專利名稱：：發(fā)酵物組合物、化妝品組合物和它們的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及發(fā)酵物組合物、化妝品組合物和它們的制造方法。更具體的是，本發(fā)明涉及一種安全性高，且骨膠原合成作用等優(yōu)異的發(fā)酵物組合物。而且，本發(fā)明還涉及含有該發(fā)酵物組合物的化妝品組合物。進(jìn)而，本發(fā)明還涉及上述發(fā)酵物組合物和化妝品組合物的制造方法。
背景技術(shù)：
：以前已知含有使米糠等發(fā)酵而獲得的發(fā)酵物的皮膚外用劑等化妝品等。例如，專利文獻(xiàn)1中公開了含有發(fā)酵糠類的化妝品組合物和采用這種組合物的化妝品。專利文獻(xiàn)l中記載了，該化妝品保濕性好，涂布在皮膚上時(shí)的刺激少，難以發(fā)生炎癥，4艮舒適。而且，專利文獻(xiàn)2中公開了通過枯草芽孢桿菌使米糠和大豆肽發(fā)酵，然后通過純化處理獲得的皮膚外用劑原料的制造方法。專利文獻(xiàn)2中記栽了該皮膚外用劑原料安全性高，可以提高皮膚的活性。專利文獻(xiàn)l:特開2004-262829號公報(bào)專利文獻(xiàn)2:特開平8-104647號公報(bào)
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的問題通過在皮膚外用劑等化妝品中配合專利文獻(xiàn)1和2記載的發(fā)酵物產(chǎn)生的功能多。例如，配合了該發(fā)酵物的皮膚外用劑等化妝品可以抑制皺紋、斑點(diǎn)、松弛等，凍傷、皸裂和皮膚變粗糙等。而且，在配合了該發(fā)酵物的皮膚外用劑等化妝品中，獲得了創(chuàng)傷治療和燒傷等癥狀的改善等效果。本發(fā)明的目的在于提供安全性高，且骨膠原合成作用等優(yōu)異的發(fā)酵物組合物。而且，本發(fā)明的目的在于通過含有該發(fā)酵物組合物的化妝品組合物。進(jìn)而，本發(fā)明的目的在于提供上述發(fā)酵物組合物和化妝品組合物的制造方法。用于解決問題的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明為以下內(nèi)容。U〕一種發(fā)酵物組合物，其特征在于含有通過枯草芽孢桿菌使米糠和豆類來源的肽發(fā)酵而獲得的發(fā)酵物，以及肽和維生素A類中的至少l種?！?〕上述〔1〕記載的發(fā)酵物組合物，上述肽為大豆蛋白質(zhì)經(jīng)水解獲得的肽和絲素蛋白(Silkfibroin)中的至少1種?！?〕一種化妝品組合物，其特征在于其含有上述〔1〕記栽的發(fā)酵物組合物?！?〕一種發(fā)酵物組合物的制造方法，其特征在于該方法具有將通過枯草芽孢桿菌使米糠和豆類來源的肽發(fā)酵而獲得的發(fā)酵物與肽和維生素A類中的至少l種相混合的混合步驟?！?〕一種化妝品組合物的制造方法，其特征在于該方法具有將通過枯草芽孢桿菌使米糠和豆類來源的肽發(fā)酵而獲得的發(fā)酵物與肽和維生素A類中的至少l種相混合的混合步驟，以及通過將該混合步驟中獲得的發(fā)酵物組合物制劑化獲得化妝品組合物的步驟。發(fā)明的效果本發(fā)明的發(fā)酵物組合物以天然物作為原料。因此，本發(fā)明的發(fā)酵物組合物安全性高，且具有優(yōu)異的骨膠原合成作用和細(xì)胞增殖作用等。而且，上述肽為大豆蛋白質(zhì)被水解而形成的肽和絲素蛋白(Silkfibroin)中的至少l種時(shí)，更容易獲得，而且可以形成具有充分的骨膠原合成性等的發(fā)酵物組合物。本發(fā)明的化妝品組合物由于具有上述構(gòu)成，因此起到優(yōu)異的骨膠原合成作用和細(xì)胞增殖作用。如果按照本發(fā)明的發(fā)酵物組合物和化妝品組合物的制造方法，就可以通過使用可以容易獲得的枯草芽孢桿菌，使之發(fā)酵來制造。因此，可以通過小型的制造設(shè)備安全且容易地制造具有上述優(yōu)異作用的本發(fā)明的發(fā)酵物組合物等。用于實(shí)施發(fā)明的最佳方式以下，詳細(xì)說明本發(fā)明。(l)發(fā)酵物組合物本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的特征在于含有通過枯草芽孢桿菌使米糠和豆類來源的肽發(fā)酵而獲得的發(fā)酵物，以及肽和維生素A類這兩種物質(zhì)中的至少l種。作為上述"米糠"，可以列舉，例如，米糠、脫脂米糠、米胚芽和脫脂米胚芽。可以單獨(dú)使用這些中的1種，也可以同時(shí)使用2種以上。上述米糠不限于市售的米糠等，可以使用各個(gè)種類的米糠。上述"豆類來源的肽"如果是豆類中所含的肽或豆類中所含蛋白質(zhì)來源的肽，其具體種類和結(jié)構(gòu)沒有特別的限定。上述"豆類來源的肽，，不限于市售的豆類來源的肽，可以使用各種豆類來源的肽。作為上述豆類來源的肽，可以列舉例如，大豆肽、小豆肽、豌豆肽和蠶豆肽。作為上述豆類來源的肽，優(yōu)選大豆肽。上述豆類來源的肽可以單獨(dú)使用l種，也可以同時(shí)使用2種以上。獲得上述豆類來源的肽的方法沒有特別的限定。例如，上迷豆類來源的肽可以通過用溶劑(水、熱水、醇(乙醇等)有機(jī)溶劑或水-有機(jī)溶劑混合溶劑)提取豆類(例如，大豆、小豆、豌豆和蠶豆等1種或2種以上)來獲得。在該過程中，根據(jù)需要可以進(jìn)行分級和純化等。進(jìn)而，通過用蛋白酶、酸或堿進(jìn)行水解處理，可以對獲得的豆類來源的肽或豆類蛋白質(zhì)進(jìn)一步片段化。進(jìn)而，上述豆類來源的肽也可以是通過使氨基酸之間以化學(xué)方式肽結(jié)合，或通過公知的基因步驟方法人工合成的肽。上述豆類來源的肽的形態(tài)沒有特別的限定。上述豆類來源的肽，可以在上述提取后，通過干燥等形成固體化的固體物質(zhì)(例如，粉狀物或粒狀物等)。而且，作為上述豆類來源的肽，可以使用上述提取物自身。也就是說，本發(fā)明中，可以使用含有上述豆類來源的肽的提取物(豆類提取物，尤其是大豆提取物等)作為上述豆類來源的肽。例如，本發(fā)明中，作為上述豆類來源的肽，可以使用通過用溶劑(水、熱水、醇(乙醇等)等有機(jī)溶劑或水-有機(jī)溶劑混合溶劑)提取豆類(例如，大豆、小豆、豌豆和蠶豆等中的l種或2種以上)而獲得的提取物。本發(fā)明中，可優(yōu)選使用尤其是含有大豆肽的提取物(大豆提取物)等。用于獲得含有上述豆類來源的肽的提取物的提取方法，就提取條件而言并沒有特別的限定。例如，作為提取原料的豆類，可以是未粉碎的，也可以是粉碎的。而且，只要可以維持提取物的品質(zhì)，也可以進(jìn)行除去雜質(zhì)等的前處理。而且，作為提取溶劑，除了水或熱水之外，還可以使用甲醇和乙醇等醇、醋酸乙酯等酯、正己烷等有機(jī)溶劑、和這些有機(jī)溶劑與水或熱水的混合溶劑等。作為上述提取溶劑，優(yōu)選水或熱水、醇(甲醇和乙醇等)、和水或熱水與醇的混合溶劑。上述熱水的溫度通常為40~lOOC優(yōu)選5080。C，更優(yōu)選5070"C。而且，提取時(shí)提取溶劑的pH通常為3~7，優(yōu)選4~6，更優(yōu)選4~5。之所以優(yōu)選，是因?yàn)橥ㄟ^將pH調(diào)整在上述范圍內(nèi)，可以保持提取原料中所含的各種成分的穩(wěn)定性。提取溫度沒有特別的限制，但優(yōu)選常溫或加熱提取。加熱提取時(shí)，作為加熱溫度，通常在40~100匸、優(yōu)選50~80t:、更優(yōu)選5070TC。之所以優(yōu)選是因?yàn)橥ㄟ^將加熱溫度調(diào)整至這個(gè)范圍，可以有效提取。上述米糠和上述豆類來源的肽的比例沒有特別的限定。通常，在上述豆類來源的肽為IOO質(zhì)量份時(shí)，上述米糠的比例為1~20質(zhì)量份，優(yōu)選520質(zhì)量份，更優(yōu)選8~18質(zhì)量份。上述米糠如果在上述范圍，則可以獲得具有充分的骨膠原合成作用等的發(fā)酵物。上述，，枯草芽孢桿菌"(Bacillussubtilis)是好氧性孢子形成細(xì)菌的代表種類。上述枯草芽孢桿菌的種類只要安全性得到保證，則沒有特別的限定。作為上述枯草芽孢桿菌，可以使用例如，納豆菌(Bacillusnatto)等。作為上述枯草芽孢桿菌，優(yōu)選容易獲得又便宜的納豆菌。而且，作為上述枯草芽孢桿菌，可以使用市售的一般的枯草芽孢桿菌。而且，只要可以獲得具有骨膠原合成作用等的發(fā)酵物，作為上述枯草芽孢桿菌，可以使用自然的或用亞硝基胍等化學(xué)物質(zhì)、X線和紫外線等人為變異手段生成的菌學(xué)性質(zhì)發(fā)生了變異的變異林。上述"發(fā)酵物"，可以通過枯草芽孢桿菌使上述米糠和上述豆類來源的肽發(fā)酵而獲得。上述發(fā)酵物，通?？梢酝ㄟ^在含有上述米糠和上述豆類來源的肽的培養(yǎng)基中攝取枯草芽孢桿菌，在適當(dāng)條件下發(fā)酵培養(yǎng)獲得。用于獲得上述"發(fā)酵物"的發(fā)酵培養(yǎng)條件沒有特別的限定。發(fā)酵培養(yǎng)通常通過通氣攪拌來進(jìn)行。而且，就上述培養(yǎng)基而言，只要上述枯草芽孢桿菌可以增殖，就沒有特別的限定。上述培養(yǎng)基通常是液體培養(yǎng)基，但也可以是固體培養(yǎng)基。而且，上述培養(yǎng)基的pH(尤其是發(fā)酵時(shí))通常在5.5~8.5、優(yōu)選6.0~8.0，更優(yōu)選6.5~7.5。之所以優(yōu)選，是因?yàn)槿绻損H位于上述范圍內(nèi)，就可以保持提取原料中所含的各種成分的穩(wěn)定性。進(jìn)而，就培養(yǎng)溫度而言，只要可以進(jìn)行發(fā)酵，則沒有特別的限定。該培養(yǎng)溫度通常在15~50X:，優(yōu)選2045。C，更優(yōu)選3Q45t:，更優(yōu)選3543'C。而且，還可以在培養(yǎng)基中添加糖等各種營養(yǎng)素和用于調(diào)整pH的酸和堿等。進(jìn)而，上述發(fā)酵可以是混合發(fā)酵，也可以是連續(xù)發(fā)酵。上述發(fā)酵物的形態(tài)沒有特別的限定。上迷發(fā)酵物可以是通過發(fā)酵培養(yǎng)獲得的發(fā)酵液或該發(fā)酵液經(jīng)過過濾而獲得的原液。而且，上述發(fā)酵物，可以是對上述發(fā)酵液，根據(jù)需要進(jìn)行滅菌處理或pH調(diào)整，或利用離子交換樹脂、活性炭柱或透析膜等進(jìn)行除臭、脫色等后處理的發(fā)酵液。進(jìn)而，上述發(fā)酵物可以是對該發(fā)酵液進(jìn)行了濃縮的濃縮液或骨狀物。除此之外，上述發(fā)酵物還可以是通過冷凍干燥等公知方法對該發(fā)酵液除去了溶劑的固體物和粉末化的粉末物。進(jìn)而，上述發(fā)酵物還可以作為在水或乙醇、丙二醇和l，3-丁二醇等有機(jī)溶劑或這些溶劑的混合溶劑中添加了上述發(fā)酵液或上述固體物質(zhì)和粉末物的溶液或分散液。上述"肽"是氨基酸通過肽結(jié)合而結(jié)合的多肽。而且，上述氨基酸通常為L-氨基酸，但也可以是D-氨基酸，或二者的混合物。也就是說，構(gòu)成上述肽的氨基酸可以是L-氨基酸、D-氨基酸和二者的混合物中的任一種。上述肽的種類，來源和結(jié)構(gòu)沒有特別的限定。例如，上述肽可以是植物中所含的植物來源的肽，也可以是動物中所含的動物來源的肽。而且，上述肽的結(jié)構(gòu)不僅為直鏈構(gòu)造，還可以含有二硫結(jié)合。作為上迷肽，具體而言，可以列舉例如，通過水解大豆蛋白質(zhì)(大豆中所含的所含的蛋白質(zhì):獲得的肽;等。如果使用這些肽，就可以獲得具有優(yōu)異的骨膠原合成作用和細(xì)胞增殖作用等的發(fā)酵物組合物。獲得上述肽的方法沒有特別的限定。上迷肽通?？梢酝ㄟ^用蛋白酶、酸、或堿等水解各種蛋白質(zhì)來獲得。當(dāng)然，具體的水解方法和條件并沒有特別的限定。其中，上述蛋白質(zhì)的種類沒有特別的限定。作為上述蛋白質(zhì)，可以列舉，例如大豆蛋白質(zhì)和絲中所含的絲蛋白質(zhì)。而且，作為上述肽，還可以使用通過化學(xué)地使氨基酸之間發(fā)生肽結(jié)合，或通過/^知的基因工程方法人工合成的肽。上述肽的氨基酸數(shù)和分子量沒有特別的限定。上述肽的氨基酸數(shù)的下限可以為例如2、3或4。而且，上述肽的氨基酸數(shù)的上限可以為例如，100、80、60或40。上述肽的分子量的下限可以為例如，50、100或200。而且，作為上述肽的分子量的上限，可以為例如，300000、200000、100000、50000或30000。尤其是，以細(xì)胞增殖作用作為目的時(shí)，作為上述肽，優(yōu)選使用高分子量的肽、例如，分子量為40000以上的肽。而且，上述肽的分子量可以通過7>知的各種方法測定。上述肽的分子量可以通過例如通過SDS-PAGE進(jìn)行的電泳法和通過HPLC和柱進(jìn)行的凝膠過濾層析等來測定。上述肽的氨基酸數(shù)和分子量可以通過用蛋白酶、酸、或堿等水解蛋白質(zhì)或肽來適當(dāng)調(diào)節(jié)。作為上述肽，優(yōu)選為(l)分子量在200~200000的肽、(2)氨基酸數(shù)為4~40且分子量為220~8000的肽、和(3)氨基酸數(shù)為2~3且分子量為100以下，100~250和250~500的分子量不同的肽的混合物。而且，作為這些(l)~(3)的肽，更優(yōu)選絲素蛋白。通過使之含有這些肽和上述發(fā)酵物，與只含有發(fā)酵物時(shí)相比，可以獲得具有更為優(yōu)異的骨膠原合成作用和細(xì)胞增殖作用等的發(fā)酵物組合物。而且，作為上述肽，可以是大豆蛋白質(zhì)經(jīng)水解獲得的，優(yōu)選氨基酸數(shù)在2~6,且分子量為100~1200的肽。通過使之含有采用了這種大豆蛋白質(zhì)的肽和發(fā)酵物，與只含有發(fā)酵物時(shí)相比，可以獲得具有更優(yōu)異的骨膠原合成作用和細(xì)胞增殖作用等的發(fā)酵物組合物。上述肽可以單獨(dú)使用l種，也可以使用2種以上。例如，作為上述肽，可以只使用上述各種肽中的l種，也可以使用2種以上。而且，作為上述肽，可以含有氨基酸數(shù)和/或分子量不同的2種以上的肽。進(jìn)而，作為上述肽，還可以同時(shí)使用像大豆蛋白質(zhì)經(jīng)水解而獲得的肽和絲素蛋白等絲肽等種類不同的2種以上的肽。上述"維生素A類"是具有類異戊二烯型多烯醇作為基本骨架的化合物和該化合物的衍生物。作為上述維生素A類，具體而言，可以列舉例如，維生素A1(視黃醇)、維生素A2、維生素AS和3，4-二氫視黃醇和這些物質(zhì)被氧化的醛(視黃醛等)和羧酸(視黃酸)等。而且，在上述"維生素A類"中還包括藥學(xué)上可允許的鹽和藥學(xué)上可允許的衍生物。作為上述衍生物，可以列舉例如，上述視黃醇等的羧酸酯。作為上述衍生物，更具體的，可以列舉，例如，視黃醇醋酸酯和視黃醇棕櫚酸酯等C1C30酯等。而且，本發(fā)明中，上述維生素類既可以單獨(dú)使用l種，也可以同時(shí)使用2種以上。本發(fā)明中，上述維生素A類的含有形態(tài)沒有特別的限定?？梢允贡景l(fā)明的發(fā)酵物組合物中含有上述維生素A類自身，其也可以與其它物質(zhì)一起合用而包含于上述組合物中。例如，上述維生素A類，作為使之包合于環(huán)糊精等主體化合物的包合物，可以使之包含于本發(fā)明的發(fā)酵物組合物中。而且，上述維生素A類，作為含有上述維生素A類的組合物或混合物，可以使之包含于本發(fā)明的發(fā)酵物組合物中。例如，上述維生素A類，作為含有肝油等上述維生素A類的組合物，可以使之包含于本發(fā)明的發(fā)酵物組合物中。進(jìn)而，上述維生素A類，作為溶解或分散了上述維生素A類的溶液或分散液，可以使之包含于本發(fā)明的發(fā)酵物組合物中。例如，可以使上述維生素A類溶解于動物油或植物油中，使該溶液包含于本發(fā)明的發(fā)酵物組合物中。本發(fā)明的發(fā)酵物組合物中，上述發(fā)酵物與上述肽和上述維生素A類之間比例沒有特別的限定。上述發(fā)酵物與上述肽和上述維生素A類總計(jì)為100質(zhì)量％時(shí)，上述發(fā)酵物的比例通常為0.1~99.9質(zhì)量％、優(yōu)選10~80質(zhì)量％、更優(yōu)選40~60質(zhì)量％。本發(fā)明中，由于含有上述發(fā)酵物和1種或2種以上的上述肽和上述維生素A類，因此骨膠原合成作用等提高，本發(fā)明中，由于上述發(fā)酵物與l種或2種以上選自于上述肽和上述維生素A類中的物質(zhì)的各個(gè)含量沒有顯著差異時(shí)，即上述發(fā)酵物的質(zhì)量比例為40~60質(zhì)量％時(shí)，骨膠原合成作用等進(jìn)一步提高，因而優(yōu)選。本發(fā)明的發(fā)酵物組合物可以用于各種用途。該用途沒有特別的限定。本發(fā)明的發(fā)酵物組合物可以在例如，皮膚外用劑等化妝品、化妝品材料、飲食品、飲食品用添加劑和沐浴液等中使用。本發(fā)明的發(fā)酵物組合物可以在化妝品和飲食品等中配合。在化妝品中配合時(shí)，本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的配合量沒有特別的限定。該配合量可以根據(jù)化妝品的種類等適量配合。本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的配合量，在化妝品為100質(zhì)量％時(shí)，可以為0.001~100質(zhì)量％、尤其是0.001~50質(zhì)量％。本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的含有量如果在上述范圍內(nèi)，則可以制成具有優(yōu)異的骨膠原合成作用等的化妝品?？梢耘浜媳景l(fā)明的發(fā)酵物組合物的化妝品的種類沒有特別的限定。作為該化妝品，可以列舉例如，冷凍千燥物、剝撕式面膜(pack)、片狀面膜(packsheet)、敷面剝落式面膜(peeling)、粉、化妝水、化妝用粉、固體化妝用粉、口紅、固體腮紅、粉底、乳液、化妝水、護(hù)體乳、洗面奶、洗面骨、護(hù)膚霜、染發(fā)液、洗發(fā)液、眼影和眉筆等。而且，這些化妝品中，根據(jù)其種類，根據(jù)需要，還可以添加其它成分，例如，植物提取物、維生素、維生素類物質(zhì)、礦物質(zhì)、低級醇類、多價(jià)醇類、油脂類、表面活性劑、抗氧化劑、紫外線吸收劑、增粘劑、色素、防腐劑和香料等。作為配合本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的化妝品，尤其可以列舉皮膚外用劑。本發(fā)明的發(fā)酵物組合物具有優(yōu)異的骨膠原合成作用等。因此，本發(fā)明的發(fā)酵物組合物在涂布于皮膚上使用的化妝品中特別有用。含的發(fā)酵物組合物和可以在皮膚外用劑中使用的其它配:劑來制備。作為上述其它的配合劑，可以列舉例如液體油(角鯊烯和藿藿芭油(Jojobaoil)等)、固體油(蜂蠟和鯨蠟醇等)、各種活性劑、和保濕劑(甘油和l,3—丁二醇等)。該皮膚外用劑的劑型沒有特別的限定。該皮膚外用劑可以形成例如，化妝水、乳霜和乳液等適于目的的各種劑型。在這種皮膚外用劑中，本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的配合量沒有特別的限定。本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的配合量，在皮膚外用劑為100質(zhì)量°/0時(shí)，可以為0.001~100質(zhì)量％，尤其是O.001~50質(zhì)量％。本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的含量如果在上述范圍內(nèi)，則可以形成具有優(yōu)異的骨膠原合成作用等的皮膚外用劑。含有本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的飲食品，可以通過例如，本發(fā)明的發(fā)酵物組合物與其它食品原料一起混合，或者在預(yù)先混合的食品原料混合物中配合本發(fā)明的發(fā)酵物組合物，然后用一般的方法加工來制造。含有本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的飲食品，可以通過例如，使本發(fā)明的發(fā)酵物組合物溶解于油脂、乙醇、丙二醇、甘油或它們的混合物中，將其配合于飲料或固體食品中來制造。而且，含有本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的飲食品，可以通過將本發(fā)明的發(fā)酵物組合物與阿拉伯樹膠和糊精等結(jié)合劑相混合從而制成粉末或顆粒等，再將其配合于飲料或固體食品中來制造。含有本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的飲食品可作為健康食品和功能性食品等提供。而且，配合了本發(fā)明的發(fā)酵物組合物的配合物還可以作為化妝品材料、沐浴液、和飲食品用添加劑等來使用。(2)化妝品組合物，細(xì)胞活化用皮膚外用劑組合物和化妝品原料本發(fā)明的化妝品組合物，細(xì)胞活化用皮膚外用劑組合物和化妝原料的特征在于含有本發(fā)明的發(fā)酵物組合物。本發(fā)明的化妝品組合物，細(xì)胞活化用皮膚外用劑組合物和化妝品原料中所含的上述發(fā)酵物組合物適用已經(jīng)說明的內(nèi)容。本發(fā)明的化妝品組合物，細(xì)胞活化用皮膚外用劑組合物和化妝品原料中上述發(fā)酵物組合物的比例沒有特別的限定。上迷發(fā)酵物組合物的比例，在例如，本發(fā)明的化妝品組合物，細(xì)胞活化用皮膚外用劑組合物和化妝品原料總體為100質(zhì)量％時(shí)，可以為0.001~100質(zhì)量0/0，尤其是0.G01~50質(zhì)量％。上述發(fā)酵物組合物的比例如果在上述范圍內(nèi)，則可以形成具有優(yōu)異的骨膠原合成作用等的化妝品組合物，細(xì)胞活化用皮膚外用劑組合物和化妝品原料。本發(fā)明的化妝品組合物的種類沒有特別的限定。作為上述化妝品組合物，可以列舉例如，冷凍干燥物、剝撕式面膜(pack)、片狀面膜(packsheet)、敷面剝落式面膜(peeling)、化妝用粉、固體化妝用粉、口紅、固體腮紅、粉底、乳液、化妝水、護(hù)體乳、洗面奶、洗面骨、護(hù)膚霜、染發(fā)液、洗發(fā)液、眼影和眉筆。而且，本發(fā)明的化妝品組合物中，根據(jù)其種類，根據(jù)需要還可以添加其它成分(例如，植物提取物、維生素、維生素類物質(zhì)、礦物質(zhì)、低級醇類、多價(jià)醇類、油脂類、表面活性劑、抗氧化劑、紫外線吸收劑、增粘劑、色素、防腐劑和香料)。作為本發(fā)明的化妝品組合物，更具體的可以列舉，尤其是皮膚外用劑。上述發(fā)酵物組合物具有優(yōu)異的骨膠原合成作用等。因此，本發(fā)明的發(fā)酵物組合物在涂布于皮膚上使用的化妝品中特別有用。上述皮它配合劑來制備。作為上迷其它的配合劑，可以列舉例如例如，液體油(角鯊烯和藿藿芭油(Jojobaoil)等)、固體油(蜂蠟和鯨蠟醇等)、各種活性劑、和保濕劑(甘油和l，3-丁二醇等)。該皮膚外用劑的劑型沒有特別的限定。該皮膚外用劑可以形成化妝水、乳霜和乳液等適于目的的各種劑型。在這種皮膚外用劑中，上述發(fā)酵物組合物的配合量沒有特別的限定。上述發(fā)酵物組合物的配合量，在皮膚外用劑為100質(zhì)量％時(shí)，可以為0.001~100質(zhì)量％，尤其是O.001~50質(zhì)量％。發(fā)酵物組合物的含量如果在上述范圍內(nèi)，則可以形成具有優(yōu)異的骨膠原合成作用等的皮膚外用劑。本發(fā)明的細(xì)胞活化用皮膚外用劑含有上述發(fā)酵物組合物。上述發(fā)酵物組合物具有優(yōu)異的骨膠原合成作用等。因此，上述發(fā)酵物組合物在涂布于皮膚上使用的化妝品中配合時(shí)特別有用。本發(fā)明的細(xì)胞活化用皮膚外用劑其本身可適用上述皮膚外用劑的說明。本發(fā)明的化妝品原料可以在例如，冷凍干燥物、剝撕式面膜(pack)、片狀面膜(packsheet)、敷面剝落式面膜(peeling)、粉、化妝水、化妝用粉、固體化妝用粉、口紅、固體腮紅、粉底、乳液、化妝水、護(hù)體乳、洗面奶、洗面骨、護(hù)膚霜、染發(fā)液、洗發(fā)液、眼影和眉筆中配合使用。(3)發(fā)酵物組合物等的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的發(fā)酵物組合物、化妝品組合物、細(xì)胞活化用皮膚外用劑組合物和化妝品原料的制造方法的特征在于具有將通過枯草芽孢桿菌使米糠和豆類來源的肽發(fā)酵而獲得的發(fā)酵物與肽和維生素A類這兩種物質(zhì)中的至少l種相混合的混合步驟。上述"米糠"、上述"豆類來源的肽"、上述"枯草芽孢桿荀"，上述"肽"和上述"維生素A類"，可適用本發(fā)明的發(fā)酵物組合物中說明的內(nèi)容。上述"發(fā)酵物"，通?？梢酝ㄟ^在含有米糠和豆類來源的肽的培養(yǎng)基中接種枯草芽孢桿菌使之發(fā)酵的發(fā)酵步驟獲得。上述"發(fā)酵步驟"中的上述"培養(yǎng)基，，含有米糠和豆來源的肽，可以是通過枯草芽孢桿菌增殖可以進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基。上述培養(yǎng)基的種類和組成沒有特別的限定。上述培養(yǎng)基通常是液體培養(yǎng)基，也可以是固體培養(yǎng)基。而且，上述培養(yǎng)基的pH(尤其是發(fā)酵時(shí))，通常為5.5~8.5、優(yōu)選6.0~8.0、更優(yōu)選6.5~7.5。而且，上述培養(yǎng)基中，為了將pH和營養(yǎng)條件等調(diào)整到優(yōu)選范圍，可以添加葡萄糖等糖類、蛋白酶等酶、純化水等水等。上述發(fā)酵時(shí)的培養(yǎng)溫度只要是可以進(jìn)行發(fā)酵，則沒有特別的限制。該培養(yǎng)溫度通常為15~50X:，優(yōu)選為20~45X:，更優(yōu)選30~45X:，更優(yōu)選為35~43C。發(fā)酵培養(yǎng)通常通過通氣攪拌進(jìn)行。通過上述發(fā)酵步驟獲得的上述發(fā)酵物的形態(tài)沒有特別的限制。上迷發(fā)酵物的形態(tài)適用本發(fā)明的發(fā)酵物組合物中說明的內(nèi)容。上述"混合步驟"中，上述發(fā)酵物與上述肽和維生素A類這兩種物質(zhì)中的至少1種相混合的方法沒有特別的限定。發(fā)酵物和肽，可以根據(jù)各自形態(tài)、和各自的質(zhì)量比例等，用均質(zhì)混合器(Homomixer)等混合器等適當(dāng)?shù)难b置混合。而且，混合時(shí)的溫度沒有特別的限定，優(yōu)選根據(jù)發(fā)酵物和肽各個(gè)種類等設(shè)定。發(fā)酵物和肽，可以根據(jù)需要在5~20匸的范圍內(nèi)一邊冷卻一邊混合，還可以根據(jù)需要在3585X:的范圍內(nèi)一邊加熱一邊混合。本發(fā)明的制造方法還可以再具備其它的步驟。作為這種其它的步驟，可以列舉例如，對上述發(fā)酵物進(jìn)行純化處理的步驟等。通過發(fā)酵步驟獲得的發(fā)酵物可與原先的肽混合，或者也可以對該發(fā)酵物進(jìn)行純化處理，然后再與肽混合。這種純化處理的方法沒有特別的限定。例如，通過壓榨發(fā)酵液，再過濾，可以純化上述發(fā)酵物。而且，也可以通過對發(fā)酵液進(jìn)行壓榨，再過濾，然后通過活性炭等進(jìn)行除臭、，焚色處理，和/或除去沉淀物的處理，然后，通過再次過濾，純化上述發(fā)酵物。通過對上迷發(fā)酵物組合物制劑化從而獲得化妝品組合物和細(xì)胞活化用皮膚外用劑組合物的步驟的內(nèi)容只要可以獲得化妝品組合物和細(xì)胞活化用皮膚外用劑組合物，在沒有特別的限定。通常，通過將上述發(fā)酵物組合物和構(gòu)成化妝品組合物和細(xì)胞活化用皮膚外用劑組合物的其它原料相混合，制成片劑或液劑等制劑，可以獲得化妝品組合物和細(xì)胞活化用皮膚外用劑組合物。當(dāng)然，還可以將上述發(fā)酵物組合物按原樣，或通過制成片劑或液劑等制劑，制成化妝品組合物和細(xì)胞活化用皮膚外用劑組合物。實(shí)施例下面，通過實(shí)施例具體說明本發(fā)明。[1]發(fā)酵物組合物的制造混合3kg米糠、0.4kg大豆肽、0.5kg葡萄糖、0.Olkg堿性蛋白酶和50kg純化水，制備培養(yǎng)基。然后，將培養(yǎng)基的pH調(diào)整到6.0~8.0，然后，接種納豆菌，于37匸培養(yǎng)38小時(shí)進(jìn)行發(fā)酵。然后，壓榨并過濾發(fā)酵液，然后，用活性炭脫色、除臭。然后通過再次過濾發(fā)酵液進(jìn)行純化，從而制備出發(fā)酵物。含有絲素蛋白(Silkfibroin)的發(fā)酵物組合物的評價(jià)將上述[1]中制備的發(fā)酵物，維生素C(和光純藥工業(yè)社制)和絲素蛋白(Silkfibroin)(Eaudeleman/>司制、商品名"FibroinSheet")溶解于緩沖液(PBS)中，使得各物質(zhì)的固體成分濃度達(dá)到2%(質(zhì)量/體積)。然后，用0.22jam的過濾器過濾該溶液。然后，通過稀釋并混合該溶液使得各成分達(dá)到表1和表2中記載的濃度，從而制備實(shí)驗(yàn)例2-15的試樣溶液。而且，實(shí)驗(yàn)例1使用上述緩沖液(PBS)作為試樣溶液。在2個(gè)96孔板(表中稱為"P1"和"P2"。)上，每1孔均接種5000個(gè)人皮膚成纖維細(xì)胞。然后，在添加了5%FBS的MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)3天。通過在添加了5%FBS的MEM培養(yǎng)基中添加實(shí)驗(yàn)例1~l5的試樣來制備試樣添加培養(yǎng)基。該試樣添加培養(yǎng)基中實(shí)驗(yàn)例1~15的試樣溶液的濃度為1%(質(zhì)量/體積，但除去上述PBS的質(zhì)量。)(因此，培養(yǎng)基中發(fā)酵物組合物中各成分的最終濃度為試樣溶液中的濃度的1/100。)。而且，將孔中的上述添加了5%FBS的MEM培養(yǎng)基更換成上述試樣添加培養(yǎng)基，再培養(yǎng)3天。接著，使用"骨膠原染色試劑盒"(骨膠原技術(shù)研究會制)，按照試劑盒附帶的手冊測定骨膠原合成量(lig)。板1(Pl)和板2(P2)中骨膠原合成量的平均值示于表1和表2。而且，實(shí)驗(yàn)例1的骨膠原合成量作為l,求出實(shí)驗(yàn)例2~8的骨膠原合成量的相對值。同樣，實(shí)驗(yàn)例9的骨膠原合成量作為1，求出實(shí)驗(yàn)例10~15的骨膠原合成量的相對值。其結(jié)果合計(jì)于表1和表2中。而且，在表1和表2中，"VC"是<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>根據(jù)表1和表2，清楚了在同時(shí)使用絲素蛋白和發(fā)酵物的實(shí)驗(yàn)例5~8和13~15中，與只使用發(fā)酵物的實(shí)驗(yàn)例3和11和絲素蛋白的實(shí)驗(yàn)例4和12相比，其骨膠原合成作用優(yōu)異。含有其它絲原料來源的肽的發(fā)酵物組合物的評價(jià)將上述[1]中制造的發(fā)酵物，維生素C(和光純藥工業(yè)社制)，絲素蛋白和下述絲肽(a)和(b)溶解于緩沖液(PBS)中，使得各物質(zhì)的固體成分濃度分別達(dá)到2%(質(zhì)量/體積)。然后，通過稀釋并混合該溶液使得各成分達(dá)到表3表5中記載的濃度，從而制備實(shí)驗(yàn)例17~19、24~28、和33~35的試樣溶液。并且，通過在體積上等量混合實(shí)驗(yàn)例17~19、24~28和33~35的試樣溶液，制備出實(shí)驗(yàn)例20~22、29~31和36的試樣溶液。而且，在實(shí)驗(yàn)例16、23和32中使用上述援沖液(PBS)作為試樣溶液。維生素C和絲素蛋白與上述[2]中使用的相同。而且，作為絲肽(a)和(b)，使用以下物質(zhì)。而且，絲肽(a)和(b)是任意一種液體，用緩沖液稀釋至作為固體成分濃度的終濃度為1%(質(zhì)量/體積)，再使用。絲肽(a);Cosmo食品社制、商品名"絲肽M-500"絲肽(b);Cosmo食品社制、商品名"絲肽M-500#60"通過與上述[2]相同的方法，測定實(shí)驗(yàn)例16~36的骨膠原合成量(lig)。板l(Pl)和板2(P2)中的骨膠原合成量的平均值示于表3~表5。而且，實(shí)驗(yàn)例16、23和32的各骨膠原合成量作為1，求出其它實(shí)驗(yàn)例的骨膠原合成量的相對值。其結(jié)果合計(jì)于表3~表5中。而且，在表3~表5中，"VC"是指維生素C，"SF"是指絲素蛋白，"SP"表示絲肽。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表4<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>根據(jù)表3~5的結(jié)果，在同時(shí)使用絲素蛋白和發(fā)酵物的實(shí)驗(yàn)例22、29和36中，與只使用發(fā)酵物的實(shí)驗(yàn)例18、25和34，以及只使用絲素蛋白的實(shí)驗(yàn)例19、26和35相比，與前述同樣具有更優(yōu)異的骨膠原合成作用。而且，還清楚了，在同時(shí)使用絲肽和發(fā)酵物的實(shí)驗(yàn)例30和31，與絲素蛋白的情況一樣，具有更優(yōu)異的骨膠原合成作用。而且，根據(jù)實(shí)驗(yàn)例17，24和33，清楚了維生素C具有骨膠原合成作用。但是，在同時(shí)使用發(fā)酵物和維生素C的實(shí)驗(yàn)例20以及同時(shí)使用維生素C和絲素蛋白的實(shí)驗(yàn)例21中，沒有發(fā)現(xiàn)由于同時(shí)使用而產(chǎn)生的協(xié)同效果，或者這種效果極小。因此，清楚了同時(shí)使用發(fā)酵物和肽所產(chǎn)生的協(xié)同效果大。含有大豆肽的發(fā)酵物組合物的評價(jià)將上述[l]中制備的發(fā)酵物，維生素C(和光純藥工業(yè)社制)，絲素蛋白和下述大豆肽(a)~(c)溶解于緩沖液(PBS)中，使得各物質(zhì)的固體成分濃度均達(dá)到2%(質(zhì)量/體積)。然后，用0.22jLim的過濾器過濾該溶液。然后，通過稀釋并混合該溶液使得各成分達(dá)到表6和表7中記栽的濃度，從而制備實(shí)驗(yàn)例38~43和49~54的試樣溶液。而且，通過按體積等量混合實(shí)驗(yàn)例38~43和49~54的試樣溶液，制備實(shí)驗(yàn)例44~47和55~56的試樣溶液。而且，在實(shí)驗(yàn)例37和48中，使用上述緩沖液(PBS)作為試樣溶液。維生素C和絲素蛋白與上述[2]中4吏用的相同。而且，作為大豆肽(a)(c),使用以下物質(zhì)。而且，大豆肽(a)、(b)和(c)是任意一種液體，用緩沖液稀釋至作為固體成分濃度的終濃度為1%(質(zhì)量/體積)，再4吏用。大豆肽(a);不二制油社制、商品名V、>f--—hSMP"大豆肽(b);不二制油社制、商品名""吖-工一卜R"大豆肽(c);不二制油社制、商品名""4-工一卜DC5"通過與上述[2]相同的方法，測定實(shí)驗(yàn)例37~47的骨膠原合成量(Hg)。板l(Pl)和板2(P2)中的骨膠原合成量的平均值示于表6。而且，實(shí)驗(yàn)例37的骨膠原合成量作為1,求出其它實(shí)驗(yàn)例的骨膠原合成量的相對值。其結(jié)果合計(jì)于表6中。而且，在表6中，"VC"是指維生素C，"SF"是指絲素蛋白，"SBP(a)~(c)"是指大豆肽(a)~(c)。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>在2個(gè)96孔板上，每1孔均散布2000個(gè)人皮膚成纖維細(xì)胞。然后，在添加了5%FBS的MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)3天。然后，更換成無血清MEM培養(yǎng)基，再培養(yǎng)1天。通過在添加了5%FBS的MEM培養(yǎng)基中添加實(shí)驗(yàn)例48~56的試樣來制備試樣添加培養(yǎng)基。該試樣添加培養(yǎng)基中上述實(shí)驗(yàn)例48~56的試樣溶液的濃度為1%(質(zhì)量/體積，但除去上述PBS的質(zhì)量。)(因此，培養(yǎng)基中發(fā)酵物組合物中各成分的最終濃度為在試樣溶液中的濃度的1/100。)。而且，將孔中的上述無血清MEM培養(yǎng)基更換成上述試樣添加培養(yǎng)基，再培養(yǎng)4天。然后，基于同仁堂"細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8"，以WST-8四唑鹽作為發(fā)色底物，在450nm的波長下測定通過活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶還原而生成的水溶性甲臜(Formazan)，測定吸光度(活細(xì)胞數(shù)與當(dāng)該吸光度的值成比例。)。而且，以實(shí)驗(yàn)例48的活細(xì)胞數(shù)作為1，計(jì)算其它實(shí)驗(yàn)例的活細(xì)胞量的相對值，評價(jià)細(xì)胞增殖作用。結(jié)果合計(jì)于表7中。而且，表7中，"VC"是指維生素C,"SF"是指絲素蛋白(Silkfibroin),"SBP(a)~(c)"是指大豆肽(a)~(c)。而且，表7中細(xì)胞增殖率這一項(xiàng)的平均值為上述吸光度值的平均值。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>根據(jù)表6，清楚了，在同時(shí)使用絲素蛋白和發(fā)酵物的實(shí)驗(yàn)例44,與只使用發(fā)酵物的實(shí)驗(yàn)例39和絲素蛋白的實(shí)驗(yàn)例40相比，具有更為優(yōu)異的骨膠原合成作用。而且，在同時(shí)使用發(fā)酵物和大豆肽的實(shí)驗(yàn)例45~47，與絲素蛋白的情況一樣，具有更為優(yōu)異的骨膠原合成作用。根據(jù)表7，清楚了同時(shí)使用發(fā)酵物和大豆肽(c)的實(shí)驗(yàn)例56，與只使用發(fā)酵物的實(shí)驗(yàn)例50相比，其細(xì)胞增殖作用進(jìn)一步提高。而且，在同時(shí)使用發(fā)酵物和絲素蛋白的實(shí)驗(yàn)例55,細(xì)胞增殖作用也同樣提高。[5]含有維生素A類的發(fā)酵物組合物的評價(jià)將上述[1]中制備的發(fā)酵物，維生素C(和光純藥工業(yè)社制)和環(huán)糊精包合視黃醇(商品名"CAVAMAXW8/RetinolComplex，，&夕口少厶社制)溶解于緩沖液(PBS)中，使得各物質(zhì)的固體成分濃度分別達(dá)到2%(質(zhì)量/體積)。然后，用0.22jum的過濾器過濾該溶液。然后，通過稀釋該溶液使得各成分達(dá)到表8中記載的濃度，制備出實(shí)驗(yàn)例58~66的試樣溶液。而且，實(shí)驗(yàn)例57中，使用上迷緩沖液(PBS)作為試樣溶液。用與上述[2]和[4]記載的方法相同的方法，測定實(shí)驗(yàn)例57~66的骨膠原合成量Ug)和細(xì)胞增殖率。其平均值示于表8。而且，以實(shí)驗(yàn)例57的骨膠原合成量和活細(xì)胞量作為1，求出其它實(shí)驗(yàn)例的骨膠原合成量和活細(xì)胞量的相對值。該結(jié)果合計(jì)于表8。而且，在表8中，"VC"是指維生素C,"CDR"是指環(huán)糊精包合視黃醇。而且，表8中細(xì)胞增殖率這一項(xiàng)的平均值為吸光度值的平均值。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>根據(jù)表8，清楚了同時(shí)使用視黃醇和發(fā)酵物的實(shí)驗(yàn)例64~66，與只使用發(fā)酵物的實(shí)驗(yàn)例59和只使用視黃醇的實(shí)驗(yàn)例60~63相比，具有更為優(yōu)異的骨膠原合成作用和細(xì)胞增殖作用。含有肽和維生素A類的發(fā)酵物組合物的評價(jià)將上述[l]中所制備的發(fā)酵物，上述絲素蛋白，上述大豆肽(A)和上述環(huán)糊精包合視黃醇溶解于緩沖液(PBS)中，使得各物質(zhì)的固體成分濃度均達(dá)到2%(質(zhì)量/體積)。然后，用0.22pm的過濾器過濾該溶液。然后，通過稀釋并混合該溶液使得各成分達(dá)到表9和表10中記載的濃度，從而制備實(shí)驗(yàn)例68、69、71和72的試樣溶液。而且，在實(shí)驗(yàn)例67和70中，使用上述緩沖液(PBS)作為試樣溶液。通過與上述[2]和[4]相同的方法，測定實(shí)驗(yàn)例67~72的骨膠原合成量()ig)和細(xì)胞增殖率。其平均值示于表9和表10。而且，以實(shí)驗(yàn)例67和70的骨膠原合成量和活細(xì)胞量作為1,求出其它實(shí)驗(yàn)例的骨膠原合成量和活細(xì)胞量的相對值。其結(jié)果合計(jì)于表9和表10中。而且，表9和表10中，"SF，，是指絲素蛋白、"SBP"是指大豆肽，"CDR，，是指環(huán)糊精包合視黃醇。而且，在表9和表10中細(xì)胞增殖率這一項(xiàng)的平均值為吸光度值的平均值。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>根據(jù)表10，清楚了同時(shí)使用視黃醇和肽的發(fā)酵物的實(shí)驗(yàn)例69和72具有優(yōu)異的骨膠原合成作用和細(xì)胞增殖作用。而且，本發(fā)明不限于上述具體的實(shí)施例。本發(fā)明根據(jù)目的，用途，可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)進(jìn)行各種變化。工業(yè)上利用的可能性本發(fā)明的發(fā)酵物組合物安全性好，具有骨膠原合成作用等。本發(fā)明的發(fā)酵物組合物可以在皮膚外用劑等各種化妝品和健康食品以及功能性食品等各種飲食品等中配合使用。也就是說，本發(fā)明可以在化妝品和飲食品等領(lǐng)域中使用。權(quán)利要求1、一種發(fā)酵物組合物，其特征在于含有通過枯草芽孢桿菌使米糠和豆類來源的肽發(fā)酵而獲得的發(fā)酵物，以及肽和維生素A類中的至少1種。2、權(quán)利要求1中所述的發(fā)酵物組合物，上述肽為大豆蛋白質(zhì)經(jīng)水解獲得的肽和絲素蛋白中的至少l種。3、一種化妝品組合物，其特征在于其含有權(quán)利要求1所述的發(fā)酵物組合物。4、一種發(fā)酵物組合物的制造方法，其特征在于該方法具有將通過枯草芽孢桿菌使米糠和豆類來源的肽發(fā)酵而獲得的發(fā)酵物與肽和維生素A類中的至少l種相混合的混合步驟。5、一種化妝品組合物的制造方法，其特征在于該方法具有將通過枯草芽孢桿菌使米糠和豆類來源的肽發(fā)酵而獲得的發(fā)酵物與肽和維生素A類中的至少l種相混合的混合步驟，以及通過將該混合步驟中獲得的發(fā)酵物組合物制劑化獲得化妝品組合物的步驟。全文摘要本發(fā)明的發(fā)酵物組合物和化妝品組合物含有通過枯草芽孢桿菌使米糠和豆類來源的肽發(fā)酵而獲得的發(fā)酵物，以及肽和維生素A類中的至少1種。而且，本發(fā)明的制造方法具有將通過枯草芽孢桿菌使米糠和豆類來源的肽發(fā)酵而獲得的發(fā)酵物與肽和維生素A類這兩種物質(zhì)中的至少1種混合的混合步驟。文檔編號A61K8/99GK101431980SQ200780015790公開日2009年5月13日申請日期2007年5月2日優(yōu)先權(quán)日2006年5月2日發(fā)明者岡田利孝,藤澤賢司,高橋?qū)捵由暾埲?株式會社東洋發(fā)酵