專利名稱：：丹參丹酚酸a和含有丹參丹酚酸a藥物組合物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，涉及丹參丹酚酸A和含有丹參丹酚酸A藥物組合物的一種新的藥用用途。本發(fā)明所述的皮膚損傷主要是指臨床醫(yī)院中皮膚科中常見病癥。本發(fā)明所述的皮膚損傷主要是指(1)外界物理或化學(xué)原岡導(dǎo)致的皮膚損傷，例如皮膚凍傷、燒傷、燙傷、日光損傷、疤痕等；(2)內(nèi)在因素(生理機能的改變)導(dǎo)致的皮膚損傷，例如青春痘、脂溢性皮炎、皮膚濕疹、皮膚氧疹、蕁麻疹、紅斑狼瘡的皮膚損傷、疥瘡、疥癬、熱瘡毒等；(3)衰老導(dǎo)致的皮膚變化。
背景技術(shù)：
：皮膚作為天然免疫的第一道防線，在抵抗外來微生物感染中發(fā)揮著重要的作用，皮膚一方面構(gòu)成了抵御病原體的物理屏障，另一方面，可分泌許多細(xì)胞因子、趨化因子和抗菌肽等，從而介導(dǎo)天然免疫和獲得性免疫，利于病原體的清除。當(dāng)皮膚組織受到損傷后，局部組織就會產(chǎn)生炎癥和細(xì)胞的死亡，一方面，有吞噬細(xì)胞、嗜中性細(xì)胞和各種炎癥性介質(zhì)與水解酶清除炎癥部位的滲出物或壞死組織；另一方面，由新生的細(xì)胞或結(jié)締組織修復(fù)破壞和缺損的組織，使傷口愈合，如損傷或喪失的細(xì)胞、組織由結(jié)構(gòu)功能相同的細(xì)胞組織所代替，稱為再生；如由肉芽組織新生結(jié)締組織代替正常組織，稱修復(fù)皮膚損傷修復(fù)是一個復(fù)雜的生物學(xué)過程，涉及炎癥反應(yīng)和細(xì)胞外基質(zhì)的合成和再塑等過程。皮膚損傷會給人體帶來進(jìn)一步的損傷，因此，需要積極的進(jìn)行治療，臨床上常常采用抗菌藥或具有抑菌作用的中藥進(jìn)行治療，雖然能夠達(dá)到一定的治療作用，但因為抗菌性的產(chǎn)生或反復(fù)感染，而導(dǎo)致皮膚損傷很難快速恢復(fù)，因此，臨床上急需一種即具有抗菌作用，又能很好的修復(fù)損傷皮膚細(xì)胞的藥物。丹酚酸AsalvianolicacidA是丹參有效成分之一，杜冠華基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2000，20(5):1014等人對丹酚酸A的活性進(jìn)行了大量研究，發(fā)現(xiàn)丹酚酸A對心腦血管疾病具有很好的治療作用，迄今為止，未有任何文獻(xiàn)報道，丹參丹酚酸A或含有丹參丹酚酸A具有治療皮膚損傷的作用。
發(fā)明內(nèi)容基于卜.述原因，我們科研人員意外的發(fā)現(xiàn)丹參丹酚酸A或含有丹參丹酚酸A的藥物組合物具有治療皮膚損傷的作用，丹參丹酚酸A即具有抗菌作用，又能很好的修復(fù)損傷的皮膚細(xì)胞，達(dá)到治療皮膚損傷的目的；通過實驗驗證，丹參丹酚酸A或含有丹參丹酚酸A的藥物組合物在治療皮膚損傷方面，具有優(yōu)效、副作用小的特點。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的。丹參丹酚酸A在制備治療皮膚損傷藥物中的應(yīng)用。含有丹參丹酚酸A的藥物組合物在制備治療皮膚損傷藥物中的應(yīng)用。其中皮膚損傷指的是燒、燙傷或是疤痕或是衰老導(dǎo)致的皮膚變化。本發(fā)明所述的皮膚損傷主要是指臨床醫(yī)院中皮膚科中常見病癥。本發(fā)明所述的皮膚損傷主要是指(1)外界物理或化學(xué)原因?qū)е碌钠つw損傷，例如皮膚凍傷、燒傷、燙傷、日光損傷、疤痕等；(2)內(nèi)在因素(生理機能的改變)導(dǎo)致的皮膚損傷，例如青春痘、脂溢性皮炎、皮膚濕疹、皮膚氧疹、蕁麻疹、紅斑狼瘡的皮膚損傷、疥瘡、疥癬、熱瘡毒等；(3)衰老導(dǎo)致的皮膚變化。本發(fā)明所述的含有丹參丹酚酸A的藥物組合物，包括以丹參丹酚酸A為君藥或臣藥的組方，其中與丹參丹酚酸A配伍的包括積雪草、半夏、黃柏、麥冬、蘆薈、石榴籽、薏苡仁、茶葉、大豆、馬齒莧、黃精、金銀花、紫草、蒲公英、五倍子、艾葉、黃芩、芒硝、苦參、射干、益母草、補骨脂、車前草、石膏、生地、丹皮、蜂王槳、沙棘、蛇床子、酸棗仁、硫磺等中藥中有效成分或有效部位中的一種或幾種；本發(fā)明所述的含有丹參丹酚酸A的藥物組合物，包括丹參丹酚酸A和抗生素或抗菌素中的一種或幾種，抗生素包括頭孢類或大環(huán)內(nèi)酯類或青霉素類等抗生素，主要包括頭孢呋辛、頭孢氨芐、頭孢曲松鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢西丁、頭孢美唑、頭孢替坦、頭孢唑林、頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢羥氨節(jié)、頭孢克羅、頭孢匹羅、拉氧頭孢、紅霉素、白霉素、阿齊紅霉素、羅紅霉素、乙酰螺旋霉素、交沙霉素、琥乙紅霉素等中的一種或幾種；抗菌素包括現(xiàn)有臨床上用來治療皮膚疾病的各種藥物中有效成分中的一種或幾種；一、藥理實驗1、抗紫外線所致皮膚損傷實驗動物純白豚鼠500600g，雌雄各半。光源采用日光紫外燈，功率30W，含長波紫外線(UVA)和中波紫外線(UVB)。實驗藥物本發(fā)明丹參丹酚酸A和含有丹參丹酚酸A的藥物組合物，按照藥劑學(xué)常規(guī)要求，制備成乳膏劑。實驗方法參照文獻(xiàn)李文興、龔守良、栗學(xué)軍等，《納米氧化鈦對紫外線所致皮膚損傷的作用》，中國科技論文在線，2004.5有關(guān)研究，豚鼠隨機分成丹參丹酚酸A干預(yù)組、含有丹參丹酚酸A藥物組合物組、基質(zhì)對照組和自身對照組，實驗動物右側(cè)背部照射，另一側(cè)為遮蓋側(cè)(即自身對照組)，照射前先將豚鼠背部照射側(cè)皮膚剃毛，暴露3cmX5cm范圍，均勻涂布藥物后靜置5min后，在距離動物皮膚10cm處進(jìn)行紫外線光源照射。第一次正式照射前，先測定最小紅斑及光照射強度。開始每日1次，每次照射量UVB為0.124J/cm2，UVA為0.237J/cm2，以后視皮膚對最小紅斑劑量適應(yīng)情況逐漸增加。照射后，乙醚經(jīng)呼吸道麻醉，即刻取兩組背部對應(yīng)雙側(cè)皮膚，進(jìn)行組織學(xué)檢查羅東輝，《中波紫外線的免疫抑制作用研究進(jìn)展》，國外醫(yī)學(xué)皮膚性病學(xué)分冊，1996，22(5):268;朱愉、多秀瀛，《實驗動物的疾病模型》，天津天津科技翻譯公司出版，1991，557-559;杜卓民，《實用組織學(xué)技術(shù)》，北京人民衛(wèi)生出版社，2001，8-294，觀察皮膚色澤、粗糙變硬程度、彈性及脫屑情況。組織學(xué)檢查將取下的皮膚用10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋和切片，HE染色(觀察表皮厚度改變)、VanGieson(VG)膠原纖維染色(觀察、比較各組間真皮層膠原纖維量變化)和過碘酸-雪夫反應(yīng)(PAS)染色(觀察、比較各組間基底膜厚度、均勻程度及結(jié)構(gòu)完整性)。實驗結(jié)果外觀表現(xiàn)肉眼觀察可見經(jīng)紫外線照射豚鼠皮膚后，基質(zhì)對照組1周后可見照射皮膚輕度紅斑形成，爾后隨累積劑量增加膚色漸漸加深，出現(xiàn)表皮增厚、脫屑、粗糙變硬、失去光澤及彈性等一系列皮膚老化癥狀。丹參丹酚酸A干預(yù)組、含有丹參丹酚酸A藥物組合物干預(yù)組和自身對照組則無明顯異常改變。表皮厚度HE染色切片顯示丹參丹酚酸A干預(yù)組、含有丹參丹酚酸A藥物組合物干預(yù)組、自身對照組豚鼠皮膚較薄，由基底層、棘層、粒層和角質(zhì)層組成,其中棘細(xì)胞常散在分布，真皮內(nèi)主要細(xì)胞有成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。基質(zhì)對照組表皮呈中度增厚，且見少量炎細(xì)胞浸潤。真皮淺層成熟膠原纖維量VG染色切片顯示丹參丹酚酸A干預(yù)組、含有丹參丹酚酸A藥物組合物干預(yù)組和自身對照組皮膚的真皮血管壁較薄，血管充盈，由結(jié)締組織及毛發(fā)、皮脂腺等皮膚附屬器官組成，膠原纖維是真皮結(jié)締組織的主要成分，呈束狀排列，在腺管周圍，纖維纖細(xì)且排列疏松，基質(zhì)對照組顯示真皮淺層膠原纖維染色減弱，纖維變細(xì)且排列稀疏，提示成熟膠原纖維減少?；啄ず穸萈AS染色顯示丹參丹酚酸A干預(yù)組、含有丹參丹酚酸A藥物組合物干預(yù)組和自身對照組鏡下無明顯變化；基質(zhì)對照組表皮與真皮交界處為基底膜帶，PAS陽性物質(zhì)增多，基底膜帶呈不規(guī)則增厚，間或有斷裂。2、對皮膚損傷促愈合作用創(chuàng)傷局部的組織修復(fù)細(xì)胞(成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞)以及各種細(xì)胞因子在創(chuàng)傷愈合過程中發(fā)揮著積極作用。放射復(fù)合傷可通過抑制傷口局部早期炎癥反應(yīng)[l]和成纖維細(xì)胞增殖而延遲傷口愈合。動物損傷模型的制作和分組健康SD大鼠(SPF級)NO.0037341)60只,10周齡,體重(220土10)g;于其背部固定部位作1.2cmX0.7cm的全厚皮膚創(chuàng)面。傷后立即行^CoY射線創(chuàng)面照射；隨機分組生理鹽水組、丹參丹船酸A組、含有丹參丹酚酸A藥物組合物組，大鼠創(chuàng)面采用藥物治療，生理鹽水組只給予生理鹽水處理作對照組。傷后5d內(nèi)每日外敷創(chuàng)面2次，處理完畢后以無菌紗布包扎。實驗結(jié)果術(shù)后動物分籠飼養(yǎng)，定期觀察創(chuàng)面并測量創(chuàng)面面積；并于傷后3、5、7d，計算愈合率創(chuàng)面愈合率=愈合面積/原傷口面積，實驗結(jié)果見表l:表1皮膚創(chuàng)面愈合率組別3天與愈合率%5天與愈合率%7天與愈合率%生理鹽水組1.72±0.0915.99±2.4927.54±楊丹參丹酚酸A組4.06±0.19**39.42±3.91**62.97土4.95"含有丹參丹酚酸A藥物組合物組4.38±0.25**41.75±4.14**64.24±5.79**注與生理鹽水組比較**<0.01.3、對衰老模型小鼠皮膚的影響實驗動物選用ICR—月齡小鼠。實臉方法動物分組、給藥及造模取小鼠隨機分組D—半乳糖組，每日頸背部皮下注射12.5。/。D—半乳糖1000mg/kg;正常對照組每日頸背部皮下注射等容量生理鹽水；丹參丹酚酸A組每日頸背部皮下注射12.5%D—半乳糖1000mg/kg，同時用剃毛器剃去背部被毛，暴露約2cm，將丹參丹酚酸A用于背部皮膚；含有丹參丹酚酸A藥物組合物組每日每日頸背部皮下注射12.5^。D—半乳糖1000mg/kg，同時用剃毛器剃去背部被毛，暴露約2cm，將含有丹參丹酚酸A的藥物組合物用于背部皮膚。10%皮膚組織勻漿的制備各組小鼠均于42d后處死，取背部脫毛后皮膚組織塊0.5g左右，經(jīng)預(yù)冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪及其它結(jié)締組織，濾紙試干，稱重，量筒量取該組織塊9倍重量預(yù)冷生理鹽水，取2/3量倒入裝有組織塊燒杯中，眼科小剪剪碎組織塊后倒人勻漿管中，用剩余1/3生理鹽水沖洗燒杯壁，用電動玻璃勻漿機制成10%組織勻漿(在冰水中進(jìn)行)，然后反復(fù)凍融3次，使其完全破碎，細(xì)胞內(nèi)容物完全游離在液相中。衰老小鼠皮膚SOD活力和皮膚總羥脯氨酸的側(cè)定參照SOD試劑盒和總羥脯氨酸盒說明書方法測定，實驗結(jié)果見表2。衰老小鼠皮膚含水量測定用打孔器取下脫毛后的背部皮膚組織0.5g左右，精密稱皮膚濕重，干操箱中放48h，稱皮膚干，計算皮膚含水百分率，實驗結(jié)果見表表2對衰老小鼠皮膚SOD活力和總羥脯氨酸的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注與半乳糖組比較"PO.Ol.表3對衰老皮膚含水量的影響組別皮膚濕重g皮膚干重g含水百分量%D—半乳糖組0.089±0.0120.038±0.01357.3±3.7正常對照組0.094±0.0150.025±0.00973.4±4.8"丹參丹酚酸A組0.075±0.0100.020±0.00373.3±4.6**含有丹參丹酚酸A藥物組合物組0.085±0.0140.024土0駕71.7±4.0**注與半乳糖組比較"PO.Ol.4、對皮膚成纖維細(xì)胞HSFb的影響主要實驗試劑本發(fā)明丹參丹酚酸A和含有丹參丹酚酸A的藥物組合物；DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基、谷胺酰氨、HEPES和細(xì)胞增殖測定試劑盒(XTT);I型膠原酶；I、IU型膠原的前膠原氨基肽原(PlINP、PniNP)放射免疫試劑盒(RIAKit);胎牛血清(fetalcalfsemm，F(xiàn)CS)。實驗方法術(shù)后剩余人正常皮膚，采用膠原酶消化法培養(yǎng)HSFb，原代達(dá)到90%融合時，按1:3比例傳代實驗選用第4~6代細(xì)胞。10%FCS的DMEM完全培養(yǎng)基在37。C，5。/。C02培養(yǎng)。6孔培養(yǎng)板，每孔接種lxl05/mlHSFb，2mlDMEM37。C5%<302培養(yǎng)24h，細(xì)胞達(dá)70%~80%融合時，0.01MPBS(pH7.3)漂洗，無血清DMEM培養(yǎng)24h后，分別加入丹參丹酚酸A藥物DMEM或含有丹參丹酚酸A藥物組合物DMEM工作溶液(2%FCS，2ml/孔)，對照孔內(nèi)加入DMEM培養(yǎng)基2ml/孔，實驗及對照組每個稀釋度6個重復(fù)孔；培養(yǎng)48h后，收集上清液。根據(jù)PIINP和PmNP提供的說明書進(jìn)行操作，計算結(jié)果見表4。表4藥物對成纖維細(xì)胞的影響結(jié)果組別PI證PIIINPHg/ml對照組11.74±0.581.33±0.18丹參丹酚酸A組89.71±2.15**6.75±0.33**含有丹參丹酚酸A藥物組合物組97.82±2.81**7.09士0.39"5、對二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制實驗實驗方法小鼠隨機分組，對照組、燒燙靈組、丹參丹酚酸A組、含有丹參乃酚酸A藥物組合物物，分別涂抹給藥，連續(xù)7天，對照組給藥蒸餾水，第7天藥后1小時，于小鼠右耳兩面涂二甲苯25pl，左耳不涂為正常耳，2小時后，脫頸椎處死，用直徑8mm打孔器打下左耳和右耳同一部位的圓片，于扭力天平上稱重，計算耳腫脹率及抑制率。結(jié)果見表6表6對二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與對照組比較**<0.01.6、抗炎實驗研究實驗動物昆明種小鼠，體重20—22g，雌雄不分。實驗方法取小鼠，分為生理鹽水組、濕疹膏組、本發(fā)明丹參丹酚酸A組、本發(fā)明含有丹參丹酚酸A藥物組合物組，涂抹給藥，每天給藥三次，連續(xù)給藥7天，于末次給藥30分鐘后，用二甲苯棉球接觸小鼠左耳約5s，15分鐘后脫頸椎處死,以打孔器將小鼠雙耳相同部位等面積切下，用電子天平精確稱重，以左耳重減右耳重為小鼠的耳腫脹度，并求出抑制率。結(jié)果見表7。表7抗炎實驗結(jié)果比較組別動物數(shù)只耳腫脹度io、抑制率%生理鹽水組濕疹膏組丹參丹酚酸A組含有丹參丹酚酸A藥物組合物組10101010125,33±30.1095.06±19.88**76,37±15.29**71,38±12.97**24.15±3.7439.06±5.2143.04±6.28注與空白對照組比較少P0.05**P<0.017、對皮膚止癢作用實驗動物1822g昆明種小鼠,實驗方法取小鼠，頸背部由10%硫化鈉溶液于給藥前24h脫毛(2X3cm)，脫毛后小鼠按照體重，性別均衡隨機分組，分別于脫毛區(qū)給予去炎松尿素軟膏50mg/只和0.5%羧甲基纖維素鈉0.05mL只涂于脫毛區(qū)，給予本發(fā)明丹參丹酚酸A和含有丹參丹酚酸A藥物組合物，lh后，于頸背部脫毛區(qū)中央皮下注射0.2%0.1mL/10g4-AP生理鹽水，記錄各組小鼠10min內(nèi)舔體次數(shù)，實驗結(jié)果見表8。表8對4-AP誘發(fā)的皮膚癢反應(yīng)的影響組別動物數(shù)舔體次數(shù)只次/10分鐘對照組1035.17±9.20去炎松組1018.17±5.34**丹參丹酚酸A組1021.37±6.95**含有丹參丹酚酸A藥物組合物組1017.34±4.94**注與對照組比較:"PO.Ol7、對小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的影響實驗動物小白鼠，昆明種，體重1822g，雌雄各半。實驗方法取小鼠，隨機分組生理鹽水組、皮炎寧組、本發(fā)明丹參丹酚酸A組和含有丹參丹酚酸A藥物組合物組，小鼠給藥每日3次，與第3日給藥1小時后，ivl。/。伊文斯藍(lán)(0.1ml/10g)，同時ip0.7。/。醋酸，20min后脫臼處死，輕揉腹部，剪切腹部皮膚，用注射器加入5ml蒸餾水沖洗腹腔，并吸取3ml腹腔液，1000r/minl離心5min于590nm處測定吸收值，結(jié)果見表9。表9不同藥物對小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的影響組別實驗動物數(shù)只吸收值A(chǔ)生理鹽水組100.47±0.10皮炎寧組100.21±0.06**丹參丹酚酸A組100.23±0.03**含有丹參丹酚酸A藥物組合物組100.19±0.03**注:與生理鹽水組比較"PO.Ol。二、實施例實施例1丹參丹酚酸A在治療下述疾病的藥物中的應(yīng)用臨床皮膚科中的疾?。煌饨缥锢砘蚧瘜W(xué)原因?qū)е碌钠つw損傷，例如皮膚凍傷、燒傷、燙傷、日光損傷、疤痕等；(2)內(nèi)在因素(生理機能的改變)導(dǎo)致的皮膚損傷，例如青春痘、脂溢性皮炎、皮膚濕疹、皮膚氧疹、蕁麻疹、紅斑狼瘡的皮膚損傷、疥瘡、疥癬、熱瘡毒等；(3)袞老導(dǎo)致的皮膚變化。實施例2含有丹參丹酚酸A的藥物組合物在治療下述疾病的藥物中的應(yīng)用臨床皮膚科中的疾??；外界物理或化學(xué)原因?qū)е碌钠つw損傷，例如皮膚凍傷、燒傷、燙傷、日光損傷、疤痕等；(2)內(nèi)在因素(生理機能的改變)導(dǎo)致的皮膚損傷，例如青春痘、脂溢性皮炎、皮膚濕疹、皮膚氧疹、蕁麻疹、紅斑狼瘡的皮膚損傷、疥瘡、疥癬、熱瘡毒等；(3)衰老導(dǎo)致的皮膚變化。注本發(fā)明所要求保護(hù)的具體技術(shù)方案，不限于上述實施例所表達(dá)的技術(shù)方案的具體組合。權(quán)利要求1、丹參丹酚酸A在制備治療皮膚損傷藥物中的應(yīng)用。2、含有丹參丹酚酸A的藥物組合物在制備治療皮膚損傷藥物中的應(yīng)用。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其中皮膚損傷指的是燒、燙傷。4、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其中皮膚損傷指的是疤痕。5、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其中皮膚損傷指的是衰老導(dǎo)致的皮膚變化。6、根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中皮膚損傷指的是燒、燙傷。7、根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中皮膚損傷指的是疤痕。8、根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中皮膚損傷指的是衰老導(dǎo)致的皮膚變化。全文摘要本發(fā)明公開了丹參丹酚酸A和含有丹參丹酚酸A的藥物組合物的一種新用途，其特征在于丹參丹酚酸A在制備治療皮膚損傷藥物中的應(yīng)用，丹參丹酚酸A與雪草、半夏、黃柏、頭孢呋辛、頭孢氨芐、頭孢曲松鈉等藥物組合的藥物組合物在制備治療皮膚損傷藥物中的應(yīng)用；藥理和臨床研究表明，丹參丹酚酸A和含有丹參丹酚酸A的藥物組合物對皮膚損傷具有很好的治療作用。文檔編號A61K31/21GK101455657SQ20071017928公開日2009年6月17日申請日期2007年12月12日優(yōu)先權(quán)日2007年12月12日發(fā)明者李志剛,栗艷彬,渠守峰,鄯慧珍,群顧申請人:北京本草天源藥物研究院