專利名稱：：猴頭菌轉(zhuǎn)化銀杏葉提取物的制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物轉(zhuǎn)化
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及生物轉(zhuǎn)化及降血糖作用，具體為猴頭菌轉(zhuǎn)化銀杏葉的發(fā)酵液及發(fā)酵液提取物的制備方法及用途。技術(shù)背景-猴頭菌(報(bào)n'c!'臓en'加mw)是著名的藥食兼用菌，其性平味甘，具有助消化、利五臟的功能。研究表明，猴頭菌具有提高機(jī)體耐缺氧能力，提高心血輸出量，加速血液循環(huán)，抑制腫瘤細(xì)胞生長等作用，尤其對(duì)胃粘膜有較好的保護(hù)作用。對(duì)具有藥效的一些己知其結(jié)構(gòu)的天然產(chǎn)物進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化和修飾是當(dāng)前研究的一個(gè)熱點(diǎn)。同時(shí)對(duì)天然產(chǎn)物進(jìn)行發(fā)酵改造，改變藥物利用度以產(chǎn)生新的治療作用，或增強(qiáng)原有療效，擴(kuò)大用藥品種，已經(jīng)成為生物轉(zhuǎn)化及制藥行業(yè)研究的重點(diǎn)之一。銀杏葉提取物(Gi"&oLextract,EGB)是從銀杏科銀杏屬植物銀杏葉中提取的活性物質(zhì)，具有改善心腦血管循環(huán)、保護(hù)肝臟提高機(jī)體免疫功能等作用。猴頭菌的研究主要集中于猴頭菌深層發(fā)酵及菌絲體的研究，銀杏葉提取物的研究集中在提取物成分的制備及制備方法，對(duì)于猴頭菌轉(zhuǎn)化銀杏葉提取物得到其發(fā)酵液用于降血糖藥物的開發(fā)，國內(nèi)還未有專利報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種猴頭菌轉(zhuǎn)化銀杏葉提取物的制備方法及用途，包括培養(yǎng)基的組成及工藝，并經(jīng)糖尿病大鼠實(shí)驗(yàn)證明其轉(zhuǎn)化物具有降血糖作用，為糖尿病的治療提供一種新的方法。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的轉(zhuǎn)化銀杏葉提取物的方法包括以下內(nèi)容猴頭菌接種到麩皮固體培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)3-7天后，轉(zhuǎn)接入種子培養(yǎng)基。種子培養(yǎng)組成為葡萄糖1040g/L,麩皮15g/L，蛋白胨210g/L，玉米粉520g/L;培養(yǎng)條件為溫度為2035。C，轉(zhuǎn)速為30-150rpm,通氣量為0.1:12:1，初始pH范圍為4.07.5。培養(yǎng)1-2天后，轉(zhuǎn)接入發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10~40g/L，麩皮l5g/L，蛋白胨210g/L，玉米粉520g/L，MgS04'7H2001g/L和KH2PO40.12g/L，l10g/LCaC03，0.25%的EGB。發(fā)酵培養(yǎng)條件為，通氣量為0.1:12:1，轉(zhuǎn)速為30-150rpm，溫度為2035。C，初始pH范圍為4.07.5。本發(fā)明的方法成本低，工藝簡(jiǎn)單，便于管理，節(jié)省人力物力。制得的發(fā)酵液經(jīng)糖尿病大鼠實(shí)驗(yàn)證明可用于降血糖藥物的制備。具體實(shí)施例方式實(shí)施例l猴頭菌接種到麩皮固體培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)3-7天后，轉(zhuǎn)接入種子培養(yǎng)基。經(jīng)種子培養(yǎng)25-28°C，150r/min培養(yǎng)l-2天后，轉(zhuǎn)接入添加發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)基組成葡萄糖40g/L，蛋白胨10g/L，麩皮5g/L，玉米粉20g/L，MgS04-7H201g/L，KH2P042g/L，EGB5g/L和10g/LCaCO3。發(fā)酵工藝轉(zhuǎn)化溫度為30'C，初始pH范圍為7.5。發(fā)酵培養(yǎng)條件為通氣量為2:1，轉(zhuǎn)速為150rpm，溫度為35'C。制得發(fā)酵液后進(jìn)行糖尿病大鼠降血糖實(shí)驗(yàn)，正常雄性SD大鼠實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)5d，選擇IO只大鼠作為正常對(duì)照組。其余大鼠禁食24h后，腹腔注射200mg/kg四氧嘧啶造模型，5d后禁食3-5h，測(cè)血糖，取血糖值Wlmmol/L的作為實(shí)驗(yàn)性糖尿病模型鼠。給藥方式如表l所示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表1各組動(dòng)物給藥方式組別制備方法模型陰性對(duì)照組0.9%生理鹽水猴頭發(fā)酵液組猴頭菌發(fā)酵離心后取上清液0.1。/oEGB組EGB溶于0.9。/。生理鹽水，配制成1%濃度(w/v)猴頭轉(zhuǎn)化O.P/。EGB發(fā)酵液組猴頭菌接種于含有1^EGB(w/v)的培養(yǎng)基,發(fā)酵離心后取上清液猴頭發(fā)酵液+0.P/。EGB組EGB溶于猴頭菌發(fā)酵上清液,配制成1^濃度(w/v)陽性對(duì)照組(二甲雙胍)二甲雙胍溶解于0.9n/。生理鹽水,配制成4g/L濃度表2不同處理組與對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前后空腹血糖含量的變化組別鼠數(shù)試驗(yàn)前試驗(yàn)后血糖降低絕對(duì)值模型陰性對(duì)照組1019.34±1.6519.05土0.98"轉(zhuǎn)化組1019.54±2.31〗.4.59±1.01**4.95±2.94發(fā)酵液十r/oEGB1018.30±1.9115.98±1.73**.2.32.士0.96'發(fā)酵液組1019.28±1.3617.64±1.63*"1.64士0.82"1%EGB組1018.61±1.7216.25±1.83**..2.36±1.23*二甲雙胍組1019.21±1.6011.66±0.91**'*7.55士2.04'實(shí)施例2猴頭菌接種經(jīng)麩皮固體培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基培養(yǎng)同施例1。培養(yǎng)1-2天后，轉(zhuǎn)接入添加發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖10g/L，蛋白胨2g/L，麩皮lg/L，玉米粉5g/L，KH2PO40.1g/L，0.5%的EGB和lg/LCaC03。發(fā)酵培養(yǎng)條件為通氣量為0.1:1，轉(zhuǎn)速為30ipm，溫度為20。C。制得發(fā)酵液后進(jìn)行糖尿病大鼠降血糖實(shí)驗(yàn)，正常雄性SD大鼠實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)5d，選擇10只大鼠作為正常對(duì)照組。其余大鼠禁食24h后，腹腔注射200mg/kg四氧嘧啶造模型，5d后禁食3-5h，測(cè)血糖，取血糖值Wlmmol/L的作為實(shí)驗(yàn)性糖尿病模型鼠。給藥方式同于實(shí)施例l，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示。表2不同處理組與對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前后空腹血糖含量的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實(shí)施例3猴頭菌接種經(jīng)麩皮固體培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基培養(yǎng)同施例1。種子培養(yǎng)1-2天后，轉(zhuǎn)接入發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)基組成葡萄糖25g/L,蛋白胨6g/L,麩皮3g/L，玉米粉12.5g/L，MgS04'7H200.5g/L和KH2P04lg/L，2.5°/。的EGB和5g/LCaC03。發(fā)酵培養(yǎng)條件為通氣量為l:l，轉(zhuǎn)速為90rpm，溫度為28。C。制得發(fā)酵液后進(jìn)行糖尿病大鼠降血糖實(shí)驗(yàn)，正常雄性SD大鼠實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)5d，選擇10只大鼠作為正常對(duì)照組。其余大鼠禁食24h后，腹腔注射200mg/kg四氧嘧啶造模型，5d后禁食3-5h，測(cè)血糖，取血糖值Wlmmol/L的作為實(shí)驗(yàn)性糖尿病模型鼠。給藥方式同于實(shí)施例l，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示。表3不同處理組與對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前后空腹血糖含量的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>以上已詳細(xì)描述了本發(fā)明的實(shí)施方案，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說很顯然可以做很多改進(jìn)和變化而不會(huì)背離本發(fā)明的基本精神。所有這些變化和改進(jìn)都在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1、猴頭菌轉(zhuǎn)化銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于以猴頭菌為出發(fā)菌株，進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)，得到具有降低血糖的猴頭菌發(fā)酵液；其中所述的種子培養(yǎng)基葡萄糖10～40g/L，麩皮1～5g/L，蛋白胨2～10g/L，玉米粉5～20g/L，培養(yǎng)條件為溫度為20～35℃，轉(zhuǎn)速為30-150rpm，通氣量為0.1∶1～2∶1，初始pH范圍為4.0～7.5；發(fā)酵培養(yǎng)基組成為葡萄糖10～40g/L，麩皮1～5g/L，蛋白胨2～10g/L，玉米粉5～20g/L，MgSO4·7H2O0～1g/L和KH2PO40.1～2g/L，1～10g/LCaCO3，0.2～5％的EGB；發(fā)酵培養(yǎng)的條件是溫度為20～35℃，攪拌速率80～200rpm，初始pH范圍為4.0～7.5；通氣量為0.1∶1～2∶1。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法得到的猴頭菌轉(zhuǎn)化銀杏葉提取物的用途，其特征是用于制備預(yù)防或治療糖尿病的藥物或保健品。全文摘要本發(fā)明屬于生物轉(zhuǎn)化
技術(shù)領(lǐng)域：
，為猴頭菌轉(zhuǎn)化銀杏葉的發(fā)酵液及發(fā)酵液提取物的制備方法及用途。其將猴頭菌接種到麩皮固體培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)3-7天后，先轉(zhuǎn)接入種子培養(yǎng)基，培養(yǎng)1-2天后，再轉(zhuǎn)接入發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。其中種子培養(yǎng)組成為葡萄糖10～40g/L，麩皮1～5g/L，蛋白胨2～10g/L，玉米粉5～20g/L；發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10～40g/L，麩皮1～5g/L，蛋白胨2～10g/L，玉米粉5～20g/L，MgSO₄·7H₂O0～1g/L和KH₂PO₄0.1～2g/L，1～10g/LCaCO₃，0.2～5％的EGB。本發(fā)明的方法成本低，工藝簡(jiǎn)單，便于管理，節(jié)省人力物力，制得的發(fā)酵液經(jīng)糖尿病大鼠實(shí)驗(yàn)證明可用于降血糖藥物的制備。文檔編號(hào)A61K36/16GK101181314SQ20071019018公開日2008年5月21日申請(qǐng)日期2007年11月20日優(yōu)先權(quán)日2007年11月20日發(fā)明者吳其飛,崔鳳杰,張志才,管國強(qiáng),香肖,錢靜亞,黃達(dá)明申請(qǐng)人:江蘇大學(xué)