專利名稱：Iap bir域結(jié)合化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可與IAP BIR域結(jié)合的橋連的化合物，其可用于治療增殖性疾病和凋亡失調(diào)的疾病如癌癥。

背景技術(shù)：
凋亡(或者程序性細胞死亡)通常發(fā)生于多細胞器官中健康組織的正常發(fā)育和維持。其為復雜的過程，導致除去損壞的、患病的或者發(fā)育上多余的細胞，而不會出現(xiàn)炎癥或者壞死的跡象。
已知特別是在癌癥和淋巴增殖綜合癥(lymphoproliferative syndromes)以及自身免疫性疾病如多發(fā)性硬化中、在神經(jīng)退化性疾病和在炎癥中的內(nèi)源性凋亡途徑是失調(diào)的。同樣，已經(jīng)有關(guān)于病毒和細菌感染的發(fā)展或者維持中主體凋亡反應(yīng)的變化的記載。
胱天蛋白酶為來自半胱氨酸蛋白酶的蛋白水解酶家族，已知其引發(fā)并執(zhí)行凋亡。在正常細胞中，胱天蛋白酶作為無活性酶原存在，其被例如那些由配體驅(qū)動的死亡受體活化導致的外部信號如細胞因子或免疫活性劑(immunological agent)活化，或被線粒體因子如在基因毒性、化學毒性或放射誘導的細胞損傷后的細胞色素C的釋放活化。凋亡蛋白抑制劑(Inhibitors of Apoptosis Proteins，IAPs)構(gòu)成能夠結(jié)合至并抑制胱天蛋白酶活性從而抑制細胞凋亡的蛋白家族。由于它們在調(diào)節(jié)胱天蛋白酶活性中的核心作用，IAP能夠抑制源自各種誘因包括喪失內(nèi)穩(wěn)態(tài)(homeostatic)或者內(nèi)源性細胞生長控制機制以及化療藥物和照射的程序性細胞死亡。
IAP包括一個至三個被稱為桿狀病毒重復(baculovirus IAP repeat，BIR)域的同源結(jié)構(gòu)域。它們也可在C-端包含具有通過其E3連接酶功能誘導IAP-結(jié)合分子遍在蛋白化(ubiquitinylation)能力的RING鋅指域。人類IAPs——XIAP、HIAP1(也稱作cIAP2)以及HIAP2(cIAP1)分別具有三個BIR域，以及羧基端RING鋅指。另一種IAP——NAIP具有三個BIR域(BIR1、BIR2和BIR3)，但無RING域，而Livin、TsIAP和MLIAP具有一個BIR域和RING域。X染色體-連接的凋亡抑制劑(Xchromosome-linked inhibitor of apoptosis，XIAP)為可以通過直接結(jié)合抑制稱作胱天蛋白酶-9的起始物胱天蛋白酶以及效應(yīng)物胱天蛋白酶胱天蛋白酶-3和胱天蛋白酶-7的IAP的實例。其通過RING鋅指域的E3連接酶活性還可誘導胱天蛋白酶通過遍在蛋白化-介導的蛋白酶體途徑的除去。XIAP是通過BIR3域與胱天蛋白酶-9結(jié)合并抑制胱天蛋白酶-9的。XIAP的接頭-BIR2域抑制胱天蛋白酶-3和胱天蛋白酶-7的活性。BIR域還與IAP與腫瘤壞死因子-受體相關(guān)因子(tumor necrosis factor-receptor associated factor，TRAF)-1和-2的相互作用有關(guān)，并且對于TAB1作為通過NFkB活化實現(xiàn)生存信號傳導的適配子蛋白。IAP通過阻止胱天蛋白酶的作用或者抑制活性胱天蛋白酶以及通過將細胞信號傳導重定向至促生存模式(pro-survival mode)從而起凋亡級聯(lián)的直接制動器的作用。
癌癥領(lǐng)域的進展使得癌癥生物學中出現(xiàn)了新的范例，其中瘤形成被看做癌癥細胞不能執(zhí)行正常的凋亡途徑。正常的細胞通過各種細胞內(nèi)和細胞外因子從其環(huán)境接受連續(xù)的反饋，并且如果從該背景移除則會“自殺”。該凋亡通過胱天蛋白酶級聯(lián)的活化誘導。然而，癌細胞獲得了克服或者繞開該凋亡調(diào)整的能力并繼續(xù)不當?shù)卦鲋?。癌癥的大多數(shù)治療在癌癥靶細胞中誘導至少部分的凋亡應(yīng)答，使得癌癥好轉(zhuǎn)或者腫瘤開始消退。然而在許多情況下，殘余的抗凋亡的細胞能夠逃脫治療并繼續(xù)致癌/遺傳改變的進程，導致出現(xiàn)我們無法有效治療的高度耐藥性、轉(zhuǎn)移性疾病。此外，多數(shù)癌癥療法包括放療和常規(guī)化療在癌細胞中誘導凋亡，但由于其缺乏僅在癌細胞中誘導凋亡的特異性從而導致額外的細胞損傷。由于具有降低與給藥這些藥物相關(guān)的副作用的益處，因此非常需要改善用于治療癌癥以及甚至其他增殖性疾病的促凋亡劑(pro-apoptosis agents)的特異性/功效。因此，非常需要找到新的誘導癌細胞凋亡的醫(yī)療方法，并且該問題的解決會提供可能的治療癌癥的全新方法。
越來越多的數(shù)據(jù)表明，癌細胞可能通過持續(xù)地過表達IAP蛋白家族的一個或多個成員而避免凋亡，如在許多原發(fā)腫瘤活組織檢查樣品以及許多經(jīng)確認的癌細胞系中所證實。流行病學研究證明，各種IAP的過表達與臨床預后和存活不佳有關(guān)。對于XIAP，其存在于白血病和卵巢癌等各種癌癥中。HIAP1和HIAP2過表達源于11q21-q23區(qū)域的頻繁染色體擴增(其涵蓋兩者)，已經(jīng)在各種惡性腫瘤包括髓母細胞瘤、腎細胞癌、成膠質(zhì)細胞瘤以及胃癌中觀察到上述過表達。(X)IAP負調(diào)節(jié)分子如XAF似乎是腫瘤抑制劑，其通常在臨床癌癥中消失。因此，通過其抑制凋亡內(nèi)在介體胱天蛋白酶的活化和執(zhí)行，IAPs可直接地促進腫瘤進展和對藥物介入的抗性。本發(fā)明的主題是通過使用能夠與特定的IAP域結(jié)合的有效的小分子在癌細胞中誘導凋亡。
已經(jīng)證明了單獨的BIR域?qū)τ谟绊慖AP的抗凋亡功能極為重要。我們提出，可與單獨的BIR域結(jié)合的IAP拮抗劑將干擾IAP的抗凋亡功能。事實上，單獨的BIR分別充當胱天蛋白酶3、7和9的N-端Ser-Gly-Val-Asp、Ser-Gly-Pro-Ile和Ala-Thre-Pro-Ile殘基的關(guān)鍵結(jié)合位點，并且這些結(jié)合對于IAP的胱天蛋白酶抑制功能是絕對必要的。N-端AxPy四肽殘基與XIAP的結(jié)合導致活性胱天蛋白酶3、7和9的釋放。在其他IAP如c-IAP1和c-IAP2的情況下，當與配體結(jié)合時BIR的功能似乎將IAP的遍在蛋白連接酶RING功能的活化指向結(jié)合的標靶、或單獨的IAP本身，而導致蛋白體缺失(proteosomal loss)。在任一種情況下，IAP的小分子拮抗劑均應(yīng)當為具有可用于癌癥、各種增殖性疾病和炎癥的前景的優(yōu)異的促凋亡劑。
哺乳動物線粒體蛋白，即拮抗IAP功能的胱天蛋白酶的第二線粒體衍生的活化物(Second Mitochondria-derived Activator of Caspases，SMAC)主要通過AxPy氨基末端四肽與各IAP上的BIR3或2位點結(jié)合。四種能夠拮抗果蠅IAP抑制胱天蛋白酶的能力的死亡誘導蛋白Reaper、HID、Grim和Sickle還能夠通過短AxPy氨基末端四肽與類似的果蠅IAP的BIR域結(jié)合，所述四肽為適合BIR結(jié)合袋并且干擾IAP-胱天蛋白酶相互作用的序列。
單獨的BIR域的整體拓撲結(jié)構(gòu)在人IAP之間以及在人IAP的單獨的BIR域之間是高度保守的，各BIR均為鋅手指多肽域，并被鎖入與兩個半胱氨酸和一個組氨酸殘基配位的鋅原子。XIAP BIR2和BIR3的X-射線結(jié)晶結(jié)構(gòu)揭示了各BIR域表面的AXPY基序的關(guān)鍵的結(jié)合袋。在形成BIR2和BIR3中的結(jié)合袋和溝的居間氨基酸序列中存在變化。同樣，我們已經(jīng)描述了其他IAP cIAP1以及cIAP2的BIR中的同源性域。這使得有可能獲得各種天然以及合成的結(jié)合化合物，對于各IAP而言，這些化合物在各BIR域之間將具有不同的特異性和結(jié)合親和力。分辨出這些化合物將以何種方式影響癌細胞以及正常細胞中IAP的生物學功能是發(fā)現(xiàn)用于治療癌癥和其中存在IAP功能失調(diào)的其他增殖性疾病的新機制藥物的主要的新挑戰(zhàn)。我們發(fā)現(xiàn)，某些BIR結(jié)合化合物可以出人意料的選擇性和效力與IAP BIR結(jié)合，從而對某些結(jié)構(gòu)種類具有明確的治療價值，該治療價值可能源于IAP喪失功能或者細胞IAP蛋白的喪失，或者兩者的結(jié)合。
已經(jīng)記載許多肽類AxPy樣化合物和雜環(huán)修飾的AxPy肽類化合物，據(jù)報道這些化合物通過與XIAP BIR3結(jié)合而活化細胞胱天蛋白酶3。最近的一些綜述可參見Elmore等，Annual Reports in Medicinal Chemistry，40(2006)245-262；Sun等，Bioo rg.Med.Chem.Let.15(2005)793-797；Oost等，J.Med.Chem.，2004，47(18)，4417-4426；Park等，Bioorg.Med.Chem.Lett.15(2005)771-775；Franklin等，Biochemistry，Vol.42，No.27，2003，8223-8231；Kip等，Biochemistry 2002，41，7344-7349；Wu等，Chemistry and Biology，Vol.10，759-767(2003)；Glover等，Analytical Biochemistry，320(2003)157-169；美國第20020177557號專利申請公開；以及美國第20040180828號專利申請公開；美國第US2006/0025347A1號專利申請公開；美國第US2005/0197403A1號專利申請公開；以及美國第US2006/0194741A1號專利申請公開。
已經(jīng)通過置換熒光標記的探針證實前述化合物靶向于XIAP的孤立的BIR3域，并且它們似乎能在所選的一組癌細胞系中誘導凋亡事件，并且在低至微摩爾至納摩爾的范圍內(nèi)具有效力。這些化合物顯示出可能源于有限的生物利用度的低體內(nèi)活性，并可能從而具有有限的治療應(yīng)用。
因此，IAP BIR域代表了發(fā)現(xiàn)和開發(fā)特別是用于治療增殖性疾病如癌癥的新治療藥物的引人注目的標靶。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人先前曾公開一系列與IAP的BIR單元結(jié)合并在各種癌細胞系中誘導凋亡的化合物(第20060264379號美國專利申請公開)。這些化合物的特征在于存在中心吡咯烷單元。我們現(xiàn)在于此公開，兩個BIR構(gòu)建單元通過取代的吡咯烷連接，其對于所述連接的位點、定向和化學性質(zhì)具有偏好，提供了一類新穎且明顯有利的化合物，這些化合物針對各種癌細胞系的源自誘導凋亡的功效相對于與它們對應(yīng)的未橋連的BIR結(jié)合化合物最多提高1000倍，并且這些化合物顯示用于治療人類癌癥所必需的功效、穩(wěn)定性和制藥學性質(zhì)。有利地，所述橋連基團的化學性質(zhì)可經(jīng)選擇以導致所述高度內(nèi)在(亞納摩爾)的細胞效力翻譯為在若干人類癌癥體內(nèi)異種移植物模型中抑制和/或壓制IAP的微克/kg效力。此外，所述化合物在一系列哺乳動物組織及體液具有藥物學可接受的穩(wěn)定性并且具有能夠確保在使用各種適于臨床應(yīng)用的給藥途徑時具有足夠的溶解度和生物利用度的藥物學性質(zhì)。這種給藥在哺乳動物中產(chǎn)生在正常組織和腫瘤組織中檢測到的持續(xù)的體內(nèi)作用。
在本發(fā)明的一個實施方案中，提供了通式I或II所代表的化合物的異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或互變異構(gòu)體，或者前藥，或者用可檢測的標記或者親和標簽標記的式I或II的化合物

其中 m為0、1或2； Y為NH、O或S； BG為 1)-X-L-X1-； X and X1獨立地選自 1)O， 2)NR13， 3)S， 4)-C1-C6烷基-， 5)-C1-C6烷基-O-， 6)-C1-C6烷基-NR13-， 7)-C1-C6烷基-S-，


或
L選自 1)-C1-C20烷基-， 2)-C2-C6烯基-， 3)-C2-C4炔基-， 4)-C3-C7環(huán)烷基-， 5)-芳基-， 6)-聯(lián)苯基-， 7)-雜芳基-， 8)-雜環(huán)基-， 9)-C1-C6烷基-(C2-C6烯基)-C1-C6烷基-， 10)-C1-C6烷基-(C2-C4炔基)-C1-C6烷基- 11)-C1-C6烷基-(C3-C7環(huán)烷基)-C1-C6烷基-， 12)-C1-C6烷基-芳基-C1-C6烷基-， 13)-C1-C6烷基-聯(lián)苯基-C1-C6烷基-， 14)-C1-C6烷基-雜芳基-C1-C6烷基-， 15)-C1-C6烷基-雜環(huán)基-C1-C6烷基-， 16)-C1-C6烷基-Y-C1-C6烷基-， 17)-芳基-Y-芳基-， 18)-雜芳基-Y-雜芳基-， 19)-雜環(huán)基-Y-雜環(huán)基-，

或
其中所述烷基、烯基、炔基以及環(huán)烷基任選地被一個或多個R6取代基取代，以及所述芳基、聯(lián)苯基、雜芳基以及雜環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； Q以及Q1獨立地選自 1)NR4R5， 2)OR11，或 3)S(O)mR11；或 Q以及Q1獨立地選自 1)芳基，或 2)雜芳基，所述芳基以及所述雜芳基任選地被一個或多個R10取代基取代； A以及A1獨立地選自 1)-CH2-， 2)-CH2CH2-， 3)-CH(C1-C6烷基)-， 4)-CH(C3-C7環(huán)烷基)-， 5)-C3-C7環(huán)烷基-， 6)-CH(C1-C6烷基-C3-C7環(huán)烷基)-， 7)-C(O)-，或 8)-C(O)OR13； R1以及R100獨立地選自 1)H，或 2)C1-C6烷基任選地被一個或多個R6取代基取代； R2以及R200獨立地選自 1)H，或 2)C1-C6烷基任選地被一個或多個R6取代基取代； R3以及R300獨立地為任選地被一個或多個R6取代基取代的C1-C6烷基； R4以及R5分別獨立地選自 1)H， 2)鹵代烷基， 3)←C1-C6烷基， 4)←C2-C6烯基， 5)←C2-C4炔基， 6)←C3-C7環(huán)烷基， 7)←C3-C7環(huán)烯基， 8)←芳基， 9)←雜芳基， 10)←雜環(huán)基， 11)←雜雙環(huán)基， 12)←C(O)-R11， 13)←C(O)O-R11， 14)←C(＝Y(jié))NR8R9，或 15)←S(O)2-R11， 其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基以及雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； R6為 1)鹵素， 2)NO2， 3)CN， 4)鹵代烷基， 5)C1-C6烷基， 6)C2-C6烯基， 7)C2-C4炔基， 8)C3-C7環(huán)烷基， 9)C3-C7環(huán)烯基， 10)芳基， 11)雜芳基， 12)雜環(huán)基， 13)雜雙環(huán)基， 14)OR7， 15)S(O)mR7， 16)NR8R9， 17)NR8S(O)2R11， 18)COR7， 19)C(O)OR7， 20)CONR8R9， 21)S(O)2NR8R9 22)OC(O)R7， 23)OC(O)Y-R11， 24)SC(O)R7，或 25)NC(Y)NR8R9， 其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基以及雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； R7為 1)H， 2)鹵代烷基， 3)C1-C6烷基， 4)C2-C6烯基， 5)C2-C4炔基， 6)C3-C7環(huán)烷基， 7)C3-C7環(huán)烯基， 8)芳基， 9)雜芳基， 10)雜環(huán)基， 11)雜雙環(huán)基， 12)R8R9NC(＝Y(jié))，或 13)C1-C6烷基-C2-C4烯基，或 14)C1-C6烷基-C2-C4炔基， 其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、以及雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； R8以及R9分別獨立地為 1)H， 2)鹵代烷基， 3)C1-C6烷基， 4)C2-C6烯基， 5)C2-C4炔基， 6)C3-C7環(huán)烷基， 7)C3-C7環(huán)烯基， 8)芳基， 9)雜芳基， 10)雜環(huán)基， 11)雜雙環(huán)基， 12)C(O)R11， 13)C(O)Y-R11，或 14)S(O)2-R11， 其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、以及雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； 或者R8和R9與它們所連接的氮原子一同形成任選地被一個或多個R6取代基取代的五元、六元或七元雜環(huán)； R10為 1)鹵素， 2)NO2， 3)CN， 4)B(OR13)(OR14)， 5)C1-C6烷基， 6)C2-C6烯基， 7)C2-C4炔基， 8)C3-C7環(huán)烷基， 9)C3-C7環(huán)烯基， 10)鹵代烷基， 11)OR7， 12)NR8R9， 13)SR7， 14)COR7， 15)C(O)OR7， 16)S(O)mR7， 17)CONR8R9， 18)S(O)2NR8R9， 19)芳基， 20)雜芳基， 21)雜環(huán)基，或 22)雜雙環(huán)基， 其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、以及環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代； R11為 1)鹵代烷基， 2)C1-C6烷基， 3)C2-C6烯基， 4)C2-C4炔基， 5)C3-C7環(huán)烷基， 6)C3-C7環(huán)烯基， 7)芳基， 8)雜芳基， 9)雜環(huán)基，或 10)雜雙環(huán)基， 其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、以及雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； R12為 1)鹵代烷基， 2)C1-C6烷基， 3)C2-C6烯基， 4)C2-C4炔基， 5)C3-C7環(huán)烷基， 6)C3-C7環(huán)烯基， 7)芳基， 8)雜芳基， 9)雜環(huán)基， 10)雜雙環(huán)基， 11)C(O)-R11， 12)C(O)O-R11， 13)C(O)NR8R9， 14)S(O)m-R11，或 15)C(＝Y(jié))NR8R9， 其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、以及雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； R13以及R14分別獨立地為 1)H，或 2)C1-C6烷基；或 R13以及R14結(jié)合形成雜環(huán)或雜雙環(huán)； R20為 1)H， 2)NH2，或 3)NHFmoc。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式1-iv代表的中間體化合物
其中PG3、R1、R2、R3、R4、以及R5如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式2-iv代表的中間體化合物
其中PG4、R1、R2、R3、R4、以及R5如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式3-ii代表的中間體化合物
其中PG4、R1、R2、R3、A、以及Q如此處所定義，并且L為-(CH2)r-、-(CH2)r-Y-(CH2)r-、-烷基-芳基-烷基-、-烷基-雜芳基-烷基-、環(huán)烷基、芳基或雜芳基。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式4(i)代表的中間體化合物
其中PG4、PG400、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q以及Q1如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式6-ii代表的中間體化合物
其中PG4、PG400、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q以及Q1如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式7-v代表的中間體化合物
其中PG4、PG400、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q以及Q1如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式8-ii代表的中間體化合物
其中PG4、r、L、R100、R200、A1、以及Q1如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式8-iii代表的中間體化合物
其中PG4、r、L、R1、R100、R2、R200、R3、A、A1、Q以及Q1如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式17-i代表的中間體化合物
其中PG4、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q以及Q1如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式18-i代表的中間體化合物
其中PG4、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q以及Q1如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式19-2代表的中間體化合物
其中PG1、PG2、L、X如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式19-3代表的中間體化合物
其中PG2、L、以及X、如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式19-8代表的中間體化合物
其中PG4、L、X、X1、R1、R100、R2、R200、R3、R300、R4、R400、R5以及R500如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式20-1a代表的中間體化合物
其中PG1、L、X、X1、R4以及R5如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式20-2代表的中間體化合物
其中PG4、L、X、以及X1、如此處所定義。
在本發(fā)明的另一方面中提供了式20-4代表的中間體化合物
其中PG4、L、X、X1、R1、R100、R2、R200、R3、R300、R4、R400、R5、以及R500如此處所定義。
本發(fā)明的另一方面提供制備本文前述式I所代表的化合物的方法，所述方法包括 a)將由式1-iv所代表的兩中間體在溶劑中偶聯(lián)
其中PG3、R1、R2、R3、A、以及Q如此處所定義；以及 b)除去保護基從而形成式1的化合物。
本發(fā)明的另一方面提供制備如本文前述的式I所代表的化合物的方法，所述方法包括 a)將由式2-iv代表的中間體與活化的二酸(0.5當量)在溶劑中偶聯(lián)
其中PG4為保護基，并且R1、R2、R3、A、以及Q如此處所定義；以及 b)除去保護基從而形成式I的化合物。
本發(fā)明的另一方面提供通過用1至2當量如此處定義的藥物學可接受的酸處理式I或II的化合物而制備式I和II化合物的藥物學可接受的鹽的方法。
本發(fā)明的另一方面提供藥物組合物，其包含與藥物學可接受的載體、稀釋劑或賦形劑混合的如前所述的化合物。
本發(fā)明的另一方面提供適于作為用于治療對象中增殖性疾病的藥物給藥的藥物組合物，其包含治療有效量的如前所述的化合物。
本發(fā)明的另一方面提供藥物組合物，其包含式I的化合物與一種或多種死亡受體激動劑例如TRAIL受體激動劑的組合。
本發(fā)明的另一方面提供藥物組合物，其包含式I的化合物與能夠增加一種或多種死亡受體激動劑的響應(yīng)的任何治療劑例如細胞因子(如各種干擾素)的組合。
本發(fā)明的另一方面提供制備藥物組合物的方法，所述方法包括將如前所述的化合物與藥物學可接受的載體、稀釋劑或賦形劑混合。
本發(fā)明另一方面提供用于治療以凋亡不足為特征的疾病的方法，所述方法包括向有此需要的對象給藥治療有效量的如前所述的藥物組合物以治療所述疾病。
本發(fā)明另一方面提供用于調(diào)節(jié)IAP功能的方法，所述方法包括將細胞與本發(fā)明的化合物接觸以防止BIR結(jié)合蛋白與IAP BIR域結(jié)合，從而調(diào)節(jié)IAP功能。
本發(fā)明另一方面提供用于治療增殖性疾病的方法，所述方法包括向有此需要的對象給藥治療有效量的如前所述的藥物組合物以治療所述增殖性疾病。
本發(fā)明另一方面提供用于治療癌癥的方法，所述方法包括向有此需要的對象給藥治療有效量的如前所述的藥物組合物以治療癌癥。
本發(fā)明另一個方面提供了用于治療癌癥的方法，所述方法包括向有此需要的對象與選自下列的藥物組合或者順序地給藥或者與放療組合或者順序地給予治療有效量的如前所述的藥物組合物從而治療癌癥 a)雌激素受體調(diào)節(jié)劑， b)雄激素受體調(diào)節(jié)劑， c)類視黃醇受體調(diào)節(jié)劑， d)細胞毒性劑， e)抗增殖劑， f)異戊二烯基-蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑， g)HMG-CoA還原酶抑制劑， h)HIV蛋白酶抑制劑， i)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑， k)血管發(fā)生抑制劑， l)PPAR-γ激動劑， m)PPAR-δ激動劑， n)固有耐藥性(inherent multidrug resistance)抑制劑， o)止吐劑， p)可用于治療貧血的藥物， q)可用于治療嗜中性白血球減少癥(neutropenia)的藥物， r)免疫促進劑， s)蛋白酶體抑制劑， t)HDAC抑制劑， u)蛋白酶體中化學胰蛋白酶樣活性的抑制劑，或蛋白酶體中化學胰蛋白酶樣活性的抑制劑，或 v)E3連接酶抑制劑， w)免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)劑例如但不限于干擾素-α、卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin，BCG)、以及能夠誘導細胞因子如各種干擾素、TNF釋放或誘導死亡受體配體如TRAIL釋放的電離輻射(UVB)， x)死亡受體TRAIL調(diào)節(jié)劑和和TRAIL激動劑如人源化抗體HGS-ETR1和HGS-ETR2。
本發(fā)明另一方面提供用于治療或預防對象的增殖性疾病的方法，所述方法包括向?qū)ο蠼o藥治療有效量的如前所述的組合物。
在本發(fā)明的另一方面中，所述方法進一步包括在給藥所述組合物之前、同時或者之后向所述對象給藥治療有效量的化療劑。
在本發(fā)明的另一方面中，所述方法進一步包括在給藥所述組合物之前、同時或者之后向所述對象給藥治療有效量的死亡受體激動劑。所述死亡受體激動劑為TRAIL或者所述死亡受體激動劑為TRAIL抗體。所述死亡受體激動劑通常以產(chǎn)生協(xié)同作用的量給藥。
本發(fā)明另一方面提供如前所述的化合物在制備用于治療或預防以凋亡不足為特征的疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明另一方面提供如前所述的化合物在制備用于治療或預防增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明另一方面提供如前所述的化合物與選自以下的藥物的組合在制備用于治療或預防增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用 a)雌激素受體調(diào)節(jié)劑， b)雄激素受體調(diào)節(jié)劑， c)類視黃醇受體調(diào)節(jié)劑， d)細胞毒性劑， e)抗增殖劑， f)異戊二烯基-蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑， g)HMG-CoA還原酶抑制劑， h)HIV蛋白酶抑制劑， i)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑， k)血管發(fā)生抑制劑， l)PPAR-γ激動劑， m)PPAR-δ激動劑， n)固有的多抗藥性的抑制劑， o)止吐劑， p)可用于治療貧血的藥物， q)可用于治療嗜中性白血球減少癥的藥物， r)免疫促進劑， s)蛋白酶體抑制劑， t)HDAC抑制劑， u)蛋白酶體中化學胰蛋白酶樣活性的抑制劑，或 v)E3連接酶抑制劑， w)免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)劑例如但不限于干擾素-α、卡介苗(BCG)、以及能夠誘導細胞因子如各種干擾素、TNF釋放或誘導死亡受體配體如TRAIL釋放的電離輻射(UVB)， x)死亡受體TRAIL調(diào)節(jié)劑和和TRAIL激動劑如人源化抗體HGS-ETR1和HGS-ETR2； 或者所述化合物與放療組合或順序地進行放療。
本發(fā)明的另一方面提供如前所述的化合物與死亡受體激動劑的組合在制備用于治療或預防對象中的增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一方面提供用于治療或預防以凋亡不足為特征的疾病的藥物組合物，其包含與藥物學可接受的載體、稀釋劑或賦形劑混合的如前所述的化合物。
本發(fā)明的另一方面提供用于預防或治療增殖性疾病的藥物組合物，其包含與能夠增加一種或多種死亡受體激動劑的循環(huán)水平的任何化合物組合的如前所述的化合物。
本發(fā)明的另一方面提供用于制備藥物組合物的方法，所述方法包括將如前所述的化合物與藥物學可接受的載體、稀釋劑或賦形劑混合。
本發(fā)明的另一方面提供探針，所述探針為前述式I或II的化合物，所述化合物用可檢測的標記或親和標簽標記。
本發(fā)明的另一方面提供鑒定能夠與IAP BIR域結(jié)合的化合物的方法，所述試驗方法包括 a)將IAP BIR域與探針接觸形成探針BIR域復合物，所述探針可被受試化合物代替； b)測量探針的信號以建立參考水平； c)將所述探針BIR域復合物與受試化合物溫育； d)測量探針的信號； e)將步驟d)的信號與參考水平相比，信號的調(diào)節(jié)提示所述受試化合物與BIR域結(jié)合， 其中所述探針是用可檢測的標記或親和標簽標記的式I或II的化合物。
本發(fā)明的另一方面提供用于檢測體內(nèi)IAP功能損失或抑制(suppression)的方法，所述方法包括a)向?qū)ο蠼o藥治療有效量的如前所述的藥物組合物；b)從所述對象分離組織樣品；以及c)由所述樣品接側(cè)IAP的功能損失或抑制。



結(jié)合以下附圖參考說明書將對本發(fā)明的其他方面以及優(yōu)點具有更深的理解 圖1所示為以化合物3進行的SKOV-3人卵巢癌細胞系異種移植試驗(XenographStudy)。在右肋部皮下向雌性CD-1裸鼠(約20-25g)皮下注射5×106在50％matrigel中的SKOV-3人卵巢癌細胞。在第55天，當腫瘤約100mm3時，開始用化合物3治療，在試驗期間用化合物治療連續(xù)5天，然后停止藥物治療2天。用數(shù)字測徑器測量腫瘤大小并按照V＝(a×b2)/2計算，其中a為最長尺寸，b為寬度。在1mg/kg觀察到腫瘤消退，而在0.3mg/kg觀察到腫瘤停滯。
圖2所示為以化合物3進行的MDA-MB-231人乳癌細胞系異種移植試驗。向雌性CD-1裸鼠(約20-25g)右肋皮下注射1 x 106MDA-MB-231人乳癌腫瘤細胞。在第71天，當腫瘤約90mm3時，開始用化合物3治療，在試驗期間用化合物治療連續(xù)5天，然后停止藥物治療2天。用數(shù)字測徑器測量腫瘤大小并按照V＝(a×b2)/2計算，其中a為最長尺寸，b為寬度。在1mg/kg觀察到腫瘤消退。
圖3顯示化合物3在體外誘導HCT-116細胞中的cIAP-1的損失。用各種濃度的化合物3處理PC3、SKOV3、MDA-MB-231、HCT-116細胞，在37℃溫育5小時。收集細胞并且用蛋白質(zhì)印跡法檢測cIAP-1的水平以及作用(加樣對照未顯示)。結(jié)果顯示，化合物3以時間依賴性方式(未顯示)誘導人癌細胞中cIAP-1的損失。使用如圖3中所述的相似的方法，化合物3誘導了ES2和4T1細胞系(未顯示)中c-IAP1的損失以及PC3細胞(未顯示)中cIAP2的損失。
圖4顯示小鼠白細胞中IAP的體外調(diào)節(jié)。用各種濃度的化合物3將CD-1小鼠全血在體外溫育3小時。通過Ficoll梯度自經(jīng)處理的全血中分離白血細胞。自白血細胞中分離蛋白質(zhì)，并用蛋白質(zhì)印跡法呈現(xiàn)cIAP-1和微管蛋白(加樣對照)的相對量。體外結(jié)果顯示化合物3誘導小鼠血液中cIAP-1的損失。
圖5顯示小鼠白細胞中cIAP-1的體外調(diào)節(jié)。以所示的劑量通過靜脈內(nèi)推注將化合物3向CD-1小鼠給藥。在1至48小時后犧牲動物，收集血液，以Ficoll梯度分離白細胞并提取蛋白質(zhì)。用蛋白質(zhì)印跡法呈現(xiàn)cIAP-1和微管蛋白(加樣對照)的相對量(下面顯示在3小時時間點)。使用先體外再體內(nèi)檢測方法，檢測結(jié)果顯示化合物3誘導小鼠白細胞中cIAP-1的下調(diào)。
圖6所示為以化合物24(1mg/kg)進行的MDA-MB-231人乳癌細胞系異種移植試驗。向雌性CD-1裸鼠(約20-25g)右肋皮下注射1×106在50％ matrigel中的MDA-MB-231人乳癌腫瘤細胞。在第55天，當腫瘤約100mm3時，開始用化合物24治療，在試驗期間用化合物治療連續(xù)5天，然后停止藥物治療2天。用數(shù)字測徑器測量腫瘤大小并按照V＝(a×b2)/2計算，其中a為最長尺寸，b為寬度。圈表示20％HPCD對照；菱形表示化合物24。
圖7顯示大鼠白細胞中cIAP-1的體外調(diào)節(jié)。通過靜脈內(nèi)推注給藥化合物24。在1至48小時后收集血液，以Ficoll梯度分離白細胞并提取蛋白質(zhì)。用蛋白質(zhì)印跡法呈現(xiàn)cIAP-1和微管蛋白(加樣對照)的相對量(下面顯示在3小時時間點)。使用先體外再體內(nèi)檢測方法，檢測結(jié)果顯示化合物24誘導小鼠白細胞中cIAP-1的下調(diào)。

具體實施例方式 在許多癌癥和其他疾病中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由基因缺陷或者化療藥物誘導的IAP上調(diào)與對凋亡的抗性提高有關(guān)。相反，我們的結(jié)果顯示，IAP水平下降的細胞對化療藥物以及對死亡受體激動劑如TRAIL更為敏感。據(jù)信，可拮抗IAP功能或者導致患病細胞中IAP損失的小分子將可用作治療劑。我們在此處披露，本發(fā)明的化合物可直接與IAP結(jié)合，導致細胞中IAP蛋白的下調(diào)，并在癌細胞中誘導凋亡。此外，本發(fā)明的化合物顯示出與用于治療癌癥的臨床相關(guān)藥物的組合具有協(xié)同作用。
我們發(fā)現(xiàn)了一系列新穎的橋連的化合物，它們與完好的細胞IAP結(jié)合并導致IAP蛋白大幅、持續(xù)下調(diào)，并且通過活性胱天蛋白酶3的增強的釋放導致癌細胞的細胞凋亡增強。已經(jīng)在源自人乳腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌的各種細胞系以及原代人白血病細胞和淋巴細胞中觀察到該生物學響應(yīng)。已發(fā)現(xiàn)該化合物在許多各種各樣的癌細胞中與死亡受體激動劑介導的殺死如TRAIL、TRAIL受體單克隆抗體以及TNF-α具有高的協(xié)同作用?；谶@些發(fā)現(xiàn)，所述化合物將可用于治療多種癌癥類型，如實體瘤和源自造血系統(tǒng)的腫瘤。并且，本發(fā)明的化合物還可用于預防轉(zhuǎn)移癌細胞入侵、炎癥、以及特征為其中細胞通過上調(diào)任一IAP而抵抗凋亡的其他疾病。如圖3中所示，化合物3在小于10nM的濃度下能夠誘導c-IAP1/2蛋白自多種腫瘤細胞系中完全消失。本發(fā)明的其他化合物已經(jīng)顯示具有以使IAP以時間依賴性方式自癌細胞中消失的相似的能力。該IAP蛋白的消失與在SKOV3細胞中的ED50強烈地相關(guān)。
在下文中詳述的兩個IAP BIR構(gòu)建單元M1和M2的“橋連”使用合適的“橋連單元”，該“橋連單元”連接至吡咯烷環(huán)之一，提供了橋連的IAP BIR結(jié)合化合物，與它們的單體單元相比，其顯示出顯著提高的抗癌活性(10-1000倍)。該提高的活性源于與完好的IAP的BIR域的結(jié)合能力提高，并且導致在各種癌細胞系中誘導凋亡。
各種因素影響本發(fā)明化合物的體內(nèi)促凋亡特征。具體而言，這些因素包括i)連接基/吡咯烷鍵的連接點，ii)連接基/吡咯烷鍵處的立體化學，iii)連接基部分本身，包括連接基系統(tǒng)的立體化學、區(qū)位化學、以及剛性，iv)在R1和R100處的烷基取代基，以及v)在R4、R400、R5和R500處的取代模式。
為了便于描述，在對式I和式II的化合物的描述之中也可包括術(shù)語P1、P2、P3、P4和P5的應(yīng)用。這些術(shù)語是指式I或II中的氨基酸或者經(jīng)修飾的氨基酸。下圖說明了所述術(shù)語的應(yīng)用
其中波浪線代表連接至另一BIR結(jié)合單元的共價鍵。
本發(fā)明化合物也可由式3或式4代表，其中M1和M2代表獨立的BIR結(jié)合域。

其中R1、R2、R100、R200、R3、R300、R20、A、A1、Q、Q1、以及BG如此處所定義，并且所述點線代表用于比較與M1和M2關(guān)聯(lián)的取代基的假想的分界線。
在式3的一個子集中，M1與M2相同，并且所述點線表示對稱線。在另一個子集中，M1不同于M2。
在一個子集中，式4的化合物關(guān)于所述點線是不對稱的。在另一個子集中，M1和M2上的取代基是相同的。在另一個子集中，M1和M2上的取代基是不同的。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識到，當M1和M2相同時，M1中的R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R13、R14、r、m、Y、A、Q、和X取代基分別與M2中的R100、R200、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R13、R14、r、m、Y、A1、Q1、和X1取代基具有相同的含義。當M1和M2不同時，至少一個R1、R2、R100、R200、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R13、R14、r、m、Y、A、A1、Q、Q1、X、和X1取代基在M1或M2中是不同的。
或者，M1中的取代基可以分別定義為R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R13、R14、r、m、p、Y、A、Q、和X，而M2中的取代基可以分別定義為R100、R200、R400、R500、R600、R700、R800、R900、R1000、R1100、R1300、R1400、r1、m1、p1、Y1、A1、Q1和X1。在M1和M2相同的情況下，M1中的R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R13、R14、r、m、Y、A、Q、和X取代基分別與M2中的R100、R200、R400、R500、R600、R700、R800、R900、R1000、R1100、R1300、R1400、r1、m1、Y1、A1、Q1和X1具有相同的含義。在M1和M2不同的情況下，前述取代基中的至少一個是不同的。
本發(fā)明的化合物可用作哺乳動物IAP的BIR域結(jié)合化合物，并且由式I或式II代表。以下詳述了式I和式II化合物的具體實施方案、各基團和取代基。
A和A1 在式I或II化合物的一個子集中，A和A1均為CH2。
在式I或II化合物的另一個子集中、A和A1均為C＝O。
在式I或II化合物的另一個子集中、A為CH2而A1為C＝O。
在式I或II化合物的另一個子集中、A和A1均為C(O)OCH3。
在式I或II化合物的另一個子集中、A和A1均為C(O)OH。
此處給出的A和A1的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核(Core)、R1、R2、R100、R200、R3、R300、Q、Q1、和BG的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
核 因此，對于式I的化合物，本發(fā)明包括式1A至1C的化合物
其中BG、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3、和R300如上文和下文中所定義。
在一個實例中，本發(fā)明包括式1A的化合物。
在另一個實例中，本發(fā)明包括式1B的化合物。
在另一個實例中，本發(fā)明包括式1C的化合物。
或者，式II的化合物包括式2A和2B的化合物
其中BG、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200 R3、R300和R20如上文和下文中所定義。
在一個實例中，本發(fā)明包括式2A的化合物。
此處給出的核的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的A、A1、R1、R2、R100、R200、R3、R300、R20、Q、Q1、和BG的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
BG 在前述化合物的一個子集中，BG為-X-L-X1-。
在一個子集中，對于其中BG為-X-L-X1-的式I化合物，本發(fā)明包括式1a至1c的化合物

其中L、X、X1、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3、和R300如上文和下文中所定義。
前述化合物的另一個子集包括式1.1a至1.1c的化合物

其中L、X、X1、A、A1、R1、R100、R2、R200、R3、R300、R4、R400、R5和R500如上文和下文中所定義。
在一個子集中，對于其中的BG為-X-L-X1-的式II化合物，本發(fā)明包括式2a的化合物
其中L、X。X1、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3和R20如上文和下文中所定義。
此處給出的BG的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、R1、R2、R100、R200、R3、R300、A、A1Q、和Q1的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
X和X1 在前述化合物的一個子集中，X和X1獨立地選自 1)O， 2)NR13， 3)S， 4)C1-C6烷基-O-， 5)C1-C6烷基，

或
在一個實例中X和X1獨立地選自 1)O，

或
此處給出的X和X1的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、L、A、A1、R1、R2、R100、R200、R3、R300、R20、Q、Q1、和BG的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
L 在前述化合物的一個子集中，L選自 1)-C1-C20烷基-， 2)-C3-C7環(huán)烷基-， 3)-芳基-， 4)-聯(lián)苯基-， 5)-雜芳基-， 6)-C1-C6烷基-(C2-C4炔基)-C1-C6烷基- 7)-C1-C6烷基-芳基-C1-C6烷基-， 8)-芳基-Y-芳基-，

或
其中所述烷基和環(huán)烷基任選地被一個或多個R6取代基取代，并且所述芳基、聯(lián)苯基和雜芳基任選地被一個或多個R10取代基取代。
L的典型的實例包括
此處給出的L的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、A、A1、r、R1、R2、R100、R200、R3、R300、R20、X、X1、Q、或Q1的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
r 在前述方面中，r為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10的整數(shù)。
此處給出的r的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、A、L、A1、R1、R2、R100、R200、R3、R300、R20、Q、Q1、X和X1的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
更明確地，本發(fā)明包括式1.1至1.18的化合物



其中r、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3和R300如上文中所定義。
或者更明確地，本發(fā)明包括式2.1和2.2的化合物
其中A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3和R20如上文中所定義。
R1和R100 在前述化合物的一個子集中R1和R100均為H。
在前述化合物的一個子集中R1和R100均為C1-C6烷基。
在一個實例中，R1和R100均為CH3。
此處給出的R1和R100的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、A、A1、R2、R200、R3、R300、Q、Q1、B、B1、和BG的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
R2和R200 在前述化合物的一個子集中R2和R200均為任選地被OH取代的C1-C6烷基。
在一個實例中，R2和R200均為CH3。
在另一個實施中，R2為CH2OH而R300為CH3。
在另一個實施中，R2和R200均為CH2OH。
在另一個實施中、R2和R200均為CH2CH3。
此處給出的R2和R200的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、A、A1、R1、R100、R3、R300、Q、Q1、和BG的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
R3和R300 在式I化合物的一個子集中，R3和R300均為C1-C6烷基。
在一個實例中，R3和R300均為C(CH3)3。
在式II化合物的一個子集中，R3為C1-C6烷基。在一個實例中，R3為C(CH3)3。
此處給出的R3和R300的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、Q、Q1、和BG的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
Q和Q1 在前述化合物的一個子集中，Q和Q1均為NR4R5，其中R4和R5如此處所定義。
此處給出的Q和Q1的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、R3、R300和BG的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
R4和R5 在其中A和A1均為C＝O的前述化合物的一個子集中，R4為H并且R5選自 1)←C1-C6烷基 2)←C2-C6烯基， 3)←C2-C4炔基， 4)←C3-C7環(huán)烷基， 5)←C3-C7環(huán)烯基， 6)←芳基， 7)←雜芳基， 8)←雜環(huán)基，或 9)←雜雙環(huán)基， 其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； 其中R6和R10如此處所定義。
在上述化合物的另一個子集中，R4為H而R5選自 1)←C1-C6烷基，或 2)←芳基， 其中所述烷基任選地被一個或兩個R6取代基取代；并且其中所述芳基任選地被一個R10取代基取代； 其中R6和R10如此處所定義。
前述子集的實例包括，R4為H而R5選自以下組中
以及
因此，當A和A1均為C＝O時，則Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q為

而Q1為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在另一個實施中，Q和Q1均為
在其中A和A1均為CH2的前述化合物的另一個子集中，R4和R5分別獨立地為 1)鹵代烷基， 2)←C1-C6烷基， 3)←C2-C6烯基， 4)←C2-C4炔基， 5)←C3-C7環(huán)烷基， 6)←C3-C7環(huán)烯基， 7)←芳基， 8)←雜芳基， 9)←雜環(huán)基， 10)←雜雙環(huán)基， 11)←C(O)-R11， 12)←C(O)O-R11， 13)←C(＝Y(jié))NR8R9，或 14)←S(O)2-R11， 其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； 其中Y、R6、R8、R9、R10和R11如此處所定義。
在上述化合物的另一個子集中，R4和R5獨立地選自 1)C1-C6烷基， 2)←C(O)-R11， 3)←C(O)O-R11，或 4)←S(O)2-R11， 其中所述烷基被R6取代基取代； 其中R6和R11如此處所定義。
在前述化合物的一個子集中，R4為S(O)2CH3而R5為

或
在前述化合物的另一個子集中，R4為C(O)CH3而R5為

或
在前述化合物的另一個子集中，R4為

而R5為

或
此處所述的R4和R5的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、R3、R300、和BG的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
R11 在前述化合物的一個子集中， R11為 1)C1-C6烷基，或 2)芳基， 其中所述烷基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基任選地被一個或多個R10取代基取代； 其中R6和R10如此處所定義。
在前述化合物的一個子集中，R11為 1)C1-C6烷基任選地被一個或兩個R6取代基取代，或 2)任選地被一個R10取代基取代的苯基； 其中所述R6和R10取代基如此處所定義。
此處給出的R11的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、R4、R5、R3、R300和BG的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
R6 在前述化合物的一個子集中，R6為 1)鹵素， 2)NO2， 3)CN， 4)芳基， 5)雜芳基， 6)雜環(huán)基， 7)雜雙環(huán)基， 8)OR7， 9)SR7，或 10)NR8R9， 其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； 其中R7、R8、R9和R10如此處所定義。
在前述化合物的另一個子集中，R6為 1)鹵素， 2)芳基，或 3)NR8R9， 其中所述芳基任選地被一個R10取代基取代； 其中R8、R9和R10如此處所定義。
在前述化合物的一個子集中，R6為 1)鹵素， 2)苯基，或 3)NR8R9， 其中所述苯基任選地被一個R10取代基取代； 其中R8和R9如此處所定義。
此處給出的R6的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、R4、R5、R3、R300和BG的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
R8和R9 在前述化合物的一個子集中，R8和R9分別獨立地為 1)H， 2)鹵代烷基， 3)C1-C6烷基， 4)C2-C6烯基， 5)C2-C4炔基， 6)C3-C7環(huán)烷基，或 7)C3-C7環(huán)烯基， 其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代； 其中所述R6取代基如此處所定義。
在前述化合物的另一個子集中，R8和R9分別獨立地為 1)H，或 2)C1-C6烷基， 其中所述烷基任選地被芳基取代。
此處給出的R8和R9的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、R4、R5、R3、R300和BG的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
R10 在前述化合物的一個方面中，R10為 1)鹵素， 2)NO2， 3)CN， 4)鹵代烷基， 5)OR7， 6)NR8R9，或 7)SR7； 其中R7、R8、和R9如此處所定義。
在前述化合物的另一個方面中，R10為 1)鹵素，或 2)OC1-C6烷基。
此處給出的R10的任何和各個單獨的定義均可與此處給出的核、A、A1、R1、R100、R2、R200、R4、R5、R3、R300和BG的任何和各個單獨的定義結(jié)合。
或者，本發(fā)明提供式I或式2所代表化合物的異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或互變異構(gòu)體，或其前藥、或藥物學可接受的鹽、或用可檢測的標記或親和標簽標記的所述化合物。

其中 n為0或1； m為0、1或2； p為1或2； Y為NH、O或S； LG為 2)-X-L-X1-； X和X1獨立地選自 1)O， 2)NR13， 3)S， 4)C1-C6烷基-O-， 5)C1-C6烷基-NR13-， 6)C1-C6烷基-S-， 7)C1-C6烷基-芳基-O-

或
L選自 1)-C1-C20烷基-， 2)-C2-C6烯基-， 3)-C2-C4炔基-， 4)-C3-C7環(huán)烷基-， 5)-苯基-， 6)-聯(lián)苯基-， 7)-雜芳基-， 8)-雜環(huán)基-， 9)-C1-C6烷基-(C2-C6烯基)-C1-C6烷基-， 10)-C1-C6烷基-(C2-C4炔基)-C1-C6烷基， 11)-C1-C6烷基-(C3-C7環(huán)烷基)-C1-C6烷基， 12)-C1-C6烷基-苯基-C1-C6烷基， 13)-C1-C6烷基-聯(lián)苯基-C1-C6烷基， 14)-C1-C6烷基-雜芳基-C1-C6烷基， 15)-C1-C6烷基雜環(huán)基-C1-C6烷基， 16)-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基， 17)-C(O)-芳基-C(O)-， 18)-C(O)-雜芳基-C(O)-， 19)-C(O)-(C1-C6烷基)-芳基-(C1-C6烷基)-C(O)-， 20)-C(O)-(C1-C6烷基)-雜芳基-(C1-C6烷基)-C(O)-，或 21)-C(O)-(C1-C6烷基)-(C3-C7環(huán)烷基)-(C1-C6烷基)-C(O)-； Q和Q1獨立地選自 1)NR4R5， 2)OR11，或 3)S(O)mR11；或 Q和Q1獨立地選自任選地被R12取代基取代的芳基或雜芳基；或 Q和Q1獨立地為
其中G為5、6或7元環(huán)，所述環(huán)任選地含有一個或多個選自S、N或O的雜原子，并且所述環(huán)任選地被一個或多個R12取代基取代，所述環(huán)任選地與芳基或雜芳基稠合，所述芳基和雜芳基任選地被一個或多個R12取代基取代。
A和A1獨立地選自 1)-CH2-， 2)-CH2CH2-， 3)-CH(C1-C6烷基)-， 4)-CH(C3-C7環(huán)烷基)-， 5)-C3-C7環(huán)烷基-， 6)-CH(C1-C6烷基-C3-C7環(huán)烷基)-，或 7)-C(O)-； R1和R100獨立地選自 3)H，或 4)任選地被一個或多個R6取代基取代的C1-C6烷基； R2和R200獨立地為H或任選地被一個或多個R6取代基取代的C1-C6烷基； R4和R5獨立地選自 1)H， 2)C1-C6烷基→， 3)C3-C7環(huán)烷基→， 4)鹵代烷基→， 5)芳基→， 6)聯(lián)苯基→， 7)雜芳基-芳基→， 8)芳基-雜芳基→， 9)芳基-雜環(huán)基→， 10)雜環(huán)基→， 11)雜芳基→， 12)雜環(huán)基→， 13)C1-C6烷基-OnC(O)→， 14)鹵代烷基-OnC(O)→， 15)C3-C7環(huán)烷基-OnC(O)→， 16)芳基-OnC(O)→， 17)雜芳基-OnC(O)→， 18)雜環(huán)基-OnC(O)→， 19)R8R9NC(＝Y(jié))→， 20)C1-C6烷基-S(O)2→， 21)C3-C7環(huán)烷基-S(O)2→， 22)芳基-S(O)2→， 23)雜芳基-S(O)2→， 24)雜環(huán)基-S(O)2→， 25)稠合的芳基-C3-C7環(huán)烷基→， 26)稠合的雜芳基-C3-C7環(huán)烷基→， 27)稠合的芳基-雜環(huán)基→， 28)稠合的雜芳基-雜環(huán)基→， 29)稠合的芳基-C3-C7環(huán)烷基-OnC(O)→， 30)稠合的雜芳基-C3-C7環(huán)烷基-OnC(O)→， 31)稠合的芳基-雜環(huán)基-OnC(O)→，或 32)稠合的雜芳基-雜環(huán)基-OnC(O)→， 其中所述烷基和環(huán)烷基任選地被一個或多個R6取代基取代，并且所述芳基、所述雜芳基和所述雜環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基； R6獨立地選自 1)鹵素， 2)C1-C6烷基， 3)C3-C7環(huán)烷基， 4)鹵代烷基， 5)芳基， 6)雜芳基， 7)雜環(huán)基， 8)OR7， 9)S(O)mR7， 10)NR8R9， 11)COR7， 12)C(O)OR7， 13)OC(O)R7， 14)SC(O)R7， 15)CONR8R9， 16)S(O)2NR8R9，或 17)N(＝Y(jié))NR8R9， 其中所述芳基、所述雜芳基和所述雜環(huán)基(heterocylyl)任選地被一個或多個R10取代基取代； R7獨立地選自 1)H， 2)C1-C6烷基， 3)C3-C7環(huán)烷基， 4)鹵代烷基， 5)芳基， 6)雜芳基， 7)雜環(huán)基， 8)C(＝Y(jié))NR8R9，或 9)C1-C6烷基-C2-C4炔基， 其中所述芳基、雜芳基、和雜環(huán)基任選地被一個或多個R10取代； R8和R9獨立地選自 1)H， 2)C1-C6烷基， 3)C3-C7環(huán)烷基， 4)鹵代烷基， 5)芳基， 6)雜芳基， 7)雜環(huán)基， 8)COC1-C6烷基， 9)COC3-C3環(huán)烷基 10)CO-芳基， 11)CO-雜芳基， 12)CO-雜環(huán)基， 13)C(O)Y-C1-C6烷基， 14)C(O)Y-C3-C3環(huán)烷基 15)C(O)Y-芳基， 16)C(O)Y-雜芳基，或 17)C(O)Y雜環(huán)基， 其中所述芳基、雜芳基和雜環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； 或者R8和R9與它們所連接的氮原子一同形成任選地被一個或多個R6取代基取代的五元、六元或七元雜環(huán)； R10獨立地選自 1)鹵素， 2)NO2， 3)CN， 4)C1-C6烷基， 5)鹵代烷基， 6)C3-C7環(huán)烷基， 7)OR7， 8)NR8R9， 9)SR7， 10)COR7， 11)CO2R7， 12)S(O)mR7， 13)CONR8R9，或 14)S(O)2NR8R9， 其中所述烷基任選地被一個或多個R6取代基取代； R11獨立地選自 1)C1-C6烷基→， 2)C3-C7環(huán)烷基→， 3)芳基→， 4)雜芳基→，或 5)雜環(huán)基→， 其中所述烷基和環(huán)烷基任選地被一個或多個R6取代基取代，并且所述芳基、雜芳基和雜環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； R12獨立地選自 1)C1-C6烷基→， 2)C3-C7環(huán)烷基→， 3)鹵代烷基→， 4)芳基→， 5)雜芳基→， 6)雜環(huán)基→， 7)C1-C6烷基-OnC(O)→， 8)鹵代烷基-OnC(O)→， 9)C3-C7環(huán)烷基-OnC(O)→， 10)芳基-OnC(O)→， 11)雜芳基-OnC(O)→， 12)雜環(huán)基-OnC(O)→， 13)R8R9NC(O)→， 14)C1-C6烷基-S(O)m→， 15)C3-C7環(huán)烷基-S(O)m→， 16)芳基-S(O)m→， 17)雜芳基-S(O)m→， 18)雜環(huán)基-S(O)m→， 19)稠合的芳基-C3-C7環(huán)烷基， 20)稠合的雜芳基-C3-C7環(huán)烷基，或 21)C(＝Y(jié))-NR8R9， 其中所述烷基和環(huán)烷基任選地被一個或多個R6取代基取代，并且所述芳基、雜芳基和雜環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代； R13為 1)H， 2)C1-C6烷基→， 3)C3-C7環(huán)烷基→， 4)鹵代烷基→， 5)芳基→， 6)雜芳基→， 7)雜環(huán)基→， 8)C1-C6烷基-OnC(O)→， 9)鹵代烷基-OnC(O)→， 10)C3-C7環(huán)烷基-OnC(O)→， 11)芳基-OnC(O)→， 12)雜芳基-OnC(O)→，或 13)雜環(huán)基-OnC(O)→。
如果在任何成分結(jié)構(gòu)中有任何變量例如R6、R600、R10、R1000等出現(xiàn)了多于一次，則所述變量在每次出現(xiàn)時的定義彼此獨立。如果某取代基本身被一個或多個取代基取代，則應(yīng)當理解為所述一個或多個取代基可以連接至相同的碳原子或不同的碳原子。僅在它們能夠形成化學穩(wěn)定的化合物之時才允許此處定義的取代基以及變量的組合。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，本發(fā)明化合物上的取代模式以及取代基可經(jīng)選擇以提供化學穩(wěn)定并、且易于使用實施例中給出的化學方法以及本領(lǐng)域公知的化學技術(shù)使用易于獲得的起始物質(zhì)合成的化合物。
應(yīng)當理解，許多本文所述的取代基或者基團具有官能團等價物，這意味著所述基團或者取代基可以被具有相似的電學、雜化或成鍵性質(zhì)的其他基團或者取代基代替。
定義 除非另有說明，否則適用以下定義 單數(shù)形式“a”、“an”以及“the”包括相應(yīng)的復數(shù)形式，除非上下文另有明確的規(guī)定。
如此處使用的，術(shù)語“包含”或“包括”是指在該詞語后所列舉的元素是需要的或者必須的，而其他元素是任選的并且可以存在或者不存在。
如此處使用的，術(shù)語“由……組成”是指包括并且僅限于該短語后的內(nèi)容。因此，短語“由……組成”指所列舉的元素是需要的或者必須的，并且不可存在其他的元素。
如此處使用的，術(shù)語“烷基”意欲包括具有所指定的碳原子數(shù)的所有的支鏈或者直鏈飽和脂肪烴基，例如在C1-C6-烷基中的C1-C6定義為包括具有直鏈或者支鏈排列的1、2、3、4、5或6個碳的基團，而C1-C4烷基中的C1-C4定義為包括具有直鏈或支鏈排列的1、2、3或4個碳的基團，并且例如C1-C20-烷基中的C1-C20定義為包括具有直鏈或支鏈排列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個碳的基團。如上定義的C1-C6-烷基和C1-C4烷基的實例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、戊基和己基。
如此處使用的，術(shù)語“烯基”是指具有其中所指定的碳原子數(shù)的不飽和直鏈或支鏈烴基，其中至少兩個碳原子通過雙鍵相互連接，并且具有E或Z區(qū)位化學(regeochemistry)或其組合。例如，C2-C6烯基中的C2-C6定義為包括具有直鏈或支鏈排列的2、3、4、5或6個碳的基團，至少兩個碳原子通過雙鍵相互連接。C2-C6烯基的實例包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基等。
如此處使用的，術(shù)語“炔基”是指具有其中所指定的碳原子數(shù)的不飽和直鏈烴基，并且其中至少兩個碳原子通過三鍵結(jié)合在一起。例如C2-C4炔基中的C2-C4定義為包括在鏈中具有2、3或4個碳原子的基團，至少兩個碳原子通過三鍵結(jié)合在一起。這種炔基的實例包括乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基等。
如此處使用的，術(shù)語“環(huán)烷基”是指具有其中所指定的碳原子數(shù)的單環(huán)飽和脂肪烴基，例如C3-C7環(huán)烷基中的C3-C7定義為包括具有單環(huán)排列的3、4、5、6或7個碳的基團。如上定義的C3-C7環(huán)烷基的實例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基以及環(huán)庚基。
如此處使用的，術(shù)語“環(huán)烯基”是指具有其中所指定的碳原子數(shù)的單環(huán)飽和脂肪烴基，例如C3-C7環(huán)烯基中的C3-C7定義為包括具有單環(huán)排列的3、4、5、6或7個碳的基團。如上定義的C3-C7環(huán)烯基的實例包括但不限于環(huán)戊烯基以及環(huán)己烯基。
如此處使用的，術(shù)語“鹵代”或“鹵素”是指氟、氯溴和碘。
如此處使用的，術(shù)語“鹵代烷基”是指其中各氫原子可相繼地被鹵素原子代替的如上定義的烷基。鹵代烷基的實例包括但不限于CH2F、CHF2和CF3。
如此處使用的，單獨或與其他基團一同使用的術(shù)語“芳基”是指含有6個碳原子的碳環(huán)芳香單環(huán)基團，其可進一步與另一個可以是芳香的、飽和的或不飽和的5-或6-元碳環(huán)基團稠合。芳基包括但不限于苯基、茚滿基、1-萘基、2-萘基和四氫萘基。所述芳基可以在環(huán)烷基環(huán)或者芳香環(huán)上的合適位置與另一基團相連。例如
從環(huán)系統(tǒng)上引出的標有箭頭的線表示所述鍵可以連接至任何合適的環(huán)原子。
如此處使用的，術(shù)語“聯(lián)苯基”是指在苯基環(huán)上的任一可用的位置連接在一起的兩個苯基。例如
如此處使用的，術(shù)語“雜芳基”是指最多十個原子的單環(huán)或雙環(huán)系統(tǒng)，其中至少一個環(huán)是芳香性的，并且包含1至4個選自O(shè)、N和S的雜原子。雜芳基取代基可以通過環(huán)碳原子或者一個雜原子連接。雜芳基的實例包括但不限于噻吩基、苯并咪唑基、苯并[b]噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡喃基、異苯并呋喃基、色烯基、呫噸基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲嗪基(indolizinyl)、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、異噻唑基、異色烷基、色烷基、異噁唑基、呋咱基、吲哚啉基、異吲哚啉基、噻唑并[4，5-b]吡啶，以及 熒光素(fluoroscein)衍生物如

或
如此處使用的，術(shù)語“雜環(huán)”、“雜環(huán)的”或者“雜環(huán)基”是指含有1-4個選自O(shè)、N和S的雜原子的5、6或7元非芳香環(huán)系統(tǒng)。雜環(huán)的實例包括但不限于吡咯烷基、四氫呋喃基、哌啶基(piperidyl)、吡咯啉基、哌嗪基、咪唑烷基、嗎啉基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、以及
如此處使用的，單獨或者與其他基團一起使用的術(shù)語“雜雙環(huán)基”是指與雜環(huán)、芳基或者任何其他此處定義的環(huán)稠合的上述定義的雜環(huán)。這種雜雙環(huán)基的實例包括但不限于香豆素、苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯、2，3-二氫苯并[b][1，4]二氧雜環(huán)己二烯(dioxine)以及3，4-二氫-2H-苯并[b][1，4]二氧雜環(huán)庚烯。
如此處使用的，術(shù)語“雜芳基”是指最多十個原子的單環(huán)或雙環(huán)系統(tǒng)，其中至少一個環(huán)是芳香性的，并且包含1至4個選自O(shè)、N和S的雜原子。雜芳基取代基可以通過環(huán)碳原子或者一個雜原子連接。雜芳基的實例包括但不限于噻吩基、苯并咪唑基、苯并[b]噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡喃基、異苯并呋喃基、色烯基、呫噸基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲嗪基(indolizinyl)、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、異噻唑基、異色烷基、色烷基、異噁唑基、呋咱基、吲哚啉基以及異吲哚啉基， 如此處使用的，術(shù)語“雜環(huán)”、“雜環(huán)的”或者“雜環(huán)基”是指含有1-4個選自O(shè)、N和S的雜原子的5、6或7元非芳香環(huán)系統(tǒng)。雜環(huán)的實例包括但不限于吡咯烷基、四氫呋喃基、哌啶基(piperidyl)、吡咯啉基、哌嗪基、咪唑烷基、嗎啉基、咪唑啉基、吡唑烷基以及吡唑啉基， 如此處使用的，術(shù)語“雜原子”是指O、S或N。
如此處使用的，術(shù)語“活化的二酸”是指其中羧酸部分原位或者在單獨的合成步驟中被轉(zhuǎn)化為例如但不限于酰鹵、琥珀酸酯、或者HOBt酯的二酸。例如琥珀酰氯和對苯二酰氯(terephthaloyl chloride)為“二酰氯”的實例。HOBt酯可通過用如DCC、EDC、HBTU等的脫水劑，如DIPEA的堿，以及HOBt在合適的溶劑中處理二酸生成?；罨亩崤c胺的反應(yīng)將導致酸官能團轉(zhuǎn)化為酰胺官能團。
如此處使用的，術(shù)語“可檢測的標記”是指一種基團，其可與本發(fā)明的化合物連接以生成探針，或者與IAP BIR域相連從而當探針與所述BIR域連接時，所述標記使得所述探針可被直接或者間接識別，從而可被檢測、測定以及定量。
如此處使用的，術(shù)語“親和標簽”是指一種配體或者基團，其連接于本發(fā)明的化合物或者IAP BIR域，從而使另一化合物可被從溶液中提取至所述配體或者基團所連接的物質(zhì)。
如此處使用的，術(shù)語“探針”是指被可檢測的標記或者親和標簽標記、并且能夠共價或者非共價結(jié)合至IAP BIR域的式I化合物。例如當所述探針非共價結(jié)合時，其可被受試化合物替代。例如當所述探針共價結(jié)合時，其可用于形成能夠被定量和被受試化合物抑制的交聯(lián)加成產(chǎn)物。
如此處使用的，術(shù)語“任選地被一個或多個取代基取代的”或者它的等價的術(shù)語“任選地被至少一個取代基取代的”是指隨后記載的事件或情況可能存在或者可能不存在，而且該描述包括其中所述事件或環(huán)境存在的情況以及其中所述事件或環(huán)境不存在的情況。該定義是指零至五個取代基。
如果取代基本身與本發(fā)明的合成方法不相容，則可以用對用于這些方法的反應(yīng)條件穩(wěn)定的適當?shù)谋Ｗo基(PG)保護該取代基。該保護基可以在該方法反應(yīng)序列中適當?shù)狞c被除去以提供希望的中間體或目標化合物。適合的以及使用這種適合的保護基保護以及脫保護不同的取代基的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知；其實例可參見T.Greene和P.Wuts，Protecting Groups in Chemical Synthesis(3rd ed.)，John Wiley & Sons，NY(1999)，將其全文并入此處作為參考。自始至終使用的保護基的實例包括但不限于Fmoc、Bn、Boc、CBz和COCF3。在某些情況下，可以具體地選擇取代基以在用于本發(fā)明方法中的反應(yīng)條件之下是活潑的。在這種情況下，反應(yīng)條件將選定的取代基轉(zhuǎn)化為另一可用于本發(fā)明方法中的中間體化合物的取代基或目標化合物中需要的取代基。
全文中使用的α-氨基酸的縮寫如下 如此處使用的，當有關(guān)α-氨基酸時術(shù)語“殘基”是指源于相應(yīng)的α-氨基酸的消除羧基的羥基以及α-氨基的氫的基團。例如，術(shù)語Gln、Ala、Gly、lle、Arg、Asp、Phe、Ser、Leu、Cys、Asn、和Tyr分別代表L-谷氨酰胺、L-丙氨酸、甘氨酸、L-異亮氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-苯丙氨酸、L-絲氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-天冬酰胺、以及L-酪氨酸的殘基。
如此處使用的，術(shù)語“對象”是指人以及非人哺乳動物如靈長類動物、貓、狗、豬、牛、綿羊、山羊、馬、兔、大鼠、小鼠等。
如此處使用的，術(shù)語“前藥”是指在生理條件之下或通過溶劑分解可以轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的生物學活性化合物的化合物。因此，術(shù)語“前藥”是指本發(fā)明化合物的藥物學可接受的前體。當向需要其的對象給藥時，前藥可以是非活性的或顯示有限的活性，但在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的活性化合物。通常，前藥在體內(nèi)例如通過經(jīng)酶促的過程在血液或其它器官中水解而轉(zhuǎn)化獲得本發(fā)明的化合物。前藥化合物在對象中常常提供溶解度、組織相容性或延遲釋放的優(yōu)點(參見Bundgard，H.，Design of Prodrugs(1985)，pp.7-9，21-24(Elsevier，Amsterdam))。前藥的定義包括共價地連接的載體，當這種前藥向?qū)ο蠼o藥時在體內(nèi)釋放本發(fā)明的活性化合物。可以通過改變存在于本發(fā)明化合物中的官能團制備，所述改變或以常規(guī)操作或在體內(nèi)分裂為本發(fā)明的母體化合物。
如此處使用的，術(shù)語“藥物學可接受的載體、稀釋劑或賦形劑”是指但不限于任何適用于所述對象優(yōu)選人的輔料(adjuvant)、載體、賦形劑、助流劑、甜味劑、稀釋劑防腐劑、染料/著色劑、增香劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、助懸劑、穩(wěn)定劑、等滲劑(isotonic agent)溶劑、乳化劑，或包封劑(encapsulating agent)如脂質(zhì)體、環(huán)糊精、包封聚合輸送系統(tǒng)(encapsulating polymeric delivery systems)或聚乙二醇基質(zhì)。
如此處使用的，術(shù)語“藥物學可接受的鹽”是指酸加成鹽以及堿加成鹽。
如此處使用的，術(shù)語“藥物學可接受的酸加成鹽”是指那些保持游離堿的生物有效性和性質(zhì)的鹽，它們不是生物學或其它方面不良的，并且是與無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等以及有機酸如乙酸、三氟乙酸、丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、枸櫞酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸等形成的。
如此處使用的，術(shù)語“藥物學可接受的堿加成鹽”是指那些保持游離酸的生物有效性以及性質(zhì)的鹽，它們不是生物學或其他方面不良的。這些鹽是由向游離酸加成無機堿或有機堿制備。源于無機堿的鹽包括但不限于鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽、鋁鹽等。源于有機堿的鹽包括但不限于伯、仲和叔胺、被取代的胺包括天然存在的被取代的胺、環(huán)胺以及堿離子交換樹脂，如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二環(huán)己胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、哈胺(hydrabamine)、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺樹脂等的鹽。
如此處使用的，術(shù)語“BIR域結(jié)合”是指本發(fā)明的化合物對IAP BIR域的作用，其阻滯或削弱IAPs至BIR結(jié)合蛋白的結(jié)合或參與頂替來自IAP的BIR結(jié)合蛋白。BIR結(jié)合蛋白的實例包括但不限于胱天蛋白酶以及線粒體衍生的BIR結(jié)合蛋白如Smac、Omi/WTR2A等。
如此處使用的，術(shù)語“凋亡不足”是指其中疾病是由對所述對象在害的細胞已不凋亡引起的或因此原因而持續(xù)的狀態(tài)。這包括但不局限于未經(jīng)治療而存活在對象中的癌細胞、在抗癌治療期間或之后存活在對象中的癌細胞、或其作用對所述對象在害的免疫細胞，并且包括嗜中性粒細胞、單核細胞以及自體反應(yīng)的T細胞。
如此處使用的，術(shù)語“治療有效量”是指式I或II化合物的量，當將其給藥至對象時足以實現(xiàn)與凋亡不足有關(guān)的疾病狀態(tài)的治療。式I化合物的量將視所述化合物所述疾病及其嚴重程度、以及所要治療的對象的年齡而定，但可以由具有其自身的知識以及了解本發(fā)明公開的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員常規(guī)地確定。
如此處使用的，術(shù)語“治療”是指對此處公開的對象中與凋亡不足有關(guān)的疾病狀態(tài)的治療，其包括(i)防止與凋亡不足有關(guān)的疾病或病癥在對象中發(fā)生，特別是當這種哺乳動物易患所述疾病或病癥但還沒有被診斷為患有其時；(ii)抑制與凋亡不足有關(guān)的疾病或病癥，即阻滯其發(fā)展；或(iii)緩解與凋亡不足有關(guān)的疾病或病癥，即導致所述病癥的消退。
如此處使用的，術(shù)語“治療癌癥”是指向優(yōu)選為人的患有癌癥的對象給藥本發(fā)明的藥物組合物以通過殺死癌細胞、抑制癌細胞的生長、或抑制癌細胞的轉(zhuǎn)移導致癌癥的減輕。
如此處使用的，術(shù)語“預防疾病”在癌癥的情況下是指外科手術(shù)后、化療后或放療后向優(yōu)選為人的患有癌癥的對象給藥本發(fā)明的藥物組合物以通過殺死剩余癌細胞、抑制其生長、或抑制其轉(zhuǎn)移而阻止癌癥的再生。該定義也包括導致疾病如哮喘MS等的促存活條件(prosurvival conditions)的預防。
如此處使用的，術(shù)語“協(xié)同效應(yīng)”是指用本發(fā)明化合物與本發(fā)明的化療藥物或死亡受體激動劑的組合實現(xiàn)的效果高于僅由所述化合物、藥物或激動劑之一得到的效果，或者有利地，由上述化合物、藥物或者激動劑的組合得到的效果高于由單獨地使用各化合物、藥物或者激動劑得到的效果。這種協(xié)同作用使得能夠給予較小的劑量。
如此處使用的，術(shù)語“凋亡”或者“細胞程序死亡”是指其中正在死亡的細胞表現(xiàn)出一組包括細胞膜起泡、細胞體(cell soma)收縮、染色質(zhì)凝聚以及DNA斷裂成梯的特征明顯的生物化學標志的細胞死亡調(diào)節(jié)過程以及任何胱天蛋白酶介導的細胞死亡。
如此處使用的，術(shù)語“BIR域”或者“BIR”在全文中可互換地使用，是指以在序列Cys-(Xaa1)2Cys-(Xaa1)16His-(Xaa1)6-8Cys內(nèi)包括保守的半胱氨酸以及一個保守的組氨酸殘基的若干不變的氨基酸殘基為特征的域。通常，所述共有序列的氨基酸序列是Xaa1-Xaa1-Xaa1-Arg-Leu-Xaa1-Thr-Phe-Xaa1-Xaa1-Trp-Pro-Xaa2-Xaa1-Xaa1-Xaa2-Xaa2-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Leu-Ala-Xaa1-Ala-Gly-Phe-Tyr-Tyr-Xaa1-Gly-Xaa1-Xaa1-Asp-Xaa1-Val-Xaa1-Cys-Phe-Xaa1-Cys-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Trp-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Asp-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-His-Xaa-1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Pro-Xaa1-Cys-Xaa1-Phe-Val，其中Xaa1是任意氨基酸，而Xaa2是任意氨基酸或者不存在。優(yōu)選地，所述氨基酸與此處提供的XIAP、HIAP1或HIAP2的BIR域序列之一基本相同。
所述BIR域殘基列舉如下(參見Genome Biology(2001)1-10)
如此處使用的，術(shù)語“ring鋅手指”或者“RZF”是指具有以下共有序列的氨基酸序列的域Glu-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa-1-Xaa2-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Cys-Lys-Xaa3-Cys-Met-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa3-X-aa1-Phe-Xaa1-Pro-Cys-Gly-His-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Cys-Xaa1-Xaa1-Cys-Ala-Xaa1-Xaa-1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Cys-Pro-Xaa1-Cys，其中Xaa1是任意氨基酸，Xaa2是Glu或Asp，而Xaa3是Val或Ile。
如此處使用的，術(shù)語“IAP”是指由IAP基因編碼的多肽或蛋白或其片段。IAP的實例包括但不限于人或小鼠NAIP(Birc 1)、HIAP-1(cIAP2、Birc 3)、HIAP-2(cIAP1、Birc 2)、XIAP(Birc 4)、survivin(Birc 5)、livin(ML-IAP、Birc 7)、ILP-2(Birc 8)和Apollon/BRUCE(Birc 6)(例如參見第6,107,041、6,133,437、6,156,535、6,541,457、6,656,704、6,689,562號美國專利；Deveraux和Reed，Genes Dev.13，239-252，1999；Kasof和Gomes，J.Biol.Chem.，276，3238-3246，2001；Vucic等，Curr.Biol.10，1359-1366，2000；Ashab等；FEBS Lett.，495，56-60，2001，其內(nèi)容并如此處作為參考)。
如此處使用的，術(shù)語“IAP基因”是指編碼具有至少一個BIR域的多肽并且能夠調(diào)節(jié)(抑制或增強)細胞或組織內(nèi)的凋亡的基因。所述IAP基因為與人或小鼠NAIP(Birc 1)、HIAP-1(cIAP 2、Birc 3)、HIAP-2(cIAP 1、Birc 2)、XIAP(Birc 4)、survivin(Birc 5)、livin(ML-IAP、Birc 7)、ILP-2(Birc 8)和Apollon/BRUCE(Birc 6)中的至少一個具有約50％或更高的核苷酸序列同源性的基因。測定到序列同源性的區(qū)域為編碼至少一個BIR域和ring鋅手指域的區(qū)域。哺乳動物IAP基因包括分離自任何哺乳動物來源的核苷酸序列。
如此處使用的，術(shù)語“IC50”是指最大響應(yīng)達到50％抑制率的特定本發(fā)明化合物的量、濃度或劑量，如在測量所述響應(yīng)的試驗中最大熒光探針結(jié)合置換。
如此處使用的，術(shù)語“EC50”是指達到細胞存活的50％抑制率的特定本發(fā)明化合物的量、濃度或劑量。
如此處使用的，術(shù)語“調(diào)節(jié)”是指使用本發(fā)明的化合物治療、預防、壓制、增強或誘導某功能或條件。例如本發(fā)明的化合物可調(diào)節(jié)對象中的IAP功能，從而通過顯著地減少或基本消除活化的凋亡蛋白如胱天蛋白酶-3、7和9與哺乳動物IAP的BIR域之間的相互作用或者通過誘導細胞中XIAP蛋白的損失增強凋亡。
如此處使用的，術(shù)語“增強凋亡”是指在體外或體內(nèi)增加給定的細胞群體中凋亡的細胞的數(shù)量。細胞群體的實例包括但不限于卵巢癌細胞、結(jié)腸癌細胞、乳腺癌細胞、肺癌細胞、胰腺癌細胞、或T細胞等。應(yīng)當理解，在給定試驗中由本發(fā)明的凋亡增強化合物提供的凋亡增強的程度將變化，但本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠確定凋亡水平的統(tǒng)計學顯著的變化，從而確定能夠增強否則被IAP限制的凋亡。優(yōu)選地，“增強凋亡”是指經(jīng)歷凋亡的細胞數(shù)目的增加為至少25％，更優(yōu)選增加50％，最優(yōu)選增加至少一倍。優(yōu)選地，所監(jiān)控的樣品為正常情況下凋亡不足的細胞樣品(即癌細胞)。檢測凋亡水平(即增強或降低)變化的方法記載于實施例中，包括定量DNA斷裂的方法、定量磷脂酰絲氨酸(phosphatoylserine)自膜的胞質(zhì)側(cè)易位至細胞外側(cè)、胱天蛋白酶活化的測定、以及細胞色素C和凋亡抑制因子通過線粒體釋放入細胞質(zhì)中的定量方法。
如此處使用的，術(shù)語“增殖性疾病”或者“增殖性病癥”是指由過高的細胞分裂水平、過低的凋亡水平或者這兩者導致的疾病。例如，癌癥如淋巴瘤、白血病、黑素瘤、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、及肺癌，以及自身免疫性疾病都是增殖性疾病的實例。
如此處使用的，術(shù)語“死亡受體激動劑”是指能夠通過直接或間接接觸而刺激由死亡受體介導的促凋亡反應(yīng)的物質(zhì)。例如，激動劑TRAIL受體抗體將與TRAIL受體結(jié)合并誘發(fā)凋亡反應(yīng)。另一方面，其他物質(zhì)如干擾素-a會誘發(fā)內(nèi)源性TRAIL的釋放和/或以擴大細胞促凋亡反應(yīng)的方式上調(diào)TRAIL受體。
本發(fā)明的化合物或其藥物學可接受的鹽可以含有一個或多個不對稱中信，手性軸和手性平面，并且可因此產(chǎn)生對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體以及其他立體異構(gòu)形式，并且可根據(jù)絕對立體化學定義，例如定義為(R)-或(S)-或氨基酸定義為(D)-或(L)-。本發(fā)明意圖包括所有的這種可能的異構(gòu)體以及它們的外消旋體和光學純的形式。光學活性(+)和(-)、(R)-和(S)-、或(D)-和(L)-異構(gòu)體可使用手性合成子或手性試劑制備，或使用常規(guī)技術(shù)如反相HPLC拆分?？梢灾苽渫庀w混合物并隨后分離為單獨的光學異構(gòu)體，或者可以通過手性合成制備這些光學異構(gòu)體?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法拆分對映異構(gòu)體，例如通過形成非對映異構(gòu)體鹽并隨后通過結(jié)晶、氣相-液相或這液相色譜、一種對映異構(gòu)體與對映異構(gòu)體特異性試劑的選擇性反應(yīng)分離。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解，在將所需的對映異構(gòu)體通過分離技術(shù)轉(zhuǎn)化為另一種化學物質(zhì)的情況下，則需要額外的步驟以生成所需的對映異構(gòu)體形式?；蛘撸梢酝ㄟ^使用光學活性試劑、底物、催化劑、或者溶劑不對稱合成或者通過不對稱轉(zhuǎn)換將一種對映異構(gòu)體轉(zhuǎn)化為另一種而合成特定的對映異構(gòu)體。
本發(fā)明的某些化合物可以兩性離子形式存在，并且本發(fā)明包括這些化合物的兩性離子形式以及其混合物。
應(yīng)用 本發(fā)明的化合物可用作IAP BIR域結(jié)合化合物，從而本發(fā)明的化合物、組合物以及方法包括用于患有或者易患以凋亡不足為特征的特定疾病的細胞或者對象的應(yīng)用。因此，本發(fā)明的化合物、組合物和方法用于治療細胞增殖性疾病/病癥，包括但不限于i)癌癥，ii)自身免疫性疾病，iii)炎性疾病，iv)醫(yī)學過程包括但不限于外科手術(shù)、血管成形術(shù)等之后誘導的增殖。
本發(fā)明的化合物也可用于治療其中細胞程序性死亡或凋亡機制(TRAIL、FAS、凋亡體)中存在缺陷的疾病，如多發(fā)性硬化癥、動脈粥樣硬化(artherosclerosis)、炎癥、自身免疫等。
所述治療包括向有此需要的對象給藥本發(fā)明的化合物、或者其藥物學可接受的鹽、或者包含藥物載體和治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥物學可接受的鹽的藥物組合物。
特別地，本發(fā)明的化合物、組合物和方法可用于治療包括實體瘤的癌癥，例如皮膚、乳房、腦部、肺部、睪丸癌等?？赏ㄟ^本發(fā)明的化合物、組合物和方法治療的癌癥包括但不限于以下 本發(fā)明化合物或其藥物學可接受的鹽或它們的前藥可以純的形式或者在適宜的藥物組合物中給藥，并且可以通過任何被接受的蓋倫藥物實踐(Galenic pharmaceuticalpractice)實施。
本發(fā)明的藥物組合物可以通過將本發(fā)明的化合物與適宜的藥物學可接受的載體、稀釋劑或賦形劑混合制備，并且可以配制為固體、半固體、液體或者氣體制劑，如片劑、膠囊、粉末、顆粒、軟膏、溶液劑、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠劑、微球以及氣霧劑。這種藥物組合物的典型的給藥途徑包括但不限于口服、非胃腸道(皮下注射、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、胸骨內(nèi)(intrasternal)注射或輸注技術(shù))、舌下、眼部、直腸、陰道以及鼻內(nèi)。本發(fā)明的藥物組合物被配制為允許其中所含的活性成分在將所述組合物給藥至對象時為可生物利用的。將給藥至對象或者患者的組合物采取一個或多個劑量單位的形式，其中例如片劑可以為單個劑量單位，而氣霧劑形式的本發(fā)明化合物的容器可以容納多個劑量單位。制備這種劑型的現(xiàn)行方法是已知的，或者對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是明顯的；例如參見Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th Ed.，(MackPublishing Company，Easton，Pa.，1990)。將要給藥的組合物總是含有用于治療如上所述的疾病的治療有效量的本發(fā)明的化合物或其藥物學可接受的鹽。
本發(fā)明的藥物組合物可以為固體或者液體的形式。在一個方面，載體為顆粒狀的，從而所述組合物為例如片劑或者散劑形式。載體可以是液體，從而所述組合物為例如口服糖漿劑、可注射液體或者可用于例如吸入給藥的氣霧劑。
對于口服給藥而言，所述藥物組合物優(yōu)選為固體或者液體形式，其中半固體、半液體、混懸劑以及凝膠形式均包括在此處被認為是固體或者液體的形式中。
作為用于口服給藥的固體組合物，所述藥物組合物可配制為散劑、顆粒劑、壓制片劑、丸劑、膠囊劑、咀嚼劑、包藥干糊片(wafer)等劑型。這種固體組合物通常將含有一種或多種惰性稀釋劑或者可食用的載體。此外，可存在以下物質(zhì)中的一種或多種粘合劑如羧甲基纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素、西黃蓍膠或者明膠；賦形劑如淀粉、乳糖或者糊精；崩解劑如海藻酸、海藻酸鈉、Primogel、玉米淀粉等；潤滑劑如硬脂酸鎂或者Sterotex；助流劑如膠態(tài)二氧化硅；甜味劑如蔗糖或者糖精；調(diào)味劑如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑；以及著色劑。
當所述藥物組合物為膠囊形式例如明膠膠囊時，其除上述類型的物質(zhì)外可包含液體載體如聚乙二醇或者油如大豆油或者植物油。
所述藥物組合物可以為液體的形式，例如為酏劑、糖漿劑、溶液劑、乳劑或者混懸劑。作為兩個實例，所述液體可以用于口服給藥或者用于通過注射給藥。當意欲用于口服給藥時，優(yōu)選的組合物除本發(fā)明化合物外還包含一種或多種甜味劑、防腐劑、染料/著色劑以及增香劑。在意欲通過注射給藥的組合物中，可以包含一種或多種表面活性劑、防腐劑、潤濕劑、分散劑、助懸劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑和等滲劑。
本發(fā)明的液體藥物組合物，無論它們?yōu)槿芤簞⒒鞈覄┗蛘咂渌愃频膭┬?，均可包含一種或多種以下輔料滅菌稀釋劑如注射用水、鹽水溶液優(yōu)選生理鹽水、林格氏溶液、等滲氯化鈉、可用作溶劑或者助懸介質(zhì)的不揮發(fā)性油如合成單酸或二酸甘油酯、聚乙二醇、甘油、丙二醇或者其他溶劑；抗菌劑如苯甲醇或羥苯甲酸甲酯；包封劑如環(huán)糊精或者官能團化的環(huán)糊精，包括但不限于α、β或δ-羥基丙基環(huán)糊精或者Captisol；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸；緩沖劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽、或者磷酸鹽以及用于調(diào)節(jié)滲透壓的物質(zhì)如氯化鈉或葡萄糖。非胃腸道制劑可以被封閉于玻璃或者塑料安瓿、一次性注射器或者多劑量小瓶中?？勺⑸渌幬锝M合物優(yōu)選是無菌的。
用于非胃腸道給藥或者口服給藥的本發(fā)明的液體藥物組合物應(yīng)當含有能夠得到合適的劑量的量的本發(fā)明化合物。通常，該量為組合物中含至少0.01％的本發(fā)明化合物。當欲用于口服給藥時，該量可以在組合物重量的0.1至約70％之間變化。對于非胃腸道應(yīng)用，本發(fā)明的組合物和制劑制備為非胃腸道劑量單位包含0.01至10重量％的本發(fā)明化合物。藥物組合物可以進一步在給藥時稀釋；例如非胃腸道劑型可以進一步用無菌、等滲注射溶液如0.9％鹽水、5重量％葡萄糖(D5W)、林格氏溶液或其他物質(zhì)稀釋。
本發(fā)明的藥物組合物可用于局部給藥，在這種情況下，載體可合適地包括溶液劑、乳劑、軟膏劑或者凝膠基質(zhì)。所述基質(zhì)例如可包含一種或者多種以下物質(zhì)軟石蠟、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油，稀釋劑如水和醇，以及乳化劑和穩(wěn)定劑。增稠劑可存在于用于局部給藥的藥物組合物中。如果意欲用于透皮給藥，則所述組合物可包括透皮貼劑或者離子電滲裝置。局部劑型可以含有約0.1至約10％w/v(以每單位體積的重量計)濃度的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明的藥物組合物可以為例如將在直腸融化并釋放藥物的栓劑的形式用于直腸給藥以治療例如結(jié)腸癌。用于直腸給藥的組合物可以含有油脂基質(zhì)作為適宜的非刺激性賦形劑。這種基質(zhì)包括但不限于羊毛脂、可可脂和聚乙二醇。
本發(fā)明的藥物組合物可以包括調(diào)節(jié)固體或者液體劑量單位的物理形式的各種物質(zhì)。例如，所述組合物可以包含在活性成分周圍形成包覆殼的物質(zhì)。所述形成包覆殼的物質(zhì)通常是惰性的，并且可選自例如糖、蟲膠、以及其他腸溶包衣劑?；蛘?，所述活性成分可以被裝在明膠膠囊中。
固體或者液體形式的本發(fā)明藥物組合物可以包括與本發(fā)明化合物結(jié)合并從而有助于所述化合物的傳遞的物質(zhì)。具有這種能力的合適的物質(zhì)包括但不限于單克隆或多克隆抗體、蛋白質(zhì)或者脂質(zhì)體。
本發(fā)明的藥物組合物可由能夠作為氣霧劑給藥的劑量單位構(gòu)成。術(shù)語“氣霧劑”是指包括由那些膠體性質(zhì)的系統(tǒng)至由加壓的包裝構(gòu)成的系統(tǒng)的各種系統(tǒng)。傳遞可以通過液化的或者加壓的氣體或者通過能夠分配活性成分的適宜的泵系統(tǒng)進行。本發(fā)明化合物的氣霧劑可以單相、雙相或三相系統(tǒng)中傳遞以傳遞所述活性成分。氣霧劑的傳遞包括必須的容器、激活劑、閥、次容器等，它們可以一同形成藥盒。本領(lǐng)域技術(shù)人員無需過度的試驗即可確定優(yōu)選的氣霧劑。
本發(fā)明的藥物組合物可以通過制藥領(lǐng)域公知的方法制備。例如，意欲用于通過注射給藥的藥物組合物可以通過將本發(fā)明的化合物與無菌蒸餾水混合形成溶液而制備?？梢约尤氡砻婊钚詣┮源龠M均質(zhì)溶液或者懸浮液的形成。表面活性劑是非共價地與本發(fā)明的化合物相互作用以促進所述化合物在含水傳遞系統(tǒng)中的溶解或者均質(zhì)懸浮的化合物。
本發(fā)明的化合物或其藥物學可接受的鹽以治療有效的量給藥，所述量將取決于各種因素，包括所采用的特定化合物的活性；所述化合物的代謝穩(wěn)定性和作用長度；患者的年齡、體重、整體健康狀況、性別以及飲食；給藥的模式和時間；排泄率；藥物組合；特定疾病或病癥的嚴重性；以及接受治療的對象。通常，治療有效的日劑量可為約0.1mg至約40mg/kg體重每日或者每日兩次本發(fā)明的化合物或者其藥物學可接受的鹽。
聯(lián)合治療 本發(fā)明的化合物或其藥物學可接受的鹽也可在給藥一種或多種下述治療藥物的同時、之前或者之后給藥。這種聯(lián)合治療可包括給藥包含本發(fā)明化合物以及一種或多種下述其他藥物的單一藥物劑量制劑，以及以其各自的藥物劑量制劑給藥本發(fā)明的化合物以及各種其他藥物。例如本發(fā)明化合物和化療藥物如taxol(紫杉醇)、taxotere、依托泊苷、順鉑、長春新堿、長春堿等可一同在一個口服劑量組合物如片劑或膠囊劑中給藥至患者，或者各藥物在單獨的口服劑量制劑中或者通過靜脈內(nèi)注射給藥。但采用單獨的劑量制劑時，本發(fā)明化合物與一種或多種其他藥物可以在基本上相同的時間即同時給藥，或者在分別交錯的時間即順序給藥；應(yīng)當理解聯(lián)合治療包括所有這些治療方案。此外，這些化合物可以與能夠以直接或間接的方式刺激死亡受體凋亡途徑的分子協(xié)同，例如，本發(fā)明化合物可以與可溶性TRAIL任何能夠?qū)е耇RAIL循環(huán)水平升高的物質(zhì)或者方法如干擾素α或放射聯(lián)合應(yīng)用。
因此，本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物與放療或者一種或多種如WO 03/099211(PCT/US03/15861)中所述的其他藥物的聯(lián)合應(yīng)用，將該文獻并入此處作為參考。
這種其他藥物的實例包括但不限于以下 a)雌激素受體調(diào)節(jié)劑， b)雄激素受體調(diào)節(jié)劑， c)類視黃醇受體調(diào)節(jié)劑， d)細胞毒性劑， e)抗增殖劑， f)異戊二烯基-蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑， g)HMG-CoA還原酶抑制劑， h)HIV蛋白酶抑制劑， i)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑， k)血管發(fā)生抑制劑， l)PPAR-γ激動劑， m)PPAR-δ激動劑， n)固有的多抗藥性的抑制劑， o)止吐劑， p)可用于治療貧血的藥物， q)可用于治療嗜中性白血球減少癥的藥物， r)免疫促進劑， s)蛋白酶體抑制劑，如Velcade和MG132(7-Leu-Leu-醛)(參見He等，Oncogene(2004)23，2554-2558)， t)HDAC抑制劑，如丁酸鈉、苯基丁酸鹽/酯(phenyl butyrate)、異羥肟酸(hydroamicacids)、細胞周期蛋白四肽(cyclin tetrapeptide)等(參見Rosato等，Molecular CancerTherapeutics 2003，1273-1284)， u)蛋白酶體中化學胰蛋白酶樣活性的抑制劑， v)E3連接酶抑制劑， w)免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)劑例如干擾素-α、以及能夠誘導細胞因子如各種干擾素、TNF釋放或誘導死亡受體配體如TRAIL釋放的電離輻射(UVB)， x)死亡受體TRAIL調(diào)節(jié)劑和和TRAIL激動劑如人源化抗體HGS-ETR1和HGS-ETR2；以及 或與放療組合或者順序地組合以治療癌癥。
其他的組合也可包括降低前述藥物的毒性例如肝毒性、神經(jīng)毒性、腎毒性等的藥物。
在一個實例中，本發(fā)明式I化合物之一與死亡受體激動劑如TRAIL，如模擬TRAIL的小分子或者抗體的聯(lián)合給藥可帶來協(xié)同效果的益處。此外，本發(fā)明化合物可與任何導致TRAIL循環(huán)水平提高的化合物聯(lián)合應(yīng)用。
長春花生物堿和相關(guān)的化合物 可與本發(fā)明的核堿基寡聚物聯(lián)合應(yīng)用以治療癌癥和其他瘤的長春花生物堿包括長春新堿、長春堿、長春地辛、長春氟寧、長春瑞濱和脫水長春堿。
海兔毒素(dolastatins)為主要在長春花生物堿結(jié)合域干擾微管蛋白的寡肽。這些化合物也可與本發(fā)明的化合物組合應(yīng)用以治療癌癥及其他瘤。海兔毒素包括海兔毒素-10(NCS 376128)、海兔毒素-15、ILX651、TZT-1027、symplostatin 1、symplostatin 3、和LU103793(西馬多丁)。
Cryptophycins(例如cryptophycin 1和cryptophycin 52(LY355703))在長春花生物堿結(jié)合域內(nèi)結(jié)合微管蛋白并誘導G2/M阻滯和凋亡。任何這些化合物均可與本發(fā)明化合物組合應(yīng)用以治療癌癥和其他瘤。
可與本發(fā)明化合物組合應(yīng)用以治療癌癥和其他瘤的其他微觀干擾型化合物記載于U.S.專利6,458,765；6,433,187；6,323,315；6,258,841；6,143,721；6,127,377；6,103,698；6,023,626；5,985,837；5,965,537；5,955,423；5,952,298；5,939,527；5,886,025；5,831,002；5,741,892；5,665,860；5,654,399；5,635,483；5,599,902；5,530,097；5,521,284；5,504,191；4,879,278；及4,816,444，以及U.S.專利申請公開2003/0153505 A1；2003/0083263 A1；以及2003/0055002 A1，將其分別引入此處作為參考。
紫杉烷類(Taxanes)以及其他微管穩(wěn)定化合物 紫杉烷類如紫杉醇、doxetaxel、RPR 109881A、SB-T-1213、SB-T-1250、SB-T-101187、BMS-275183、BRT216、DJ-927、MAC-321、IDN5109、和IDN5390可與本發(fā)明化合物組合應(yīng)用以治療癌癥和其他瘤。紫杉烷類似物(例如BMS-184476、BMS-188797)以及功能相關(guān)的非紫杉烷類(例如埃博霉素(例如埃博霉素A、埃博霉素B(EPO906)、脫氧埃博霉素B以及埃博霉素B內(nèi)酰胺(BMS-247550))、eleutherobin、discodermolide、2-epi-discodermolide、2-des-甲基discodermolide、5-羥基甲基discodermolide、19-des-氨基羰基discodermolide、9(13)-cyclodiscodermolide以及l(fā)aulimalide)也可用于本發(fā)明方法和組合物中。
可與本發(fā)明化合物組合用于治療癌癥和其他瘤的其他微管穩(wěn)定化合物記載于美國專利6,624,317；6,610,736；6,605,599；6,589,968；6,583,290；6,576,658；6,515,017；6,531,497；6,500,858；6,498,257；6,495,594；6,489,314；6,458,976；6,441,186；6,441,025；6,414,015；6,387,927；6,380,395；6,380,394；6,362,217；6,359,140；6,306,893；6,302,838；6,300,355；6,291,690；6,291,684；6,268,381；6,262,107；6,262,094；6,147,234；6,136,808；6,127,406；6,100,411；6,096,909；6,025,385；6,011,056；5,965,718；5,955,489；5,919,815；5,912,263；5,840,750；5,821,263；5,767,297；5,728,725；5,721,268；5,719,177；5,714,513；5,587,489；5,473,057；5,407,674；5,250,722；5,010,099；和4,939,168；以及U.S.專利申請公開2003/0186965 A1；2003/0176710 A1；2003/0176473 A1；2003/0144523 A1；2003/0134883 A1；2003/0087888 A1；2003/0060623 A1；2003/0045711 A1；2003/0023082A1；2002/0198256 A1；2002/0193361 A1；2002/0188014 A1；2002/0165257 A1；2002/0156110 A1；2002/0128471 A1；2002/0045609 A1；2002/0022651 A1；2002/0016356A1；2002/0002292 A1，將其分別引入本文作為參考。
其他可與本發(fā)明的化合物一同給藥的化療藥物列于下表
其他的組合也可包括降低前述藥物的毒性例如肝毒性、神經(jīng)毒性、腎毒性等的藥物。
篩選試驗 本發(fā)明化合物也可用于篩選其他與IAP BIR域結(jié)合的化合物的方法中。大體而言，將IAP結(jié)合在載體(support)上并將本發(fā)明化合物加入試驗中以將本發(fā)明化合物用于鑒別結(jié)合至IAP BIR域的化合物的方法中。或者，可以將本發(fā)明化合物結(jié)合至載體上并加入IAP。
有若干方法用于確定本發(fā)明化合物與BIR域的結(jié)合。在一種方法中，例如可將本發(fā)明化合物熒光或者放射性標記并直接測定結(jié)合。例如，可以通過將IAP連接至固體載體上、加入可檢測地標記的本發(fā)明化合物、洗去過量的試劑、并且測定可檢測標記的量是否是否在于固體載體上的量來實施上述方法?？墒褂枚喾N封閉(blocking)和洗滌步驟，這些是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。
在某些情況下，僅標記一種成分。例如，可以標記BIR域中的特定殘基。或者可以用不同的標記標記多于一種的成分；例如使用I125標記BIR域，使用熒光標記標記探針。
本發(fā)明的化合物可用作篩選其他候選藥物或者受試化合物的競爭劑。如此處使用的，術(shù)語“候選藥物”或者“受試化合物”可互換地使用，表示要測試生物活性的任何分子例如蛋白質(zhì)、寡肽、小的有機分子、多糖、多核苷酸等。所述化合物可能能夠直接或者間接地改變IAP生物活性。
候選藥物可包括各種化學種類，盡管通常它們都是分子量高于100并小于約2500道爾頓的小的有機分子。候選藥物通常包括與蛋白質(zhì)在結(jié)構(gòu)上相互作用必須的官能團，例如氫鍵和親脂性結(jié)合，并且通常包括至少胺、羰基、羥基、醚、或者羧基基團。所述候選藥物通常包括被一個或多個官能團取代的環(huán)狀碳結(jié)構(gòu)或者雜環(huán)結(jié)構(gòu)和/或芳香或多芳香結(jié)構(gòu)。
候選藥物可以得自任意數(shù)量的來源，包括合成或天然化合物庫。例如許多手段可用于隨機和定向合成廣泛的有機化合物和生物分子，包括隨機化的寡核苷酸的表達?；蛘?，細菌、真菌、植物和動物提取物形式的天然化合物庫是可用的或者易于制備的。此外，天然或者合成制備的庫和化合物易于通過常規(guī)的化學、物理和生物化學手段修飾。
可以通過在第一樣品中將IAP BIR域和探針結(jié)合以形成探針BIR域復合物然后將來自第二樣品的受試化合物加入來進行競爭性篩選試驗。測定所述試驗的結(jié)合，在兩樣品之間的結(jié)合的變化或者差異表示存在能夠與BIR域結(jié)合并潛在地調(diào)節(jié)IAP活性的受試化合物。
在一種情況下，受試化合物的結(jié)合通過使用競爭性結(jié)合試驗測定。在這種實施方案中，用熒光標記標記探針。在某些情況下，受試化合物和探針之間可能存在競爭性結(jié)合。導致與對照相比熒光的變化的顯示出探針的受試化合物被認為與BIR域結(jié)合。
在一種情況下，受試化合物可以被標記?；蛘呤茉嚮衔铩⒒蛘弑景l(fā)明化合物、或者兩者均被首先加至IAP BIR域一段足以結(jié)合形成復合物的時間。
考慮到高通量篩選，探針BIR域復合物的形成通常需要在4℃至40℃之間溫育10分鐘至約1小時。通常除去或者洗去任何過量的試劑。然后加入受試化合物，然后是存在或者不存在的標記的成分，以指示至BIR域的結(jié)合。
在一種情況下，首先加入所述探針，然后加入受試化合物。探針的置換是受試化合物與BIR域結(jié)合并因此能夠結(jié)合至并潛在地調(diào)節(jié)IAP的活性的標志。可標記任一種成分。例如，在洗液中存在探針表明被受試化合物置換?；蛘?，如果受試化合物被標記，在載體上存在的探針表明發(fā)生了置換。
在一種情況下，可以首先加入受試化合物，溫育并洗滌，然后加入探針。沒有被探針結(jié)合可能表明受試化合物以更高的親和力與BIR域結(jié)合。因此，如果在載體上檢測到探針，并且沒有與受試化合物結(jié)合，則可能表明所述受試化合物能夠與BIR域結(jié)合。
通過篩選受試化合物調(diào)節(jié)IAP活性的能力而進行調(diào)節(jié)試驗，調(diào)節(jié)試驗包括如上所述將受試化合物與IAP BIR域結(jié)合，并測定IAP生物活性的變化。因此在這種情況下，受試化合物應(yīng)當既與BIR域結(jié)合(盡管這并非是必須的)又如上所述改變其生物活性。
在所述試驗中可使用陽性對照以及陰性對照。所有的對照和受試樣品均進行多次以獲得統(tǒng)計學顯著性結(jié)果。在溫育后，洗滌樣品除去非特異性結(jié)合的物質(zhì)并測定結(jié)合的探針的量。例如，在使用放射性標記的情況下，可以在閃爍計數(shù)器中對所述樣品計數(shù)以測定結(jié)合的化合物的量。
通常，取決于標記的性質(zhì)，在試驗中檢測的信號可能包括熒光、能量共振轉(zhuǎn)移、時間分辨熒光、放射活性、熒光偏振、等離子體共振、或者化學發(fā)光等。可用于進行本發(fā)明篩選試驗的可檢測的標記包括熒光標記如熒光素、俄勒岡綠(Oregon green)、丹磺酰、羅丹明、四甲基羅丹明、德州紅、Eu3+；化學發(fā)光標記如熒光素酶；比色標記；酶標記物；或者放射性同位素如氘、I125等。
可用于進行本發(fā)明的篩選試驗的親和標簽包括生物素、聚組氨酸等。
合成以及方法學 以下所示為用于合成本發(fā)明化合物的通用方法，公開這些方法僅用于舉例說明的目的，并非意欲對通過任何其他方法制備所述化合物的工藝晶型限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易理解，有許多方法可用于制備本發(fā)明化合物。
通用步驟 可以預想用于制備由式I和式II代表的對稱或者不對稱地橋連的化合物的若干方法。在路線1至8以及路線17至20中圖示了通用方法，而在路線9至16以及路線21至26中圖示了具體的實例。
路線1圖示了用于制備式I的雙炔基橋連的化合物的通用程序。用NaH將N-PG1-2-羥基脯氨酸脫質(zhì)子化，并用炔丙基溴處理以提供脯氨酸中間體1-i。用肽偶聯(lián)劑活化1-i的羧酸并用伯胺或者仲胺處理，并將PG1脫保護以提供酰胺中間體1-ii。通過用肽偶聯(lián)劑活化PG2(H)N(R3)CHCO2H的羧酸，然后加入1-ii以提供完全保護的酰胺，從而實現(xiàn)PG2(H)N(R3)CHCO2H與1-ii的肽偶聯(lián)，其可以進一步在PG2脫保護以提供酰胺1-iii。用肽偶聯(lián)劑活化PG3(R1)N(R2)CHCO2H的羧酸，然后加入1-iii以提供酰胺中間體1-iv。使用合適的催化劑系統(tǒng)通過1-iv的炔部分的自身偶聯(lián)(homo-coupling)制備雙炔基橋連部分，然后脫保護PG3以提供化合物1-v。

路線1 如路線2中所示，通過典型的酰胺偶聯(lián)/脫保護路線制備中間體2-i。如此，用氨基酸偶聯(lián)試劑活化PG1-順-2-氨基-Pro(PG2)-OH的羧酸部分，用胺處理以提供相應(yīng)的酰胺，然后在合適的反應(yīng)條件下脫去PG1以提供中間體2-i。以類似的方式，PG3(H)N(R3)HCCO2H與2-i偶聯(lián)，然后脫保護PG3以提供2-ii。PG4(R1)N(R2)HCCO2H與2-ii偶聯(lián)以提供2-iii。脫保護PG2提供2-iv。

路線2 路線3圖示了式I的酰胺橋連的化合物可以通過在堿的存在下用合適地活化的二酸處理3-i以提供3-ii制備。PG4脫保護提供通式3-iii的化合物。二酸的活化可以包括活性酯、酰氯、酰溴、琥珀酰胺酯、HOBt酯的使用，以及用于酰胺鍵形成中的其他試劑的使用。

L＝-(CH2)r-、-(CH2)r-Y-(CH2)r-、-烷基-芳基-烷基-、-烷基-雜芳基-烷基-、環(huán)烷基、芳基或雜芳基、其中r為1-10 路線3 路線4圖示了烷基橋連的化合物，其可以使用如上所述的方法制備。用0.5當量的含有兩個離去基團的烷基鏈如1，5-二溴戊烷、1，10-二溴癸烷等處理3-i提供中間體4-i。或者，用二醛還原氨基化3-i可以得到中間體4-i。脫保護PG4得到式4-ii的化合物。

路線4 路線5圖示了一種其中兩個BIR結(jié)合單元可以通過雙乙炔橋連單元橋連的方法。5-i和5-ii的偶聯(lián)提供對稱地橋連的中間體5-iii和5-v以及不對稱的中間體5-iv的混合物?？梢酝ㄟ^如色譜法或者重結(jié)晶的方法分離5-ii、5-iii以及5-v。脫保護單獨的中間體5-iii、5-iv和5-v或者其混合物提供化合物5-vi、5-vii和5-viii。

路線5中間體5-i和5-ii的偶聯(lián) 路線6中所示為用于制備不對稱地橋連的化合物的另一種方法。偶聯(lián)5-i和6-i將提供中間體6-ii、5-iii和6-iii的混合物?？梢酝ㄟ^如色譜法或者重結(jié)晶的方法分離6-ii、5-iii和6-iii。中間體6-iii的PG4脫保護提供化合物6-iv。

路線6中間體5-i和6-i的偶聯(lián) 另一種策略包括如路線7和8中所示的通過雙酰胺橋連基團橋連兩個BIR結(jié)合單元。
用肽偶聯(lián)劑活化單保護的橋連基團HO2C-L-CO2PG5，隨后用中間體3-i處理以提供中間體7-ii。PG5脫保護提供中間體7-iii。用肽偶聯(lián)劑然后用7-iv處理7-iii提供7-v。PG4和PG400脫保護提供化合物7-vi。

路線7P3-P3雙-酰胺橋連的化合物 如路線8中所示，類似的方法可用于制備在P2和P3之間被橋連的不對稱地橋連的BIR結(jié)合單元。用環(huán)酸酐如琥珀酸酐或戊二酸酐處理8-i提供中間體8-ii。用酰胺偶聯(lián)劑然后用3-i處理8-ii提供中間體8-iii。PG4脫保護提供化合物8-iv。

路線8P2-P3雙-酰胺橋連的化合物 路線9圖示了化合物1的合成。用在DMF中的NaH然后用炔丙基溴處理Boc-順-2-羥基-L-脯氨酸以提供中間體9-1。與(R)-1，2，3，4-四氫-1-萘胺進行酰胺偶聯(lián)，并用TFA使Boc脫保護提供中間體9-2。Boc-叔-BuGly-OH與9-2酰胺偶聯(lián)，然后用TFA使Boc脫保護提供中間體9-3。Boc-MeAla-OH與中間體9-3的酰胺偶聯(lián)提供中間體9-4。使用CuI/TMEDA催化劑在O2下自身偶聯(lián)9-4的乙炔基團得到中間體9-5，然后使用在1-4二噁烷中的4N HCl脫保護提供化合物1·2HCl。

路線9 中間體10-6用于化合物2和3的制備中(參見路線10至12)。使用與中間體9-4所述的類似的程序在第一步中使用Fmoc-AMPC(2S，4S)-OH制備中間體10-5。使用堿如20％嗎啉在溶劑如THF中除去Fmoc保護基提供中間體10-6。

路線10 在THF中使用0.5當量的癸二酰氯處理中間體10-6提供11-1。使用4N在1，4-二噁烷中的HCl除去Boc保護基提供化合物2·2HCl(路線11)。

路線11 類似地，在THF中使用0.5當量對苯二酰氯處理中間體10-6提供12-1。使用1N在1，4-二噁烷中的HCl除去Boc保護基提供化合物3·2HCl(路線12)。

路線12 路線13圖示了化合物4和5的制備。在丙酮中使用CuCl和TMEDA催化劑系統(tǒng)在氧氣氛下偶聯(lián)中間體9-4和13-1以提供中間體9-5、13-2以及13-3的混合物。硅膠色譜分離提供各單獨的中間體。使用4N在1，4-二噁烷中的HCl處理單獨地使中間體13-2和13-3脫保護，分別得到化合物4·2HCl和5·2HCl。

路線13化合物4和5的合成 路線14圖示了化合物6的制備。在丙酮中使用CuCl和TMEDA催化劑系統(tǒng)在氧氣氛下偶聯(lián)中間體9-4和14-1。通過硅膠色譜從所得的混合物中分離中間體14-2。使用4N在1，4-二噁烷中的HCl處理使中間體14-2脫保護以提供化合物6·2HCl。

路線14 路線15圖示了P2-P3橋連的化合物7和8的制備。用戊二酸酐處理中間體15-1以提供中間體15-2。用HBTU、HOBt和DIPEA處理15-2，然后加入DMF中的10-6，得到中間體15-3。使用H2在Pd/C上除去Cbz保護基得到中間體15-4。用Boc-N-MeAla-OH?；?5-4提供中間體15-5，使用4N在1，4-二噁烷中的HCl除去其Boc保護基提供化合物7·2HCl。


路線15 使用以聚苯乙烯作為載體的N-甲基哌嗪在DMF中除去化合物7·2HCl的Fmoc保護基提供化合物8。使用4N在1，4-二噁烷中的HCl除去中間體15-3的Boc保護基提供化合物9·HCl(參見路線16)。

路線16 路線17圖示了由磺酰胺鍵橋連的化合物的合成。用二磺酰氯試劑處理3-i提供中間體17-i。PG4脫保護提供化合物17-ii。

路線17 類似地，用雙-異氰酸酯處理3-i提供中間體18-i，其在脫保護PG4后得到化合物18-ii。

路線18 路線19a和19b描述了制備其中A＝CO且Q＝NR4R5的化合物3-iii、17-ii或18-ii的可供替換的路線。用LG-L-LG處理被保護的氨基-脯氨酸衍生物19-1以提供中間體19-2，然后在PG1脫保護得到中間體19-3。通過如前所述的氨基酸偶聯(lián)/脫保護程序?qū)⒅虚g體19-3轉(zhuǎn)化為中間體19-5。第三個氨基酸偶聯(lián)步驟將中間體19-5轉(zhuǎn)化為中間體19-6。19-6在PG2脫保護得到二酸中間體19-7。用氨基酸偶聯(lián)試劑、然后用R4R5NH處理19-7得到中間體19-8，脫保護PG4后得到化合物19-9。

路線19a
路線19b 該方法可用于合成橋連的雙-脯氨酸酰胺、磺酰胺和脲。例如，在其中橋連基團包括Ar部分的情況下，X-L-X＝-NHS(O)2-Ar-S(O)2NH-、NHC(O)-Ar-C(O)NH-、或-NHC(O)NH-Ar-NHC(O)NH-、-O-CH2ArCH2-O-。
或者，脯氨酸衍生物19-2可以在PG2脫保護并轉(zhuǎn)化為酰胺中間體20-3。在如上所述的類似的程序后，20-3可被轉(zhuǎn)化為化合物19-9。


路線20 路線21中圖示了化合物20的合成。用對苯二酰氯處理N-Boc-順-4-氨基-L-脯氨酸甲酯(21-1)以提供中間體21-2，將其用TFA進一步脫保護得到中間體21-3。用HBTU和HOBt使中間體21-3與Boc-叔-BuGyl-OH(21-4)偶聯(lián)，然后用TFA脫保護以提供中間體21-6。使用HBTU和HOBt使中間體21-6與Boc-N-MeAla-OH(21-7)偶聯(lián)以提供中間體21-8。使用LiOH皂化甲酯以提供中間體21-9。使用HBTU和HOBt使中間體21-9與苯乙胺偶聯(lián)提供中間體21-10，將其用在1，4-二噁烷中的HCl脫保護以提供化合物20·2HCl。


路線21 該方法用于制備許多脯氨酸酰胺衍生物如化合物19至24以及46至51。該方法如路線22中所示，其中，中間體21-9與2-丙酰胺偶聯(lián)，然后HCl脫保護得到化合物22·2HCl，而中間體21-9與1，1-二苯基甲胺偶聯(lián)然后用HCl脫保護提供化合物24·2HCl。

路線22 吡咯烷衍生物的制備如路線23中所述。將中間體21-8的酯部分還原為醇23-1，然后將其氧化為醛23-2。使用苯乙胺還原氨化提供中間體23-4。用乙酰氯或芐酰氯?；?3-4分別提供23-3和23-6。使用1N在1，4-二噁烷中的HCl脫保護提供化合物25·2HCl和27·2HCl。

路線23a
路線23b 用甲磺酰氯磺酰化23-4，然后使用1N在1，4-二噁烷中的HCl脫保護提供化合物26·2HCl。
中間體24-1提供了可用于制備醚橋連的化合物的有用的模板。如下文所述，由N-Boc-順-4-羥基-L-脯氨酸和α，α’-二溴-p-二甲苯制備中間體24-1。酰胺偶聯(lián)并用TFA脫去Boc保護基得到中間體24-3。如上所述的兩連續(xù)的氨基酸偶聯(lián)和脫保護步驟提供化合物29·2HCl。


路線24 使用1，3-苯二磺酰氯橋連中間體10-6得到中間體25-1。使用4N在1，4-二噁烷中的HCl脫保護提供化合物33，為其二-HCl鹽。

路線25 類似地，使用1，4-苯二異氰酸酯橋連中間體10-6得到中間體26-1，其在用TFA脫保護后得到化合物44，為二-TFA鹽。

路線26 路線27中所示為化合物35的制備。用piperide在THF中處理使中間體10-1脫保護得到中間體27-1。27-1與Cbz-Gly-OH偶聯(lián)，隨后脫去Boc保護得到中間體27-3·TFA。27-3與Boc-t-BuGly-OH偶聯(lián)，隨后脫去Boc保護得到中間體27-5·TFA。27-5·2TFA與Boc-NMeAla-OH偶聯(lián)提供中間體27-2。使用H2和Pd/C除去Cbz基團得到27-7，使用對苯二酰氯將其橋連得到中間體27-8。使用4N在1，4-二噁烷中的HCl脫保護提供化合物35·2HCl。

路線27a
路線27b 由光學活性的(R)-2-羥基-1-苯基乙胺(28-1)制備了各種手性胺。將中間體28-1以Boc保護得到28-2。用各種鹵代烷基將28-2的醇部分烷基化得到中間體28-3、28-4和28-5。用HCl將中間體28-3、28-4和28-5脫保護得到手性胺28-6、28-7和28-8。

路線28 以化合物22和24中所述的類似的方式將中間體28-6、28-7和28-8與中間體21-9偶聯(lián)(參見路線22)以分別提供化合物63、64和65。
其他手性胺可以商購獲得或者可以通過許多方法制備，所述方法包括使用手性或非手性化學品的酮、醇或疊氮化物至胺的轉(zhuǎn)化或者相互轉(zhuǎn)化，以及通過本領(lǐng)域已知的方法如色譜法或結(jié)晶法的異構(gòu)體手性拆分。
例如，路線29圖示了光學富集的、非對稱的1，1-二苯基甲胺的對映選擇性合成，其通過將芳基硼酸加入手性sulfinimines中，然后用酸水解sulfinimines以提供光學富集的胺中間體例如中間體29-4和29-5而制備(Bolshan，Y.；Batey，R.A.，Org.Letters 2005，7，1481-1484)。

路線29 以化合物22和24所圖示的類似的方式使中間體29-4和29-5與中間體21-9偶聯(lián)(參見路線22)以分別得到化合物66和67。
存在若干用于將四氫萘酮轉(zhuǎn)化為手性1，2，3，4-四氫萘基-1-胺的方法，例如由R.A.Stalker等，Tetrahedron 2002，58，4837中發(fā)表的方法，將其概述如下
可以使用如路線21和22所圖示的類似的方法將這些手性胺并入本發(fā)明的化合物中。
以上路線可用于合成本發(fā)明的對稱化合物以及不對稱化合物。取代基A1、A、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3、R300等如此處所定義。LG為離去基團，如Cl、Br、I、OTs、OSu或OMs。
實施例 以下縮寫用于全文之中 Boct-丁氧基羰基； CBz芐基氧基羰基； DCM二氯甲烷，CH2Cl2； DIPEA二異丙基乙胺； DMAP4-(二甲基氨基)吡啶； DMFN，N-二甲基甲酰胺； DTT二硫蘇糖醇； EDC3-二甲基氨基丙基-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽； EDTA乙二胺四乙酸； FmocN-(9-芴基甲氧基羰基)； HBTUO-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽； HCl鹽酸； HOAc乙酸； HOBt1-羥基苯并三唑； HPLC高效液相色譜； LCMS液相色譜-質(zhì)譜； MeOH甲醇； MgSO4硫酸鎂； MS質(zhì)譜； NaHCO3碳酸氫鈉； Pd/C鈀碳； TEA三乙胺； THF四氫呋喃；以及 TMEDAN，N，N，N-四甲基乙二胺。
合成方法 化合物1的合成 步驟1中間體9-1 在N2下于0℃將NaH(440mg，11.0mmol)懸浮于無水DMF(5mL)中。將Boc-順-2-羥基-L-脯氨酸(1.00g，4.0mmol)溶于無水DMF(15mL)中并逐滴加入NaH懸浮液中。在0℃將該混合物靜置10min。將炔丙基溴(560μL，5.0mmol)逐滴加入溶液中。將混合物在0℃下攪拌1h然后用H2O淬滅。將內(nèi)容物與EtOAc和10％檸檬酸一起加入分液漏斗中(直到pH～2)。收集有機層、干燥并減壓濃縮?？焖偕V(Flashchromatography)(二氧化硅，己烷/THF)得到澄清油狀中間體9-1。MS(m/z)M+Na＝292。
步驟2中間體9-2 在N2下將中間體9-1(560mg，2.1mmol)、HOBt(444mg，2.9mmol)、EDC(563mg，2.9mmol)和DIPEA(1.46mL，8.4mmol)溶于無水二氯甲烷(10mL)并在室溫下攪拌10min。然后加入1，2，3，4-(R)-四氫萘基-1-胺(368μL，2.5mmol)，并將溶液在室溫下攪拌24h。然后將內(nèi)容物與EtOAc一同加入分液漏斗中，并用10％檸檬酸(2×)、飽和NaHCO3(2×)和鹽水洗滌。收集有機層、干燥并減壓濃縮。在室溫下用5ml的50％CH2Cl2/TFA處理產(chǎn)物1hr。真空除去揮發(fā)物并用二乙醚研磨殘余物得到中間體9-2·TFA。MS(m/z)M+1＝299。
步驟3中間體9-3 在N2下將Boc-t-Bu-Gly-OH(484mg，2.1mmol)、HOBt(375mg，2.4mmol)、HBTU(910mg，2.4mmol)和DIPEA(1.20mL，7mmol)溶于無水DMF(10mL)并在室溫下攪拌10min。然后加入中間體9-2(720mg，1.75mmol)，并將溶液在室溫下攪拌24h。然后將內(nèi)容物與EtOAc一同加入分液漏斗中，并用10％檸檬酸(2×)，飽和NaHCO3(2×)和鹽水洗滌。收集有機層、干燥并減壓濃縮。在室溫下用10mL的50％CH2Cl2/TFA處理所得產(chǎn)物1hr。真空除去揮發(fā)物并用二乙醚研磨殘余物得到中間體9-3·TFA。MS(m/z)M+1＝412。
步驟4中間體9-4 在N2下將Boc-N-Me-Ala-OH(278mg，1.37mmol)、HOBt(227mg，1.49mmol)、EDC(293mg，1.49mmol)和DIPEA(796μL，4.6mmol)溶于無水二氯甲烷(10mL)并在室溫下攪拌10min。然后加入中間體9-3·TFA(600mg，1.14mmol)并將溶液在室溫下攪拌24h。加入EtOAc并將有機層用10％檸檬酸(2x)、飽和NaHCO3(2x)和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥、過濾、并減壓除去揮發(fā)物。用硅膠色譜純化產(chǎn)品，用10-100％己烷/THF洗脫得到中間體9-4。MS(m/z)M+Na＝619。
步驟5化合物1 將中間體9-4(100mg，0.17mmol)、CuCl(25mg，0.25mmol)和N，N，N，N-四甲基乙二胺(38μL，0.25mmol)懸浮于無水丙酮(5ml)中并在O2氣氛下在室溫下攪拌72h。加入EtOAc并將有機層用10％檸檬酸(2x)、飽和NaHCO3(2x)和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥、過濾并減壓除去揮發(fā)物。用硅膠色譜純化產(chǎn)物，用10-100％己烷/THF洗脫得到中間體9-5。在0℃用4N在1，4-二噁烷中的HCl處理9-52小時，然后減壓除去揮發(fā)物得到化合物1，為其二-HCl鹽。MS(m/z)M+1＝991.7。
中間體10-6的合成 步驟1中間體10-1 將Fmoc-AMPC(2S，4S)-OH(900mg，2.0mmol)、HBTU(1.14g，3.0mmol)和HOBt(415mg，3.0mmol)溶于無水DMF(10mL)并用DIPEA(1050uL，6.0mmol)處理。將混合物攪拌10分鐘然后加入(R)-1，2，3，4-四氫萘基-1-胺(330uL，2.2mmol)。將反應(yīng)攪拌過夜，然后用乙酸乙酯(100mL)和10％檸檬酸(50mL)稀釋。分離有機層并用10％檸檬酸(2 x 50mL)、飽和碳酸氫鈉(3 x 25mL)和鹽水(1 x 20mL)洗滌，然后用無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮得到白色固體狀粗10-1。以LCMS檢測該物質(zhì)純度為95％，將其不經(jīng)進一步純化而用于下一步中。
步驟2中間體10-2 將中間體10-1溶于二氯甲烷(10mL)并用TFA(10mL)處理。將溶液在室溫下攪拌2小時，然后減壓除去揮發(fā)物。用二乙醚(25mL)攪拌所得油狀物得到淺褐色固體，經(jīng)過濾并用二乙醚(2 x 5mL)洗滌得到淺褐色固體化合物10-2·TFA(1.17g)。
步驟3中間體10-3 將Boc-t-BuGly-OH(460mg，2.0mmol)、HBTU(760mg，2.0mmol)和HOBt(270mg，2.0mmol)以及DIPEA(765uL，7.5mmol)溶于無水DMF(10mL)并將反應(yīng)在室溫下攪拌10min，然后加入中間體10-2(867mg，1.5mmol)。將混合物攪拌過夜，然后用乙酸乙酯(200mL)和10％檸檬酸(50mL)稀釋。分離有機層并用10％檸檬酸(2 x 50mL)、飽和碳酸氫鈉(3 x 25mL)和鹽水(1 x 20mL)洗滌，然后用無水硫酸鎂干燥、過濾并減壓濃縮得到白色固體狀粗10-3(920mg，LCMS純度>95％)，將其不經(jīng)進一步純化即用于下一步中。
步驟4中間體10-4 將中間體10-3溶于二氯甲烷(10mL)并用TFA(10mL)。將溶液在室溫下攪拌2小時然后減壓除去揮發(fā)物。將所得油狀物用二乙醚(20mL)攪拌得到淺褐色固體，將其過濾、用二乙醚(2 x 5mL)洗滌得到白色固體狀化合物10-4·TFA。
步驟5中間體10-5 將Boc-MeAla-OH(308mg，1.52mmol)、HBTU(450mg，1.91mmol)和HOBt(260mg，1.91mmol)溶于無水DMF(10mL)。加入DIPEA(886uL，5.0mmol)并將反應(yīng)在室溫下攪拌10min，然后加入中間體10-4(900mg，1.27mmol)。將混合物攪拌過夜，然后用乙酸乙酯(200mL)和10％檸檬酸(50mL)稀釋。分離有機層并用10％檸檬酸(2 x 50mL)、飽和碳酸氫鈉(3 x 25mL)和鹽水(1 x 20mL)洗滌，然后用無水硫酸鎂干燥、過濾并減壓濃縮得到白色固體狀粗10-5(0.87mg，LCMS純度95.5％)，將其不經(jīng)進一步純化即用于下一步中。
步驟6中間體10-6 將中間體10-5溶于20％嗎啉/THF(10mL)并將溶液在室溫下攪拌16小時。減壓除去揮發(fā)物得到白色固體狀化合物10-6。進一步通過硅膠色譜純化得到10-6，其LCMS純度為95％(MS(m/z)M+1＝617.4。
化合物2的合成 步驟1中間體11-1 將粗10-6(200mg，0.251mmol)溶于THF(5mL)并在冰浴中冷卻。加入DIPEA(50uL，0.275mmol)和癸二酰氯(26uL，0.125mmol)并將反應(yīng)在室溫下攪拌4小時，然后用乙酸乙酯(20mL)和飽和碳酸氫鈉稀釋。分離有機層，用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥、過濾并減壓除去溶劑。將所得粗固體用硅膠色譜純化，用10-100％己烷/THF梯度洗脫，得到白色固體狀11-1(55mg)。
步驟2化合物2 用4N在1，4-二噁烷(3mL)中的HCl處理中間體11-1(50mg)并攪拌3小時。減壓除去揮發(fā)物并用二乙醚(3 x 5mL)研磨所得固體。減壓干燥所得固體得到灰白色固體狀化合物2·2HCl(30mg)。MS(m/z)(M+2)/2＝541.4。
化合物3 步驟1中間體12-1 將粗10-6(200mg，0.251mmol)溶于THF(5mL)并在冰浴上冷卻至4℃。加入DIPEA(50uL，0.275mmol)。加入對苯二酰氯(26uL，0.125mmol)并將反應(yīng)攪拌16小時，然后用乙酸乙酯(20mL)和飽和碳酸氫鈉稀釋。分離有機層，用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓除去溶劑。將所得粗固體用硅膠色譜純化，用25-100％己烷/THF梯度洗脫，得到白色固體狀12-1(90mg)。
步驟2化合物3 用4N在1，4-二噁烷(3mL)中的HCl處理中間體12-1(90mg)并攪拌3小時。減壓除去揮發(fā)物，并用二乙醚研磨所得固體，過濾并用二乙醚(3 x 5mL)洗滌。減壓干燥所得固體得到灰白色固體狀化合物3·2HCl(40mg)。MS(m/z)(M+2)/2＝523.4。
化合物4和5 將中間體9-4(130mg，0.21mmol)和中間體13-1(130mg，0.22mmol)、CuCl(60mg，0.6mmol)和四甲基乙二胺(90μL，0.6mmol)懸浮于無水丙酮(15mL)并在室溫下在O2氣氛下攪拌120小時。加入EtOAc并用10％檸檬酸(2x)、飽和NaHCO3(2x)和鹽水洗滌有機層，用無水Mg2SO4干燥，過濾并減壓濃縮。用硅膠色譜純化產(chǎn)物，用10-100％己烷/THF洗脫得到中間體9-5、13-2和13-3。將中間體13-2和13-3獨立地用4N在1，4-二噁烷中的HCl處理。除去揮發(fā)物并將所得固體用二乙醚研磨，過濾并用二乙醚洗滌，分別得到化合物4和5，為它們的二-HCl鹽。
化合物4·2HClMS(m/s)M+1＝993.5。
化合物5·2HClMS(m/z)M+1＝995.6。
化合物6 將中間體9-4(250mg，0.400mmol)、中間體14-1(560mg，0.900mmol)、CuCl(267mg，2.7mmol)和四甲基乙二胺(405μL，2.7mmol)懸浮于無水丙酮(10mL)并在室溫下在O2氣氛下攪拌72小時。加入Celite并通過celite墊過濾混合物。將EtOAc加入濾液并將所得有機層用10％檸檬酸(2x)、飽和NaHCO3(2x)和鹽水洗滌，用無水Mg2SO4干燥，過濾并減壓濃縮。用硅膠色譜純化產(chǎn)物，用10-100％己烷/THF洗脫，得到中間體14-2。將中間體14-2用4N在1，4-二噁烷中的HCl處理。除去揮發(fā)物并將所得固體用二乙醚研磨，過濾并用二乙醚洗滌，得到化合物6，為其二-HCl鹽。MS(m/s)(M+2)/2＝514.4。
化合物7 步驟1 在N2下在0℃將中間體15-1(1.0g，1.2mmol)、戊二酸酐(190mg，1.7mmol)和DIPEA(836μL，4.8mmol)溶于二氯甲烷(20mL)。加入催化量的DMAP并將溶液在冰上攪拌30min并在室溫下攪拌24小時。向濾液中加入EtOAc并將所得有機層用10％檸檬酸(2x)、飽和NaHCO3(2x)和鹽水洗滌，用無水Mg2SO4干燥，過濾并減壓濃縮得到白色固體狀中間體15-2。
步驟2 在N2下將中間體15-2(420mg，0.5mmol)、HOBt(85mg，0.63mmol)、HBTU(222mg，0.60mmol)和DIPEA(313μL，1.8mmol)溶于無水DMF(5ml)并在室溫下攪拌10min。加入中間體10-6(250mg，0.45mmol)并將溶液在室溫下攪拌24小時。加入EtOAc并將所得有機層用10％檸檬酸(2x)、飽和NaHCO3(2x)和鹽水洗滌，用無水Mg2SO4干燥，過濾并減壓濃縮。用硅膠色譜純化產(chǎn)物，用10-100％己烷/THF洗脫，得到中間體15-3。
步驟3 將中間體15-3(240mg，0.17mmol)、10wt％Pd/C(50mg，50％H2O)懸浮于MeOH(10mL)中并在室溫下在H2氣氛下攪拌24h(1atm)。在celite上過濾內(nèi)容物并用MeOH洗滌。減壓下濃縮濾液得到白色固體狀中間體15-4。
步驟4 在N2下將BocNMe-Ala-OH(57mg，0.28mmol)、HOBt(44mg，0.33mmol)、HBTU(116mg，0.31mmol)和DIPEA(90μL，0.52mmol)溶于無水DMF(5mL)，并用中間體15-4(160mg，0.13mmol)處理。在室溫下攪拌24小時后加入EtOAc并將所得有機層用10％檸檬酸(2x)、飽和NaHCO3(2x)和鹽水洗滌，用無水Mg2SO4干燥，過濾并減壓濃縮。用硅膠色譜純化產(chǎn)物，用10-100％己烷/THF洗脫，得到中間體15-5。將中間體15-5用4N在1，4-二噁烷中的HCl在室溫下攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)物得到化合物7，為其HCl鹽。MS(M+2)/2＝618.0。
化合物8 將化合物7·HCl(100mg，0.08mmol)溶于DMF(1mL)中并加入至哌嗪基甲基聚苯乙烯樹脂(0.86mmol/g，356mg，0.3mmol)的CH2Cl2(5mL)混懸液中。在室溫下震蕩48小時后，加入另外200mg的樹脂。將混合物在室溫下震蕩20天，然后過濾，用MeOH洗滌。減壓除去揮發(fā)物得到白色固體狀化合物8。MS(m/z)M+1＝1012。
化合物9 用4N在1，4-二噁烷中的HCl處理中間體15-3(10mg)1小時。減壓除去揮發(fā)物得到化合物9，為其HCl鹽。MS(m/s)(M+2)/2＝642。
用與化合物2所述的類似的方式制備化合物10、11、12、13、14、15、16、39、40、41、42、43、52、55、56、57和58，其中用相應(yīng)的磺酰氯或者活化的二酸代替步驟1中的癸二酰氯。這些化合物的MS表征總結(jié)于表1。
用與化合物29所述的類似的方式制備化合物17，使用1，2，3，4-(R)-四氫萘基-1-胺代替苯乙胺。MS(m/s)(M+2)/2＝510.4。
化合物18 將中間體21-8在4N在1，4-二噁烷中的HCl內(nèi)攪拌2小時。真空除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀化合物18·2HCl。MS(m/z)M+1＝815.4。
用與化合物20所述的類似的方式制備化合物19、21、22、23、24、31、32、46、47、48、49、50、51、54、59、60、61、63、64、65和67，其中在步驟6中用相應(yīng)的胺代替苯乙胺。這些化合物的MS表征總結(jié)于表1。
化合物20 步驟1中間體21-2 向冷卻至0℃的N-Boc-順-4-氨基-L-脯氨酸甲酯21-1(10.0g，35.61mmol)的CH2Cl2溶液內(nèi)依次加入TEA(14.88mL，106.80mmol)、DMAP(10mg)和對苯二酰氯(3.61g，17.80mmol)，并將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體21-2。
步驟2中間體21-3·2TFA 在0℃將中間體21-2(4.80g，7.76mmol)溶于CH2Cl2(40mL)和TFA(40mL)的混合物。將溶液在室溫下攪拌4小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀中間體21-3·2TFA。MS(m/z)M+1＝419.2。
步驟3中間體21-5 向冷卻至0℃的Boc-α-tBuGly-OH，21-4，(3.95g，17.07mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(13.5mL，77.6mmol)、HOBt(2.62g，19.4mmol)和HBTU(7.36g，19.4mmol)。在攪拌10分鐘后，加入中間體21-3·2TFA(5.02g，7.76mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體21-5。
步驟4中間體21-6·2TFA 在0℃將中間體21-5(6.55g，7.76mmol)溶于CH2Cl2(40mL)和TFA(40mL)的混合物中。將溶液在室溫下攪拌3小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀中間體21-6·2TFA。MS(m/z)M+1＝645.4 步驟4中間體21-8 向冷卻至0℃的Boc-NMe-Ala-OH，21-7，(3.15g，15.51mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(12.3mL，70.5mmol)、HOBt(2.38g，17.63mmol)和HBTU(6.69g，17.63mmol)。攪拌10分鐘后加入中間體21-6·2TFA(6.15g，7.05mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體21-8。
步驟5中間體21-9 向冷卻至0℃的中間體21-8(6.20g，6.11mmol)的THF(80mL)和MeOH(8mL)溶液中加入1N LiOH水溶液(30.5mL)并將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。用10％檸檬酸將pH調(diào)至6并加入乙酸乙酯，分離有機層，用鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮得到白色固體狀中間體21-9。
步驟6中間體21-10 向冷卻至0℃的中間體21-9(150mg，0.15mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(265uL，1.52mmol)、HOBt(51mg，0.38mmol)和HBTU(144mg，0.38mmol)。在攪拌10分鐘后，加入苯乙胺(42uL，0.33mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體21-10。
步驟7化合物20·2HCl 將4N在1，4-二噁烷中的HCl(3.0mL)加入中間體21-10(145mg，0.12mmol)中并將溶液在0℃下攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀化合物20·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2＝497.6。
化合物22·2HCl 步驟1中間體22-1 向冷卻至0℃的中間體21-9(75mg，0.08mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(135uL，0.76mmol)、HOBt(26mg，0.19mmol)和HBTU(72mg，0.19mmol)。在攪拌10分鐘后加入異丙胺(14uL，0.17mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體22-1。
步驟2化合物22·2HCl 將4N在1，4-二噁烷(2.0mL)中的HCl加入中間體22-1(58mg，0.05mmol)中并將溶液在0℃攪拌2小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀化合物22·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2＝435.4。
化合物24·2HCl 步驟1中間體22-2 向冷卻至0℃的中間體21-9(600mg，0.61mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(1.0mL，6.08mmol)、HOBt(205mg，1.52mmol)和HBTU(576mg，1.52mmol)。在攪拌10分鐘后加入氨基二苯基甲烷(230uL，1.34mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體22-2。
步驟2化合物24·2HCl 4N在1，4-二噁烷(1.9mL)中的HCl加入中間體22-2(660mg，0.50mmol)中并將溶液在0℃攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀化合物24·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2＝435.4。
化合物25 步驟1中間體23-1 向冷卻至0℃的中間體21-8(1.10g，1.08mmol)的THF溶液中加入硼氫化鋰(118mg，4.86mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時。加入乙酸乙酯和10％檸檬酸。分離有機層，用NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體23-1。MS(m/z)M+1＝959.6 步驟2中間體23-2 向中間體23-1(284mg，0.29mmol)的CH2Cl2溶液中加入Dess Martin periodinane(314mg，0.74mmol)并將反應(yīng)在室溫下攪拌5小時。加入NaHCO3水溶液，分離有機層，用鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體23-2。
步驟3中間體23-4 向中間體23-2(282mg，0.29mmol)的CH2Cl2溶液加入苯乙胺(82uL，0.65mmol)。在室溫下攪拌30分鐘后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(280mg，1.32mmol)并將反應(yīng)混合物攪拌2小時。加入飽和NaHCO3水溶液，分離有機層，用鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體23-4。MS(m/z)M+1＝1165.8 步驟4中間體23-5 向冷卻至0℃的中間體23-4(100mg，0.08mmol)的CH2Cl2溶液中依次加入三乙胺(60uL，0.43mmol)和乙酰氯(14uL，0.19mmol)。將反應(yīng)在室溫下攪拌2小時然后加入水和乙酸乙酯。分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體23-5。
步驟5化合物25·2HCl 將4N在1，4-二噁烷(3mL)中的HCl加入中間體23-5(80mg，0.06mmol)中并將溶液在室溫下攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀化合物25·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2＝525.6。
化合物26·2HCl 步驟1中間體23-5 向冷卻至0℃的中間體23-4(100mg，0.08mmol)的CH2Cl2溶液中依次加入TEA(60uL，0.43mmol)和甲磺酰氯(15uL，0.19mmol)，并將反應(yīng)在室溫下攪拌2小時。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體23-5。
步驟2化合物26·2HCl 將4N在1，4-二噁烷(3mL)中的HCl加入中間體23-5(79mg，0.06mmol)中并將溶液在室溫下攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀化合物26·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2＝561.6。
用與化合物26所述的類似的方式制備化合物27、28和30，其中對于化合物27和28分別使用乙酰氯和芐酰氯代替甲磺酰氯。
化合物27-MS(m/z)(M+2)/2＝587.6。
化合物28-MS(m/z)(M+2)/2＝543.6。
化合物30-MS(m/z)(M+2)/2＝579.6。
化合物29 步驟1中間體24-1 向冷卻至0℃的1.0M NaHMDS的THF溶液(21.6mL，21.6mmol)中緩緩加入N-Boc-順-4-羥基-L-脯氨酸(2.50g，10.8mmol)的DMF溶液。在0℃攪拌20分鐘后，加入α，α’-二溴-p-二甲苯(1.37g，5.0mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體24-1。
步驟2中間體24-2 向冷卻至0℃的中間體24-1(200mg，0.35mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(365uL，2.1mmol)、HOBt(132mg，0.98mmol)和HBTU(345mg，0.91mmol)。在攪拌10分鐘后加入苯乙胺(107uL，0.85mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體24-2。
步驟3中間體24-3·2TFA 將中間體24-2(260mg，0.35mmol)溶于CH2Cl2(3mL)和TFA(3mL)的混合物中。將溶液在室溫下攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀中間體24-3·2TFA。MS(m/z)M+1＝571.4 步驟4中間體24-4 向冷卻至0℃的Boc-α-tBuGly-OH(256mg，1.10mmol)DMF溶液中依次加入DIPEA(361uL，2.10mmol)、HOBt(175mg，1.3mmol)和HBTU(455mg，1.2mmol)。在攪拌10分鐘后加入中間體24-3·2TFA(230mg，0.46mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體24-4。
步驟5中間體24-5·2TFA 將中間體24-4(458mg，0.46mmol)溶于CH2Cl2(3mL)和TFA(3mL)的混合物中。在室溫下攪拌溶液30分鐘。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀中間體24-5·2TFA。MS(m/z)M+1＝797.6 步驟6中間體24-6 向冷卻至0℃的Boc-NMe-Ala-OH(119mg，0.58mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(209uL，1.2mmol)、HOBt(91mg，0.67mmol)和HBTU(236mg，0.62mmol)。在攪拌10分鐘后加入中間體24-5·2TFA(250mg，0.24mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體24-6。
步驟7化合物29·2HCl 將4N在1，4-二噁烷(1.0mL)中的HCl加入中間體24-6(280mg，0.24mmol)，將溶液在0℃下攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀化合物29·2HCl。MS(m/z)M+1＝967.6。
化合物33 步驟1中間體25-1 向中間體10-6(258mg，0.50mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(217uL，1.25mmol)和1，3-苯二磺酰氯(69mg，0.25mmol)，并將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體25-1。
步驟2化合物33·2HCl 將4N在1，4-二噁烷(2mL)中的HCl加入中間體25-1(143mg，0.11mmol)中并將溶液在0℃攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀化合物33·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2＝559.5。
化合物34 用與化合物20類似的方式制備化合物34，其中在步驟1中將N-Boc-順-4-氨基-L-脯氨酸甲酯以N-Boc-反-4-氨基-L-脯氨酸甲酯代替，并且在步驟6中將苯乙胺以1，2，3，4-(R)-四氫萘基-1-胺代替。MS(m/z)M+1＝1045.8。
化合物35·2HCl 步驟1中間體27-1 將中間體10-1(3.90g，6.68mmol)溶于THF(100mL)中，并用哌啶(5.0mL，68.2mmol)處理。將溶液在室溫下攪拌16小時，然后減壓除去揮發(fā)物得到半固體物，將其懸浮于MeOH(5mL)中并過濾。濃縮濾液，將其懸浮于MeOH(5mL)中，過濾并將濾液濃縮得到半固體狀物中間體27-1(純度80％)。
步驟2中間體27-2 向冷卻至0℃的芐氧羰基甘氨酸(carbobenzyloxyglycine)(699mg，3.34mmol)的DMF溶液依次加入DIPEA(2.40mL，13.9mmol)、HOBt(488mg，3.61mmol)和HBTU(1.37g，3.61mmol)。在攪拌10分鐘后加入中間體27-1(1.00g，2.78mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體27-2。
步驟3中間體27-3·TFA 將中間體27-2(1.42g，2.58mmol)溶于CH2Cl2(15mL)和TFA(15mL)的混合物中。將溶液在室溫下攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀中間體27-3·TFA。MS(m/z)M+1＝451.4 步驟4中間體27-4 向冷卻至0℃的Boc-α-tBuGly-OH(668mg，2.89mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(2.1mL，12.0mmol)、HOBt(488mg，3.61mmol)和HBTU(1.37g，3.61mmol)。在攪拌10分鐘后加入中間體27-3·TFA(1.36g，2.41mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體27-4。
步驟5中間體27-5·TFA 將中間體27-4(1.38g，2.08mmol)溶于DCM(10mL)和TFA(10mL)的混合物中。將溶液在室溫下攪拌4小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀中間體27-5·TFA。MS(m/z)M+1＝564.4 步驟6中間體27-6 向冷卻至0℃的Boc-NMe-Ala-OH(902mg，4.44mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(3.50mL，20.2mmol)、HOBt(682mg，5.05mmol)和HBTU(1.92g，5.05mmol)。在攪拌10分鐘后加入中間體27-5·TFA(1.14g，1.68mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體27-6。
步驟7中間體27-7 向在N2下攪拌的中間體27-6(925mg，1.24mmol)的無水MeOH(25mL)溶液中加入10％Pd/C(125mg)。將反應(yīng)混合物用H2吹滌并攪拌1小時。然后通過celite過濾反應(yīng)，并真空濃縮濾液。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體27-7。MS(m/z)M+1＝615.4 步驟8中間體27-8 向冷卻至0℃的中間體27-7(150mg，0.25mmol)的DCM溶液中依次加入TEA(100uL，0.73mmol)和對苯二酰氯(25.0mg，0.12mmol)，并將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體27-8。
步驟9化合物35·2HCl 將4N在1，4-二噁烷(2mL)中的HCl加入中間體27-8(166mg，0.12mmol)中，并將溶液在室溫下攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀化合物35·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2＝580.6。
用與化合物35所述的類似的方式從中間體27-7制備化合物36、37和38，分別使用草酰氯、間苯二酰氯(isophthaloyl dichloride)和4，4’-聯(lián)苯二甲酰氯(4，4’-biphenyldicarbonyl chloride)代替步驟8中的苯二酰氯(phthaloyl chloride)。
化合物36-MS(m/z)(M+2)/2＝542.6。
化合物37-MS(m/z)(M+2)/2＝580.6。
化合物38-MS(m/z)(M+2)/2＝618.6。
化合物44 步驟1中間體26-1 向中間體10-6(150mg，0.27mmol)的THF溶液中依次加入TEA(112uL，0.81mmol)和1，4-苯二異氰酸酯(43mg，0.27mmol)，并將反應(yīng)在室溫下攪拌4小時。減壓除去揮發(fā)物，并用硅膠色譜純化殘余物得到白色固體狀中間體26-1。
步驟2化合物44·2TFA 將中間體26-1(148mg，0.12mmol)溶于CH2Cl2(1.5mL)和TFA(0.4mL)的混合物中。將溶液在室溫下攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀化合物44·2TFA。MS(m/z)(M+2)/2＝538.4。
化合物62 用4N在1，4-二噁烷中的HCl處理中間體21-9兩小時。減壓除去揮發(fā)物并將殘余物用二乙醚研磨得到灰白色固體化合物62·HCl。MS(m/z)M+1＝787.6。
中間體28-6 步驟1中間體28-2 將(S)-(+)-2-苯基氨基乙醇(glycinol)，28-1(1.64g，12.0mmol)溶于CH2Cl2(90mL)。加入Boc2O(2.84g，13.0mmol)和DMAP(34mg，0.02mmol)并在室溫下攪拌1小時。將反應(yīng)混合物用二乙醚(200mL)和1N HCl(100mL)稀釋。將有機層用1M HCl(2 x100mL)洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并減壓除去揮發(fā)物。用硅膠色譜純化所得殘余物得到油狀物以得到白色固體狀中間體28-2(2.7g，收率95％)。MS(m/z)M+1＝238.2。
步驟2中間體28-6 將中間體28-2(420mg，1.77mmol)和碘甲烷(330μL，5.29mmol)溶于無水DMF(25mL)。將混合物冷卻至0℃，然后加入NaH(以60％分散于油中，103mg，2.58mmol)。在2小時后，將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(200mL)和1M HCl(100mL)稀釋。將有機層用1M HCL(2 x 100mL)洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并減壓除去揮發(fā)物。用硅膠色譜純化殘余物得到油狀中間體28-3。然后將中間體28-3冷卻至0℃，并用4M在1，4-二噁烷(5mL)中的HCl處理。在攪拌90分鐘后，減壓除去揮發(fā)物，并將所得固體用二乙醚洗滌，得到白色固體狀中間體28-6·HCl(237mg，收率69％)。MS(m/z)M+1＝152.2。
采用類似的程序制備中間體28-7和28-8，其中對于中間體28-7用芐基溴代替碘甲烷，對于中間體28-8用碘乙酰胺代替碘甲烷。
化合物66
步驟1中間體29-1 向苯甲醛(840μL，8.25mmol)的CH2Cl2(150mL)溶液中加入(S)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(1.0g，8.25mmol)和乙醇鈦(3.5ml，16.50mmol)。將反應(yīng)混合物回流5小時，冷卻至室溫。加入水并將混合物劇烈攪拌，然后通過celite攪拌。將水層用CH2Cl2(3x)萃取，并將合并的有機萃取物用鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到黃色油狀中間體29-1。
步驟2中間體29-2 向(S，E)-N-亞芐基-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺，29-11，(110mg，0.526mmol)、[Rh(cod)(CH3CN)2]BF4(20.1mg，0.053mmol)、對-甲苯基硼酸(143mg，1.052mmol)和Et3N(147μl，1.052mmol)的二噁烷(1.2mL)混懸液中加入H2O(2.4mL)。將所得褐色混懸液在室溫下攪拌2天。將水層用EtOAc(3x)萃取，并將合并的有機萃取物用鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到白色固體狀中間體29-2(d.e.＝81％)。
步驟3中間體29-4 向(S)-2-甲基-N-((R)-苯基(p-甲苯基)甲基)丙烷-2-亞磺酰胺(82mg，0.27mmol)，29-2，的MeOH(270μL)溶液中加入4N在1，4-二噁烷中的HCl4(140μL，0.54mmol)。將溶液在室溫下攪拌1小時，然后加入Et2O并形成白色沉淀。過濾并用Et2O洗滌沉淀得到白色固體狀中間體29-4·HCl。
步驟4中間體29-5 向冷卻至0℃的中間體21-9(122mg，0.123mmol)的DMF溶液中依次加入DIPEA(193μL，1.107mmol)、HOBt(42mg，0.308mmol)和HBTU(117mg，0.308mmol)。在攪拌10分鐘后加入中間體29-4·HCl(59mg，0.253mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水和乙酸乙酯，分離有機層，用10％檸檬酸、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。用硅膠色譜純化得到粉紅色固體狀中間體66-1。
步驟5化合物66·2HCl 將4N在1，4-二噁烷(1ml)中的HCl加入中間體66-1(135mg，0.12mmol)。將溶液在0℃攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)物，并將殘余物用二乙醚研磨得到白色固體狀化合物6·2HCl。MS(m/z)(M+2)/2＝573.6。
根據(jù)上述程序制備本發(fā)明的代表性化合物并在表1中示出 表1






















表2至6中所示為可通過上述程序的簡單變化而制備的本發(fā)明的代表性的化合物 表2
其中A和A1均為CH2或均為C(O)，并且

表3 M1-BG-M2 式1A BG為



表4 M1-BG-M2 式1B BG為



表5
R1、R2、R3、R100、R200和R300如上述所定義，-X-L-X`-選自
R4和R400為H； R5和R500選自

X＝CH2，S或On＝0，1，或2


X＝CH2，S，S(O)m或O n＝0，1，或2


或
其中所述芳基部分可以被R10取代，并且其中R10和R10’獨立地定義為如上文所述的R10，并且其中所述烷基可以進一步被如上所定義的R6取代。
表6
R1、R2、R3、R100、R200和R300如上述所定義， -X-L-X`-選自
R4和R400為H； R5和R500選自

X＝CH2，S或O n＝0，1，或2

X＝CH2，S，S(O)m或O n＝0，1，或2


或
其中芳基部分可以被R10取代，并且其中R10和R10’獨立地如上述R10所定義，并且其中烷基可以被如上述定義的R6進一步取代。
試驗 用于表達的分子構(gòu)建體 GST-XIAP BIR3RING通過BamH1和AVA I將氨基酸246-497的XIAP編碼序列克隆入PGEX2T1。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α用于蛋白表達和純化。
GST-HIAP2(cIAP-1)BIR 3通過BamH1和XhoI將氨基酸251-363的HIAP2編碼序列克隆入PGex4T3。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α用于蛋白表達和純化。
GST-HIAP1(cIAP-2)BIR 3通過BamH1和XhoI將氨基酸236-349的HIAP1編碼序列克隆入PGex4T3。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α用于蛋白表達和純化。
GST-接頭BIR 2 BIR3Ring通過BamH1和XhoI將氨基酸93-497的XIAP編碼序列克隆入PGex4T1。使用引物TTAATAGGATCCATCAACGGCTTTTATC和GCTGCATGTGTGTCAGAGG采用標準PCR條件從pGex4t3中的全長XIAP擴增氨基酸93-497。將PCR片段TA克隆入pCR-2.1(invitrogen)。通過BamHI/XhoI消化將接頭BIR 2 BIR 3 Ring亞克隆入pGex4T1。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α用于蛋白表達和純化。
全長人XIAP，AEG質(zhì)粒數(shù)23(AEG plasmid number 23)。通過BamH1和Xho I限制位點將氨基酸1-497的XIAP編碼序列克隆入GST融合載體PGEX4T1。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α用于蛋白純化。
GST-XIAP接頭BIR 2通過BamHI和XhoI將氨基酸93-497的XIAP接頭BIR 2編碼序列克隆入pGex4T3。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α用于蛋白表達和純化。
重組蛋白質(zhì)的表達和純化 A.重組蛋白質(zhì)的表達 將谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)標簽蛋白在大腸桿菌菌株DH5-α中表達。為了表達全長XIAP，將轉(zhuǎn)化XIAP-BIR域、cIAP-1、cIAP-2和Livin各自或其組合的細菌在37℃于加有50μg/ml氨芐青霉素的Luria肉湯(LB)培養(yǎng)基中培養(yǎng)整夜。然后將整夜培養(yǎng)的培養(yǎng)物用新鮮的加有氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基稀釋25倍，并使細菌生長至A600＝0.6然后用1mM異丙基-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷誘導3小時。在誘導時，將細胞在5000RPM離心10分鐘并除去培養(yǎng)基。從1升培養(yǎng)物中獲得的各沉淀物接受10ml裂解緩沖液(50mM Tris-HCl，200mM NaCl，1mM DTT，1mM PMSF，2mg/ml溶酶體(lysosyme)，100μg/ml))，在輕微震蕩下于4℃溫育。溫育20分鐘后，將細胞懸浮液在-80℃放置整夜或者直到需要時。
B.重組蛋白的純化 為了純化重組蛋白，將IPTG誘導的溶胞產(chǎn)物解凍、渦旋，然后在每次解凍后渦旋條件下在液氮中閃凍二次破壞。通過將提取物通過氮氣設(shè)置于100psi的Bio-Neb細胞破壞裝置(Glas-col)四次進一步破壞所述細胞。將提取物在SS-34Beckman轉(zhuǎn)子中在4℃下以15000RPM離心30分鐘澄清。然后將所得上清液與每500ml細胞培養(yǎng)物(每1000ml全長XIAP培養(yǎng)物)2ml谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠珠(Pharmacia)在4℃混合1小時。然后，用1×Tris-Buffered Saline(TBS)洗滌3次以除去未結(jié)合的蛋白。將保留的蛋白質(zhì)每次用2ml的含有10mM還原的谷胱甘肽的50mM的TRIS pH8.0洗脫2次。將洗脫的蛋白質(zhì)合并并用604g/升硫酸銨沉淀，將所得沉淀物再懸浮于適宜的緩沖液中。通過SDS-PAGE判斷，純化的蛋白質(zhì)的純度>90％。純化的蛋白質(zhì)的蛋白濃度通過Bradford法測定。
在大腸桿菌AD494細胞中，使用pet28ACPP32構(gòu)建體將His-標簽蛋白表達于大腸桿菌菌株中。如上所述制備可溶性蛋白部分。根據(jù)廠商操作指南使用裝有NiSO4的螯合-瓊脂糖凝膠(Pharmacia)通過親和色譜法純化上清液用于蛋白純化。以SDS-PAGE測定，洗脫的蛋白質(zhì)的純度>90％。以Bradford試驗測定純化的蛋白的蛋白質(zhì)濃度。
熒光探針P1的合成 在2-氯三苯甲基氯樹脂上使用標準Fmoc化學制備熒光肽探針Fmoc-Ala-Val-Pro-Phe-Tyr(t-Bu)-Leu-Pro-Gly(t-Bu)-Gly-OH(Int.J.Pept.Prot.Res.38555-561，1991)。從樹脂上的切割使用在二氯甲烷(DCM)中的20％乙酸進行，該切割使得側(cè)鏈仍舊封閉。在室溫下使用在二甲基甲酰胺(DMF)中的過量的二異丙基碳二亞胺(DIC)將C-端保護的羧酸與4’-(氨基甲基)熒光素偶聯(lián)(Molecular Probes，A-1351；Eugene，Oreg.)，然后用硅膠色譜純化(DCM中的10％甲醇)。使用DMF中的20％哌啶除去N-端Fmoc保護基，然后以硅膠色譜純化(DCM中的20％甲醇，0.5％HOAc)。最后，使用含有2.5％水和2.5％三異丙基硅烷的95％三氟乙酸除去叔丁基側(cè)鏈保護基，以提供探針P1(HPLC測定純度>95％)。
探針P2
結(jié)合試驗 基于熒光偏振的競爭性試驗 在所有試驗中，使用激發(fā)濾光片設(shè)置在485nm、發(fā)射濾光片設(shè)置在535nm的Tecan Polarion儀器衡量熒光和熒光-偏振。在每個試驗中，通過滴定選定的蛋白質(zhì)得到目標蛋白質(zhì)的濃度，以生成僅在熒光探針P1或P2存在下的線性劑量-響應(yīng)信號。在建立這些條件后，在固定的所確定量的目標蛋白質(zhì)和熒光探針以及選定化合物的10個點的連續(xù)稀釋存在下評價化合物的效力(IC50)和選擇性。對于每個IC50曲線而言，如下進行試驗將50mM MES緩沖液pH6.5中的稀釋的化合物以25μL/孔加入空白96孔板中，然后以25μL/孔加入50mM的MES pH6.5中的0.5mg/ml牛血清白蛋白(BSA)。首先僅以化合物/BSA溶液進行試驗以測定各種化合物的自體熒光。然后加入25μL在含有0.05mg/ml BSA的50mM MES中稀釋的熒光素探針，并檢測熒光素信號的熄滅。最后加入25μL/孔在含有0.05mg/ml BSA的50mM MES中稀釋至適宜濃度的目標或者對照蛋白質(zhì)(GST-BIRs)并測定熒光偏振。
IC50和抑制常數(shù)的測定 在每個試驗中，將相對偏振-熒光單位對化合物的最終濃度作圖，使用Grad padprism和/或Cambridge軟件計算IC50。如上所述并根據(jù)Nikolovska-Coleska，Z.(2004)Anal Biochem 332，261-273中所述的方程由算得的IC50獲得ki值。
熒光偏振競爭性試驗 使用探針P2如上所述測定BIR2-BIR3-ring FP試驗中各種化合物的ki值。例如，化合物3顯示小于100nM的ki。
胱天蛋白酶-3全長XIAP、接頭BIR2或者接頭-BIR2-BIR3-RING脫抑制(derepression)試驗 為了測定所選化合物對XIAP-Bir2的相對活性，我們建立了體外試驗，其中通過XIAP接頭-Bir2、XIAP接頭Bir2-Bir3-RING或全長XIAP的GST融合蛋白抑制胱天蛋白酶-3。將胱天蛋白酶-3(0.125μl)和12.25-34.25nM(最終濃度)的GST-XIAP融合蛋白(GST-Bir2、GST-Bir2Bir3RING或全長XIAP)與連續(xù)稀釋的化合物(200μM-5pM)共溫育。通過疊加25μL的0.4mM DEVD-AMC溶液測定胱天蛋白酶3活性。最終反應(yīng)體積為100μL。所有的稀釋均在胱天蛋白酶緩沖液中(50mM Hepes pH7.4，100mM NaCl，10％蔗糖，1mM EDTA，10mM DTT，0.1％CHAPS(Stennicke，H.R.，和Salvesen，G.S.(1997).Biochemical characteristics of caspase-3，-6，-7，and-8.J.Biol.Chem.272，25719-25723)進行。
在于室溫下溫育15分鐘后，在激發(fā)波長為360nm、發(fā)射波長為444nm的TECAN分光光度計中測量由底物的胱天蛋白酶-3水解釋放的熒光AMC。使用GraphPadv4.0，以溫育15分鐘后的熒光值對log10化合物濃度作圖，基于單位點或者雙位點競爭模型計算IC50值。
結(jié)果顯示，優(yōu)選的化合物的IC50值與對SKOV3s的EC50值相關(guān)，并且通常小于1μM。
無細胞試驗 使用細胞提取物的胱天蛋白酶脫抑制試驗(凋亡體) 將100μg的293細胞S100提取物和0.25μM-2μM的GST-XIAP融合蛋白(XIAP-Bir3RING、XIAP-Bir2Bir3RING、或全長XIAP)與連續(xù)稀釋的化合物(40μM-5pM)共溫育。通過添加1mM dATP、0.1mM ALLN、133μg細胞色素C(最終濃度)并在37℃下溫育25分鐘活化提取物中存在的胱天蛋白酶。所有的反應(yīng)和稀釋均使用S100緩沖液(50mM Pipes pH7.0，50mM KCl，0.5mM EGTA pH8.0，2mM MgCl2加有1/1000稀釋的2mg/ml松胞菌素B，2mg/ml胰凝乳蛋白酶抑制劑，抑酶醛肽，胃酶抑素，抗蛋白酶，0.1M PMSF，1M DTT)。最終反應(yīng)體積為30μL。通過疊加30μL的0.4mM DEVD-AMC溶液測定胱天蛋白酶3活性。在激發(fā)波長為360nm、發(fā)射波長為444nm的TECAN分光光度計中，以每5分鐘進行讀數(shù)的1小時動態(tài)周期測量釋放的AMC斷裂。胱天蛋白酶活性作為AMC熒光/sec的Vo計算。將我們的化合物對胱天蛋白酶的脫抑制與完全活化的提取物和被XIAP融合蛋白的存在所抑制的活化的提取物進行比較。
結(jié)果顯示，優(yōu)選的化合物的IC50值與對SKOV3s的EC50值相關(guān)，并且通常小于1μM。
細胞培養(yǎng)和細胞死亡試驗 A.細胞培養(yǎng) 將MDA-MD-231(乳腺癌)和H460(肺癌)癌細胞在加有10％FBS和100單位/mL青霉素和鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
B.試驗 在包括MDA-MB-231、SKOV3、H460、PC3、HCT-116和SW480細胞的各種細胞系上進行存活試驗。將各細胞以各自每孔5000和2000的密度種于96孔板上并在5％CO2存在下于37℃溫育24小時。將選定的化合物以0.01μM至最高100μM的各種濃度在培養(yǎng)基中稀釋。將稀釋的化合物加在MDA-MB-231細胞上。對于MDA-MB-231SKOV3、H460、PC3、HCT-116和SW480細胞，單獨或者在1-3ng/ml的TRAIL存在下加入所述化合物。72小時后，通過基于MTS的試驗評價細胞生存力。將[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑內(nèi)鹽；MTS]的溶液加在細胞上1至4小時。溫育后，使用設(shè)置于570nm的Tecan分光光度計衡量轉(zhuǎn)化的MTS的量。
用所選定的本發(fā)明化合物處理MDA-MB-231、SKOV3和PC3細胞，發(fā)現(xiàn)EC50均為100nM或更小。當用本發(fā)明化合物在TRAIL的存在下處理上述細胞系時，它們顯示50nM或更小的EC50。
MTT存活試驗 在用化合物處理一天前，將每孔2000至4000細胞種于用組織培養(yǎng)處理的含有100μl培養(yǎng)基的96孔板并在37℃、5％CO2條件下溫育。在用化合物處理的那天，用細胞培養(yǎng)基將化合物稀釋至2×工作儲備液濃度。然后將100μL稀釋的化合物加入各孔中。將處理的板在37℃、5％CO2溫育72小時。溫育后，在將每孔20μL的5mg/ml的MTT試劑加至板上后衡量細胞生存力。將板在37℃在5％CO2的存在下溫育2小時。然后將上清液移除并加入100μL異丙醇。在TECAN分光光度計于570nm下測定吸光度。存活百分比表達為以未處理的細胞獲得的信號的百分比。
從表7中可見，上文表1中所示的化合物對MDA-MB-231和SKOV-3細胞通常顯示<1μM的EC50值。特定化合物具有<50nM的EC50。
表7 A-EC50小于50nM B-EC50小于250nM C-EC50大于1000nM D-EC50大于1000nM 凋亡試驗培養(yǎng)細胞胱天蛋白酶-3活性的測定 在處理前1天前，將細胞以每孔10000個種于含有100μL培養(yǎng)基的白色組織培養(yǎng)(white tissue culture)處理的96孔板中。在用化合物處理的那天，用細胞培養(yǎng)基將化合物稀釋至2×工作儲備液濃度，將100μL稀釋的化合物加入各孔中，并將處理的板在37℃、5％CO2溫育5小時。溫育后，用200μL冷TRIS緩沖鹽水(TBS)緩沖液洗板兩次。用50μL胱天蛋白酶試驗緩沖液(20mM Tris-HCl pH7.4，0.1％NP-40，0.1％Chaps，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.1mM PMSF，2mg/ml胰凝乳蛋白酶抑制劑，抑酶醛肽，胃酶抑素，抗蛋白酶)裂解細胞，并在震蕩下于4℃溫育30分鐘。將45μL胱天蛋白酶試驗緩沖液和5μL1mg/ml的Ac-DEVD-AMC加入各孔中，震蕩板并在37℃溫育16小時。在TECAN分光光度計中測定釋放AMC的量，激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片分別設(shè)置在360nm和444nm。以與未處理細胞獲得的信號相比表達胱天蛋白酶活性百分比。
結(jié)果顯示，優(yōu)選的化合物的IC50值與對SKOV3s的EC50值相關(guān)，并且通常小于1μM。
細胞生物化學 A.XIAP和PARP/胱天蛋白酶-3/胱天蛋白酶-9的檢測 通過蛋白質(zhì)印跡法檢測細胞表達的XIAP和PARP。將細胞以300000細胞/孔鋪于60mm孔(6孔板)。第二天將細胞用所示濃度的選定化合物處理。24小時后將細胞胰蛋白酶化，通過在1800RPM于4℃離心沉淀。將所得沉淀物用冷TBS漂洗2次。將最終洗滌過的細胞沉淀用250μL溶胞緩沖液(NP-40，甘油，1％蛋白酶抑制劑混合物(Sigma))溶解，在輕微震蕩下置于4℃下25分鐘。將細胞提取物在4℃下10,000rpm離心10分鐘。保留上清液以及沉淀用于如下所述的蛋白質(zhì)印跡法分析。由上清液中測定蛋白質(zhì)含量，并將約50μg蛋白質(zhì)在10％SDS-PAGE分離。將沉淀用溶解緩沖液洗滌，并再懸浮于50μL Lamelli緩沖液1X中，使之沸騰并在SDS-PAGE上分離。在電泳后，將各凝膠在0.6A電轉(zhuǎn)移至硝基纖維素膜上2小時。用在TBST(含0.1％(v/v)吐溫-20的TBS)中的5％脫脂乳在室溫下封閉膜非特異性位點1小時。
對于蛋白質(zhì)免疫檢測，將膜與XIAP(克隆48，得自Becton-Dickison)或者PARP(Cell signal)的第一抗體(primary antibody)溫育過夜，或者將胱天蛋白酶-3或者胱天蛋白酶-9第一抗體在震蕩下于4℃以以下稀釋液溫育 XIAP克隆80(Becton-Dickinson).....1/2500 PARP(Cell Signal).......................1/2500 胱天蛋白酶3(Sigma).........................1/1500 胱天蛋白酶9(Upstate)........................1/1000 在整夜溫育后，膜接受三次在TBST中的15分鐘的洗滌，然后在室溫下在與HRP-酶(Chemicon)偶聯(lián)的第二抗體的存在下溫育1小時，并以1/5000稀釋。在溫育后，將各膜用TBST洗滌三次，并通過加入熒光底物(ECL試劑盒Amersham)并捕獲不同曝光時間的X-RAY膜上的信號來檢測免疫反應(yīng)帶。
某些示例性化合物顯示在接近一定濃度時誘導PARP的斷裂，所述濃度與對SKOW3s的EC50值有關(guān)并且通常小于1μM。
中空纖維模型(Hollow fiber model) 采用中空纖維體內(nèi)模型來證實選定化合物對選定細胞系的單一藥物治療或者與選定的細胞毒性劑組合的體內(nèi)效力。在第一天，培養(yǎng)所選的細胞系并以約40,000細胞/纖維的細胞密度填充纖維。在手術(shù)日(第四天)，將三條纖維皮下植入28-35Nu/Nu CD-1雄性小鼠中。在第五天，小鼠開始每日接受通過皮下途徑注射的對照載體或者含有適宜濃度的所選化合物的載體和/或通過腹膜內(nèi)途徑注射的細胞毒性劑。在連續(xù)以藥物處理3-7天后，犧牲動物，移除所有纖維并用MTT試驗測定剩余細胞的代謝活性(metabolic viability)?；衔锏男ЯΧx為載體處理的動物以及用單獨的化合物或者與細胞毒性劑組合的所述化合物處理的動物之間的差異。
在第一天植入MDA-MB-231細胞。以1、3和10mg/kg(2mg/mL在20％的HPCD水溶液中)通過IV推注(尾靜脈)注射給藥化合物3連續(xù)4天。與20％HPCD對照相比，以化合物3在3mg/kg的藥物濃度下觀察到完全的細胞生長抑制。
使用化合物3進行的SKOV-3人卵巢癌細胞系異種移植研究 在右肋部皮下，向雌性CD-1裸鼠(約20-25g)皮下注射在50％matrigel中的5×106SKOV-3人卵巢腫瘤細胞。在第55天，當腫瘤約100mm3時，開始用化合物3以5天給藥/2天停藥的治療方案在試驗期間進行治療。用數(shù)字測徑器測量腫瘤大小并按照V＝(a×b2)/2計算，其中a為最長尺寸，b為寬度。
在以1mg/kg劑量給藥化合物3時觀察到腫瘤消退，而在以0.3mg/kg劑量給藥化合物3時觀察到腫瘤停滯(見圖1)。
用化合物3進行的MDA-MB-231人乳腺癌細胞系異種移植試驗 向雌性CD-1裸鼠(約20-25g)右肋部皮下注射1×106MDA-MB-231人乳腺腫瘤細胞。在第71天，當腫瘤約90mm3時，開始用化合物3以5天給藥/2天停藥的治療方案在試驗期間進行治療。用數(shù)字測徑器測量腫瘤大小并按照V＝(a×b2)/2計算，其中a為最長尺寸，b為寬度。
在以1mg/kg劑量給藥化合物3時觀察到腫瘤消退(見圖2)。
藥動學試驗 將選定的化合物溶于生理鹽水并以包括靜脈內(nèi)推注、靜脈內(nèi)輸注、口服以及皮下注射的不同給藥途徑以各種劑量給藥。
通過若干給藥途徑，本發(fā)明化合物均表現(xiàn)出可接受的藥動學性質(zhì)。
體外功效 試驗證明本發(fā)明化合物在體外以0.1nM至1000nM之間的EC50殺死SKOV3(卵巢癌)、MDA-MB-231(乳腺癌)、BT549(乳腺癌)，HL-60(急性早幼粒細胞白血病)以及PANC-1(胰腺癌)(參見表7)。
使用各種SKOV3對這些化合物的SAR作圖，顯示出若干有趣的趨勢。由順式和反式脯氨酸衍生物3和29的EC50(EC50分別為1nM和88nM)可以看出，吡咯烷橋連位點處立體化學的變化影響了化合物的效力。酰胺橋連單元提供了活性化合物，但是通過改變橋連單元的成分觀察到很大范圍的對SKOV3細胞的效力。小的、構(gòu)型受限制的橋連單元包括但不限于1，4-苯基二羧酰胺(對苯二酰胺)、1，3-苯基二羧酰胺、2，6-萘基二羧酰胺、1，4-環(huán)己基二羧酰胺、3，5-吡啶基二羧酰胺或者C2-C10脂肪族二羧酰胺提供了高度活性的化合物。包含雙-甘氨酸酰胺的橋連單元如化合物30提供了較低活性的化合物(EC50＝188nM)。
醚、脲和磺酰胺橋連單元提供了對SKOV3細胞有活性的化合物，但磺酰胺橋連單元通常活性較小。
通過改變P4取代基觀察到對SKOV3細胞效力的顯著的變化，其中在R4/R400酰胺處的(R)-立體化學提供比相應(yīng)的(S)-異構(gòu)體效力高5-10倍的化合物。在所述酰胺附近引入親水性部分提供了較低活性的化合物如化合物49。
此外，N-端丙氨酸部分的烷基化提供了比相應(yīng)的未取代的N-端丙氨酸衍生物效力最多高100倍的化合物。
癌細胞系的一個子集并非固有地對本發(fā)明的化合物敏感，它們的EC50高于1000nM。我們已經(jīng)證明，IAP BIR結(jié)合化合物顯示出與死亡受體激動劑如TRAIL、激動劑TRAIL受體抗體、TNF-α等的協(xié)同殺各種癌細胞系的活性。我們于此公開，式I和II的化合物還表現(xiàn)出與死亡受體激動劑如TRAIL的協(xié)同殺各種癌細胞系的活性。當用化合物和TRAIL或拮抗劑TRAIL抗體處理這些細胞時，這些細胞系對化合物高度敏感，EC50通常小于100nM。
這些癌細胞系包括HELA(宮頸癌)、HCT116(結(jié)腸癌)、PC3(前列腺癌)、OVCAR-3(卵巢癌)、HEY(卵巢癌)、和H460(肺癌)。在TRAIL(1-3ng/mL)和各種濃度的化合物3的存在下，對上述細胞系的EC50小于1000nM。
體內(nèi)效力 在SKOV3和MDA-MB-231異種移植腫瘤模型中檢測化合物3(參見圖1和2)。在兩種情況下，當給藥5天停藥2天時，在1mg/kg均觀察到腫瘤消退。在SKOV3異種移植中在0.1mg/kg觀察到腫瘤停滯。
討論 上述結(jié)果表明，本發(fā)明的IAP BIR結(jié)合化合物在體外和體內(nèi)均為非常有效的藥物，其中在IAP結(jié)合和IAP調(diào)節(jié)間的機制關(guān)聯(lián)可被認為與抗癌功效有關(guān)。我們證明了本發(fā)明的化合物以高的親和力與IAP的BIR域結(jié)合，導致活性胱天蛋白酶3和9的釋放。并且，這些化合物導致在癌細胞中誘導凋亡，同時協(xié)同地使癌細胞系對死亡受體激動劑如TRAIL更敏感。此外，當用本發(fā)明的化合物處理患有腫瘤的動物時，在藥物學相關(guān)的劑量本發(fā)明化合物使得腫瘤表現(xiàn)出停滯和/或消退。
通過若干給藥途徑，本發(fā)明化合物均表現(xiàn)出可接受的藥動學性質(zhì)。
其他實施方案 由前述說明本領(lǐng)域技術(shù)人員將了解，可對此處記載的發(fā)明作出變更和修改以適應(yīng)各種用途和條件。這些實施方案也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本說明書中所提到的所有出版物均并入此處作為參考。
權(quán)利要求
1.式I或II代表的化合物的異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或互變異構(gòu)體，或前藥，或用可檢測的標記或親和標簽標記的式I或II的化合物
其中
m為0、1或2；
Y為NH、O或S；
BG為
1)-X-L-X1；
X和X1獨立地選自
1)O，
2)NR13，
3)S，
4)-C1-C6烷基-，
5)-C1-C6烷基-O，
6)-C1-C6烷基-NR13-，
7)-C1-C6烷基-S-，
或
L選自
1)-C1-C20烷基-，
2)-C2-C6烯基-，
3)-C2-C4炔基-，
4)-C3-C7環(huán)烷基-，
5)-芳基-，
6)-聯(lián)苯基-，
7)-雜芳基-，
8)-雜環(huán)基-，
9)-C1-C6烷基-(C2-C6烯基)-C1-C6烷基-，
10)-C1-C6烷基-(C2-C4炔基)-C1-C6烷基-
11)-C1-C6烷基-(C3-C7環(huán)烷基)-C1-C6烷基-，
12)-C1-C6烷基-芳基-C1-C6烷基-，
13)-C1-C6烷基-聯(lián)苯基-C1-C6烷基-，
14)-C1-C6烷基-雜芳基-C1-C6烷基-，
15)-C1-C6烷基-雜環(huán)基-C1-C6烷基-，
16)-C1-C6烷基-Y-C1-C6烷基-，
17)-芳基-Y-芳基-，
18)-雜芳基-Y-雜芳基-，
19)-雜環(huán)基-Y-雜環(huán)基-，
或
其中所述烷基、烯基、炔基和環(huán)烷基任選地被一個或多個R6取代基取代，并且所述芳基、聯(lián)苯基、雜芳基、和雜環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
Q和Q1獨立地選自
1)NR4R5，
2)OR11，或
3)S(O)mR11；或
Q和Q1獨立地選自
1)芳基，或
2)雜芳基，所述芳基和所述雜芳基任選地被一個或多個R10取代基取代；
A和A1獨立地選自
1)-CH2-，
2)-CH2CH2-，
3)-CH(C1-C6烷基)-，
4)-CH(C3-C7環(huán)烷基)-，
5)-C3-C7環(huán)烷基-，
6)-CH(C1-C6烷基-C3-C7環(huán)烷基)-，
7)-C(O)-，或
8)-C(O)OR13；
R1和R100獨立地選自
1)H，或
2)任選地被一個或多個R6取代基取代的C1-C6烷基；
R2和R200獨立地選自
1)H，或
2)任選地被一個或多個R6取代基取代的C1-C6烷基；
R3和R300獨立地為任選地被一個或多個R6取代基取代的C1-C6烷基；
R4和R5分別獨立地選自
1)H，
2)鹵代烷基，
3)←C1-C6烷基，
4)←C2-C6烯基，
5)←C2-C4炔基，
6)←C3-C7環(huán)烷基，
7)←C3-C7環(huán)烯基，
8)←芳基，
9)←雜芳基，
10)←雜環(huán)基，
11)←雜雙環(huán)基，
12)←C(O)-R11，
13)←C(O)O-R11，
14)←C(＝Y(jié))NR8R9，或
15)←S(O)2-R11，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
R6為
1)鹵素，
2)NO2，
3)CN，
4)鹵代烷基，
5)C1-C6烷基，
6)C2-C6烯基，
7)C2-C4炔基，
8)C3-C7環(huán)烷基，
9)C3-C7環(huán)烯基，
10)芳基，
11)雜芳基，
12)雜環(huán)基，
13)雜雙環(huán)基，
14)OR7，
15)S(O)mR7，
16)NR8R9，
17)NR8S(O)2R11，
18)COR7，
19)C(O)OR7，
20)CONR8R9，
21)S(O)2NR8R9
22)OC(O)R7，
23)OC(O)Y-R11，
24)SC(O)R7，或
25)NC(Y)NR8R9，
其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
R7為
1)H，
2)鹵代烷基，
3)C1-C6烷基，
4)C2-C6烯基，
5)C2-C4炔基，
6)C3-C7環(huán)烷基，
7)C3-C7環(huán)烯基，
8)芳基，
9)雜芳基，
10)雜環(huán)基，
11)雜雙環(huán)基，
12)R8R9NC(＝Y(jié))，或
13)C1-C6烷基-C2-C4烯基，或
14)C1-C6烷基-C2-C4炔基，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
R8和R9分別獨立地為
1)H，
2)鹵代烷基，
3)C1-C6烷基，
4)C2-C6烯基，
5)C2-C4炔基，
6)C3-C7環(huán)烷基，
7)C3-C7環(huán)烯基，
8)芳基，
9)雜芳基，
10)雜環(huán)基，
11)雜雙環(huán)基，
12)C(O)R11，
13)C(O)Y-R11，或
14)S(O)2-R11，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
或者R8和R9與它們所連接的氮原子一同形成任選地被一個或多個R6取代基取代的五元、六元或七元雜環(huán)；
R10為
1)鹵素，
2)NO2，
3)CN，
4)B(OR13)(OR14)，
5)C1-C6烷基，
6)C2-C6烯基，
7)C2-C4炔基，
8)C3-C7環(huán)烷基，
9)C3-C7環(huán)烯基，
10)鹵代烷基，
11)OR7，
12)NR8R9，
13)SR7，
14)COR7，
15)C(O)OR7，
16)S(O)mR7，
17)CONR8R9，
18)S(O)2NR8R9，
19)芳基，
20)雜芳基，
21)雜環(huán)基，或
22)雜雙環(huán)基，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、和環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；
R11為
1)鹵代烷基，
2)C1-C6烷基，
3)C2-C6烯基，
4)C2-C4炔基，
5)C3-C7環(huán)烷基，
6)C3-C7環(huán)烯基，
7)芳基，
8)雜芳基，
9)雜環(huán)基，或
10)雜雙環(huán)基，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
R12為
1)鹵代烷基，
2)C1-C6烷基，
3)C2-C6烯基，
4)C2-C4炔基，
5)C3-C7環(huán)烷基，
6)C3-C7環(huán)烯基，
7)芳基，
8)雜芳基，
9)雜環(huán)基，
10)雜雙環(huán)基，
11)C(O)-R11，
12)C(O)O-R11，
13)C(O)NR8R9，
14)S(O)m-R11，或
15)C(＝Y(jié))NR8R9，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
R13和R14分別獨立地為
1)H，或
2)C1-C6烷基；或
R13和R14結(jié)合形成雜環(huán)或雜雙環(huán)；
R20為
1)H，
2)NH2，或
3)NHFmoc。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為CH2。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中A為CH2而A1為C＝O。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C(O)OCH3。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C(O)OH。
7.權(quán)利要求1的化合物，其包括式1A至1C的化合物
其中BG、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3、和R300如權(quán)利要求1中所定義。
8.權(quán)利要求1的化合物，其包括式2A和2B的化合物
其中BG、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3、和R20如權(quán)利要求1中所定義。
9.權(quán)利要求1的化合物，其中BG為-X-L-X1-。
10.權(quán)利要求1的化合物，其包括式1a至1c的化合物
其中L、X、X1、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3、和R300如權(quán)利要求1中所定義。
11.權(quán)利要求1的化合物，其包括式1.1a至1.1c的化合物
其中L、X、X1、A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3、R300、R4、R400、R5和R500如權(quán)利要求1中所定義。
12.權(quán)利要求1的化合物，其包括式2a的化合物
其中L、X、X1、A、A1、B、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3和R20如權(quán)利要求1中所定義。
13.權(quán)利要求1的化合物，其中X和X1獨立地選自
1)O，
2)NR13，
3)S，
4)-C1-C6烷基-O-，
5)-C1-C6烷基，
或
14.權(quán)利要求13的化合物，其中X和X1獨立地選自
1)O，
或
15.權(quán)利要求1的化合物，其中L選自
1)-C1-C20烷基-，
2)-C3-C7環(huán)烷基-，
3)-芳基-，
4)-聯(lián)苯基-，
5)-雜芳基-，
6)-C1-C6烷基-(C2-C4炔基)-C1-C6烷基-
7)-C1-C6烷基-芳基-C1-C6烷基-，
8)-芳基-Y-芳基-，
或
其中所述烷基和環(huán)烷基任選地被一個或多個R6取代基取代，并且所述芳基、聯(lián)苯基和雜芳基任選地被一個或多個R10取代基取代。
16.權(quán)利要求15的化合物，其中L選自以下組中
和
17.權(quán)利要求16的化合物，其中r為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10的整數(shù)。
18.權(quán)利要求1的化合物，其包括式1.1至1.18的化合物
其中r為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10的整數(shù)，并且A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3和R300如權(quán)利要求1中所定義。
19.權(quán)利要求1的化合物，其包括式2.1和2.2的化合物
其中A、A1、Q、Q1、R1、R100、R2、R200、R3、R300和R20如權(quán)利要求1中所定義。
20.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R100均為H。
21.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R100均為C1-C6烷基。
22.權(quán)利要求21的化合物，其中R1和R100均為CH3。
23.權(quán)利要求1的化合物，其中R2和R200均為任選地被OH取代的C1-C6烷基。
24.權(quán)利要求23的化合物，其中R2和R200均為CH3。
25.權(quán)利要求23的化合物，其中R2為CH2OH而R300為CH3。
26.權(quán)利要求23的化合物，其中R2和R200均為CH2OH。
27.權(quán)利要求23的化合物，其中R2和R200均為CH2CH3。
28.權(quán)利要求1的化合物，其中R3和R300均為C1-C6烷基。
29.權(quán)利要求28的化合物，其中R3和R300均為C(CH3)3。
30.權(quán)利要求1的化合物，其中Q和Q1均為NR4R5。
31.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，Q和Q1均為NR4R5，R4為H并且
R5選自
1)←C1-C6烷基，
2)←C2-C6烯基，
3)←C2-C4炔基，
4)←C3-C7環(huán)烷基，
5)←C3-C7環(huán)烯基，
6)←芳基，
7)←雜芳基，
8)←雜環(huán)基，或
9)←雜雙環(huán)基，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
其中R6和R10如此處所定義。
32.權(quán)利要求31的化合物，其中R4為H而R5選自
1)←C1-C6烷基，或
2)←芳基，
其中所述烷基任選地被一個或兩個R6取代基取代；并且其中所述芳基任選地被一個R10取代基取代；
其中R6和R10如此處所定義。
33.權(quán)利要求32的化合物，其中R4為H而R5選自以下組中
以及
34.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
35.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
36.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q為
Q1為
37.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
38.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
39.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
40.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
41.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
42.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
43.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
44.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
45.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
46.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
47.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
48.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
49.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
50.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
51.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
52.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
53.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
54.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
55.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
56.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
57.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
58.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為C＝O，而Q和Q1均為
59.權(quán)利要求1的化合物，其中A和A1均為CH2而Q和Q1均為NR4R5，R4和R5分別獨立地為
1)鹵代烷基，
2)←C1-C6烷基，
3)←C2-C6烯基，
4)←C2-C4炔基，
5)←C3-C7環(huán)烷基，
6)←C3-C7環(huán)烯基，
7)←芳基，
8)←雜芳基，
9)←雜環(huán)基，
10)←雜雙環(huán)基，
11)←C(O)-R11，
12)←C(O)O-R11，
13)←C(＝Y(jié))NR8R9，或
14)←S(O)2-R11，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
其中Y、R6、R8、R9、R10和R11如此處所定義。
60.權(quán)利要求59的化合物，其中R4和R5獨立地選自
1)C1-C6烷基，
2)←C(O)-R11，
3)←C(O)O-R11，或
4)←S(O)2-R11，
其中所述烷基被R6取代基取代；
其中R6和R11如此處所定義。
61.權(quán)利要求60的化合物，其中R4為S(O)2CH3而R5為
或
62.權(quán)利要求60的化合物，其中R4為C(O)CH3而R5為
63.權(quán)利要求60的化合物，其中R4為
而R5為
或
64.權(quán)利要求1的化合物，其中R11為
1)C1-C6烷基，或
2)芳基，
其中所述烷基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基任選地被一個或多個R10取代基取代；
其中R6和R10如此處所定義。
65.權(quán)利要求64的化合物，其中R11為
1)任選地被一個或兩個R6取代基取代的C1-C6烷基，或
2)任選地被一個R10取代基取代的苯基；
其中所述R6和R10取代基如此處所定義。
66.權(quán)利要求1的化合物，其中R6為
1)鹵素，
2)NO2，
3)CN，
4)芳基，
5)雜芳基，
6)雜環(huán)基，
7)雜雙環(huán)基，
8)OR7，
9)SR7，或
10)NR8R9，
其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
其中R7、R8、R9和R10如此處所定義。
67.權(quán)利要求66的化合物，其中R6為
1)鹵素，
2)芳基，或
3)NR8R9，
其中所述芳基任選地被一個R10取代基取代；
其中R8、R9和R10如此處所定義。
68.權(quán)利要求1的化合物，其中R8和R9分別獨立地為
1)H，
2)鹵代烷基，
3)C1-C6烷基，
4)C2-C6烯基，
5)C2-C4炔基，
6)C3-C7環(huán)烷基，或
7)C3-C7環(huán)烯基，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；
其中所述R6取代基如此處所定義。
69.權(quán)利要求1的化合物，其中R10為
1)鹵素，
2)NO2，
3)CN，
4)鹵代烷基，
5)OR7，
6)NR8R9，或
7)SR7；
其中R7、R8、和R9如此處所定義。
70.權(quán)利要求1的化合物，其選自以下組中
71.權(quán)利要求1的化合物，其選自以下組中
和
72.由式1-iv代表的中間體化合物
其中PG3、R1、R2、R3、A、和Q如權(quán)利要求1中所定義。
73.由式2-iv代表的中間體化合物
其中PG4、R1、R2、R3、A、和Q如權(quán)利要求1中所定義。
74.由式3-ii代表的中間體化合物
其中PG4、PG400、R1、R2、R3、A、和Q如權(quán)利要求1中所定義，并且L為-(CH2)r-、-(CH2)r-Y-(CH2)r-、-烷基-芳基-烷基-、-烷基-雜芳基-烷基-、環(huán)烷基、芳基或雜芳基。
75.由式4-i代表的中間體化合物
其中PG4、PG400、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、X、X1、Q和Q1如權(quán)利要求1中所定義。
76.由式6-ii代表的中間體化合物
其中PG4、PG400、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q和Q1如權(quán)利要求1中所定義。
77.由式7-v代表的中間體化合物
其中PG4、PG400、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q和Q1如權(quán)利要求1中所定義。
78.由式8-ii代表的中間體化合物
其中PG4、r、L、R100、R200、A1、和Q1如權(quán)利要求1中所定義。
79.由式8-iii代表的中間體化合物
其中PG4、PG400、r、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q和Q1如權(quán)利要求1中所定義。
80.由式17-i代表的中間體化合物
其中PG4、PG400、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q和Q1如權(quán)利要求1中所定義。
81.由式18-i代表的中間體化合物
其中PG4、PG400、L、R1、R100、R2、R200、R3、R300、A、A1、Q和Q1如權(quán)利要求1中所定義。
82.由式19-8代表的中間體化合物
其中PG4、PG400、L、X、X1、R1、R100、R2、R200、R3、R300、R4、R400、R5和R500如權(quán)利要求1中所定義。
83.由式19-3代表的中間體化合物
其中PG2、L、和X如權(quán)利要求1中所定義。
84.由式20-2代表的中間體化合物
其中L、X、X1、R4和R5如權(quán)利要求1中所定義。
85.由式20-4代表的中間體化合物
其中L、X、X1、R3、R4、和R5如權(quán)利要求1中所定義。
86.制備如前所述的式I所代表的化合物的方法，所述方法包括
a)將兩個由式1(iv)代表的中間體在溶劑中偶聯(lián)
其中PG3、R1、R2、R3、A、和Q如此處所定義；以及
b)除去保護基從而形成式I的化合物。
87.制備如前所述的式I所代表的化合物的方法，所述方法包括
a)將式2(iv)所代表的中間體與活化的二酸(0.5當量)在溶劑中偶聯(lián)
其中PG4為保護基，而R1、R2、R3、A、和Q如此處所定義；以及
b)除去保護基，從而形成式I的化合物。
88.式I或II所代表的化合物或其鹽在制備用于治療或預防以凋亡不足為特征的疾病的藥物中的應(yīng)用
其中
m為0、1或2；
Y為NH、O或S；
BG為
1)-X-L-X1-；
X和X1獨立地選自
1)O，
2)NR13，
3)S，
4)-C1-C6烷基-，
5)-C1-C6烷基-O，
6)-C1-C6烷基-NR13-，
7)-C1-C6烷基-S-，
或
L選自
1)-C1-C20烷基-，
2)-C2-C6烯基-，
3)-C2-C4炔基-，
4)-C3-C7環(huán)烷基-，
5)-芳基-，
6)-聯(lián)苯基-，
7)-雜芳基-，
8)-雜環(huán)基-，
9)-C1-C6烷基-(C2-C6烯基)-C1-C6烷基-，
10)-C1-C6烷基-(C2-C4炔基)-C1-C6烷基-
11)-C1-C6烷基-(C3-C7環(huán)烷基)-C1-C6烷基-，
12)-C1-C6烷基-芳基-C1-C6烷基-，
13)-C1-C6烷基-聯(lián)苯基-C1-C6烷基-，
14)-C1-C6烷基-雜芳基-C1-C6烷基-，
15)-C1-C6烷基-雜環(huán)基-C1-C6烷基-，
16)-C1-C6烷基-Y-C1-C6烷基-，
17)-芳基-Y-芳基-，
18)-雜芳基-Y-雜芳基-，
19)-雜環(huán)基-Y-雜環(huán)基-，
或
其中所述烷基、烯基、炔基和環(huán)烷基任選地被一個或多個R6取代基取代，并且所述芳基、聯(lián)苯基、雜芳基、和雜環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
Q和Q1獨立地選自
1)NR4R5，
2)OR11，或
3)S(O)mR11；或
Q和Q1獨立地選自
1)芳基，或
2)雜芳基，所述芳基和所述雜芳基任選地被一個或多個R10取代基取代；
A和A1獨立地選自
1)-CH2-，
2)-CH2CH2-，
3)-CH(C1-C6烷基)-，
4)-CH(C3-C7環(huán)烷基)-，
5)-C3-C7環(huán)烷基-，
6)-CH(C1-C6烷基-C3-C7環(huán)烷基)-，
7)-C(O)-，或
8)-C(O)OR13；
R1和R100獨立地選自
1)H，或
2)任選地被一個或多個R6取代基取代的C1-C6烷基；
R2和R200獨立地選自
1)H，或
2)任選地被一個或多個R6取代基取代的C1-C6烷基；
R3和R300獨立地為任選地被一個或多個R6取代基取代的C1-C6烷基；
R4和R5分別獨立地選自
1)H，
2)鹵代烷基，
3)←C1-C6烷基，
4)←C2-C6烯基，
5)←C2-C4炔基，
6)←C3-C7環(huán)烷基，
7)←C3-C7環(huán)烯基，
8)←芳基，
9)←雜芳基，
10)←雜環(huán)基，
11)←雜雙環(huán)基，
12)←C(O)-R11，
13)←C(O)O-R11，
14)←C(＝Y(jié))NR8R9，或
15)←S(O)2-R11，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
R6為
1)鹵素，
2)NO2，
3)CN，
4)鹵代烷基，
5)C1-C6烷基，
6)C2-C6烯基，
7)C2-C4炔基，
8)C3-C7環(huán)烷基，
9)C3-C7環(huán)烯基，
10)芳基，
11)雜芳基，
12)雜環(huán)基，
13)雜雙環(huán)基，
14)OR7，
15)S(O)mR7，
16)NR8R9，
17)NR8S(O)2R11，
18)COR7，
19)C(O)OR7，
20)CONR8R9，
21)S(O)2NR8R9
22)OC(O)R7，
23)OC(O)Y-R11，
24)SC(O)R7，或
25)NC(Y)NR8R9，
其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
R7為
1)H，
2)鹵代烷基，
3)C1-C6烷基，
4)C2-C6烯基，
5)C2-C4炔基，
6)C3-C7環(huán)烷基，
7)C3-C7環(huán)烯基，
8)芳基，
9)雜芳基，
10)雜環(huán)基，
11)雜雙環(huán)基，
12)R8R9NC(＝Y(jié))，或
13)C1-C6烷基-C2-C4烯基，或
14)C1-C6烷基-C2-C4炔基，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
R8和R9分別獨立地為
1)H，
2)鹵代烷基，
3)C1-C6烷基，
4)C2-C6烯基，
5)C2-C4炔基，
6)C3-C7環(huán)烷基，
7)C3-C7環(huán)烯基，
8)芳基，
9)雜芳基，
10)雜環(huán)基，
11)雜雙環(huán)基，
12)C(O)R11，
13)C(O)Y-R11，或
14)S(O)2-R11，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基；
或者R8和R9與它們所連接的氮原子一同形成任選地被一個或多個R6取代基取代的五元、六元或七元雜環(huán)；
R10為
1)鹵素，
2)NO2，
3)CN，
4)B(OR13)(OR14)，
5)C1-C6烷基，
6)C2-C6烯基，
7)C2-C4炔基，
8)C3-C7環(huán)烷基，
9)C3-C7環(huán)烯基，
10)鹵代烷基，
11)OR7，
12)NR8R9，
13)SR7，
14)COR7，
15)C(O)OR7，
16)S(O)mR7，
17)CONR8R9，
18)S(O)2NR8R9，
19)芳基，
20)雜芳基，
21)雜環(huán)基，或
22)雜雙環(huán)基，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、和環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；
R11為
1)鹵代烷基，
2)C1-C6烷基，
3)C2-C6烯基，
4)C2-C4炔基，
5)C3-C7環(huán)烷基，
6)C3-C7環(huán)烯基，
7)芳基，
8)雜芳基，
9)雜環(huán)基，或
10)雜雙環(huán)基，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
R12為
1)鹵代烷基，
2)C1-C6烷基，
3)C2-C6烯基，
4)C2-C4炔基，
5)C3-C7環(huán)烷基，
6)C3-C7環(huán)烯基，
7)芳基，
8)雜芳基，
9)雜環(huán)基，
10)雜雙環(huán)基，
11)C(O)-R11，
12)C(O)O-R11，
13)C(O)NR8R9，
14)S(O)m-R11，或
15)C(＝Y(jié))NR8R9，
其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基任選地被一個或多個R6取代基取代；并且其中所述芳基、雜芳基、雜環(huán)基、和雜雙環(huán)基任選地被一個或多個R10取代基取代；
R13和R14分別獨立地為
1)H，或
2)C1-C6烷基；或
R13和R14結(jié)合形成雜環(huán)或雜雙環(huán)；以及
R20為
1)H，
2)NH2，或
3)NHFmoc。
89.權(quán)利要求1至71之一的化合物在制備用于治療或預防以凋亡不足為特征的疾病的藥物中的應(yīng)用。
90.權(quán)利要求88或89的應(yīng)用，其中所述疾病為癌癥。
91.權(quán)利要求1至71之一的化合物在制備用于治療或預防增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。
92.權(quán)利要求1至71之一的化合物與如下物質(zhì)組合在制備用于治療或預防增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用，其中所述物質(zhì)選自
a)雌激素受體調(diào)節(jié)劑，
b)雄激素受體調(diào)節(jié)劑，
c)類視黃醇受體調(diào)節(jié)劑，
d)細胞毒性劑，
e)抗增殖劑，
f)異戊二烯基-蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑，
g)HMG-CoA還原酶抑制劑，
h)HIV蛋白酶抑制劑，
i)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，
k)血管發(fā)生抑制劑，
l)PPAR-γ激動劑，
m)PPAR-δ激動劑，
n)固有的多抗藥性的抑制劑，
o)止吐劑，
p)可用于治療貧血的藥物，
q)可用于治療嗜中性白血球減少癥的藥物，
r)免疫促進劑，
s)蛋白酶體抑制劑；
t)HDAC抑制劑；
u)蛋白酶體中化學胰蛋白酶樣活性的抑制劑；或
v)E3連接酶抑制劑；
w)免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)劑例如但不限于干擾素-α、卡介苗(BCG)、以及能夠誘導細胞因子如各種干擾素、TNF釋放或誘導死亡受體配體如TRAIL釋放的電離輻射(UVB)；
x)死亡受體TRAIL調(diào)節(jié)劑和和TRAIL激動劑如人源化抗體HGS-ETR1和HGS-ETR2；
或者所述化合物與放療組合或順序地進行放療。
93.權(quán)利要求1至71之一的化合物與死亡受體激動劑組合在制備用于治療或預防對象的增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。
94.權(quán)利要求93的應(yīng)用，其中所述死亡受體激動劑為TRAIL。
95.權(quán)利要求93的應(yīng)用，其中所述死亡受體激動劑為TRAIL抗體。
96.權(quán)利要求93的應(yīng)用，其中所述死亡受體激動劑以產(chǎn)生協(xié)同作用的量存在。
97.權(quán)利要求92或93的應(yīng)用，其中所述增殖性疾病為癌癥。
98.用于治療或預防以凋亡不足為特征的疾病的藥物組合物，其包含與藥物學可接受的載體、稀釋劑或賦形劑相混合的權(quán)利要求1至71之一所述的化合物。
99.用于預防或治療增殖性疾病的藥物組合物，其包含與增加一種或多種死亡受體激動劑的循環(huán)水平的任何化合物組合的權(quán)利要求1至71之一所述的化合物。
100.用于制備藥物組合物的方法，所述方法包括將權(quán)利要求1至71之一的化合物與藥物學可接受的載體、稀釋劑或賦形劑混合。
101.由式19-2代表的中間體化合物
其中PG1、PG2、L、X如此處所定義。
102.式20-1a代表的中間體化合物
其中PG1、L、X、X1、R4和R5如此處所定義。
103.制備式I和II的化合物的藥物學可接受的鹽的方法，其中將式I或II的化合物用1至2當量如此處所定義的藥物學可接受的酸處理。
104.檢測體內(nèi)IAP功能損失或IAP抑制的方法，所述方法包括a)向?qū)ο蠼o藥治療有效量的權(quán)利要求88所述的藥物組合物；b)自所述對象分離組織樣品；以及c)自所述樣品檢測IAP功能損失或IAP抑制。
105.權(quán)利要求104的方法，其中所述IAP為XIAP。
106.權(quán)利要求104的方法，其中所述IAP為c-IAP1。
107.權(quán)利要求104的方法，其中所述IAP為c-IAP2。
108.權(quán)利要求104的方法，其中所述組織是腫瘤樣品。
109.權(quán)利要求104的方法，其中所述組織是正常組織。
110.權(quán)利要求104的方法，其中所述組織分離自造血系統(tǒng)。
111.權(quán)利要求104的方法，其中自血液分離單核細胞，并在所述單核細胞中測量IAP抑制或損失。
全文摘要
本發(fā)明公開了式I或II代表的化合物的異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或互變異構(gòu)體或其鹽，其中R1、R2、R3、R100、R200、R300、A、A1、BG、Q和Q1為文中所描述的取代基。本發(fā)明還公開了式I和II的化合物在治療增殖性疾病如癌癥中的應(yīng)用。
文檔編號A61K31/4025GK101443309SQ200780017496
公開日2009年5月27日 申請日期2007年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月16日
發(fā)明者A·布德羅爾特, P·比羅, J·雅奎斯, J·W·吉拉德 申請人:埃格拉醫(yī)療公司