專利名稱：一種野菊花有效部位組合物及其制備方法和應(yīng)用以及含其的藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種野菊花有效部位組合物及其制備方法和應(yīng)用以及含其的藥 物制劑。
背景技術(shù)：
高血壓是世界最常見的心血管疾病，也是最大的流行病之一，常引起心、 腦、腎等臟器的并發(fā)癥，嚴重危害著人類的健康，因此提高對高血壓病的認識，
對早期預(yù)防、及時治療有極其重要的意義。我國成人高血壓患病率為18.8%，全 國大城市成年人群的高血壓患病率為20.4%，估計全國現(xiàn)患病人數(shù)為1.6億，比 1991年增加7000多萬，而人群高血壓知曉率、治療率和控制率僅為30.2%、24.7% 和6.1%。這些數(shù)字表明我國己成為世界上受高血壓危害最嚴重的國家之一。
另外，高血壓病是發(fā)生中風(fēng)最重要的危險因素之一，在部分中風(fēng)患者中早 有高血壓或高血壓病史，由于未出現(xiàn)中風(fēng)先兆癥狀而疏于預(yù)防。通過對高血壓 病血液流變學(xué)檢測，發(fā)現(xiàn)高血壓病患者血液處于高度的濃、粘、凝聚狀態(tài)，提 示此類患者的血液流動性下降、流變性異常、凝固性增高。因而在治療高血壓 病正規(guī)降壓的同時，對合并高粘血癥要積極采取降粘、去纖解聚、溶栓治療， 有利于高血壓病合并高粘血癥的防治，以預(yù)防和減少心肌梗塞與腦缺血性中風(fēng) 的發(fā)生。
中、西醫(yī)治療高血壓各有優(yōu)勢，亦各有局限。臨床實驗證明，中西藥合用療效優(yōu)于單用西藥或單用中藥。中醫(yī)治療根本原則以平衡陰陽、調(diào)整氣血運行 為主。 一般認為，中藥近期療效較差，而西藥近期療效較好，但毒、副作用較 大。
常用西藥有以下幾類利尿劑、卩-阻滯劑、鈣拮抗劑(CCB)、血管緊張素 轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)、血管緊張素II受體阻滯劑、oi-阻滯劑等。西藥需終生服 用，服藥后血壓易反彈、波動產(chǎn)生副作用；西藥治療高血壓能很快使血壓下降， 甚至恢復(fù)正常，但在改善頭暈、頭痛等癥狀上效果欠佳；采用西藥治療高血壓 時，經(jīng)常有為達到目標血壓而頻繁加減藥量等情況，因此也會出現(xiàn)血壓波動幅 度較大的現(xiàn)象。眾多因素讓多數(shù)高血壓患者難以下定決心堅持服用西藥，而把 目光投向傳統(tǒng)中醫(yī)藥。
而中醫(yī)中藥是以辨證為基礎(chǔ)的，強調(diào)整體治療，癥狀改善比較理想。如當(dāng) 高血壓患者出現(xiàn)頭痛、頭暈、頭脹、失眠、煩躁等癥狀時，中醫(yī)認為是由于肝 腎陰虛，陰虛陽亢，陽亢化風(fēng)所致。通過清熱瀉火、平肝熄風(fēng)的治療，往往在 血壓下降的同時，上述癥狀也隨之改善。中藥降壓作用緩和，穩(wěn)定血壓效果較 好，如野菊花、葛根、杜仲等，尤其適用于早期、老年高血壓患者，較重的高 血壓病配合中藥治療，也可防止血壓較大波動。
中西藥合用后，西藥既可發(fā)揮近期療效高的長處，又由于用量相應(yīng)減少而 減輕其毒、副作用。中藥的降壓作用可提高近期療效，又具有遠期降壓作用。
故中西藥合用治療高血壓，具有見效快、療效高、副作用少的優(yōu)點?？梢娭形?藥合理聯(lián)用，可以減輕或消除副作用，達到"減副增效"的目的。
野菊花為菊科植物野菊(Chrysanthemum indicum L)的干燥頭狀花序，性涼， 味苦、辛，歸肺肝二經(jīng)，具有疏風(fēng)清熱、消腫解毒、抗感染、抗病毒的功效。其化學(xué)成分包括萜類和揮發(fā)油，主要為單萜類、倍半萜類及其氧衍生物、三 萜類化合物和內(nèi)酯、烴類等脂肪族化合物，其中有環(huán)化小茴香烯、碳垸、1,2，4-三乙酰氧基苯、亞油酸、石竹烯氧化物、姜烯、石竹烯、胡椒酮、莰酮、P-蒎烯、 環(huán)己烯、1,5，5-三甲基-6-亞甲基-環(huán)己烯、苯并環(huán)庚三烯、肉豆蔻酸、沉香螺醇、 廣藿香醇等；黃酮類化合物，主要為蒙花苷、木犀黃酮苷、刺槐素苷、金合歡 素-7-0-a-吡喃鼠李糖基(1—6)-P-D-吡喃葡萄糖苷、金合歡素-7-0-a-吡喃鼠李糖 基(1—6) [2-0-乙?；?P-D-吡喃葡萄糖基(1—2)]-卩-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、 槲皮素、洋芹素等；其他成分有山崳酸甘油酯、棕櫚酸、多糖、P-胡蘿卜素、蛋 白質(zhì)、氨基酸、嘌呤、膽堿、水蘇堿、鞣質(zhì)、維生素和葉綠素等。
野菊花藥理作用包括抗病原微生物作用、對心血管系統(tǒng)的作用、降壓作 用、對血小板凝聚的影響、降低血粘度、抗炎、免疫作用、抗氧化作用等，臨 床多用于治療各種急慢性感染性疾病(包括急慢性呼吸道感染、泌尿生殖系統(tǒng)感 染、急性乳腺炎、急性淋巴管炎以及急性感染性肝炎等疾病)，亦用于治療腫瘤、 高血壓病和高脂血癥，以及對感冒、流行性腦膜炎的預(yù)防。
研究發(fā)現(xiàn)天然來源的野菊花黃酮類化合物分子量小，能被人體迅速吸收， 能通過血腦屏障，能進入脂肪組織，具有如下作用對擴張冠狀動脈、擴張毛 細血管、疏通微循環(huán)，可用于治療冠心病、高血壓；以及抗癌、抗腫瘤、抗炎 鎮(zhèn)痛、抑制血小板凝聚、抑菌抗病毒、降血糖、免疫調(diào)節(jié)、治療骨質(zhì)疏松、抗 氧化、抗衰老、抗輻射等作用。文獻報道野菊花揮發(fā)油也具有清熱解毒、降壓 作用。劉菊芳等研究發(fā)現(xiàn)野菊花內(nèi)酯、黃酮苷等水難溶物質(zhì)，對麻醉貓、正 常狗均有一定的降壓效果，而且降壓作用緩和、持久，是較理想的降血壓藥物。
通過對現(xiàn)有文獻和專利進行檢索，發(fā)現(xiàn)對于野菊花有效部位的提取大多采用單獨提取水溶性部位或脂溶性部位，而未考慮到兩種有效部位的協(xié)同作用。 野菊花水溶性部位的提取多采用水或含水乙醇煎煮或回流，水溶性部位主要為 黃酮類物質(zhì)。野菊花脂溶性部位的提取多采用水蒸氣蒸餾法、減壓蒸餾法、溶 劑萃取法等，脂溶性部位主要為萜類和揮發(fā)油物質(zhì)。這些提取方法通常工藝復(fù) 雜、耗時、產(chǎn)品純度不高、對環(huán)境污染大，而且易殘留有害物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種新的野菊花有效部位組合物及其制 備方法。該有效部位組合物所含的藥效成分更全面，充分發(fā)揮了野菊花水溶性 和脂溶性有效成分的綜合藥理效果，降壓作用緩和持久、穩(wěn)定血壓效果較好， 明顯優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)制備的只考慮到單獨有效部位的野菊花提取物。
本發(fā)明的野菊花有效部位組合物可由下述方法制得
(1) 取100份野菊花，將其中1~100份野菊花進行超臨界流體萃取，收集 萃取液制得野菊花有效部位1;
(2) 將剩下的野菊花，或者剩下的野菊花與步驟(1)經(jīng)超臨界流體萃取后 的藥渣的混合物，加水煎煮，將煎煮液濃縮，加入體積百分比90~95%乙醇，靜 置沉淀，濾取上清液，濃縮至清膏，加入輔料，干燥，或者直接將清膏進行干 燥，制得野菊花有效部位2;
(3) 將野菊花有效部位1和野菊花有效部位2混合，即可制得本發(fā)明的野 菊花有效部位組合物。
步驟(1)中，所述的超臨界流體萃取的條件較佳的為以超臨界狀態(tài)的二 氧化碳為萃取溶劑，萃取壓力為8-25MPa、萃取溫度為30~50°C、解析壓力為5~9 MPa、解析溫度為30 55°C、萃取時間為1~2.5小時、二氧化碳流量為 160 200kg/小時；
更佳的為以超臨界狀態(tài)的二氧化碳為萃取溶劑，萃取條件萃取壓力為
10 20MPa、萃取溫度為35~45 °C、解析壓力為6 8MPa、解析溫度為35~50°C、 萃取時間為1.5~2小時、二氧化碳流量為170 190kg/小時；
最佳的為以超臨界狀態(tài)的二氧化碳為萃取溶劑，萃取條件萃取壓力為
15MPa、萃取溫度為38°C、解析壓力為7MPa、解析溫度為35°C、萃取時間為 1.5小時、二氧化碳流量為180kg/小時。
步驟(1)中，取IOO份野菊花，較佳的將其中IO份野菊花進行超臨界流 體萃取，收集萃取液制得野菊花有效部位l。
步驟(2)中，較佳的水提的條件為加水煎煮2或3次，每次1 2小時， 合并煎液，濃縮至0.5 1.5g生藥/ml藥液，加入藥液體積1 2倍量的體積百分 比卯~95%乙醇，攪勻，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至65 75'C下相對密度為 1.25~1.3的清膏，加入輔料，干燥，或者直接將清膏進行干燥，制得野菊花有效 部位2;
更佳的水提的條件為加水煎煮2或3次，每次1 1.5小時，合并煎液， 濃縮至0.5 lg生藥/ml藥液，加入藥液體積1 1.5倍量的體積百分比90~92% 乙醇，攪勻，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至65 75'C下相對密度為1.25~1.3 的清膏，加入輔料，干燥，或者直接將清膏進行干燥，制得野菊花有效部位2;
最佳的水提的條件為加水煎煮2次，每次1.5小時，合并煎液，濃縮至l g生藥/ml藥液，加入藥液體積1倍量的體積百分比90%乙醇，攪勻，靜置沉淀， 濾取上清液，濃縮至65~75°(:下相對密度為1.3的清膏，加入輔料，干燥，或者直接將清膏進行干燥，制得野菊花有效部位2。
本發(fā)明由上述的制備方法制得的野菊花有效部位組合物可單用或與其它藥 物配伍后，可與藥學(xué)上可接受的輔料混合，采用常規(guī)方法制成各種口服制劑， 如片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、栓劑等，較佳的為臨床上可接受的普通片劑、 緩釋片、分散片、緩釋膠囊及滴丸等。
為了使片劑成型，可使用本領(lǐng)域任何已知的并廣泛使用的賦形劑。例如， 填充劑，如乳糖、淀粉、糊精、結(jié)晶性纖維素等；粘合劑，如糖漿、淀粉漿、 明膠漿、阿拉伯膠漿、西黃蓍膠漿、聚乙烯吡咯垸酮等；崩解劑，如淀粉、羧 甲基淀粉鈉、羥丙基淀粉、改良淀粉、微晶纖維素等；崩解抑制劑，如甘油三 硬脂酸酯、椰子油和氫化油；潤濕劑，如水、乙醇、甘油等；以及助流劑，如 改良淀粉、滑石粉，硬脂酸鹽、硼酸粉、聚乙二醇等。如果需要的話，可采用 通常的包衣材料進行包衣，制成為糖衣片、薄膜衣片劑。
為了使滴丸劑成型，可使用本領(lǐng)域任何己知的并廣泛使用的賦形劑，例如， 基質(zhì)，如硬脂酸、蟲蠟、氫化油、聚乙二醇類、甘油明膠等；冷凝液，如液狀 石蠟、植物油、甲基硅油、水等。
為了使栓劑成形，可使用本領(lǐng)域任何已知并廣泛使用的基質(zhì)，例如，可可 豆脂、單合成脂肪酸酯、甘油明膠、聚乙二醇類等。
本發(fā)明的野菊花有效部位組合物在藥物制劑中的含量無特殊限制，可在很 寬的范圍內(nèi)進行選擇，通?？蔀橘|(zhì)量百分比10 50%。
本發(fā)明中，所述的藥物組合物的給藥方法沒有特殊限制?？筛鶕?jù)病人年齡、 性別和其它條件及癥狀，選擇各種劑型的制劑給藥。本發(fā)明中，可以根據(jù)服藥 方法、病人年齡、性別和其它條件以及癥狀適當(dāng)?shù)剡x擇用藥劑量。通常的給藥劑量可為約5mg野菊花有效部位組合物/kg體重/天。 本發(fā)明所用試劑及原料均市售可得。
本發(fā)明還進一步涉及本發(fā)明的野菊花有效部位組合物在制備降壓藥物中的 應(yīng)用。
本發(fā)明的積極進步效果在于本發(fā)明采用超臨界流體萃取和水提相結(jié)合的 方法來制備野菊花有效部位組合物，更全面地收集野菊花具有降壓作用的有效 部位，包括黃酮類和萜類物質(zhì)，充分發(fā)揮了水溶性和脂溶性有效部位的結(jié)合藥 效。本發(fā)明所制備的野菊花有效部位組合物的降壓作用緩和持久、穩(wěn)定血壓效 果較好，單用或與其它有效成分配伍后所制成的制劑是較理想的降血壓藥物， 尤其是與西藥合用后，既可發(fā)揮西藥近期療效高的長處，又可體現(xiàn)中藥提高近
期降壓療效而并具有遠期降壓作用的優(yōu)勢，從而達到"減副增效"的目的。藥效 實驗表明本發(fā)明的野菊花有效部位組合物所制成的制劑在降壓藥效方面明顯 優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)制備的野菊花水提取物所制成的制劑，驗證了本發(fā)明的進步之處。 本發(fā)明的制備方法速度快、提取率高、產(chǎn)品純度好、流程簡單、能耗低、過程 無有機溶劑殘留，克服了現(xiàn)有的野菊花提取技術(shù)不全面、提取率低、能耗較高 的不足。
具體實施例方式
下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所 述的實施例范圍之中。
實施例l野菊花有效部位組合物的制備 共計100kg的野菊花按下方法提取取lkg的野菊花放入超臨界萃取裝置萃取釜中，以超臨界狀態(tài)的二氧化碳為
萃取溶劑，萃取條件萃取壓力為8MPa、萃取溫度為45"C、解析壓力為5MPa、 解析溫度為45"C、萃取時間為2小時、二氧化碳流量為190kg/小時，收集萃取液 得野菊花有效部位l。
另取剩余99kg野菊花，與經(jīng)過超臨界萃取后的藥渣混勻，加水煎煮2次，每 次1.5小時，合并煎液，濃縮至1.5g生藥/ml藥液，加入相當(dāng)于藥液體積l倍量的體 積百分比卯％乙醇，攪勻，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至相對密度為1.3(65 75'C 測)的清膏，加入清膏重量50%的淀粉，拌勻，干燥得野菊花有效部位2。
將野菊花有效部位1和野菊花有效部位2混勻即為本發(fā)明野菊花的有效部位 組合物。
檢測方法為
氣相色譜-質(zhì)譜條件Finnigan Voyager氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；VF-5MS (30 m x0.25mm,0.25nm)彈性石英毛細管柱；柱溫初始5(TC (保持2min)，以l(TC/min 的速率升至30(TC (保持5min);汽化溫度250°C;載氣為氦氣；分流比200:1; 進樣量l.Onl;流量1.0ml/min。電子轟擊(EI)離子源，電子能量70eV; 掃描范圍50 500amu;倍增器電壓1000V;源溫200°C; NIST譜庫。
取野菊花有效部位l (^l乙醚稀釋溶液，稀釋倍數(shù)5倍)，用GC^MS聯(lián) 用儀分析鑒定，通過對HPMSD化學(xué)工作站檢索NIST標準置譜圖庫，并結(jié)合有關(guān) 文獻人工譜圖解析，確認了野菊花有效部位l中的各化學(xué)成分。利用峰面積歸一 化法確定了所檢測出成分中相對含量較高成分的相對含量(％)，并將下列22個成 分的相對含量(％)求和，以體現(xiàn)有效部位l (通過SFE制備)中非極性成分的相對 總量，結(jié)果為58.84wt%。表l野菊花有效部位l化學(xué)成分分析表
序號化合物相對含 量/%序號化合物相對含
1環(huán)化小茴香烯0.3812石竹烯2.18
2三^ "碳烷2.3013胡椒酮2.79
3二十九碳烷5.6314莰酮1.12
4二十八碳烷0,7515P-蒎烯1.22
5二十六碳烷6.2416環(huán)己烯0.50
6二十五碳烷8.37171,5， 5-三甲基-6-亞 甲基-環(huán)己烯1.04
1，2， 4-三乙酰 氧基苯4.2418苯并環(huán)庚三烯3.63
8二十三碳烷6.4819二H "碳烷1,84
9亞油酸5.7420肉豆蔻酸0.88
10石竹烯氧化物1.0821沉香螺醇0.51
11姜烯1.6222廣藿香醇0.30
實施例2野菊花有效部位組合物的制備 共計100kg的野菊花按下方法提取
取10kg的野菊花放入超臨界萃取裝置萃取釜中，以超臨界狀態(tài)的二氧化碳
為萃取溶劑，萃取條件萃取壓力為10MPa、萃取溫度為45'C、解析壓力為9 MPa、解析溫度為5(TC、萃取時間為2小時、二氧化碳流量為200kg/小時，收 集萃取液得野菊花有效部位1。
另取剩余90kg野菊花，與經(jīng)過超臨界萃取后的藥渣混勻，加水煎煮2次， 每次1小時，合并煎液，濃縮至lg生藥/ml藥液，加入相當(dāng)于藥液體積1倍量 的體積百分比90%乙醇，攪勻，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至相對密度為1.3 (65 75。C測)的清膏，加入清膏重量50%的淀粉，拌勻，干燥得野菊花有效部 位2。
將野菊花有效部位1和野菊花有效部位2混勻即得本發(fā)明野菊花有效部位組合物。
檢測方法同實施例1，野菊花有效部位1中非極性成分的相對總量為
60.65%。
實施例3野菊花有效部位組合物的制備
共計100kg的野菊花按下方法提取
取10kg的野菊花放入超臨界萃取裝置萃取釜中，以超臨界狀態(tài)的二氧化碳 為萃取溶劑，萃取條件萃取壓力為8MPa、萃取溫度為50 °C、解析壓力為5 MPa、 解析溫度為55t、萃取時間為2.5小時、二氧化碳流量為160kg/小時，收集萃取 液得野菊花有效部位l。
另取剩余90kg野菊花，與經(jīng)過超臨界萃取后的藥渣混勻，加水煎煮2次，每 次1小時，合并煎液，濃縮至lg生藥/ml藥液，加入相當(dāng)于藥液體積l倍量的體積 百分比90%乙醇，攪勻，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至相對密度為1.3 (65~75°C 測)的清膏，干燥得野菊花有效部位2。
將野菊花有效部位1和野菊花有效部位2混勻即得本發(fā)明野菊花有效部位 組合物。
檢測方法同實施例1，野菊花有效部位1中非極性成分的相對總量為 61.75%。
實施例4野菊花有效部位組合物的制備 共計100kg的野菊花按下方法提取
取100kg的野菊花放入超臨界萃取裝置萃取釜中，以超臨界狀態(tài)的二氧化 碳為萃取溶劑，萃取條件萃取壓力為15MPa、萃取溫度為38T:、解析壓力為 7MPa、解析溫度為35匸、萃取時間為1.5小時、二氧化碳流量為180kg/小時，收集萃取液得野菊花有效部位1。
將經(jīng)過超臨界萃取后的藥渣加水煎煮2次，每次1.5小時，合并煎液，濃 縮至lg生藥/ml藥液，加入相當(dāng)于藥液體積1倍量的體積百分比90%乙醇，攪 勻，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至相對密度為1.3 (65 75-C測)的清膏，干 燥得野菊花有效部位2。
將野菊花有效部位1和野菊花有效部位2混勻即得本發(fā)明野菊花有效部位 組合物。
檢測方法同實施例1，野菊花有效部位1中非極性成分的相對總量為 59.12%。
實施例5 野菊花有效部位組合物的制備 共計100kg的野菊花按下方法提取
取50kg的野菊花放入超臨界萃取裝置萃取釜中，以超臨界狀態(tài)的二氧化碳 為萃取溶劑，萃取條件萃取壓力為25MPa、萃取溫度為3(TC、解析壓力為8 MPa、解析溫度為30。C、萃取時間為l小時、二氧化碳流量為180kg/小時，收
集萃取液得野菊花有效部位1 。
另取剩余的50kg野菊花，加水煎煮3次，每次2小時，合并煎液，濃縮至 0.5g生藥/ml藥液，加入相當(dāng)于藥液體積2倍量的體積百分比95%乙醇，攪勻， 靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至相對密度為1.3 (65 75"C測)的清膏，直接干 燥得野菊花有效部位2。
將野菊花有效部位1和野菊花有效部位2混勻即得本發(fā)明野菊花有效部位 組合物。
檢測方法同實施例1，野菊花有效部位1中非極性成分的相對總量為58.98%。
實施例6 野菊花有效部位組合物的制備 共計100kg的野菊花按下方法提取
取50kg的野菊花放入超臨界萃取裝置萃取釜中，以超臨界狀態(tài)的二氧化碳 為萃取溶劑,萃取條件:萃取壓力為20MPa、萃取溫度為40°C 、解析壓力為8 MPa、 解析溫度為4(TC、萃取時間為1.5小時、二氧化碳流量為170kg/小時，收集萃 取液得野菊花有效部位1 。
另取剩余50kg野菊花，與經(jīng)過超臨界萃取后的藥渣混勻，加水煎煮2次， 每次2小時，合并煎液，濃縮至1.5g生藥/ml藥液，加入相當(dāng)于藥液體積1.5倍 量體積百分比的90%乙醇，攪勻，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至相對密度為 1.3 (65 75'C測)的清膏，直接干燥得野菊花有效部位2。
將野菊花有效部位1和野菊花有效部位2混勻即得本發(fā)明野菊花有效部位 組合物。
檢測方法同實施例1，野菊花有效部位1中非極性成分的相對總量為 57,99%。
實施例7野菊花有效部位組合物的制備 共計100kg的野菊花按下方法提取
取100kg的野菊花放入超臨界萃取裝置萃取釜中，以超臨界狀態(tài)的二氧化 碳為萃取溶劑，萃取條件萃取壓力為10MPa、萃取溫度為35"C、解析壓力為 6 MPa、解析溫度為5(TC、萃取時間為2小時、二氧化碳流量為190kg/小時， 收集萃取液得野菊花有效部位1 。
將經(jīng)過超臨界萃取后的藥渣加水煎煮3次，每次1.2小時，合并煎液，濃縮至0.8g生藥/ml藥液，加入相當(dāng)于藥液體積1.5倍量體積百分比的92%乙醇，攪 勻，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至相對密度為1.3 (65 75。C測)的清膏，直 接干燥得野菊花有效部位2。
將野菊花有效部位1和野菊花有效部位2混勻即得本發(fā)明野菊花有效部位 組合物。
檢測方法同實施例1，野菊花有效部位1中非極性成分的相對總量為 58.05%。
實施例8野菊花有效部位組合物的制備 共計100kg的野菊花按下方法提取-
取40kg的野菊花放入超臨界萃取裝置萃取釜中，以超臨界狀態(tài)的二氧化碳 為萃取溶劑，萃取條件:萃取壓力為15MPa、萃取溫度為45 °C 、解析壓力為7 MPa、 解析溫度為45'C、萃取時間為1.8小時、二氧化碳流量為180kg/小時，收集萃 取液得野菊花有效部位1。
另取剩余的60kg野菊花，與經(jīng)過超臨界萃取后的藥渣混勻，加水煎煮2次， 每次1.5小時，合并煎液，濃縮至0.5g生藥/ml藥液，加入相當(dāng)于藥液體積1.2 倍量體積百分比的90%乙醇，攪勻，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至相對密度 為1.3 (65 75。C測)的清膏，直接干燥得野菊花有效部位2。
將野菊花有效部位1和野菊花有效部位2混勻即得本發(fā)明野菊花有效部位 組合物。
檢測方法同實施例1，野菊花有效部位1中非極性成分的相對總量為 58.23%。
實施例9野菊花有效部位組合物的制備共計100kg的野菊花按下方法提取.-
取lkg的野菊花放入超臨界萃取裝置萃取釜中，以超臨界狀態(tài)的二氧化碳
為萃取溶劑，萃取條件:萃取壓力為10MPa、萃取溫度為40'C、解析壓力為8MPa、 解析溫度為35'C、萃取時間為1.5小時、二氧化碳流量為190kg/小時，收集萃 取液得野菊花有效部位l。
另取剩余99kg野菊花，與經(jīng)過超臨界萃取后的藥渣混勻，加水煎煮2次， 每次1.5小時，合并煎液，濃縮至0.5g生藥/ml藥液，加入相當(dāng)于藥液體積l倍 量體積百分比的90%乙醇，攪勻，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至相對密度為 1.25 (65 75'C測)的清膏，直接干燥得野菊花有效部位2。
將野菊花有效部位1和野菊花有效部位2混勻即得本發(fā)明野菊花有效部位 組合物。
檢測方法同實施例l，野菊花有效部位1中非極性成分的相對總量為58.3%。 實施例10野菊花有效部位組合物的制備
共計100kg的野菊花按下方法提取
取100kg的野菊花放入超臨界萃取裝置萃取釜中，以超臨界狀態(tài)的二氧化 碳為萃取溶劑，萃取條件萃取壓力為20MPa、萃取溫度為35"C、解析壓力為 6MPa、解析溫度為5(TC、萃取時間為2小時、二氧化碳流量為170kg/小時，收 集萃取液得野菊花有效部位1 。
將經(jīng)過超臨界萃取后的藥渣加水煎煮3次，每次1小時，合并煎液，濃縮 至lg生藥/ml藥液，加入相當(dāng)于藥液體積1.5倍量體積百分比的90%乙醇，攪勻， 靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至相對密度為1.28 (65 75。C測)的清膏，直接干 燥得野菊花有效部位2。將野菊花有效部位1和野菊花有效部位2混勻即得本發(fā)明野菊花有效部位 組合物。
檢測方法同實施例l，野菊花有效部位1中非極性成分的相對總量為58.4%。 實施例11中西復(fù)方降壓片的制備
取實施例2制得的野菊花有效部位組合物100g，珍珠層粉100g，氫氯噻嗪 5g，鹽酸可樂定30mg，蘆丁20g。
按下列制法制備以上五味，取野菊花有效部位組合物、珍珠層粉、氫氯 噻嗪、戸丁混勻，加體積百分比70%的乙醇適量溶解鹽酸可樂定，將乙醇液均 勻拌入上述混合粉中，反復(fù)攪拌后，制成顆粒，干燥，壓制成1000片，包衣即 得。
檢測方法為
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；乙腈一 水(28: 72)為流動相；檢測波長為326nm。理論板數(shù)按蒙花苷計算，應(yīng)不低于 1000。
測定法取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細，取0.5g，精密稱定， 置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放置，擦 干后再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶 液；另精密稱取蒙花苷對照品10mg，置100ml量瓶中，加適量甲醇溶解后，再 加甲醇至刻度，搖勻，精密量取適量用甲醇稀釋制得每lml中含蒙花苷50pg的 溶液作為對照品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10pl，注入液 相色譜儀，按外標法以峰面積計算即得。本品每片含野菊花有效部位組合物以 蒙花苷計0.60mg。實施例12中西復(fù)方降壓緩釋膠囊的制備
取實施例3制得的野菊花有效部位組合物7S.42g，珍珠層粉150g，鹽酸可 樂定45mg，氫氯噻嗪7.5g，蘆丁30g,空白丸芯78.09 g，聚乙烯吡咯垸酮6.48g， 丙烯酸樹脂RS100 7.87g， 二氧化硅7.56g，滑石粉21.14g，蟲膠12.90g。
按下列制法制備取適量空白丸芯至包衣鍋內(nèi)，以丙烯酸樹脂RS100乙醇 溶液為粘合劑，逐步撒上經(jīng)過粉碎的珍珠層粉，制備珍珠層粉小丸，備用。另 取野菊花有效部位組合物，加適量體積百分比50%乙醇稀釋后，加入6.48g聚 乙烯吡咯垸酮和7.56g 二氧化硅，攪拌均勻，噴至空白丸芯上，制備野菊花小丸， 分成兩部分，比例為1: 2，備用。將氫氯噻嗪溶于適量丙酮和丙烯酸樹脂RSIOO 中，攪拌至溶解；另將可樂定溶于純水中，混和兩種溶液，噴至較少一部分的 野菊花小丸上，干燥后以蟲膠乙醇溶液進行包衣，干燥，即得。取剩余野菊花 小丸置包衣鍋內(nèi)，以蟲膠乙醇溶液作為粘合劑，逐步撒上蘆丁細粉，制備蘆丁 小丸，干燥后混合珍珠層小丸以蟲膠乙醇溶液包衣，干燥。將上述兩種緩釋小 丸混合均勻，裝入膠囊，即得。
檢測方法為
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈一 水(28: 72)為流動相；檢測波長為326nm。理論板數(shù)按蒙花苷計算，應(yīng)不低于 1000。
測定法取本品內(nèi)容物，研細，精密稱取適量(約相當(dāng)于蒙花苷2.5mg)，置 50ml量瓶中，加適量甲醇溶解后，再加甲醇至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，作為供 試品溶液；另精密稱取蒙花苷對照品10mg，置100ml量瓶中，加適量甲醇溶解 后，再加甲醇至刻度，搖勻，精密量取適量用甲醇稀釋制得每lml中含蒙花苷50^ig的溶液作為對照品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10nl，
注入液相色譜儀，按外標法以峰面積計算即得。本品每粒含野菊花有效部位組
合物以蒙花苷計0.83mg。
實施例13野菊花有效部位組合物緩釋片的制備
取實施例4的野菊花有效部位組合物94.10g，與過80目篩輔料混合均勻， 加入適量潤濕劑，以18目篩制粒，45-C真空干燥、整粒，加入潤滑劑適量，壓 制成1000片，即得。
表2野菊花有效部位組合物緩釋片的處方
成分投料量(g)
野菊花有效部位組合物94.10
乙基纖維素13.4
低取代羥丙基纖維素227.5
糊精65
檢測方法同實施例8，本品每片含野菊花有效部位組合物以蒙花苷計0.9mg。 實施例14野菊花有效部位組合物分散片的制備
取實施例4的野菊花有效部位組合物94.10g，與過80目篩輔料混合均勻(硬 脂酸鎂除外)，加入適量潤濕劑，過30目篩制粒，45°C真空干燥，40目篩整粒。 加入硬脂酸鎂，混合均勻后壓片。每片重0.4g。
表3野菊花有效部位組合物分散片的處方
成分投料量(g)
野菊花有效部位組合物94.10
乳糖125.9
交聯(lián)聚維酮40
微晶纖維100
羧甲基淀粉鈉20
硬脂酸鎂20
檢測方法同實施例8，本品每片含野菊花有效部位組合物以蒙花苷計0.92mg。
實施例15野菊花有效部位組合物滴丸的制備
稱取500g聚乙二醇(PEG，分子量6000)，于水浴中邊攪拌邊加熱，待全 部溶化后加入實施例4的野菊花有效部位組合物94.10g，攪勻，再滴加5 10ml PEG400，攪拌使其三者充分混勻。在80 85。C保溫條件下滴入二甲基硅油冷凝 液中(冷凝液溫度約為0 4'C)，滴制成丸。
檢測方法同實施例8，本品每丸含野菊花有效部位組合物以蒙花苷計0.93mg。
效果實施例
本發(fā)明實施例11的"中西復(fù)方降壓片"單次給藥對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR) 的急性降壓作用研究
本發(fā)明野菊花有效部位組合物與西藥合用后，西藥既可發(fā)揮近期療效高的長 處，又由于用量相應(yīng)減少而減輕其毒、副作用。本發(fā)明野菊花有效部位組合物的 降壓作用可提高近期療效，又具有遠期降壓作用。故本實驗采用本發(fā)明實施例7 中的"中西復(fù)方降壓片"進行單次給藥對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的急性降壓作 用研究。
一、材料和方法 l材料 U動物
來源，種屬，品系自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)，由上海斯萊克實驗動物有限公 司提供。動物合格證號SCXK (滬)2003—0003 體重330土30g。性別公 數(shù)量50只 1.2受試藥物
市售降壓片規(guī)格為0.25g/片，市售，為陽性對照組，其中野菊花提取物為水
提物。處方為野菊花提取物100g，珍珠層粉100g，氫氯噻嗪5g，鹽酸可樂定 30mg，蘆丁20g，制成1000片，每片重0.25 g，每片含野菊花提取物O.lg。試驗前， 先將市售降壓片研磨成粉，然后用食用色拉油配制成濃度為0.035g/ml的混懸液， 臨用時新鮮配制。
本發(fā)明實施例11中的"中西復(fù)方降壓片"規(guī)格為0，25g/片。處方為野菊花 有效部位組合物100g，珍珠層粉100g，氫氯噻嗪5g，鹽酸可樂定30mg，蘆丁 20g， 制成1000片，每片重0.25g，每片含野菊花有效部位組合物O.lg。試驗前，用食 用色拉油摻入"中西復(fù)方降壓片，使其濃度為0.017、 0.051、 0.153g/ml的藥液，隨 用隨配。
13溶劑
食用色拉油規(guī)格為1L/瓶，上海日清油脂有限公司產(chǎn)品，食品標準號 GB/T17756，食品認可標簽號31 (20002)-2232，產(chǎn)品批號(生產(chǎn)日期)25/07/2005。 2實驗方法
2.1本發(fā)明實施例11中的"中西復(fù)方降壓片"單次給藥對自發(fā)性高血壓大鼠 (SHR)的急性降壓作用研究
2.1.1分組給藥之前，稱重，然后以RBP-1B型大鼠血壓心率測定儀(中日友 好臨床醫(yī)學(xué)研究所)測定自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)尾動脈收縮壓(SBP)，凡SBP》 170mmHg者納入研究。50只自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)分組采用拉丁方設(shè)計分為ABCDE五組，每組IO只，A為空白溶劑對照組，B， C， D分別為本發(fā)明實施例7 中的"中西復(fù)方降壓片"低、中、高劑量組,E為市售降壓片組。 2丄2藥物劑量
"中西復(fù)方降壓片"低劑量組0.017g/kg
"中西復(fù)方降壓片"中劑量組0.051g/kg
"中西復(fù)方降壓片"高劑量組0.153g/kg
市售降壓片陽性對照組:0.018g/kg (相當(dāng)于"中西復(fù)方降壓片"小劑量) 2丄3給藥途徑實驗前一周，分別測定自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)清醒時的血壓 三次。給藥前測定血壓作為基礎(chǔ)值，然后給"中西復(fù)方降壓片"低劑量組、中劑量 組、高劑量組、市售降壓片陽性對照組的SHR大鼠分別灌胃給予"中西復(fù)方降壓 片"或市售降壓片，空白對照組的SHR大鼠灌胃給予同體積的4XCMC溶液，然 后分別在給藥后的l小時、2小時、4小時、6小時、8小時、12小時、24小時、 36小時、48小時測定心率和血壓，比較血壓下降情況。以？-檢驗做統(tǒng)計分析。
3統(tǒng)計學(xué)方法用SPSS軟件對實驗數(shù)據(jù)迸行統(tǒng)計，以均數(shù)±標準差(釷S)表 示，對空白對照組和給藥組的血壓下降情況以及不同時間點的血壓下降情況進行
方差分析，P<0.05表明具有顯著性差異，P<0.01表明具有極顯著差異。
4實驗結(jié)果
"中西復(fù)方降壓片"單次給藥對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的血壓下降幅度 的影響
給藥前，"中西復(fù)方降壓片"低、中、高三組，市售降壓片陽性對照組以及 空白對照組的SHR大鼠的平均基礎(chǔ)血壓值都比較接近，給藥后從1小時開始， "中西復(fù)方降壓片"低、中、高三組及市售降壓片陽性對照組的血壓較空白對照組的血壓有明顯的下降，其中市售降壓片陽性對照組的血壓在2小時左右降到 最低，血壓隨后慢慢上升，結(jié)果見表4，"中西復(fù)方降壓片"低劑量組的血壓在給 藥后2小時降到最低，隨后慢慢上升，"中西復(fù)方降壓片"中劑量組和高劑量組 的血壓也在給藥后2小時降到谷值，但血壓降低幅度較低劑量組和市售降壓片 陽性對照組大，隨后慢慢上升。而空白對照組的血壓在0—6小時之間相對保持 平穩(wěn)，下降值波動范圍在0mmHg至5mmHg之間。經(jīng)過方差分析，"中西復(fù)方 降壓片"低、中、高三劑量組及巿售降壓片陽性對照組較之于空白對照組差異顯 著，由此可見"中西復(fù)方降壓片"相對市售降壓片來說能夠迅速而有效的降低血 壓，而且回升較慢。說明本發(fā)明中的野菊花有效部位組合物所制成的制劑降壓 作用緩和持久、穩(wěn)定血壓效果較好，明顯優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)制備的野菊花水提取物 所制成的制劑，進而驗證了本發(fā)明的進步之處。
表4 "中西復(fù)方降壓片"單次給藥對血壓的影響
時間 低劑量組中劑量組 高劑量組陽性對照組空白對照組
Oh184±7185±7186±5184±5184±7
lh158±6**161±8**155±8**162±4**184±8
2h155±8**151±7**150±8**153±9**184±7
4h156士4**157±9**151±6**158±5**184±7
6h161±5**158±6**154±7**162±5**185±7
**P<0.0權(quán)利要求
1. 一種野菊花有效部位組合物的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)取100份野菊花，將其中1～100份野菊花進行超臨界流體萃取，收集萃取液制得野菊花有效部位1；(2)將剩下的野菊花，或者剩下的野菊花與步驟(1)經(jīng)超臨界流體萃取后的藥渣的混合物，或者經(jīng)超臨界流體萃取后的藥渣，加水煎煮，將煎煮液濃縮，加入體積百分比90～95％乙醇，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至清膏，加入輔料，干燥，或者直接將清膏進行干燥，制得野菊花有效部位2；(3)將野菊花有效部位1和野菊花有效部位2混合，即可制得本發(fā)明的野菊花有效部位組合物。
2. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(1)中，所述的超臨界 流體萃取的條件為以超臨界狀態(tài)的二氧化碳為萃取溶劑，萃取壓力為 8 25MPa、萃取溫度為30~50°C、解析壓力為5-9MPa、解析溫度為30~55°C、 萃取時間為1~2.5小時、二氧化碳流量為160 200kg/小時。
3. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的超臨界流體萃取的條件 為以超臨界狀態(tài)的二氧化碳為萃取溶劑，萃取條件萃取壓力為10 20MPa、 萃取溫度為35 45。C、解析壓力為6 8MPa、解析溫度為35~50°C、萃取時間 為L5 2小時、二氧化碳流量為170 190kg/小時。
4. 如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述的超臨界流體萃取的條件 為以超臨界狀態(tài)的二氧化碳為萃取溶劑，萃取條件萃取壓力為15MPa、 萃取溫度為38"C、解析壓力為7MPa、解析溫度為35'C、萃取時間為1.5小 時、二氧化碳流量為180kg/小時。
5. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的步驟(1)中，取100 份野菊花，將其中10份野菊花進行超臨界流體萃取，收集萃取液制得野菊花有效部位l。
6. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的步驟(2)中，加水煎 煮2或3次，每次1 2小時，合并煎液，濃縮至0.5 1.5g生藥/ml藥液， 加入藥液體積1 2倍量的體積百分比卯~95%乙醇，攪勻，靜置沉淀，濾取 上清液，濃縮至65 75"C下相對密度為1.25-1.3的清膏，加入輔料，干燥， 或者直接將清膏進行干燥，制得野菊花有效部位2。
7. 如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于加水煎煮2或3次，每次1 1.5小時，合并煎液，濃縮至0.5 lg生藥/ml藥液，加入藥液體積1 1.5倍 量的體積百分比90~92%乙醇，攪勻，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至65~75 'C下相對密度為1.25~1.3的清膏，加入輔料，干燥，或者直接將清膏進行干 燥，制得野菊花有效部位2。
8. 如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于加水煎煮2次，每次1.5小時， 合并煎液，濃縮至1 g生藥/ml藥液，加入藥液體積1倍量的體積百分比90% 乙醇，攪勻，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至65 75'C下相對密度為1.3的 清膏，加入輔料，干燥，或者直接將清膏進行干燥，制得野菊花有效部位2。
9. 如權(quán)利要求1~8中任一項所述的制備方法制得的野菊花有效部位組合物。
10. 如權(quán)利要求9所述的野菊花有效部位組合物單用或與其它藥物配伍后制得的 藥物制劑。
11. 如權(quán)利要求IO所述的藥物制劑，其特征在于所述的制劑為普通片劑、緩 釋片、分散片、緩釋膠囊或滴丸。
12.如權(quán)利要求9所述的野菊花有效部位組合物在制備降壓藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種野菊花有效部位組合物的制備方法及由該方法制得的野菊花有效部位組合物取100份野菊花，將其中1～100份進行超臨界流體萃取，收集萃取液得有效部位1；將剩下的野菊花，或其與超臨界流體萃取后藥渣的混合物，加水煎煮，濃縮煎煮液，加入體積比90～95％乙醇，靜置沉淀，濾取上清液，濃縮至清膏，加入輔料，干燥，或者直接將清膏進行干燥，制得有效部位2；將有效部位1和2混合即可。本發(fā)明還公開了由該野菊花有效部位組合物制得的藥物制劑及其在制備降壓藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的野菊花有效部位組合物藥效成分全面，降壓作用緩和持久、穩(wěn)定血壓效果較好，其制備方法速度快、提取率高、產(chǎn)品純度好、流程簡單、能耗低、過程無有機溶劑殘留。
文檔編號A61K36/185GK101468054SQ20071017368
公開日2009年7月1日 申請日期2007年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月28日
發(fā)明者周國偉, 崎 宋, 張國明, 李勝華, 樊敏偉, 冰 王, 謝德隆, 馬能溢 申請人:上海雷允上科技發(fā)展有限公司;上海市中藥研究所