專利名稱：一種中藥組合物及其制備工藝和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，涉及一種中藥組合物及其制備工藝和應(yīng)用。

背景技術(shù)：
腎陽不足，命門火衰導(dǎo)致的病證很多，涉及的范圍亦很廣，婦女崩漏是其中之一，早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》便有“崩”的記載，后“金匱要略”又有“漏下”、“崩中下血”的記述，至《諸病源候論》專立“崩中候”、“漏下候”，書云“忽然暴下，謂之崩中”，“非時(shí)而下，淋瀝不斷，謂之漏下也”?，F(xiàn)代高等醫(yī)藥院校教材《中醫(yī)婦科學(xué)》載“崩漏是指經(jīng)血非時(shí)暴下不止或淋漓不凈，前者稱崩中或經(jīng)崩；后者稱漏下或經(jīng)漏。雖然崩與漏出血情況不同，但二者常交替出現(xiàn)，故概稱崩漏”。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)稱功能性子宮出血。
崩漏常見的病因有血熱、腎虛、脾虛、血瘀等，發(fā)病機(jī)理主要是沖任損傷，不能制約經(jīng)血，故經(jīng)血從胞宮非時(shí)妄行。本證病因多為先天稟賦不足，腎氣稚弱，天葵初至，沖任未盛或因更年期腎氣漸虛，因故重虛?；蛞虿划?dāng)之手術(shù)，損傷胞宮沖任以致腎虛。由于腎氣不足，腎陽虛弱，封藏不固，沖任失約，故經(jīng)來無期量多或淋漓。陽虛則真火不足，經(jīng)血失煦，故色淡質(zhì)稀。腎陽不足，命門火衰不能溫煦，故畏寒肢冷。腰為腎之府，下肢為足少陰經(jīng)脈所過，腎陽不足，不能溫達(dá)腰脊、下肢，故腰膝酸軟。腎陽虛膀胱失約，則夜尿頻繁。精神不振，面色晦暗，舌質(zhì)淡，苔薄潤(rùn)，脈沉細(xì)無力等，均為腎陽虛所致。崩漏腎陽虛證癥見突然出血，量多，或淋漓不凈，色淡質(zhì)稀，精神不振，面色晦暗，肢冷畏寒，腰膝酸軟，夜尿頻繁等。治宜溫補(bǔ)腎陽，固沖止血。崩漏是婦科常見病之一，過去多用激素治療，但消化道反應(yīng)較重，目前缺乏一種療效可靠服用方便的中藥制劑。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種固中止血的中藥組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述中藥組合物的制備工藝。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供上述中藥組合物在制藥中的應(yīng)用。
本發(fā)明根據(jù)中醫(yī)藥理論，重用淫羊藿為主藥，該藥性味辛、甘，溫。入腎、肝經(jīng)。為溫補(bǔ)腎陽要藥?！夺t(yī)學(xué)入門》載其“補(bǔ)腎虛，助陽”。《普濟(jì)方》云其“治婦女血海久冷，漏下”。腎為先天之本，脾為后天之本，“先天生后天，后天濟(jì)先天”。方中黃芪甘，溫。入脾、肺經(jīng)。為補(bǔ)氣、升陽、攝血之要藥?！墩渲槟摇吩啤包S芪補(bǔ)諸虛不足……益元?dú)?。”《日華子》曰“黃芪助氣，治血崩帶下”。張景岳稱黃芪“其所以止血崩血淋者，以氣固而血自止也?！薄吨腥A本草》載“凡氣不攝血，吐血、咳血、便血、尿血、崩漏均可選用黃芪，單用或入復(fù)方”。黨參性味甘，平。入脾、肺經(jīng)。功能補(bǔ)中益氣。二藥同用，協(xié)助主藥溫補(bǔ)腎陽，固沖止血。實(shí)后天以養(yǎng)先天。故為輔藥。腎陰與腎陽相互為用，“陽生于陰”，“陰生于陽”所以張景岳說“善補(bǔ)陽者，必于陰中求陽，則陽得陰助而生化無窮”。方中墨旱蓮性味甘、酸，寒。入肝、腎經(jīng)。功能滋補(bǔ)肝腎?！侗静荼阕x》說“旱蓮草甘酸而寒，折之中有汁出，其色黑，故入腎”?！斗诸惒菟幮浴份d其“止血，補(bǔ)腎。治淋、崩漏”。白芍性味甘、苦、酸，微寒。功能養(yǎng)血斂陰。《中華本草》載“主治崩漏”甘者能補(bǔ)，酸者能收，二藥同用，使化源充足，陽有所附，亦為輔藥。本方為崩漏腎陽虛證患者而設(shè)，其特點(diǎn)溫而不燥，固而不澀，滋而不膩。全方配伍，共奏溫補(bǔ)腎陽，固沖止血之功。
本發(fā)明的目的是通過下列措施實(shí)現(xiàn)的 一種中藥組合物，該中藥組合物的處方含有下列重量份的藥材淫羊藿25～70份，黃芪20～45份，黨參15～35份，墨旱蓮15～35份，白芍10～25份。
所述中藥組合物的制備工藝，包括下列步驟 a.按處方取淫羊藿和墨旱蓮切絲，與黃芪、黨參、白芍飲片裝入提取罐內(nèi)，每次加入8～15倍藥材總重量的蒸餾水，回流提取2～3次，每次1.5～3小時(shí)，得到提取液； b.提取液過濾，減壓濃縮至80℃時(shí)相對(duì)密度為1.10～1.20，放冷，加入乙醇至含醇量達(dá)50～70％，攪拌，冷藏18～36小時(shí)，過濾，減壓回收乙醇至50℃時(shí)相對(duì)密度為1.00～1.20，得濃縮液； c.加入輔料，制備成所需劑型。
所述中藥組合物的制備工藝，其中步驟c是向濃縮液中加入適量蒸餾水，冷藏18～36小時(shí)，過濾，于濾液中加入適量(0.3～3w/v‰)的甜葉菊苷調(diào)味，調(diào)節(jié)pH為6～7，加水定容，過濾，灌裝，封口，滅菌。
所述的中藥組合物在制備治療崩漏的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明有益效果 一、本發(fā)明藥物的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 本發(fā)明藥物具有溫補(bǔ)腎陽，固沖止血的功能，主治崩漏腎陽虛證。根據(jù)本處方的功能主治，選擇了腎陽虛模型動(dòng)物或正常動(dòng)物觀察了本發(fā)明藥物的止血、溫陽補(bǔ)腎、增強(qiáng)子宮張力、活血化瘀、抗炎、鎮(zhèn)痛和免疫調(diào)節(jié)作用。以下實(shí)驗(yàn)所使用的本發(fā)明藥物按實(shí)施例1制備。
(一)本發(fā)明藥物的止血作用研究 1.本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠的止血作用 供試品本發(fā)明藥物(河南南陽綠洲藥業(yè)有限公司，批號(hào)20010626，含量1.66g生藥/g提取物，外觀棕色液體，供試品保存條件室溫陰涼處保存。按實(shí)施例1制備，以下同)。使用時(shí)用蒸餾水配制成濃度112.5、225、450mg生藥/ml。
陽性對(duì)照藥宮血寧(云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)20000110，規(guī)格0.13g/粒膠囊，外觀棕色粉末。以下同)。使用時(shí)用蒸餾水配成16mg膠囊粉/ml。
造模藥醋酸潑泥松(上海第九制藥廠，批號(hào)010213，規(guī)格125mg/5ml，外觀注射乳液。以下同)。使用時(shí)用生理鹽水配制成10mg/ml。
動(dòng)物分組大鼠按體重隨機(jī)分成6組，分別為正常對(duì)照組；腎陽虛模型組；陽性對(duì)照藥宮血寧0.16g膠囊粉/kg；本發(fā)明藥物2.25g生藥/kg；本發(fā)明藥物4.5g生藥/kg；本發(fā)明藥物9.0g生藥/kg。
給藥時(shí)間本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥組每日灌胃給藥一次，給藥體積為10ml/kg體重，連續(xù)給藥10天。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌胃給予同體積蒸餾水，時(shí)間相同。
試驗(yàn)方法 腎陽虛造模型方法除正常對(duì)照組外，其它各組大鼠均于試驗(yàn)第1、3、5、7、9日肌肉注射醋酸潑泥松10mg/kg。
本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥組在造模的同時(shí)開始給藥，每日灌胃給藥一次，給藥體積為10ml/kg體重，連續(xù)給藥10天。末次給藥后24小時(shí)，用利剪距鼠尾尖0.3cm處剪斷鼠尾，從血液自然流出開始計(jì)時(shí)，每30秒用濾紙輕輕吸鼠尾斷面一次，觀察至無血跡止，記錄為出血時(shí)間；采用毛細(xì)玻管法測(cè)定凝血時(shí)間；大鼠用30mg/kg戊巴比妥鈉麻醉，腹主動(dòng)脈取血，枸櫞酸鈉抗凝，離心取血漿，測(cè)定凝血酶原時(shí)間和血漿復(fù)鈣時(shí)間。
統(tǒng)計(jì)方法各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。本發(fā)明藥物各劑量組及陽性對(duì)照藥組分別與腎陽虛模型組進(jìn)行比較，用t-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
結(jié)果表明大鼠反復(fù)肌肉注射給予醋酸潑泥松后呈現(xiàn)體重降低、體溫降低、立毛、倦怠、大便溏軟等腎陽虛癥狀，該模型組動(dòng)物的出血時(shí)間、凝血酶原時(shí)間、血漿復(fù)鈣時(shí)間均較對(duì)照組明顯延長(zhǎng)(P＜0.05或P＜0.01)，凝血時(shí)間也有延長(zhǎng)趨勢(shì)，表明腎陽虛大鼠存在出血傾向。灌胃給予本發(fā)明藥物2.25、4.5、9.0g生藥/kg可明顯對(duì)抗醋酸潑泥松引起的出血時(shí)間、凝血酶原時(shí)間、血漿復(fù)鈣時(shí)間延長(zhǎng)(與醋酸潑泥松模型組比較P＜0.05或P＜0.01)。本發(fā)明藥物9.0g生藥/kg還可對(duì)抗醋酸潑泥松引起的凝血時(shí)間延長(zhǎng)，2.25、4.5g生藥/kg劑量水平對(duì)凝血時(shí)間無明顯影響。陽性對(duì)照藥宮血寧也可明顯對(duì)抗腎陽虛大鼠的出血時(shí)間和血漿復(fù)鈣時(shí)間延長(zhǎng)，對(duì)凝血時(shí)間和凝血酶原時(shí)間無明顯影響。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠具有明顯的止血作用。結(jié)果見表1。
結(jié)論采用醋酸潑泥松誘導(dǎo)的大鼠腎陽虛模型觀察了本發(fā)明藥物的止血作用。結(jié)果顯示，模型組動(dòng)物的出血時(shí)間、凝血時(shí)間、凝血酶原時(shí)間、血漿復(fù)鈣時(shí)間均較正常對(duì)照組明顯延長(zhǎng)(P＜0.05或P＜0.01)，表明腎陽虛大鼠存在出血傾向。給予本發(fā)明藥物2.25、4.5、9.0g生藥/kg可明顯對(duì)抗醋酸潑泥松引起的出血時(shí)間、凝血酶原時(shí)間和血漿復(fù)鈣時(shí)間延長(zhǎng)(與醋酸潑泥松模型組比較P＜0.05或P＜0.01)。本發(fā)明藥物9.0g生藥/kg可明顯對(duì)抗醋酸潑泥松引起的凝血時(shí)間延長(zhǎng)。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠具有明顯的止血作用。為本發(fā)明藥物治療臨床上因?yàn)槟I陽不足而導(dǎo)致的子宮功能性出血提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
表1本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠出、凝血指標(biāo)的影響(n＝10，Mean±SD) 注與正常對(duì)照組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01 2.本發(fā)明藥物對(duì)正常小鼠出、凝血時(shí)間的影響 試驗(yàn)材料 供試品本發(fā)明藥物，使用時(shí)用蒸餾水配制成濃度112.5、225、450mg生藥/ml。
陽性對(duì)照藥止血寶顆粒(西安威信制藥有限公司，批號(hào)20000201，規(guī)格25mg/粒膠囊，外觀棕黑色顆粒劑。以下同)。使用時(shí)用蒸餾水配制成78mg/ml。
陰性對(duì)照品蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)ICR小鼠，雌性，50只，體重20±2g，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCKX 11-00-0006。北京九江口飼料廠提供的大鼠顆粒飼料飼養(yǎng)，動(dòng)物飼養(yǎng)于潔凈動(dòng)物房不銹鋼籠內(nèi)，自然光照，自由進(jìn)食與飲水。
動(dòng)物分組小鼠按體重隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為對(duì)照組；陽性對(duì)照藥止血寶顆粒1.56g/kg；本發(fā)明藥物2.25g生藥/kg；本發(fā)明藥物4.5g生藥/kg；本發(fā)明藥物9.0g生藥/kg。
給藥頻率和時(shí)間本發(fā)明藥物各劑量組和止血寶顆粒組均每日灌胃給藥一次，給藥體積為0.2ml/10g體重，連續(xù)給藥3天。對(duì)照組灌胃給予同體積蒸餾水。
試驗(yàn)方法末次給藥后1小時(shí)，用利剪距鼠尾尖0.5cm處剪斷鼠尾，從血液自然流出開始計(jì)時(shí)，每30秒用濾紙輕輕吸鼠尾斷面一次，觀察至無血跡止，記錄為出血時(shí)間；采用毛細(xì)玻管法從眼眶靜脈叢取血測(cè)定凝血時(shí)間。
統(tǒng)計(jì)方法各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。本發(fā)明藥物各劑量組及陽性對(duì)照藥組分別與對(duì)照組進(jìn)行比較，用t-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表2。本發(fā)明藥物9.0、4.5、2.25g生藥/kg均可明顯縮短小鼠的出血時(shí)間，4.5、2.25g生藥/kg可使小鼠凝血時(shí)間縮短。結(jié)果表明本發(fā)明藥物可明顯縮短小鼠的出、凝血時(shí)間，表明有明顯的止血作用。
表2本發(fā)明藥物對(duì)正常小鼠出血時(shí)間和凝血時(shí)間的影響(n＝10) 注與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01 結(jié)論采用正常小鼠觀察了本發(fā)明藥物對(duì)出、凝血時(shí)間的影響。結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物9.0、4.5、2.25g生藥/kg可明顯縮短小鼠切口的出血時(shí)間，4.5、2.25g生藥/kg可使小鼠凝血時(shí)間縮短。結(jié)果表明本發(fā)明藥物可明顯縮短小鼠的出、凝血時(shí)間，表明有明顯的止血作用。
(二)本發(fā)明藥物的溫陽補(bǔ)腎作用 試驗(yàn)材料 供試品本發(fā)明藥物，使用時(shí)用蒸餾水配制成濃度0.225、0.45、0.9、1.8g生藥/ml。
陽性對(duì)照藥宮血寧，使用時(shí)用蒸餾水配成16mg膠囊粉/ml。
陰性對(duì)照品蒸餾水。
造模藥醋酸潑泥松，使用時(shí)用生理鹽水配制成10mg/ml。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)SD大鼠，雌性70只，動(dòng)物體重180～200g，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCKX 11-00-0006。北京九江口飼料廠提供的大鼠顆粒飼料飼養(yǎng)，動(dòng)物飼養(yǎng)于潔凈動(dòng)物房不銹鋼籠內(nèi)，自然光照，自由進(jìn)食與飲水。
動(dòng)物分組大鼠按體重隨機(jī)分成7組，分別為正常對(duì)照組；腎陽虛模型組；陽性對(duì)照藥宮血寧0.16g膠囊粉/kg；本發(fā)明藥物2.25g生藥/kg；本發(fā)明藥物4.5g生藥/kg；本發(fā)明藥物9.0g生藥/kg；本發(fā)明藥物18.0g生藥/kg。
給藥時(shí)間本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥組每日灌胃給藥一次，給藥體積為10ml/kg體重，連續(xù)給藥10天。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌胃給予同體積蒸餾水，時(shí)間相同。
試驗(yàn)方法 腎陽虛造模型方法除正常對(duì)照組外，其它各組大鼠均于試驗(yàn)第1、3、5、7、9日肌肉注射醋酸潑泥松10mg/kg。
給藥本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥組在造模的同時(shí)開始給藥，每日灌胃給藥一次，給藥體積為10ml/kg體重，連續(xù)給藥10天。
檢測(cè)指標(biāo) 1、試驗(yàn)前和末次給藥結(jié)束后24小時(shí)，分別測(cè)定動(dòng)物體溫。
2、末次給藥后24小時(shí)，用戊巴比妥鈉麻醉動(dòng)物，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，分離血清，用放免法測(cè)定黃體生成素(LH4)、雌二醇(E2)、孕酮(P)含量。
3、末次給藥后24小時(shí)，取出動(dòng)物子宮、卵巢、肝臟、脾臟、胸腺稱重，折算臟器系數(shù)(g臟器重/100g體重)。
4、用10％福爾馬林固定子宮和卵巢，分別從每只動(dòng)物子宮分角以上和卵巢端向下0.5-1cm處橫切取材各2塊，厚約0.5cm，石蠟包埋，制備0.3μm的切片，每只子宮共取4張切片，HE染色，用Olympus顯微鏡觀察子宮組織形態(tài)，每張切片選取4個(gè)部位，以顯微鏡目鏡微格測(cè)定子宮內(nèi)膜厚度和平滑肌層厚度，取每只子宮的近分角處和近卵巢端的子宮內(nèi)膜厚度和平滑肌層厚度平均值。
統(tǒng)計(jì)方法各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。本發(fā)明藥物各劑量組及陽性對(duì)照藥組分別與腎陽虛模型組進(jìn)行比較，用t-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
試驗(yàn)結(jié)果 1、本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛動(dòng)物體重和體溫的影響模型組大鼠反復(fù)注射醋酸潑泥松造模結(jié)束后，模型組大鼠體重較正常對(duì)照組明顯減輕(與正常對(duì)照組比較P＜0.01)，體溫明顯下降(造模前后比較P＜0.05)；本發(fā)明藥物2.25、4.5、9.0、18.0g生藥/kg灌胃給藥10天對(duì)腎陽虛大鼠體重?zé)o明顯影響；9.0、18.0g生藥/kg灌胃給藥10天可使腎陽虛大鼠體溫明顯回升(與模型組比較P＜0.05)，結(jié)果表明本發(fā)明藥物可使腎陽虛大鼠的體溫明顯回升，具有溫陽作用，結(jié)果見表3。
2、本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠性腺器官重量及系數(shù)的影響腎陽虛模型動(dòng)物的子宮、卵巢重量及其系數(shù)均明顯減輕(與對(duì)照組比較P＜0.01)。4.5、9.0、18.0g生藥/kg灌胃給藥10天后，各組子宮、卵巢重量及其系數(shù)均較模型組明顯增高(與模型組比較P＜0.05或P＜0.01)，2.25g生藥/kg劑量組的子宮、卵巢重量及其系數(shù)與模型組比較無明顯差異。陽性對(duì)照藥宮血寧也可明顯增加腎陽虛大鼠的子宮、卵巢重量及其系數(shù)(與模型組比較P＜0.001)。結(jié)果表明本發(fā)明藥物可明顯拮抗腎陽虛大鼠的子宮和卵巢萎縮，對(duì)子宮和卵巢具有保護(hù)作用。結(jié)果見表4。
3、本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠免疫器官重量及臟器系數(shù)的影響腎陽虛模型大鼠胸腺及脾臟的重量及其臟器系數(shù)均較正常對(duì)照組明顯減輕(P＜0.01)，雖然模型組肝臟重量無明顯變化，由于其體重減輕，折算的肝臟系數(shù)較對(duì)照組明顯增大(P＜0.01)。本發(fā)明藥物4.5、9.0、18.0g生藥/kg灌胃給藥10天后，各組胸腺重量及其系數(shù)均較模型組明顯增高(與模型組比較P＜0.05或P＜0.01)，但對(duì)肝、脾臟重量及其系數(shù)無明顯影響。陽性對(duì)照藥宮血寧也可明顯增加腎陽虛大鼠的胸腺重量及其系數(shù)(與模型組比較P＜0.001)，但對(duì)肝、脾臟重量和系數(shù)無明顯影響。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對(duì)醋酸潑泥松誘導(dǎo)的腎陽虛大鼠的胸腺重量及其系數(shù)減輕具有明顯的拮抗作用。結(jié)果見表4。
4、本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛雌性大鼠性腺激素的影響從表5可見，本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥宮血寧對(duì)大鼠血清黃體生成素(LH4)、雌二醇(E2)、孕酮(P)含量均無顯著影響，表明本發(fā)明藥物對(duì)大鼠血液性腺激素水平無明顯影響。
5、本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛雌性大鼠子宮內(nèi)膜和平滑肌層厚度以及組織形態(tài)學(xué)的影響 5.1對(duì)子宮內(nèi)膜和平滑肌層厚度的影響 腎陽虛模型組大鼠子宮內(nèi)膜和平滑肌層明顯變薄(與正常對(duì)照組比較P＜0.01)，表明腎陽虛大鼠的子宮內(nèi)膜和平滑肌層呈現(xiàn)萎縮性病變。本發(fā)明藥物4.5、9.0、18.0g生藥/kg劑量水平可明顯拮抗腎陽虛大鼠的子宮退行性變，使子宮內(nèi)膜和平滑肌厚度均較模型組明顯增加(與模型組比較P＜0.05或P＜0.01)，結(jié)果見表6。
5.2子宮、卵巢肉眼觀察結(jié)果 正常對(duì)照組大鼠子宮管腔粗細(xì)較均勻，漿膜面、粘膜面及管腔內(nèi)均未見明顯的充血、水腫及腫物等。模型組大鼠子宮直徑比正常對(duì)照組細(xì)，子宮無明顯充血、水腫和硬化或結(jié)節(jié)形成，未見明顯的瘀血，卵巢未見有明顯病變。本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥宮血寧組的部分動(dòng)物子宮較正常對(duì)照組偏細(xì)，但比模型組粗，未見明顯的充血、水腫及瘀血，管腔內(nèi)未見明顯腫物等異常變化。
5.3子宮、卵巢組織形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果 顯微鏡下觀察可見，正常對(duì)照組子宮內(nèi)膜腺體較多，腺上皮細(xì)胞呈柱狀，核分裂相多見；間質(zhì)細(xì)胞呈梭形，細(xì)胞核增大，呈紡錘狀，有較多的核分裂相。平滑肌纖維走向規(guī)則，子宮壁各層結(jié)構(gòu)清晰，血管豐富；卵巢組織結(jié)構(gòu)顯示正常。
模型組子宮內(nèi)膜薄，腺體稀少、分散，腺上皮細(xì)胞為立方型或低柱狀，間質(zhì)細(xì)胞呈梭形，排列緊密伴有纖維增生，上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)不活躍，核分裂相較少。平滑肌層走向尚規(guī)則，肌層厚度較對(duì)照組薄，未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，有部分肌纖維侵入內(nèi)膜層。部分卵巢有不同程度的出血，但卵泡和黃體未見有明顯的改變。
本發(fā)明藥物4.5、9.0、18.0g生藥/kg劑量組和陽性對(duì)照藥宮血寧組子宮腺體較模型組增加，腺上皮細(xì)胞增多，呈柱狀，細(xì)胞核增大，可見核仁，分裂相增加。平滑肌層排列規(guī)則，平滑肌層厚度較模型組增加，子宮粘膜層很少有平滑肌組織，肌纖維間質(zhì)血管豐富，卵巢未見明顯的病理形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果見病理照片。
結(jié)論本發(fā)明藥物可使腎陽虛大鼠體溫明顯回升，具有明顯的溫陽作用；可顯著對(duì)抗腎陽虛大鼠的子宮、卵巢、胸腺的退行性病變，使這些臟器的重量及其系數(shù)增加。腎陽虛動(dòng)物給予本發(fā)明藥物后，其子宮內(nèi)膜腺體稀少和平滑肌層變薄的退行性組織形態(tài)學(xué)改變得到明顯改善，給藥后的動(dòng)物子宮腺體數(shù)增加，子宮內(nèi)膜和平滑肌層增厚，表明本發(fā)明藥物可在一定程度上阻止腎陽虛大鼠的性腺器官和免疫器官的退行性病變；本發(fā)明藥物對(duì)大鼠的黃體生成素(LH4)、雌二醇(E2)、孕酮(P)含量均無顯著影響，表明對(duì)雌性大鼠血液性腺激素水平無明顯影響。
表3本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠體重、體溫的影響(Mean±SD，n＝10) 注①自身前后比較#P＜0.05，##P＜0.01； ②與對(duì)照組比較△P＜0.05，△△P＜0.01； ③與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
表4本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠免疫和性腺器官重量的影響(Mcan±SD，n＝10) 注①與對(duì)照組比較#P＜0.05，##P＜0.01； ②與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01 表5本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠雌、孕激素的影響(Mean±SD，n＝10) 表6本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠子宮內(nèi)膜和平滑肌層厚度的影響 注①與對(duì)照組比較##P＜0.001； ②與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01 (三)本發(fā)明藥物對(duì)家兔在位子宮收縮的影響 試驗(yàn)材料 供試品本發(fā)明藥物，使用時(shí)用蒸餾水配制成濃度0.625、1.25、2.5g生藥/ml。
陽性對(duì)照藥宮血寧，使用時(shí)用蒸餾水配成25mg膠囊粉/ml 陰性對(duì)照品生理鹽水 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)大耳白家兔，雌性未孕、未產(chǎn)家兔40只，體重2-2.5kg，北京通力實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供，，動(dòng)物合格證號(hào)京動(dòng)許字(2000)第024號(hào)，九江口飼料廠提供的家兔顆粒飼料飼養(yǎng)，動(dòng)物飼養(yǎng)于潔凈動(dòng)物房?jī)?nèi)，溫度20-25℃，自然光照。
動(dòng)物分組家兔隨機(jī)分成5組，每組8只，分別為正常對(duì)照組、陽性對(duì)照藥宮血寧0.1g膠囊粉/kg、本發(fā)明藥物2.5g生藥/kg、本發(fā)明藥物5.0g生藥/kg、本發(fā)明藥物10.0g生藥/kg。
給藥途徑由于動(dòng)物試驗(yàn)時(shí)處于麻醉狀態(tài)，故本發(fā)明藥物和陽性對(duì)照藥均采用十二指腸給藥。對(duì)照組經(jīng)十二指腸給予同體積生理鹽水。
給藥次數(shù)本發(fā)明藥物各劑量組、陽性對(duì)照藥組及對(duì)照組均于試驗(yàn)當(dāng)天給藥1次，給藥體積為4ml/kg體重。
試驗(yàn)方法 各組家兔均于試驗(yàn)前每日注射苯甲酸雌二醇0.2mg/kg(上海第九制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)991102，規(guī)格為1mg/ml)，連續(xù)給藥2天。各組家兔于末次注射苯甲酸雌二醇后24h進(jìn)行試驗(yàn)。家兔經(jīng)耳緣靜脈注射給予戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，仰位固定，下腹部剪毛，于下腹部作一正中切口，長(zhǎng)度約4～5cm。打開腹腔，找到子宮。從子宮頸與陰道交界處向一側(cè)子宮角放入一氣囊，氣囊與一硅膠管連接，排盡氣囊內(nèi)的空氣，并讓氣囊中充滿水，硅膠管與壓力換能器相連，用BIOPAC SYSTEM多道生理記錄儀監(jiān)測(cè)子宮活動(dòng)。
術(shù)后，待所描記的子宮活動(dòng)恒定時(shí)(約為手術(shù)后30分鐘)，記錄一段正常收縮曲線，然后經(jīng)十二指腸給予受試藥，記錄給藥后30、60、90、120分鐘子宮活動(dòng)曲線，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)記錄12min。計(jì)數(shù)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)曲線12分鐘內(nèi)的收縮次數(shù)，用BIOPAC SystemAcqknowledge 3.5計(jì)算軟件計(jì)算平均子宮收縮幅度和收縮曲線下面積。并按下式計(jì)算相對(duì)收縮幅度。
相對(duì)收縮幅度(％)＝給藥后收縮幅度·給藥前收縮幅度-1·100 計(jì)算和統(tǒng)計(jì)方法各組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的子宮收縮幅度、收縮頻率及收縮曲線下面積以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用t-檢驗(yàn)比較各給藥組與對(duì)照組之間的差異。
試驗(yàn)結(jié)果 本試驗(yàn)中，子宮收縮幅度和曲線下面積可反應(yīng)子宮張力情況。表7結(jié)果顯示，經(jīng)十二指腸給予本發(fā)明藥物10g生藥/kg后90min和120min時(shí)的子宮收縮幅度均較對(duì)照組明顯增高(P＜0.05)，但該劑量水平對(duì)子宮收縮次數(shù)未見明顯影響。本發(fā)明藥物5g生藥/kg和2.5g生藥/kg劑量下對(duì)子宮收縮幅度、收縮次數(shù)無明顯影響。陽性對(duì)照藥宮血寧給藥后120min對(duì)子宮相對(duì)收縮幅度有明顯的增強(qiáng)作用(與對(duì)照組比較P＜0.05)。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物經(jīng)十二指腸給藥10g生藥/kg，對(duì)子宮收縮有一定的增強(qiáng)作用，主要表現(xiàn)為對(duì)子宮張力的增強(qiáng)，而對(duì)收縮頻率無明顯影響。
結(jié)論經(jīng)十二指腸給予本發(fā)明藥物10g生藥/kg后，可明顯維持子宮張力，給藥后90min和120min的子宮收縮幅度和相對(duì)收縮幅度均較對(duì)照組明顯增高(與對(duì)照組比較P＜0.05)，該劑量下各時(shí)間點(diǎn)對(duì)子宮收縮次數(shù)未見明顯影響。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物經(jīng)十二指腸給藥10g生藥/kg，對(duì)子宮收縮有一定的增強(qiáng)作用，主要表現(xiàn)為對(duì)收縮幅度的增強(qiáng)和對(duì)子宮張力的增加，而對(duì)收縮頻率無明顯影響。
表7本發(fā)明藥物對(duì)家兔子宮收縮幅度(mmHg)和相對(duì)收縮幅度(％)的影響(n＝8) 注與對(duì)照組比較*P＜0.05 (四)本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠血液流變學(xué)的影響 試驗(yàn)材料 供試品本發(fā)明藥物，使用時(shí)用蒸餾水配制成濃度0.225、0.45、0.9、1.8g生藥/ml。
陽性對(duì)照藥宮血寧，使用時(shí)用蒸餾水配成16mg膠囊粉/ml。
陰性對(duì)照品蒸餾水。
造模藥醋酸潑泥松，使用時(shí)用生理鹽水配制成10mg/ml。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)SD大鼠，雌性70只，體重180～200g，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCKX 11-00-0006，北京九江口飼料廠提供的大鼠顆粒飼料飼養(yǎng)，動(dòng)物飼養(yǎng)于潔凈動(dòng)物房不銹鋼籠內(nèi)，自然光照，自由進(jìn)食與飲水。
試驗(yàn)方法 動(dòng)物分組大鼠按體重隨機(jī)分成7組，分別為正常對(duì)照組；腎陽虛模型組；陽性對(duì)照藥宮血寧0.16g膠囊粉/kg；本發(fā)明藥物2.25g生藥/kg；本發(fā)明藥物4.5g生藥/kg；本發(fā)明藥物9.0g生藥/kg；本發(fā)明藥物18.0g生藥/kg。
給藥時(shí)間本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥組每日灌胃給藥一次，給藥體積為10ml/kg體重，連續(xù)給藥10天。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌胃給予同體積蒸餾水。
試驗(yàn)方法 腎陽虛造模型方法除正常對(duì)照組外，其它各組大鼠均于試驗(yàn)第1、3、5、7、9日肌肉注射醋酸潑泥松10mg/kg。
給藥本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥組在造模的同時(shí)開始給藥，每日灌胃給藥一次，給藥體積為10ml/kg體重，連續(xù)給藥10天。末次給藥后24小時(shí)，用戊巴比妥鈉麻醉動(dòng)物，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，分別測(cè)定血小板、血球壓積、全血粘度、血漿粘度、血小板聚集等指標(biāo)。
統(tǒng)計(jì)方法各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。本發(fā)明藥物各劑量組及陽性對(duì)照藥組分別與腎陽虛模型組進(jìn)行比較，用t-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響結(jié)果見表8。結(jié)果顯示，腎陽虛大鼠血小板數(shù)量和血小板聚集率均較正常對(duì)照組顯著降低，血球壓積明顯增高(與正常對(duì)照組比較P＜0.05)，全血粘度較正常對(duì)照組有增高趨勢(shì)，但統(tǒng)計(jì)學(xué)上未見顯著性差異。模型組動(dòng)物的血球壓積顯著增高和全血粘度有增高趨勢(shì)說明動(dòng)物有血瘀征象，而血小板數(shù)量和血小板聚集率降低可能與血瘀過程中血小板的消耗有關(guān)。本發(fā)明藥物9.0、18.0g生藥/kg劑量水平可使腎陽虛大鼠增高的血球壓積和全血粘度恢復(fù)正常(與腎陽虛模型組比較P＜0.05)，血小板聚集率與模型組比較也有恢復(fù)正常的趨勢(shì)，但統(tǒng)計(jì)學(xué)上與模型組無顯著差異。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛模型大鼠的血液流變學(xué)指標(biāo)具有改善作用。
結(jié)論本發(fā)明藥物9.0、18.0g生藥/kg劑量水平可使腎陽虛大鼠增高的血球壓積和全血粘度恢復(fù)正常(與腎陽虛模型組比較P＜0.05)，使降低的血小板聚集率恢復(fù)正常，結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛模型大鼠的血液流變學(xué)具有改善作用，因此對(duì)微循環(huán)具有改善作用。
表8本發(fā)明藥物對(duì)腎陽虛大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響(n＝10) 注與對(duì)照組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.001 (五)本發(fā)明藥物抗炎作用對(duì)異物植入子宮引起的大鼠子宮炎癥的影響 試驗(yàn)材料 供試品本發(fā)明藥物，使用時(shí)用蒸餾水配制成濃度0.225、0.45、0.9g生藥/ml。
陽性對(duì)照藥宮血寧，使用時(shí)用蒸餾水配成25mg膠囊粉/ml 陰性對(duì)照品蒸餾水 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)SD大鼠，雌性50只，體重180～200g，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCKX 11-00-0006，北京九江口飼料廠提供的大鼠顆粒飼料飼養(yǎng)，動(dòng)物飼養(yǎng)于潔凈動(dòng)物房不銹鋼籠內(nèi)，自然光照，自由進(jìn)食與飲水。
試驗(yàn)方法 大鼠按體重隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為模型組；陽性對(duì)照藥宮血寧組0.25g膠囊粉/kg；本發(fā)明藥物2.25g生藥/kg；本發(fā)明藥物4.5g生藥/kg；本發(fā)明藥物9.0g生藥/kg。
給藥時(shí)間本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥組每日灌胃給藥一次，給藥體積為10ml/kg體重，共給藥10天。模型組灌胃給予同體積蒸餾水。
試驗(yàn)方法 將大鼠用乙醚麻醉，于下腹部正中行2cm切口，暴露子宮，沿右側(cè)子宮角上1cm處作一橫切口，將一高壓滅菌的塑料管(管徑2mm，長(zhǎng)0.5cm，重10mg)植入右側(cè)子宮腔內(nèi)，與子宮切口縫合固定。術(shù)后，大鼠肌肉注射青霉素2萬u/只，共1次。取術(shù)后大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，術(shù)后2小時(shí)開始灌胃給藥，共給藥10天，末次給藥后1小時(shí)，股動(dòng)脈放血處死動(dòng)物，取出兩側(cè)子宮、用組織天平稱重，求左右兩側(cè)子宮重量之差，作為子宮腫脹度。
統(tǒng)計(jì)方法每組試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。本發(fā)明藥物各劑量組及陽性對(duì)照藥組分別與模型組進(jìn)行比較，用t-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物4.5和9.0g生藥/kg可明顯抑制異物植入子宮引起的炎性腫脹，其子宮腫脹度比模型組明顯減低(與模型組比較P＜0.01)，抑制率分別為49.6％和63.4％。本發(fā)明藥物2.25g生藥/kg劑量組對(duì)子宮腫脹也有一定的抑制，但與模型組比較無顯著差異(P＞0.05)。陽性對(duì)照藥宮血寧也可明顯抑制子宮腫脹，抑制率為44.7％。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物4.5和9.0g生藥/kg對(duì)異物植入子宮引起的子宮炎癥具有明顯的抑制作用，其作用有一定的量-效關(guān)系。結(jié)果見表9。
表9本發(fā)明藥物對(duì)子宮炎癥的影響(n＝12，Mean±SD) 注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01 結(jié)論采用子宮植入異物引起炎性腫脹的方法，觀察了本發(fā)明藥物對(duì)子宮炎癥的抑制作用。結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物4.5和9.0g生藥/kg可明顯抑制異物植入子宮引起的炎性腫脹，其子宮腫脹度比模型組明顯減低(與模型組比較P＜0.01)，抑制率分別為49.6％和63.4％。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對(duì)異物植入子宮引起的子宮炎癥具有明顯的抑制作用，其作用有一定的量-效關(guān)系。
(六)本發(fā)明藥物的鎮(zhèn)痛作用對(duì)冰醋酸誘導(dǎo)的化學(xué)刺激性疼痛的鎮(zhèn)痛作用 試驗(yàn)材料 供試品本發(fā)明藥物，使用時(shí)用蒸餾水配制成濃度225、450、900mg生藥/ml。
陽性對(duì)照藥消炎痛(山西汾河制藥廠，批號(hào)0102007，規(guī)格25mg/粒膠囊，外觀白色粉末。以下同)。使用時(shí)用蒸餾水配制成1mg/ml。
陰性對(duì)照品蒸餾水 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)ICR小鼠，雌性60只，體重20-24g，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCKX 11-00-0006，北京九江口飼料廠提供的大鼠顆粒飼料飼養(yǎng)，動(dòng)物飼養(yǎng)于潔凈動(dòng)物房不銹鋼籠內(nèi)，自然光照，自由進(jìn)食與飲水。
試驗(yàn)方法 動(dòng)物分組小鼠按體重隨機(jī)分成5組，每組12只，分別為對(duì)照組；陽性對(duì)照藥消炎痛20mg/kg；本發(fā)明藥物4.5g生藥/kg；本發(fā)明藥物9.0g生藥/kg；本發(fā)明藥物18.0g生藥/kg。
給藥時(shí)間本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥組灌胃給藥一次，給藥體積為20ml/kg體重。模型組灌胃給予同體積蒸餾水。
試驗(yàn)方法各組動(dòng)物給藥后30分鐘，給每只小鼠腹腔注射0.6％冰醋酸0.2ml，隨后立即觀察每只小鼠出現(xiàn)扭體的潛伏期和20分鐘內(nèi)的扭體次數(shù)。
統(tǒng)計(jì)方法各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。各劑量組及陽性對(duì)照藥組分別與模型組進(jìn)行比較，用t-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物9.0、18.0g生藥/kg可明顯減少由冰醋酸誘導(dǎo)的小鼠腹膜刺激性扭體反應(yīng)次數(shù)，延長(zhǎng)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期(P＜0.05)，表明對(duì)化學(xué)刺激性疼痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。4.5g生藥/kg劑量下也在一定程度上減少扭體次數(shù)，延長(zhǎng)扭體反應(yīng)潛伏期，但在統(tǒng)計(jì)學(xué)上與模型組比較無顯著差異。陽性對(duì)照藥消炎痛也對(duì)化學(xué)刺激性疼痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果見表10。
表10本發(fā)明藥物對(duì)冰醋酸誘導(dǎo)的小鼠扭體反應(yīng)的影響(n＝12) 注與模型組比較*P＜0.05 結(jié)論本發(fā)明藥物9.0、18.0g生藥/kg可明顯減少由冰醋酸誘導(dǎo)的小鼠腹膜刺激性扭體反應(yīng)次數(shù)，延長(zhǎng)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期(P＜0.05)，表明對(duì)化學(xué)刺激性疼痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
(七)本發(fā)明藥物的免疫調(diào)節(jié)作用對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 試驗(yàn)材料 供試品本發(fā)明藥物，使用時(shí)用蒸餾水配制成濃度113、225、450mg生藥/ml。
陽性對(duì)照藥龜蛇粉膠囊(江蘇隆力奇集團(tuán)，批號(hào)010612，規(guī)格0.4g/粒，每日劑量為8粒，外觀膠囊。以下同)。使用時(shí)用蒸餾水配制成含膠囊提取物21mg/ml。
陰性對(duì)照品蒸餾水 造模型用藥醋酸潑泥松，使用時(shí)用生理鹽水配制成1mg/ml。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)ICR小鼠，雌性60只，體重22±2g，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCKX 11-00-0006，北京九江口飼料廠提供的大鼠顆粒飼料飼養(yǎng)，動(dòng)物飼養(yǎng)于潔凈動(dòng)物房不銹鋼籠內(nèi)，自然光照，自由進(jìn)食與飲水。
試驗(yàn)方法 動(dòng)物分組小鼠按體重隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為正常對(duì)照組；免疫低下模型組；陽性對(duì)照藥龜蛇粉膠囊0.42g膠囊粉/kg；本發(fā)明藥物2.25g生藥/kg；本發(fā)明藥物4.5g生藥/kg；本發(fā)明藥物9.0g生藥/kg。
給藥時(shí)間本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥組每日灌胃給藥一次，給藥體積為20ml/kg體重，連續(xù)給藥10天。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌胃給予同體積蒸餾水。
試驗(yàn)方法 小鼠按體重隨機(jī)分組，本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥組每日灌胃給藥一次，給藥體積為20ml/kg體重，連續(xù)給藥10天。給藥的第8、9兩天，除正常對(duì)照組外，其余各組小鼠均肌肉注射醋酸潑尼松10mg/kg每日各一次。給藥第8天，所有組的小鼠均腹腔注射2％肝糖原2ml/只。第11天，處死小鼠，腹腔注入RPMI 1640培養(yǎng)液2ml，收集腹腔巨噬細(xì)胞，于巨噬細(xì)胞懸液中加入2％雞紅血球，并加入一玻片條。37℃孵育30分鐘后，用生理鹽水輕輕沖洗玻片條。室溫干燥后，用甲醇固定，姬母薩染色。封片后于普通顯微鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)巨噬細(xì)胞，計(jì)算巨噬細(xì)胞吞噬百分率。
巨噬細(xì)胞吞噬百分率(％)＝吞噬雞血球的MΦ·MΦ總數(shù)-1·100 吞噬指數(shù)＝吞噬的雞血球總數(shù)·MΦ總數(shù)-1 統(tǒng)計(jì)方法各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。本發(fā)明藥物各劑量組和陽性對(duì)照藥組的數(shù)據(jù)分別與模型對(duì)照組進(jìn)行比較，用t-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
試驗(yàn)結(jié)果 巨噬細(xì)胞吞噬功能代表機(jī)體的非特異性免疫功能。醋酸潑泥松10mg/kg im，1次/d×2d，可造成小鼠非特異性免疫功能顯著低下，巨噬細(xì)胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)均明顯低于正常小鼠(P＜0.01)；本發(fā)明藥物2.25、4.5、9.0g生藥/kg灌胃給藥10天，可明顯提高免疫低下小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，吞噬百分率和吞噬指數(shù)均明顯高于模型組(P＜0.05，P＜0.01)。陽性對(duì)照藥龜蛇粉膠囊也可明顯提高免疫受抑小鼠的巨噬細(xì)胞吞噬功能(P＜0.01)。結(jié)果見表11。結(jié)果表明本發(fā)明藥物對(duì)非特異性免疫功能具有顯著的促進(jìn)作用。
表11本發(fā)明藥物對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 注與正常對(duì)照組比較##P＜0.01； 與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論本發(fā)明藥物2.25、4.5、9.0g生藥/kg灌胃給藥10天，可明顯提高免疫低下小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，使吞噬百分率和吞噬指數(shù)均顯著高于模型組(P＜0.05，P＜0.01)，表明對(duì)非特異性免疫具有明顯的增強(qiáng)作用。
上述結(jié)果表明，本發(fā)明藥物具有明顯的溫陽補(bǔ)腎和止血作用，對(duì)子宮炎癥具有明顯的抗炎作用，對(duì)化學(xué)刺激性疼痛具有明顯的止痛作用；同時(shí)，本發(fā)明藥物還在一定程度上增強(qiáng)子宮收縮，改善血液流變學(xué)，具有改善微循環(huán)，減少子宮出血的作用；此外本發(fā)明藥物還可提高免疫功能，具有扶正固本，補(bǔ)氣升陽攝血作用。本研究為本發(fā)明藥物治療崩漏腎陽虛證提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
二、本發(fā)明藥物的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (一)急性毒性試驗(yàn) 本發(fā)明藥物給小鼠灌胃給藥，按最大給藥濃度和最大灌胃體積一日內(nèi)給藥2次，總劑量達(dá)200g生藥/kg(相當(dāng)于推薦的臨床60kg人日用劑量的266倍)，動(dòng)物未出現(xiàn)毒性癥狀，未出現(xiàn)呼吸抑制、驚厥、抽搐等反應(yīng)；動(dòng)物的一般情況、活動(dòng)、排泄物、皮毛均未見異常。因此本發(fā)明藥物對(duì)小鼠灌胃給藥的最大耐受量為200g生藥/kg，相當(dāng)于推薦的臨床人日用劑量的266倍，在此劑量下未見毒性反應(yīng)。
(二)長(zhǎng)期毒性試驗(yàn) 本發(fā)明藥物按20、40、80g生藥/kg/天(各約相當(dāng)于人(60kg)日用劑量的26.5、53、106倍)的劑量，給大鼠連續(xù)灌胃給藥6個(gè)月，并于給藥后3個(gè)月和6個(gè)月及停藥1個(gè)月時(shí)分批處死動(dòng)物，觀察本發(fā)明藥物對(duì)動(dòng)物的慢性毒性作用。結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物80、40、20g生藥/kg體重給大鼠連續(xù)灌胃給藥6個(gè)月和停藥1個(gè)月，3個(gè)劑量水平均未引起動(dòng)物死亡，對(duì)動(dòng)物的平均體重、飼料消耗量、行為活動(dòng)、糞便等一般情況無明顯影響。
本發(fā)明藥物高、中、低三個(gè)劑量水平給藥3、6個(gè)月和停藥1個(gè)月后，大鼠的各項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo)(RBC、WBC及其分類Gr、Ly、MO、HGB、HCT、PLT、凝血時(shí)間)和血液生化學(xué)指標(biāo)(BUN、Crea、TBIL、TP、ALB、GLU、ALT、ALP、AST、CHOL)及心電圖等指標(biāo)均在正常值范圍內(nèi)波動(dòng)，尿液定性檢查未見明顯異常。
本發(fā)明藥物高、中、低三個(gè)劑量水平給大鼠連續(xù)灌胃給藥6個(gè)月對(duì)動(dòng)物重要臟器系數(shù)均無明顯影響。停藥1個(gè)月后未見遲發(fā)性影響。給藥3、6個(gè)月和停藥1個(gè)月后，3個(gè)劑量組動(dòng)物的心、肝、脾、肺、腎、腦、垂體、視神經(jīng)、腎上腺、甲狀腺、胸腺、腸系膜淋巴結(jié)、胃、十二指腸、結(jié)腸、胰腺、卵巢、子宮等臟器的大體解剖和組織形態(tài)學(xué)觀察均未見明顯的病理改變 結(jié)果提示，本發(fā)明藥物80、40、20g生藥/kg/天連續(xù)灌胃給藥6個(gè)月，對(duì)大鼠無明顯的毒性作用。

具體實(shí)施例方式 以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述。
實(shí)施例1 處方 淫羊藿 550g 黃芪333.3g 黨參250g 墨旱蓮 250g 白芍180g 甜葉菊苷3g 制成1000支 制備工藝淫羊藿和墨旱蓮切成約1cm左右的絲，黃芪、黨參、白芍飲片裝入提取罐內(nèi)，每次加入12倍藥材總重量的蒸餾水，回流提取2次，每次2小時(shí)，得到提取液，濾布過濾，減壓濃縮至密度為1.20(80℃)，放冷后，在強(qiáng)烈攪拌下加入乙醇至含醇量達(dá)60％，冷藏24小時(shí)后，板框過濾，減壓回收乙醇至密度為1.06(50℃)，加入約600ml的蒸餾水，冷藏24小時(shí)，板框過濾，于濾液中加入甜葉菊苷調(diào)味，用1N的NaOH調(diào)pH為6.5，加入水至1000ml，板框過濾。灌裝(10ml/支)，封口，105℃流動(dòng)蒸汽滅菌，燈檢，包裝，檢驗(yàn)，入庫。
實(shí)施例2 處方 淫羊藿 450g 黃芪300g 黨參200g 墨旱蓮 230g 白芍200g 甜葉菊苷3g 制成500支 制備工藝淫羊藿和墨旱蓮切成約1cm左右的絲，黃芪、黨參、白芍飲片裝入提取罐內(nèi)，每次加入12倍藥材總重量的蒸餾水，回流提取2次，每次2小時(shí)，得到提取液，濾布過濾，減壓濃縮至密度為1.2(80℃)，放冷后，在強(qiáng)烈攪拌下加入乙醇至含醇量達(dá)60％，冷藏24小時(shí)后，板框過濾，減壓回收乙醇至密度為1.10(50℃)，加入約600ml的蒸餾水，冷藏24小時(shí)，板框過濾，于濾液中加甜葉菊苷調(diào)味，用1N的NaOH調(diào)pH為6.3，加入水至1000ml，板框過濾。灌裝(20ml/支)，封口，105℃流動(dòng)蒸汽滅菌，燈檢，包裝，檢驗(yàn)，即得。
實(shí)施例3 處方 淫羊藿 300g 黃芪333g 黨參250g 墨旱蓮 250g 白芍180g 微晶纖維素 1500g 乳糖1000g 制成3000片 制備工藝淫羊藿和墨旱蓮切成約1cm左右的絲，黃芪、黨參、白芍飲片裝入提取罐內(nèi)，每次加入15倍藥材總重量的蒸餾水，回流提取2次，每次2小時(shí)，得到提取液，濾布過濾，減壓濃縮至密度為1.2(80℃)，放冷后，在強(qiáng)烈攪拌下加入乙醇至含醇量達(dá)60％，冷藏24小時(shí)后，板框過濾，減壓回收乙醇至密度為1.15(50℃)，加入乳糖和微晶纖維素，制粒，干燥，壓片，即得。
實(shí)施例4 處方 淫羊藿 500g 黃芪333.3g 黨參250g 墨旱蓮 250g 白芍166.7g 微晶纖維素 1000g 乳糖1500g 制成3000粒 制備工藝淫羊藿和墨旱蓮切成約1cm左右的絲，黃芪、黨參、白芍飲片裝入提取罐內(nèi)，每次加入8倍藥材總重量的蒸餾水，回流提取3次，每次3小時(shí)，得到提取液，濾布過濾，減壓濃縮至密度為1.2(80℃)，放冷后，在強(qiáng)烈攪拌下加入乙醇至含醇量達(dá)60％，冷藏24小時(shí)后，板框過濾，減壓回收乙醇至密度為1.18(50℃)，加入乳糖和微晶纖維素，制粒，干燥，裝膠囊，即得。
權(quán)利要求
1.一種中藥組合物，其特征在于該中藥組合物的處方含有下列重量份的藥材淫羊藿25～70份，黃芪20～45份，黨參15～35份，墨旱蓮15～35份，白芍10～25份。
2.權(quán)利要求1所述中藥組合物的制備工藝，其特征在于包括下列步驟
a.按處方取淫羊藿和墨旱蓮切絲，與黃芪、黨參、白芍飲片裝入提取罐內(nèi)，每次加入8～15倍藥材總重量的蒸餾水，回流提取2～3次，每次1.5～3小時(shí)，得到提取液；
b.提取液過濾，減壓濃縮至80℃時(shí)相對(duì)密度為1.10～1.20，放冷，加入乙醇至含醇量達(dá)50～70％，攪拌，冷藏18～36小時(shí)，過濾，減壓回收乙醇至50℃時(shí)相對(duì)密度為1.00～1.20，得濃縮液；
c.加入輔料，制備成所需劑型。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述中藥組合物的制備工藝，其特征在于步驟c是向濃縮液中加入適量蒸餾水，冷藏18～36小時(shí)，過濾，于濾液中加入適量的甜葉菊苷調(diào)味，調(diào)節(jié)pH為6～7，加水定容，過濾，灌裝，封口，滅菌。
4.權(quán)利要求1所述的中藥組合物在制備治療崩漏的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，公開了一種中藥組合物及其制備工藝和應(yīng)用。該組合物的處方含有下列重量份的藥材淫羊藿25～70份，黃芪20～45份，黨參15～35份，墨旱蓮15～35份，白芍10～25份。該組合物有止血、溫陽補(bǔ)腎、增強(qiáng)子宮張力、活血化瘀、抗炎、鎮(zhèn)痛和免疫調(diào)節(jié)作用，具有溫補(bǔ)腎陽，固沖止血的功能，可用于制備治療崩漏的藥物。
文檔編號(hào)A61K36/71GK101181374SQ20071019118
公開日2008年5月21日 申請(qǐng)日期2007年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月11日
發(fā)明者徐向陽, 孟先彬, 俊 謝, 曄 孫, 黃春玉, 俊 楊, 瑩 蔡, 范廷校 申請(qǐng)人:金陵藥業(yè)股份有限公司