專利名稱：：阿魏酸與苦參堿類(lèi)化合物拼接后所形成的化合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及阿魏酸與苦參堿類(lèi)化合物拼接后所形成的鹽類(lèi)、酰胺類(lèi)或酯類(lèi)化合物。}1、:新形成的化合物具有增加苦參堿類(lèi)化合物或阿魏酸的生物學(xué)作用，和/或降低其毒性，和/或增加藥物的溶解性。研究背景阿魏酸的化學(xué)名稱為4-羥基-3-甲氧基肉桂酸,是植物界普遍存在的一種船酸，是、當(dāng)歸、川芎、阿魏等中藥的有效成分之一，廣泛存在多種植物中?？梢酝ㄟ^(guò)提取或合成的方法獲得。其具有廣泛的藥理作用，例如抗炎、抗菌、抗氧化、增強(qiáng)免疫、抗腫瘤、抗心血管疾病、抗纖維化、抗老年癡呆等都有報(bào)道?？鄥⑹浅Ｓ玫闹兴幹?。其含多種生物堿，以苦參堿(matrine)、氧化苦參堿(oxyma-trine)為主，其次有槐果堿(l-sophocarpine)、槐定堿(sophoridine)，N-氧化槐果堿(N-oxysophocarpine)、和異苦參堿等。其丌發(fā)的藥物冇苦參素、苦參堿、槐果堿等在臨床上主要用于慢性肝病的治療、抗病毒、抗腫瘤的治療以及心血管病的治療，具有抗病毒、抗肝纖維化、免疫調(diào)節(jié)作用及抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)作用等。我們的研究發(fā)現(xiàn)，阿魏酸與苦參堿類(lèi)化合物拼接形成的鹽類(lèi)、酰胺類(lèi)和酯類(lèi)化合物可明liii增加苦參堿類(lèi)化合物和/或阿魏酸的作用，具有明顯的協(xié)同作用，和/或降低苦參堿類(lèi)化合物的毒性，和/或增加阿魏酸的水溶性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及阿魏酸與苦參堿類(lèi)化合物拼接后所形成的化合物。本發(fā)明所涉及的阿魏酸包括阿魏酸和其異構(gòu)體。本發(fā)明所涉及的苦參堿類(lèi)化合物主要包括苦參堿、氧化苦參堿(苦參素)、槐果堿、氧化槐果堿、槐醇、白金雀花堿以及苦參堿的異構(gòu)體槐定堿、異苦參堿等。其結(jié)構(gòu)特征是具有四環(huán)的喹嗪啶，如圖<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>氧化槐果喊槐定堿異苦參堿本發(fā)明所涉及的阿魏酸與苦參堿類(lèi)化合物拼接方式可以是鹽類(lèi)化合物，也可以是酰胺類(lèi)或酯類(lèi)化合物。其阿魏酸上取代的位置可以在R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8節(jié)(見(jiàn)下圖)。其屮l、2或3個(gè)基團(tuán)與苦參堿類(lèi)生物堿連接后，其余基團(tuán)可以由藥學(xué)上可接受的鹽或氫、羥基、羧基、羰基等基團(tuán)連接?？鄥A類(lèi)生物堿結(jié)合的位覽本發(fā)明涉及的阿魏酸與^參堿類(lèi)化合物拼接后所形成的鹽類(lèi)、酰胺類(lèi)或酯類(lèi)化合物貝有明顯的協(xié)同作用，即既增加阿魏酸的生物學(xué)效應(yīng)又苦參堿類(lèi)化合物的生物學(xué)效應(yīng)。例如抗臟器纖維化作用，改善血液流變學(xué)，抗病毒作用，抗炎作用，抑制膽堿酯酶的作用，止痛和止癢作用，抗血栓作用，抗血小板聚集作用，抗菌作用，抗腫瘤作用，抗氧化作用，降血脂作用，增加免疫，增加精子活力和運(yùn)動(dòng)，抗高血壓作用等。本發(fā)明所涉及的阿魏酸與苦參堿類(lèi)化合物形成化合物可明顯增強(qiáng)阿魏酸和苦參堿類(lèi)化合物的藥現(xiàn)作用。包括對(duì)心臟和血管的作用，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用，治療肝炎的作用，治療臟器纖維化的作用，改善血液流變學(xué)的作用，消炎止痛和止癢作用，改善免疫的作用，抗菌和抗病毒作用等。本發(fā)明所涉及的阿魏酸與苦參堿類(lèi)形成的鹽類(lèi)和酯類(lèi)化合物可明顯減輕阿魏酸和/成苦參堿類(lèi)化合物的毒性作用。本發(fā)明涉及的阿魏酸與苦參堿類(lèi)化合物拼接后所形成的鹽類(lèi)、酰胺類(lèi)或酯類(lèi)化合物町明顯增加阿魏酸的水溶性。實(shí)施例一阿魏酸苦參素鹽的的制各將阿魏酸用少許乙醉溶解，加入等摩爾的苦參素水溶液，按照常規(guī)方法制成凍—粉針。實(shí)施例二阿魏酸槐果堿酰胺的合成將阿魏酸和苦參素加入反應(yīng)釜屮，加入催化劑反應(yīng)后，硅膠柱層析分離得化合物。實(shí)施例三阿魏酸苦參堿酯的合成準(zhǔn)確稱収一定iS的阿魏酸置f徘形瓶中，加入-定量的苦參城，加入催化劑溶液，封□，置于恒溫振蕩水浴中，sere,反應(yīng)io小時(shí)，反應(yīng)完后，硅膠柱層析分離得化合物。按照通常的化學(xué)反應(yīng)可以拼接成的化合物oj以用.卜'表示例。表l.阿魏酸在R1和R2位置上由苦參堿類(lèi)生物堿取代形成的化合物示例<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表2.R3，IM,K5，R6,R7，K8基團(tuán)常見(jiàn)的取代基示例<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例四、幾種化合物抗炎作用與苦參素和阿魏酸的抗炎鎮(zhèn)痛作用的比較選取健康小鼠，W組10只。灌胃給藥20mg/kg,連續(xù)3天，末次給藥30min后，腹腔注射0.6%醋酸10ml/kg，記朵15min內(nèi)小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)次數(shù)。計(jì)算藥物鎮(zhèn)袖百分率。藥物鈹痛.白.分率(％)=(對(duì)照組扭體次數(shù)-治療組扭體次數(shù))/對(duì)照組扭體次數(shù)X100%結(jié)果化合物i-V具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，5種化合物的鎮(zhèn)痛作用都比阿魏酸和苦參素的作用強(qiáng)(表3)。表3.化合物I-V對(duì)小鼠醋酸扭體的鎮(zhèn)痛作用比較<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>選取小鼠毎組10只，稱重標(biāo)記后，將小鼠的右耳用二甲苯棉球接觸5sec，左耳作為對(duì)照，于致炎10min后，分別在致炎耳殼上，涂覆給予藥物濃度為1%受試藥物，空白對(duì)照組給生理鹽水，30min后將小鼠頸脫臼處死，用直徑6mm打孔器取等積左(自身對(duì)照)、右耳(二甲苯處理)稱重，計(jì)算耳腫脹率。耳腫脹率(％)=右耳重量-左耳重量/左耳重量乂100%.結(jié)果5種化合物的抗二甲苯所致的耳腫脹作用都明顯，除化合物m外，其他4種化合物的作用都明顯強(qiáng)于阿魏酸和苦參素的作用(見(jiàn)表4)。表4.化合物I-V對(duì)小鼠耳腫脹的作用化合物代號(hào)腫脹率(％)屮:白對(duì)照組173.72槐果堿133,4阿魏酸164.6i，74.9丄丄.98.9m.136.4IV.111.2v.96.7實(shí)施例五、幾種化合物對(duì)肝臟肝星狀細(xì)胞增值和分泌型T膠原蛋白的的作用材料與試劑大鼠I型膠原蛋白ELISA試劑盒，胰蛋白酶，胎牛血清等。方法大鼠肝臟肝呈狀細(xì)胞(h印aticstellatecell,HSC)復(fù)蘇后接種在100mL塑料培養(yǎng)瓶中，于5%C02、95%濕度的0)2培養(yǎng)箱里培養(yǎng)。待培養(yǎng)瓶中細(xì)胞長(zhǎng)成單層后，棄去培養(yǎng)液，加入0.2596胰蛋白酶的消化液，收集消化液，2000rPmin離心7min，棄上潰液，兩用DMI':.M培養(yǎng)液離心洗滌一次，細(xì)胞團(tuán)塊用含20%胎牛血清DMEM培養(yǎng)液懸浮并計(jì)數(shù)，用含DMRM培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板,每孔100ul，48h后吸去培養(yǎng)液再用含l(^小牛血清的DMf':M培養(yǎng)液同歩化細(xì)胞，使細(xì)胞同歩化于靜止期。實(shí)驗(yàn)分組(生理鹽水)，加入藥物使得各組培養(yǎng)液中藥物濃度分別是50umol/L,每組6孔重復(fù)培養(yǎng)3次，作用48h后，終止培養(yǎng)，分別在毎孔加入5mg/L噻唑藍(lán)(MTT)20nL，再培養(yǎng)4h，加入DMSO后振蕩10min，用酶標(biāo)儀(波長(zhǎng)570nnO測(cè)定HSC吸光度。另取藥物作用后的細(xì)胞，按照上述方法培養(yǎng)后，吸取上清液，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定I型膠原蛋白含量。結(jié)果化合物1-V都具有明顯抑制肝臟肝星狀細(xì)胞增值和分泌型I膠原蛋白的的作用，其作用都好于阿魏酸和苦參堿，其中以化合物1V的作用最強(qiáng)(見(jiàn)表5)。表5部分化合物對(duì)大鼠肝肝星狀細(xì)胞增值和I型膠原蛋白含量<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例六、幾種化合物抗膽堿酯酶的作用的比較自健康大鼠取血5mi，放入加有抗凝劑的試管中，用生理鹽水稀釋10倍，待用。將藥物用生理鹽水分別稀釋為O、5、10、20、40、80、160、320、640mg/L的待測(cè)溶液。取O.05ml不同的待測(cè)溶液中加入0.5ml稀釋了的全血中，充分混勻后，貨37。C環(huán)境預(yù)孵lh。然后按照乙酰膽堿酯酶試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定全血乙酰膽堿酯酶的活性。計(jì)算半數(shù)抑制濃度(ICS0)。結(jié)果阿魏酸未見(jiàn)明顯的抑制膽堿酯酶的作用，苦參素具有抑制膽堿酯酶的作用，化合物1-X都具有抑制膽堿酯酶的作用，其半數(shù)抑制濃度都明顯小于苦參素，其中化合物II、III、X的作用最強(qiáng)(見(jiàn)表6)。表6部分化合物對(duì)膽堿酯酶抑制作用的ICs?；衔锩QI"(mg/U空白—苦參素735.5苫參堿——阿魏酸—新斯的明365.7l.223.4丄丄.86.5丄丄丄.58.8IV.433.9V.567.1VI.588.4.V丄I.323.1vm.211.6IX.121.8X.88.7實(shí)施例七、部分化合物對(duì)小鼠腸動(dòng)力作用的比較藥品和試劑苦參素注射液，山東新華制藥股份有限公司生產(chǎn)；甲硫酸新斯的明注射液，山東天福制藥廠生產(chǎn)；硫酸阿托品注射液，山東天福制藥廠生產(chǎn)；硫酸嗎啡控釋片，北京萌蒂制藥有限公司生產(chǎn)。動(dòng)物及飼養(yǎng)環(huán)境健康昆明小鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，體重18-22g，由青島市藥檢所提供，每籠10只。飼料由山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。屏障系統(tǒng)飼養(yǎng)，過(guò)濾送風(fēng)，室內(nèi)溫度18-22°C;、敲度50-60%;光照12小吋。實(shí)驗(yàn)方法小鼠灌胃給相應(yīng)藥物或生理鹽水，連續(xù)3天，末次給藥甜禁食不禁水16h，于給藥30min后，每只小鼠灌罔給予5%活性炭混懸液0.2ml，20min后脫臼處死小鼠，打開(kāi)腹腔分離腸系膜，剪取幽門(mén)至回盲部的腸管，置于托盤(pán)上，輕輕將小腸拉成直線，測(cè)量腸滔;長(zhǎng)度作為小腸總長(zhǎng)度，從幽門(mén)節(jié)炭末前沿的距離作為炭木在腸內(nèi)推進(jìn)距離。用以下公式計(jì)算炭末推進(jìn)率。炭水推進(jìn)率(％)=炭末在腸內(nèi)推進(jìn)距離/小腸總長(zhǎng)度><100%結(jié)果化合物I-x都凡有明顯的促進(jìn)小鼠小腸碳末推進(jìn)率，其作用都比苦參緊強(qiáng)。表7部分化合物對(duì)正常小鼠小腸炭末推進(jìn)率的影響(I±SI〕)lf藥劑.徵(ng/kg)N^末推進(jìn)率(9^T'—.….—■■空白——1057.26±9.10褲、，101058.85±13.22苦參素201067.49±11.68*阿魏酸201054.33±10.22新斯的明1068.55±4-80承水丄.1010TI-20±8.ll林I丄.10丄oTS.54±12.42*m.101072.36±8.77林IV.101075.12±13.35*V,10丄o79.01±6.88林VI.101068.52±10.55*VTT.101065.34±11.32*Vl丄I.101077.58土12.66**丄X.101072.35±10.76**X.101078.3111.47林與對(duì)照組比較*P<U.05;**P<0.01。實(shí)施例八、幾種化合物急性毒性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)A:驗(yàn)力'法:取小鼠，l次灌胃給藥，觀衫72小時(shí)，記錄死亡情況，結(jié)架其都性作川都比槐架堿弱見(jiàn)表8。表8部分化合物對(duì)小鼠毒性的觀察(I土SD)化合物給藥劑量(mg/kg)N死亡動(dòng)物數(shù)阿魏酸槐果堿i.li丄.TV.V.VI.Vl丄V工II.IX.X.X丄.Xll.xm.x丄v.XV.xvr.XVJi.500誦500100010001000100010001000薩100010001000丄ooo10001000,10001000100010101010101010101010101010101010101010101001000000000020000012%對(duì)照組比較*P<0.05;**P<0.01,實(shí)施例九、幾種化合物對(duì)皮疹的治療作用病例選擇年齡在18-25歲，身體雙側(cè)皮疹，性別不限，每種藥物實(shí)驗(yàn)10例。在皮診上局部涂抹1%藥物，自身單盲對(duì)照，左側(cè)肢體涂抹藥物，右側(cè)肢體涂抹生理鹽水，涂抹后IO分鐘進(jìn)行結(jié)果評(píng)價(jià)。結(jié)果評(píng)價(jià)對(duì)消腫止齊:作ffl進(jìn)行評(píng)價(jià)。顯效皮疹明顯消退，止癢作用明顯。有效有一定的止癢作用，丘疹有一定程度的消退。無(wú)效未見(jiàn)明顯作用。結(jié)果5種化合物的治療作用都明顯好于苦參素和阿魏酸(見(jiàn)表9)。表9.幾種化合物對(duì)皮疹的治療作用療效評(píng)價(jià)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>權(quán)利要求1.本發(fā)明涉及阿魏酸與苦參堿類(lèi)化合物分子拼接后所形成的化合物。2.本發(fā)明所涉及的阿魏酸包括阿魏酸和其異構(gòu)體。本發(fā)明所涉及的苦參堿類(lèi)化合物主要包括苦參堿、氧化苦參堿(苦參素)、槐果堿、氧化槐果堿、槐醇、白金雀花堿以及苦參堿的異構(gòu)體槐定堿、異苦參堿等。其結(jié)構(gòu)特征是具有四環(huán)的喹嗪啶，如圖II、/、、一々、-,、-".丄丄、'f1(T、r0H'0、、一'阿魏酸的結(jié)構(gòu)3.本發(fā)明所涉及的阿魏酸與苦參堿類(lèi)化合物拼接方式可以是鹽類(lèi)化合物，也可以是酰胺類(lèi)或酯類(lèi)化合物。其苦參堿類(lèi)生物堿在阿魏酸上結(jié)合的位置可以是R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8等(見(jiàn)下圖)。其中-個(gè)或一個(gè)以上基團(tuán)與苦參堿類(lèi)生物堿連接后，其余基團(tuán)可以由藥學(xué)上可接受的鹽或氫、氧、硫、鹵素、硝基、烷基、羥基、羧基、羰基等基團(tuán)連接。"、■/、、，--』、、，」,入、，丄、個(gè)、,--'氧化苦參喊氧化槐果喊,丄、苦參堿J::::、槐果堿.°、、/.、、異苦參堿槐定喊<image>imageseeoriginaldocumentpage3</image>苦參堿類(lèi)生物堿在阿魏酸上結(jié)合的位置4.本發(fā)明涉及的阿魏酸與苫參堿類(lèi)化合物拼接后所形成的鹽類(lèi)、酰胺類(lèi)或酯類(lèi)化合物具有明顯的協(xié)同作用，即既增加阿魏酸的生物學(xué)效應(yīng)又增加苦參堿類(lèi)化合物的生物學(xué)效應(yīng)。例如抗臟器纖維化作用，改善血液流變學(xué)，抗病毒作用，抗炎作用，抑制膽堿酯酶的作用，止痛和止哮作用，抗血栓作用，抗血小板聚集作用，抗菌作用，抗腫瘤作用，抗氧化作用，降血脂作用，增加免疫，增加精子活力和運(yùn)動(dòng)，抗高血壓作用等。5.本發(fā)明所涉及的阿魏酸與苦參堿類(lèi)化合物形成化合物有些可明顯增強(qiáng)阿魏酸和/或苦參堿類(lèi)化合物的藥理作用。包括對(duì)心臟和血管的作用，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用，治療肝炎的作用，治療臟器纖維化的作用，改善血液流變學(xué)的作用，消炎止痛和止癢作用，改善免疫的作用，抗菌和抗病毒作用等。6.本發(fā)明所涉及的阿魏酸與苦參堿類(lèi)形成的化合物有的可減輕阿魏酸和/或苦參堿類(lèi)化合物的毒性作用。7.本發(fā)明涉及的阿魏酸與苦參堿類(lèi)化合物拼接后所形成的鹽類(lèi)、酰胺類(lèi)或酯類(lèi)化合物有的可增加阿魏酸的水溶性。全文摘要本發(fā)明涉及阿魏酸與苦參堿類(lèi)化合物拼接后所形成的鹽類(lèi)、酰胺類(lèi)或酯類(lèi)化合物。其新形成的化合物具有增加苦參堿類(lèi)化合物和/或阿魏酸的生物學(xué)作用，或降低其毒性，或增加藥物的溶解性。文檔編號(hào)A61K31/4375GK101591337SQ20071019682公開(kāi)日2009年12月2日申請(qǐng)日期2007年12月7日優(yōu)先權(quán)日2007年12月7日發(fā)明者馬維富申請(qǐng)人:馬維富