專利名稱：細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑、蛋白 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有先島芙蓉(Hibiscus makinoi)的提取物的細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑、蛋白酶活性促進(jìn)劑、皮膚外用劑及食品。

背景技術(shù)：
作為隨著年齡增加而來的皮膚的彈性降低以及皺紋、色斑等老化癥狀的原因，可以例舉有細(xì)胞功能降低、膠原質(zhì)等的細(xì)胞外基質(zhì)成份的減少或性變、紫外線導(dǎo)致的黑色素產(chǎn)生或色素沉積以及細(xì)胞的氧化傷害等。為了防止或改善這樣的老化癥狀，以往已經(jīng)進(jìn)行了各種有效成份的搜尋以及配合研究。眾所周知作為細(xì)胞賦活劑有凸柑的香精(參照專利文獻(xiàn)1)，作為膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑有從山毛櫸科山毛櫸屬植物的樹芽中提取的提取物(參照專利文獻(xiàn)2)，作為美白劑有白鶴靈芝水和/或有機(jī)溶劑提取物(參照專利文獻(xiàn)3)，作為抗氧化劑有猿尾枷科猿尾枷屬植物的提取物(參照專利文獻(xiàn)4)，作為抗炎癥劑有茶多酚類(專利文獻(xiàn)5)，作為芳香化酶活性促進(jìn)劑有小球藻的提取物(專利文獻(xiàn)6)，作為蛋白酶活性促進(jìn)劑有從母菊、小牡丹蔓、洋常春藤選擇的1種以上的植物提取物(專利文獻(xiàn)7)。
而且，未發(fā)現(xiàn)有關(guān)于將先島芙蓉(Hibiscus makinoi)的提取物作為有效成份而得的細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑、皮膚外用劑以及食品的現(xiàn)有技術(shù)。
專利文獻(xiàn)1日本專利文獻(xiàn)特開2001—131045號(hào)公報(bào) 專利文獻(xiàn)2日本專利文獻(xiàn)特開平10—203952號(hào)公報(bào) 專利文獻(xiàn)3日本專利文獻(xiàn)特開2003—89630號(hào)公報(bào) 專利文獻(xiàn)4日本專利文獻(xiàn)特開平10—182413號(hào)公報(bào) 專利文獻(xiàn)5日本專利文獻(xiàn)特開平6—9391號(hào)公報(bào) 專利文獻(xiàn)6日本專利文獻(xiàn)特開2004—189609號(hào)公報(bào) 專利文獻(xiàn)7日本專利文獻(xiàn)特開2003—226613號(hào)公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容
目前使用的細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑、蛋白酶活性促進(jìn)劑、皮膚外用劑以及食品有實(shí)質(zhì)效果不充分的情況，從而期待著開發(fā)出更優(yōu)良的有效成份。鑒于這樣的現(xiàn)有技術(shù)的問題，本發(fā)明的目的在于，提供來自天然、安全性高、且效果更優(yōu)良的細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑、蛋白酶活性促進(jìn)劑、皮膚外用劑以及食品。
本發(fā)明的發(fā)明人為了解決上述問題，在對(duì)種種天然物進(jìn)行了研究后，發(fā)現(xiàn)了先島芙蓉(Hibiscus makinoi)的提取物的優(yōu)良的細(xì)胞賦活作用、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用、美白作用、抗氧化作用、抗炎癥作用、芳香化酶活性促進(jìn)作用以及蛋白酶活性促進(jìn)作用，從而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明提供了含有先島芙蓉(Hibiscus makinoi)的提取物的細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑、蛋白酶活性促進(jìn)劑、皮膚外用劑以及食品。
作為先島芙蓉的提取物，用從水、生理鹽水、磷酸緩沖液、極性有機(jī)溶劑、超臨界流體以及亞臨界流體組成的群中選擇的至少1種提取先島芙蓉而得的提取物能夠適用。
其中，優(yōu)選(1)常溫常壓下用低級(jí)醇水溶液提取的提取物、(2)高溫高壓下用水提取的提取物。用低級(jí)醇水溶液或水提取后，優(yōu)選進(jìn)行凍結(jié)干燥等除去水分。
從細(xì)胞賦活、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)、美白、抗氧化、抗炎癥、芳香化酶活性促進(jìn)以及蛋白酶活性促進(jìn)的效果更優(yōu)良的觀點(diǎn)出發(fā)，作為先島芙蓉，優(yōu)選使用先島芙蓉干燥粉碎物。
先島芙蓉的提取物由于作為谷胱甘肽產(chǎn)生促進(jìn)劑以及酪氨酸酶活性抑制劑發(fā)揮作用，所以能夠想到會(huì)產(chǎn)生美白效果。而且，先島芙蓉的提取物由于作為DPPH自由基消去劑以及SOD樣活性劑(過氧化物消去劑)發(fā)揮作用，所以能夠想到會(huì)產(chǎn)生抗氧化效果。而且，先島芙蓉的提取物由于作為透明質(zhì)酸酶活性抑制劑發(fā)揮作用，因而能夠想到會(huì)產(chǎn)生抗炎癥效果。
發(fā)明的效果 根據(jù)本發(fā)明，能夠提供具有優(yōu)良效果的細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑以及蛋白酶活性促進(jìn)劑。而且，通過將先島芙蓉的提取物配合到皮膚外用劑中，能夠提供在皺紋、松弛、肌膚粗糙、色斑、暗沉等皮膚老化癥狀的防止和改善方面發(fā)揮優(yōu)良效果的老化防止改善用皮膚外用劑、在黑色素產(chǎn)生抑制方面發(fā)揮優(yōu)良效果的美白用皮膚外用劑、以及在抗炎癥性方面發(fā)揮優(yōu)良效果的抗炎癥用皮膚外用劑。進(jìn)而，通過將先島芙蓉的提取物配合到食品中，能夠提供在美容、健康維持或營養(yǎng)補(bǔ)給方面發(fā)揮優(yōu)良效果的食品。

具體實(shí)施例方式 本發(fā)明中使用的先島芙蓉(Hibiscus makinoi)是錦葵科芙蓉屬的植物。先島芙蓉生長于石垣島等的南西諸島，在這些地域能夠獲得。
先島芙蓉的提取物是通過對(duì)先島芙蓉原料(稱為作為提取對(duì)象的先島芙蓉)進(jìn)行提取而得的。提取時(shí)，先島芙蓉的任何組織都可以利用，提取是容易且高效的，因此可以使用先島芙蓉的樹皮、葉子或果實(shí)。生的先島芙蓉可以提取，但考慮到提取效率，優(yōu)選在實(shí)施了細(xì)切、干燥、粉碎等處理后提取。
作為提取方法，可以適用浸漬提取溶劑的方法、使用超臨界流體或亞臨界流體的方法。為了提高提取效率，可以一邊攪拌一邊提取、或在提取溶劑中一邊通過均化器或攪拌器等對(duì)先島芙蓉原料均勻化一邊提取。
作為提取溶劑，可以使用水；甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇等低級(jí)醇(碳個(gè)數(shù)6以下的醇)；1，3-丁二醇、丙二醇、二丙二醇、丙三醇等多價(jià)醇；乙醚、丙醚等醚類；乙酸丁酯、乙酸乙酯等酯類；丙酮、甲乙酮等酮等的溶劑，也可以從這些溶劑中選擇1種或2種以上來使用。而且除了水之外，上述提取溶劑相當(dāng)于極性有機(jī)溶劑。
作為提取溶劑，還可以使用生理鹽水、磷酸緩沖液、磷酸緩沖生理鹽水等。而且，可以使用水、二氧化碳、乙烯、丙烯、乙醇、甲醇、氨等的1種或2種以上的超臨界流體或亞臨界流體。即，可以使用水、二氧化碳、乙烯、丙烯、乙醇、甲醇、氨等進(jìn)行先島芙蓉的超臨界提取或亞臨界提取。
作為提取溫度，從5℃左右到提取溶劑的沸點(diǎn)以下的溫度比較合適。提取時(shí)間根據(jù)提取溶劑的種類以及提取溫度而不同，1小時(shí)～14日左右比較合適。
而且，提取可以在常溫(室溫，例如10～40℃)、常壓(1氣壓＝約100kPa)下進(jìn)行，也可以使用高壓滅菌器等在高溫(例如，50℃～200℃、優(yōu)選50～150℃)、高壓(例如，超過100kPa而在500kPa以下、優(yōu)選超過100kPa而在300kPa以下)下進(jìn)行。
在進(jìn)行超臨界提取、亞臨界提取時(shí)，優(yōu)選在使用的流體的臨界溫度以上且臨界壓力以上的情況下提取。例如，在使用二氧化碳作為超臨界流體時(shí)，優(yōu)選在31℃以上且7.3MPa以上的情況下提取，在使用甲醇時(shí)，優(yōu)選在239℃以上且8.1MPa以上的情況下提取，在使用水時(shí)，優(yōu)選在374℃以上且22.1MPa以上的情況下提取。
對(duì)于先島芙蓉的提取，特別優(yōu)選的是，在常溫常壓下用低級(jí)醇水溶液(例如，甲醇水溶液或乙醇水溶液，特別是乙醇水溶液)提取，在高溫(例如，50～200℃、優(yōu)選50～150℃、特別是120℃)高壓下用水提取。通過進(jìn)行這樣的提取，能夠有效且切實(shí)地獲得作為細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑或蛋白酶活性促進(jìn)劑的功效優(yōu)良的提取物。
作為先島芙蓉的提取物，可以舉出有(1)先島芙蓉的提取液，(2)將先島芙蓉的提取液濃縮和/或干固后再度溶解于水或極性有機(jī)溶劑后而得的產(chǎn)物，(3)在不損害生理作用的范圍內(nèi)對(duì)先島芙蓉的提取液實(shí)施脫色、脫臭、脫鹽等的精制處理或根據(jù)柱層析法等的分離處理后所得的產(chǎn)物，(4)對(duì)先島芙蓉的提取液以及實(shí)施了上述處理后而得的先島芙蓉的提取液進(jìn)行凍結(jié)干燥、使用時(shí)為再度溶解于水或極性有機(jī)溶劑中而使用的狀態(tài)的提取物等。
在此，先島芙蓉的提取液是將從先島芙蓉原料提取的成份在提取溶劑中分散或溶解后的狀態(tài)的產(chǎn)物。并且，作為上述極性有機(jī)溶劑，可以舉出上述的低級(jí)醇、多價(jià)醇、醚類、酯類、酮等。
先島芙蓉的提取物具有優(yōu)良的細(xì)胞賦活作用、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用、美白作用、抗氧化作用、抗炎癥作用、芳香化酶活性促進(jìn)作用以及蛋白酶活性促進(jìn)作用，能夠作為細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑、蛋白酶活性促進(jìn)劑、皮膚外用劑以及食品利用。
把先島芙蓉的提取物作為有效成份的細(xì)胞賦活劑，具有對(duì)各種細(xì)胞的細(xì)胞賦活作用，特別是對(duì)真皮纖維芽細(xì)胞發(fā)揮優(yōu)良的細(xì)胞賦活效果。細(xì)胞賦活劑中先島芙蓉的提取物的含量，以細(xì)胞賦活劑總量為基準(zhǔn)，優(yōu)選為0.0001～100質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.001～50質(zhì)量％。
把先島芙蓉的提取物作為有效成份的膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑，具有膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用，特別是對(duì)在真皮纖維芽細(xì)胞中的膠原質(zhì)I產(chǎn)生以及在表皮角化細(xì)胞中的膠原質(zhì)IV產(chǎn)生發(fā)揮優(yōu)良的膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)效果。
膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑中的先島芙蓉的提取物的含量，以膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑總量為基準(zhǔn)，優(yōu)選為0.0001～100質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.001～50質(zhì)量％。
把先島芙蓉的提取物作為有效成份的美白劑，具有美白作用，特別是，通過以谷胱甘肽產(chǎn)生促進(jìn)作用、酪氨酸酶活性抑制作用以及黑色素產(chǎn)生抑制作用為基礎(chǔ)的美白作用，發(fā)揮良好改善色斑·雀斑等色素沉積癥狀的效果。美白劑中先島芙蓉的提取物的含量，以美白劑總量為基準(zhǔn)，優(yōu)選為0.0001～100質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.001～50質(zhì)量％。
把先島芙蓉的提取物作為有效成份的抗氧化劑，具有抗氧化作用，特別是，通過以DPPH自由基消去作用以及SOD樣活性作用(過氧化物消去作用)為基礎(chǔ)的抗氧化作用，發(fā)揮優(yōu)良的效果?？寡趸瘎┲邢葝u芙蓉的提取物的含量，以抗氧化劑總量為基準(zhǔn)，優(yōu)選為0.0001～100質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.001～50質(zhì)量％。
把先島芙蓉的提取物作為有效成份的抗炎癥劑，具有抗炎癥作用，特別是，通過以透明質(zhì)酸酶活性抑制作用為基礎(chǔ)的抗炎癥作用發(fā)揮優(yōu)良的效果?？寡装Y劑中先島芙蓉的提取物的含量，以抗炎癥劑總量為基準(zhǔn)，優(yōu)選為0.0001～100質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.001～50質(zhì)量％。
把先島芙蓉的提取物作為有效成份的芳香化酶活性促進(jìn)劑，通過以芳香化酶活性促進(jìn)作用為基礎(chǔ)的雌激素產(chǎn)生促進(jìn)作用，發(fā)揮優(yōu)良的美肌效果和抗老化效果。芳香化酶活性促進(jìn)劑中先島芙蓉的提取物的含量，以芳香化酶活性促進(jìn)劑總量為基準(zhǔn)，優(yōu)選為0.0001～100質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.001～50質(zhì)量％。
把先島芙蓉的提取物作為有效成份的蛋白酶活性促進(jìn)劑，通過活性化皮膚內(nèi)部的蛋白酶，促進(jìn)作為自身肌膚的再生的去角質(zhì)(Self Peeling)，發(fā)揮優(yōu)良的美肌效果以及抗老化效果。蛋白酶活性促進(jìn)劑中先島芙蓉的提取物的含量，以蛋白酶活性促進(jìn)劑總量為基準(zhǔn)，優(yōu)選為0.0001～100質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.001～50質(zhì)量％。
而且，通過先島芙蓉的提取物與皮膚外用劑配合，能夠得到在皮膚老化癥狀的防止和改善方面發(fā)揮優(yōu)良效果的老化防止改善用的皮膚外用劑，在黑色素產(chǎn)生抑制方面發(fā)揮優(yōu)良效果的美白用皮膚外用劑，以及在抗炎癥性方面發(fā)揮優(yōu)良效果的抗炎癥用皮膚外用劑。與皮膚外用劑配合時(shí)的先島芙蓉的提取物的配合量，可以根據(jù)皮膚外用劑的種類、使用目的等進(jìn)行調(diào)整，但從效果、穩(wěn)定性等方面出發(fā)，以皮膚外用劑總量為基準(zhǔn)，優(yōu)選為0.0001～50.0質(zhì)量％，更優(yōu)選為0.001～10.0質(zhì)量％。
配合了先島芙蓉的提取物的皮膚外用劑(能夠作為細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑、蛋白酶活性促進(jìn)劑等適用的皮膚外用劑)的劑形是任意的，例如，可以作為洗劑等的可溶化系、乳脂或乳液等的乳化系、爐甘石洗劑等的分散系提供，而且，能夠以與噴射劑共同填充而得的氣溶膠、軟膏劑、粉末、顆粒等的種種劑形來提供。
并且，在配合有先島芙蓉的提取物的皮膚外用劑中，除了先島芙蓉的提取物之外，根據(jù)需要，可以適當(dāng)配合有通常與醫(yī)藥品、醫(yī)藥部外品、皮膚化妝原料、毛發(fā)用化妝原料以及洗凈原料配合的油性成份、保濕劑、粉體、色素、乳化劑、可溶化劑、洗凈劑、紫外線吸收劑、增粘劑、藥劑、香料、樹脂、防菌防霉劑、醇類等。而且，在不損害本發(fā)明效果的范圍內(nèi)，也可以與其他的細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑或蛋白酶活性促進(jìn)劑一起使用。
而且，先島芙蓉的提取物也能夠用于以美容、健康維持、營養(yǎng)補(bǔ)給為目的的食品、飲料以及醫(yī)藥品。配合有先島芙蓉的提取物的食品、飲料以及醫(yī)藥品的劑形是任意的，例如，可以以飲料劑或點(diǎn)滴劑等液劑、口香糖或飴糖等固形劑、或膠囊、粉末、顆粒、藥片等一般的劑形提供。
而且，配合有先島芙蓉的提取物的食品、飲料以及醫(yī)藥品中，除了先島芙蓉的提取物之外，根據(jù)需要，可以適當(dāng)配合有通常與食品、飲料、醫(yī)藥品以及醫(yī)藥部外品配合的糖類、鹽類、醇類、氨基酸、著色料、香料、甜味料、酸味料、防腐劑、增粘劑、藥劑等。而且，在不損害本發(fā)明的效果的范圍內(nèi)，也可以與其他的細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑或蛋白酶活性促進(jìn)劑一起使用。
實(shí)施例 以下，對(duì)先島芙蓉的提取物的制造例、用于評(píng)價(jià)各作用的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行更詳細(xì)的說明，但是本發(fā)明并不因此而受任何限定。
[制造例1] 向先島芙蓉的樹皮或葉子的干燥粉碎物中加入20倍量的50質(zhì)量％乙醇，在室溫下邊攪拌邊提取2小時(shí)后，通過過濾去除不溶物。減壓濃縮后，進(jìn)行凍結(jié)干燥，得到先島芙蓉的提取物。
[制造例2] 向先島芙蓉的樹皮、葉子或果實(shí)的干燥粉碎物中加入20倍量的精制水，用高壓滅菌器在120℃下加熱20分鐘后提取。通過邊維持高溫邊吸引過濾而去除不溶物后，進(jìn)行凍結(jié)干燥，得到先島芙蓉的提取物。
使用通過上述制造例得到的先島芙蓉的提取物，進(jìn)行用于評(píng)價(jià)各作用的實(shí)驗(yàn)。
[實(shí)施例1]對(duì)真皮纖維芽細(xì)胞的細(xì)胞賦活作用的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 該評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，使用通過制造例1記載的制造方法得到的先島芙蓉的樹皮的提取物作為樣品。評(píng)價(jià)按以下順序進(jìn)行。在96孔微板上播種正常的人真皮纖維芽細(xì)胞，每1個(gè)孔播種2.0×104個(gè)。對(duì)于播種培養(yǎng)基，適用在杜爾貝克變異依格培養(yǎng)基(DMEM)中添加1質(zhì)量％的胎牛血清(FBS)后所得的產(chǎn)物。培養(yǎng)24小時(shí)后，將培養(yǎng)基換成用添加1質(zhì)量％FBS的DMEM培養(yǎng)基調(diào)制成各種樣品濃度的試樣培養(yǎng)液，再培養(yǎng)48小時(shí)。
然后，換成含有400μg/mL的3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT)的培養(yǎng)基培養(yǎng)2小時(shí)，用2-丙醇提取由四唑環(huán)的開環(huán)產(chǎn)生的甲暨(formazan)。用酶標(biāo)儀測定550nm的吸光度，同時(shí)作為濁度測定650nm的吸光度，用兩個(gè)測定值的差來評(píng)價(jià)細(xì)胞賦活作用。
對(duì)真皮纖維芽細(xì)胞的細(xì)胞賦活作用以將無樣品添加的調(diào)控的細(xì)胞賦活作用定為100時(shí)的相對(duì)值進(jìn)行評(píng)價(jià)。表1示出了其評(píng)價(jià)結(jié)果。并且，表中的**表示t檢測的顯著性概率不足1％(P<0.01)。
[表1] **P<0.01 如表1所示，在添加有先島芙蓉的提取物的培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)了顯著的真皮纖維芽細(xì)胞賦活作用。特別的，在添加0.13～0.25mg/mL樣品的情況下，與調(diào)控比較，危險(xiǎn)率不足1％，確認(rèn)有顯著的真皮纖維芽細(xì)胞賦活作用。因此，明確了先島芙蓉的提取物具有優(yōu)良的真皮纖維芽細(xì)胞賦活作用。
[實(shí)施例2]對(duì)真皮纖維芽細(xì)胞I型膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 該評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，使用通過制造例1記載的制造方法得到的先島芙蓉的樹皮的提取物作為樣品。評(píng)價(jià)按以下順序進(jìn)行。在96孔微板上播種正常的人真皮纖維芽細(xì)胞，每1個(gè)孔播種2.0×104個(gè)。對(duì)于播種培養(yǎng)基，適用在杜爾貝克變異依格培養(yǎng)基(DMEM)中添加5質(zhì)量％的胎牛血清(FBS)后所得的產(chǎn)物。培養(yǎng)24小時(shí)后，將培養(yǎng)基換成用添加0.5質(zhì)量％FBS的DMEM培養(yǎng)基調(diào)制成各種樣品濃度的試樣培養(yǎng)液，再培養(yǎng)24小時(shí)。
培養(yǎng)上清中分泌的I型膠原質(zhì)的量用酶免疫吸著測定法(ELISA)測定。首先，使培養(yǎng)上清中的I型膠原質(zhì)與兔抗人I型膠原質(zhì)多克隆抗體(CHEMICON)反應(yīng)后，作為二次抗體用過氧化物酶標(biāo)識(shí)的抗兔IgG多克隆抗體(HISTOFINE；日冷)進(jìn)行標(biāo)識(shí)。然后，向標(biāo)識(shí)的過氧化物酶添加2，2’-連氮基雙(3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)以及過氧化氫并反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀測定405nm的吸光度。
進(jìn)而，用PIERCE公司制BCA Protein Reagent Assay kit測定各孔的蛋白量，求出對(duì)應(yīng)單位蛋白量的I型膠原質(zhì)產(chǎn)生量。
對(duì)真皮纖維芽細(xì)胞的I型膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用以將無樣品添加的調(diào)控的與單位蛋白量相當(dāng)?shù)腎型膠原質(zhì)產(chǎn)生量定為100時(shí)的相對(duì)值進(jìn)行評(píng)價(jià)。表2示出了其評(píng)價(jià)結(jié)果。并且，表中t檢測的顯著性概率不足5％的(P<0.05)用*表示，顯著性概率不足1％(P<0.01)的用**表示。
[表2] **＝P<0.01、*＝0.01<P<0.05 如表2所示，在添加有先島芙蓉的提取物的培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)了顯著的對(duì)真皮纖維芽細(xì)胞的I型膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用。特別的，在添加0.25mg/mL樣品的情況下，與調(diào)控比較，危險(xiǎn)率不足1％，確認(rèn)有顯著的I型膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用。因此，明確了先島芙蓉的提取物具有優(yōu)良的I型膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用。
[實(shí)施例3]對(duì)表皮角化細(xì)胞的IV型膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 該評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，使用通過制造例1記載的制造方法得到的先島芙蓉的葉子的提取物作為樣品。評(píng)價(jià)按以下順序進(jìn)行。在96孔微板上播種人表皮未全角化細(xì)胞，每1個(gè)孔播種2.0×104個(gè)。對(duì)于播種培養(yǎng)基，使用在杜爾貝克變異依格培養(yǎng)基(DMEM)中添加5質(zhì)量％的胎牛血清(FBS)后所得的產(chǎn)物。培養(yǎng)24小時(shí)后，將培養(yǎng)基換成用添加5質(zhì)量％FBS的DMEM培養(yǎng)基調(diào)制成各種樣品濃度的試樣培養(yǎng)液，再培養(yǎng)5天。
培養(yǎng)上清中分泌的IV型膠原質(zhì)的量用夾心ELISA法測定。首先，使培養(yǎng)上清中的IV型膠原質(zhì)與對(duì)于IV型膠原質(zhì)的單克隆抗體(識(shí)別部位α2鏈)反應(yīng)后，與生物素化多克隆抗體反應(yīng)。
然后，添加抗生物素蛋白化山葵過氧化物酶，與生物素化多克隆抗體的生物素部結(jié)合。添加成為了過氧化物酶基質(zhì)的3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺并使其發(fā)色，用酶標(biāo)儀測定650nm的吸光度。
進(jìn)而，用PIERCE公司制BCA Protein Reagent Assay kit測定各孔的蛋白量，求出對(duì)應(yīng)單位蛋白量的IV型膠原質(zhì)產(chǎn)生量。
對(duì)表皮角化細(xì)胞的IV型膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用，以將無樣品添加的調(diào)控的與單位蛋白量相當(dāng)?shù)腎V型膠原質(zhì)產(chǎn)生量定為100時(shí)的相對(duì)值進(jìn)行評(píng)價(jià)。表3示出了其評(píng)價(jià)結(jié)果。表中的**表示t檢測的顯著性概率不足1％(P<0.01)。
[表3] **P<0.01 如表3所示，在添加有先島芙蓉的提取物的培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)了顯著的對(duì)表皮未全角化細(xì)胞的IV型膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用。特別的，在添加0.5～1.0mg/mL樣品的情況下，與調(diào)控比較，危險(xiǎn)率不足1％，確認(rèn)有顯著的IV型膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用。因此，明確了先島芙蓉的提取物具有優(yōu)良的IV型膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)作用。
[實(shí)施例4]對(duì)B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞的黑色素產(chǎn)生抑制作用的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 該評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，使用通過制造例1記載的制造方法得到的先島芙蓉的樹皮的提取物作為樣品。評(píng)價(jià)按以下順序進(jìn)行。在90mm培養(yǎng)皿中播種B16小鼠黑色素瘤(B16F0)細(xì)胞，每1個(gè)培養(yǎng)皿播種18000個(gè)。對(duì)于播種培養(yǎng)基，使用在杜爾貝克變異依格培養(yǎng)基(DMEM)中添加5質(zhì)量％的胎牛血清(FBS)后所得的產(chǎn)物。培養(yǎng)24小時(shí)后，將培養(yǎng)基換成用添加5質(zhì)量％FBS的DMEM培養(yǎng)基調(diào)制成各種樣品濃度的試樣培養(yǎng)液，再培養(yǎng)5天。
此時(shí)，負(fù)向調(diào)控?zé)o樣品添加的添加了5質(zhì)量％FBS的DEME培養(yǎng)基，使用含有50mM濃度乳酸鈉的添加了5質(zhì)量％FBS的DMEM培養(yǎng)基作為正向調(diào)控。
培養(yǎng)結(jié)束后，通過使用0.25％胰蛋白酶的胰蛋白酶處理來回收細(xì)胞，移送到1.5mL微管進(jìn)行離心操作得到細(xì)胞沉淀物。用肉眼觀察得到的沉淀物的黑化狀況。表4示出了視覺判定的基準(zhǔn)。視覺判定的基準(zhǔn)為將負(fù)向調(diào)控作為判定5，正向調(diào)控作為判定1。
此外，向上述得到的沉淀物中添加組織溶解劑(商品名Solvable)并煮沸后，冷卻到室溫，通過分光光度計(jì)(HITACHI制分光光度計(jì)U-3010)測定500nm的吸光度。通過上述判定以及500nm吸光度評(píng)價(jià)對(duì)B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞的黑色素產(chǎn)生抑制作用。表5示出了其評(píng)價(jià)結(jié)果。
[表4] [表5] 如表5所示，在使用添加有100μg/mL樣品的培養(yǎng)基情況下，僅比正向調(diào)控稍有黑化。由此可知，先島芙蓉的提取物具有優(yōu)秀的黑色素產(chǎn)生抑制作用以及以此為基礎(chǔ)的美白作用。
[實(shí)施例5]對(duì)表皮黑色素細(xì)胞的谷胱甘肽產(chǎn)生促進(jìn)作用的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 該評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，使用通過制造例1記載的制造方法得到的先島芙蓉的樹皮的提取物作為樣品。評(píng)價(jià)按以下順序進(jìn)行。在已膠原質(zhì)編碼的96孔微板上播種正常的人表皮黑色素細(xì)胞，每1個(gè)孔播種3.0×104個(gè)。對(duì)于播種培養(yǎng)基，使用在MGM培養(yǎng)基中加入2％FCS、纖維芽細(xì)胞增殖因子(FGF)(3ng/mL)、胰島素(5μg/mL)以及氫化可的松(0.18μg/mL)后所得的產(chǎn)物。在5％CO2、37℃下培養(yǎng)24小時(shí)后，添加100μL調(diào)整成各種樣品濃度的培養(yǎng)基，培養(yǎng)48小時(shí)。
培養(yǎng)后，用含有苯甲基磺酰氟((PMSF)0.1mM)的磷酸緩沖化生理鹽水(PBS)(pH7.5)洗凈后，加入含有PMSF(0.1mM)的PBS100mL，進(jìn)行5秒鐘的超聲波破碎處理后，將處理液移到另外的盤中。
然后，向處理液中加入含有2mM的NADPH的5％碳酸氫鈉水溶液25μL，再加入添加有含有乙烯二胺四乙酸(0.5mM)、BSA(1mg/mL)以及谷胱甘肽還原酶(12.5/mL)的0.1M磷酸緩沖液25μL的含有0.5mM的乙烯二胺四乙酸的磷酸緩沖液125μL。在37℃下放置10分鐘后，向各個(gè)孔中加入含有0.5mM的乙烯二胺四乙酸和10mM的5，5’-二硫代二(2-硝基安息香酸)的0.1M磷酸緩沖液25μL，根據(jù)450nm的吸光度測定谷胱甘肽濃度。
此外，用PIERCE公司制的BCA Protein Reagent Assay kit測定蛋白量，求出與單位蛋白量對(duì)應(yīng)的谷胱甘肽產(chǎn)生量。
對(duì)表皮黑色素細(xì)胞的谷胱甘肽產(chǎn)生促進(jìn)作用以將無樣品添加的調(diào)控的與單位蛋白量相當(dāng)?shù)墓入赘孰漠a(chǎn)生量定為100時(shí)的相對(duì)值進(jìn)行評(píng)價(jià)。表6示出了其評(píng)價(jià)結(jié)果。并且，表中的**表示t檢測的顯著性概率不足1％(P<0.01)。
[表6] **P<0.01 如表6所示，在添加有先島芙蓉的提取物的培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)了顯著的谷胱甘肽產(chǎn)生促進(jìn)作用。特別的，在添加0.25～1.0mg/mL樣品的情況下，與調(diào)控比較，危險(xiǎn)率不足1％，確認(rèn)有顯著的谷胱甘肽產(chǎn)生促進(jìn)作用。因此，明確了先島芙蓉的提取物具有優(yōu)良的谷胱甘肽產(chǎn)生促進(jìn)作用以及以此為基礎(chǔ)的美白作用。
[實(shí)施例6]對(duì)表皮黑色素細(xì)胞的酪氨酸酶活性抑制作用的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 該評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，使用通過制造例2記載的制造方法得到的先島芙蓉的樹皮的提取物作為樣品。評(píng)價(jià)按以下順序進(jìn)行。在96孔微板上播種正常的人表皮黑色素細(xì)胞，每1個(gè)孔播種3.0×104個(gè)。播種培養(yǎng)基使用倉紡公司制Medium154S。培養(yǎng)24小時(shí)后，將培養(yǎng)基換成用Medium154S調(diào)制成各種樣品濃度的試樣培養(yǎng)液，再培養(yǎng)48小時(shí)。
然后，將培養(yǎng)液換為含有1質(zhì)量％Triton—X的磷酸緩沖液75μL，使細(xì)胞完全溶解。隨后，以50μL作為粗酶液，向其中加入作為基質(zhì)的50μL的含有0.05質(zhì)量％左旋多巴(L-dopa)的磷酸緩沖液，在37℃下靜置2小時(shí)。
添加基質(zhì)后，立即用酶標(biāo)儀測定反應(yīng)結(jié)束時(shí)的405nm的吸光度，將兩測定值的差導(dǎo)入下式，將求得的值作為多巴黑色素生成量。
{(反應(yīng)后405nm值-反應(yīng)前405nm值)-2.166}/5.238 并且，用PIERCE公司制BCA Protein Reagent Assay Kit測定蛋白量，求出與單位蛋白量相當(dāng)?shù)亩喟秃谏厣闪俊?br> 對(duì)表皮黑色素細(xì)胞的酪氨酸酶活性抑制作用，以將無樣品添加的調(diào)控的與單位蛋白量相當(dāng)?shù)亩喟秃谏厣闪慷?00時(shí)的相對(duì)值評(píng)價(jià)。表7示出了其評(píng)價(jià)結(jié)果。而且，表中的**表示t檢測的顯著性概率不足1％(P<0.01)。
[表7] **P<0.01 如表7所示，在添加有先島芙蓉的提取物的培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)了顯著的酪氨酸酶活性抑制作用。特別是，在添加0.25～1.0mg/mL樣品的情況下，與調(diào)控比較，危險(xiǎn)率不足1％，確認(rèn)有顯著的酪氨酸酶活性抑制作用。因此，明確了先島芙蓉的提取物具有優(yōu)良的酪氨酸酶活性抑制作用以及以此為基礎(chǔ)的美白作用。
[實(shí)施例7]DPPH自由基消去作用的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 該評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，使用通過制造例2記載的制造方法得到的先島芙蓉的葉子的提取物作為樣品。評(píng)價(jià)按以下順序進(jìn)行。將用50質(zhì)量％乙醇調(diào)制成各種樣品濃度的試樣溶液每個(gè)向96孔微板添加100μL。再向其每個(gè)添加0.2mM的1，1-二苯基-2-苦基苯肼(DPPH)乙醇溶液100μL。
充分混合后，在室溫下背陰處靜置24小時(shí)后，測定來自DPPH自由基的516nm的吸光度。使未添加樣品時(shí)的吸光度為(A)、添加了樣品時(shí)的吸光度為(B)，此時(shí)，將通過下式求得的值作為DPPH自由基消去率。通過DPPH自由基消去率評(píng)價(jià)DPPH自由基消去作用。表8示出了其評(píng)價(jià)結(jié)果。
{1-(B)/(A)}×100(％) [表8] 根據(jù)表8，可見先島芙蓉的提取物具有以DPPH自由基消去作用為基礎(chǔ)的抗氧化作用。
[實(shí)施例8]SOD樣活性作用的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 該評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，使用通過制造例2記載的制造方法得到的先島芙蓉的葉子的提取物作為樣品。評(píng)價(jià)按以下順序進(jìn)行。向含有0.25mM WST-1以及1mM Hypoxanthine的HANK’S(+)溶液75mL中添加用HANK’S(+)溶液調(diào)制成各種樣品濃度的試樣溶液25mL。進(jìn)而，添加XanthineOxidase 25mL(0.0075Units)，在37℃下反應(yīng)15分鐘后，測定450nm的吸光度。
回到試樣溶液，使僅添加HANK’S(+)溶液情況下的吸光度為(A)、添加了試樣溶液情況下的吸光度為(B)時(shí)，將根據(jù)下式求得的值作為過氧化物陰離子消去率。根據(jù)過氧化物陰離子消去率評(píng)價(jià)SOD樣活性作用。表9示出了其評(píng)價(jià)結(jié)果。
{1-(B)/(A)}×100(％) [表9] 根據(jù)表9，明確了先島芙蓉的提取物具有基于SOD樣活性作用的抗氧化作用。
[實(shí)施例9]透明質(zhì)酸酶活性抑制作用的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 該評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，使用通過制造例2記載的制造方法得到的先島芙蓉的葉子的提取物作為樣品。評(píng)價(jià)按以下順序進(jìn)行。將市售的透明質(zhì)酸鉀鹽(來自人臍帶)溶解到0.1M磷酸緩沖液(pH7.0)中，使?jié)舛葹?.9mg/mL，作為基質(zhì)溶液。將市售的透明質(zhì)酸酶(來自牛睪丸)溶解到0.1M磷酸緩沖液(pH7.0)中，使?jié)舛葹?300unit/mL，作為酶溶液。并且，酶溶液用時(shí)調(diào)制。
向試管中加入用0.1M磷酸緩沖液(pH7.0)調(diào)制成各種樣品濃度的試樣溶液0.1mL和酶溶液0.03mL，在37℃反應(yīng)20分鐘。然后加入活性化劑0.06mL，在37℃下反應(yīng)20分鐘。進(jìn)而加入基質(zhì)溶液0.15mL，在37℃下反應(yīng)1小時(shí)。加入0.4N NaOH0.06mL使反應(yīng)停止后迅速冰冷，添加硼酵緩沖液(pH9.1)0.06mL，煮沸3分鐘后再冰冷。
添加p-DABA溶液(歐立希試劑)2.0mL，在37℃下反應(yīng)20分鐘后，從各試管移到96孔微板中，用酶標(biāo)儀測定585nm的吸光度。透明質(zhì)酸酶的活性被抑制時(shí)，作為透明質(zhì)酸分解產(chǎn)物的N-Acetylglucosamin(GlcNAc)減少，由于Morgan-ElSon反應(yīng)的吸光度減低。
將使用無樣品添加的0.1M磷酸緩沖液時(shí)的吸光度作為調(diào)控吸光度，并將使用試樣溶液時(shí)的吸光度作為試樣吸光度，該情況下，根據(jù)下式求出的值作為透明質(zhì)酸酶活性抑制率。通過透明質(zhì)酸酶活性抑制率評(píng)價(jià)透明質(zhì)酸酶活性抑制作用。表10示出了其評(píng)價(jià)結(jié)果。并且，表中對(duì)t檢測的顯著性概率不足5％的(P<0.05)用*表示，顯著性概率不足1％的(P<0.01)用**表示。
(調(diào)控吸光度-試樣吸光度)/調(diào)控吸光度×100(％) [表10] **P<0.01、*0.01<P<0.05 如表10所示，在先島芙蓉的提取物中，發(fā)現(xiàn)了顯著的透明質(zhì)酸酶活性抑制作用。特別的，在使用樣品濃度5.0mg/mL的試樣溶液的情況下，與調(diào)控比較，危險(xiǎn)率不足1％，確認(rèn)有顯著的透明質(zhì)酸酶活性抑制作用。因此，明確了先島芙蓉的提取物具有優(yōu)良的透明質(zhì)酸酶活性抑制作用以及以此為基礎(chǔ)的抗炎癥作用。
[實(shí)施例10]芳香化酶活性促進(jìn)作用的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 該評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，使用通過制造例1記載的制造方法得到的先島芙蓉的葉子的提取物作為樣品。評(píng)價(jià)按以下順序進(jìn)行。向調(diào)制成各種樣品濃度的試樣溶液4μL中添加含有NADP+、MgCl2、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶以及昆蟲細(xì)胞膜蛋白的混合溶液(調(diào)控)96μL，調(diào)制反應(yīng)液。隨后對(duì)反應(yīng)液在37℃下加熱10分鐘。
然后，向反應(yīng)液中添加含有15nM的CYP19(芳香化酶)及50μM的7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素(基質(zhì))的溶液100μL。隨后將反應(yīng)液在37℃下加熱30分鐘，而后添加100μM三羥甲基氨基甲烷75μL，停止反應(yīng)。
通過該反應(yīng)，芳香化酶將作為基質(zhì)的7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素分解，生成作為熒光物質(zhì)的7-氫-4-三氟甲基香豆素。由此，用激發(fā)波長409nm、發(fā)光波長530nm進(jìn)行熒光測定。
芳香化酶活性促進(jìn)作用以將無樣品添加的調(diào)控的熒光測定量定為100時(shí)的相對(duì)值進(jìn)行評(píng)價(jià)。表11示出了其評(píng)價(jià)結(jié)果。并且，表中t檢測的顯著性概率不足5％的(P<0.05)用*表示，顯著性概率不足1％(P<0.01)的用**表示。
[表11] **P<0.01，*0.01<P<0.05 如表11所示，在先島芙蓉的提取物中，發(fā)現(xiàn)了顯著的芳香化酶活性促進(jìn)作用。特別是，在使用樣品濃度0.13mg/mL的試樣溶液的情況下，與調(diào)控比較，危險(xiǎn)率不足1％，確認(rèn)有顯著的芳香化酶活性促進(jìn)作用。因此，明確了先島芙蓉的提取物具有優(yōu)良的芳香化酶活性促進(jìn)作用。
[實(shí)施例11]蛋白酶活性促進(jìn)作用的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 該評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，使用通過制造例1記載的制造方法得到的先島芙蓉的樹皮的提取物作為樣品。評(píng)價(jià)按以下順序進(jìn)行。在調(diào)制成各種樣品濃度的試樣溶液中添加胰蛋白酶原，使?jié)舛葹?3mg/mL。向其中添加熒光素修飾酪素，是其濃度為0.25質(zhì)量％，調(diào)制反應(yīng)液。然后，將反應(yīng)液在37℃下加熱24小時(shí)。通過該反應(yīng)，胰蛋白酶原被活性化而變?yōu)橐鹊鞍酌?，作為基質(zhì)的熒光素修飾酪素被胰蛋白酶分解。然后，向反應(yīng)液中添加三氯乙酸，使其濃度為3.3質(zhì)量％，在37℃下加熱20分鐘。由此，使未反應(yīng)的熒光素修飾酪素沉淀。
為了測定由熒光素修飾酪素的分解而產(chǎn)生的熒光，對(duì)上清用激發(fā)波長485nm、發(fā)光波長538nm進(jìn)行熒光測定。蛋白酶活性促進(jìn)作用，以將無樣品添加的調(diào)控的熒光測定量定為100時(shí)的相對(duì)值評(píng)價(jià)。表12示出了其評(píng)價(jià)結(jié)果。
[表12] 根據(jù)表12，明確了先島芙蓉的提取物具有蛋白酶活性促進(jìn)作用。
然后，將示出配合有本發(fā)明的先島芙蓉的提取物的皮膚外用劑(能夠作為細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑、蛋白酶活性促進(jìn)劑等適用的皮膚外用劑)以及飲料的處方例。而且，以下，只要不是特別的標(biāo)注，就意味著各種成份的配合量為質(zhì)量％。
[處方例1]乳液 [表13] 制法在80℃下加熱溶解(1)～(6)的油相成份。另外在80℃下加熱溶解(7)～(10)的水相成份。邊攪拌邊在其中加入上述油相成份，用均化器均勻地乳化。乳化結(jié)束后，開始冷卻，順次加入(11)和(12)，均勻地混合。
[處方例2]化妝水 [表14] 制法將(2)和(3)溶解到(1)中。溶解后，順次添加(4)～(8)，然后充分?jǐn)嚢?，加?9)，均勻混合。
[處方例3]乳脂 [表15] 制法在80℃下加熱溶解(1)～(6)的油相成份。另外在80℃下加熱溶解(7)～(10)的水相成份。邊攪拌邊在其中加入上述油相成份，用均化器均勻地乳化。乳化結(jié)束后，加入(11)，開始冷卻，在40℃下加入(12)，均勻地混合。
[處方例4]美容液 [表16] 制法混合(1)～(6)的水相成份，在75℃下加熱溶解。另外，混合(7)～(14)的油相成份，在75℃下加熱溶解。然后，向上述水相成份中添加油相成份，進(jìn)行預(yù)備乳化后，用均質(zhì)攪拌器均勻乳化。乳化結(jié)束后開始冷卻，在50℃下加入(15)。再冷卻到40℃，加入(16)，均勻混合。
[處方例5]水性凝膠體 [表17] 制法將(1)加到(2)中，攪拌均勻后，添加(3)。攪拌均勻后，添加在(4)中預(yù)先溶解的(5)。攪拌均勻后，加入預(yù)先混合的(6)～(8)，均勻攪拌混合。
[處方例6]清潔劑 [表18] 制法均勻溶解(1)和(2)。在其中順次加入(3)和(4)，均勻混合。
[處方例7]洗面奶 [表19] 制法在80℃下加熱溶解(1)～(4)的油相成份。另外，在80℃下加熱溶解(5)～(7)的水相成份，并與油相成份均勻混合攪拌。開始冷卻，在40℃下添加(8)，均勻混合。
[處方例8]隔離霜乳脂 [表20] 制法混合(1)～(4)的油相成份，在75℃下加熱溶解。另外，混合(5)～(7)的水相成份，在75℃下加熱溶解，向其中加入(8)～(10)的顏料，用均質(zhì)攪拌器均勻分散。在該水相成份中加入上述油相成份，用均質(zhì)攪拌器乳化。乳化結(jié)束后開始冷卻，在40℃下加入(11)和(12)的成份，均勻混合。
[處方例9]乳液狀粉底 [表21] 制法混合(1)～(6)的油相成份，在75℃下加熱溶解。另外，混合(7)～(10)的水相成份，在75℃下加熱溶解，在其中加入(11)～(15)的顏料，用均質(zhì)攪拌器均勻分散。加入油相成份，進(jìn)行乳化。乳化結(jié)束后開始冷卻，在40℃下順次加入(16)和(17)的成份，均勻混合。
[處方例10]油中水型潤滑乳脂 [表22] 制法將(5)和(6)在(11)的一部分中溶解，使溫度為50℃，在加熱到50℃的(4)中一邊攪拌一邊慢慢添加。將其混合后，在70℃下在加熱溶解的(1)～(3)中均勻分散。一邊攪拌一邊在其中加入將(7)～(10)在70℃下加熱溶解到(11)的剩余部分中而得的產(chǎn)物，用均質(zhì)攪拌器乳化。乳化結(jié)束后開始冷卻，在40℃下加入(12)，均勻混合。
[處方例11]潤膚膏 [表23] 制法混合(2)和(3)，加熱至80℃后，在加熱到80℃的(1)中溶解。均勻溶解后，加入(4)和(5)，邊攪拌邊開始冷卻。冷卻到40℃，加入(6)和(7)，均勻混合。
[處方例12]沐浴劑 [表24] 制法均勻混合(1)～(4)。
[處方例13]發(fā)蠟 [表25] 制法混合(1)～(6)的油相成份，在75℃下加熱溶解。另外，在75℃下加熱溶解(7)～(10)的水相成份，加入上述油相成份，用均質(zhì)攪拌器乳化。乳化結(jié)束后開始冷卻，在40℃下加入(11)和(12)的成份，均勻混合。
[處方例14]生發(fā)油 [表26] 制法混合(1)～(4)的成份，并均勻化。
[處方例15]飲料 [表27] 制法均勻混合(1)～(5)。
如上所述，根據(jù)本發(fā)明，能夠提供具有優(yōu)良效果的細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑以及蛋白酶活性促進(jìn)劑。而且，通過將先島芙蓉的提取物配合到皮膚外用劑中，能夠提供在皺紋、松弛、肌膚粗糙、色斑、暗沉等皮膚老化癥狀的防止和改善方面發(fā)揮優(yōu)良效果的老化防止改善用皮膚外用劑、在黑色素產(chǎn)生抑制方面發(fā)揮優(yōu)良效果的美白用皮膚外用劑、以及在抗炎癥性方面發(fā)揮優(yōu)良效果的抗炎癥用皮膚外用劑。進(jìn)而，通過將先島芙蓉的提取物配合到食品、飲料以及醫(yī)藥品中，能夠提供在美容、健康維持或營養(yǎng)補(bǔ)給方面發(fā)揮優(yōu)良效果的食品、飲料以及醫(yī)藥品。
產(chǎn)業(yè)上的可利用性 根據(jù)本發(fā)明，能夠提供具有優(yōu)良效果的細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑以及蛋白酶活性促進(jìn)劑。而且，通過將先島芙蓉的提取物配合到皮膚外用劑中，能夠提供在皺紋、松弛、肌膚粗糙、色斑、暗沉等皮膚老化癥狀的防止和改善方面發(fā)揮優(yōu)良效果的老化防止改善用皮膚外用劑、在黑色素產(chǎn)生抑制方面發(fā)揮優(yōu)良效果的美白用皮膚外用劑、以及在抗炎癥性方面發(fā)揮優(yōu)良效果的抗炎癥用皮膚外用劑。進(jìn)而，通過將先島芙蓉的提取物配合到食品中，能夠提供在美容、健康維持或營養(yǎng)補(bǔ)給方面發(fā)揮優(yōu)良效果的食品。
權(quán)利要求
1.一種細(xì)胞賦活劑，其特征在于，含有先島芙蓉(Hibiscus makinoi)的提取物。
2.一種膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑，其特征在于，含有先島芙蓉(Hibiscusmakinoi)的提取物。
3.一種美白劑，其特征在于，含有先島芙蓉(Hibiscus makinoi)的提取物。
4.一種抗氧化劑，其特征在于，含有先島芙蓉(Hibiscus makinoi)的提取物。
5.一種抗炎癥劑，其特征在于，含有先島芙蓉(Hibiscus makinoi)的提取物。
6.一種芳香化酶活性促進(jìn)劑，其特征在于，含有先島芙蓉(Hibiscusmakinoi)的提取物。
7.一種蛋白酶活性促進(jìn)劑，其特征在于，含有先島芙蓉(Hibiscusmakinoi)的提取物。
8.一種皮膚外用劑，其特征在于，含有先島芙蓉(Hibiscus makinoi)的提取物。
9.一種食品，其特征在于，含有先島芙蓉(Hibiscus makinoi)的提取物。
全文摘要
在細(xì)胞賦活劑、膠原質(zhì)產(chǎn)生促進(jìn)劑、美白劑、抗氧化劑、抗炎癥劑、芳香化酶活性促進(jìn)劑、蛋白酶活性促進(jìn)劑、皮膚外用劑以及食品中，含有先島芙蓉(Hibiscus makinoi)的提取物。
文檔編號(hào)A61K8/97GK101489528SQ20078002709
公開日2009年7月22日 申請日期2007年9月4日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月6日
發(fā)明者菊池宏子, 荒島雅樹, 荒卷沙也香, 吉田浩子 申請人:諾薇雅株式會(huì)社