專利名稱：一種含薤白的治療血管內(nèi)皮功能障礙的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種含薤白的治療血管內(nèi)皮功能障礙的藥物及其制備方 法，屬于中草藥制劑技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
內(nèi)皮功能障礙是動(dòng)脈粥樣硬化的始動(dòng)因素并貫穿病變?nèi)^程，高同型半 胱氨酸血癥是內(nèi)皮功能障礙的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[梁俊清，吳以嶺，趙韶華，等. 通心絡(luò)超微粉對(duì)同型半胱氨酸致血管損傷的干預(yù)作用.絡(luò)病學(xué)基礎(chǔ)與臨床研
究(2),中國科學(xué)技術(shù)出版社，202 205]。
內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)的降低或消失是國際公認(rèn)的評(píng)價(jià)血管內(nèi)皮功能障 礙白勺金標(biāo)準(zhǔn)[Verdejo Paris丄Endothelial function[J]. Arch Cardiol Mex, 2006,76(Suppl 2):S164-9]， NO是血管內(nèi)皮所合成分泌的最重要的血管活性物 質(zhì)。NO具有擴(kuò)張血管，抗血小板粘附聚集，抗血管平滑肌細(xì)胞增生等作用 [Moncade S. Nitric Oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology[J]. Pharmacol Rev, 1997,43:109-114]，血漿NO水平可作為血管內(nèi)皮損傷程度的評(píng) 價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。 一氧化氮和內(nèi)皮素一1(ET-1)是血管內(nèi)皮合成、分泌的2種重要物質(zhì)。 NO是一種小分子血管活性物質(zhì)，是重要的內(nèi)源性血管舒張因子，在血管內(nèi)皮 中由NO合成酶催化L-精氨酸而生成，并向血管中膜的平滑肌細(xì)胞迅速彌散， 激活鳥苷酸環(huán)化酶，生成cGMP，并激活cGMP依賴性蛋白，影響Na+-Ca2+交 換，使平滑肌松弛，血管舒張。近年研究表明，當(dāng)患者存在高血壓及高血脂 等代謝指標(biāo)異常時(shí)，內(nèi)皮功能受損，NO的生成與分泌下降[吳以嶺.絡(luò)病學(xué). 北京中國中醫(yī)藥出版社，2006.]。內(nèi)皮素(ET—1)被認(rèn)為是目前所知的 最強(qiáng)烈的縮血管物質(zhì)，在與血管平滑肌有關(guān)的血管張力和結(jié)構(gòu)的長期調(diào)節(jié)中 起作用。ET—1不僅本身具有強(qiáng)有力的縮血管作用，而且還增強(qiáng)5-羥色胺 (5-HT)、去甲腎上腺素的縮血管作用，刺激血管內(nèi)皮的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活 性及腎上腺素和醛固酮的釋放，刺激單核細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，刺激血管平滑肌細(xì)胞的移行和增生，從而促進(jìn)AS的進(jìn)程[張清德，魏宗德.通心絡(luò)膠囊對(duì)
冠心病患者血脂及內(nèi)皮素的影響[J].中國心血管雜志，2006,11(1): 20-23〗。
E丁是心臟的高度"毒性肽"，其濃度升高是病情惡化標(biāo)志之一，臨床上可用ET 升高的幅度判斷病情，估計(jì)預(yù)后[黃宗明，陳清枝，李東野.冠心病患者內(nèi) 皮細(xì)胞的損傷及其機(jī)制[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1999,19(1): 19-21]。其引起 的血管收縮、心肌缺血、代謝紊亂和細(xì)胞增殖是與血管損傷有關(guān)疾病的共同 致病因素。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種含薤白的治療血管內(nèi)皮功能障礙的藥物及其制 備方法。
本發(fā)明藥物是由如下重量份比例的原料藥制成的
人參100-140重量份薤白100-140重量份蜈蚣50-80重量份每 100克其它原料藥總重加水蛭素180-240ATU抗凝比活性單位。 優(yōu)選為
人參120重量份薤白120重量份蜈蚣67重 料藥總重加水蛭素210ATU抗凝比活性單位。
〔份
每100克其它原
人參100重量份薤白105重量份蜈蚣53重] 料藥總重加水蛭素180ATU抗凝比活性單位。
難
每100克其它原
人參140重量份薤白135重量份蜈蚣80重量份每100克其它原 料藥總重加水蛭素240ATU抗凝比活性單位。
人參125重量份薤白119重量份蜈蚣63重量份每100克其它原 料藥總重加水蛭素225ATU抗凝比活性單位。
本發(fā)明中水蛭素的用量單位ATU，是指水蛭素的抗凝活性的效價(jià)單位， 其測(cè)定方法為將4u 1凝血酶(8mU/y l)和10 20" 1待測(cè)水蛭素樣品加入 到lml緩沖液中(0.1MTris-HCl -0.2MNaCl，pH 8.3和0.01%牛血清白蛋白)，室溫5min，再加入生色底物(Chromozym TH, 2mM)40 ti 1，繼續(xù)在室溫下放 置5min。加入33y。醋酸0.5ml終止反應(yīng)，405nm波長處測(cè)定光吸收，査標(biāo) 準(zhǔn)曲線，計(jì)算水蛭素的活性。
為便于臨床應(yīng)用，本發(fā)明藥物可以制成膠囊劑、片劑、散劑、口服液、 軟膠囊、丸劑、酊劑、糖漿劑、栓劑、凝膠劑、噴霧劑或注射劑。
本發(fā)明藥物還可以由所述各原料藥的提取物制成。
本發(fā)明藥物的活性成份由以下步驟制成
1) 取組方量人參藥材，用60-90%乙醇提取1-3次，第1次加藥材8-12 倍量溶劑提取l-2小時(shí)，第2次加6-10倍量溶劑提取l-2小時(shí)，第3次加 6-10倍量溶劑提取0.5-1小時(shí)；合并上述提取液，趁熱濾過，減壓回收乙醇， 并濃縮，放入不銹鋼桶內(nèi)，加純水?dāng)嚢杈鶆?，冷?4-36h;將冷藏液取出， 放至常溫，板框過濾器過濾，用少量水洗滌板框，濾液加純水稀釋，備用； 取人參濃縮藥液通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，并分別用pH值8-9 的氨水、20%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液；將80%洗脫液 加入純水，配成50%醇溶液，通過中性氧化鋁柱，收集洗脫液，再用少量 50%乙醇洗滌柱子，合并洗脫液備用；取藥液加入活性炭，回流加熱，煮 沸20min，趁熱板框抽濾，收集濾液，濃縮，冷藏過夜；澄清板過濾，減 壓干燥，即得人參提取物；
2) 取組方量薤白藥材，8-12倍水溫浸，濾過，低溫濃縮得薤白提取物， 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:5—1:15重量比例裝柱，使用 水與乙醇的比例按照5:95—95:5梯度變化進(jìn)行梯度洗脫，每個(gè)濃度洗脫4 一6倍柱體積，收集60-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味后，減壓 濃縮為相對(duì)密度1.1一1.5的稠膏，冷凍干燥即得薤白中間體；
3) 取組方量蜈蚣粗粉，用4-6倍量的生理鹽水于60。C溫浸提取2-3次， 每次2-3小時(shí)；澄清板過濾溫浸液，濾液合并濃縮；加入硫酸銨鹽，使溶 液至40-60%飽和度，放置過夜；沉淀用澄清板過濾，濾液加入硫酸銨鹽， 使溶液至80-90%飽和度，放置過夜后離心；除去上清液后的沉淀用水溶解， 透析脫鹽；透析后溶液用PEG-6000脫水濃縮至原體積的1 /2-2/3后冷凍干 燥即得蜈蚣提取物；4)將步驟l)所的人參提取物、步驟2)所得薤白中間體、步驟3)所得蜈 蚣提取物加入組方量水蛭素混勻。
本發(fā)明藥物的制備方法，其特征在于該藥物由以下歩驟制成
1) 取組方量人參藥材，用60-90%乙醇提取1-3次，第1次加藥材8-12 倍量溶劑提取l-2小時(shí)，第2次加6-10倍量溶劑提取l-2小時(shí)，第3次加 6-10倍量溶劑提取0.5-1小時(shí)；合并上述提取液，趁熱濾過，減壓回收乙醇， 并濃縮，放入不銹鋼桶內(nèi)，加純水?dāng)嚢杈鶆?冷藏24-36h;將冷藏液取出， 放至常溫，板框過濾器過濾，用少量水洗滌板框，濾液加純水稀釋，備用； 取人參濃縮藥液通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，并分別用pH值8-9 的氨水、20%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液；將80%洗脫液 加入純水，配成50%醇溶液，通過中性氧化鋁柱，收集洗脫液，再用少量 50%乙醇洗滌柱子，合并洗脫液備用；取藥液加入活性炭，回流加熱，煮 沸20min，趁熱板框抽濾，收集濾液，濃縮，冷藏過夜；澄清板過濾，減 壓干燥，即得人參提取物；
2) 取組方量薤白藥材，8-12倍水溫浸，濾過，低溫濃縮得薤白提取物， 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:5—1:15重量比例裝柱，使用 水與乙醇的比例按照5:95—95:5梯度變化進(jìn)行梯度洗脫，每個(gè)濃度洗脫4 一6倍柱體積，收集60-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味后，減壓 濃縮為相對(duì)密度1.1一1.5的稠膏，冷凍干燥即得薤白中間體；
3) 取組方量蜈蚣粗粉，用4-6倍量的生理鹽水于6(TC溫浸提取2-3次， 每次2-3小時(shí)；澄清板過濾溫浸液，濾液合并濃縮；加入硫酸銨鹽，使溶 液至40-60%飽和度，放置過夜；沉淀用澄清板過濾，濾液加入硫酸銨鹽， 使溶液至80-90%飽和度，放置過夜后離心；除去上清液后的沉淀用水溶解， 透析脫鹽；透析后溶液用PEG-6000脫水濃縮至原體積的1 /2-2/3后冷凍干 燥即得蜈蚣提取物；
4) 將步驟l)所得人參提取物、步驟2)所得薤白中間體、步驟3)所得蜈 蚣提取物加入組方量水蛭素混勻。
5) 將步驟4)所得混合物按照常規(guī)制劑方法制成膠囊劑、片劑、散劑、 口服液、軟膠囊、丸劑、酊劑、糖漿劑、栓劑、凝膠劑、噴霧劑或注射劑。
7本發(fā)明藥物可升高血清NO水平，降低血漿ET水平。
本發(fā)明藥物可以由常規(guī)的提取工藝[如范碧亭《中藥藥劑學(xué)》(上?？?br> 學(xué)出版社1997年12月第1版)]制得。
本發(fā)明中的藥物，作為原料藥的中藥名稱及其加工方法來自《中藥大辭 典》(1977年7月，第一版，上海科學(xué)技術(shù)出版社)禾B《中國藥典》(2005 年版，化學(xué)工業(yè)出版社)。
本發(fā)明中藥組合物還可以按常規(guī)的制劑工藝，例如，范碧亭《中藥藥劑 學(xué)》(上?？茖W(xué)出版社1997年12月第1版)記載的制備工藝，制成藥劑學(xué)可 接受的任意常規(guī)劑型。
本發(fā)明的應(yīng)用中，所述中藥組合物的制劑劑型為膠囊劑、片劑、散劑、 口服液、軟膠囊、丸劑、酊劑、糖漿劑、栓劑、凝膠劑、噴霧劑或注射劑等， 為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時(shí)加入藥學(xué)可接受的輔料，例如 填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基
質(zhì)等。填充劑包括淀粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維 素、蔗糖等；崩解劑包括淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、 交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑 包括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括聚 乙烯吡咯垸酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包 括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括糖精鈉、 阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括甜味劑及各種香精； 防腐劑包括尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、
醋酸氯乙定、桉葉油等；基質(zhì)包括PEG6000， PEG4000，蟲蠟等。為使上 述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)中藥藥劑學(xué)，需在制備這些劑型時(shí)加入藥學(xué)可接受的其它輔 料(范碧亭《中藥藥劑學(xué)》，上?？茖W(xué)出版社1997年12月第1版中各劑型記 載的輔料)。
為闡明本發(fā)明中藥組合物治療血管內(nèi)皮功能障礙的活性，用按實(shí)施例l 方法制得的提取物(以下稱本發(fā)明藥物)進(jìn)行了下列臨床試驗(yàn)。1資料與方法
l.l動(dòng)物及分組健康Wistar雄性大鼠60只，體重220 240g，購于北京維 通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，將大鼠按體重隨機(jī)分為下列6組，(l)正常對(duì)照組(正 常飼料飲食)。(2)模型組。(3)人參組模型組+人參水煎液。(4)水蛭
組模型組+水蛭微粉煎液。(5)蜈蚣組模型組+蜈蚣煎液。(6)本發(fā)明 藥物組模型組+本發(fā)明藥物。
1.2藥物
人參水煎液由河北以嶺醫(yī)藥研究院提供，配制成0.12g生藥/ml，給藥 濃度為1.2g生藥/Kg，按lml/100g灌胃。每周6天。
水蛭微粉水煎劑由河北以嶺醫(yī)藥研究院提供，水蛭微粉300目篩通過
率〉95%，水煎30min，濾過)水煎成0.1g生藥/ml，給藥濃度為lg生藥/Kg， 按lml/100g灌胃。每周6天。
蜈蚣水煎劑由河北以嶺醫(yī)藥研究院提供，配制成0.067g生藥/ml，給藥 濃度為0.67g生藥/Kg，按lml/100g灌胃。每周6天。
本發(fā)明藥物由河北以嶺醫(yī)藥研究院提供，配制成0.347g生藥/ml，給藥 濃度為3.47g生藥/Kg;按lml/100g灌胃。每周6天。
以上藥物均在使用前用0.5XCMC-Na制成混懸液，4t:保存?zhèn)溆?。用?組在灌胃藥物的同時(shí)，作為對(duì)照的正常組和模型組按體重，用0.5XCMC-Na 液以lml/100g灌胃。
1.3造模方法
參照文獻(xiàn)[梁俊清，吳以嶺，趙韶華，等.通心絡(luò)超微粉對(duì)同型半胱氨酸 致血管損傷的干預(yù)作用.絡(luò)病學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究(2),中國科學(xué)技術(shù)出版社， 202~205]采用3%蛋氨酸飲食(不限食)，4周，建立內(nèi)皮功能障礙大鼠動(dòng)物模 型。蛋氨酸25kg/袋，純度99.9%，河北省農(nóng)科院提供。3%高蛋氨酸(Met) 飼料由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心制作。
1.4檢測(cè)指標(biāo)
1.4.1 NO含量采用硝酸還原酶法檢測(cè)于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，10%水合氯醛麻 醉(0.35ml/100g)，頸動(dòng)脈插管取血，4°C， 3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，常規(guī)分
離留取血清，-701:保存，嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求進(jìn)行檢測(cè)。1.4.2血漿ET含量的測(cè)定采用放免法。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，頸動(dòng)脈取血2ml注 入含有10。/。的EDTA-Na230)il和抑肽酶40iil的無菌抗凝試管中，混勻，4°C， 3000r/min，離心10min，分離血漿，-7(TC保存，嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求
1.5主動(dòng)脈組織光鏡及電鏡觀察
1.5.1光鏡觀察 各組于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，仔 細(xì)分離并截取胸主動(dòng)脈，用4%多聚甲醛溶液固定，脫水，石蠟包埋，切片， 行HE染色，于光學(xué)顯微鏡下觀察各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胸主動(dòng)脈的大體形態(tài)學(xué)改變。
1.5.2透射電鏡觀察各組于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，10%水合氯醛腹腔注射麻醉， 仔細(xì)分離并截取一小段動(dòng)脈，迅速浸入電鏡液中，修成lmmxlmmxlmm大小 組織塊，置電鏡液中fC保存(由河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院電鏡室協(xié)助完成)。
1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
所有數(shù)據(jù)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(S土s)表示。采用SPSS-11.5統(tǒng)計(jì)軟件包，多 個(gè)樣本均數(shù)比較用單因素方差分析(One-WayANOVA)，多個(gè)樣本均數(shù)間的 兩兩比較用最小顯著差法(least significant difference, LSD)，若方差不齊則 采用Satterthwaite-t，檢驗(yàn)行兩兩比較，以P < 0.05作為判斷差異顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。
2結(jié)果
2.1內(nèi)皮功能的變化
模型組大鼠較正常組ET明顯增高，NO明顯下降，具有顯著性差異 (P〈0.01);各治療組可明顯降低模型大鼠的ET水平(PO.05或PO.01);各 治療組可增加模型大鼠的NO水平(PO.05或PO.01);本發(fā)明藥物組分別較 人參組、水蛭組、蜈蚣組具有明顯作用(PO.05或PO.01)。人參、水蛭、蜈 蚣三組之間無明顯差異(P>0.05)。見表l。
表l各組之間內(nèi)皮素(ET)、 NO變化比較(^±、 n=10)
組別 _ET(pg/ml)_NO(畫ol/L)
正常 140.32±9.81 44.36± 5.43
模型組 171.23 ±10.56" 24.81 ± 7.32
人參組 162.54±8.78# 35.89± 4.75;
水蛭組 159.38 ±9.45# 32.76 ±8.52#蜈蚣組 154.91±8.67## 34.73±6.74#
本發(fā)明藥物組145.69 ± 7.86#M A@@& 46.3 5 ± 9.64艦 與正常組比較"PO.01;與模型組比較"P0.05， ##P<0.01;與人參組比 較，<0.05， PO.01;與水蛭組比較,<0.05， @@P<0.01;與蜈蟲公組比較& <0.05，
2.2主動(dòng)脈病理檢査
正常組主動(dòng)脈血管形態(tài)正常，內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,中膜彈力纖維正常。外 膜形態(tài)基本正常。模型組內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、分布不均勻、密度增加，內(nèi)膜有多 量淋巴細(xì)胞附壁、內(nèi)膜內(nèi)有炎細(xì)胞浸潤、內(nèi)彈力板有斷裂；平滑肌細(xì)胞水腫。 各用藥組可改善模型大鼠的主動(dòng)脈大體結(jié)構(gòu)，尤以本發(fā)明藥物組更加明顯。 見圖l。
2.3各組大鼠主動(dòng)脈組織內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化
模型組內(nèi)皮細(xì)胞線粒體大部分嵴和少部分膜融合或消失，幾乎見不到粗 面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和吞飲小泡。人參組、水蛭組、蜈蚣組、本發(fā)明藥物組內(nèi)皮細(xì)胞 超微結(jié)構(gòu)變化較模型組減輕，本發(fā)明藥物組作用較人參組、水蛭組、蜈蚣組 更加明顯。見圖2。
3結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,內(nèi)皮功能障礙時(shí),NO合成減少，ET明顯增加，病理學(xué)檢 査可見血管內(nèi)皮細(xì)胞嚴(yán)重受損，通絡(luò)藥物治療可明顯升高血清NO水平，明顯 降低血漿ET水平，顯示了通絡(luò)藥物具有改善內(nèi)皮功能障礙的作用，而本發(fā)明 藥物較單味藥人參、水蛭、蜈蚣效果更明顯，主動(dòng)脈組織光鏡及電鏡檢查也 證實(shí)了這一點(diǎn)，顯示了復(fù)方藥物的系統(tǒng)效應(yīng)。


圖l:各組大鼠主動(dòng)脈組織HE染色(400>0
圖2:各組大鼠主動(dòng)脈組織內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化(20000x)
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明以下實(shí)施列中所用水蛭素購自廣西科康水蛭素股份有限公司，其他中藥材購自安國藥材市場(chǎng)。但其不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。 實(shí)施例l:本發(fā)明藥物提取物的制備
人參120克薤白120克蜈蟲公67克水蛭素640ATU 制法
1) 取組方量人參藥材，用75%乙醇提取2次，第1次加藥材8倍量溶 劑提取2.小時(shí)，第2次加10倍量溶劑提取2小時(shí)；合并上述提取液，趁熱 濾過，減壓回收乙醇，并濃縮，放入不銹鋼桶內(nèi)，加純水?dāng)嚢杈鶆?冷藏36h; 將冷藏液取出，放至常溫，板框過濾器過濾，用少量水洗漆板框，濾液加 純水稀釋，備用；取人參濃縮藥液通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱， 并分別用pH值8.5的氨水、20%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫 液；將80%洗脫液加入純水，配成50%醇溶液，通過中性氧化鋁柱，收集 洗脫液，再用少量50%乙醇洗滌柱子，合并洗脫液備用；取藥液加入活性 炭，回流加熱，煮沸20min，趁熱板框抽濾，收集濾液，濃縮，冷藏過夜； 澄清板過濾，減壓干燥，即得人參提取物；
2) 取組方量薤白藥材，IO倍水溫浸，濾過，低溫濃縮得薤白提取物， 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:12重量比例裝柱，使用水與乙 醇的比例按照5:95-15:85-30:70-50:50-70:30-85:15-95:5梯度變化進(jìn)行梯度洗 脫，每個(gè)濃度洗脫5倍柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無 醇味后，減壓濃縮為相對(duì)密度1.3的稠膏，冷凍干燥即得薤白中間體；
3) 取組方量蜈蚣粗粉，用6倍量的生理鹽水于6(TC溫浸提取2次，每 次2小時(shí)；澄清板過濾溫浸液，濾液合并濃縮；加入硫酸銨鹽，使溶液至 50%飽和度，放置過夜；沉淀用澄清板過濾，濾液加入硫酸銨鹽，使溶液 至70%飽和度，放置過夜后離心；除去上清液后的沉淀用水溶解，透析脫 鹽；透析后溶液用PEG-6000脫水濃縮至原體積的3/5后冷凍干燥即得蜈蚣 提取物；
4) 將步驟l)所的人參提取物、步驟2)所得薤白中間體、步驟3)所得蜈蚣 提取物加入組方量水蛭素混勻。
實(shí)施例2:本發(fā)明藥物膠囊的制備
人參100克薤白100克蜈蛇53克水蛭素450ATU
12制法
1) 取組方量人參藥材，用60%乙醇提取3次，第1次加藥材8倍量溶
劑提取2小時(shí)，第2次加6倍量溶劑提取2小時(shí)，第3次加6倍量溶劑提
取0.5小時(shí)；合并上述提取液，趁熱濾過，減壓回收乙醇，并濃縮，放入不 銹鋼桶內(nèi)，加純水?dāng)嚢杈鶆?冷藏24h;將冷藏液取出，放至常溫，板框過 濾器過濾，用少量水洗滌板框，濾液加純水稀釋，備用；取人參濃縮藥液 通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，并分別用pH值8.7的氨水、20% 乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液；將80。/。洗脫液加入純水，配 成50%醇溶液，通過中性氧化鋁柱，收集洗脫液，再用少量50%乙醇洗滌 柱子，合并洗脫液備用；取藥液加入活性炭，回流加熱，煮沸20min，趁 熱板框抽濾，收集濾液，濃縮，冷藏過夜；澄清板過濾，減壓干燥，即得 人參提取物；
2) 取組方量薤白藥材，12倍水溫浸，濾過，低溫濃縮得薤白提取物， 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:7.5重量比例裝柱，使用水與 乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度變化進(jìn)行梯 度洗脫，每個(gè)濃度洗脫6倍柱體積，收集60-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙 醇至無醇味后，減壓濃縮為相對(duì)密度1.25的稠膏，冷凍干燥即得薤白中間 體；
3) 取組方量蜈蚣粗粉，用6倍量的生理鹽水于6(TC溫浸提取2次，每 次2小時(shí)；澄清板過濾溫浸液，濾液合并濃縮；加入硫酸銨鹽，使溶液至 55%飽和度，放置過夜；沉淀用澄清板過濾，濾液加入硫酸銨鹽，使溶液 至85%飽和度，放置過夜后離心；除去上清液后的沉淀用水溶解，透析脫 鹽；透析后溶液用PEG-6000脫水濃縮至原體積的1/2后冷凍干燥即得蜈蚣 提取物；
4) 將步驟l)所的人參提取物、步驟2)所得薤白中間體、步驟3)所得蜈蚣 提取物加入組方量水蛭素混勻 ，
5) 按常規(guī)制劑工藝制成膠囊劑。 實(shí)施例3:本發(fā)明藥物片劑的制備
人參125克薤白119克蜈蚣63克水蛭素690.75ATU制法
1) 取組方量人參藥材，用90%乙醇提取2次，第1次加藥材12倍量 溶劑提取1小時(shí)，第2次加6倍量溶劑提取1小時(shí)；合并上述提取液，趁 熱濾過，減壓回收乙醇，并濃縮，放入不銹鋼桶內(nèi)，加純水?dāng)嚢杈鶆?冷藏 24h;將冷藏液取出，放至常溫，板框過濾器過濾，用少量水洗滌板框，濾
液加純水稀釋，備用；取人參濃縮藥液通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂 柱，并分別用pH值8.5的氨水、20%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇 洗脫液；將80%洗脫液加入純水，配成50%醇溶液，通過中性氧化鋁柱， 收集洗脫液，再用少量50%乙醇洗滌柱子，合并洗脫液備用；取藥液加入 活性炭，回流加熱，煮沸20min，趁熱板框抽濾，收集濾液，濃縮，冷藏 過夜；澄清板過濾，減壓干燥，即得人參提取物；
2) 取組方量薤白藥材，12倍水溫浸，濾過，低溫濃縮得薤白提取物， 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:10重量比例裝柱，使用水與乙 醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-卯:10梯度變化進(jìn)行梯度 洗脫，每個(gè)濃度洗脫5倍柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至 無醇味后，減壓濃縮為相對(duì)密度1.20的稠膏，冷凍干燥即得薤白中間體；
3) 取組方量蜈蚣粗粉，用5倍量的生理鹽水于6(TC溫浸提取2次，每 次3小時(shí)；澄清板過濾溫浸液，濾液合并濃縮；加入硫酸銨鹽，使溶液至 55%飽和度，放置過夜；沉淀用澄清板過濾，濾液加入硫酸銨鹽，使溶液 至87%飽和度，放置過夜后離心；除去上清液后的沉淀用水溶解，透析脫 鹽；透析后溶液用PEG-6000脫水濃縮至原體積的3/5后冷凍干燥即得蜈蚣 提取物；
4) 將步驟l)所的人參提取物、步驟2)所得薤白中間體、步驟3)所得蜈蚣 提取物加入組方量水蛭素混勻。
5) 按常規(guī)制劑工藝制成片劑。 實(shí)施例4:本發(fā)明藥物口服液的制備
人參140克薤白135克蜈蚣80克水蛭素852ATU 制法
1)取組方量人參藥材，用65%乙醇提取2次，第1次加藥材8倍量溶
14劑提取1小時(shí)，第2次加10倍量溶劑提取2小時(shí)；合并上述提取液，趁熱 濾過，減壓回收乙醇，并濃縮，放入不銹鋼桶內(nèi)，加純水?dāng)嚢杈鶆?冷藏30h; 將冷藏液取出，放至常溫，板框過濾器過濾，用少量水洗滌板框，濾液加 純水稀釋，備用；取人參濃縮藥液通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，
并分別用pH值8.5的氨水、20%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫 液；將80%洗脫液加入純水，配成50%醇溶液，通過中性氧化鋁柱，收集 洗脫液，再用少量50%乙醇洗滌柱子，合并洗脫液備用；取藥液加入活性 炭，回流加熱，煮沸20min，趁熱板框抽濾，收集濾液，濃縮，冷藏過夜； 澄清板過濾，減壓干燥，即得人參提取物；
2) 取組方量薤白藥材，12倍水溫浸，濾過，低溫濃縮得薤白提取物， 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:13重量比例裝柱，使用水與乙 醇的比例按照5:95-15:85-30:70-50:50-70:30-85:15-95:5梯度變化進(jìn)行梯度洗 脫，每個(gè)濃度洗脫5.5倍柱體積，收集70-76%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇 至無醇味后，減壓濃縮為相對(duì)密度1.35的稠膏，冷凍干燥即得薤白中間體；
3) 取組方量蜈蚣粗粉，用4-6倍量的生理鹽水于6(TC溫浸提取2次， 每次3小時(shí)；澄清板過濾溫浸液，濾液合并濃縮；加入硫酸銨鹽，使溶液 至55%飽和度，放置過夜；沉淀用澄清板過濾，濾液加入硫酸銨鹽，使溶
液至85%飽和度，放置過夜后離心；除去上清液后的沉淀用水溶解，透析 脫鹽；透析后溶液用PEG-6000脫水濃縮至原體積的2/3后冷凍干燥即得蜈 蚣提取物；
4) 將步驟l)所的人參提取物、步驟2)所得薤白中間體、步驟3)所得蜈蚣 提取物加入組方量水蛭素混勻。
5) 按常規(guī)制劑工藝制成口服液。 實(shí)施例5:本發(fā)明藥物凝膠劑的制備
按照實(shí)施例1的處方和制法制得活性提取物，按常規(guī)方法制成凝膠劑。 實(shí)施例6:本發(fā)明藥物注射劑的制備
按照實(shí)施例l的處方和制法制得活性提取物，按常規(guī)方法制成注射劑。 實(shí)施例7:本發(fā)明藥物酊劑的制備
按照實(shí)施例l的處方和制法制得活性提取物，按常規(guī)方法制成酊劑。實(shí)施例8:本發(fā)明藥物丸劑的制備
按照實(shí)施例l的處方和制法制得活性提取物，按常規(guī)方法制成丸劑。 實(shí)施例9:本發(fā)明藥物糖漿劑的制備
按照實(shí)施例l的處方和制法制得活性提取物，按常規(guī)方法制成糖漿劑。 實(shí)施例10:本發(fā)明藥物散劑的制備
按照實(shí)施例l的處方和制法制得活性提取物，按常規(guī)方法制成散劑。 實(shí)施例ll:本發(fā)明藥物栓劑的制備
按照實(shí)施例l的處方和制法制得活性提取物，按常規(guī)方法制成栓劑。 實(shí)施例12:本發(fā)明藥物噴霧劑的制備
按照實(shí)施例l的處方和制法制得活性提取物，按常規(guī)方法制成噴霧劑。
權(quán)利要求
1、一種含薤白的治療血管內(nèi)皮功能障礙的藥物，其特征在于是由如下比例的原料藥制成的人參100-140重量份 薤白100-140重量份 蜈蚣50-80重量份 每100克其它原料藥總重加水蛭素180-240ATU抗凝比活性單位。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的藥物，其原料藥的比例為 人參120重量份薤白120重量份蜈蚣67重量份每100克其它原料藥總重加水蛭素210ATU抗凝比活性單位。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其原料藥的比例為 人參100重量份薤白105重量份蜈蚣53重量份每100克其它原料藥總重加水蛭素180ATU抗凝比活性單位。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其原料藥的比例為 人參140重量份薤白135重量份蜈蚣80重量份每100克其它原料藥總重加水蛭素240ATU抗凝比活性單位。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其原料藥的重量份比例為 人參125重量份薤白119重量份蜈蛇63重量份每100克其它原料藥總重加水蛭素225ATU抗凝比活性單位。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1-5任-一所述的藥物，其特征在于該藥物為膠囊劑、 片劑、散劑、口服液、軟膠囊、丸劑、酊劑、糖漿劑、栓劑、凝膠劑、噴 霧劑或注射劑。
7、 如權(quán)利要求6所述的藥物，其特征在于該藥物的活性成份由以下步 驟制成1)取組方量人參藥材，用60-90%乙醇提取1-3次，第1次加藥材8-12 倍量溶劑提取l-2小時(shí)，第2次加6-10倍量溶劑提取l-2小時(shí)，第3次加 6-10倍量溶劑提取0.5-1小時(shí)；合并上述提取液，趁熱濾過，減壓回收乙醇， 并濃縮，放入不銹鋼桶內(nèi)，加純水?dāng)嚢杈鶆?冷藏24-36h;將冷藏液取出， 放至常溫，板框過濾器過濾，用少量水洗滌板框，濾液加純水稀釋，備用；取人參濃縮藥液通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，并分別用pH值8-9 的氨水、20%乙醇、80°/。乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液；將80%洗脫液 加入純水，配成50%醇溶液，通過中性氧化鋁柱，收集洗脫液，再用少量 50%乙醇洗漆柱子，合并洗脫液備用；取藥液加入活性炭，回流加熱，煮 沸20min，趁熱板框抽濾，收集濾液，濃縮，冷藏過夜；澄清板過濾，減 壓干燥，即得人參提取物；2) 取組方量薤白藥材，8-12倍水溫浸，濾過，低溫濃縮得薤白提取物， 薤白提取物與藥用大孔樹脂HPD-400按照1:5—1:15重量比例裝柱，使用 水與乙醇的比例按照5:95—95:5梯度變化進(jìn)行梯度洗脫，每個(gè)濃度洗脫4 一6倍柱體積，收集60-80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味后，減壓 濃縮為相對(duì)密度1.1一1.5的稠膏，冷凍干燥即得薤白中間體；3) 取組方量蜈蚣粗粉，用4-6倍量的生理鹽水于6(TC溫浸提取2-3次， 每次2-3小時(shí)；澄清板過濾溫浸液，濾液合并濃縮；加入硫酸銨鹽，使溶 液至40-60%飽和度，放置過夜；沉淀用澄清板過濾，濾液加入硫酸鉸鹽， 使溶液至80-90%飽和度，放置過夜后離心；除去上清液后的沉淀用水溶解， 透析脫鹽；透析后溶液用PEG-6000脫水濃縮至原體積的1/2-2/3后冷凍干 燥即得蜈蚣提取物；4) 將步驟l)所的人參提取物、步驟2)所得薤白中間體、步驟3)所得蜈 蚣提取物加入組方量水蛭素混勻。
8、 如權(quán)利要求6所述的藥物，其特征在于該藥物由按照權(quán)利要求7制 得的活性成分按照常規(guī)方法制成膠囊劑、片劑、散劑、口服液、軟膠囊、 丸劑、酊劑、糖漿劑、栓劑、凝膠劑、噴霧劑或注射劑。
9、 如權(quán)利要求6所述的藥物，其特征在于所述藥物可升高血清NO水 平，降低血漿ET水平。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含薤白的治療血管內(nèi)皮功能障礙的藥物及其制備方法。研究證實(shí)本發(fā)明藥物能有效升高血清NO水平，降低血漿ET水平，顯示了本發(fā)明藥物具有改善內(nèi)皮功能障礙的作用。
文檔編號(hào)A61K9/02GK101439140SQ20071018805
公開日2009年5月27日 申請(qǐng)日期2007年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月23日
發(fā)明者吳以嶺 申請(qǐng)人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司