專利名稱：：脫氧吉瑞霉素和d-阿拉伯膠素醇類似物及使用方法脫氧吉瑞霉素和D-阿拉伯膠素醇類似物及使用方法發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明一般涉及N-烷基化亞氨基糖類似物，它們的制備和它們的用途。更具體地講，包括脫氧吉瑞霉素(deoxynojirimycin)和D-阿拉伯膠素醇(arabinitol)的類似物、新的制備方法、包含這樣的類4以物的組合物和用途。
背景技術(shù)：
：脫氧吉瑞霉素(DNJ)和該化合物的某些N-烷基化修飾物為有效的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)a-葡糖苷酶I和II制劑。(T.D.Buttersl,等.^f遂舉'^^"對iV-遂凝^^差必^^;^^^廟^參合4^^^差潛好為、fIfe/rafeorc^113-124(2000).)。亞氨對唐迅速和有放地穿透質(zhì)膜，以使細胞溶膠中的亞氨基糖的濃度與細胞外的濃度平衡。(H.R.Mellor,等，應(yīng)真,諒類眾參^^力斧^:務(wù)潛應(yīng)i參^S^W凝承、所oc/zem.丄861-866(2004).)。在細胞溶膠中，亞氨基糖直接與抑制糖脂生物合成的順式-高爾基氏體的胞質(zhì)側(cè)的神經(jīng)酰胺特異性葡糖基轉(zhuǎn)移酶相互作用。然而，為了調(diào)節(jié)通過葡糖苷酶抑制作用的N-連接的加工，亞氨J4唐必須進入ER腔。進入ER的速率是未知的，但可假設(shè)ER腔中的亞氨基糖濃度比外源性提供給細胞的低得多。對此的證據(jù)來自于其中需要抑制ER葡糖苦酶I的濃度已經(jīng)被測量的試驗，通常需要該濃度為體外抑制純化酶的濃度的1,000-10，000倍。(L.A.vandenBroek等，真Y七JV-12處j/-應(yīng)我參^合底'^染潛葡潛夯凝丼教W^^戎4#(7/爪"^€瘦##保'/鄰少"http://^o/Oc,"-S由".她diV-咖/rrava肌CV^'附—ey戶，扁Soy507-516.(1994).)。在進入ER腔內(nèi)之后，DNJ類似物抑制a-葡糖苷酶I和II誘導(dǎo)的葡萄糖殘基的除去，形成含有不能與伴侶鈣聯(lián)接蛋白(calnexin)和鈣網(wǎng)蛋白相互作用的過度糖基化N-連接的低聚糖的蛋白質(zhì)，伴倡鉤聯(lián)接蛋白和鈣網(wǎng)蛋白兩者參與蛋白質(zhì)折疊質(zhì)量控制。(R.G.Spiro等，分f伴估f冷、^凝漠乂及^與^《乂扃^f^農(nóng)^傳W^f伊處潛茅寧:^《必W證KZ)e力"衍ow丄e"/"-Z汰e/VqpeWeyq/"決eA/b/ecM/wC7wpmwe,Gar/re".CM//"，朋t/Z)emo"Wra"'ow0/7&Co/鵬7c"rio"^Wo羅朋oy油se戶o附ia"z'verCo/gz'，271/歷o/.C&m.11588-11594(1996).)。某些含有過度糖基化聚糖的蛋白質(zhì)仍可以通過內(nèi)型-a(l，2)甘露糖苷酶在高爾基氏體中加工，因此在由葡糖苷酶抑制作用引起的低聚糖加工中防止阻斷發(fā)生。(K.Fujimoto,K.等，a-葡潛茅磔//-^^妄躇^M^V:-^遂^^,潛》"^^廖途辨a畫G7,油^/W咖'e"fC函t/eiVocaw/"g),266/5Zo/.Ozem.3571-3578(1991);S.E.Moore等，葛/大^沐^至"-￡>-^虞潛茅齊炎供^f承成潛蛋^7V-遂^^識,潛W不眾鷹,潛茅綈^^^徑^證KZ)eworarra^"7TWGWgz'265J脂.C72柳.13104-13112(19卯).)。自ER除去錯誤折疊的蛋白質(zhì)并且產(chǎn)生游離的低聚糖(FOS)為正常的細胞過程。鈣聯(lián)接蛋白-或者鈣網(wǎng)蛋白依賴的，異常折疊的蛋白質(zhì)和過度糖基化的異常折疊蛋白質(zhì)最后被轉(zhuǎn)運出ER,通過Sec61p通道進入細胞溶膠(E丄Wiertz等，Sec61介,W應(yīng)蛋^々移_￡蛋々爽#破"^"(5^。(1/-附6<^/(3^67a"^Aro/"Afem6廠a"e/Vo化/w^zejE"t/o//osw/c7eA.cw/wwf/zeiVofeosome々/-Z)es^wc"'cw),384Atowre432-438(1996)),在那里通過胞質(zhì)肽釋放N-連接的低聚糖N-聚糖酶(glycanase)(PNGase)(它可以或者不可以直接與Sec61p通道相互作用)產(chǎn)生FOS。(G.Li等，應(yīng)一潛差必錄，，/v究應(yīng)7V-,溏爽與f^躇尸rafe似owe)，Ato/.爿cad5W.t/6^15809-15814(2005);Spiro，R.G.,iV-遂^W,甘處潛浙,潛4乾命/i潛蛋^的力^河咖^舉席^CW/Mo/.1025-1041(2004).)。蛋白質(zhì)選擇性自ER排出至細胞溶膠，隨后被蛋白酶體降解的這一過程被稱為ER-相關(guān)降解(ERAD)。在細胞質(zhì)中產(chǎn)生的FOS通過胞質(zhì)酶例如內(nèi)型-R-N乙酰氨基葡糖苷酶(EnGNase)(T.Suzuki等，乙應(yīng)虞差,潛茅凝，一神參與勿f溶履^游,^辦五油-y9-A^c砂/g/wc畫m/m'ttee,朋99iVW/.爿c"d9691-9696(2002》和細胞溶膠的a-甘露糖苷酶(V,A.Shoup等，義^^f勿應(yīng)溶凝^a-D-護,潛茅躇^磁必和遂Z/vwC>toyo/)，251J所o/.C7^附.3845-3852(1976))起作用，最后形成轉(zhuǎn)運至溶酶體的Man5GlcNACl(M5N)種類。然而，葡糖基化的FOS據(jù)說不能進入溶酶體降解(A.Saint-Pol等,游庠W,^處潛型錄,潛W勿/《^:魔_^溶雄#/^"運(0)^00/-^>/>^0510附￡7Va"^spoWo/FreePo/戸"朋ose-妙eWgas"cc/z腦'(ies),274J.Biol.Chem.13547-13555(1999))，并且它們的最終結(jié)果有待被測量。其他小的、但是可檢測量的FOS包括Glc!MansGlcNAc！存在于細胞中，除M5N外，還表示ERAD的正常默認途徑。(H.R.Mellor等，應(yīng)一真#諒#,#類眾參^么敏^77V-遽凝^瓶,潛>工^弁賴斧^^游岸^薪類謹^瓶,Y,^i14G7wcoy盧toi(9%asflcc/wr/<iay),381Bz'oc/zew.丄867-875(2004).)。測定當在抑制劑存在下蛋白質(zhì)在ER中折疊時，a-葡糖苷酶-介導(dǎo)的N-連接低聚糖的水解速率的基于細胞的ERa-葡糖苷酶試驗的開發(fā)，揭示了低聚糖中間體在生物合成途徑中的重要原理，并且可用于預(yù)測蛋白質(zhì)錯誤折疊的效力；一種方法已被建議用作抑制病毒感染性的潛在療法。(R.A.Dwek等，/S^7萄凝差必斧力浴^才法D&cov.65-75(2002).)?！矫?，提供式I和II的新的亞氨基糖類化合物:概述其中R為:其中R'為:III該方法包括使式IV化合物16-R2—Z'為取代或未取代的烷基；R2為取代或未取代的烷基；Ww獨立地選自氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的鹵代烷基、取代或未取代的鏈烷?；⑷〈蛭慈〈姆减；蛘呷〈蛭慈〈呢沾溚轷；?；Xw獨立地選自H、N02、N3或者NH2;Y不存在或者為取代或未取代的d-烷基，除羰基外；Z選自鍵或者NH;條件是當Z為鍵時，Y不存在，和條件是當Z為NH時，Y為取代或未取代的d-烷基，除羰基外;和Z'為鍵或者NH。另一方面，提供用于制備式m化合物的方法，w4o、w3o,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>Q為不存在或者為CH,條件是如果Q為不存在，那么OWi也不存在。R2為取代或未取代的烷基；w^獨立地選自氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的鹵代烷基、取代或未取代的鏈烷?；?、取代或未取代的芳?；蛘呷〈蛭慈〈呢沾溚轷；?；Xw獨立地選自H、N02、N3或者NH2;和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>Z，選自鍵或者NH。另一方面，提供用式i、式n、式m化合物、它們的鹽或它們中任何兩種或更多種的混合物抑制(X-葡糖苷酶的方法。在還一方面，提供通過使a-葡糖苷酶與式i、式n、式m化合物、它們的鹽或它們中任何兩種或更多種的混合物接觸來抑制自低聚糖除去葡萄糖殘基的方法。另一方面，提供用于抑制哺乳動物的病毒感染的方法，該方法包括使被病毒感染的哺乳動物細胞與有效抑制病毒的量的式I化合物、式n化合物、式m化合物、它們的藥學上可接受的鹽或者它們中的任何兩種或更多種的混合物接觸。繪圖的簡短描述圖1顯示了自對照細胞(a)、NAP-DNJ(50pM)處理的細胞(b)、DNP-DNJ(50(oM)處理的細胞(c)和NB-DNJ(1mM)處理的細胞(d)分離的FOS的NP-HPLC結(jié)果。圖2為用多種濃度的NAP-DNJ處理HL60細胞24小時后的曲線周，游離—低聚糖被分—離—并經(jīng)，-HPL—C分葛。詳細描述"AA"為鄰氨基苯曱酸的縮寫。"DNJ"為脫氧吉瑞霉素的縮寫。"ER"為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的縮寫。"ERAD"為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)退化的縮寫。"NP-HPLC，，為正相高效液相色i普法的縮寫。"Tris"為三(羥基甲基)氨基曱烷的縮寫。如在此使用的，"光親和標記"指其中光化學活性組分，特別是與生命分子有關(guān)的光化學活性組分凈皮光致激發(fā)，以致于將標記物通常通過中間態(tài)共價附著于生命分子的技術(shù)。通常，"取代的"指如下定義的官能團，其中所包含的連接氬原子的一個或多個鍵由連接非氬或非碳原子的鍵替代。取代的基團也包括其中連接碳或氫原子的一個或多個4定由連接雜原子的一個或多個鍵(包含雙鍵或三鍵)替代的基團。在一些實施方案中，取代的基團具有l(wèi)、2、3、4、5或6個取代基。取代基的實例包括(但不限于)卣素(即F、Cl、Br和I)、羥基、烷氧基、鏈烯氧基、炔氧基、芳氧基、芳烷氧基、雜環(huán)氧基和雜環(huán)基烷氧基、羰基(氧代)、羧基、酯、醚、尿烷(urethanes)、將、羥胺、烷氧基胺、硫醇；硫化物，例如烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基石克化物基團；亞砜、砜、磺?；被酋；?、胺、N-氧化物、肼、酰肼、腙、疊氮化物、酰胺、脲、脒、胍、烯胺、酰亞胺、異氰酸酯、異硫氰酸酯、氰酸酯、碌u氰酸酯、亞胺和腈。取代的環(huán)狀基團例如取代的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基也包括環(huán)和稠合的環(huán)系統(tǒng)，其中與氫原子的鍵用與碳原子的4建替代。因此，取代的環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基也可用如下定義的烷基、鏈烯基和炔基取代。烷基包括在一些實施方案中具有1-約20個碳原子，在其它實施方案中具有l(wèi)-12個碳原子和在另一些其它實施方案中具有1-8個碳原子的直鏈和分支烷基及環(huán)烷基。直鏈烷基的實例包括(但不限于)具有l(wèi)-8個碳原子的那些烷基例如曱基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基。分支烷基的實例包括(但不限于)異丙基、異丁基、仲丁基、叔丁基、異戊基和2，2-二曱基丙基。烷基可為取代或未取代的。代表性的取代烷基可用以上列出的任何基團例如氨基、氧代、羥基、氰基、羧基、硝基、硫代、烷氧基和F、Cl、Br、I基團取代一次或更多次。環(huán)烷基為環(huán)狀烷基例如(但不限于)環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。在一些實施方案中，環(huán)烷基具有3-8個環(huán)原子，而在其它實施方案中，環(huán)碳原子的數(shù)目范圍在3-5、6或7。環(huán)烷基還包括單環(huán)、雙環(huán)和多環(huán)環(huán)系統(tǒng)，例如如下描述的橋接環(huán)烷基，以及稠合的環(huán)例如(但不限于)十氳萘基等。環(huán)烷基可以是取代的或未取代的。取代的環(huán)烷基可用如上定義的非氫和非碳基團取代一次或更多次。然而，取代的環(huán)烷基也包括用如上定義的直鏈或支鏈烷基取代的環(huán)。代表性的取代環(huán)烷基可被單取代或被取代多于一次，例如(但不限于)2，2-、2，3-、2，4-、2,5-或2，6-二取代的環(huán)己基，其可用以上列出的任何基團例如曱基、氨基、羥基、氰基、羧基、硝基、硫代、烷氧基和F、Cl、Br、I基團取代。鏈烯基包括如以上定義的直鏈和支鏈烷基和環(huán)烷基，只是在兩個碳原子之間存在至少一個雙鍵。因此，鏈烯基具有2-約20個碳原子并且通常具有2-12個碳，或者在一些實施方案中具有2-8個碳原子。實例包括(但不限于)乙烯基、CH=CH(CH3)、CH=C(CH3)2、C(CH3)=CH2、C(CH3)=CH(CH3)、C(CH2CH3)=CH2、環(huán)己烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己二烯基、丁二烯基、戊二烯基和己二烯基等。鏈烯基可為取代或未取代的。炔基包括直鏈和支鏈烷基，只是在兩個碳原子之間存在至少一個三鍵。因此，炔基具有2-約20個碳原子并且通常具有2-12個碳，或者在一些實施方案中具有2-8個碳原子。實例包括(但不限于)-C三CH、-C=C(CH3)、-CeC(CH2CH3)、-CH2OCH、-CH2C=C(CH3)和-CH2C三C(CH2CH3)等。炔基可為取代或未取代的。芳基為不含有雜原子的環(huán)狀芳烴。芳基包括單環(huán)、雙環(huán)和多環(huán)系統(tǒng)。因此，芳基包括(但不限于)苯基、甘菊環(huán)基、庚間三烯并庚間三烯基、亞聯(lián)苯基、indacenyl、芴基、菲基、苯并菲基(triphenylenyl)、20芘基、并四苯基、蓋基(chrysenyl)、聯(lián)苯基、蒽基、茚基、茚滿基、并環(huán)戊二烯基和萘基。在一些實施方案中，芳基在基團的環(huán)部分含有6-14個碳并且在其它實施方案中含有6-12個或者甚至6-10個碳原子。盡管短語"芳基"包括含有稠合環(huán)的基團,例如稠合的芳族-脂肪族環(huán)系統(tǒng)(例如茚滿基、四氫萘基等)，但是不包括具有其它基團例如鍵于環(huán)原子之一的烷基或卣代基團的芳基。相反地，基團例如甲苯基稱為取代的芳基。芳基可為取代或未取代的。代表性的取代的芳基可被單取代或者被取代多于一次。例如，單取代的芳基包括，但不限于，2-、3-、4-、5-或6-取代的苯基或萘基，它們可用如以上列舉的那些基團取代。雜環(huán)基包括含有3個或更多個環(huán)原子，其中一個或多個為雜原子例如(但不限于)N、O和S的芳族(也稱為雜芳基)和非芳環(huán)化合物。在一些實施方案中，雜環(huán)基含有l(wèi)、2、3或4個雜原子。在一些實施方案中，雜環(huán)基包含3-20個環(huán)原子，而其它這樣的基團具有3-6、10、12或15個環(huán)原子。雜環(huán)基包含不飽和的、部分飽和的和飽和的環(huán)系統(tǒng)，例如咪唑基、咪唑啉基和咪唑烷基。短語"雜環(huán)基"包括稠合環(huán)種類，包括含有稠合的芳族和非芳族基團的那些稠合環(huán)，例如苯并三唑基、2,3-二氫苯并[1，4]-二氧雜環(huán)己烯基和苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基。短語也包括含有雜原子的橋接多環(huán)系統(tǒng)，例如(但不限于)奎寧環(huán)基。然而，短語不包括具有其它基團例如鍵于環(huán)原子之一的烷基、氧代或鹵代基團的雜環(huán)基。寧可將這些稱為"取代的雜環(huán)基"。雜環(huán)基可為取代或未取代的。雜環(huán)基包括(但不限于)卩比咯烷基、吡咯啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、派咬基、旅漆基、嗎啉基、p比咯基、吡哇基、他哇烷基、四氫吡喃基、硫代嗎啉基、p比喃基、三唑基、四唑基、呋喃基、四氫吹喃基、嗯唑基、異蝶哇基、p塞唑基、吡p定基、嘧咬基、p達"秦基、吡溱基、p塞吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二氫苯并呋喃基、吲哚基、二氫吲哚基、氮雜吲味基、吲唑基、苯并咪唑基、氮雜苯并咪唑基、苯并嗯唑基、苯并噻唾基、苯并噻二唑基、咪21唑并吡p定基、異嗨唑并吡咬基、硫萘基(thianaphthalenyl)、噤呤基、黃嘌呤基、腺嘌呤基、鳥嘌呤基、喹啉基、異會啉基、四氫喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、苯并三唑基、2,3-二氫苯并[1，4]二氧雜環(huán)己烯基和苯并[1,3]間二氧雜環(huán)戊烯基。代表性的取代的雜環(huán)基可為單取代的或者被取代多于一次，例如(但不限于)他咬基或嗎啉基，它們可用如以上定義的多種基團包括(但不限于)烷基、氧代、羰基、氨基、烷氧基、氰基和/或囟代2-、3-、4-、5-或6-取代或者雙取代。烷氧基為其中連接氫原子的鍵由連接如以上定義的烷基的碳原子的鍵替代的羥基(-OH)。線性烷氧基的實例包括(但不限于)曱氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等。分支烷氧基的實例包括(但不限于)異丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、異戊氧基、異己氧基等。環(huán)烷氧基的實例包括(但不限于)環(huán)丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)戊氧基、環(huán)己氧基等。代表性的取代的烷氧基可用如以上定義的多種基團，包括(但不限于)氨基、氧代、烷氧基、烷基、氰基和/或鹵素基團:f又代一次或多次。術(shù)語"芳氧基"和"芳烷氧基"分別指鍵于氧原子的芳基和在烷基鍵于氧原子的芳烷基。實例包括(但不限于)苯氧基、萘氧基和千氧基。代表性的取代的芳氧基和芳烷氧基可用如以上定義的多種基團，包括(但不限于)氨基、氧代、烷氧基、烷基、氰基和/或閨素基團耳又代一次或更多次。如在此使用的術(shù)語"羧酸基"指-COOH基團。如在此使用的術(shù)語"羧酸酯"指-COOR"基團。R3G為如在此定義的取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基烷基或雜環(huán)基。術(shù)語"酰胺"(或"酰氨基")分別包括C-和N-酰胺基團，即-C(0)NR"R"和-NR"C(0)R"基團。R31和R"獨立地為氫或者如在此定義的取代或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基烷基或雜環(huán)基。酰氨基因此包括(但不限于)氨基甲?；?-C(0)NH2)和甲酰胺基(-NHC(O)H)。尿烷基分別包括N-和O-尿烷基，即-NR"C(0)OR"和-0(:(0)服331134基團。R33和R"獨立地為氫或者如在此定義的取代或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基烷基或雜環(huán)基。如在此使用的術(shù)語"胺"指-NHR"和-NR"R"基團，其中R35、R"和R"獨立地為氫或者如在此定義的取代或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基烷基或雜環(huán)基。未取代的胺稱為氨基并且具有式-NH2。術(shù)語"氨磺酰基，，分別包括S-和N-氨磺?；鶊F，即-302順381139和-順388021139基團。R"和R"獨立地為氬或者如在此定義的取代或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基烷基或雜環(huán)基。磺酰胺基因此包括(但不限于)氨磺?；?-S02NH2)。術(shù)語"巰基(thiol)"指-SH基團，而硫化物包括-SR"基團，亞砜包括-S(O)R"，砜包括-S02R"基團，和磺酰基包括-S020R43。R40、R41、R"和R"每一個獨立地為如在此定義的取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基烷基。術(shù)語"脲"指-NR44-C(0)-NR45R46基團。R44、1145和1146基團獨立地為氫或者如在此定義的取代或未取代的烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基烷基。術(shù)語"脒"指-c(NR47)NR48R49和-NR47c(NR48)1149基團，其中R47、R48和R"每一個獨立地為氫或者如在此定義的取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基烷基。術(shù)語"胍"指-NR50C(NR5"NR52R53基團，其中R50、R51、R52和R"每一個獨立地為氬或者如在此定義的取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基烷基。術(shù)語"烯胺"指-C(R54)^C(R55)NR56R57和-NR54C(R55"C(R56)R57基團，其中R54、R55、1156和1157每一個獨立地為氫或者如在此定義的取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基烷基。術(shù)語"酰亞胺"指-C(0)NR58C(0)R59基團，其中1158和1159每一個獨立地為氫或者如在此定義的取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基烷基。術(shù)語"亞胺"指-CR，NR")和-N(CR6^")基團，其中1160和R61每一個獨立地為氫或者如在此定義的取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基烷基，條件是R60和R"兩者不同時為氬。其它術(shù)語可指以上定義所包含的具體基團的組合。盡管沒有打算限定，以下術(shù)語可用于描述基團的某些組合。鏈烷?；钢辨溁蛑ф湹耐榛驶７减；阜蓟驶?。卣代烷基指具有一個或多個鹵素取代基的烷基，其中卣素選自氟、氯、溴或碘。卣代鏈烷?；赣靡粋€或多個卣素取代的鏈烷?；Ａu基烷基指用一個或多個羥基(OH)取代的烷基。羥基鏈烯基指用一個或多個羥基取代的鏈烯基。硫代烷基指用一個或多個巰基取代的烷基。烷氧基鏈烯基指用一個或多個烷基醚基團取代的鏈烯基。烷氧基烷基指具有至少一個醚基團的烷基，烷氧基烷氧基烷基指用烷氧基取代并因此具有兩個或更多個醚基團的烷氧基烷基，和氧雜烷基通常指基團例如烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基等。羥基烷基烷氧基烷基指用至少一個羥基烷基取代的烷氧基烷基。雜環(huán)基烷基指其中一個或多個氬原子被取代或未取代的雜環(huán)基替代的烷基。環(huán)烷基烷基指用環(huán)烷基取代的烷基。各基團的其它組合對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。也包括互變異構(gòu)體?；プ儺悩?gòu)體的非限定性實例為酮/烯醇互變異構(gòu)體、亞氨基/氨基互變異構(gòu)體、N-取代的亞氨基/N-取代的氨基互變異構(gòu)體、巰基/硫代羰基互變異構(gòu)體和環(huán)-鏈互變異構(gòu)體，例如5和6元環(huán)氧、氮、硫或者含有氧和-克的雜環(huán)也含有相對于雜原子a位24的取代基。具體地講也包括對映體和非對映體以及外消旋體和在此討論化合物的異構(gòu)體混合物?！矫妫峁┬碌腄NJ化合物。在一個實施方案中，提供式I化合物w4o.其中R為:X5X4&為取代或未取代的烷基；W!4獨立地選自氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卣代烷基、取代或未取代的鏈烷?；⑷〈蛭慈〈姆减；蛘呷〈蛭慈〈呢沾溚轷；?；X^獨立地選自H、N02、N3或者NH2;Y不存在或者為取代或未取代的d-烷基，除羰基外；和Z選自4建或者NH;條件是當Z為鍵時，Y不存在，和條件是當Z為NH時，Y為取代或未取代的Cr烷基，除羰基外。在一些實施方案中，Ri為具有l(wèi)-8個碳原子的未取代或取代的烷基。在其它實施方案中，Z為NH。在另外的其它實施方案中，X!和X3為N02，并且X2、X4和Xs為H。在另外的其它實施方案中，Xi為N02，X3為N3，并且X2、X4和Xs為H。在另外的其它實施方案中，Ww全部為氫，并且在其它實施方案中，Y為CH2。在一些實施方案中，式I化合物具有式IA化合物的結(jié)構(gòu):IA■在一些這樣的實施方案中，式IA化合物為N-(N，-(4，-疊氮基-2，-硝基苯基)-6-氨基己基)-脫氧吉瑞霉素。在其它這樣的實施方案中，式IA化合物為N-(N，-(2，,4，-二硝基苯基)-6-氨基己基)-脫氧吉瑞霉素。在另一個方面，也提供式I化合物的組合物。這樣的組合物包含藥學上可接受的載體。在另一個方面，提供新的D-阿拉伯膠素醇(arabinitol)化合物。在一個實施方案中，提供式II化合物ii其中R'為R2為取代或未取代的烷基；WL3獨立地選自氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卣代烷基、取代或未取代的鏈烷酰基、取代或未取代的芳酰基或者取代或未取代的卣代鏈烷?；?；Xl5獨立地逸自H、N02、&或者麗2;和Z，選自鍵或者NH。在一些實施方案中，112為具有l(wèi)-8個碳原子的取代或未取代的烷基。在其它實施方案中，Z，為NH。在另外的其它實施方案中，Xj和X3為N02，并且X2、X4和Xs為H。在另外的其它實施方案中，Xj為N02,X3為N3，并且X2、X4和Xs為H。在另外的其它實施方案中，Ww全部為氫。在一些實施方案中，式II化合物具有式IIA化合物的結(jié)構(gòu)例如，式IIA化合物包括其中112為-(012)6-;Ww為H;X！為N02;X3為N3;X2、X4和X5為H;并且Z，為NH的化合物以及其中R2為-(CH2)6-;Ww為H;^和X3為N02;X2、X4和Xs為H;并且Z，為NH的化合物。27在另一個方面，也提供式n化合物的組合物。這樣的組合物包含藥學上可接受的載體。在另一個方面，提供用于制備DNJ和D-阿拉伯膠素醇類似物的方法。因此在一些實施方案中，提供制備式III化合物的方法，w4o、w2a該方法包括使式IV化合物:oHR,一Z-I、與式V化合物縮合:w4aw3oW20'V其中R'為28R2為取代或未取代的烷基；WM獨立地選自氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的囟代烷基、取代或未取代的鏈烷?；?、取代或未取代的芳?；蛘呷〈蛭慈〈呢沾溚轷；?；X,.5獨立地選自H、N02、Ns或者NH2;Z，選自鍵或者NH;和Q不存在或為CH，條件是如果Q不存在，那么OWi也不存在。在所述方法的一些實施方案中，通過用式V化合物將式VI化合物還原性氨基化實施縮合。在其它實施方案中，式IV化合物通過用HO-R2-NH2將式VI化合物芳族氟置換，形成式VII化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>并氧化式VII化合物以提供式IV化合物來制備。在其它實施方案中，通過還原式VIII化合物制備式IV化合物，其中X，選自Cl或Br。通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，自市售可得到的前體化合物可制備式vin化合物。作為非限定性實例，4-苯基丁酸可轉(zhuǎn)化為2，4-二硝基苯基丁酸，隨后使4-硝基還原為胺，并轉(zhuǎn)化為2-硝基_4-疊氮基苯基丁酸。然后通過將2-硝基-4-疊氮基苯基丁酸轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酰氯，隨后按照本領(lǐng)域熟知的方法還原為醛，制備相應(yīng)的醛，即式IV化合物。在一些實施方案中，式III化合物具式niA化合物的結(jié)構(gòu)。如以上描述的那樣，DNJ、D-阿拉伯膠素醇及其某些N-烷基化修飾為有效的a-葡糖苷酶抑制劑。因此，在本發(fā)明的另一方面，提供用式I和II化合物抑制a-葡糖苷酶的方法。在一些實施方案中，方法包括用式I化合物或其鹽、式II化合物或其鹽或者它們中任何兩種或更多種的混合物抑制a-葡糖苷酶<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>其中R為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>R,為:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>Ri為取代或未取代的烷基；R2為取代或未取代的烷基；WM獨立地選自氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卣代烷基、取代或未取代的鏈烷?；?、取代或未取代的芳?；蛘呷〈蛭慈〈呢沾溚轷；籜w獨立地選自H、N02、N3或者NH2;Y不存在或者為取代或未取代的d-烷基，除羰基外；Z選自鍵或者NH;條件是當Z為鍵時，Y不存在，和條件是當Z為NH時，Y為取代或未取代的Cr烷基，除羰基外；和Z，為鍵或者NH。在所述方法的一些實施方案中，Ri或R2具有1-8個碳原子。在其它的實施方案中，X!和X3為N02，并且X2、X4和X5為H。在另外的其它實施方案中，X!為N02,X3為N3，并且X2、X4和Xs為H。在另外的其它實施方案中，Y為CH2。在所述方法的一些實施方案中，a-葡糖苷酶選自a-葡糖苷酶I或者a-葡糖苷酶II。在一些這樣的實施方案中，化合物的鹽為藥學上可接受的鹽。在一些實施方案中，鹽為堿金屬鹽、堿土金屬鹽或者它們中任何兩種或更多種的混合物。在其它的實施方案中，鹽選自鈉、鉀、鉤、鎂鹽、有機堿或堿性季銨鹽等或者它們中任何兩種或更多種的混合物。32在其它的實施方案中，式I化合物具有以下式IA化合物的結(jié)構(gòu)和/或式II化合物具有以下式IIA化合物的結(jié)構(gòu)W30在一些實施方案中，抑制a-葡糖苷酶的方法進一步包括在a-葡糖普酶存在下光解化合物。在某些實施方案中，在標記底物存在下，a-葡糖苷酶可受到抑制。例如，在此描述的化合物和具有放射性標記例如"C標記的那些類似物(H,R.Mellor等，》文射性標記的-烷基化脫氧吉瑞霉素的制備、生物化學特征鑒定和生物學特性(/V印ara"o",iV-a/^>7"toiZ)eox，o力Ww戸'ra1),336S/oc/zem./225-233(2002))可選捧性結(jié)合于細胞中的a-葡糖苦酶，然后可通過照射激活，以形成可在a-葡糖苷酶的活化位點共價插入到氨基酸殘基中的高反應(yīng)性物質(zhì)。這可在其中疊氮化合物被光活化產(chǎn)生氮烯，然后與氨基酸反應(yīng)形成酰肼化合物的疊氮化合物實施例中實現(xiàn)，如在流程I中圖解說明的那樣。當在芳環(huán)(Ar)上存在吸電子基團時，芳基氮烯對親核試劑比對另一個芳基氮烯更具反應(yīng)活性。因此，當標記含有具有親核基團(例如在賴氨酸中的S-氨基)的氨基酸(RAA)的蛋白時，分子間相互反應(yīng)竟爭性超過分子內(nèi)反應(yīng)更為有利。_Raa-NH2JIAr-N-N=N-Ar-N-一Ar-N-N-Raa疊氮化物氮烯耕33流程I.自疊氮化物形成氮烯并共價標記生命分子中的氨基酸在本發(fā)明的另一個方面，提供一種方法，該方法包括通過使a-葡糖苷酶與式I化合物或其鹽、式II化合物或其鹽或者它們中任何兩種或更多種的混合物接觸，抑制葡萄糖殘基自低聚糖中除去X5X4為取代或未取代的烷基；R2為取代或未取代的烷基；WM獨立地選自氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卣代烷基、取代或未取代的鏈烷?；?、取代或未取代的芳?；蛘呷〈蛭慈〈拿娲溚轷；?；Xw獨立地選自H、N02、N3或者NH2;Y不存在或者為取代或未取代的d-烷基，除羰基外；Z選自鍵或者NH;條件是當Z為鍵時，Y不存在，和條件是當Z為NH時，Y為取代或未取代的Cr烷基，除羰基外;和Z，為鍵或者NH。DNJ和D-阿拉伯膠素醇的N-烷基化修飾，例如N-丁基-DNJ可用作抗病毒藥。因此，在本發(fā)明的另一個方面，提供用于抑制哺乳動物病毒感染的方法，其包括使被病毒感染的哺乳動物細胞與有效抑制病毒的量的式I化合物或其藥學上可接受的鹽、式II化合物或其藥學上可接受的鹽或者它們中任何兩種或更多種的混合物接觸其中R為:R,為:&X4Rj為取代或未取代的烷基；R2為取代或未取代的烷基；Ww獨立地選自氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的囟代烷基、取代或未取代的鏈烷酰基、取代或未取代的芳?；蛘呷〈蛭慈〈拿娲溚轷；?；Xw獨立地選自H、N02、N3或者NH2;Y不存在或者為取代或未取代的Cr烷基，除羰基外；Z選自鍵或者NH;條件是當Z為鍵時，Y不存在，和條件是當Z為NH時，Y為取代或未取代的d-烷基，除羰基外；和Z，為鍵或者NH。在一些實施方案中，病毒為屬于黃病毒科(Flaviviridae)家族的病毒。病毒可選自(但不限于)肝炎病毒例如乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒或者牛病毒性腹瀉病毒。在這樣的實施方案中，有效抑制病毒的量為有效抑制肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或者牛腹瀉病毒的量。在另一個實施方案中，式I和II化合物可單獨或聯(lián)合與本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的核苦酸抗病毒化合物、核苦抗病毒化合物、免疫刺激化合物、免疫調(diào)節(jié)化合物或者它們中任何兩種或更多種的混合物接觸。在一些實施方案中，接觸進一步包括給予哺乳動物式I或II化合物。在一些實施方案中，哺乳動物細胞為人細胞。仍然在其它的實施方案中，接觸包括給予人式I或II化合物。對于^^^開的目的并且除非另外具體指明，"a"或"an"意指"一個或多個"。36本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)易于意識到，所討論的所有范圍可以并且也不必對所有目的描述其中的所有亞范圍并且所有這樣的亞范圍也形成本發(fā)明的部分和一部分。所有列舉的范圍可易于看作是充分描述并使相同范圍能夠分解為至少相等的二等份、三等份、四等份、五等份、十等份等。作為非限定性實例，在此討論的每一個范圍可易于分解為下三分之一(lowerthird)、中三分之一(middlethird)和上三分之一(upperthird)等。在本說明書中參照的所有出版物、專利申請、授權(quán)的專利和其它文件在此通過參照結(jié)合到本文中，如同各出版物、專利申請、授權(quán)的專利和其它文件被具體和單獨指明以其全部內(nèi)容通過參照結(jié)合到本文中那樣。參考文獻中所含通過參照結(jié)合的定義如與本公開中的定義相抵觸時則被排除。因此，一般性描述的本發(fā)明將通過參照以下實施例更力口易于得到理解，實施例通過圖解說明提供并且不打算限制本發(fā)明。實施例1N-(N，-《4，-疊氮基-2，-硝基苯基)-6-ES"^基)-DNJ(NAP-DNJ)的合成.用6-氨基己醇在4-氟-3-硝基苯基疊氮化物(FNAP)中直接進行芳族氟置換，產(chǎn)生要求的醇，該醇被氧化為醛。用DNJ使生成的醛經(jīng)歷還原性氨基化，產(chǎn)生最終產(chǎn)物，如在流程II中所示。F流程II.(i)三乙胺(2.2當量)，1，4-二氧六環(huán)，室溫，2小時，550/0,(ii)Dess-Martin(1.2當量)，DCM,室溫，2小時，95%;和(iii)DNJ,NaCNBH3(1.5當量)，AcOH，MeOH，室溫，14小時，定量收率。采用iH和"CNMR及質(zhì)譜進行NAP-DNJ的表征。得自1D和13C)NMR的結(jié)果列于表1中并且COSY與NOESY結(jié)果顯示如下。&NMR為任意的和13CNMR參照曱醇(49.0ppm)。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>^JHCOSY試驗C1H/H，畫C2H-C3H-C4H-C5H-C6應(yīng)，；C7H/H，-C8H2-C9H2-C10H2-C11H2-C12H2;C15H畫C17H-C18H。芳環(huán)因此為1,2,4-三取代和—C7被連接或者為剛性環(huán)的—部分。NOESY試-驗(400毫秒)C7H—C1H(138),C6H/H，(343);C7H，—C6H/H，(325);C12H2—C18H。環(huán)周圍的大偶合常數(shù)提示C1H，、C2H、C3H、C4H和C5H全部為反式雙軸向的。這表明所述環(huán)具有葡萄糖立體化學，即為DNJ。來自C7H/H，-C1H/H，和C6H/H，的NOES表明C12連接于芳環(huán)并且環(huán)位置可能與C18相鄰。光譜學[a]D22-7.7(c0.026,MeOH);vmax(Ge)3356(NH+OH),2926，2856(CH)，2119(N3)，1633，1556(C=C),1521，1347(NO^cm^質(zhì)譜m/z(ES+):425.33([M+H]+,100%);HRMS(ES+):實測值425.2152([M+H]+);理論值426.2149。實施例2N國(N，畫(2，4-二硝基苯基)-6-iJ^己基)-DNJ(NDP隱DNJ)的合成.用6-氨基己醇在2，4-二硝基氟苯(桑格(Sanger，s)試劑)中直接進行芳族氟置換，產(chǎn)生要求的醇，該醇被氧化為醛。用DNJ使生成的醛經(jīng)歷還原性氨基化，產(chǎn)生最終產(chǎn)物(流程m)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>流程m.(i)三乙胺(l.l當量)，1,4-二氧六環(huán)，室溫，1小時，97%;(ii)Dess-Martin(1.2當量)，DCM，室溫，2小時,76%;(iii)DNJ，NaCNBH3(1.2當量)，AcOH，MeOH，室溫，16小時，52%。進行NDP-DNJ表征并且結(jié)果顯示如下。SH(500.3MHz,MeOD):1.33-1.58(6H，m,H-3，ab,H-4，ab,H國2，ab)，1.77(2H,a-五重峰，Hz，H-5，ab),2.11(1H，a-dt，/549.5Hz:72.8Hz,H-5)，2.16(1H,a-t,10.8Hz,H-la),2.54-2.61(1H，m，H-l，a)，2.79-2.85(1H，m，H-l，b),2.98(1H，dd，11.2Hz,4.9Hz,H隱lb),3.12(1H,a-t,^.1Hz,H-3),3.33(1H,a-t,J9.3Hz,H-4),3.46(1H,ddd,力,h10.4Hz,J2,39.2Hz，《/2;lb4.9Hz，H-2),3.50(2H,a-t，/7.2Hz，H-6，)，3.82(1H,dd,/一b11.9Hz,2.9Hz,H-6a),3.86(1H,dd,/61)，6311.9Hz:/6b,52.7Hz，H-6b),7.16(1H，d，A",9.6Hz，H畫6"),8.28(1H，dd，^",6",9.6Hz，Js",3"2.7Hz,H畫5"),9.03(1H，d，J3"'5"2.7Hz，H-3")。Sc(125.8MHz，MeOD):25.2(C國2'),27.9(C-4'),28.3(C-3，)，29.7(C畫5'),44.2(C-6，)，53.7(C-l，)，57.7(C-l)，59.6(C-6),67.5(C-5),70.8(C畫2),72.1(C畫4)，80.6(C-3),115.8(C-6"),124.8(C畫3")，131.1(C-5")，131.5(C-r)，136.9(C-2"),149.8(C-4")。光譜學[a]D22-7.9(c0.14，MeOH);vmax(Ge)3356(OH+NH)，1572，1339(N02)cm'1.質(zhì)譜w/zHRMS(ESI+):實測值429.1973，C18H29N408[M+H]+;理論值429.1985。實施例3N-(烷基苯基)-DNJ衍生物的合成.如以下在流程IV中顯示的那樣，可自苯基羧酸制備N-烷基苯基-DNJ化合物。在流程IV中，將4-苯基丁酸轉(zhuǎn)化—為2,4:二硝基苯基丁酸，隨巖將4—-裙塞迷原—為叛并轉(zhuǎn)化為2-硝基-4-疊氮基苯基丁酸。然后通過將2-硝基-4-疊氮基苯基丁酸轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酰氯，隨后還原為醛，可制備醛?？捎肈NJ使生成的醛經(jīng)歷還原性氨基化以產(chǎn)生最終產(chǎn)物?；蛘?，可用D-阿拉伯膠素醇替代DNJ產(chǎn)生相應(yīng)的D-阿拉伯膠素醇化合物。N02OH流程IV.C-苯基-DNJ書于生物的合成.實施例4釆用通過改進已知方法的試驗方法評〗介ER-葡糖普酶抑制劑對細胞的作用。(H.R.Mellor等，應(yīng)一真#磁##類似參^#^7.'iV-遂凝時瓶秉潛>工的押浙#^和^離的薪錄差化瓶,潛W^^卩CW/w/(3r^fecto。/X)eo:^"o力Wm戸'w^"a/ogwas../"/n'她'o"q/7V"-Zi"A:e<iC^gasacc/wrW^0，381867-875(2004)。在亞氨^f唐處理以生成在細胞溶膠中降解的錯誤折疊的蛋白質(zhì)后游離的低聚#唐檢測為細胞ER進入和a-葡糖苷酶I和II通過亞氨基糖的糖蛋白加工的抑制作用的準確測量。把細胞培養(yǎng)至高密度(lx107細胞/ml)，之后在各種濃度的新鮮的含NB-DNJ的培養(yǎng)基中生長。在較低的密度下接種細胞以至于在溫育階段結(jié)束時達到高密度。在細胞培養(yǎng)后，除去培養(yǎng)基并且經(jīng)離心用PBS沖洗細胞3次。解凍前在-20。C下把沖洗的細胞貯存短暫時間并在水中玻璃勻漿化。測定FOS的提取條件以使FOS最大回收。實質(zhì)上，通過混合床離子交換柱(O.2mlAG50W-XI2(H+，100-200目)經(jīng)O.4mlAG3-X4(OfT，100-200目)使勻漿脫鹽和脫蛋白并用水(5x1ml)預(yù)先平衡。向柱中加入勻漿，用4x1ml水沖洗并收集洗脫液。然后真空干燥或者通過冷凍干燥提耳又、純化FOS。通過本領(lǐng)域已知的方法用鄰氨基苯甲酸標記FOS。(D.C.Neville等，#經(jīng)瘋應(yīng)炎潛凝漆必;^命^^^f趁標記^^身^標記^務(wù)潛腐衍/^森,潛W為、祈J"咖^。/Hwomy酒辦T^e/ec/C7/ycD/geW/o"—aw^TJw說ram7亍cJczV/Z^6S/z72g)，3—31,爿w"7.57oc/zew.275-282(2004)。)簡而言之，把鄰^J^苯曱酸(30mg/ml)溶于乙酸鈉三水合物(4%，w/v)和硼酸(2。/q，w/v)在甲醇的溶液中。把該溶液加入到固體氰基硼氫化鈉中以得到最終濃度45mg/ml?；旌仙傻娜芤阂缘玫阶罱K的標記混合物。使干燥的FOS溶于30pl水中并加入80pl的標記混合物，之后于80。C下溫育45-60分鐘。使反應(yīng)物冷卻至室溫，加入1ml乙腈/水(97:3，v/v)并渦旋混合物。通過層析法在DiscoveryDPA-6S柱上純化標記的低聚糖。用2x1ml乙腈預(yù)先平衡柱。釆用重力流填充樣品并使之滴流通過柱。先后用4x1ml乙腈/水(99:l，v/v)和0.5ml乙腈/水(97:3,v/v)沖洗柱。用2x0.6ml水洗脫標記的低聚糖。采用伴刀豆球蛋白A(ConA)-瓊脂糖凝膠4B柱(100]al包被的樹脂)，在50mMTris/HCl緩沖液(pH7.2)中純化標記的低聚糖。先后用2xlml水、1ml的1mMMgCl2、1mMCaCl2和1mM在水中的MnCl2以及最后用2x1ml50mMTris/HCl緩沖液(pH7.2)預(yù)先平衡柱。加入樣品并使之與柱相互反應(yīng)30分鐘，然后用2x1ml50mMTris/HCl緩沖液(pH7.2)沖洗。然后用2x1ml在50mMTris/HCl緩沖液(pH7.2)中的熱(70。C)0.5M曱基-cc-D-p比喃甘露糖苷洗脫ConA結(jié)合的FOS。伴隨已知方法的稍微改進(D.C.Neville等)，采用4.6x250mmTSKgelAmide-80柱(Anachem,Luton,UK)，經(jīng)NP-HPLC分離ConA-瓊脂糖凝膠純化的2-AA-標記的低聚糖。層析系統(tǒng)由WatersAlliance2695分離模塊和設(shè)置在激發(fā)光波長360nm和發(fā)射光波長425nm的在線Waters474熒光檢測器組成。所有層析在3(TC下進行。第一種溶劑，溶劑A為乙腈，第二種溶劑，溶劑B為Milli-Q水。溶劑C由100mM氫氧化銨組成，用在Milli-Q水中的乙酸滴定至pH3.85并采用標準的5N氫氧化銨溶液(Sigma)制備。梯度條件如下時間=0分鐘oh)),71.6%A,8.4%B，20%C(0.8ml/分鐘);t-6，71.6%A,8.4%B,20%C(0.8ml/分鐘);t=40,52%A,28%B,20%C(0.8ml/分鐘);t=41，230/。A，57%B，20%C(1ml/分鐘)；t=43,23%A,57%B,20%C(1ml/分鐘)；t=44,71.6%A,8.4%B,20%C(1.2ml/分鐘)；t=59,71.6%A,8.4%B,20%C(1.2ml/分鐘);t=60，71.6%A,8.4%B,20%C(0.8ml/分鐘)。以Milli-Q水/乙腈(3/7，v/v)注射樣品(〈50|il)?？刂扑袑游?，包括數(shù)據(jù)采集和采用WatersEmpower軟件處理。在與2-AA標記的葡萄糖低聚體梯形物(衍生自右旋糖酐的部分水解物)外標物比較后，采用PeakTime軟件(在室內(nèi)(in-house)開發(fā)的)測量葡萄糖單位。通過已知方法，自大鼠肝純化已^^純^f匕的a-葡并唐苷酶I和II。(G.B.Karlsson等，j^^^W-7",應(yīng)真才裙####逸砂720WiV"-G7少cosy/加'owc/7ecow6/"""f"O人268J歷o/.CTze附.,570-576(1993).)從使用作為葡糖苷酶抑制劑的NB-DNJ處理的細胞生成的44FOS分離物制備底物，并經(jīng)HPLC純化。分離2-AA-標記的FOS并作為a-葡糖普酶I或II兩者中任何一種的底物純化。加入熒光標記的底物GlqMan5GlcNAd(GlM5N)、Glc2Mari5GlcNAc,(G2M5N)、Glc3Man5GlcNAd(G3M5N)和Glc3Man9GlcNAc"G3M9N2)以分離1.5ml含各種濃度的亞氨基糖的離心試管并真空干燥。加入足夠的a-葡糖苷酶I以在30分鐘反應(yīng)時間內(nèi)生成25%水解的G3M5N。類似地，a-葡糖苷酶II與G2M5N溫育2小時并與G1M5N溫育20分鐘。在所有情況下，在溫育時間內(nèi)發(fā)生底物的線性降解。通過加入30pl乙腈終止反應(yīng)。在酶處理后，通過10000分子量切除(cutoff)的濾膜于7000rpm下4巴所有消化液離心45分鐘(其已用150pl的水預(yù)先沖洗)以如上描迷的那樣在HPLC分析前除去蛋白質(zhì)并如上經(jīng)HPLC分析。實施例1-3的結(jié)果a-葡糖苷酶I和II的體外抑制作用對a-葡糖苷酶I和a-葡糖苦酶II底物采用一定范圍的抑制劑濃度生成IC5o值，如以下顯示的那樣用2-AA標記。N-丁基-DNJ(NB-DNJ)的抑制作用作為比較物被顯示。五甘露糖底物<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>這些數(shù)據(jù)揭示了NAP-DNJ對a-葡糖苷酶I活性的抑制作用比a-葡糖苷酶II(a)或(b)活性分別有效20倍和50倍。與NB-DNJ相比較，a-葡糖苷酶I的抑制作用改進40倍。然而，通過細胞觀察這些4又作為FOS的結(jié)構(gòu)并分析且生理上更加相關(guān)的位于ER的底物。七甘露糖底物Mana6\7Mana6、Mana3\^〉Man(J4GlcNAc-2AAGlca2Glcoc3Glca3Mana2Mana2Mana3葡糖苷酶i葡糖苷酶n酵a-葡糖苷酶Ia-葡糖苷酶n(a)a-葡糖苷酶n(b)底物Glc3Man7GlcNAc1Glc2Man7GlcNAciGlciMan7GlcNAciIC50(nM)IC50(nM)NAP-DNJ0.037±0.00111.7±0.719.2±0.06NDP-畫0.045±0.00318.1±1.610.2±0.02NB-DNJndndncN未觀'J試這些數(shù)據(jù)揭示了與生理上已纟H現(xiàn)的更加類似的具有甘露糖結(jié)構(gòu)的底物對葡糖苷酶抑制作用顯示明顯的差別。NAP-DNJ抑制葡糖苷酶I比葡糖苷酶II(a)有效300倍以上和比葡糖苷酶II(b)有效500倍以上。對NDP-DNJ也觀察到類似的改善。用通常經(jīng)ER中的葡糖苷酶修飾的低聚糖底物進行最后的體外實驗。九甘露糖底物<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>nd=未觀ll試這些數(shù)據(jù)揭示了抑制劑的ICs。值可能并不依賴介導(dǎo)三-糖基化底物水解的葡糖苷酶I的甘露糖結(jié)構(gòu)，但可依賴于葡糖苷酶II。這可表明采用生理上相關(guān)的底物，在抑制所有的三-糖基化結(jié)構(gòu)上NAP-DNJ優(yōu)于NB-DNJ25-50倍，并且在抑制葡糖普酶I比抑制葡糖苷酶II(a)和(b)活性要好300-500倍。細胞內(nèi)葡糖苷酶活性的抑制作用將HL60細胞與各種濃度的NAP-DNJ、DNP-DNJ和NB-DNJ(作為抑制劑參比物)一起溫育24小時并分離、標記游離的低聚糖并用NP-HPLC表征(圖1)。圖1描繪了NP-HPLC結(jié)果，包括自對照組細胞分離的FOS(a);NAP-DNJ(50j^M)處理的細月包(b);DNP-DNJ(50pM)處理的細胞(c)，和NB-DNJ(1mM)處理的細胞(d)。通過已知的參比物和其結(jié)構(gòu)經(jīng)質(zhì)譜和采用純化的葡糖苷酶和甘露糖苷酶消化表征的純化的標準物確定峰。這些數(shù)據(jù)揭示了在細胞中，NAP-DNJ在抑制葡糖苷酶I(葡糖苷酶I抑制產(chǎn)物的估測，G3M5N)比NB-DNJ更顯著有效(20-50倍)。在圖2中觀察到NAP-DNJ濃度對葡糖苷酶I和II的相對抑制的作用。圖2為用各種濃度的NAP-DNJ處理HL60細胞24小時后通過NP-HPLC分離和分開游離低聚糖的圖解。測量對應(yīng)于葡糖苷酶I(G3M5N)和葡糖苷酶II(b)(GlM5N)抑制作用的峰面積并對一種未受葡糖苷酶抑制作用影響的用作內(nèi)標物的游離低聚糖M4的量歸一化。蛋白量的歸一化給出相同的結(jié)果。這些數(shù)據(jù)顯示了NAP-DNJ對葡糖苦酶的相對效力。采用體外試驗，不管對葡糖普酶II的明顯弱的效力，NAP-DNJ在非常低的濃度(I-IOj^M)下抑制細胞內(nèi)的酶。隨著NAP-DNJ的量增加至最大量在50-100joM,葡糖苷酶I被抑制，對葡糖苷酶II減少可得到的底物，其降低的量可被觀察到(圖2)。盡管一些實施方案已被闡明和描述，應(yīng)該理解本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在此可進行變化和修飾，而在它的如在以下權(quán)利要求中定義的更廣泛方面不背離本發(fā)明。權(quán)利要求1.一種式I化合物其中R為R1為取代或未取代的烷基；W1-4獨立地選自氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的鹵代烷基、取代或未取代的鏈烷?；?、取代或未取代的芳?；蛘呷〈蛭慈〈柠u代鏈烷?；籜1-5獨立地選自H、NO2、N3或者NH2；Y不存在或者為取代或未取代的C1-烷基，除羰基外；Z選自鍵或者NH；條件是當Z為鍵時，Y不存在，和條件是當Z為NH時，Y為取代或未取代的C1-烷基，除羰基外。2.權(quán)利要求1的化合物，其中Ri為具有l(wèi)-8個碳原子的未取代或取代的烷基。3.權(quán)利要求1的化合物，其中Z為NH。4.權(quán)利要求1的化合物，其中Xi和X3為N02;和X2、X4和Xs為H。5.權(quán)利要求1的化合物，其中X!為N02;X3為N3;和X2、X4和Xs為H。6.權(quán)利要求1的化合物，其中WM為H。7.權(quán)利要求1的化合物，其中Y為CH2。8.權(quán)利要求l的化合物，其中式I化合物具有式IA化合物的結(jié)9.權(quán)利要求8的化合物，其中R為畫(CH2)5畫；WM為H;為N02;X3為N3;X2、X4和Xs為H;Y為-(CH2)-;和Z為NH。10.權(quán)利要求8的化合物，其中RKCH2)5-;Ww為H;Xi和X3為N02;X2、X4和X5為H;Y為-(CH2)-;和Z為麗。11.一種組合物，其包含權(quán)利要求1的化合物和藥學上可接受的載體。12.—種以下式II的^:合物，R2為取代或未取代的烷基；Ww獨立地為氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的鹵代烷基、取代或未取代的鏈烷酰基、取代或未取代的芳?；?，或者取代或未取代的卣代鏈烷酰基；Xw獨立地選自H、N02、N3或者NH2;和Z，選自鍵或者NH。13.權(quán)利要求12的化合物，其中R2為具有1-8個碳原子的取代或未取代的烷基。14.權(quán)利要求12的化合物，其中Z，為NH。其中R'為:15.權(quán)利要求12的化合物，其中Xi和X3為N02;和X2、X4和X5為H。16.權(quán)利要求12的化合物，其中X!為N02;X3為N3;和X2、X4和Xs為H。17.權(quán)利要求12的化合物，其中Ww全部為氬。18.權(quán)利要求12的化合物，其中式II化合物具有以下式IIA化合19.權(quán)利要求18的化合物，其中R4-(CH2)6-;Ww為H;X！為N02;X3為N3;X2、X4和Xs為H;和Z，為麗。20.權(quán)利要求18的化合物，其中R4-(CH2)6-;W卜3為H;和X3為N02;物的結(jié)構(gòu):載體cX2、X4和Xs為H;和Z，為NH。21.—種組合物，其包含權(quán)利要求13的化合物和藥學上可接受的22.—種制備式III化合物方法w4o.該方法包括通過使式IV化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>與式v化合物縮合來制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中R'為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>Q不存在或為CH,條件是如果Q不存在，那么OW!也不存在；R2為取代或未取代的烷基；Ww獨立地為氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卣代烷基、取代或未取代的鏈烷?；?、取代或未取代的芳?；蛘呷〈蛭慈〈呢沾溚轷；籜w獨立地選自H、N02、N3或者NH2;和Z，選自4建或者NH。23.權(quán)利要求22的方法，其中所述縮合是通過用式V化合物將式VI化合物還原性氨基化。24.權(quán)利要求22的方法，其中式IV化合物通過用HO-R2-NH2使式VI-化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>經(jīng)芳族氟替代形成式VII化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>并氧化式vn化合物制備，提供式iv化合物。25.權(quán)利要求22的方法，其中式III化合物具有式IIIA化合物的立體化學<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>—2石一種—方—法—,——該方^^括:——;r式T化合，勿或-其鹽、.式n化-合喻-26.或其鹽或者它們中任何兩種或更多種的混合物抑制a-葡糖苷酶w4o、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中R為:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>R，為:X5X4Ri為取代或未取代的烷基；R2為取代或未取代的烷基；WM獨立地選自氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卣代烷基、取代或未取代的鏈烷酰基、取代或未取代的芳酰基或者取代或未取代的卣代鏈烷?；?；X^獨立地選自H、N02、N3或者NH2;Y不存在或者為取代或未取代的Cr烷基，除羰基外；Z選自鍵或者NH;條件是當Z為鍵時，Y不存在，和條件是當Z為NH時，Y為取代或未取代的d-烷基，除羰基外;和Z'為鍵或者NH。27.權(quán)利要求26的方法，其中Ri或R2具有1-8個碳原子。28.權(quán)利要求26的方法，其中Xi和Xs為N02;和X2、X4和Xs為H。29.權(quán)利要求26的方法，其中Xi為N02;X3為N3;和X2、X4和Xs為H。30.權(quán)利要求26的方法，其中a-葡糖苦酶為a-葡糖苦酶I或a-葡糖苷酶II。31.權(quán)利要求26的方法，其中所述化合物的鹽為藥學上可接受的鹽。32.權(quán)利要求26的方法，其中式I化合物具有式IA化合物的立體化學和式II化合物具有式IIA化合物的立體化學<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>33.權(quán)利要求26的方法，該方法還包括在a-葡糖苷酶存在下光解化合物。34.權(quán)利要求26的方法，其中a-葡糖苷酶在標記的底物存在下被抑制。35.—種方法，該方法包4舌通過使a-葡糖苷酶與式I化合物或其鹽、式II化合物或其鹽或者它們中任何兩種或更多種的混合物接觸，抑制葡萄糖殘基自低聚糖的去除<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中R為:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>Rj為取代或未取代的垸基；R2為取代或未取代的烷基；Ww獨立地選自氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的鹵代烷基、取代或未取代的鏈烷?；?、取代或未取代的芳?；蛘呷〈蛭慈〈呢洞溚轷；籜w獨立地選自H、N02、Ns或者NH2;Y不存在或者為取代或未取代的Q-烷基，除羰基外；Z選自4建或者NH;條件是當Z為鍵時，Y不存在，和條件是當Z為NH時，Y為取代或未取代的d-烷基，除羰基外;和Z，為鍵或者NH。全文摘要本發(fā)明提供通過多種方法制備的新的亞氨基糖化合物。在某些情況中，新的亞氨基糖為脫氧吉瑞霉素類似物。例證性的制備方法包括使醛與哌啶基或者吡咯烷基化合物的縮合反應(yīng)。亞氨基糖化合物可用于抑制葡糖苷酶。文檔編號A61K31/445GK101489554SQ200780027372公開日2009年7月22日申請日期2007年5月22日優(yōu)先權(quán)日2006年5月24日發(fā)明者G·W·J·弗利特,R·A·德維克,T·D·巴特斯申請人:聯(lián)合治療公司