木素(式II化合物)，純度為98%，購自南京青澤醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司；AG-1、AG-2、AG-3(實(shí)施例l制備得到)；利可君為江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)方法1、造模方法將小鼠隨機(jī)分為8組，除正常對照組動物外，其余小鼠用，o-Y射線照射一次，劑量為7.50Gy(劑量率為450倫/分)。2、給藥情況(1)正常對照組，(2)模型組，(1)(2)組小鼠分別給予體積為0.lml/10g的生理鹽水；(3)(4)組分別為利可君高、低劑量組小鼠分別給予劑量為40mg/kg、10mg/kg的利可君；(5)(6)(7)(8)組分別為染料木素組、AG-1組、AG-2組、AG-3組給藥劑量均為100mg/kg。以上各組均為照射前7天灌胃給藥，每日1次，連續(xù)14天。末次給藥24小時(shí)后，摘眼球取血，檢測血中白細(xì)胞數(shù)(WBC)，并計(jì)算升白率=[(給藥組白細(xì)胞數(shù)-模型組白細(xì)胞數(shù))/模型組白細(xì)胞數(shù)]X100。/。，結(jié)果見表3。表3染料木素類"二合物對，0-Y照射損傷小鼠血液學(xué)的影響(X士SD，n=10)組別數(shù)量(只)劑量(mg/kg)WBC(xio7l)升白率(%)正常組10—8.72±2.13—模型組10一2.87±0,41A一利可君高劑量組10402.98±1.263.83利可君低劑量組10105.51±1.12*91.99染料木素組101006.23±1.98*117.07AG-l組101006.41±1.83*123.34AG-2組101005.18±1.59*80.49AG-3組101005.65±1.71*96.86*表示^〈0.05，與模型組相比，有顯著性差異；&表示^<0.05,與正常組相比，有顯著性差異。結(jié)果顯示，染料木素組、AG-l組、AG-2組、AG-3組與模型組相比有極顯著性差異，并且療效明顯優(yōu)于陽性對照藥-利可君。表明染料木素類化合物對，o-Y照射所致外周白細(xì)胞減少有明顯的保護(hù)作用。實(shí)施例5^菜素對6"Co-y所致小鼠骨髓損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)動物雄性SPF級C57BL/6小鼠60只，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司，體重為18-22g。SPF級動物房飼養(yǎng)，12小時(shí)光照/12小時(shí)黑暗，自由攝取飼料和水。實(shí)驗(yàn)藥品芹菜素(式VI化合物)，純度為98%，購自南京青澤醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司；鯊肝醇為江蘇鵬鷂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)方法1、造模方法動物隨機(jī)分為6組，除正常對照組外，其余各組動物均用，0-Y射線照射一次，劑量為7.50Gy(劑量率為450倫/分)。2、給藥情況(1)正常對照組，(2)模型組，(1)(2)組小鼠分別給予體積為O.lml/10g的蒸餾水；(3)鯊肝醇組小鼠給予劑量為100mg/kg的鯊肝醇；(4)(5)(6)組分別為芹菜素(式VI化合物)高、中、低劑量組小鼠分別給予劑量為100mg/kg、25mg/kg、5mg/kg的芹菜素。以上各組均為照射前7天灌胃給藥，每日1次，連續(xù)14天。末次給藥24小時(shí)后，摘眼球取血，檢測血中白細(xì)胞數(shù)(WBC)，并計(jì)算升白率=[(給藥組白細(xì)胞數(shù)-模型組白細(xì)胞數(shù))/模型組白細(xì)胞數(shù)]xiooy。，結(jié)果見表4。表4芹菜素對，0-Y照射損傷小鼠血液學(xué)的影響(X±SD,n=10)組別數(shù)量(只)齊!j量(mg/kg)wbc(xio7l)升白率(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>*表示/7〈0.05,與模型組相比，有顯著性差異；a表示p〈0.05,與正常組相比，有顯著性差異。結(jié)果顯示，芹菜素高、中劑量組與模型組相比有極顯著性差異，并且療效明顯優(yōu)于陽性對照藥-鯊肝醇組。芹菜素對6°(:0-Y照射所致外周白細(xì)胞減少有明顯的治療作用。實(shí)施例6染料木素類化合物或芹菜素抵抗環(huán)磷酰胺對小鼠胸腺和脾臟的損傷作用實(shí)驗(yàn)動物雄性SPF級C57BL/6小鼠90只，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司，體重為22-24g。SPF級動物房飼養(yǎng)，12小時(shí)光照/12小時(shí)黑暗，自由攝取飼料和水。實(shí)驗(yàn)藥品染料木素(式n化合物)，純度為98%，購自南京青澤醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司；芹菜素(式VI化合物)，純度為98%，購自南京青澤醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司；AG-1、AG-2、AG-3(實(shí)施例l制備得到)；利可君為江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；注射用環(huán)磷酰胺，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)方法1、造模方法動物隨機(jī)分為9組，除正常對照組外，其余各組小鼠均給予腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg，每日1次，連續(xù)3天，造成胸腺、脾臟萎縮模型；2、給藥情況(1)正常對照組，(2)模型組，(1)(2)組小鼠分別給予體積為O.lml/10g的生理鹽水；(3)(4)組分別為利可君高、低劑量組小鼠分別給予劑量為40mg/kg、10rag/kg的利可君;(5)(6)(7)(8)(9)組分別為染料木素組、AG-1組、AG-2組、AG-3組、芹菜素組給藥劑量均為100mg/kg。以上各組均為造模前提前3天灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10天。本實(shí)驗(yàn)通過環(huán)磷酰胺造模前提前3天給藥，從而使藥物在血液中的濃度明顯升高，達(dá)到治療有效量。末次給藥24小時(shí)后，眼眶放血處死動物，稱體重，解剖取胸腺和脾臟，并用電子天平精密稱重，計(jì)算各組動物的胸腺指數(shù)(胸腺指數(shù)=胸腺重量/體重)和脾指數(shù)(脾指數(shù)=脾重量/體重)。結(jié)果見表5。表5染料木素類化合物或芹菜素對免疫功能低下小鼠的脾、胸腺指數(shù)的影響(X土SD，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>*表示/3<0.05，與模型組相比，有顯著性差異；a表示/K0.05,與正常組相比，有顯著性差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腹腔注射環(huán)磷酰胺后，與正常對照組相比，模型組小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)顯著降低，表明造模成功。染料木素、AG-1、AG-2、AG-3、芹菜素可顯著升高免疫功能低下小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)，且差異具有顯著性(/K0.05)。因此，染料木素類化合物或芹菜素能夠顯著對抗免疫抑制劑引起的免疫器官萎縮，對免疫器官具有保護(hù)作用，提示染料木素類化合物或芹菜素可改善免疫抑制小鼠的非特異免疫功能。實(shí)施例7制備片劑利用常規(guī)技術(shù)，混合以下組分，然后直接壓片，制備片劑形式的藥物組合物，其配方如下實(shí)施例8制備注射劑<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>注射用水加至1000ml①將亞硫酸氫鈉加于500ml注射用水中，加入羧甲基纖維素鈉，混勻，浸泡過夜(24小時(shí))，全溶后，用210目尼龍布過濾；②將溶液①水浴加熱，加入吐溫-80，混勻；③至水浴沸騰，加入染料木素，混勻，繼續(xù)加熱30分鐘，取出冷卻至室溫，G3垂熔玻璃漏斗過濾；④加注射用水至1000ml，混勻，灌封，用10(TC30分鐘滅菌，得到注射劑。實(shí)施例9組合物的制備利用常規(guī)技術(shù)，混合以下組分，然后直接壓片，制備片劑形式的藥物組合物，其配方如下-<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。權(quán)利要求1.一種如式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯在制備預(yù)防或治療白細(xì)胞減少的組合物中的用途，式中，W代表如式VII所示的化合物其中R5，R6，R7，R8，R9分別選自氫原子、C1-2烷基、鹵素原子、羥基、C1-4烷氧基、乙酰氧基、NR″2、或硝基，其中R″代表C1-4烷基；X代表氧原子、硫原子、氨基；Y代表氫原子、C1-2烷基、鹵素原子、羥基、羧基、C1-3酯基；Z代表氧原子、硫原子；R1，R2，R3，R4分別選自氫原子、C1-2烷基、鹵素原子、羥基、C1-4烷氧基、乙酰氧基、NR″2、或硝基，其中R″代表C1-4烷基；并且W和Y的位置可互換。2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的白細(xì)胞減少選自下組白細(xì)胞減少癥、粒細(xì)胞減少癥；所述的粒細(xì)胞減少癥選自慢性粒細(xì)胞減少癥或周期性粒細(xì)胞減少癥。3.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的組合物能預(yù)防或治療骨髓抑制引起的白細(xì)胞減少。4.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的如式I所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯選自下組式中，W代表如式VII所示的化合物:;或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>5.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥學(xué)上可接受的鹽或酯是如式I所示的化合物與選自下組的酸所形成氫氯酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富馬酸、馬來酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、或羥乙磺酸；所述的藥學(xué)上可接受的鹽是如式I所示的化合物與選自下組的堿或堿土金屬所形成鈉、鉀、鈣或鎂。6.—種如式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯在制備預(yù)防或治療免疫抑制的組合物中的用途，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>式中，w代表如式vn所示的化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中R5，RR7，R8，R9分別選自氫原子、C卜2烷基、鹵素原子、羥基、C卜4烷氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表C,—4垸基；X代表氧原子、硫原子、氨基；Y代表氫原子、C卜2垸基、鹵素原子、羥基、羧基、C卜3酯基；Z代表氧原子、硫原子；R'，R2，R3，R4分別選自氫原子、C卜2垸基、鹵素原子、羥基、C卜4垸氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表C卜4烷基；并且W和Y的位置可互換。7.如權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于，所述的組合物能預(yù)防或治療白細(xì)胞減少引起的免疫抑制。8.如權(quán)利要求1或6所述的用途，其特征在于，所述的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯來源于植物或原料藥材，所述的植物物或原料藥材選自豆科植物或傘形科植物；所述的豆科植物優(yōu)選染料木、大豆、槐、黃羽扁豆或尼泊爾黃花木；所述的傘形科植物優(yōu)選旱芹。9.一種組合物，其特征在于，它含有(a)作為主要活性成分的0.05-99機(jī)％的如式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中R5，R6,R7，R8，R9分別選自氫原子、d-2垸基、囪素原子、羥基、C卜4烷式中，W代表如式VII所示的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表d—4烷基；X代表氧原子、硫原子、氨基；Y代表氫原子、C卜2烷基、鹵素原子、羥基、羧基、d—3酯基；Z代表氧原子、硫原子；R'，R2,R3,R4分別選自氫原子、C卜2垸基、鹵素原子、羥基、C,—4烷氧基、乙酰氧基、NR〃2、或硝基，其中R〃代表C卜4烷基；并且W和Y的位置可互換；(b)有效量的選自下組的一種或多種含量為0.0001—20wtG/。的輔助活性成分維生素B4、輔酶A、脫氧核糖核酸、鯊肝醇、集落刺激因子、重組人類粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)、粒細(xì)胞一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF);和(c)藥學(xué)上可接受的載體。10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其特征在于，所述的組合物是藥物組合物、食品組合物或飲食補(bǔ)充劑；所述的組合物選自片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、口服液、醑劑、酊劑、氣霧劑、粉霧劑、注射劑、注射用無菌粉末、栓劑。全文摘要本發(fā)明公開了一種如式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯的用途，即被用于制備預(yù)防或治療白細(xì)胞減少的組合物。本發(fā)明還公開其在預(yù)防或治療免疫抑制方面的用途。文檔編號A61K31/352GK101444499SQ20071017098公開日2009年6月3日申請日期2007年11月26日優(yōu)先權(quán)日2007年11月26日發(fā)明者強(qiáng)俞申請人:上海安普生物科技有限公司