專利名稱：一種中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，涉及一種中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：
呼吸道疾病是臨床常見的疾病類型，通常伴有咳嗽、咳痰、氣喘、炎癥、氣道反應(yīng)性增高等癥狀。病因比較復(fù)雜，病毒感染、細菌感染、非特異性炎癥、過敏等均可發(fā)生，治療措施需要標本兼治。常見病有支氣管炎、肺炎、支氣管哮喘、病毒性感冒等，特別是急性支氣管炎，其發(fā)病率為其它各種呼吸道疾病之首位，氣道炎癥導(dǎo)致的咳嗽是其主要癥狀，同時可因炎癥導(dǎo)致的氣道反應(yīng)性增高，而使呼吸癥狀持續(xù)不解，造成臨床治療比較棘手。目前市場上存在多種中藥和西藥，均在不同方面有所側(cè)重，部分藥品價格較高，造成臨床應(yīng)用難以普及。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有止咳、平喘、抗炎、抑菌、抗病毒作用的中藥組合物。
本發(fā)明另一個目的是提供上述中藥組合物的制備方法。
本發(fā)明還有一個目的是提供上述中藥組合物在制備止咳藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的是通過下列技術(shù)措施實現(xiàn)的 一種中藥組合物，其配方含有下列重量份的原料藥材 蟬蛻400-450份，黃芩200-250份，地龍250-300份，僵蠶200-250份，荊芥200-250份，紫菀250-300份，百部400-450份，訶子200-250份。
所述的中藥組合物，其配方含有下列重量份的原料藥材 蟬蛻414份，黃芩230份，地龍276份，僵蠶230份，荊芥230份，紫菀276份，百部414份，訶子230份。
所述的中藥組合物，其劑型為片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、口服液、注射劑。
所述中藥組合物的制備方法，包括下列步驟 a.按配方取原料藥材，其中荊芥加適量水浸泡1～3小時后，提取揮發(fā)油2～4小時，藥渣I及殘液另置備用； b.蟬蛻、黃芩、地龍、紫菀、百部、訶子加適量濃度為60～80％的乙醇回流提取2～4次，每次1～3小時，濾過，得藥渣II及濾液，濾液合并，回收乙醇至無醇味，得藥液A備用； c.藥渣II與步驟a的藥渣I與殘液合并，加入僵蠶及適量水，煎煮2～4次，每次2-3小時，合并濾液，濾過，濾液減壓濃縮至70℃相對密度約為1.2～1.4，與藥液A合并，得藥液B； d.將揮發(fā)油與藥液B合并，加入液體制劑常用輔料按液體制劑常規(guī)工藝制成液體制劑；或者 將揮發(fā)油加30～50倍量水，3～5倍量β-環(huán)糊精，以膠體磨研磨包合，濾過，包合物65～75℃烘干；另將藥液B進行干燥，粉碎成細粉；根據(jù)所需固體制劑向細粉中加入相應(yīng)常規(guī)輔料，加入包合物，常規(guī)工藝制成固體制劑。
所述中藥組合物的制備方法，其中步驟e為細粉加入適量糊精混勻，以80％乙醇制顆粒，將步驟b所得的包合物加入顆粒中，混勻，分裝，制成顆粒劑。
所述中藥組合物在制備止咳藥物中的應(yīng)用。
所述中藥組合物在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。
所述中藥組合物在制備平喘藥物中的應(yīng)用。
所述中藥組合物在制備抑菌藥物中的應(yīng)用。
所述中藥組合物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的有益效果 本發(fā)明提供的中藥組合物疏風(fēng)熱、清肺絡(luò)、宣肅止咳，具有明顯的抑菌、抗病毒、抗炎、解痙、止咳平喘、降低氣道反應(yīng)性等作用，無明顯急性毒性反應(yīng)，也無明顯蓄積性毒性和延遲性毒性作用，安全有效，穩(wěn)定性好，價格低廉，為廣大患者提供了更多的選擇。本發(fā)明提供的制備方法簡單易行，成本低。
一、本發(fā)明中藥組合物的藥效學(xué)實驗 實驗1本發(fā)明藥物對小鼠氨水引咳作用的影響 實驗材料 1受試藥物本發(fā)明藥物(按實施例1制備，以下簡稱蟬蛻，下同)，由河南省奧林特制藥廠生產(chǎn)，批號980320。規(guī)格9袋/盒，10克/袋。臨床用量每日3次，每次1袋。每克成品約相當于原生藥2.30g。因制成顆粒時，已加入糊精，所以不用加其它助懸劑，使用時用蒸餾水配成40％、20％、10％三種濃度溶液。
2陽性對照藥神奇枇杷止咳顆粒(簡稱枇杷止咳)，貴州神奇制藥有限公司生產(chǎn)，批號98090601(成人用量5g/人/次，3次/日)，使用時用蒸餾水配成20％濃度。
3試劑氨水，開封化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號9700108。
4動物昆明種小鼠，購于河南省實驗動物中心。合格證號醫(yī)動字99007。
實驗方法 1、分組與給藥取健康昆明種小鼠50只，體重18～20g，雌雄各半，隨機均分為5組，灌胃給藥，每天一次，連續(xù)三天。
空白對照組生理鹽水，10ml/kg；陽性對照組枇杷止咳顆粒，2g/kg；蟬蛻高劑量組4g/kg；蟬蛻中劑量組2g/kg；蟬蛻低劑量組1g/kg。
2、氨水引咳與指標測定末次給藥1小時后，分別置于4L的玻璃鐘罩內(nèi)，用霧化器將14％的氨水霧化導(dǎo)入鐘罩5秒鐘，記錄小鼠咳嗽的潛伏期(由噴入至小鼠咳嗽所需時間)。
3、統(tǒng)計學(xué)方法結(jié)果進行組間比較t檢驗。
實驗結(jié)果各組動物經(jīng)氨水熏吸后，本發(fā)明藥物組及神奇枇杷止咳顆粒組較生理鹽水組，咳嗽潛伏期明顯延長(表1)。
表1本發(fā)明藥物對氨水所致小鼠咳嗽潛伏期的影響
生理鹽水組比較。**P＜0.01。
結(jié)論本實驗利用氨水誘發(fā)小鼠咳嗽，觀察本發(fā)明藥物的止咳作用，結(jié)果表明，本發(fā)明藥物能明顯延長小鼠氨水引咳潛伏期，與空白對照組比較有顯著性差異。
實驗2、本發(fā)明藥物對豚鼠枸櫞酸引咳作用的影響 實驗材料 1受試藥物本發(fā)明藥物，同前。
2陽性對照藥神奇枇杷止咳顆粒，同前。
3試劑枸櫞酸鈉，開封化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號950910。
4動物豚鼠，體重200～250g，雌雄各半，由河南省實驗動物中心提供。
實驗方法 1、動物篩選取豚鼠分別置于4L密閉鐘罩內(nèi)，以霧化器霧化17.5％的枸櫞酸鈉導(dǎo)入鐘罩內(nèi)，霧化1分鐘，記錄5min內(nèi)豚鼠的咳嗽次數(shù)，將次數(shù)少于10次者棄除。
2、分組與給藥取合格豚鼠50只，雌雄各半，隨機均分為5組，灌胃給藥，每天一次，連續(xù)三天。
空白對照組生理鹽水，10ml/kg；陽性對照組枇杷止咳顆粒，2g/kg；蟬蛻高劑量組4g/kg；蟬蛻中劑量組2g/kg；蟬蛻低劑量組1g/kg。
3、枸櫞酸引咳與指標測定末次給藥1小時，用枸櫞酸鈉霧化60秒引咳，記錄5分鐘內(nèi)咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)。
4、統(tǒng)計學(xué)方法結(jié)果進行組間比較t檢驗。
實驗結(jié)果本發(fā)明藥物對枸櫞酸所致豚鼠咳嗽，可以明顯延長潛伏期及減少咳嗽次數(shù)，見表2。
表2本發(fā)明藥物對枸櫞酸引咳的作用
與生理鹽水組比較，**P＜0.01。
結(jié)論本實驗利用枸櫞酸誘發(fā)豚鼠咳嗽，觀察本發(fā)明藥物的止咳作用，結(jié)果表明，本發(fā)明藥物能明顯延長豚鼠枸櫞酸引咳潛伏期，顯著減少咳嗽次數(shù)，與空白對照組比較有顯著性差異。
實驗3本發(fā)明藥物對電刺激貓喉上神經(jīng)引咳的影響 實驗材料 1受試藥物本發(fā)明藥物，同前。實驗時配成30％、15％和7.5％三種濃度。
2陽性對照藥 神奇枇杷止咳顆粒同前，使用時用去離子水配成20％濃度。
聯(lián)邦止咳露(復(fù)方磷酸可待因口服液)，每5毫升磷酸含可待因5mg，鹽酸麻黃堿4mg，撲爾敏1mg，氯化銨110mg，深圳市制藥廠生產(chǎn)，批號981072，臨床成人用量10-15ml/次，3次/日。該藥是臨床常用西藥止咳藥。
3儀器 3.1SEN-7103型電子刺激器，日本NIHOW KOHDEN生產(chǎn)。
3.2LMS-2B生理記錄儀，成都儀器廠生產(chǎn)。
4動物雜種家貓，體重2.38±0.33kg，雌雄各半，河南省中醫(yī)藥研究院動物中心提供。
實驗分組 1、本發(fā)明藥物，高劑量組3g/kg(以成藥計，藥物30g加蒸餾水至100ml，10mi/kg體重ig)；中劑量組1.5g/kg(以成藥計，藥物15g加蒸餾水至100ml，10ml/kg體重ig)；低劑量組0.75g/kg(以成藥計，藥物7.5g加蒸餾水至100ml，10ml/kg體重ig)。
2、聯(lián)邦止咳露，4.5mg/kg(以磷酸可待因含量計)，藥液45ml加蒸餾水至100ml，10ml/kg體重ig。
3、神奇枇杷止咳顆粒，1.8g/kg，藥物18g加蒸餾水至100ml，10ml/kg體重ig)。
4、溶劑對照組，蒸餾水10ml/kg，ig。
實驗方法 1、取健康貓，稱重，用戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射麻醉，背位固定于手術(shù)臺上，沿頸中線切開皮膚，分離皮下組織，暴露甲狀軟骨，找出一側(cè)迷走神經(jīng)，沿迷走神經(jīng)向頭端找出結(jié)神經(jīng)節(jié)，即可見喉上神經(jīng)由神經(jīng)結(jié)分出，然后仔細分離出喉上神經(jīng)(不要損傷神經(jīng))按上保護電級，并在電極處滴數(shù)滴液體石蠟，以防干燥。
2、于腹部切開皮膚暴露一部分腹直肌，縫一絲線于肌肉上，另一端固定于拉力換能器上，用記錄儀記錄貓咳嗽情況。
3、調(diào)節(jié)電子刺激器，有關(guān)參數(shù)如下波寬0.5ms，脈沖頻率50次/秒，每次刺激持續(xù)時間5秒鐘，相鄰兩次刺激間隔時間不小于5分鐘。調(diào)節(jié)刺激輸出電壓由低到高遞增，測出給藥前刺激喉上神經(jīng)時引起咳嗽的電壓閾值即為該貓的咳嗽閾值(以連續(xù)兩次刺激閾值不變?yōu)闇?，然后對貓灌胃給藥一次，測定給藥后閾值變化情況。
4、觀察指標電刺激閾值，包括給藥前閾值，給藥后最大閾值，并計算前后差值，提高率等。
閾值提高差值(V)＝給藥后最大閾值-給藥前閾值
結(jié)果實驗結(jié)果顯示本發(fā)明藥物高、中劑量組能明顯提高致咳刺激電壓閾值，聯(lián)邦止咳露亦具有同樣作用，見表3。
表3本發(fā)明藥物對電刺激貓喉上神經(jīng)致咳電壓閾值的影響(n＝10，X±SD) 注與給藥前比較△P＜0.05，△△p＜0.01；與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論本實驗利用電刺激貓喉上神經(jīng)引咳法，觀察本發(fā)明藥物止咳作用，結(jié)果表明，本發(fā)明藥物3g/kg、1.5g/kg、0.75g/kg三個劑量組分別對貓灌胃給藥，可3g/kg及1.5g/kg明顯提高電刺激貓喉上神經(jīng)致咳的電壓閾值，并隨劑量增加，作用增強。結(jié)果表明本發(fā)明藥物對貓具有中樞性鎮(zhèn)咳作用。
實驗4本發(fā)明藥物對豚鼠離體氣管平滑肌的影響 實驗材料 1、本發(fā)明藥物及神奇枇杷止咳顆粒，同前，使用時用生理鹽水分別配成40％及20％的濃度。
2、磷酸組織胺，批號960711。中國科學(xué)院上海生化研究所產(chǎn)品。
3、氯化乙酰膽堿，批號971125，上海試劑三廠產(chǎn)品。
4、動物成年豚鼠，雌雄不拘，體重367±42g，由河南省實驗動物中心提供。
5、儀器、離體器官側(cè)定儀。DC-001型，南京分析儀器廠生產(chǎn)。
實驗方法 取健康豚鼠，用木捶猛擊頭部致昏后，股動脈放血致死，迅速剪開頸部皮膚，分離氣管，從甲狀腺軟骨以下至氣管分叉處整條氣管剪下，放入盛有Krebs營養(yǎng)液的培養(yǎng)器皿中(營養(yǎng)液0℃，預(yù)先充O2飽和)，剪除氣管周圍的結(jié)締組織，將氣管剪成約3mm寬的螺旋條。放入離體器官測定儀，加入營養(yǎng)液，通氣(95％O2和5％CO2)。讓氣管在營養(yǎng)液中平衡120min，更換三次營養(yǎng)液。接通記錄儀電源，記錄一段正常曲線后，再按下列步驟進行。
(1)加入0.01％磷酸組織胺(His)0.2ml，待出現(xiàn)高峰時，分別觀察加入累計加入 本發(fā)明藥物(0.4g/ml)0.2ml，0.4ml，0.8ml；神奇枇杷止咳顆粒(0.2g/ml)0.2ml，0.4ml，0.8ml，空白對照；累計加入生理鹽水0.2ml，0.4ml、0.8ml后平滑肌收縮情況。
(2)加入0.05％乙酰膽堿(Ach)0.2ml，待出現(xiàn)高峰時，分別觀察藥物同(1)，并記錄平滑肌收縮情況。
結(jié)果本發(fā)明藥物對豚鼠離體氣管平滑肌His及Ach所致痙攣有明顯對抗作用。(表4，5) 表4蛻止咳顆粒對豚鼠離體氣管平滑肌His致痙后的影響
與給藥前比較，**P＜0.01 表5本發(fā)明藥物對豚鼠離體氣管平滑肌Ach致痙后的影響
與給藥前比較，**P＜0.01。
結(jié)論本發(fā)明藥物對豚鼠離體氣管平滑肌組胺(His)致痙具有解痙作用對乙酰膽堿(Ach)致痙后，也有明顯的解痙作用。
實驗5本發(fā)明藥物的抗炎作用 實驗材料 1、本發(fā)明藥物，同前。
2、動物昆明種小鼠，雄性，體重25～30g，由河南省實驗動物中心提供。合格證號醫(yī)動字99007。
3、巴豆油致炎液巴豆油2％，乙醚78％，無水乙醇20％，混勻，置磨口瓶中，5℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 4、阿斯匹林，鄭州化學(xué)制藥廠提供原料藥，使用時用1％糊精溶液配成20mg/ml，即2％濃度。
實驗方法 實驗選用小鼠60只，隨機均分為6組(1)空白對照組ig生理鹽水10ml/kg(2)蟬蛻大劑量組ig蟬蛻4g/kg，(3)蟬蛻中劑量組ig蟬蛻2g/kg，(4)蟬蛻小劑量組ig蟬蛻1g/kg，(5)神奇枇杷止咳顆粒組ig神奇枇杷止咳顆粒2.0g/kg，(6)阿斯匹林組，ig阿斯匹林200mg/kg。各組動物，每天ig一次，共6天。第6天給藥30min后，每只小鼠左耳兩面均勻涂上巴豆油致炎液0.5ml，4小時后，小鼠脫椎處死，用8mm直徑打孔器在相同部位打下兩耳片，稱重，求出兩耳片差異，按下列公式計算抑制率
結(jié)果結(jié)果見表6，蟬蛻大、中、小劑量組及枇杷止咳顆粒組與生理鹽水組比較，小鼠兩耳重量差均有所降低，其中蟬蛻大劑量組作用最強。
表6本發(fā)明藥物對小鼠耳腫脹的影響
注與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01 結(jié)論本發(fā)明藥物有明顯的抗炎作用。
實驗6本發(fā)明藥物對免疫系統(tǒng)的影響 實驗材料 1、本發(fā)明藥物，同前； 2、2，4-二硝基氯苯，批號970611，上海試劑一廠； 3、伊文思藍，批號950415，上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站； 4、雞紅細胞懸液，常規(guī)雞翼靜脈取血，放2倍阿氏液4℃保存； 5、都氏試劑，碳酸氫鈉1.0g，氰化鉀0.05g，高鐵氰化鉀0.2g，加蒸餾水至1000ml； 6、補體制備新鮮豚鼠血清，用生理鹽水1∶10稀釋備用。
7、動物昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22g；由河南省中醫(yī)藥研究院動物房提供。合格證號醫(yī)動字99012。
實驗方法 1、對2，4-二硝基氯苯(DNCB)所致遲發(fā)型皮膚超敏反應(yīng)(DTH)的影響 實驗選用小鼠50只，隨機均分為5組，分組及給藥方法見表7，于小鼠頸下脫毛后滴0.5g/ml DNCB液2ul/只致敏，給藥當日連續(xù)給藥10天后，在小鼠腹部脫毛皮膚上滴0.025g/ml DNCB液20ul/只進行攻擊。24小時后iv 1mg/ml伊文思藍10mg/kg，30min后處死動物，取腹部藍染皮膚，剪碎置試管中，用1∶1丙酮生理鹽水5ml浸泡24小時，取上清液比色(λ＝610nm)。
結(jié)果本發(fā)明藥物對小鼠DTH反應(yīng)的強度沒有顯著影響，給藥組OD值低于對照組(表7)。
表7本發(fā)明藥物對DNCB誘導(dǎo)小鼠DTH反應(yīng)的影響
注與空白對照組比較，*P＜0.05 2、本發(fā)明藥物對血清溶血素的影響 選用昆明種小鼠50只，隨機均分為5組，分組及給藥方法見表8，各組動物連續(xù)ig給藥7天，于實驗當天ip 2％雞紅細胞混懸液0.2ml/只。7天后摘除眼球取血20ul/只，加入1ml生理鹽水中，每管加入5％雞紅細胞0.5ml，置37℃水浴30min，冰箱終止反應(yīng)，離心，2500rpm 5分鐘，取上清液1ml加入3ml都氏試劑靜置10min后，722分光光度計540nm處比色。
結(jié)果給藥組動物與空白組比較，OD值無顯著性差異(表8)。
表8本發(fā)明藥物對小鼠血清溶血素生成的影響
結(jié)論本發(fā)明藥物對DNBC誘導(dǎo)小鼠DTH以及對小鼠血清溶血素生成沒有顯著影響，只有降低趨勢。
實驗7本發(fā)明藥物的體內(nèi)外抑菌實驗 實驗材料 1、實驗動物昆明種小鼠，體重14±1g，雌雄兼用。由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物養(yǎng)殖場提供。合格證號SCXK11-00-0006。
2、受試藥物本發(fā)明藥物，同前。
3、陽性藥物環(huán)丙沙星注射液，德國拜耳公司制造，批號960701，體外實驗時用肉湯培養(yǎng)基稀釋成含0.2mg/ml的原藥液用于實驗；環(huán)丙沙星片，天津市中央藥業(yè)有限公司制造，批號010336，實驗時按臨床等效劑量灌胃給藥。
4、細菌菌株金黃色葡萄球菌(260032-18)；白色葡萄球菌(26101)；乙型溶血性鏈球菌(32172 10)；肺炎桿菌(11 14)；大腸桿菌(44113 23)；綠膿桿菌(10211 55)；變形桿菌(49101 1)；卡它球菌(29108)；淋球菌(29106)。分別購自衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所及北京市醫(yī)藥生物技術(shù)研究所，為半年內(nèi)臨床分離菌株或標準株。
5、肉湯培養(yǎng)基衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所生產(chǎn)，批號980226。
6、24孔一次性培養(yǎng)板。37℃培養(yǎng)箱。
方法及結(jié)果 1、對乙型溶血性鏈球菌所致小鼠死亡的保護作用 1.1感染小鼠最小致死量(MLD)的確定 將乙型溶血性鏈球菌用生理鹽水進行105-109個菌/ml的稀釋后，給小鼠腹腔注射進行感染。每只0.5ml，每個稀釋度感染10只，記錄感染后各組小鼠的死亡情況，連續(xù)觀察7天。將在3天內(nèi)小鼠的死亡率達80％以上的稀釋度定為最小致死量。經(jīng)反復(fù)觀察，本實驗中乙型溶血性鏈球菌在108個菌/ml稀釋時，小鼠3天內(nèi)累計死亡率可達80％以上，故將其定為最小致死量，用于感染動物。
1.2對小鼠死亡的保護作用 取小鼠100只，體重14±1g，按體重隨機分為5組，實驗組分別給予本發(fā)明藥物3.0g、2.0g、1.0g成藥/kg/d；環(huán)丙沙星片組0.143g/kg/d；細菌感染對照組給予同體積的蒸餾水。連續(xù)三天，第四天取已增菌18小時的乙型溶血性鏈球菌菌液(含108個菌/ml)，0.5ml/只，腹腔注射，作致死性攻擊，感染后再繼續(xù)給藥二天。每日記錄感染后動物死亡數(shù)，連續(xù)1周，計算死亡率、保護率及生命延長率，以X2及t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果見表9、10。




表9本發(fā)明藥物對乙型溶血性鏈球菌致小鼠死亡率的影響 與細菌感染組比較**P＜0.01 表10本發(fā)明藥物對乙型溶血性鏈球菌致小鼠存活時間的影響 與細菌感染組比較**P＜0.01 *P＜0.05 表9、10結(jié)果顯示小鼠感染細菌7天內(nèi)，本發(fā)明藥物3.0g/kg/d劑量組小鼠的死亡數(shù)較感染對照組相對減少(保護率為40％)，但在統(tǒng)計學(xué)上無明顯差異。但小鼠的平均存活天數(shù)較感染對照組明顯延長，統(tǒng)計學(xué)有顯著性差異(P＜0.05)。表明本發(fā)明藥物在此劑量時對乙型溶血性鏈球菌感染致小鼠死亡有一定的保護作用。
2.本發(fā)明藥物的體外抑菌實驗 用肉湯培養(yǎng)基將受試藥物進行1∶5～1∶160倍倍比稀釋后，加至24孔細胞培養(yǎng)板上，每個稀釋度各設(shè)2孔，每孔加入藥液培養(yǎng)基1.0ml，再加入105個菌/ml的菌液0.1ml，置37℃溫箱中培養(yǎng)24小時，觀察各孔中細菌生長情況。同時設(shè)細菌對照和陽性對照藥對照。結(jié)果見表11。
表11本發(fā)明藥物的體外抑菌實驗 +表示有細菌生長-表示無細菌生長 2.2結(jié)果顯示經(jīng)24小時培養(yǎng)后，細菌對照孔均有細菌生長。本發(fā)明藥物對所試的9種細菌、15個菌株均有不同程度的抑制作用，最低抑菌濃度分別在6.25～25mg/ml之間，抑菌效價分別在1∶10～1∶40之間。環(huán)丙沙星在所試劑量時對體外細菌的生長均有明顯的抑制作用。
小結(jié)本實驗觀察了本發(fā)明藥物的體內(nèi)外抑菌作用，結(jié)果顯示本發(fā)明藥物在對乙型溶血性鏈球菌所致小鼠死亡保護實驗中，可明顯延長小鼠的生存天數(shù)，小鼠的死亡數(shù)有減少的趨勢；在體外實驗，本發(fā)明藥物對所試的9種細菌、15個菌株均有不同程度的抑制作用，最低抑菌濃度在6.25～25mg/ml之間，抑菌效價為1∶10～1∶40。說明本發(fā)明藥物在體內(nèi)外實驗中均有明顯的抑菌作用。
實驗8本發(fā)明藥物體內(nèi)抗病毒試驗 實驗材料 1、動物瑞士種小鼠，體重12-15g，雌雄各半。由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所繁殖場提供，合格證號01-3001。
2、病毒流感病毒亞甲型鼠肺適應(yīng)株FM1，-60℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 3、免疫血清用雞胚尿囊液傳代的FM1病毒免疫家兔，獲得高效價的免疫血清，凍存于-60℃冰箱備用。
4、標記抗體羊抗兔IgG-FITC，華美生物工程公司出品，-20℃保存?zhèn)溆谩?br> 5、受試藥物本發(fā)明藥物，同前。實驗時按11、5.5、2.75g/kg/d小鼠灌胃給藥。
6、陽性對照藥神奇枇杷止咳顆粒，貴州神奇制藥有限公司生產(chǎn)，批號98040201；病毒唑湖北省醫(yī)藥工業(yè)研究所出品，為原料藥。
方法和結(jié)果 1、對小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用 取小鼠70只按體重隨機分成7組。分別給予本發(fā)明藥物上述三個劑量；病毒唑(0.07g/kg/d)組；神奇枇杷止咳顆粒組(2.75g/kg/d)；病毒感染對照組及正常動物對照組。除正常對照組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15個LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05ml。從感染前一天開始灌胃給藥，連續(xù)5天，病毒對照組以等容量蒸餾水灌胃。第6天稱取小鼠體重后解剖，肉眼觀察肺部病變，記錄肺部肝樣實變的程度，摘取全肺稱重，逐個計算肺指數(shù)值，并求出肺指數(shù)抑制率。
肺指數(shù)＝[肺重(g)/體重(g)]×100
結(jié)果采用組間t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理。見表12。
表12本發(fā)明藥物對小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用 與病毒對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05 結(jié)果顯示蟬蛻大、中劑量組動物的肺指數(shù)值均低于病毒對照組，與病毒對照組比較有顯著性差異。表明蟬蛻在11、5.5g/kg/d劑量時對流感病毒引起的小鼠肺炎有明顯的抑制作用。
2、對小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量的影響 除病毒感染量為1000LD50外，動物分組、給藥方法等均同上一個實驗，但去掉正常對照組。感染病毒后48小時處死小鼠，解剖取肺，摘取左側(cè)中葉肺固定，常規(guī)脫水、包埋、制作石蠟切片。以間接免疫熒光法染色，以熒光素標記的抗流感病毒血清作示蹤原，通過間接免疫熒光結(jié)合，觀察感染鼠肺內(nèi)特異性的病毒抗原，判斷藥物對病毒增殖的作用，熒光陽性數(shù)多，表明病毒顆粒增殖多，并作組間比較。
表13本發(fā)明藥物對小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量的影響
與病毒對照組比較**P＜0.01 結(jié)果顯示蟬蛻顆粒大劑量組的肺內(nèi)流感病毒增殖量明顯少于病毒對照組，與病毒對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)。說明蟬蛻在11g/kg/d劑量時對小鼠肺內(nèi)流感 病毒增殖量有顯著的抑制作用。
小結(jié)流感病毒感染小鼠肺臟后，可引起肺組織的炎性改變形成病毒性肺炎。由于肺組織充血、滲出使肺臟重量增加，且肺重量的增加與其炎癥的程度成正相關(guān)。在試驗室常采用肺指數(shù)(肺重量/體重)來表示肺臟炎癥輕重的程度，肺指數(shù)越大表明肺的炎癥病變越重，反之亦然。此外，流感病毒在引起肺臟炎癥改變的同時，常在肺內(nèi)進行繁殖，在實驗室采用特異性免疫熒光抗體進行標記可反映病毒增殖的程度，特異熒光標記的比率越高表示病毒增殖量越大，因此，常做為判斷藥物抗病毒作用的另一常用指標。本試驗觀察了本發(fā)明藥物對小鼠流感病毒性肺炎及肺內(nèi)流感病毒增殖量的影響，結(jié)果顯示在11g/kg/d、5.5g/kg/d劑量時對小鼠流感性肺炎有明顯抑制作用；在11g/kg/d劑量時對小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖有明顯抑制作用。
實驗9本發(fā)明藥物對大鼠高氣道反應(yīng)的影響 動物SD大鼠，雄性，由河南省實驗動物中心提供，體重160～180g。合格證號醫(yī)動字01006。
藥物 本發(fā)明藥物同前。
阿斯美膠囊日本三共株式會社生產(chǎn)，批號MN531；進口藥品證號20000006；生產(chǎn)日期2001年7月；每粒膠囊成份鹽酸甲氧那明12.5mg，那可丁7mg，氨茶堿25mg，馬來酸氯苯那敏2mg，共46.5mg/粒；適應(yīng)癥哮喘、過敏性咳嗽；成人用量2粒/次，3次/日。是臨床上常用的治療哮喘及過敏性咳嗽的藥品之一，該藥作為西藥陽性對照藥。
神奇枇杷止咳顆粒同前。
儀器霧化器YC-Y800型，醫(yī)用超生霧化器，北京亞都科技股份有限公司生產(chǎn)。Pclab生物信號采集系統(tǒng)北京微信斯達科技發(fā)展有限責(zé)任公司生產(chǎn)。壓力傳感器MPX5050DP Motorola，美國產(chǎn)。γ-計數(shù)儀SN-695放免測定儀，上海產(chǎn)。
試劑 1、卵蛋白華美生物工程公司提供，批號0111。
2、白細胞介素-4(IL-4)放免藥盒，北京東亞免疫技術(shù)研究所提供，批號20020628。
3、白細胞介素-6(IL-6)放免藥盒，北京東亞免疫技術(shù)研究所提供，批號20020628。
4、白細胞介素-8(IL-8)放免藥盒，北京東亞免疫技術(shù)研究所提供，批號20020628。
5、白栓素B2(TXB2)放免藥盒，北京東亞免疫技術(shù)研究所提供，批號20020628。
6、內(nèi)皮素(ET-1)放免藥盒，北京華英生物技術(shù)研究所提供，批號20020630。
7、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)放免藥盒，北京華英生物技術(shù)研究所提供，批號20020630。
方法 將大鼠分別放入4L玻璃鐘罩內(nèi)，以1mg/ml的卵蛋白霧化導(dǎo)入1分鐘，1分鐘內(nèi)出現(xiàn)咳嗽動物為合格的敏感動物，挑選合格大鼠隨機分為以下各組1、空白組。2、模型組。3、阿斯美治療組7mg/kg。4、枇杷止咳治療組0.23g/kg。5、蟬蛻治療組大劑量4g/kg。6、蟬蛻治療組中劑量2g/kg。7、蟬蛻治療組小劑量1g/kg。8、阿斯美預(yù)防組7mg/kg。9、枇杷止咳預(yù)防組0.23g/kg。10、蟬蛻預(yù)防組大劑量4g/kg。11、蟬蛻預(yù)防組中劑量2g/kg。12、蟬蛻預(yù)防組小劑量1g/kg。
將氫氧化鋁干粉以10％的比例溶入蒸餾水，加熱煮沸10分鐘，不停攪拌，制成氫氧化鋁溶膠液，過濾，取上清液，以此做為佐劑，溶入卵蛋白，配1mg/ml的卵蛋白溶液。各組動物(除空白組外)以新鮮配制的1％卵蛋白溶液作皮下液射，每鼠在兩后足跖、兩腹股溝、腰兩側(cè)、背兩側(cè)、頸兩側(cè)共取10點，每點皮下注射0.05ml，同時腹腔注射0.5ml，共計1ml，空白對照組僅注射氫氧化鋁佐劑，1周后再重復(fù)一次，使大鼠致敏。
預(yù)防給藥的各組大鼠于第一次注射卵蛋白開始灌胃不同的藥物，治療給藥的各組大鼠于第二次注射卵蛋白一周后開始給藥，空白對照組及模型組只灌胃去離子水2ml/100g。
各組動物均于第二次注射卵蛋白一周后開始高氣道反應(yīng)激發(fā)處理，將大鼠置于4L的玻璃鐘罩內(nèi)，連接超聲霧化器，霧化吸入0.4mg/ml的卵蛋白(正常對照組以生理鹽水代之)15min，霧量控制在1ml/2min，以激發(fā)哮喘。連續(xù)激發(fā)2周，同時各組給予不同藥物，兩周后將動物置于下面裝置中測動物清醒狀態(tài)下的咳喘潛伏期、咳喘次數(shù)、呼吸頻率等。
次日將動物麻醉，腹主動脈取血；取右側(cè)肺，用10ml生理鹽水灌洗3次，回收肺泡灌洗液，作下列檢測肺泡灌洗液白細胞計數(shù)，然后1500轉(zhuǎn)/分離心15分鐘，上清液測IL-8、IL-6、IL-4、TXB2、ET-1、GM-CSF等，血液也測IL-4、IL-6、IL-8、TXB2、ET-1、GM-CSF等。
表14本發(fā)明藥物對大鼠高氣道反應(yīng)的影響
注與模型組比較**P＜0.01 表15本發(fā)明藥物對高氣道反應(yīng)大鼠咳喘次數(shù)、咳喘潛伏期的影響
注與模型組比較**P＜0.01 表16本發(fā)明藥物對高氣道反應(yīng)大鼠肺泡灌洗液中相關(guān)細胞因子的影響
注與模型組比較，*P＜0.05 **P＜0.01 表17本發(fā)明藥物對高氣道反應(yīng)大鼠血清中相關(guān)細胞因予的影響
注與模型組比較，*P＜0.05 **P＜0.01 結(jié)果本發(fā)明藥物對卵蛋白激發(fā)后高氣道反應(yīng)大鼠，可以抑制其咳喘次數(shù)、減少呼吸頻率及呼吸幅度，延長哮喘潛伏期，對肺泡灌洗液中的血細數(shù)及炎性細胞因子有抑制作用，對血液中的炎性細胞因子也有明顯的抑制作用，但對ET-1無明顯作用。
結(jié)論本發(fā)明藥物對高氣道反應(yīng)模型大鼠的高過敏性(咳喘及肺部炎癥)有明顯的抑制作用。
二、急性毒性實驗 本發(fā)明藥物急性毒性試驗 實驗材料 1、受試藥物本發(fā)明藥物(以下簡稱蟬蛻)，由河南省奧林特制藥廠生產(chǎn)。規(guī)格9袋/盒，10克/袋。臨床用量每日3次，每次1袋。每克成品約相當于原生藥2.30g。為提高用藥濃度，實驗用浸膏粉(每克含生藥4.18克)，用蒸溜水配成73.3％濃度。浸膏粉由河南省奧林特藥廠提供批號，010912。
2、實驗動物昆明種小鼠20只，雌雄各半，體重18～20g，由河南省實驗動物中心提供，合格證號醫(yī)動字01006。
方法與結(jié)果 1方法實驗用昆明種小鼠，禁食12小時(自由飲水)后，灌胃給藥，一日內(nèi)灌胃三次，每次0.4ml/10g體重，間隔5小時。每天觀察動物毛發(fā)、活動、精神狀態(tài)、食量、飲水量及動物死亡情況等，連續(xù)觀察7天。
2結(jié)果小鼠灌胃給藥后，7天內(nèi)動物毛發(fā)、活動、精神狀態(tài)、食量及排泄物等均未見異常，無動物死亡，體重增長見表18。測得小鼠一日累計本發(fā)明藥物灌胃的最大給藥量為367.7g生藥/kg體重，相當于臨床用藥量的319.7倍。
結(jié)論本發(fā)明藥物以小鼠能耐受的最大濃度和最大可灌胃容積灌胃給藥，觀察7天，未發(fā)現(xiàn)明顯急性毒性反應(yīng)，無動物死亡。測得本發(fā)明藥物小鼠灌胃給藥的最大給藥量為367.7g生藥/kg體重(相當于臨床用量的319.7倍)。
表18本發(fā)明藥物急性毒性實驗體重變化表
三、長期毒性實驗 本發(fā)明藥物以28.88g生藥/kg體重、21.66g生藥/kg體重和14.44g生藥/kg體重(分別相當于臨床用藥量的80倍、60倍和40倍)三個劑量給大鼠連續(xù)灌胃給藥90天及停藥14天，觀察對大鼠可能產(chǎn)生的蓄積性毒性和延遲性毒性反應(yīng)。實驗結(jié)果表明給藥期間及停藥后，三個劑量組動物體重增長、血常規(guī)、血液生化測定、各主要臟器指數(shù)和組織病理學(xué)檢查均未見異常，與空白對照組比較無顯著性差異。說明本發(fā)明藥物對大鼠無明顯蓄積性毒性和延遲性毒性反應(yīng)。
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具體實施例方式 以下通過實施例對本發(fā)明作進一步的闡述。
實施例1 配方 蟬蛻414g，黃芩230g，地龍276g，僵蠶230g，荊芥230g，紫菀276g，百部414g，訶子230g。
制備方法 a.按配方取原料藥材，其中荊芥加水浸泡2小時后，提取揮發(fā)油3小時，藥渣I及殘液另置備用； b.揮發(fā)油加40倍量水，4倍量β-環(huán)糊精，以膠體磨研磨包合10分鐘，濾過，包合物70℃烘干，另置備用； c.蟬蛻、黃芩、地龍、紫菀、百部、訶子加14720ml 70％乙醇回流提取3次，每次2小時，濾過，得藥渣II及濾液，濾液合并，回收乙醇至無醇味，得藥液備用； d.藥渣II與步驟a的藥渣I與殘液合并，加入僵蠶，加水18400ml，煎煮3次，每次2.5小時，合并濾液，濾過，濾液減壓濃縮至70℃相對密度約為1.3，與步驟c所得藥液合并，真空干燥，粉碎成細粉； e.細粉加入糊精450g混勻，以80％乙醇制顆粒，將步驟b所得的包合物加入顆粒中，混勻，分裝，制成顆粒劑。
實施例2 配方 蟬蛻400g，黃芩230g，地龍250g，僵蠶250g，荊芥200g，紫菀270g，百部430g，訶子240g。
制備方法 a.按配方取原料藥材，其中荊芥加水浸泡2小時后，提取揮發(fā)油2.5小時，藥渣I及殘液另置備用； b.揮發(fā)油加45倍量水，5倍量β-環(huán)糊精，以膠體磨研磨包合10分鐘，濾過，包合物68℃烘干，另置備用； c.蟬蛻、黃芩、地龍、紫菀、百部、訶子加14720ml 70％的乙醇回流提取4次，每次1.5小時，濾過，得藥渣II及濾液，濾液合并，回收乙醇至無醇味，得藥液備用； d.藥渣II與步驟a的藥渣I與殘液合并，加入僵蠶，加水18400ml，煎煮3次，每次2.5小時，合并濾液，濾過，濾液減壓濃縮至70℃相對密度約為1.3，與步驟c所得藥液合并，真空干燥，粉碎成細粉； e.細粉加入糊精450g混勻，以80％乙醇制顆粒，將步驟b所得的包合物加入顆粒中，混勻，分裝，制成顆粒劑。
實施例3 配方 蟬蛻450g，黃芩230g，地龍290g，僵蠶240g，荊芥230g，紫菀280g，百部420g，訶子220g。
制備方法 a.按配方取原料藥材，其中荊芥加水浸泡2小時后，提取揮發(fā)油3小時，藥渣I及殘液另置備用； b.蟬蛻、黃芩、地龍、紫菀、百部、訶子加14720ml 70％的乙醇回流提取3次，每次3小時，濾過，得藥渣II及濾液，濾液合并，回收乙醇至無醇味，得藥液A備用； d.藥渣II與步驟a的藥渣I與殘液合并，加入僵蠶，加水18400ml，煎煮2次，每次3小時，合并濾液，濾過，濾液減壓濃縮至70℃相對密度約為1.2，與藥液A合并，得藥液B； e.揮發(fā)油與藥液B合并，加入矯味劑，混勻，加水定容至10000ml，分裝，滅菌，制成口服液，每支10ml。
實施例4 配方 蟬蛻420g，黃芩200g，地龍260g，僵蠶238g，荊芥225g，紫菀276g，百部427g，訶子232g。
制備方法 a.按配方取原料藥材，其中荊芥加適量水浸泡2小時后，提取揮發(fā)油4小時，藥渣I及殘液另置備用； b.揮發(fā)油加50倍量水，5倍量β-環(huán)糊精，以膠體磨研磨包合10分鐘，濾過，包合物75℃烘干，另置備用； c.蟬蛻、黃芩、地龍、紫菀、百部、訶子加14720ml 70％的乙醇回流提取2次，每次3小時，濾過，得藥渣II及濾液，濾液合并，回收乙醇至無醇味，得藥液備用； d.藥渣II與步驟a的藥渣I與殘液合并，加入僵蠶，加水18400ml，煎煮2次，每次3小時，合并濾液，濾過，濾液減壓濃縮至70℃相對密度約為1.4，與步驟c所得藥液合并，真空干燥，粉碎成細粉； e.細粉加入淀粉450g，再加入步驟b所得的包合物，混勻，壓片，制成片劑。
實施例5 配方 蟬蛻436g，黃芩215g，地龍273g，僵蠶243g，荊芥241g，紫菀260g，百部435g，訶子227g。
制備方法 a.按配方取原料藥材，其中荊芥加適量水浸泡3小時后，提取揮發(fā)油2小時，藥渣I及殘液另置備用； b.揮發(fā)油加45倍量水，4倍量β-環(huán)糊精，以膠體磨研磨包合，濾過，包合物70℃烘干，另置備用； c.蟬蛻、黃芩、地龍、紫菀、百部、訶子加14720ml 70％的乙醇回流提取3次，每次2小時，濾過，得藥渣II及濾液，濾液合并，回收乙醇至無醇味，得藥液備用； d.藥渣II與步驟a的藥渣I與殘液合并，加入僵蠶，加水18400ml，煎煮2次，每次3小時，合并濾液，濾過，濾液減壓濃縮至70℃相對密度約為1.3，與步驟c所得藥液合并，真空干燥，粉碎成細粉； e.細粉加入糊精450g混勻，以80％乙醇制顆粒，將步驟b所得的包合物加入顆粒中，混勻，灌裝膠囊，制成膠囊劑。
權(quán)利要求
1.一種中藥組合物，其特征是該中藥組合物的配方含有下列重量份的原料藥材
蟬蛻400-450份，黃芩200-250份，地龍250-300份，僵蠶200-250份，荊芥200-250份，紫菀250-300份，百部400-450份，訶子200-250份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征是該中藥組合物的配方含有下列重量份的原料藥材
蟬蛻414份，黃芩230份，地龍276份，僵蠶230份，荊芥230份，紫菀276份，百部414份，訶子230份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物，其特征是該中藥組合物的劑型為片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、口服液、注射劑。
4.權(quán)利要求1或2所述中藥組合物的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟
a.按配方取原料藥材，其中荊芥加適量水浸泡1～3小時后，提取揮發(fā)油2～4小時，藥渣I及殘液另置備用；
b.蟬蛻、黃芩、地龍、紫菀、百部、訶子加適量濃度為60～80％的乙醇回流提取2～4次，每次1～3小時，濾過，得藥渣II及濾液，濾液合并，回收乙醇至無醇味，得藥液A備用；
c.藥渣II與步驟a的藥渣I與殘液合并，加入僵蠶及適量水，煎煮2～4次，每次2-3小時，合并濾液，濾過，濾液減壓濃縮至70℃相對密度約為1.2～1.4，與藥液A合并，得藥液B；
d.將揮發(fā)油與藥液B合并，加入液體制劑常用輔料按液體制劑常規(guī)工藝制成液體制劑；或者
將揮發(fā)油加30～50倍量水，3～5倍量β-環(huán)糊精，以膠體磨研磨包合，濾過，包合物65～75℃烘干；另將藥液B進行干燥，粉碎成細粉；根據(jù)所需固體制劑向細粉中加入相應(yīng)常規(guī)輔料，加入包合物，常規(guī)工藝制成固體制劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述中藥組合物的制備方法，其特征在于步驟d為細粉加入適量糊精混勻，以80％乙醇制顆粒，將所得的包合物加入顆粒中，混勻，分裝，制成顆粒劑。
6.權(quán)利要求1或2所述中藥組合物在制備止咳藥物中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1或2所述中藥組合物在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1或2所述中藥組合物在制備平喘藥物中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1或2所述中藥組合物在制備抑菌藥物中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求1或2所述中藥組合物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，公開了一種中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。該中藥組合物的配方含有下列重量份的原料藥材蟬蛻400-450份，黃芩200-250份，地龍250-300份，僵蠶200-250份，荊芥200-250份，紫菀250-300份，百部400-450份，訶子200-250份。該中藥組合藥具有明顯的抑菌、抗病毒、抗炎、解痙、止咳平喘、降低氣道反應(yīng)性等作用，安全有效，成本低，可用于制備止咳、抗病毒、平喘藥物。
文檔編號A61K36/88GK101181561SQ20071019113
公開日2008年5月21日 申請日期2007年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月10日
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