專利名稱：：百秋李醇在制備防治老年性癡呆癥的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及百秋李醇在制備防治老年性癡呆癥的藥物中的用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：廣霍香，Pogostemoncablin(Blanco)Benth，是唇形科刺蕊草屬植物，多年生草本，全草藥用。其味辛，微溫，歸脾、胃、肺三經(jīng)，具有芳香化濁、開胃止嘔、發(fā)表解暑的功能。廣霍香的藥用成分主要是其揮發(fā)油，稱廣霍香油(patchoulioil)，具有調(diào)節(jié)消化道功能、胃腸平滑肌解痙和抗菌作用。其主要成分是廣霍香醇(patchoulialcohol,百秋李醇)，具有f丐離子拮抗作用(ChemPharmBu11，1989,37(2):345-348)。廣霍香醇屬三環(huán)倍半萜類化合物，可結(jié)晶，熔點(diǎn)5556%，沸點(diǎn)140°C(1.06kPa)，旋光度-97.4°(c=24，氯仿)，不溶于水，溶于醇、醚和常用有機(jī)溶劑。分子式C15H260，CAS登記號(hào)為5986-55-0，分子量為222.37，化學(xué)名為(lR-(lalpha，4beta,4-alpha,6beta，8-alpha))-Octahydro-4，8a,9，9-tetramethyl-l<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage3</formula>,6-methano-l(2H)-naphthol，結(jié)構(gòu)式如下老年癡呆病是一種以進(jìn)行性認(rèn)知功能減退為主要臨床癥狀的慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。其發(fā)病率隨著年齡增長而急劇上升，我國65歲以上老年人的患病率為1%5%,85歲以上達(dá)到20%40%。老年癡呆的病理改變包括廣泛的神經(jīng)元丟失、腦內(nèi)出現(xiàn)無數(shù)神經(jīng)元纖維纏結(jié)(neurofibrillarytangles)和老年斑(senilepl叫ue)等。目前已上市的老年癡呆治療藥物如安理申、他克林等，可以在一定程度上改善或緩解輕度患者的癡呆癥狀，但不能阻止或逆轉(zhuǎn)病變的進(jìn)一步發(fā)展。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供百秋李醇在制備防治老年性癡呆癥的藥物中的用途。本發(fā)明要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是提供一種防治老年性癡呆癥的藥物組合物。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案百秋李醇在制備防治老年性癡呆癥的藥物中的用途。一種防治老年性癡呆癥的藥物組合物，由活性成分百秋李醇和藥學(xué)接受的輔料組成。所述藥學(xué)接受的輔料包括但不限于藥學(xué)上可接受的稀釋劑、防腐劑、溶劑、乳化劑、佐劑和/或載體。所述防治老年性癡呆癥的藥物或藥物組合物為口服制劑、注射劑、經(jīng)肺、鼻劑、經(jīng)皮或其他方式給藥劑型。所述口服劑型包含但不限于膠囊、片劑、丸劑、錠劑、顆粒劑、脂質(zhì)體等。本發(fā)明中的百秋李醇購自中國藥品生物制品檢定所，純度達(dá)98%以上。在細(xì)胞水平，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測百秋李醇抗P淀粉樣蛋白(A0)致PC12凋亡作用以及對(duì)原代海馬神經(jīng)元軸突生長促進(jìn)作用。在動(dòng)物水平，采用小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)和Morris水迷宮試驗(yàn)觀測其對(duì)東莨菪堿所致老年癡呆模型小鼠學(xué)習(xí)記憶的促進(jìn)作用。結(jié)果顯示，百秋李醇對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)及營養(yǎng)作用，能夠改善老年癡呆模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明經(jīng)過廣泛深入的研究，在篩選抗老年性癡呆病的藥物中出人意料地發(fā)現(xiàn)百秋李醇具有神經(jīng)保護(hù)及營養(yǎng)作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)老年癡呆模型小鼠學(xué)習(xí)記憶有促進(jìn)作用。因此，可將百秋李醇用于制備防治老年癡呆病的藥物。以百秋李醇為活性成分的藥物在臨床上可能會(huì)有顯著療效，從而產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明發(fā)明作進(jìn)一步說明，并非對(duì)本發(fā)明的限定，依照本領(lǐng)域公知的現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的實(shí)施方式并不限于此，因此凡依照本公開內(nèi)容所作出的本領(lǐng)域的等同替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:百秋李醇抗凋亡作用一.材料1.百秋李醇，購自中國藥品生物制品檢定所，純度達(dá)98%以上。2.Ae25~35，購自Sigma公司。3.AnnexinV-FITC，F(xiàn)ITC標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白V，購自晶美生物工程有限公司。4.PI溶液，碘化丙啶溶液。5.大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12)細(xì)胞株，本室傳代保存。二.方法采用流式細(xì)胞術(shù)檢測百秋李醇對(duì)抗八025~35導(dǎo)致大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12)凋亡作用。實(shí)驗(yàn)分組如下對(duì)照組；Ae25~35處理組；不同劑量藥物組。取100W的細(xì)胞懸液于流式管中，加入AnnexinV-FITC和PI溶液(20W/ml)混勻，室溫避光孵育15分鐘，加400WPBS，流式細(xì)胞儀分析。三.結(jié)果與正常組比，Ae2EM5處理模型組凋亡率明顯增加，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.01);各加藥組凋亡率與模型組比顯著降低(P〈0.01)，百秋李醇有抗AP:25,致PC12細(xì)胞凋亡作用。表l-百秋李醇抗AP2535致PC12細(xì)胞的凋亡作用<table>complextableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注〃與對(duì)照組比P〈0.01;A與模型組比P〈0.01實(shí)施例2:百秋李醇促進(jìn)原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元軸突生長作用一.材料1.百秋李醇，購自中國藥品生物制品檢定所，純度達(dá)98%以上。2.胰酶，濃度為0.25%，購自Sigma公司3.DMEM/F-12培養(yǎng)基，購自Gibco公司。4.神經(jīng)生長因子(NGF)，購自北京圣日醫(yī)藥科技發(fā)展有限責(zé)任公司。5.胎牛血清，購自Gibco公司。6.N2，購自Gibco公司。7.B27,購自Gibco公司。8.阿糖胞苷，購自哈爾濱博萊制藥有限公司。9.SD大鼠乳鼠，出生12h內(nèi)，早$兼用，分為對(duì)照組和不同劑量藥物組，購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。二.方法大鼠乳鼠經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為75%乙醇消毒后，斷頭置于含解剖液的平皿中，分離出全腦，解剖顯微鏡下分離海馬組織。將其置于0.25%胰蛋白酶中并用剪刀剪碎。每隔4min吸取胰酶至含血清離心管中，并加入新鮮胰酶直至無肉眼可見的組織塊。200目金屬篩網(wǎng)過濾后以1000rpmmin—'離心10min。將其重懸于10%胎牛血清的DMEM/F-12種植液，接種于預(yù)先包被多聚賴氨酸的24孔板，培養(yǎng)過夜后換為3%胎牛血清、1%N2、腦7和3ng'mL-'阿糖胞苷的DMEM/F-12培養(yǎng)液。加入終濃度質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05、0.5、5yg'mL—'百秋李醇，同時(shí)加入2ngm1/1神經(jīng)生長因子(NGF);對(duì)照組僅加2ngmL—1的NGF。2d后于熒光顯微鏡下拍照，并統(tǒng)計(jì)軸突長度，方法為每組10張，每張測量各神經(jīng)元軸突長度，求和后除以其神經(jīng)元總數(shù)。三.結(jié)果百秋李醇本身對(duì)原代海馬神經(jīng)元軸突生長無促進(jìn)作用，但在2ng*mL—'NGF存在下可明顯促進(jìn)其軸突生長，其軸突長度明顯長于對(duì)照組(P<0.01)。結(jié)果表明，在極低濃度NGF存在下，百秋李醇0.055ug*mL—'的濃度范圍內(nèi)對(duì)原代海馬神經(jīng)元軸突生長有促進(jìn)作用(表2)。表2:<table>complextableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注n=10^與對(duì)照組比P〈0.01實(shí)施例3:百秋李醇對(duì)老年癡呆模型小鼠學(xué)習(xí)記憶的促進(jìn)作用一.材料1.百秋李醇，購自中國藥品生物制品檢定所，純度達(dá)98%以上。2.東莨菪堿，徐州萊恩藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。3.昆明小鼠，體重1416g，雌性，分為正常對(duì)照、東莨菪堿組和不同劑量藥物組，小鼠按體重均衡的原則隨機(jī)原則分組，每組10只，購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。二.方法采用小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)和Morris水迷宮試驗(yàn)觀測百秋李醇對(duì)東莨菪堿所致老年癡呆模型小鼠學(xué)習(xí)記憶的促進(jìn)作用。小鼠按體重均衡的原則隨機(jī)原則分組。給藥7d后，造模并進(jìn)行試驗(yàn)。1.小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)將動(dòng)物放置在平臺(tái)上，適應(yīng)環(huán)境3min，然后通以36V電壓，訓(xùn)練5min。24h后測驗(yàn)，記錄第一次跳下平臺(tái)的潛伏期、5min內(nèi)的錯(cuò)誤次數(shù)和總電擊時(shí)間，以此作為記憶成績。2.Morris水迷宮試驗(yàn)試驗(yàn)前一天先將小鼠放入水迷宮中自由游泳2min以適應(yīng)環(huán)境。每日上午訓(xùn)練前15min腹腔注射東莨菪堿5mg'kg—1，每天給藥一次。第一天小鼠訓(xùn)練3次，每次分別從3個(gè)不同入水點(diǎn)將小鼠面向容器壁放入水中游泳，若小鼠在90s內(nèi)不能找到水下平臺(tái)，則將其直接置于平臺(tái)上并停留30s。第二天開始每天上下午各訓(xùn)練一次，記錄小鼠入水后爬上平臺(tái)所用的時(shí)間、路經(jīng)軌跡等作為檢測小鼠對(duì)空間和線索學(xué)習(xí)的指標(biāo)，24小時(shí)后按步進(jìn)行復(fù)測，共訓(xùn)練3天。每組取4只鼠腦組織做免疫組化測定膽堿能Mi受體水平，每只鼠做兩張切片，免疫組化采用SABC法，DAB顯色，最后用蘇木素進(jìn)行核復(fù)染。每組取一張切片作為陰性對(duì)照(一抗用PBS代替)。數(shù)據(jù)分析時(shí)，每張切片按海馬和皮層相同部位選取5個(gè)視野，結(jié)果用MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析管理系統(tǒng)4.0進(jìn)行處理，分析平均光密度和積分光密度。三.結(jié)果1.小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)跳臺(tái)結(jié)果顯示，與正常組比，模型組5min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加，潛伏期顯著縮短。與模型組比，百秋李醇組錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少，但潛伏期有增加的趨勢但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表3)。表3:百秋李醇對(duì)東莨菪堿小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型跳臺(tái)成績的影響組別齊'J量(mg-kg-1)錯(cuò)誤次數(shù)(n)潛伏期(s)正常對(duì)照組—0.2±0.4259.9±95.2東莨菪堿組55.0±1.7"*8.3±2.3***百秋李醇低劑量組501.5±1.2#110.0±94.4百秋李醇高劑量組1001.0±1.1##141.2±137.8注與正常組相比，***P<0.001;與模型組相比#<0.05,辨O.Ol.2.Morris水迷宮試驗(yàn)Morris水迷宮結(jié)果顯示，隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，各組小鼠找到平臺(tái)的潛伏期逐漸縮短。與對(duì)照組相比，模型組(東莨菪堿5mgkg—1)各次訓(xùn)練成績均顯示出顯著差異。百秋李醇組從第5次訓(xùn)練開始與模型組顯示出顯著差異。結(jié)果如表4所示表4:百秋李醇對(duì)東莨菪堿小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型水迷宮上臺(tái)潛伏期的影響潛伏期(s)對(duì)照組東莨菪堿百秋李醇百秋李醇__(100mgkg")(50mgkg懇1)第1次60.10±29.5386.94±9.49*81.53±20.5887.38±6.64第2次40.32±31.0389.08±1.85***70.50±31.2582.46±11.23第3次40.43±27.3077.73±26.37**55.42±31.2269.87±22.16第4次24.87±10.4176.52±28.31***52.28±33.5359.81±24.90第5次19.80±12.0478.43±1.74***32.07±16.53,44.49±33.24##第6次15.22±7.4983.30±20.15***31.77±23.97###34.03±10.58###第7次17.19±12.8660.02±30.74**28.02±10.58##32.70±19.24#注與正常組相比*P<0.05,**P<0.01，***P〈0.001;與模型組相比#P<0.05，P<0.01，###PO.OOl。第l一3次為第一天訓(xùn)練結(jié)果，第4、5次為第二天訓(xùn)練結(jié)果，第6、7次為第三天訓(xùn)練結(jié)果。平均光密度結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組平均光密度值顯著下降，說明細(xì)胞染色程度下降，膽堿能M1受體水平降低。而百秋李醇組平均光密度值均比模型組有所提高，說明藥物可能使M1受體水平提高。積分光密度結(jié)果亦顯示模型組比正常對(duì)照組顯著降低，而百秋李醇組比模型組顯著升高。說明藥物組陽性細(xì)胞染色水平的整體水平升高，即抗原總量水平升高，結(jié)果見表5。表5:百秋李醇對(duì)東莨菪堿造成小鼠獲得性學(xué)習(xí)記憶障礙模型腦組織M！受體水平的影響組別平均光密度積分光密度正常對(duì)照0.21±0.041077.70±612.46東莨菪堿模型0.15±0.04***261.24±103.28***百秋李醇100rag'kg—10.18±0.05抑858.88±165.8柳#百秋李醇50mgkg—10.17±0.03tt673.44±171.66#抑注與正常組相比，***PO.001;與模型組相比#P<0.05,##P<0.01，###P<0.001。權(quán)利要求1.百秋李醇在制備防治老年性癡呆癥的藥物中的用途。2.—種防治老年性癡呆癥的藥物組合物，其特征在于由活性成分百秋李醇和藥學(xué)接受的輔料組成。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種防治老年性癡呆癥的藥物組合物，其特征在于所述藥學(xué)接受的輔料為藥學(xué)上可接受的稀釋劑、防腐劑、溶劑、乳化劑、佐劑和/或載體。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種防治老年性癡呆癥的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物為口服制劑、注射劑、經(jīng)肺、鼻劑、經(jīng)皮或其他方式給藥劑型。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種防治老年性癡呆癥的藥物組合物，其特征在于所述口服劑型為膠囊、片劑、丸劑、錠劑、顆粒劑或脂質(zhì)體。全文摘要本發(fā)明公開了百秋李醇在制備防治老年性癡呆癥的藥物中的用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。百秋李醇在制備防治老年性癡呆癥的藥物中的用途。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明經(jīng)過廣泛深入的研究，在篩選抗老年性癡呆病的藥物中出人意料地發(fā)現(xiàn)百秋李醇具有神經(jīng)保護(hù)及營養(yǎng)作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)老年癡呆模型小鼠學(xué)習(xí)記憶有促進(jìn)作用。因此，可將百秋李醇用于制備防治老年癡呆病的藥物。以百秋李醇為活性成分的藥物在臨床上可能會(huì)有顯著療效，從而產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。文檔編號(hào)A61K31/045GK101194899SQ20071017634公開日2008年6月11日申請日期2007年10月25日優(yōu)先權(quán)日2007年10月25日發(fā)明者徐風(fēng)華,欒復(fù)新,黃曉舞申請人:中國人民解放軍總醫(yī)院