通過調(diào)節(jié)抗原呈遞細胞的功能調(diào)節(jié)免疫反應的制作方法

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專利名稱：通過調(diào)節(jié)抗原呈遞細胞的功能調(diào)節(jié)免疫反應的制作方法
技術領域：
本發(fā)明通常涉及通過調(diào)節(jié)抗原呈遞細胞(APC)的功能調(diào)節(jié)免疫反應。特別的，本發(fā)明涉及伴侶蛋白IO在調(diào)節(jié)諸如主要組織相容性復合體(MHC) 分子例如HLA的細胞表面表達的APC功能中的用途，和用于疾病治療的相關方法、用途和組合物，以及用于篩選APC功能調(diào)節(jié)劑的方法。
背景技術：
對抗入侵細菌和病毒病原體的宿主防御系統(tǒng)的核心成分包含通過細胞受體對病原體、或其成分的成功識別，所述細胞受體誘導導致免疫系統(tǒng)的刺激的信號級聯(lián)放大。所述系統(tǒng)的基本方面是主要組織相容性復合體(MHC)-肽復合體的T-細胞識別。
當源自病原體的肽在MHC II類分子(其包括最初在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中組裝的 a-和(3-鏈)的情況下呈現(xiàn)時，CD4+T-細胞能識別所述肽。這些a-鏈和卩-鏈與恒定鏈(Ii)接合，所述恒定鏈保護肽結合槽并促進MHC II類分子向內(nèi)體間隔輸送。在內(nèi)體間隔中，Ii被清除，在結合槽中留下肽(CLIP)。伴侶蛋白分子HLA-DM促使CLIP被抗原肽替換。載有抗原肽的成熟MHC II類分子而后遷移至細胞表面，在此其能纟皮呈遞至CD4+T-細胞。
所述抗原處理系統(tǒng)和成熟MHC II類分子的呈遞出現(xiàn)在樹突細胞(DC) 中，其是僅有的能刺激天然T細胞和誘導初級免疫反應的APC。因此， DC在抗原呈遞和適應性免疫的誘導上起到關鍵作用。DC誘導免疫反應的能力依賴于其成熟狀態(tài)。在細胞表面上表達低水平的MHC和諸如 CD40、 CD80、 CD83和CD86的T細胞共刺激分子的未成熟DC,捕獲周圍的抗原。而后，其遷移至二級淋巴組織并經(jīng)歷成熟過程。成熟后， MHC分子/人細胞內(nèi)間隔重新分配至細胞表面，這導致呈遞抗原的能力增加。伴隨著，促進T細胞活化的共刺激分子的表面表達被上調(diào)。由DC 分泌的細胞因子分布也依賴于其成熟階段。成熟DC產(chǎn)生的細胞因子包括IL-12、 IL-1 a/p、 IL隱18、 IFN-a/卩、IL-6、 TNF-a、 IL-IO、和TGF-p。 DC細胞因子分布最后決定免疫反應的Thl/Th2-結果。即，通過DC誘導的IL-12分泌的抗原誘導Thl分化，而不誘導IL-12產(chǎn)生的抗原促進Th2 分化。
在DC成熟中包涉及的許多調(diào)節(jié)方法還是未知的。特別的，當MHC II類分子經(jīng)歷從未成熟DC中的內(nèi)體結構到成熟DC中的質(zhì)膜的定位的改變時，所涉及的許多分子信號通路還不清楚。
伴侶蛋白10 (CpnlO)是一種高度保守的線粒體伴侶蛋白，其在蛋白質(zhì) 的折疊上起基本作用。CpnlO也已經(jīng)顯示涉及大量免疫調(diào)節(jié)活性，例如，核因子-kB(NF-kB)活化的抑制和促炎細胞因子的產(chǎn)生，既在體外又在體內(nèi)。本發(fā)明基于令人驚奇的和意想不到的發(fā)現(xiàn)，即CpnlO具有調(diào)節(jié)APC 功能的能力，包括MHC分子在DC中從細胞內(nèi)間隔到細胞表面的重新分配，和T細力包的APC介導的活化。
發(fā)明概述
依據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供通過調(diào)節(jié)至少一個MHC分子的細胞表面表達的水平、來調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官的免疫反應的方法，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
所述方法還包括通過調(diào)節(jié)至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平、來調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官的免疫反應，包括給予有效量的伴侶蛋白10。
MHC分子可以是MHC I類分子、MHC II類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達。抗原呈遞細胞可以選自巨嗟細胞、樹突細胞或B細胞。
伴侶蛋白IO可以是天然衍生的、重組產(chǎn)生的或合成產(chǎn)生的伴侶蛋白 10。伴侶蛋白10可以是真核細胞起源的。伴侶蛋白IO可以是哺乳動物起源的。伴侶蛋白IO可以是人伴侶蛋白10。
伴侶蛋白10可以包括SEQ ID NO:l 、 SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中所列的多肽序列。伴侶蛋白IO可以是乙酰化的或非乙?；?。
伴侶蛋白IO可以以編碼伴侶蛋白10的多聚核苷酸形式被給藥。編碼伴侶蛋白IO的多聚核苷酸可以位于基因構建體中，可操作地與啟動子
連接。多聚核苷酸可以包括SEQ ID NO:4中所列的序列。
依據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供一種通過調(diào)節(jié)至少一個MHC分子的細
胞表面表達的水平治療或預防個體的疾病或狀態(tài)的方法，其中所述方法
包括給予個體有效量的伴侶蛋白10。
所述方法還可以包括通過調(diào)節(jié)至少一個其他細胞表面分子的細胞表
面表達的水平治療或預防個體的疾病或狀態(tài)的方法，包括給予個體有效
量的伴侶蛋白10。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC
分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或
HLA-DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達。抗原呈遞細胞可以選自巨嗟細胞、沖對突細胞或B細胞。
疾病或狀態(tài)可以源自，或另外地相關于，由病毒或細菌病原體引起的個體的感染。疾病或狀態(tài)可以是癌癥、自體免疫紊亂、炎癥、過敏、哮喘或傳染病。
伴侶蛋白IO可以是天然衍生的、重組產(chǎn)生的或合成產(chǎn)生的伴侶蛋白 10。伴侶蛋白10可以是真核細胞起源的。伴侶蛋白IO可以是人伴侶蛋白10。
伴侶蛋白10可以包括SEQ ID NO:l、 SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3
中所列的多肽序列。伴侶蛋白IO可以是乙?；幕蚍且阴；摹?br> 伴侶蛋白IO可以以編碼伴侶蛋白10的多聚核苷酸形式被給藥。編
碼伴侶蛋白10的多聚核苷酸可以位于基因構建體中，可操作地與啟動子
連接。多聚核苷酸可以包括SEQ ID NO:4中所列的序列。
依據(jù)本發(fā)明的第三方面，提供一種用于調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、
組織或器官的至少一個MHC分子的細胞表面表達的水平的方法，其中所
述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
所述方法還可以包括調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官的至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平的方法，包括給予有效
量的伴侶蛋白10。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達?？乖蔬f細胞可以選自巨喧細胞、4對突細胞或B細胞。
依據(jù)本發(fā)明的第四方面，提供一種用于調(diào)節(jié)個體或其至少一個組織或器官的抗原呈遞細胞的功能的方法，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
抗原呈遞細胞可以選自巨噬細胞、樹突細胞或B細胞。功能可以選自向淋巴結的遷移、T細胞活化或T細胞增殖。依據(jù)本發(fā)明的第五方面，提供一種組合物，當用于治療或預防疾病
或狀態(tài)時，其中所述組合物包含伴侶蛋白IO和至少一個藥學上可接受載
體、稀釋劑或佐劑，以及其中所述伴侶蛋白IO調(diào)節(jié)至少一個MHC分子
的細胞表面表達的水平。
伴侶蛋白IO還可以調(diào)節(jié)至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達
的水平。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達。抗原呈遞細胞
可以選自巨噬細胞、樹突細胞或B細胞。
依據(jù)本發(fā)明的第六方面，提供一種組合物，當用于治療或預防疾病
或狀態(tài)時，其中所述組合物包含伴侶蛋白IO和至少一個藥學上可接受載
體、稀釋劑或佐劑，以及其中伴侶蛋白IO調(diào)節(jié)個體或其至少一個組織或
器官的抗原呈遞細胞的功能。
抗原呈遞細J包可以選自巨噬細胞、樹突細J包或B細胞。功能可以選自向淋巴結的遷移、T細胞活化或T細胞增殖。依據(jù)本發(fā)明的第七方面，提供伴侶蛋白IO在用于疾病或狀態(tài)的治療或預防的藥物的制造上的用途，其中所述伴侶蛋白IO調(diào)節(jié)至少一個MHC 分子的細胞表面表達的水平。
伴侶蛋白IO還可以調(diào)節(jié)至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達?？乖蔬f細胞
可以選自巨嗟細胞、樹突細胞或B細胞。
依據(jù)本發(fā)明的第八方面，提供伴侶蛋白IO在用于疾病或狀態(tài)的治療
或預防的藥物的制造上的用途，其中所述伴侶蛋白IO調(diào)節(jié)個體或其至少
一個組織或器官中的抗原呈遞細胞的功能。
抗原呈遞細胞可以選自巨喧細胞、樹突細胞或B細胞。功能可以選自向淋巴結的遷移、T細胞活化或T細胞增殖。依據(jù)本發(fā)明的第九方面，提供一種方法，用于調(diào)節(jié)個體或其至少一
個細胞、組織或器官中的一個或多個免疫調(diào)節(jié)劑的細胞中的產(chǎn)生、定位
和/或細胞表面表達，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10,其中
所述伴侶蛋白10調(diào)節(jié)至少一個MHC分子或至少一個其他細胞表面分子
的細胞表面表達的水平。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC
分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或
HLA-DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達?？乖蔬f細胞可以選自巨謹細胞、樹突細胞或B細胞。
依據(jù)本發(fā)明的第十方面，提供一種方法，用于鑒定調(diào)節(jié)免疫反應的化合物，其中所述方法包括
(a) 將細胞或細胞提取物與候選化合物在CpnlO存在下接觸；和
(b) 確定至少一個MHC分子在所述細胞的表面上的表達是否與所述候選化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
方法還可以包括(C)確定至少一個其他細胞表面分子在所述細胞的表面上的表達是否與所述候選化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
MHC分子可以是MHC I類分子、MHC II類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA畫DQ。
細月包表面表達可以是抗原呈遞細力包的細力包表面表達?？乖蔬f細月包可以選自巨嗟細胞、樹突細胞或B細胞。
依據(jù)本發(fā)明的第十一方面，提供一種方法，用于篩選多個化合物以鑒定調(diào)節(jié)免疫反應的化合物，其中所述方法包括
(a) 將細胞或細胞提取物與所述多個化合物在CpnlO存在下接觸；和
(b) 確定至少一個MHC分子在所述細胞的表面上的表達是否與所述多個化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
方法還可以包括
與所述多個化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
MHC分子可以是MHC I類分子、MHC II類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達?？乖蔬f細胞可以選自巨p藍細月包、杉于突細胞或B細胞。
依據(jù)本發(fā)明的第十二方面，提供一種方法，用于誘導調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官中的至少一個MHC分子的細胞表面表達的水平，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
所述方法還可以包括調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官中的至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA畫DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達?？乖蔬f細胞可以選自巨噬細胞、樹突細胞或B細胞。
依據(jù)本發(fā)明的第十三方面，提供一種方法，用于鑒定調(diào)節(jié)免疫反應
的化合物，其中所述方法包括
(a) 將細胞或細胞提取物與所述候選化合物在CpnlO存在下接觸；和
(b) 確定所述細胞向淋巴結的遷移或激活和/或引起T細胞增殖的能力是否在與所述候選化合物接觸的情況下而被調(diào)節(jié)。
細胞可以是抗原呈遞細胞?？乖蔬f細胞可以選自巨噬細胞、樹突細月包或B細月包。
依據(jù)本發(fā)明的第十四方面，提供一種方法，用于篩選多個化合物以鑒定調(diào)節(jié)免疫反應的化合物，其中所述方法包括
(b)確定所述細胞向淋巴結的遷移或激活和/或引起T細胞增殖的能力是否在與所述多個化合物接觸的情況下而被調(diào)節(jié)。
細胞可以是抗原呈遞細胞?？乖蔬f細胞可以選自巨噬細胞、樹突細胞或B細^^包。
依據(jù)本發(fā)明的第十五方面，提供一種方法，用于調(diào)節(jié)個體或其至少一個組織或器官中的抗原呈遞細胞的功能，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
抗原呈遞細月包可以選自巨噬細月包、沖對突細月包或B細月包。
功能可以選自向淋巴結的遷移或T細胞活化。
定義
本說明書上下文中，術語"包括，，指"主要包括，但不一定僅有"。另夕卜，單詞"包括(comprising)"的變化形式，如"包括(comprise)"和"包括 (comprises)"具有相應的不同含義。
本文所用的術語"治療(treatment)"、"治療(treating)"及其變化形式，指任何或全部應用，其治療疾病狀態(tài)或癥狀、預防疾病產(chǎn)生、或其他無論以任何方式預防、阻礙、延遲、或逆轉(zhuǎn)疾病或其他不期望癥狀的進展。
本文所用的術語"有效量"，其含義中包括無毒但足夠量的藥劑或化合物以提供期望的治療或疾病預防效果。準確需要量在個體間依據(jù)諸如被治療的物種、個體的年齡和一般狀況、被治療的狀態(tài)的嚴重程度、被給藥的特殊藥劑和給藥方式等因素而變化。因此，指定準確的"有效量" 是不可能的。然而，對于任何給定情況，適合的"有效量，，可以通過本領域內(nèi)的普通技術人員僅用常規(guī)試驗就可以確定。
術語"多肽，，指由氨基酸通過肽鍵連接在一起形成的聚合物。術語"多肽"和"蛋白質(zhì)"在本文可交換應用，盡管出于本發(fā)明目的，"多肽"構成全長蛋白質(zhì)的一部分。
本文用到的術語"多聚核苷酸"指脫氧核糖核苷酸堿基、核糖核苷酸堿基或已知的類似物或天然核苷酸的單鏈或雙鏈聚合物，或其混合物。
本文用到的術語"調(diào)節(jié)(modulating)"、"調(diào)節(jié)(modulates)"及其變化形式指與沒有調(diào)節(jié)分子或藥劑時的活性、產(chǎn)生、分泌或其他起作用的水平相比時，在本發(fā)明的特定調(diào)節(jié)分子或藥劑存在下，增加或降低分子的活性、產(chǎn)生、分泌或起作用的水平。這些術語不意味著量的增加或減少。調(diào)節(jié)可以是任何足以產(chǎn)生期望的結果的數(shù)量，并可以是直接或間接的。
本文應用的術語"免疫調(diào)節(jié)劑"指分子調(diào)節(jié)劑，其在免疫反應的活化、保持、成熟、阻止、抑制或增加中起作用。
術語"MHC分子"指任何分子，其復合、聯(lián)合或形成一部分主要組織相容性復合體。因而"MHC分子，，可以包括任何說明的人白血球抗原 (HLA)，例如，包括但不限于HLA-DR(MHC II類)、MHCI類分子、或非經(jīng)典的MHC分子，例如CDla、 CDlb或CDlc。
術語"其他細胞表面分子，，指在細胞表面上表達的任何分子，可以或不可以包括共刺激分子。術語"共刺激分子"指能直接或間接有助于涉及 MHC分子的信號傳導的任何分子。
附圖簡述
本發(fā)明現(xiàn)在將僅通過非限制性實施例，參考

。圖1. CpnlO顯著減少HLA-DR在DC上的表達
在GM-CSF和IL-4存在下，人DC從單核細胞分化5天。用LPS, 單核細胞向DC的轉(zhuǎn)化通過CDla和CD14細胞表面表達的流式細胞檢測分析驗證。CDla+ CD14- DC 一皮進一步分析成熟標記物HLA-DR的細胞表面表達。培養(yǎng)的源自單核細胞的DC被用于評估CpnlO調(diào)節(jié)LPS-誘導DC 成熟的能力。HLA-DR的表達在用CpnlO孵育的未成熟DC上不變(A)。然而，LPS-i秀導HLA-DR的表達的上調(diào)凈皮CpnlO顯著降^f氐(A對B， p=0.0408; A對C， p=0.0324; A對D, p=0.0161)(B)。代表3個獨立的實驗。
圖2. CpnlO通過DC減少組成性TNF-a釋放
培養(yǎng)的源自單核細胞的DC被用于評估CpnlO調(diào)節(jié)組成性TNF-a釋放的能力。DC用一定濃度范圍的cpnlO孵育20小時。TNF-a在培養(yǎng)上清中的富集通過ELISA測量。顯示的數(shù)據(jù)代表4個獨立的實驗。圖3. CpnlO減少原發(fā)混合白細胞反應(MLR)中的IFN-y產(chǎn)生培養(yǎng)的源自單核細胞的DC被用于評估CpnlO調(diào)節(jié)原發(fā)混合白細胞反應(MLR)中DC對T細胞的活化。DC與異源CD+ T細胞共培養(yǎng)6天， FN-y產(chǎn)生在培養(yǎng)上清中用ELISA測定。IFN-y富集被CpnlO顯著降低。數(shù)據(jù)代表2個獨立的實驗。
圖4. CpnlO不影響原發(fā)混合白細胞反應(MLR)中的T細胞增殖培養(yǎng)的源自單核細胞的DC和單獨的異源CD4+ T細胞在CpnlO存在或不存在下被共培養(yǎng)6天。用CyQUANT細胞增殖檢測試劑盒依據(jù)制造商的說明書測量增殖。代表2個獨立的實驗。
實施本發(fā)明的最佳方式
應用熒光染料標記的蛋白質(zhì)，發(fā)明人已經(jīng)顯示，CpnlO與抗原呈遞細胞、主要是樹突細胞間有強相互作用。體外實驗的數(shù)據(jù)，其中從PBMC 而來的骨髓或者類漿細胞的樹突細胞(DC)在TLR配體范圍內(nèi)刺激之前被特定地耗盡，顯示了在CpnlO存在下，細胞因子產(chǎn)生的動力學的微小改變。而且，本發(fā)明人證明了與CpnlO —起成熟的源自單核細胞的DC從細胞內(nèi)間隔重新分配減少水平的HLA-DR和其他共刺激分子至細胞表面。此MHC II類分子表達的下調(diào)和降低的抗原呈遞能力可以有助于 CpnlO的全部抗炎作用。
特別的，為了評估CpnlO在DC成熟上的作用，本發(fā)明人應用源自單核細胞的DC,其在過去已經(jīng)被廣泛描述(J.Exp.Med. 1994; 179: 1109;
18Blood 2002; 99: 993; PNAS 1996; 93: 2588; InUmmunol. 2004; 16: 767)。未成熟源自單核細胞的DC是CD14-HLA-DR+ CDla+細胞。關于用LPS活化，其上調(diào)HLA-DR和表達對細胞表面上的T細胞的刺激物配體。在此表明，CpnlO在體外調(diào)節(jié)DC成熟的程度。
從而，發(fā)明人已經(jīng)顯示，Cpnl0下調(diào)細胞表面的HLA-DR的LPS誘導表達。此降低的HLA-DR表達可以是由成熟DC減少IFN-y產(chǎn)生的結果(在J. Immunol 1989; 143:3781中說明)。另一方面，HLA-DR的CpnlO 誘導下調(diào)可以反映將負載抗原的MHC II類分子輸送至細胞表面的內(nèi)吞途徑的效率的改變。然而，在此呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)提供清晰地證據(jù)證明，DC成熟的預防以及DC和B細胞的降低的抗原呈遞能力很可能是自身免疫性疾病的改善中的CpnlO的作用^^式。
因此，本發(fā)明提供用于調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官的免疫反應的方法，通過調(diào)節(jié)至少一個MHC分子的細胞表面表達的水平，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
所述方法還包括調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官的免疫反應，通過調(diào)節(jié)至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平，包括給予有效量的伴侶蛋白10。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA腸DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達?？乖蔬f細胞可以選自巨喧細月包、樹突細月包或B細月包。
伴侶蛋白10可以是源自天然的、重組產(chǎn)生的或合成產(chǎn)生的伴侶蛋白 10。伴侶蛋白10可以是真核細胞起源的。伴侶蛋白IO可以是哺乳動物起源的。伴侶蛋白IO可以是人伴侶蛋白10。
伴侶蛋白10可以包括SEQ ID NO:l、 SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3 中所列的多肽序列。伴侶蛋白IO可以是乙?；幕蚍且阴；?。
伴侶蛋白IO可以以編碼伴侶蛋白10的多聚核苷酸形式被給藥。編碼伴侶蛋白IO的多聚核苷酸可以位于基因構建體中，可操作地與啟動子連接。多聚核苷酸可以包括SEQ ID NO:4中所列的序列。本發(fā)明也提供用于通過調(diào)節(jié)至少一個MHC分子的細胞表面表達的
水平治療或預防個體中的疾病或狀態(tài)的方法，其中所述方法包括給予個
體有效量的伴侶蛋白10。
所述方法還可以包括通過調(diào)節(jié)至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平治療或預防個體中的疾病或狀態(tài)，其包括給予個體有效量
的伴侶蛋白10。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA陽DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達?？乖蔬f細胞可以選自巨噬細胞、樹突細胞或B細胞。
疾病或狀態(tài)可以源自，或另外地相關于，由病毒或細菌病原體引起的個體的感染。疾病或狀態(tài)可以是癌癥、自體免疫紊亂、發(fā)炎、過敏、哮喘或傳染病。
伴侶蛋白IO可以是源自天然的、重組產(chǎn)生的或合成產(chǎn)生的伴侶蛋白 10。伴侶蛋白10可以是真核細胞起源的。伴侶蛋白IO可以是人伴侶蛋白10。
伴倡蛋白10可以包括SEQ ID NO:l 、 SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3 中所列的多肽序列。伴侶蛋白IO可以是乙?；幕蚍且阴；摹?br> 伴侶蛋白IO可以以編碼伴侶蛋白10的多聚核苷酸形式被給藥。編碼伴侶蛋白10的多聚核苷酸可以位于基因構建體中，可操作地與啟動子連接。多聚核苷酸可以包括SEQ ID NO:4中所列的序列。
本發(fā)明另外提供用于調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官的至少一個MHC分子的細胞表面表達的水平的方法，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
所述方法還可以包括調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官的至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平的方法，包括給予有效量的伴侶蛋白10。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或HLA-DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達?？乖蔬f細胞
可以選自巨喧細胞、樹突細胞或B細胞。
本發(fā)明還提供用于調(diào)節(jié)個體或其至少一個組織或器官的抗原呈遞細
胞的功能的方法，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。抗原呈遞細月包可以選自巨噬細胞、樹突細力包或B細胞。功能可以選自向淋巴結的遷移、T細胞活化或T細胞增殖。此外，本發(fā)明提供組合物，當用于治療或預防疾病或狀態(tài)時，其中
所述組合物包含伴侶蛋白IO和至少一種藥學上可接受載體、稀釋劑或佐
劑，以及其中伴侶蛋白IO調(diào)節(jié)至少一個MHC分子的細胞表面表達的水平。
伴侶蛋白IO還可以調(diào)節(jié)至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達?？乖蔬f細胞可以選自巨喧細月包、樹突細胞或B細胞。
本發(fā)明也提供組合物，當用于治療或預防疾病或狀態(tài)時，其中所述組合物包含伴侶蛋白IO和至少一種藥學上可接受載體、稀釋劑或佐劑，以及其中伴侶蛋白10調(diào)節(jié)個體或其至少一個組織或器官中的抗原呈遞細胞的功能。
抗原呈遞細胞可以選自巨喧細胞、樹突細胞或B細胞。
功能可以選自向淋巴結的遷移、T細胞活化或T細胞增殖。
本發(fā)明另外提供伴侶蛋白10在用于疾病或狀態(tài)的治療或預防的藥劑
的制造上的應用，其中伴侶蛋白IO調(diào)節(jié)至少一個MHC分子的細胞表面
表達的水平。
伴侶蛋白IO還調(diào)節(jié)至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達。抗原呈遞細胞
可以選自巨嗟細胞、樹突細胞或B細胞。
本發(fā)明還提供伴侶蛋白10在用于疾病或狀態(tài)的治療或預防的藥劑的
制造上的應用，其中伴侶蛋白IO調(diào)節(jié)個體或其至少一個組織或器官的抗
原呈遞細胞的功能。
抗原呈遞細月包可以選自巨噬細l包、初于突細月包或B細月包。
功能可以選自向^fr巴結的遷移、T細胞活化或T細胞增殖。
此外，本發(fā)明提供方法，用于調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或
器官中的一個或多個免疫調(diào)節(jié)劑的細胞中的產(chǎn)生、定位和/或細胞表面表
達，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10,和其中伴侶蛋白10調(diào)
節(jié)至少一個MHC分子或至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA畫DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達。抗原呈遞細胞可以選自巨噬細胞、樹突細胞或B細胞。
本發(fā)明也提供方法，用于鑒定調(diào)節(jié)免疫反應的化合物，其中所述方法包括
(a) 將細胞或細胞提取物與候選化合物在CpnlO存在下接觸；和
(b) 確定至少一個MHC分子在所述細胞的表面上的表達是否與所述候選化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
所述方法還可以包括
(c) 確定至少一個其他細胞表面分子在所述細胞的表面上的表達是否與所述候選化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
MHC分子可以是MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達?？乖蔬f細胞可以選自巨嗟細胞、樹突細胞或B細胞。
本發(fā)明另外提供方法，用于篩選多個化合物以鑒定調(diào)節(jié)免疫反應的
化合物，其中所述方法包括
(a) 將細胞或細胞提取物與多個化合物在CpnlO存在下接觸；和
(b) 確定至少一個MHC分子在所述細胞的表面上的表達是否與所述多個化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
所述方法還可以包括
與所述多個化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
MHC分子可以是MHC I類分子、MHC II類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達?？乖蔬f細胞可以選自巨p藍細胞、樹突細胞或B細胞。
本發(fā)明還提供方法，用于誘導調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官中的至少一個MHC分子的細胞表面表達的水平，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
所述方法還可以包括調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官中的至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平，包括給予有效量的
伴侶蛋白10。
MHC分子可以是MHC I類分子、MHC II類分子、或非經(jīng)典性MHC 分子。MHCII類分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
細胞表面表達可以是抗原呈遞細胞的細胞表面表達。抗原呈遞細胞可以選自巨嗟細胞、樹突細胞或B細胞。
此外，本發(fā)明也提供方法，用于鑒定調(diào)節(jié)免疫反應的化合物，其中所述方法包括
(a) 將細胞或細胞提取物與候選化合物在CpnlO存在下接觸；和
(b) 確定所述細胞向淋巴結的遷移或刺激和/或引起T細胞增殖的能力
23是否與所述候選化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
細胞可以是抗原呈遞細胞。抗原呈遞細胞可以選自巨噬細胞、樹突細胞或B細^<。
本發(fā)明還提供方法，用于篩選多個化合物以鑒定調(diào)節(jié)免疫反應的化
合物，其中所述方法包括
(a) 將細胞或細胞提取物與所述多個化合物在CpnlO存在下接觸；和
(b) 確定所述細胞向淋巴結的遷移或刺激和/或引起T細胞增殖的能力是否與所述多個化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
細胞可以是抗原呈遞細胞。抗原呈遞細胞可以選自巨噬細胞、樹突細月包或B細月包。
本發(fā)明另外提供方法，用于調(diào)節(jié)個體或其至少一個組織或器官的抗原呈遞細胞的功能，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。抗原呈遞細胞可以選自巨喧細胞、樹突細胞或B細胞。功能可以選自向淋巴結的遷移、T細胞活化或T細胞增殖。本領域內(nèi)的那些技術人員應了解，依據(jù)本發(fā)明的方法，CpnlO可以單獨或連同一個或多個另外的藥劑給藥。例如，CpnlO可以與一個或多個能刺激TLR3、 TLR4、 TLR7和TLR9的一個或多個的TLR激動劑一同被給藥。另外，本發(fā)明包括用CpnlO連同其他治療方法的聯(lián)合療法以治療疾病和紊亂。例如，CpnlO可以用于病毒疾病的治療，其響應于I 型干擾素如IFN(3或IFNa的治療。另夕卜，由于TLR7和TLR9的激動劑誘導活化先已被報道能增強腫瘤對放射療法的響應，CpnlO可以連同放射療法;故用以治療癌癥。
對于此類聯(lián)合治療，聯(lián)合治療的每個成分可以同時給藥，或以任何次序順序給藥，或在不同時間給藥，以提供期望的效果?？蛇x擇的，成分可以以單一劑量單位被配制在一起作為組合產(chǎn)品。當單獨給藥時，可以優(yōu)選成分通過相同的給藥途徑給藥，盡管這不是必要這樣。
CpnlO
依據(jù)本發(fā)明的方面和實施方案，需要治療的個體被給予有效量的 CpnlO。在特別實施方案中，被治療的個體是人，因此，CpnlO多肽是人CpnlO多肽。本領域內(nèi)的那些技術人員應了解，依據(jù)本發(fā)明應用的CpnlO 的精確一致性可以依據(jù)許多因素而不同，例如要治療的物種，以使CpnlO 可被選擇以衍生自要治療的物種。
CpnlO可以是天然的、源自天然的、重組的或合成的CpnlO。在Morton 等人在2000年的(Immunol Cell Biol 78:603-607)、 Ryan等人在1995年的 (J Biol Chem 270:22037-22043)和Johnson等人在2005年的(J Biol Chem 280:4037-4047)中說明的方法是用于重組和合成Cpnl0蛋白質(zhì)的適合的生產(chǎn)方法的實例，而在Somodevilla-Torres等人在2003年的(Protein Expression and Purification 32:276-287)、 Ryan等人在1995年的(J Biol Chem 270:22037畫22043)和Zhang等人在2000年的(J Neurol Sci 182:5-15) 中說明的方法是用于天然和源自天然的CpnlO蛋白質(zhì)的適合的生產(chǎn)方法的實施例，盡管技術人員應了解，本發(fā)明不受限于所應用的純化或生產(chǎn)
CpnlO。
依據(jù)本發(fā)明所用的CpnlO多肽和肽片段可以用標準重組核酸技術得到或可以例如用傳統(tǒng)的液相或固相合成纟支術合成。CpnlO肽可以通過用諸如endoLys-C、 endoArg-C、 endoGlu-C和葡萄球菌V8-蛋白酶的一個或多個蛋白酶消化多肽而產(chǎn)生。消化的肽片段能通過例如高效液相色譜 (HPLC)技術純化。
本發(fā)明的實施方案還包括編碼CpnlO的多聚核苷酸的給藥。在此情況下，多聚核香酸典型地被可操作地與啟動子連接，以使適合的多肽序列在多聚核芬酸給予個體后產(chǎn)生。多聚核苦酸可以以載體被給予個體。載體可以是質(zhì)粒載體、病毒載體、或適于外源序列的插入到、它們的引入到真核細胞和引入的序列表達的任何其他適合的載體。典型的，載體是真核細胞表達載體，可以包括表達控制和處理序列，如啟動子、增強子、核糖體結合部位、多腺苷酸化信號和轉(zhuǎn)錄終止序列。被給藥的核酸構建體可以包含凈果DNA或可以與一個或多個藥學上可接受載體一起以組合物的形式存在。
CpnlO多肽可以具有如SEQ ID NO:l所列的氨基酸序列。編碼CpnlO 的多聚核苷酸的核苷酸序列可以是如SEQ ID NO:4所列的，或在此顯示與SEQIDNO:4的序列雜交的充分序列一致性。在可選擇的實施方案中，多聚核苷酸的核苷酸序列可以與SEQ ID NO:4所列的序列共有至少30%、 40%、 50%、 60%、 70%、 80%、 85%、 90%、 96%、 97%、 98%或99%的一致性。
本文所用的術語"多肽"和"多聚核苷酸"的范圍內(nèi)，是其片段和變體。僅作為實例，如在WO 95/15338 (也就是"伴侶蛋白10" PCT申請?zhí)?PCT/AU94/00740)中說明的Cpn10的肽片段可以依據(jù)本發(fā)明的方面和實施方案纟皮應用。
術語"片段"指核酸或多肽序列，其編碼全長Cpn10蛋白質(zhì)組分或是全長Cpn10蛋白質(zhì)的組分。根據(jù)多肽，片段具有與全長蛋白質(zhì)一樣的定性的生物活性。依據(jù)本發(fā)明應用的Cpn10的生物活性片^a可以典型地具有至少約50%的相應于全長蛋白質(zhì)的免疫調(diào)節(jié)活性，更典型的是至少約 60%的此活性，更典型的是至少約70%的此活性，更典型的是至少約80% 的此活性，更典型的是至少約90%的此活性，和更典型的是至少約95% 的此活性。
本文應用的術語"變體"指基本上類似的分子。通常，核酸序列變體編碼具有相同的定性的生物活性的多肽。通常，多肽序列變體也具有相同的定性的生物活性。另外，這些多肽序列變體可以共有至少50%、 55%、 60%、 65%、 70%、 75%、 80%、 85%、 90%、 95%、 96%、 97%、 98%或 99%的序列一致性。
另外，變體多肽可以包括類似物，其中術語"類似物，，指為Cpn10衍生物的多肽，其中衍生物包括一個或多個氨基酸添加、刪除、取代，使得多肽基本上保留與天然Cpnl0相同的功能。本領域內(nèi)眾所周知的，一些氨基酸可以在多肽內(nèi)改變而不會改變多肽的活性(保守取代)。術語"保守氨基酸取代"指多肽鏈(蛋白質(zhì)一級序列)中一個氨基酸取代或替代為具有相似特性的另一個氨基酸。例如，帶電荷氨基酸谷氨酸(Glu)被類似的帶電荷氨基酸天冬氨酸(Asp)取代就是一個保守氨基酸取代。氨基酸添加可以源于Cpn10多肽或其片段與另外一個多肽或肽融合，如多聚組氨酸標記、麥芽糖結合蛋白融合、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶融合、綠色熒光蛋白融合，或諸如FLAG或c-myc的表位標記的添加。例如，野生型人Cpn10多肽可以在N端包含添加的GSM三肽部分(SEQ ID NO:2;參見例如WO 95/15338，其公開通過引用并入本文)或在N端具有添加的丙氨酸(A)殘基 (SEQ ID NO:3; WO 2004/041300(也就是"伴侶蛋白IO免疫抑制"PCT申請?zhí)朠CT/AU2003/001467),其^^開通過引用并入本文)，或在N端具有添加的甘氨酸(G)殘基(SEQ ID NO:5; PCT/AU2006/001278("修飾的伴侶蛋白IO，，PCT申請))，其公開通過引用并入本文。本發(fā)明也包括編碼此 CpnlO的修飾形式的多聚核苷酸應用。
CpnlO變體能通過CpnlO蛋白質(zhì)的突變或編碼核酸的突變產(chǎn)生，如通過應用本領域內(nèi)的那些技術人員熟知的方法隨機突變或定點誘變。此類方'法可以在侈寸長口 Cwrewf /Votoco/s in Afo/eci//ar Bz'o/ogy (分子生4勿生4勿學實驗室指南)(Chapter 9), Ausubel et al" 1994， John Wiley & Sons, Inc., New York中被發(fā)現(xiàn)，其公開通過引用并入本文。變體和類似物也包括與其他化學部分、融合蛋白質(zhì)復合的多肽或其他翻譯后修飾的多肽。適合的修飾的實例在共同未決國際專利申請PCT/AU2005/000041中被說明，其公開通過引用并入本文。
另外，CpnlO多肽或其片段可以具有其他翻譯后修飾，包括側鏈修飾，例如乙?；?、脒化、曱氨?；?、還原性烷基化和本領域內(nèi)技術人員已知的其他修飾。
組合物和給藥途徑
些普通技術人員已知的方法和程序制備，因而可以包括藥學上可接受載體、稀釋劑和/或佐劑。
組合物可以通過標準途徑給藥。通常，組合物可以通過腸胃外(例如靜脈內(nèi)、脊柱內(nèi)、皮下或肌肉內(nèi))途徑、口服或外用途徑給藥。給藥可以是全身性、區(qū)域性性或局部性。在任何給定情況下所采用的具體給藥途徑取決于許多因素，包括被治療狀態(tài)的性質(zhì)、所述狀態(tài)的嚴重性和程度、待遞送的具體化合物的需要劑量以及所述化合物可能的副作用。
通常，適合的組合物可根據(jù)本領域普通技術人員已知的方法制備，其可包括藥學上可接受的稀釋劑、佐劑和/或賦形劑。所述稀釋劑、佐劑和賦形劑在與組合物的其他成分相容并且對其接受者無毒的方面必須是 "可接受的"。
藥學上可接受的載體或稀釋劑的實例為軟化水或蒸餾水；鹽水溶液；諸如花生油(peanut oil)、紅花油、扭t欖油、棉籽油、玉米油、芝麻油、花生油(arachisoil)或椰子油的基于植物的油；硅油類，包括聚硅氧烷，如聚曱基硅氧烷、聚苯基硅氧烷和聚曱苯基硅氧烷；揮發(fā)性硅酮；諸如液狀石蠟、軟石蠟或角鯊烷的礦物油；諸如曱基纖維素、乙基纖維素、羧曱基纖維素、羧曱基纖維素鈉或羥丙基曱基纖維素的纖維素衍生物；低級鏈烷醇，例如乙醇或異丙醇；低級芳烷醇；低級聚烷撐亞烷基二醇或低級烷撐二醇，例如聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇、丙二醇、1,3-丁二醇或甘油；脂肪酸酯，如棕櫚酸異丙酯、肉豆蔻酸異丙酯或油酸乙酯；聚乙烯吡咯烷酮；瓊脂；角叉菜膠；黃蓍樹膠或阿拉伯樹膠和凡士林。典型的，所述一種或多種載體形成組合物重量的10-99.9%。
本發(fā)明組合物可以為適合通過注射給藥的形式；適合口服的制劑形式(如膠嚢劑、片劑、嚢片、酏劑)；適合外用給藥的軟膏、乳劑或洗劑形式；適合作為滴眼劑給藥的形式；適合通過諸如鼻內(nèi)吸入或口腔吸入的吸入給藥的氣霧劑形式；適合腸胃外即皮下、肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)注射給藥的形式。
對于以可注射的溶液或懸浮液給藥時，無毒的胃腸外可接受的稀釋劑或載體包括林格氏(Ringer's)溶液、等滲鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水、乙醇和1,2丙二醇。
適于口服使用的載體、稀釋劑、賦形劑和佐劑的一些實例包括花生油(peanutoil)、液狀石蠟、羧曱基纖維素鈉、曱基纖維素、海藻酸鈉、阿拉伯樹膠、黃蓍樹膠、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、白明膠和卵磷脂。此外，這些口服制劑包含適合的增香劑和著色劑。當以膠嚢形式使用時，用諸如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯的延遲崩解的化合物包被所述膠嚢劑。
佐劑通常包括潤滑劑、乳化劑、增稠劑、防腐劑、殺菌劑和緩沖劑。口服給藥的固體形式包含人和獸醫(yī)制藥實踐中可接受的粘合劑、甜味劑、崩解劑、稀釋劑、增香劑、包衣劑、防腐劑、潤滑劑和/或時間延遲劑。適合的粘合劑包括阿拉伯樹膠、白明膠、玉米淀粉、黃蓍樹膠、海藻酸鈉、羧曱基纖維素或聚乙二醇。適合的甜味劑包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、阿斯巴特或糖精。適合的崩解劑包括玉米淀粉、曱基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、瓜爾膠、黃原膠、皂粘土、海藻酸或瓊脂。適合的稀釋劑包括乳糖、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、高嶺土、纖維素、碳酸鈣、硅酸4丐或磷酸二鉤。適合的增香劑包括薄荷油、冬青油、櫻桃、桔子或樹莓增香劑。適合的包衣劑包括丙烯酸和/或曱基丙烯酸和/或它們的酯的聚合物或共聚物、蠟類、脂肪族醇類、玉米醇溶蛋白、蟲膠或谷蛋白。
適合的防腐劑包括苯曱酸鈉、維生素E、 a-生育酚、抗壞血酸、對羥基苯曱酸曱酯、對羥基苯曱酸丙酯或亞硫酸氫鈉。適合的潤滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸、油酸鈉、氯化鈉或滑石。適合的時間延遲劑包括甘油單硬脂酸酯或甘油二^f更脂酸酯。
除了上述制劑外，口服給藥的液體形式還包含液體載體。適合的液體載體包括水；油類，如橄欖油、花生油(peanutoil)、芝麻油、葵花籽油、紅花油、花生油(arachisoil)、椰子油、液狀石蠟、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、乙醇、丙醇、異丙醇、甘油、脂肪族醇類、甘油三酯類或其混合物。
口服給藥的懸浮液還包括分散劑和/或懸浮劑。適合的懸浮劑包括羧曱基纖維素鈉、曱基纖維素、羥丙曱基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸鈉或乙?；?。適合的分散劑包括卯磷脂，脂肪酸(諸如硬脂酸)的聚氧乙烯酯，聚氧乙烯山梨醇單油酸酯或聚氧乙烯山梨醇二油酸酯、聚氧乙烯山梨醇單硬脂酸酯或聚氧乙烯山梨醇二硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇單月桂酸酯或聚氧乙烯山梨醇二月桂酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖單油酸酯或聚氧乙烯山梨聚糖二油酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖單硬脂酸酯或聚氧乙烯山梨聚糖二硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖單月桂酸酯或聚氧乙烯山梨聚糖二月桂酸酯等等。
口服給藥的乳劑還包括一種或多種乳化劑。適合的乳化劑包括上述示例性分散劑或諸如瓜爾膠、阿拉伯樹膠或黃蓍樹膠的天然樹膠。
制備腸胃外給藥組合物的方法對本領域技術人員而言是顯而易見的，并詳細描述在Remington's Pharmaceutical Science(雷明頓藥物科學)，
2915th ed., Mack Publishing Company, Easton， Pa.中，該文獻通過引用并入本文。
本發(fā)明外用制劑包括活性成分和一種或多種可接受的載體以及任選的任何其他治療成分。適合外用給藥的制劑包括適合通過皮膚滲透到需要治療部位的諸如搽劑、洗劑、乳劑、軟膏或糊劑的液體制劑或半液體制劑，以及適于對眼睛、耳朵或鼻子給藥的滴劑。
本發(fā)明滴劑包括無菌水或油狀溶液或懸浮液。這些滴劑的制備可通過將活性成分溶解在殺菌劑和/或殺真菌劑和/或任何其他適合的防腐劑的水溶液中，任選地包括表面活性劑。隨后通過過濾澄清所得溶液，轉(zhuǎn) 移到適合的容器中并滅菌。通過維持在90。C-100。C半小時的高壓蒸汽滅菌或通過濾過除菌法實現(xiàn)滅菌，接著通過無菌操作轉(zhuǎn)移到容器中。適合包含在滴劑中的殺菌劑和殺真菌劑的實例為硝酸苯汞或醋酸苯汞 (0.002%)、苯扎氯銨(0.01%)和醋酸氯己定(0.01%)。適合制備油狀溶液的溶劑包括甘油、稀乙醇和丙二醇。
本發(fā)明洗劑包括適合應用到皮膚或眼睛的洗劑。洗眼劑包括任選地含有殺菌劑的無菌水溶液，可通過類似于上述關于制備滴劑的方法制備。應用到皮膚的洗劑或搽劑還包括諸如乙醇或丙酮的快速干燥和冷卻皮膚的制劑，和/或諸如甘油的濕潤劑，或諸如蓖麻油或花生油(arachis oil)的油。
本發(fā)明乳劑、軟膏或糊劑為適合外用的活性成分的半固體制劑。它們的制備是通過將單獨的磨成細粉或弄成粉狀形式的活性成分或在水或非水液體溶液或懸浮液中的磨成細粉或弄成粉狀形式的活性成分與油脂
性基質(zhì)或非油脂性基質(zhì)混和。所述基質(zhì)包括諸如硬石蠟、軟石蠟、液體石蠟、甘油、蜂蠟、金屬鬼的烴類；諸如杏仁油、玉米油、花生油(arachis oil)、蓖麻油或橄欖油的天然來源的油；羊毛脂或其衍生物；或諸如硬脂酸或油酸的脂肪酸以及諸如丙二醇或聚乙二醇的醇。
所述組合物可摻入任意適合的表面活性劑，如陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑或諸如山梨坦酯或其聚氧乙烯衍生物的非離子表面活性劑。還包括諸如天然樹膠、纖維素衍生物的懸浮劑或諸如矽雜質(zhì) (silicaceous)硅酸鹽的無機物質(zhì)以及諸如羊毛脂的其他成分。也以脂質(zhì)體形式進行所述組合物的給藥。脂質(zhì)體通常衍生自磷脂類或其他脂質(zhì)物質(zhì)，并通過分散在水介質(zhì)中的單層或多層含水液晶形成。可采用能形成脂質(zhì)體的任何無毒生理學上可接受的并且可代謝的脂質(zhì)。脂質(zhì)體形式的所述組合物包含穩(wěn)定劑、防腐劑和賦形劑等。優(yōu)選的脂質(zhì) 為天然的與合成的磷脂類和磷酯酰膽堿(卵磷脂)。形成脂質(zhì)體的方法為本
領域已知，關于這方面可具體參考Prescott, Ed" Methods in Cell Biology (細胞生物學方法)，Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y, (1976)， p.33a化《.，其內(nèi)容通過引用并入本文。
所述組合物可與大量的聚乙二醇(PEG)衍生物偶聯(lián)。添加PEG到蛋白上(聚乙二醇化)為已成熟建立的方法，用于降低蛋白的血漿清除率，由此增加它們的效力(Nucci etal， 1991，爿dv. Z>wgDe/. i ev, 6:133)。聚乙二醇化的其他益處包括更強的蛋白穩(wěn)定性、降低的免疫原性、增強的可溶性和對蛋白質(zhì)水解降低的敏感性(Sheffield W. 2001， Cwr Z>wg 7brge" CaW/ovosc //aewato/ 1:1 -22)。 PEG分子包含基本重復結構
(OCH3CH2)n-OH,并根據(jù)它們的分子量分類。PEG衍生物與蛋白偶聯(lián)增加它們的水動力學半徑，通常它們半衰期的增加直接與所結合的PEG鏈大小有關(Sheffield W.2001, CWr Z>wg r"rgefe GaWomsc //a倒ato/ Dz離cQ:l-22)。
也以微粒形式進行所述組合物的給藥。由聚丙交酯(PLA)、聚丙交酯 -共-乙交酯(PLGA)和s-己內(nèi)酯(-己內(nèi)酯)形成的可生物降解的微粒廣泛用作藥物載體以增加血漿半衰期，由此延長效力(R. Kumar, M.， 2000， / 尸/zarm尸/zawwce^ 3(2) 234-258)。微粒被配制用于遞送一系列藥物候選物，包括疫苗、抗生素和DNA。另外，開發(fā)這些制劑用于不同的遞送途徑，包括胃腸外皮下注射、靜脈注射和吸入。
所述組合物可摻入由蔗糖醋酸異丁酸酯(SAIB)與有機溶劑或有機溶劑混合物組成的控制釋放的基質(zhì)?？蓪⒕酆衔锾砑觿┨砑拥阶鳛獒尫鸥?良劑的媒介物中以進一步增加粘性并降低釋放率。SAIB為公知的食品添加劑。它是疏水性很強、完全酯化的蔗糖衍生物，標稱比為異丁酸酯乙酸酯=6: 2。作為混和性酯，SAIB不結晶，且以澄清的粘性液體存在。將SAIB與諸如乙醇或苯曱醇的藥學上可接受的有機溶劑混合降低混合物的粘性足以使得可用于注射?？蓪⒒钚运幬锍煞痔砑拥絊AIB遞送媒介物以形成SAIB溶液或懸浮液制劑。當皮下注射所述制劑時，溶劑從基質(zhì) 中擴散使得SAIB-藥物或SAIB-藥物-聚合物的混合物原位形成儲庫。
出于本發(fā)明目的，分子和藥劑可作為組合物治療性或者預防性給予個體。在治療性應用中，可以以足以治療或至少部分控制疾病和其并發(fā) 癥的量將所述組合物給予已患疾病的患者。
所述組合物應提供足以有效治療所述患者的分子或藥劑量。對任何具體患者的治療有效劑量水平取決于多種因素，包括被治療的病癥和病癥的嚴重性；所采用的分子或藥劑的活性；所采用的組合物；患者的年齡、體重、一般健康、性別和飲食；給藥時間；給藥途徑；分子或藥劑的隔離率；治療的持續(xù)時間；用于聯(lián)合或同時治療的藥物以及醫(yī)學中公知的其他相關因素。
通過常規(guī)實驗，本領域技術人員能確定治療可適用疾病所需要的藥劑或化合物的有效無毒量。
一般地，期望的有效劑量范圍為約0.0001-1000 mg/kg體重/24小時；通常約0.001-750 mg/kg體重/24小時；約0.01-500 mg/kg體重/24小時；約0.1-500 mg/kg體重/24小時；約0.1-250 mg/kg體重/24小時；約1.0-250 mg/kg體重/24小時。更典型地，期望的有效劑量范圍為約1.0-200 mg/kg 體重/24小時；約1.0-100 mg/kg體重/24小時；約1.0-50 mg/kg體重/24 小時；約1.0-25 mg/kg體重/24小時；約5.0-50 mg/kg體重/24小時；約 5.0-20 mg/kg體重/24小時；約5.0-15 mg/kg體重/24小時。
可選地，有效劑量高達約500mg/m2。通常，期望的有效劑量范圍為約25-500 mg/m2,優(yōu)選地約25-350 mg/m2，更優(yōu)選約25-300 mg/m2，還更優(yōu)選約25-250 mg/m2,甚至更優(yōu)選約50-250 mg/m2，甚至還更優(yōu)選約 75-150 mg/m2。
通常，治療性應用中，在疾病狀態(tài)的持續(xù)時間中治療。
另外，根據(jù)被治療疾病狀態(tài)的性質(zhì)和程度、給藥形式、途徑和部位、以及被治療特定個體的自然狀況確定個體劑量的最佳量和時間間隔，這對本領域普通技術人員而言是顯而易見的。并且，通過常規(guī)技術可確定這種最佳條件。本領域技術人員采用常規(guī)療程確定試驗可確定最佳療程，如在確定天數(shù)內(nèi)，每天給予組合物劑量的次數(shù)，這對本領域普通技術人員而言也是顯而易見的。
CpnlO激動劑和拮抗劑
本發(fā)明也包括CpnlO的激動劑和拮抗劑的應用以及篩選和產(chǎn)生此類激動劑和拮抗劑的方法。
Cpn 10激動劑和拮抗劑可以依據(jù)其對TLR3 、 TLR4、 TLR7和/或TLR9 信號和免疫調(diào)節(jié)劑分泌的作用而特別設計和篩選。
抗體可以作為CpnlO、或其片段或類似物的激動劑或拮抗劑。優(yōu)選適合的抗體由CpnlO多肽的不連續(xù)區(qū)域或片段制備，特別是包括在賦予蛋白酶活性和/或伙伴結合或底物結合的那些。抗原ConlO多肽含有至少約5個，優(yōu)選至少約10個氨基酸。
的。例如，抗-CpnlO單克隆抗體，典型地含有Fab部分，可以用在 Antibodies-A Laboratory Manual, Harlow and Lane， eds., Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1988)中說明的雜交瘤技術來制備。
基本上，在直接對CpnlO或其片段或類似物的單克隆抗體的制備中，通過培養(yǎng)中的連續(xù)細胞系提供用于抗體分子的產(chǎn)生的任何技術可以被應用。這些包括最初由Kohler等人于1975年在Nature, 256:495-497中開發(fā) 的雜交瘤技術，以及三體雜交瘤技術、人B細胞雜交瘤技術(Kozbor等人, 1983, Immunology Today, 4:72)、和產(chǎn)生人單克隆抗體的EBV-雜交瘤技術 (Cole等人，在Mwoc/o"a/ Jw^ocZ/as朋d Ca"cer 77zera^ (單克隆抗體和癌癥治療)，pp. 77-96， Alan R.Liss， Inc., (1985)中)。永生的、產(chǎn)生抗體的細胞系能通過除融合外的其他技術產(chǎn)生，如B淋巴細胞用致癌DNA直接轉(zhuǎn) 化，或用Epstein-Barr病毒轉(zhuǎn)染。見，例如，M. Schreier等人的"Hybridoma Techniques (雜交瘤技術),，(1980) 、 Hammerling等人的"Monoclonal Antibodies and T-cell Hybridomas (單克隆抗體和T-細胞雜交瘤細胞),，(1981)、 Kennett等人的"Monoclonal Antibodies (單克隆抗體)，，(1980)。
總之，產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤的產(chǎn)生方式是，將骨髓瘤或其他自保持細胞系與淋巴細胞融合，所述淋巴細胞從哺乳動物脾中獲得，并用
其識別因子結合部分、或識別因子、或其原點-特異DNA-結合部分超免
疫。雜交瘤產(chǎn)生可用于實踐本發(fā)明的單克隆抗體，這通過其與本識別因子的免疫反應能力以及其抑制目標細胞中的特定轉(zhuǎn)錄活性的能力確定。
可用于實施本發(fā)明的單克隆抗體能通過起始單克隆雜交瘤培養(yǎng)產(chǎn) 生，所述單克隆雜交瘤培養(yǎng)包括含有雜交瘤的營養(yǎng)培養(yǎng)基，所述雜交瘤分泌適當?shù)目乖禺愋缘目贵w分子。培養(yǎng)保持足以使雜交瘤向培養(yǎng)基中分泌抗體分子的條件和時間。含抗體培養(yǎng)基而后被收集?？贵w分子而后能進一步通過公知的技術分離。
類似的，在本領域內(nèi)有各種已知操作可用于產(chǎn)生多克隆抗體。為了
產(chǎn)生抗-CpnlO多克隆抗體，各種宿主動物能通過CpnlO、或其片段或類似物的注射而被免疫，其包括但不限于兔、小雞、小鼠、大鼠、綿羊、山羊等。另外，CpnlO多肽或其片段或類似物能與免疫原載體偶聯(lián)，例如，牛血清白蛋白(BSA)或鎮(zhèn)眼帽貝血藍蛋白(KLH)。同時，各種佐劑可以被應用以增加免疫學響應，包括但不限于Freund's(完全和不完全)、礦物凝膠如氫氧化鋁、表面活性物質(zhì)如溶血卵磷脂、多聚醇、聚陰離子、肽、油乳狀物、鎮(zhèn)眼帽貝血藍蛋白、二硝基酚、和潛在可用的人佐劑如 BCG(卡介苗)禾口^豆'J 、才奉卄犬牙干菌(Coo^e^actehMm porvww)。
期望的抗體的篩選也能通過各種本領域內(nèi)已知的技術完成?？贵w的免疫特異性結合的分析可以包括，但不限于，放射性免疫測定 (radioimmunoassay), ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)、夾心免疫測定、放射免疫測定(immunoradiometric assay)、凝膠擴散沉降反應、免疫擴散測定、原位免疫測定、蛋白質(zhì)印記(Westemblot)、沉淀反應、凝集測定、補體結合測定、熒光免疫測定、A蛋白測定、和免疫電泳測定等(見，例如，Ausubel 等人，eds， 1994， Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York)?？贵w結合可以依據(jù)一級抗體上的可測定標記測定?？蛇x擇的，抗體可以依據(jù)其與二級抗體或被適當標記的試劑結合而測定。用于測定免疫分析中的結合的各種方法是本領域內(nèi)已知的，并在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
由抗CpnlO或其片^殳或類似物產(chǎn)生的抗體(或其片段)具有對CpnlO的結合親和力。優(yōu)選的，抗體(或其片段)具有大于約105 M",更優(yōu)選大
于約106 M",還更優(yōu)選大于約107 M"和最優(yōu)選大于約108 M"的結合親和力(affinity)或親和力(avidity)。
在得到適合量的本發(fā)明抗體的方面，可以用不含血清的培養(yǎng)基成批發(fā)酵制造抗體。當發(fā)酵后，抗體可以通過多步操作結合層析法和病毒滅活/去除步驟被純化。例如，抗體可以首先用A蛋白親和層析法分離，而后用溶劑/洗滌劑處理以使任何脂質(zhì)嚢膜病毒滅活。進一步純化，典型地通過陰離子和陽離子交換色譜可以被應用以除去剩余蛋白、溶劑/洗滌劑和核酸。此純化的抗體可以進一步用凝膠過濾柱純化和配制于0.9%生理鹽水中。配制的大量制備物而后可以被滅菌和過濾并去除病毒。
除了抗體之外的激動劑和拮抗劑也可以被應用。候選激動劑或拮抗劑可以通過與TLR3、 TLR4、 TLR7或TLR9、和任選的TLR3、 TLR4、 TLR7或TLR9激動劑形成分子復合物的能力而識別。另外，候選拮抗劑可以通過預防或中斷包含CpnlO，和TLR3、 TLR4、 TLR7或TLR9，和任選的TLR3 、 TLR4 、 TLR7或TLR9激動劑的分子復合物的形成的能力而識別。
用于識別和產(chǎn)生激動劑和拮抗劑的技術和操作是本領域內(nèi)的技術人員公知的，包括諸如合成化學庫(如組合庫)的分子庫的篩選，結構數(shù)據(jù)庫的計算機輔助篩選，計算機輔助模擬和/或設計，或更傳統(tǒng)的檢測分子結合相互作用的生物物理技術。
現(xiàn)在將參考下述具體實施例更詳細地描述本發(fā)明，所述具體實施例不應解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實施例
重逸入Q /t/"
對于下列實施例中說明的試驗，重組人CpnlO(GenBank Accession No. X75821)在Johnson等人2005年的(J Biol Chem 280:4037-4047)中說明的 co//(大腸桿菌)中產(chǎn)生。純度用SDS-PAGE確定為〉97。/。。 CpnlO的冷凍等分部分僅當應用前才被解凍。在GroEL介導的硫氰酸酶再折疊測定中，所有CpnlO批次顯示與大腸桿菌相同的摩爾活性(數(shù)據(jù)未顯示)。
35實施例1-通用材料和方法細胞培養(yǎng)和細胞信號分子
含有50 |aM的2-巰基乙醇(2-ME) (Gibco)和1%的非必要氨基酸 (Gibco)的補充RPMI(SPP-036)被應用于全部細胞培養(yǎng)試驗中，不同地與重組人GM-CSF (R&D Systems, #215- GM, Lot No AR115021)、重組人 IL畫4 (R&D Systems, #204 IL， Lot No AG235051)、 CD14+微珠(Micro Beads) (Miltenyi #130-050-201， Lot No 5050927008)和源自大腸桿菌的LPS (Sigma #L6529, Lot No 015K4103)—起。未成熟DC產(chǎn)生
PBMC從健康志愿者中制備(LTP-062.02)。 PBMC儲液被儲存在液氮中的細胞管中(LTP-063-03)。單核細胞通過依據(jù)制造商的說明書使用 CD14+微珠純化。5xl07 CD14+單核細胞被接種于含有2-ME和非必要氨基酸的20ml補充RPMI的75-cm2燒瓶中。為了產(chǎn)生未成熟DC， GM-CSF (10 jig/ml)加IL-4 (10嗎/ml) (GM-CSF/IL-4-DC)被添加至培養(yǎng)物中。在培養(yǎng)4天時，10ml新鮮的含有細胞因子的培養(yǎng)基被添加。在CpnlO存在或不存在下的DC成熟
未成熟DC在第五天被收獲，洗滌并以lx106細胞/孔的濃度和3ml 的補充RPMI/孔涂板于6孔板中。DC的成熟通過LPS(0.12 ng/ml)誘導20 小時。Cpn10 (10昭/ml)在添加LPS前1小時被添加。細胞表面免疫分型
成熟DC #皮收獲、洗滌并在4。C下用隨后的由BD: CD14-APC-Cy7、 HLA畫DR-APC、 CDla畫PE、 CD1 lc-PE、 CD80-PE、 CD83-PE、 CD86-PE 和CD40-PE而來的APC-Cy7-、 PE-或APC-偶聯(lián)的單克隆抗體(mAB)標記 30分鐘。所用的同型對照為IgG廣APC-Cy7、 IgGrAPC和IgG廣PE。死細胞和殘骸基于其光散射性從分析中被排除。分析在BD FACS-Array流式細胞儀上進行。 DC的細胞因子釋放的分析
DC在培養(yǎng)5天后收獲，洗滌和以lxl06/ml涂板于平底^f敖稀釋板。DC 用LPS (0.15 ng/ml)成熟20小時。為評估CpnlO在DC細胞因子產(chǎn)生的作用，CpnlO (0.1-10 pg/ml)在LPS添加前1小時凈皮添加。上清液,皮收獲并在-20。C下儲存。TNF-a在培養(yǎng)物上清液中的積聚隨后用CpnlO孵育DC 20小時，通過ELISA用R&D DuoSet試劑盒依據(jù)制造商的說明書評估。原發(fā)混合白細胞反應(MLR)測定
CDA+ T細月包通過用CD4 T細胞分離試劑盒II (Miltenyi, # 130-091-155, Lot No 5060928051)依據(jù)制造商的說明書從新鮮血液中純化。T細胞的純度通過流式細胞儀常規(guī)檢測。總共lxl()S個T細胞與lx104 個DC在CpnlO (0.1-10嗎/ml)存在或不存在下共培養(yǎng)6天。上清液被收集并通過ELISA分析IFN-y積聚。細胞增殖用CyQUANT增殖檢測試劑盒(分子探針# C35006, Lot No 45179A)依據(jù)制造商的說明書評估。
實施例2-Cpnl0在體外降低DC成熟
培養(yǎng)的源自單核細胞的DC ^皮應用以評估CpnlO調(diào)節(jié)響應于LPS的 DC成熟的能力。單核細胞轉(zhuǎn)化成DC通過CDla和CD14細胞表面表達的流式細胞儀分析驗證。CDla+ CD14- DC被進一步分析成熟標記物HLA-DR、 CD40、 CD80、 CD83和CD86的表面表達。當CpnlO在成熟期間被添加時，響應于LPS的HLA-DR的平均熒光強度(MFI)(圖l)被顯著降低 (p<0.05)。相反，在不存在激動劑時，HLA-DR的表達在用CpnlO孵育的未成熟DC上是不變的。(圖1代表3個獨立的實驗。)
另外發(fā)現(xiàn)，當源自單核細胞的DC在上清液的測試前與CpnlO —起孵育20小時時，在TNF-a組成性釋放進細胞培養(yǎng)液上有顯著和劑量依賴的降低。這些結果可以反應CpnlO降低細胞活化的能力(圖2，代表4個獨立的實馬全)。
實施例3-CpnlO調(diào)節(jié)DC對T細胞的刺激
在原發(fā)混合白細胞反應(MLR)中，CpnlO調(diào)節(jié)DC對T細胞的刺激的能力可以與CpnlO對響應于諸如前列腺素E2、 IL-1(3、 IL-6和TNF-a或可溶性三聚CD40L的配體的DC成熟的作用的分析一起被研究。如圖3 所示，培養(yǎng)的源自單核細胞的DC被用于評估CpnlO調(diào)節(jié)T細胞活化的能力，此T細胞活化響應于在測試細胞培養(yǎng)上清液的IFN-y產(chǎn)生前與異源CD4+ T細胞共培養(yǎng)6天。圖3顯示的數(shù)據(jù)(代表2個獨立的實驗)表明， IFN-y積聚被CpnlO顯著降低。圖4顯示的數(shù)據(jù)證明，在原發(fā)MLR期間， CpnlO不影響T細^^曾殖，如CyQUANT細^^增殖測定中所確定的。(圖 3的數(shù)據(jù)代表2個獨立的實驗)。
實施例4-用于治療的組合物
依據(jù)在此提供的實施本發(fā)明的最佳方式，特別優(yōu)選的組合物概述如下。下述僅作為組合物的示例性實例被解釋，不以任何方式作為本發(fā)明的范圍的限制。
實施例4(a)-用于腸胃外給藥的組合物
用于肌內(nèi)注射的組合物能被制備以含有l(wèi)ml的滅菌緩沖水，和lmg 適當?shù)幕衔铩?br> 類似的，用于靜脈輸注的組合物可以包含250ml滅菌林格氏(Ringer's) 溶液，和5mg適當?shù)幕衔铩?實施例4(b)-可注射腸胃外給藥的組合物
適合于通過注射給藥的組合物可以通過將以重量計1%的適當?shù)幕?合物混合于以體積計10%的丙二醇和水中而制備。溶液通過過濾滅菌。實施例4(c)-膠嚢組合物
適合的化合物的膠嚢形式的組合物可以通過將50 mg粉末形式的試劑或化合物、100 mg乳糖、35 mg滑石和10 mg硬脂酸4美添入標準兩件硬膠嚢中而制備。實施例4(d)-滴眼劑組合物
用于作為滴眼劑遞送的典型組合物扭克述如下
適合的化合物 0.3g
尼泊金曱酯 0.005g
尼泊金丙酯 0.06g
純化水約至100.00ml
在75。C下，尼泊金曱酯和尼泊金丙酯被溶解在70ml純水中，得到的溶液被冷卻。適合的化合物而后被添力。，溶液通過膜過濾器(0.22iim孔徑) 過濾滅菌，并無菌包裝至滅菌容器中。實施例4(e)-用于吸入給藥的組合物
對容量為20-30 ml的氣霧劑容器，將0.5-0.8%重量的諸如聚山梨酯 85或油酸的潤滑劑與10 mg適合的化合物的混合物分散在諸如氟利昂的噴射劑中，裝入適合的氣霧劑容器中用于鼻內(nèi)或口腔吸入給藥實施例4(f)-軟骨組合物
通常作為軟膏遞送的組合物包括將1.0 g適合的化合物與100.0 g白
軟石蠟一起分散產(chǎn)生光滑均一的產(chǎn)物。
權利要求
1. 通過調(diào)節(jié)至少一個MHC分子的細胞表面表達水平、來調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官的免疫反應的方法，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
2. 如權利要求1所述的方法，其中所述方法還包括通過調(diào)節(jié)至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平、來調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官的免疫反應，包括給予有效量的伴侶蛋白10。
3. 通過調(diào)節(jié)至少一個MHC分子的細胞表面表達的水平來治療或預防個體的疾病或狀態(tài)的方法，其中所述方法包括給予個體有效量的伴侶蛋白10。
4. 如權利要求3所述的方法，其中所述方法還包括通過調(diào)節(jié)至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平治療或預防個體的疾病或狀態(tài)，包括給予有效量的伴侶蛋白10。
5. 用于調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官的至少一個MHC 分子的細胞表面表達的水平的方法，其中所述方法包括給予有效量的伴倡蛋白10。
6. 如權利要求5所述的方法，其中所述方法還包括調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官的至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平，包括給予有效量的伴侶蛋白10。
7. 如權利要求2、 4或6的任一權利要求所述的方法，其中所述其他細胞表面分子是共刺激分子。
8. 如權利要求1-7的任一權利要求所述的方法，其中所述MHC分子選自MHCI類分子、MHCII類分子、或非經(jīng)典的MHC分子。
9. 如權利要求8所述的方法，其中所述MHCII類分子選自HLA-DR、 HLA-DP和HLA-DQ。
10. 如權利要求1-9的任一權利要求所述的方法，其中所述細胞表面表達是抗原呈遞細胞的細胞表面表達。
11. 如權利要求10所述的方法，其中所述抗原呈遞細胞選自巨噬細月包、一對突細力包和B細月包。
12. 如權利要求1-11的任一權利要求所述的方法，其中所述伴侶蛋白IO是源自天然的、重組產(chǎn)生的或合成產(chǎn)生的伴侶蛋白10。
13. 如權利要求1-12的任一權利要求所述的方法，其中所述伴侶蛋白IO是真核細胞起源的。
14. 如權利要求1-13的任一權利要求所述的方法，其中所述伴侶蛋白IO是哺乳動物起源的。
15. 如權利要求14所述的方法，其中所述伴侶蛋白IO是人伴侶蛋白10。
16. 如權利要求15所述的方法，其中所述伴侶蛋白10包括SEQ ID NO: 1 、 SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所列的多肽序列。
17. 如權利要求16所述的方法，其中所述伴侶蛋白IO是乙?；幕?非乙?；?。
18. 如權利要求1-17的任一權利要求所述的方法，其中所述伴侶蛋白IO以編碼伴倡蛋白10的多聚核苷酸形式被給藥。
19. 如權利要求18所述的方法，其中所述編碼伴侶蛋白IO的多聚核芬酸位于基因構建體中，可操作地與啟動子連接。
20. 如權利要求18或19的任一權利要求所述的方法，其中所述多聚核苷酸包括SEQ ID NO:4所列的序列。
21. 用于調(diào)節(jié)個體或其至少一個組織或器官的抗原呈遞細胞的功能的方法，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
22. 如權利要求21所述的方法，其中所述抗原呈遞細胞選自巨噬細月包、4對突細力包或B細月包。
23. 如權利要求21或22的任一權利要求所述的方法，其中所述功能選自向淋巴結的遷移、T細胞活化或T細胞增殖。
24. 組合物，當用于治療或預防疾病或狀態(tài)時，其中所述組合物包含伴侶蛋白IO和至少一個藥學上可接受載體、稀釋劑或佐劑，以及其中所述伴侶蛋白10調(diào)節(jié)至少一個MHC分子的細胞表面表達的水平。
25. 如權利要求24所述的組合物，其中所述伴侶蛋白IO還調(diào)節(jié)至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平。
26. 如權利要求25所述的組合物，其中所述其他細胞表面分子是共刺激分子。
27. 如權利要求24-26的任一權利要求所述的組合物，其中所述MHC 分子選自MHCI類分子、MHCII類分子、和非經(jīng)典的MHC分子。
28. 如權利要求27所述的組合物，其中所述MHC II類分子選自 HLA-DR、 HLA-DP和HLA-DQ。
29. 如權利要求24-28的任一權利要求所述的組合物，其中所述細胞表面表達是抗原呈遞細胞的細胞表面表達。
30. 如權利要求29所述的組合物，其中所述抗原呈遞細胞選自巨噬細月包、4對突細力包和B細月包。
31. 組合物，當用于治療或預防疾病或狀態(tài)時，其中所述組合物包含伴侶蛋白IO和至少一種藥學上可接受載體、稀釋劑或佐劑，以及其中伴侶蛋白IO調(diào)節(jié)個體或其至少一個組織或器官中的抗原呈遞細胞的功能。
32. 如權利要求31所述的組合物，其中所述抗原呈遞細胞選自巨噬細胞、樹突細胞或B細胞。
33. 如權利要求31或32的任一權利要求所述的組合物，其中所述功能選自向淋巴結遷移、T細胞活化或T細胞增殖。
34. 伴侶蛋白10在用于制備治療或預防疾病或狀態(tài)的藥物上的用途，其中所述伴侶蛋白IO調(diào)節(jié)至少一個MHC分子的細胞表面表達的水平。
35. 如權利要求34所述的用途，其中所述伴侶蛋白IO還調(diào)節(jié)至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平。
36. 如權利要求35所述的用途，其中所述其他細胞表面分子是共刺激分子。
37. 如權利要求34-36的任一權利要求所述的用途，其中所述MHC分子選自MHCI類分子、MHCII類分子、和非經(jīng)典的MHC分子。
38. 如權利要求37所述的用途，其中所述MHC II類分子選自 HLA-DR、 HLA-DP和HLA-DQ。
39. 如權利要求34-38的任一權利要求所述的用途，其中所述細胞表面表達是抗原呈遞細胞的細胞表面表達。
40. 如權利要求39所述的用途，其中所述抗原呈遞細胞選自巨噬細胞、樹突細胞和B細胞。
41. 伴侶蛋白10在用于制備治療或預防疾病或狀態(tài)的藥物上的用途，其中所述伴侶蛋白IO調(diào)節(jié)個體或其至少一個組織或器官抗原呈遞細胞的功能。
42. 如;f又利要求41所述的用途，其中所述抗原呈遞細胞選自巨噬細胞、樹突細胞或B細胞。
43. 如權利要求41或42所述的用途，其中所述功能選自向淋巴結遷移、T細胞活化或T細胞增殖。
44. 用于調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官中的一個或多個免疫調(diào)節(jié)劑的細胞中的產(chǎn)生、定位和/或細胞表面表達的方法，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10,和其中所述伴侶蛋白IO調(diào)節(jié)至少一個 MHC分子或至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平。
45. 如權利要求44所述的方法，其中所述其他細胞表面分子是共刺激分子。
46. 如權利要求44或45所述的方法，其中所述MHC分子選自MHCI類分子、MHCII類分子、和非經(jīng)典的MHC分子。
47. 如權利要求46所述的方法，其中所述MHC II類分子選自 HLA-DR、 HLA-DP和HLA-DQ。
48. 如權利要求44-47的任一權利要求所述的方法，其中所述細胞表面表達是抗原呈遞細胞的細胞表面表達。
49. 如權利要求48的方法，其中所述抗原呈遞細胞選自巨噬細胞、才對突細力包和B細月包。
50. 用于鑒定調(diào)節(jié)免疫反應的化合物的方法，其中所述方法包括(a) 將細胞或細胞提取物與候選化合物在CpnlO存在下接觸；和(b) 確定至少一個MHC分子在所述細胞的表面上的表達是否與所述候選化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
51. 如權利要求50所述的方法，其中所述方法還包括與所述候選化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
52. 用于篩選多個化合物以鑒定調(diào)節(jié)免疫反應的化合物的方法，其中所述方法包括(a) 將細胞或細月包^是:取物與所述多個化合物在CpnlO存在下接觸；和(b) 確定至少一個MHC分子在所述細胞的表面上的表達是否與所述多個化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
53. 如權利要求52所述的方法，其中所述方法還包括(c) 確定至少一個其他細胞表面分子在所述細胞的表面上的表達是否與所述多個化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
54. 用于誘導調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官中的至少一個 MHC分子的細胞表面表達的水平的方法，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
55. 如權利要求54所述的方法，其中所述方法還包括調(diào)節(jié)個體或其至少一個細胞、組織或器官中的至少一個其他細胞表面分子的細胞表面表達的水平，包括給予有效量的伴侶蛋白10。
56. 如權利要求51、 53或55的任一權利要求所述的方法，其中所述其他細胞表面分子是共刺激分子。
57. 如權利要求50-56的任一權利要求所述的方法，其中所述MHC 分子選自MHCI類分子、MHCII類分子、和非經(jīng)典的MHC分子。
58. 如^f又利要求57所述的方法，其中所述MHC II類分子選自 HLA-DR、 HLA-DP和HLA-DQ。
59. 如權利要求50-58的任一權利要求所述的方法，其中所述細胞表面表達是抗原呈遞細胞的細胞表面表達。
60. 如^L利要求59所述的方法，其中所述抗原呈遞細胞選自巨噬細月包、一對突細力包和B細月包。
61 .用于鑒定調(diào)節(jié)免疫反應的化合物的方法，其中所述方法包括(a) 將細胞或細胞提取物與所述候選化合物在Cpnl0存在下接觸；和(b) 確定所述細胞向淋巴結的遷移或活化和/或引起T細胞增殖的能力是否與所述候選化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
62.用于篩選多個化合物以鑒定調(diào)節(jié)免疫反應的化合物的方法，其中所述方法包括(a) 將細胞或細胞提取物與所述多個化合物在CpnlO存在下接觸；和(b) 確定所述細胞向淋巴結的遷移或活化和/或引起T細胞增殖的能力是否與所述多個化合物接觸而被調(diào)節(jié)。
63. 如權利要求61或62所述的方法，其中所述細胞是抗原呈遞細胞。
64. 如權利要求63所述的方法，其中所述抗原呈遞細胞選自巨噬細月包、4對突細力包或B細月包。
65. 用于調(diào)節(jié)個體或其至少一個組織或器官中的抗原呈遞細胞的功能的方法，其中所述方法包括給予有效量的伴侶蛋白10。
66. 如權利要求65所述的方法，其中所述抗原呈遞細胞選自巨噬細胞、樹突細胞或B細胞。
67. 如權利要求65或權利要求66所述的方法，其中所述功能選自向淋巴結的遷移、T細胞活化或T細胞增殖。
全文摘要
本發(fā)明涉及應用伴侶蛋白10調(diào)節(jié)抗原呈遞細胞的功能。更特別的，本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)諸如HLA的MHC分子的細胞表面表達。
文檔編號A61K38/16GK101443032SQ200780013496
公開日2009年5月27日申請日期2007年3月1日優(yōu)先權日2006年3月2日
發(fā)明者卡羅琳·阿曼達·多賓, 芭芭拉·簡·約翰遜, 英格·E·A·弗萊馳申請人:悉生物有限公司

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