專利名稱：：與人il-17結(jié)合的抗體分子的制作方法與人IL-17結(jié)合的抗體分子本發(fā)明涉及對(duì)IL-17的抗原決定簇具有特異性的抗體分子。本發(fā)明還涉及該抗體分子的治療應(yīng)用和生產(chǎn)所述抗體分子的方法。白介素17(IL-17)，亦稱CTLA-8或IL-17A,是促炎細(xì)胞因子，其剌激各種非免疫細(xì)胞分泌各種各樣的其他細(xì)胞因子。IL-17能夠誘導(dǎo)粘附細(xì)胞，像成纖維細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、上皮和內(nèi)皮細(xì)胞分泌IL-6、IL-8、PGE2、MCP-1和G-CSF，還能夠誘導(dǎo)ICAM-1表面表達(dá)、T細(xì)胞增殖，和當(dāng)在被照射成纖維細(xì)胞存在下共同培養(yǎng)時(shí)，誘導(dǎo)CD34+人祖細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化為嗜中性白細(xì)胞(Fossiez等人，1998，Int.Rev.Immunol16，541-551)。IL-17主要由活化記憶T細(xì)胞產(chǎn)生并通過(guò)與遍在分布的細(xì)胞表面受體(IL-17R)結(jié)合而發(fā)揮作用(Yao等人，1997，Cytokine,9，794-800)。它也可以通過(guò)與IL-17RA和IL-17RC的復(fù)合物結(jié)合而發(fā)揮作用(Toy等人，2006，J.Immunol.177(11);36-39)。已經(jīng)鑒定了很多IL-17的同系物，它們?cè)谡{(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中具有相似和不同的作用。對(duì)于IL-17細(xì)胞因子/受體家族的綜述，參見(jiàn)D畫(huà)nt，2003,ExpertOpin.Ther.Patents,13,287-303。IL-17可能促進(jìn)很多由異常免疫反應(yīng)介導(dǎo)的疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和呼吸道炎癥，以及器官移植排斥和抗腫瘤免疫。IL-17活性抑制劑是本領(lǐng)域熟知的，例如小鼠IL-17R:人Fc融合蛋白、小鼠可溶性IL-17R和抗IL-17單克隆抗體已經(jīng)被用來(lái)證明1卜17在各種類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中的作用(Lubberts等人，J.Immunol.2001,167，1004-1013;Chabaud等人，ArthritisRes.2001，3，168-177)。此外，中和多克隆抗體已經(jīng)被用來(lái)減少腹膜粘連的形成(Chung等人.，2002，J.Exp.Med.，195，1471-1478)。WO04/106377中描述了從大鼠得到的抗人IL-17抗體。WO2006/054059中描述了親和力為大約220pM的人源化抗IL-17抗體。WO2006/013107中描述了親和力為6大約188pM的完全人抗IL-17單克隆抗體。本領(lǐng)域仍然需要適于治療患者的改善的抗IL-17抗體。我們現(xiàn)在已經(jīng)鑒定了適于用于治療或預(yù)防IL-17介導(dǎo)的或與IL-17水平升高相關(guān)的病理障礙的高親和力中和抗IL-17抗體?？贵w可變區(qū)中的殘基通常根據(jù)Kabat等設(shè)計(jì)的系統(tǒng)來(lái)編號(hào)。這個(gè)系統(tǒng)在Kabat等人，1987，inSequencesofProteinsofImmunologicalInterest,USDepartmentofHealthandHumanServices,NIH，USA(以下稱作"Kabat等人(上述)，，)中陳述闡明。本說(shuō)明書(shū)中使用這個(gè)編號(hào)系統(tǒng)，除非另外指出。Kabat殘基命名并不總是正好符合氨基酸殘基的線性編號(hào)。實(shí)際的線性氨基酸序列可能含有比嚴(yán)格的Kabat編號(hào)更少或增加的氨基酸，相當(dāng)于基本可變區(qū)結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)組分，無(wú)論是構(gòu)架區(qū)還是互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的縮短或插入。對(duì)于給定抗體來(lái)說(shuō)，殘基的正確Kabat編號(hào)可以通過(guò)抗體序列與"標(biāo)準(zhǔn)"Kabat編號(hào)序列中的殘基同源性比對(duì)來(lái)確定。根據(jù)Kabat編號(hào)系統(tǒng)，重鏈可變區(qū)的CDR位于殘基31-35(CDR-H1)、殘基50-65(CDR-H2)和殘基95-102(CDR-H3)。然而，根據(jù)Chothia(Chothia，C.andLesk，A.M.J.Mol.Biol.，196，901-917(1987))，相當(dāng)于CDR-H1的環(huán)從殘基26延伸至殘基32。因此，這里使用的'CDR-H1，包括殘基26至35，如Kabat編號(hào)系統(tǒng)和Chothia的拓樸環(huán)定義聯(lián)合所述。根據(jù)Kabat編號(hào)系統(tǒng)，輕鏈可變區(qū)的CDR位于殘基24-34(CDR-LI)、殘基50-56(CDR-L2)和殘基89-97(CDR-L3)。如這里使用的術(shù)語(yǔ)"中和抗體"描述了例如通過(guò)阻斷IL-17與其一個(gè)或多個(gè)受體結(jié)合，能夠中和IL-17的生物信號(hào)活性的抗體。用于本發(fā)明的抗體可以使用本領(lǐng)域已知的任何合適方法來(lái)獲得。IL-17多肽或表達(dá)該多肽的細(xì)胞可用于生產(chǎn)特異性識(shí)別IL-17的抗體。IL-17多肽可以是'成熟，多肽或其生物學(xué)活性片段或衍生物。優(yōu)選IL-17多肽是成熟的人多肽。IL-17多肽可以通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法由包括表達(dá)系統(tǒng)的基因工程宿主細(xì)胞來(lái)制備，或可以從天然生物來(lái)源中回收它們。本申請(qǐng)中術(shù)語(yǔ)"多肽"包括肽、多肽和蛋白。這些詞可以互換使用，除非另外說(shuō)明。在有些情況下IL-17多肽可以是較大蛋白的一部分，較大蛋白例如是與例如親和標(biāo)記融合的融合蛋白?？笽L-17多肽的抗體可以通過(guò)將該多肽給予動(dòng)物，優(yōu)選非人動(dòng)物，使用熟知和常規(guī)方案而獲得，這種情況下免疫動(dòng)物是必需的，參見(jiàn)例如HandbookofExperimentalImmunology,D.M.Weir(ed.)，Vol4，BlackwellScientificPublishers,Oxford,England,1986)。可以免疫4艮多溫血?jiǎng)游?，例如兔、小鼠、大鼠、綿羊、牛或豬。然而，通常優(yōu)選小鼠、兔、豬和大鼠。用于本發(fā)明的抗體包括完整抗體及其功能性活性片段或衍生物，并可以是，但不限于單克隆抗體、人源化抗體、完全人或嵌合抗體。單克隆抗體可以用本領(lǐng)域已知的任何方法制備，例如雜交瘤技術(shù)(Kohler&Milstein，1975，Nature,256:495-497)、三體瘤(trioma)技術(shù)、人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)(Kozbor等人，1983，ImmunologyToday,4:72)和EBV雜交瘤技術(shù)(Cole等人，MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,pp77-96，AlanRUss，Inc.,1985)。用于本發(fā)明的抗體也可以使用單淋巴細(xì)胞抗體法來(lái)產(chǎn)生，通過(guò)由例如Babcook，J.等人，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93(15):7843-78481;W092/02551;WO2004/051268和國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)柫馨图?xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白可變區(qū)cDNA。人源化抗體(其包括CDR移植抗體)是具有來(lái)自非人物種的一個(gè)或(參見(jiàn)例如US5，585，089;WO91/09967)。人們會(huì)理解可能僅僅需要轉(zhuǎn)移CDR的特異性決定殘基而不是整個(gè)CDR(參見(jiàn)例如，Kashmiri等人，2005，Methods,36，25-34)。人源化抗體可以任選進(jìn)一步包含來(lái)源于CDR所來(lái)源的非人物種的一個(gè)或多個(gè)構(gòu)架殘基。嵌合抗體是已被基因工程改造的免疫球蛋白基因編碼的那些抗體，這種改造使輕鏈和重鏈基因由屬于不同物種的免疫球蛋白基因片段組成。用于本發(fā)明的抗體還可以使用本領(lǐng)域已知的各種噬菌體展示法生產(chǎn)，和包括Brinkman等人(inJ.I麵no1.Methods,1995，182:41—50)、Ames等人(J.Immunol.Methods,1995，184:177—186)、Kettleborough等人(Eur.J.Immunol.1994，24:952-958)、Persic等人(Gene,19971879-18)、Burton等人(AdvancesinImmunology,1994，57:191-280)和W090/02809;W091/10737;WO92/01047;W092/18619;W093/11236;W095/15982;WO95/20401;andUS5，698，426;5，223，409;5,403,484;5，580，717;5,427,908;5，750，753;5,821,047;5，571，698;5，427，908;5，516，637;5,780,225;5,658,727;5，733，743和5，969，108中公開(kāi)的方法。完全人抗體是其中重鏈和輕鏈的可變區(qū)和恒定區(qū)(存在的情況下)全部是人來(lái)源的，或基本上與人來(lái)源的序列相同，而不必來(lái)自相同抗體的那些抗體。完全人抗體的實(shí)例可以包括例如如上所述噬菌體展示法生產(chǎn)的抗體，和由小鼠生產(chǎn)的抗體，其中小鼠免疫球蛋白可變區(qū)和恒定區(qū)基因已經(jīng)被它們的人對(duì)應(yīng)物取代，如EP0546073Bl，US5，545，806，US5，569，825，US5,625,126，US5，633，425，US5,661,016，US5，770，429,EP0438474Bl和EP0463151Bl中的一般性術(shù)語(yǔ)所描述。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中提供了對(duì)人IL-17具有特異性的中和抗體，其包含重鏈，其中重鏈可變區(qū)包含至少一個(gè)下述的CDR:具有圖1(c)SEQIDNO:1給出的CDR-Hl的序列的CDR，具有圖1(c)SEQIDN0:2給出的CDR-H2的序列的CDR和具有圖1(c)SEQIDNO:3給出的CDR-H3的序列的CDR。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中提供了對(duì)人IL-17具有特異性的中和抗體，其包含重鏈，其中重鏈可變區(qū)的CDR-Hl、CDR-H2和CDR-H3中的至少兩個(gè)選自下列SEQIDNO:1給出的CDR-HI的序列，SEQIDNO:2給出的CDR-H2的序列和SEQIDNO:3給出的CDR-H3的序列。例9如，該抗體可以包含重鏈，其中CDR-HI具有SEQIDNO:1給出的序列而CDR-H2具有SEQIDNO:2給出的序列。可供選擇地，該抗體可以包含重鏈，其中CDR-H1具有SEQIDNO:1給出的序列而CDR-H3具有SEQIDNO:3給出的序列，或該抗體可以包含重鏈，其中CDR-H2具有SEQIDNO:2給出的序列而CDR-H3具有SEQIDNO:3給出的序列。為了避免除懷疑，應(yīng)理解包括全部排列。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中提供了對(duì)人IL-17具有特異性的中和抗體，其包含重鏈，其中重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:1給出的CDR-Hl的序列，SEQIDNO:2給出的CDR-H2的序列和SEQIDN0:3給出的CDR-H3的序列。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中提供了對(duì)人IL-17具有特異性的中和抗體，其包含輕鏈，其中輕鏈可變區(qū)包含至少一個(gè)下述的CDR:具有圖1(c)SEQIDNO:4給出的CDR-L1的序列的CDR，具有圖1(c)SEQIDNO:5給出的CDR-L2的序列的CDR和具有圖1(c)SEQIDNO:6給出的CDR-L3的序列的CDR。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中提供了對(duì)人IL-17具有特異性的中和抗體，其包含輕鏈，其中輕鏈可變區(qū)的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少兩個(gè)選自下列SEQIDN0:4給出的CDR-LI的序列，SEQIDNO:5給出的CDR-L2的序列和SEQIDNO:6給出的CDR-L3的序列。例如，該抗體可以包含輕鏈，其中CDR-L1具有SEQIDNOM給出的序列而CDR-L2具有SEQIDNO:5給出的序列?？晒┻x擇地，該抗體可以包含輕鏈，其中CDR-LI具有SEQIDNO:4給出的序列而CDR-"具有SEQIDNO:6給出的序列，或該抗體可以包含輕鏈，其中CDR-U具有SEQIDNO:5給出的序列而CDR-L3具有SEQIDNO:6給出的序列。為了避免疑惑，應(yīng)理解包括全部排列。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中提供了對(duì)人IL-17具有特異性的中和抗體，其包含輕鏈，其中輕鏈可變區(qū)包含SEQIDN0:4給出的CDR-Ll的序列，SEQIDNO:5給出的CDR-L2的序列和SEQIDNO:6給出的CDR-L3的序列。10本發(fā)明的抗體分子優(yōu)選分別包含互補(bǔ)輕鏈或互補(bǔ)重鏈。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的抗體包含重鏈和輕鏈，其中重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:1給出的CDR-H1的序列、SEQIDN0:2給出的CDR-H2的序列和SEQIDNO:3給出的CDR-H3的序列，其中輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:4給出的CDR-L1的序列、SEQIDNO:5給出的CDR-L2的序列和SEQIDNO:6給出的CDR-L3的序列。人們會(huì)理解可以對(duì)本發(fā)明提供的CDR進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)氨基酸置換、添加和/或缺失，而不顯著改變抗體與IL-17結(jié)合和中和IL-17活性的能力。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地檢測(cè)任何氨基酸置換、添加和/或缺失的影響，例如通過(guò)使用實(shí)施例中描述的方法確定IL-17結(jié)合和中和。因此，本發(fā)明提供了對(duì)人IL-17具有特異性的抗體，包含一個(gè)或多個(gè)CDR，選自C醒-l(SEQIDN0:1)、C醒-2(SEQIDNO.2)、C醒-3(SEQIDNO:3)、CDRL-1(SEQIDNO:4)、CDRL-2(SEQIDNO:5)和CDRL-3(SEQIDNO:6)，其中一個(gè)或多個(gè)CDR中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸已被另一氨基酸，優(yōu)選如下文中所定義的相似氨基酸置換。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了對(duì)人IL-17具有特異性的抗體，包含如圖1(c)所示的CDRH-l(SEQIDNO:l)、CDRH-2(SEQIDNO.2)、CDRH-3(SEQIDNO:3)、CDRL-1(SEQIDNO:4)、CDRL-2(SEQIDN0:5)和CDRL-3(SEQIDNO:6)，其中一個(gè)或多個(gè)CDR中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸已被另一氨基酸，優(yōu)選如下文中所定義的相似氨基酸置換。"在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含重鏈，其中重鏈可變區(qū)包含三個(gè)CDR，其中CDRH-1的序列與SEQIDNO:1給出的序列具有至少60%同一性或相似性，CDRH-2與SEQIDNO:2給出的序列具有至少60%同一性或相似性和/或CDRH-3與SEQIDNO:3給出的序列具有至少60%同一性或相似性。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含重鏈，其中重鏈可變區(qū)包含三個(gè)CDR,其中CDRH-1的序列與SEQIDNO:1給出的序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%同一性或相似性，CDRH-2與SEQIDNO:2給出的序列具有至少70°/。、80%、90%、95%或98%同一性或相似性和/或CDRH-3與SEQIDNO:3給出的序列具有至少70%、80°/。、ii90°/。、95%或98%同一性或相似性。這里使用的"同一性"表示比對(duì)序列中任何特定位置的氨基酸殘基在該序列之間是相同的。這里使用的"相似性"表示比對(duì)序列中任何特定位置的氨基酸殘基在該序列之間是相似類型的。例如，亮氨酸可以取代異亮氨酸或纈氨酸。常?？梢员舜巳〈钠渌被岚ǖ幌抻?苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸(具有芳香側(cè)鏈的氨基酸)；-賴氨酸、精氨酸和組氨酸(具有堿性側(cè)鏈的氨基酸)；-天冬氨酸和谷氨酸(具有酸性側(cè)鏈的氨基酸)；-天冬酰胺和谷氨酰胺(具有酰胺側(cè)鏈的氨基酸)；和-半胱氨酸和甲硫氨酸(具有含硫側(cè)鏈的氨基酸)。同一性和相似性的程度可以很容易地計(jì)算(ComputationalMolecularBiology,Lesk，A.M.，ed.，OxfordUniversUyPress,NewYork,1988;Biocomputing.InformaticsandGenomeProjects,Smith,D.W.，ed.，AcademicPress,NewYork,1993;ComputerAnalysisofSequenceData,Part1,Griffin,A.M.,andGriffin,H.G.，eds.,H醒naPress,NewJersey,1994;SequenceAnalysisinMolecularBiology,vonHeinje，G.，AcademicPress,1987，SequenceAnalysisPrimer,Gribskov，M.和Devereux，J.，eds.，MStocktonPress,NewYork,1991,從NCBI可得到的BLASfM軟件(Altschul，S.F.等人，1990，J.Mol.Biol.215:403-410;Gish，W.&States,DJ.1993，NatureGenet.3:266-272.Madden,T.L.等人，1996，Meth.Enzymol.266:131-141;Altschul,S.F.等人，1997,NucleicAcidsRes.25:3389-3402;Zhang,J.&Madden,T丄1997，Ge醒eRes.7:649-656，)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含輕鏈，其中輕鏈可變區(qū)包含三個(gè)CDR，其中CDRL-1的序列與SEQIDNO:4給出的序列具有至少60%同一性或相似性，CDRL-2與SEQIDNO:S給出的序列具有至少60%同一性或相似性和/或CDRL-3與SEQIDNO:6給出的序列具有至少60%同一性或相似性。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含輕鏈，其中輕鏈可變區(qū)包含三個(gè)CDR,其中CDRL-1的序列與SEQIDNO:4給出的序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%同一性或相似性，CDRL-2與SEQIDNO:5給出的序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%同一性或相似性和/或CDRL-3與SEQIDNO:6給出的序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%同一性或相似性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的抗體是單克隆抗體。在-一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的抗體是嵌合抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的抗體是CDR移植抗體分子，包含SEQIDNOS:1至6(圖1(c))提供的一個(gè)或多個(gè)CDR或其變體。這里使用的術(shù)語(yǔ)"CDR移植抗體分子"是指其中重鏈和/或輕鏈含有移植入受體抗體(例如人抗體)的重鏈和/或輕鏈可變區(qū)構(gòu)架的來(lái)自供體抗體(例如鼠單克隆抗體)的一個(gè)或多個(gè)CDR(如果期望，包括一個(gè)或多個(gè)修飾的CDR)的抗體分子。對(duì)于綜述，參見(jiàn)Vaughan等人，NatureBiotechnology,i^，535-539，1998。在一個(gè)實(shí)施方案中，不是轉(zhuǎn)移整個(gè)CDR，只是以上描述的任何一個(gè)CDR的一個(gè)或多個(gè)特異性決定殘基被轉(zhuǎn)入人抗體構(gòu)架(參見(jiàn)例如Kashmiri等人，2005，Methods,36,25-34)。在一個(gè)實(shí)施方案中，僅僅以上描述的一個(gè)或多個(gè)CDR的特異性決定殘基被轉(zhuǎn)入人抗體構(gòu)架。在另一實(shí)施方案中，僅僅以上描述的每一個(gè)CDR的特異性決定殘基被轉(zhuǎn)入人抗體構(gòu)架。當(dāng)移植CDR或特異性決定殘基時(shí)，可以使用針對(duì)CDR所來(lái)源的供體抗體的類別/類型的任何適當(dāng)?shù)氖荏w可變區(qū)構(gòu)架序列，包括小鼠、靈長(zhǎng)類動(dòng)物和人構(gòu)架區(qū)。優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明的CDR移植抗體具有包含人受體構(gòu)架區(qū)以及一個(gè)或多個(gè)CDR或如上所迷的特異性決定殘基的可變區(qū)。因此，一個(gè)實(shí)施方案中提供了中和CDR移植抗體，其中可變區(qū)包含人受體構(gòu)架區(qū)和非人供體CDR?？捎糜诒景l(fā)明的人構(gòu)架區(qū)的實(shí)例是K0L、NEWM、REI、EU、TUR、TEI、LAY和POM(Kabat等人，上述)。例如，KOL和NEWM可用于重鏈，REI可用于輕鏈而EU、LAY和POM可用于重鏈和輕鏈?？晒┻x擇地，可以使用人種系序列；這些可以從http:〃vbase.mrc-cpe.ac.uk/獲得。在本發(fā)明的CDR移植抗體中，受體重鏈和輕鏈不必來(lái)源于相同抗體，如果期望，可以包含具有來(lái)源于不同鏈的構(gòu)架區(qū)的組合鏈。本發(fā)明CDR移植抗體重鏈的構(gòu)架區(qū)優(yōu)選來(lái)源于人亞組VH3序列1-U3-15連同JH4。因此，提供了中和CDR移植抗體，其包含至少一個(gè)非人供體CDR,其中重鏈構(gòu)架區(qū)來(lái)源于人亞組序列1-U3-15連同JH4。人JH4的序列如下(YFDY)WGQGTLVTVSS。YFDY基序是CDR-H3的一部分，不是構(gòu)架區(qū)4的一部分(Ravetch,JV.等人，1981，Cell，27，583-591)。本發(fā)明CDR移植抗體輕鏈的構(gòu)架區(qū)優(yōu)選來(lái)源于人種系亞組VK1序列2-1-(1)L4連同JK1。因此，提供了中和CDR移植抗體，其包含至少一個(gè)非人供體CDR，其中輕鏈構(gòu)架區(qū)來(lái)源于人亞組序列VK12-1-(1)L4連同JK1。JK1序列如下(WT)FGQGTKVEIK。VTT基序是CDR-L3的一部分，而不是構(gòu)架區(qū)4的一部分(Hieter，PA.，等人，1982，J.Biol.Chem.，257，1516-1522)。同樣，在本發(fā)明的CDR移植抗體中，構(gòu)架區(qū)也不必與受體抗體具有完全相同的序列。例如，稀有殘基可以轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)于受體鏈類別或類型來(lái)說(shuō)更常見(jiàn)的殘基?？晒┻x擇地，受體構(gòu)架區(qū)中所選擇殘基可以被改變，使得它們相當(dāng)于供體抗體中相同位置發(fā)現(xiàn)的殘基(參見(jiàn)Reichmann等人，1998，Nature,332，323-324)。這種改變應(yīng)該保持在恢復(fù)供體抗體親和力所必需的最低限度。W091/09967中闡明了選擇可能需要改變的受體構(gòu)架區(qū)中殘基的方案。優(yōu)選，在本發(fā)明的CDR移植抗體分子中，如果受體重鏈具有人VH3序列1-U3-15連同JH4，則重鏈的受體構(gòu)架區(qū)除了一個(gè)或多個(gè)供體CDR外至少包含第49位的供體殘基(根據(jù)卡巴特等人，(上述))。因此，提供了CDR移植抗體，其中至少重鏈可變區(qū)第49位的殘基是供體殘基。優(yōu)選，在根據(jù)本發(fā)明的CDR移植抗體分子中，如果受體輕鏈具有人亞組VK1序列2-l-(l)L4連同JK1，則不轉(zhuǎn)移供體殘基，即僅轉(zhuǎn)移CDR。因此，提供了CDR移植抗體，其中僅僅CDR轉(zhuǎn)入供體構(gòu)架。供體殘基是來(lái)自供體抗體的殘基，即，CDR最初所來(lái)源的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含重鏈，其中重鏈可變區(qū)包含圖1(b)SEQIDN0:9給出的序列。人們會(huì)理解本發(fā)明提供的抗體可變區(qū)可以進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)氨基酸置換、添加和/或缺失，而不顯著改變抗體與IL-17結(jié)合和中和IL-17活性的能力。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地檢測(cè)任何氨基酸置換、添加和/或缺失的影響，例如通過(guò)使用實(shí)施例中描述的方法測(cè)定IL-17結(jié)合和中和。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含重鏈，其中重鏈可變區(qū)包含與SEQIDNO:9給出的序列具有至少60%同一性或相似性的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含重鏈，其中重鏈可變區(qū)包含與SEQIDNO:9給出的序列具有至少70°/。，80%,90%,95線98%同一性或相似性的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含輕鏈，其中輕鏈可變區(qū)包含圖1(a)SEQIDN0:7給出的序列。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含輕鏈，其中輕鏈可變區(qū)包含與SEQIDNO:7給出的序列具有至少60%同一性或相似性的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含輕鏈，其中輕鏈可變區(qū)包含與SEQIDNO:7給出的序列具有至少70%，80%，90%,95%或98%同一性或相似性的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含重鏈和輕鏈，其中重鏈可變區(qū)包含SEQIDN0:9給出的序列，其中輕鏈可變區(qū)包含SEQIDN0:7給出的序列。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，抗體包含重鏈和輕鏈，其中重鏈可變區(qū)包含與SEQIDNO:9給出的序列具有至少60%同一性或相似性的序列，而輕鏈可變區(qū)包含與SEQIDNO:7給出的序列具有至少60°/。同一性或相似性的序列。優(yōu)選，該抗體包含重鏈和輕鏈，其中重鏈可變區(qū)包含與SEQIDN0:9給出的序列具有至少70%,80%，90°/。，9/?；?8%15同一性或相似性的序列，其中輕鏈可變區(qū)包含與SEQIDN0:7給出的序列具有至少70%,80%，90%，95%或98%同一性或相似性的序列。本發(fā)明的抗體分子可以包括具有全長(zhǎng)重鏈和輕鏈的完全抗體分子或其片段，并且可以是，但不限于Fab、修飾的Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、單域抗體、scFv、二、三或四價(jià)抗體、雙scFv、雙抗體、三抗體、四抗體和上迷任何抗體的表位結(jié)合片段(參見(jiàn)例如Holliger和Hudson2005，NatureBiotech.23(9):1126-1136;AdairandLawson，2005，DrugDesignReviews-Online2(3)，209-217)。產(chǎn)生和制造這些抗體片段的方法是本領(lǐng)域熟知的(參見(jiàn)例如Verma等人，1998,JournalofImmimologicalMethods,216，165-181)。用于本發(fā)明的其他抗體片段包括國(guó)際專利申請(qǐng)WO2005/003169、WO2005/003170和WO2005/003171中描述的Fab和Fab'片段。多價(jià)抗體可以包含多重特異性或可以是單特異性的(參見(jiàn)例如WO92/22853和WO05/113605)。本發(fā)明的抗體分子如果存在恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域可以針對(duì)該抗體分子所提出的功能，尤其是可能需要的效應(yīng)功能進(jìn)行選擇。例如，恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域可以是人IgA、IgD、IgE、IgG或IgM結(jié)構(gòu)域。尤其是，當(dāng)抗體分子意欲用于治療和需要抗體效應(yīng)功能時(shí)，可以使用人IgG恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域，特別是IgGl和IgG3同型?？晒┻x擇地，當(dāng)抗體分子意欲用于治療且不需要抗體效應(yīng)功能，例如用于簡(jiǎn)單地阻滯IL-17活性時(shí)，可以4吏用IgG2和IgG4同型。人們會(huì)理解也可以使用這些恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的序列變體。例如可以使用如Angal等人，MolecularImmunology,1993,30(1)，105-108描述的其中第241位絲氨酸已轉(zhuǎn)變?yōu)楦彼岬腎gG4分子。特別優(yōu)選的是IgG4恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域包含這種改變。本領(lǐng)域技術(shù)人員還會(huì)理解抗體可以經(jīng)歷各種翻譯后修飾。這些修飾的類型和程度常常取決于用于表達(dá)該抗體的宿主細(xì)胞系以及培養(yǎng)條件。這種修飾可以包括糖基化、曱硫氨酸氧化、環(huán)縮二氨酸形成、天冬氨酸異構(gòu)化和天冬酰胺脫酰胺的變化。常見(jiàn)的修飾是由于羧肽酶作用羧基末端堿性殘基(例如賴氨酸或精氨酸)的丟失(如Harris,RJ.JournalofChromatography705:129-134，1995中描述)。因此，圖161(f),SEQIDNO:15中給出的抗體重鏈C末端賴氨酸可以缺乏。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體重鏈包含CH1結(jié)構(gòu)域和抗體輕鏈包含CL結(jié)構(gòu)域，或kappa或lambda。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的抗體是對(duì)人IL-17具有特異性的中和抗體，其中重鏈恒定區(qū)包含第241位絲氨酸已被脯氨酸取代的人lgG4恒定區(qū)，如Angal等人，上述描述。因此，本發(fā)明提供了其中重鏈包含圖1(f),SEQIDNO:15中給出的序列或由該序列組成的抗體。一個(gè)或多個(gè)氨基:置換、添加和;或缺失，二不顯著^改^抗體與、L-:7結(jié)合和中和IL-17活性的能力。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地檢驗(yàn)任何氨基酸置換、添加和/或缺失的影響，例如通過(guò)使用實(shí)施例中描述的方法確定IL-17結(jié)合和中和。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含重鏈，其中重鏈可變區(qū)包含與SEQIDNO:15給出的序列具有至少60%同一性或相似性的序列。優(yōu)選，抗體包含重鏈，其中重鏈可變區(qū)包含與SEQIDN0:15給出的序列具有至少70%,80%,90%，95%或98%同一性或相似性的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的抗體分子包含輕鏈，該輕鏈包含圖1(d),SEQIDN0:11中給出的序列。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含輕鏈，其中輕鏈包含與SEQIDNO:11給出的序列具有至少60%同一性或相似性的序列。優(yōu)選，抗體包含輕鏈，其中輕鏈包含與SEQIDN0:11給出的序列具有至少70%,80%,90%，95%或98%同一性或相似性的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抗體，其中重鏈包含SEQIDNO:15給出的序列或由該序列組成，而輕鏈包含SEQIDNO:11給出的序列或由該序列組成。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含重鏈和輕鏈，其中重鏈包含與SEQIDNO:15給出的序列具有至少60°/。同一性或相似性的序列，而輕鏈包含與SEQIDNO:11給出的序列具有至少60%同一性或相似性17的序列。優(yōu)選，該抗體包含重鏈和輕鏈，其中重鏈包含與SEQIDNO:15給出的序列具有至少70%，80%,90%,95%或98%同一性或相似性的序列，其中輕鏈包含與SEQIDN0:11給出的序列具有至少70%,80°/。，90%，95%或98%同一性或相似性的序列。本發(fā)明還提供了人IL-17的特異性區(qū)域或表位，其與本發(fā)明提供抗體結(jié)合，尤其是包含重鏈序列g(shù)H4(SEQIDNO:9)和/或輕鏈序列g(shù)L2(SEQIDNO:7)的抗體。人IL-17多肽的特異性區(qū)域或表位可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何合適的表位作圖方法與本發(fā)明提供的任何一個(gè)抗體組合來(lái)鑒定。這種方法的實(shí)例包括篩選與本發(fā)明抗體結(jié)合的來(lái)源于IL-17的長(zhǎng)度變化的肽，最小的片段可以特異性結(jié)合含有該抗體識(shí)別的表位序列的抗體。IL-17肽可以合成或通過(guò)蛋白水解消化IL-17多肽來(lái)制備。結(jié)合該抗體的肽可以通過(guò)例如質(zhì)鐠分析來(lái)鑒定。在另一實(shí)例中，可使用NMR核磁共振語(yǔ)學(xué)鑒定本發(fā)明抗體結(jié)合的表位。一旦得到鑒定，如果需要，則可以將結(jié)合本發(fā)明抗體的表位片段用作免疫原來(lái)獲得結(jié)合相同表位的另外的中和抗體。IL-17活性，本發(fā)明的抗體尤其是包含重鏈序列g(shù)H4(SEQIDNO:9)和輕鏈序列g(shù)L2(SEQIDN0:7)的抗體。因此，本發(fā)明還提供了對(duì)人IL-17具有特異性的中和抗體，其交叉阻斷如上所述任何一個(gè)抗體與人IL-17結(jié)合和/或因那些抗體的任何一個(gè)結(jié)合IL-17而被交叉阻斷。在一個(gè)實(shí)施方案中，這樣抗體與以上描述抗體相同的表位結(jié)合。在另一實(shí)施方案中，交叉阻斷中和抗體結(jié)合與被上文中所述抗體結(jié)合的表位接近和/或重疊的表位。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明這個(gè)方面的交叉阻斷中和抗體不與本發(fā)明抗體相同的表位或與所述表位接近和/或重疊的表位結(jié)合?？梢允褂帽绢I(lǐng)域任何合適方法鑒定交叉阻斷抗體，例如使用竟?fàn)幮訣LISA或BIAcore,其中交叉阻斷抗體與人IL-17的結(jié)合阻止本發(fā)明抗體的結(jié)合，或反之亦然。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了對(duì)人IL-17具有特異性的中和抗體，其交叉阻斷重鏈包含序列g(shù)H4(SEQIDNO:9)和其輕鏈包含序列g(shù)L2(SEQIDNO:7)的抗體與人IL-17結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的交叉阻斷抗體抑制包含重鏈序列g(shù)H4(SEQIDN0:9)和輕鏈序列g(shù)L2(SEQIDN0:7)的抗體的結(jié)合，該抑制大于80%，優(yōu)選大于85%，更優(yōu)選大于90%,甚至更優(yōu)選大于95%?？晒┻x擇地或此外，根據(jù)本發(fā)明這個(gè)方面的中和抗體可以被包含重鏈序列g(shù)H4(SEQIDN0:9)和輕鏈序列g(shù)L2(SEQIDN0:7)的抗體與人IL-17的結(jié)合所交叉阻斷。因此還提供了對(duì)人IL-17具有特異性的中和抗體分子，該中和抗體被包含重鏈序列g(shù)H4(SEQIDNO:9)和輕鏈序列g(shù)L2(SEQIDN0:7)的抗體與人IL-17結(jié)合而交叉阻斷。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明這個(gè)方面提供的中和抗體被包含重鏈序列g(shù)H4(SEQIDN0:9)和輕鏈序列g(shù)L2(SEQIDNO:7)的抗體與人IL-17的結(jié)合所抑制，該抑制大于80%,優(yōu)選大于85%，更優(yōu)選大于90%，甚至更優(yōu)選大于95%。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的交叉阻斷抗體完全是人的。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的交叉阻斷抗體是人源化的。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的交叉阻斷抗體與人IL-17具有100pm或更好的親和力。本發(fā)明的抗體分子優(yōu)選具有高結(jié)合親和力，優(yōu)選皮摩爾。親和力可以使用本領(lǐng)域已知的任何合適方法測(cè)定，包括如實(shí)施例描述的使用天然或重組IL-17的BIAcore。優(yōu)選^f吏用重組人IL-17測(cè)定親和力，如本文實(shí)施例描述的。優(yōu)選本發(fā)明的抗體分子具有約200pM或更好的結(jié)合親和力。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子具有約100pM或更好的結(jié)合親和力。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子具有約50pM或更好的結(jié)合親和力。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子具有約20pM或更好的結(jié)合親和力。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子具有約10pM或更好的結(jié)合親和力。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子是完全人或人源化的，并且具有約100pM或更好的結(jié)合親和力。fe口的任何合適方法來(lái)改變。因此本發(fā)明還涉及本發(fā)明抗體分子的變體，其對(duì)IL-17的親和力提高。這種變體可以通過(guò)很多親和力成熟方案獲得，包括使CDR突變(Yang等人，J.Mol.Biol.，254，392-403，1995)、鏈改組(Marks等人，Bio/Technology，10，775>-783，1992)、使用大腸桿菌突變抹(Low等人，J.Mol.Biol.，250，359-368，1996)、DNA改組(Patten等人，Curr.Opin.Biotechnol，8，724-733，1997)、噬菌體展示(Thompson等人，J.Mol.Biol.，256，77-88，1996)和有性PCR(sexualPCR)(Crameri等人，Nature,391，288-291，1998)。Vaughan等人(上述)討論了這些親和力成熟的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子中和IL-17活性，例如在實(shí)施例中描述的體外試驗(yàn)中。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了對(duì)人IL-17具有特異性的中和抗體，其在小于2nM濃度下能夠50%抑制0.8nM人IL-17的活性，所述抑制活性基于IL-17誘導(dǎo)的從Hela細(xì)胞釋放的IL-6來(lái)測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，50%抑制IL-17的抗體濃度小于lnM。在一個(gè)實(shí)施方案中，小于O.5nM。在一個(gè)實(shí)施方案中，該試驗(yàn)中使用的人IL-17是天然人IL-17。在一個(gè)實(shí)施方案中，該試驗(yàn)中使用的人IL-17是重組人IL-17。在一個(gè)實(shí)施方案中，中和抗體是人源化的或完全人抗體。如果期望，本發(fā)明使用的抗體可以與一個(gè)或多個(gè)效應(yīng)分子偶聯(lián)。這種分子連接形成可以連接本發(fā)明抗體的單獨(dú)部分。在期望獲得與效應(yīng)分子連接的抗體片段的情況下，這可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)或重組DNA程序來(lái)制備，其中抗體片段直接或通過(guò)偶聯(lián)劑與效應(yīng)分子連接。這種效應(yīng)分子與抗體偶聯(lián)的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的(參見(jiàn)Hellstrom等人，ControlledDrugDelivery,2ndEd.，Robinson等人，eds.，1987,pp.623-53;Thorpe等人，1982，Immunol.Rev.，62:119-58和Dubowchik等人,1999，PharmacologyandTherapeutics,83，67-123)。特定的化學(xué)步驟包括例如93/06231、WO92/22583、W089/00195、WO89/01476和WO03031581中描述的?？晒┻x擇地，在效應(yīng)分子是蛋白或多肽的情況下，可以使用重組DNA程序?qū)崿F(xiàn)連接，例如WO86/01533和EP0392745中描述。這里使用的術(shù)語(yǔ)效應(yīng)分子包括例如抗腫瘤劑、藥物、毒素、生物學(xué)活性蛋白，例如酶、其他抗體或抗體片段、合成的或天然存在的聚合物、核酸及其片段，例如DNA、RNA及其片段、放射性核素特別是放射性碘、放射性同位素、螯合金屬、納米顆粒和報(bào)道基團(tuán)例如熒光化合物或NMR或ESR光譜術(shù)可檢測(cè)到的化合物。效應(yīng)分子的實(shí)例可以包括細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒劑，包括對(duì)細(xì)胞有害(例如殺死)的任何試劑。實(shí)例包括combrestatins、多拉司他汀、epothilones、星形孑包菌素、maytansinoids、spongistatins、才艮審素、軟海綿素、桿孢菌素、hemiasterlins、紫杉酚、細(xì)胞+>弛素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、吐根堿、絲裂霉素、鬼臼亞乙苷、tenoposide、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花堿、秋水仙素、阿霉素、柔紅霉素、二羥炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光輝霉素、放線菌素D、1-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、心得安和嘌呤霉素及其類似物或同系物。效應(yīng)分子還包括但不限于抗代謝物(例如氨甲喋呤、6-巰基嘌呤、6-巰基鳥(niǎo)噪呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺)、烷化劑(例如二氯甲二乙胺、thioepa苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、亞硝脲氮芥(BSNU)和環(huán)己亞賄脲(CC,)、環(huán)磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、鏈脲佐菌素、絲裂霉素C和順二氯化二氨亞柏(II)(DDP)順式鉑氨)、蒽環(huán)類抗生素(例如柔紅霉素(daunorubicin)(以前是daunomycin)和阿霉素)、抗生素(例如放線菌素(dacti細(xì)ycin)(以前是acti謂ycin)、博萊霉素、光輝霉素、氨茴霉素(AMC)、刺孢霉素或多卡米星)、抗有絲分裂劑(例如長(zhǎng)春新堿和長(zhǎng)春花堿)。其他效應(yīng)分子可以包括螯合放射性核素例如mIn和9°Y、Lu177、Bismuth213、锎252、銥192和鴒188/錸188;或藥物例如但不限于烷基磷酸膽堿、拓樸異構(gòu)酶I抑制劑、紫杉烷和蘇拉明。21其他效應(yīng)分子包括蛋白、肽和酶。感興趣酶包括但不限于蛋白水解酶、水解酶、裂解酶、異構(gòu)酶、轉(zhuǎn)移酶。感興趣蛋白、多肽和肽包括但不限于免疫球蛋白，毒素例如相思豆毒蛋白、蓖麻毒A、假單胞菌外毒素、或白喉毒素，蛋白例如胰島素、腫瘤壞死因子、a-干擾素、p-干擾素、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子或組織纖溶酶原激活物、血栓形成劑或抗血管生成劑，例如制管張素或內(nèi)皮抑制素，或生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物例如淋巴因子、白介素-1(IL-1)、白介素-2(IL-2)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)或其他生長(zhǎng)因子和免疫球蛋白。其他效應(yīng)分子可以包括對(duì)例如診斷有用的可檢測(cè)到的物質(zhì)?？蓹z測(cè)到的物質(zhì)實(shí)例包括各種酶、輔基、熒光材料、發(fā)光材料、生物發(fā)光材料、放射性核素、正電子放射金屬(用于正電子發(fā)射層析成象)和非放射性順磁性金屬離子。通常參見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)4，741，900關(guān)于可以與抗體偶聯(lián)用作診斷的金屬離子。合適的酶包括辣根過(guò)氧化酶、0-半乳糖普酶、或乙酰膽堿酯酶；合適的輔基包括鏈霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白和生物素；合適的熒光材料包括傘形酮、熒光素、異硫氰酸熒光素、若丹明、二氯三嗪基胺熒光素、丹磺酰氯和藻紅蛋白；合適的發(fā)光材料包括魯米諾；合適的生物發(fā)光材料包括熒光素酶、瑩光素和水母發(fā)光蛋白；和合適的放射性核素包括1251、1311、"'In和"Tc。在另一實(shí)例中，效應(yīng)分子可以增加抗體在體內(nèi)的半衰期和/或降低抗體的免疫原性和/或增加抗體穿過(guò)上皮屏障遞送到免疫系統(tǒng)。合適的這個(gè)類型的效應(yīng)分子實(shí)例包括聚合物、白蛋白、白蛋白結(jié)合蛋白或白蛋白結(jié)合化合物，例如WO05/117984中描述的那些。在效應(yīng)分子是聚合物的情況下，它通常可以是合成的或天然存在的聚合物，例如任選取代的直或支鏈聚烯烴基、聚亞烷基或聚乙二醇聚合物或分支或不分枝的多糖，例如同型或異型多糖?？梢源嬖谟谏鲜龊铣删酆衔锷系木唧w任選的取代基包括一個(gè)或多個(gè)羥基、曱基或甲氧基。22合成聚合物的具體實(shí)例包括任選取代的直或支鏈聚(乙二醇)、聚(丙二醇)、聚(乙烯醇)或它們的衍生物，特別是任選取代的聚(乙二醇)，例如單甲氧基聚(乙二醇)或其衍生物。具體天然存在的聚合物包括乳糖、直鏈淀粉、葡聚糖、糖原或它們的衍生物。這里使用的"衍生物"意欲包括反應(yīng)性的衍生物，例如巰基-選擇性的活性基團(tuán)，例如馬來(lái)酰亞胺等等?；钚曰鶊F(tuán)可以直接或通過(guò)接頭片段與聚合物連接。人們會(huì)理解這種基團(tuán)的殘基在有些情況下會(huì)作為抗體片段和聚合物之間的連接基形成產(chǎn)物的一部分。聚合物的大小可以根據(jù)期望而變化，但是平均分子量通常會(huì)在500Da至50000Da，優(yōu)選5000至4G000Da和更優(yōu)選20000至40000Da。聚合物大小尤其可以基于產(chǎn)品的預(yù)定用途進(jìn)行選擇，例如局限于某些組織例如肺瘤的能力或延長(zhǎng)循環(huán)半衰期的能力(對(duì)于綜述，參見(jiàn)Chapman,2002,AdvancedDrugDeliveryReviews,54，531-545)。因此例如在產(chǎn)物意欲離開(kāi)循環(huán)并穿過(guò)組織，例如用于治療腫瘤的情況下，使用小分子量聚合物可能是有利的，例如大約5000Da的分子量。對(duì)于產(chǎn)物保留在循環(huán)中的應(yīng)用，使用較高分子量聚合物可能是有利的，例如分子量范圍從20000Da至40000Da。特別優(yōu)選的聚合物包括聚烯烴基聚合物，例如聚(乙二醇)，或尤其是曱氧基聚(乙二醇)或其衍生物，且特別是分子量范圍從約15000Da至約40000Da。在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明中使用的抗體與聚(乙二醇)(PEG)部分連接。在一個(gè)特別的實(shí)例中，該抗體是抗體片段并可以通過(guò)位于抗體片段中的任何可利用氨基酸側(cè)鏈或末端氨基酸官能團(tuán)與PEG分子連接，例如任何游離氨基、亞氨基、硫醇基、羥基或羧基。這種氨基酸可以天然存在于抗體片段中或可以使用重組DNA方法而工程改造入片段(參見(jiàn)例如US5,219,996;US5,667,425;W098/25971)。在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的抗體分子是修飾的Fab片段，其中修飾是一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加至其重鏈C末端以允許連接效應(yīng)分子。優(yōu)選，另外的氨基23有可以連接效應(yīng)分子的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基。多個(gè)部位可用于連接兩個(gè)或更多PEG分子。優(yōu)選PEG分子通過(guò)硫醇基與位于抗體至的至少一個(gè)半胱氨酸殘基中的半胱氨:i基的硫原子共價(jià)連接。共^鍵通常將i二i鍵或尤其是硫-碳鍵。在硫醇基用作適當(dāng)活化效應(yīng)分子的連結(jié)點(diǎn)的情況下，例如可以使用硫醇選擇性衍生物例如馬來(lái)酰亞胺和半胱氨酸衍生物?；罨酆衔锟梢杂米髦苽渚酆衔镄揎椀娜缟纤隹贵w片段的起始原料?；罨酆衔锟梢允呛辛虼蓟钚曰鶊F(tuán)的任何聚合物，例如oc-閨素羧酸或酯，例如碘乙酰胺，酰亞胺，例如馬來(lái)酰亞胺，乙烯基砜或二石克化物。這種起始原料可以從商業(yè)上獲得(例如從Nektar，以前的ShearwaterPolymersInc.,Huntsville，AL，USA)或可以從市場(chǎng)上可買到的起始原料使用常規(guī)化學(xué)步驟制備。具體PEG分子包括20k甲氧基-PEG-胺(可從Nektar,以前的Shearwater獲得；RappPolymere;和SunBio)和M-PEG-SPA(可從Nektar,以前的Shearwater獲得)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體是PEG化的修飾的Fab片段或diFab，即具有與其共價(jià)連接的PEG(聚(乙二醇))，例如根據(jù)EP0948544或EP1090037中公開(kāi)的方法[也參見(jiàn)"Poly(ethyleneglycol)Chemistry,BiotechnicalandBiomedicalApplications",1992,J.MiltonHarris(ed)，PlenumPress,NewYork,"Poly(ethyleneglycol)ChemistryandBiologicalApplications",1997，J.MiltonHarrisandS.Zalipsky(eds)，AmericanChemicalSociety,WashingtonDCand"BioconjugationProteinCouplingTechniquesfortheBiomedicalSciences",1998,M.AslatnandA.Dent，GrovePublishers,NewYork;Chapman,A.2002，AdvancedDrugDeliveryReviews2002,54:531-545]。在一個(gè)實(shí)例中，PEG與絞鏈區(qū)的半胱氨酸連接。在一個(gè)實(shí)例中，PEG修飾的Fab片段具有與修飾絞鏈區(qū)中單個(gè)硫醇基共價(jià)連接的馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)。賴氨酸殘基可以與馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)共價(jià)連接，并且賴氨酸殘基上的每個(gè)胺基可以連接分子量為大約2420,000Da的曱氧基聚(乙二醇)聚合物。因此與Fab片段連接的PEG的總分子量可以是大約40，000Da。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了對(duì)人IL-17具有特異性的中和抗體，其是修飾的Fab片段，具有包含SEQIDN0:9給出序列的重鏈和包含SEQIDNO.7給出序列的輕鏈，并且在其重鏈C末端具有含與效應(yīng)分子連接的至少一個(gè)半胱氨酸殘基的修飾的絞鏈區(qū)。優(yōu)選效應(yīng)分子是PEG和使用(W098/25971和WO2004072116)中描述方法連接，由此賴氨酰馬來(lái)酰亞胺基與重鏈C末端半胱氨酸殘基連接，和賴氨酰殘基的每個(gè)氨基與分子量約20，OOODa的甲氧基聚(乙二醇)殘基共價(jià)連接。因此與抗體連接的PEG的總分子量可以是大約40，OOODa。在另一實(shí)例中，效應(yīng)分子可以與抗體片段連接，使用國(guó)際專利申請(qǐng)WO2005/003169、WO2005/003170和WO2005/003171中描述的方法。本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明抗體分子的重鏈和/或輕鏈的分離的DNA序列。優(yōu)選，該DNA序列編碼本發(fā)明抗體分子的重鏈或輕鏈。本發(fā)明的DNA序列可以包括合成DNA，例如化學(xué)方法生產(chǎn)的合成DM,cDNA、基因組DNA或其任何組合。編碼本發(fā)明抗體分子的DNA序列可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法荻得。例如，編碼部分或全部抗體重鏈和輕鏈的DNA序列可以如所期望的從確定的DM序列或基于相應(yīng)的氨基酸序列進(jìn)行合成。編碼受體構(gòu)架序列的DNA是本領(lǐng)域技術(shù)人員普遍可獲得的并且可以根據(jù)它們的已知氨基酸序列容易地合成?？梢允褂梅肿由飳W(xué)的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備編碼本發(fā)明抗體分子的DM序列。期望的DNA序列可以使用寡核苷酸合成技術(shù)完全或部分合成。適當(dāng)時(shí)可以使用定點(diǎn)誘變和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)。圖1(h)SEQIDNO:8;圖1(i)SEQIDNO:10;圖1(j)SEQIDNO:13;圖1(k)SEQIDNO:14;圖1(1)SEQIDNO:17和圖1(m)SEQIDNO:18中提供了合適的序列實(shí)例。SEQIDNO18中核苷酸1-57和SEQIDNO14中1-60編碼小鼠抗體B72.3的信號(hào)肽序列(Whittle等人，1987，ProteinEng.1(6)499-505.),其被切割而獲得本發(fā)明的中和抗體分子(信號(hào)肽分別相當(dāng)于圖1(g)SEQIDNO:16中氨基酸殘基1-19和圖1(e)SEQIDNO:12中氨基酸殘基1-20)。本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明抗體重鏈的分離的DNA序列，該重鏈包含SEQIDNO:17或SEQIDNO:18。本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明抗體輕鏈的分離的DNA序列，該輕鏈包含SEQIDNO:13或SEQIDN0:14。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明一個(gè)或多個(gè)DNA序列的克隆或表達(dá)載體。因此，提供了包含編碼本發(fā)明抗體的一個(gè)或多個(gè)DNA序列的克隆或表達(dá)栽體。優(yōu)選，包含分別編碼本發(fā)明抗體分子輕鏈和重鏈的兩個(gè)DNA序列的克隆或表達(dá)載體。優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明的載體包含SEQIDNO:14和SEQIDNO:18給出的序列。SEQIDNO18中的核苷酸1-57和SEQIDNO14中的1-60編碼小鼠抗體B72.3的信號(hào)肽序列(分別是SEQIDNO:16中的殘基1-19和SEQIDNO:12中的1-20),最優(yōu)選其被切割而獲得本發(fā)明的中和抗體分子。可以構(gòu)建載體的一般方法、轉(zhuǎn)染方法和培養(yǎng)方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。在這方面,參考"CurrentProtocolsinMolecularBiology",1999，F(xiàn).M.Ausubel(ed)，WileyInterscience，NewYorkandtheManiatisManualproducedbyColdSpringHarborPublishing。還提供了包含一個(gè)或多個(gè)克隆或表達(dá)栽體的宿主細(xì)胞，該載體包含編碼本發(fā)明抗體的一個(gè)或多個(gè)DNA序列。任何合適的宿主細(xì)胞/載體系統(tǒng)可以用于表達(dá)編碼本發(fā)明抗體分子的DNA序列?？梢允褂眉?xì)菌，例如大腸桿菌及其他微生物系統(tǒng)，或也可以使用真核生物例如哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。合適的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞包括CH0、骨髓瘤或雜交瘤細(xì)月包。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)根據(jù)本發(fā)明的抗體分子的方法，包括在適于虧1起編碼本發(fā)明抗體分子的DNA表達(dá)蛋白的條件下培養(yǎng)含有本發(fā)明栽體的宿主細(xì)胞，和分離該抗體分子。該抗體分子可以僅僅包含重鏈或輕鏈多肽，而在這樣情況下需要26僅僅重鏈或輕鏈多肽編碼序列用于轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。對(duì)于包含重鏈和輕鏈的產(chǎn)物的生產(chǎn)，可以用兩個(gè)載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞系，第一個(gè)載體編碼輕鏈多肽和第二個(gè)載體編碼重鏈多肽?？晒┻x擇地，可以使用單個(gè)載體，該載體包含編碼輕鏈和重鏈多肽的序列。由于本發(fā)明抗體對(duì)治療和/或預(yù)防病理情況有效，本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明抗體分子和一個(gè)或多個(gè)藥物可接受賦形劑、稀釋劑或載體組合的藥物或診斷組合物。因此，提供了本發(fā)明抗體用于制備藥物的用途。該組合物通常以無(wú)菌藥物組合物的一部分提供，該藥物組合物通常會(huì)包含藥物可接受載體。本發(fā)明的藥物組合物可以另外包含藥物可接受佐劑。本發(fā)明還提供了制備藥物或診斷組合物的方法，包括添加和混合本發(fā)明的抗體分子連同一個(gè)或多個(gè)藥物可接受賦形劑、稀釋劑或載體。該抗體分子可以是藥物或診斷組合物中唯一的活性成分或可以伴有其他活性成分，包4舌其他抗體成分，例如抗TNF、抗IL-1P、抗T細(xì)胞、抗IFNy或抗LPS抗體，或非抗體成分例如黃嘌呤。其他合適的活性成分包括能夠誘導(dǎo)耐受度的抗體，例如抗CD3或抗CD4抗體。該藥物組合物優(yōu)選包含治療有效量的本發(fā)明抗體。這里使用的術(shù)語(yǔ)"治療有效量"是指治療、改善或預(yù)防目標(biāo)疾病或病情所需，或顯示初可檢測(cè)到的治療或預(yù)防作用所需的治療劑的量。對(duì)于任何抗體，治療有效量可以在細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)或在動(dòng)物模型中初步估計(jì)，通常在嚙齒類、兔、狗、豬或靈長(zhǎng)類動(dòng)物中。該動(dòng)物模型也可以用于測(cè)定合適的濃度范圍和給藥途徑。然后這種信息可用于確定在人類中有效的劑量和給藥途徑。對(duì)于受試驗(yàn)的人的精確治療有效量將取決于疾病狀況的嚴(yán)重性、受試者的一般健康狀況、受試者的年齡、體重和性別、飲食、給藥的時(shí)間和頻率、藥物聯(lián)合、對(duì)治療的反應(yīng)敏感性和耐受度/反應(yīng)。這個(gè)量可以通過(guò)常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定并且在臨床醫(yī)師的判斷之內(nèi)。通常，治療有效量會(huì)從0.Olmg/kg至50mg/kg，優(yōu)選0.lmg/kg至20mg/kg。藥物組合物可以方便地以每劑含有預(yù)定量本發(fā)明活性劑的單位劑型存在。27該組合物可以單獨(dú)給予患者或可以與其他試劑、藥物和激素聯(lián)合給予(例如同時(shí)、順序或分開(kāi))。本發(fā)明抗體分子給予的劑量取決于所治療病情的性質(zhì)、存在的炎癥程度和取決于該抗體分子是用于預(yù)防還是治療現(xiàn)存病情。劑量的頻率將取決于抗體分子的半衰期和其作用的持續(xù)時(shí)間。如果抗體分子半衰期短(例如2至10小時(shí))，每天給予一劑或多劑可能是必需的?；蛘撸绻贵w分子半衰期長(zhǎng)(例如2至15天)，可能僅需要給予每天一次、每周一次乃至每1月或2月一次的劑量。藥物可接受栽體本身不應(yīng)該誘導(dǎo)對(duì)接受該組合物的個(gè)體有害的抗體產(chǎn)生并且不應(yīng)該有毒。合適的載體可以是大的、緩慢代謝的大分子，例如蛋白質(zhì)、多肽、脂質(zhì)體、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、氨基酸共聚物和無(wú)活性病毒顆粒?？梢允褂盟幬锟山邮茺}，例如無(wú)機(jī)酸鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽和硫酸鹽，或有機(jī)酸鹽，例如醋酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽和苯曱酸鹽。治療組合物中的藥物可接受載體可以另外含有液體，例如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，輔料，例如潤(rùn)濕劑或乳化劑或pH緩沖劑可以存在于這種組合物中。這種載體能使該藥物組合物被配制成片劑、丸劑、糖衣丸、膠嚢、液體、凝膠劑、糖漿、漿液和懸浮液，用于被患者攝取。優(yōu)選的給藥形式包括適于腸胃外給藥的形式，例如通過(guò)注射或輸注，例如通過(guò)快速濃注或連續(xù)輸注。在產(chǎn)品用于注射或輸注的情況下，它可以采用處于含油或含水載體中的懸浮、溶液或乳劑的形式，和它可以含有配制劑(formulatoryagents),例如懸浮劑、防腐劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?？晒┻x擇地，抗體分子可以是千燥形式，在使用前與適當(dāng)?shù)臒o(wú)菌液體重新組配。一旦配制成，本發(fā)明的組合物可以直接給予受試者。待治療的受試者可以是動(dòng)物。然而，優(yōu)選該組合物適于給予受試人。本發(fā)明的藥物組合物可以通過(guò)許多途徑給予，包括但不限于口腔、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、透皮、經(jīng)皮下(例如參見(jiàn)WO98/20734)、皮下、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、腸內(nèi)、局部、舌下、陰道內(nèi)或直腸途徑。也可以使用無(wú)痛皮下噴射器給予本發(fā)明的藥物組合物。典型地，治療組合物可以制備成可注射的，或液體溶液或懸浮液。也可以制成適于注射前以溶于或懸浮于液體載體的固體形式。組合物的直接遞送通常會(huì)伴隨注射、皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)注射或遞送至組織間隙。該組合物還可以給予受損處。劑量治療可以是單劑量計(jì)劃或多劑量計(jì)劃。人們會(huì)理解組合物中的活性成分將是抗體分子。正因?yàn)檫@樣，它在胃腸道易于被降解。因此，如果組合物通過(guò)胃腸道途徑給予，該組合物將需要含有保護(hù)抗體不被降解，但是一旦已經(jīng)被胃腸道吸收則釋;故該抗體的試劑。藥物可接受載體的深入討論可在Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPublishingCompany,N.J.1991)中獲得。還設(shè)想了本發(fā)明的抗體將通過(guò)使用基因治療給予。為了實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)，在適當(dāng)?shù)腄NA組件控制下的編碼抗體分子的重鏈和輕鏈的DM序列被導(dǎo)入患者，使得由DNA序列表達(dá)該抗體鏈并在原地裝配。本發(fā)明還提供了用于控制炎性疾病的抗體分子。優(yōu)選，該抗體分子可用于減輕炎性過(guò)程或預(yù)防炎性過(guò)程。本發(fā)明還提供了用于治療或預(yù)防IL-17介導(dǎo)的或與升高的IL-17水平相關(guān)的病理障礙的本發(fā)明的抗體分子。優(yōu)選，病理情況選自下組感染(病毒、細(xì)菌、真菌和寄生蟲(chóng)性的)、與感染相關(guān)的內(nèi)毒素性休克、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哞喘、盆腔炎、阿爾茨海默氏病、克羅恩氏病、纖維性海綿體炎、乳糜瀉、膽嚢疾病、藏毛病、腹膜炎、銀屑病、脈管炎、手術(shù)粘連、中風(fēng)、I型糖尿病、lyme關(guān)節(jié)炎、腦膜腦炎、免疫介導(dǎo)的中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的炎性障礙例如多發(fā)性硬化和吉-巴綜合征、其他自身免疫障礙、胰腺炎、外傷(手術(shù))、移植物抗宿主疾病、移植排斥、癌癥(實(shí)體腫瘤例如黑素瘤、肝胚細(xì)胞瘤、肉瘤、鱗狀細(xì)胞癌、移行細(xì)胞癌、卵巢癌和血液系統(tǒng)惡性肺瘤，尤其是急性髓性白血病、慢性粒性白血病、胃癌和結(jié)腸癌)、心臟病包括缺血性疾病例如心肌梗塞以及動(dòng)脈粥樣硬化、血管內(nèi)凝血、骨吸收、骨質(zhì)疏松癥、骨關(guān)節(jié)炎、牙周炎和胃酸過(guò)少。本發(fā)明還提供了用于治療或預(yù)防疼痛的根據(jù)本發(fā)明的抗體分子。本發(fā)明進(jìn)一步提供了根據(jù)本發(fā)明的抗體分子用于制造治療或預(yù)防IL-17介導(dǎo)的或與升高的IL-17水平相關(guān)的病理障礙的藥物的用途。優(yōu)選病理障礙是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或多發(fā)性硬化。本發(fā)明進(jìn)一步提供了根據(jù)本發(fā)明的抗體分子在制備治療或預(yù)防疼痛的藥物中的用途。本發(fā)明的抗體分子可以用于期望降低IL-17在人或動(dòng)物體的作用的任何療法。IL-17可以在體內(nèi)循環(huán)或可以以出乎意料的高水平局部存在于體內(nèi)特定部位，例如炎癥部位。優(yōu)選本發(fā)明的抗體分子用于控制炎性疾病。本發(fā)明還提供了治療罹患由IL-17介導(dǎo)的障礙或處于這種風(fēng)險(xiǎn)中的人或動(dòng)物受試者的方法，該方法包括將有效量的本發(fā)明的抗體分子給予受試者。本發(fā)明的抗體分子也可以用于診斷，例如涉及IL-17的疾病狀況的體內(nèi)診斷和造影。在下面的實(shí)施例中，參照附圖僅以例證方式進(jìn)一步描述本發(fā)明，其中圖1:a)抗體CA048—497.g2(277gL2gH4)的輕鏈V區(qū)(SEQIDNO:7)b)抗體CA048—497.g2(277gL2gH4)的重鏈V區(qū)(SEQIDNO:9)c)抗體CA048—497.g2(277gL2gH4)的CDRH1(SEQIDNO:1)，CDRH2(SEQIDNO:2)，CDRH3(SEQIDNO:3)，CDRL1(SEQIDNO:4)，CDRL2(SEQIDNO:5),CDRL3(SEQIDNO:6)。d)抗體CA048——497.g2的輕鏈(SEQIDNO:11)e)抗體CA048—497.g2的輕鏈，包括信號(hào)序列(下劃線)(SEQIDNO:12)30的重鏈(SEQIDNO:15)g)抗體CA048—497.g2的重鏈，包括信號(hào)序列(下劃線)(SEQIDNO:16)h)編碼抗體CA048_497.g2的輕鏈可變區(qū)的MA(SEQIDNO:8)i)編碼抗體CA048—497.g2的重鏈可變區(qū)的DNA(SEQIDNO:10)j)編碼抗體CA048—497.g2的輕鏈的DNA(SEQIDNO:13)k)編碼抗體CA048-497.g2輕鏈可變區(qū)的DNA,包括信號(hào)序列(SEQIDNO:14)1)編碼抗體CA048—497.g2的重鏈的DNA(SEQIDNO:17)m)編碼抗體CA048-497.g2的重鏈的DNA，包括信號(hào)序列(SEQIDNO:18)圖2:抗體CA048—497.g2抑制在用重組人IL-17刺激的Hela細(xì)胞中產(chǎn)生IL-6。圖3:抗體CA048-497.g2抑制在用天然人IL-17刺激的Hela細(xì)胞中產(chǎn)生IL-6。DNA操作和一般方法使用大腸桿菌菌林INVaP(Invitrogen)轉(zhuǎn)化和常規(guī)培養(yǎng)生長(zhǎng)。DNA限制和修飾酶得自RocheDiagnosticsLtd.和NewEnglandBiolabs。使用Maxi質(zhì)粒純化試劑盒(QIAGEN，目錄號(hào)12165)進(jìn)行質(zhì)粒制備。使用ABIPrismBigDye終止測(cè)序試劑盒(目錄號(hào)4304149)進(jìn)行DNA測(cè)序反應(yīng)并在ABI3100自動(dòng)測(cè)序儀(AppliedBiosystems)上運(yùn)行。使用AutoAssembler禾呈序(AppliedBiosystems)分析數(shù)據(jù)。寡核苦酸得自Invitrogen。^沒(méi)計(jì)編碼初始V區(qū)序列的基因并由EntelechonGmbH通過(guò)自動(dòng)合成方法構(gòu)建，并且通過(guò)寡核苷酸定向誘變修飾以產(chǎn)生移植形式的基因。使用IgG裝配ELISA確定IgG的濃度。實(shí)施例1:中和抗IL-17抗體(抗CA048497.g2(277gL2gH4))的制備用重組人IL-17(購(gòu)自R&Dsystems)免疫雌性SpragueDawly大31鼠。大鼠接受含20MgIL-17的100Ml弗氏佐劑的四次免疫。使用WO04/051268中描述的方法分離結(jié)合人IL-17的抗體277。分離抗體277重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)的基因并在經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄PCR克隆后測(cè)序。使用人V區(qū)受體構(gòu)架并通過(guò)在該構(gòu)架區(qū)改變供體殘基的數(shù)量來(lái)設(shè)計(jì)一系列人源化VL和VH區(qū)。設(shè)計(jì)兩個(gè)移植VL區(qū)(gLl和2)和7個(gè)移植VH區(qū)(gHl-7),并通過(guò)寡核苷酸裝配和PCR誘變構(gòu)建基因。輕鏈移植序列亞克隆入人輕鏈表達(dá)載體pKHlO.1中，該載體含有編碼人C-Kappa恒定區(qū)(Km3異型)的DNA。重鏈移植序列亞克隆入人y-4表達(dá)載體pVhg4PFL中，該栽體含有編碼含鉸鏈穩(wěn)定突變S241P的人y-4恒定區(qū)的DM(Angal等人，上述)。質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞和產(chǎn)生了用于篩選IL-17結(jié)合和中和試驗(yàn)中活性的抗體(例如IL-17誘導(dǎo)了在細(xì)胞系3T3-證中IL-6產(chǎn)生，基于Yao等人，J.Immunol.1995;155，5483-5486描述的方法)。使用Lipofectamine2000程序，根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)(InVitrogen，目錄號(hào)11668)進(jìn)行CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染。選擇中和il-17(gL2gH4)最有力的和在CHO細(xì)胞中表達(dá)最高的移植。圖l(a)和(b)中顯示了V區(qū)序列和SEQIDNO:7和9分別是輕鏈(gL2)和重鏈(gH4)。這個(gè)抗體被命名為CA028—497.g2。圖1(c)顯示了這個(gè)抗體的CDR。圖1(d)和(f)分別顯示了全長(zhǎng)輕鏈和重鏈。圖1(k)和(m)會(huì)別顯示了編碼輕鏈和重鏈的DNA序列。重鏈?zhǔn)荏w構(gòu)架區(qū)是人種系序列VH31-U3-15，構(gòu)架區(qū)4來(lái)自人JH區(qū)種系JH4的這個(gè)部分。輕鏈?zhǔn)荏w構(gòu)架區(qū)是人種系序列VK12-1-(1)L4，構(gòu)架區(qū)4來(lái)自人JK區(qū)種系JK1的這個(gè)部分。SEQIDN0:9重鏈第49位氨基酸是發(fā)現(xiàn)對(duì)CHO細(xì)胞表達(dá)和對(duì)于IL-17親和力必需的供體殘基。實(shí)施例2:CA028-497.g2對(duì)IL-17親和力的評(píng)價(jià)BIAcore技術(shù)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)生物分子之間的結(jié)合并且無(wú)需標(biāo)記。相互作用物之一，稱為配體，直接固定或捕獲于固定表面上，而另一個(gè)，32稱為被測(cè)物，注入捕獲表面上的溶液。纟笨測(cè)器檢測(cè)隨著被測(cè)物于配體結(jié)合而在表面上形成復(fù)合體時(shí)群體的改變。這相當(dāng)于結(jié)合過(guò)程。當(dāng)被測(cè)物被緩沖液替代時(shí)監(jiān)測(cè)解離過(guò)程。用CA028-497.g2作為配體和IL-17作為被測(cè)物估計(jì)在BIAcore試驗(yàn)中CA028—497.g2對(duì)IL-17的親和力。用CA028—497.g2作為配體確定CA028—497.g2對(duì)來(lái)自不同物種的IL-17的親和力固定在探測(cè)器芯片上的抗人IgGFc俘獲CA028-497.g2后，人IL-17或來(lái)自其他物種的IL-17滴定于捕獲表面。程序?qū)嵗缦耝f吏用BIAcore3000(BIAcoreAB)進(jìn)行BIA(Biamolecular互相作用分析(BiamolecularInteractionAnalysis))。AffinipureF(ab')2片段山羊抗人IgG，F(xiàn)c(JacksonImmunoResearch)通過(guò)胺類偶聯(lián)化學(xué)作用以《8000反應(yīng)單位(RUs)的捕獲水平固定在CM5探測(cè)芯片上。HBS-EP緩沖液(10mMHEPESpH7.4，0.15MNaCl，3mMEDTA，0.005%表面活性劑P20，BIAcoreAB)用作運(yùn)行緩沖液，流速10jaW分鐘。注射CA028—497.g210mL用于捕獲固定的抗人IgG-F(abh。IL-17以各種濃度，流速30uL/分鐘滴定于捕獲的CA028—497.g2上。表面再次注射30jjL40mMHC1，隨后注射10nL5mMNaOH。使用BIAevaluation軟件(3.2版本)按照標(biāo)準(zhǔn)程序分析減去本底的結(jié)合曲線。根據(jù)擬合算法確定動(dòng)力參數(shù)。估計(jì)來(lái)自不同非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物(NHP)物種的瞬時(shí)表達(dá)的IL-17相對(duì)于人IL-17的濃度，然后使用這些濃度確定IL-17的親和力。以等于或低于25nM的IL-17濃度測(cè)定親和力。確定的CA028—497.g2的親和力值對(duì)于人IL-17是6.3pM，對(duì)于短尾猴IL-17是10.7pM而對(duì)于小猿IL-17是12.9pM(表1)。根據(jù)等值的人IL-17結(jié)合估計(jì)瞬時(shí)短尾猴IL-17和瞬時(shí)小猿IL-17的濃度。表l:CA028—497.g2對(duì)IL-17的親和力<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>實(shí)施例3:人細(xì)月包上人IL-17的中和利用IL-17誘導(dǎo)人Hela細(xì)胞產(chǎn)生IL-6的能力確定CA028—497.g2對(duì)人重組IL-17和哺乳動(dòng)物細(xì)胞(CHO)衍生人IL-17(稱為"天然"IL-17)的中和效力。Hela細(xì)胞得自ATCC細(xì)胞庫(kù)(ATCCCCL-2)。使細(xì)胞生長(zhǎng)在補(bǔ)充了10%胎牛血清、青霉素、慶大霉素和谷氨酰胺的Dulbecco's改良Eagle's培養(yǎng)基(DMEM)中。lxl(T個(gè)細(xì)胞鋪在96孔平底組織培養(yǎng)板中。細(xì)胞孵育整夜并在試驗(yàn)緩沖液中洗滌一次。在固定濃度的人TNF-a存在下孵育人重組IL-17(25ngrar)或者"天然"IL-17(25ngm1—1)，將此混合物與CA028—497.g2預(yù)孵育。然后將細(xì)胞因子加抗體添加至孵育過(guò)夜的Hela細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生的IL-6與被加到細(xì)胞中的IL-17的量成比例。使用MesoScaleDiscovery96孔Multi-SpotIL-6人細(xì)胞因子試驗(yàn)確定細(xì)胞上清液中IL-6釋放的水平。這個(gè)試驗(yàn)本質(zhì)上是夾心免疫測(cè)定，其中預(yù)先包被的抗人IL-6捕獲抗體與細(xì)胞上清液或校準(zhǔn)溶液中的IL-6結(jié)合，并使用IL-6特異性檢測(cè)抗體對(duì)該水平進(jìn)行定量。CA028-497.g2有效中和人重組IL-17和哺乳動(dòng)物細(xì)胞衍生的人IL-17(圖2和3)。這些實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)表明CA028—497g.2抗人重組IL-17的ICs。為51ng/mL±3ng/mL(0.34nM)，抗哺乳動(dòng)物細(xì)胞衍生的IL-17的I"為103±7ng/mL(0.7nM)。述了本發(fā)明，決不意味著限制本發(fā)明，并且在以下權(quán)利要求范圍內(nèi)可以進(jìn)行細(xì)節(jié)的改動(dòng)。本發(fā)明的每個(gè)實(shí)施方案的優(yōu)選特征也針對(duì)加以必要的變化的每個(gè)其他實(shí)施方案。文作為參考，如同每;單獨(dú)出版物具體和單獨(dú)指出被引入本文作為參考，如充分闡明一樣。權(quán)利要求1.結(jié)合IL-17的包含重鏈的中和抗體，其中重鏈可變區(qū)包含至少一個(gè)下述CDR具有SEQIDNO1給出的CDR-H1的序列的CDR、具有SEQIDNO2給出的CDR-H2的序列的CDR和具有SEQIDNO3給出的CDR-H3的序列的CDR。2.根據(jù)權(quán)利要求1的中和抗體，其中重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:1給出的CDR-HI的序列、SEQIDNO:2給出的CDR-H2的序列和SEQIDNO:3給出的CDR-H3的序列。3.結(jié)合人IL-17的含輕鏈的中和抗體，其中輕鏈可變區(qū)包含至少一個(gè)下述CDR:具有SEQIDNO:4給出的CDR-L1的序列的CDR、具有SEQIDNO:5給出的CDR-L2的序列的CDR和具有SEQIDNO:6給出的CDR-L3的序列的CDR。4.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的中和抗體，另外包含輕鏈，其中輕鏈可變區(qū)包含至少一個(gè)下述CDR:具有SEQIDN0:4給出的CDR-Ll的序列的CDR、具有SEQIDNO:5給出的CDR-L2的序列的CDR和具有SEQIDNO:6給出的CDR-L3的序列的CDR。5.根據(jù)權(quán)利要求3或權(quán)利要求4的中和抗體，其中輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:4給出的CDR-L1的序列、SEQIDNO:5給出的CDR-L2的序列和SEQIDNO:6給出的CDR-L3的序列。6.結(jié)合人IL-17的中和抗體，其中重鏈可變區(qū)包含三個(gè)CDR,并且CDRH-1的序列與SEQIDNO:1給出的序列具有至少60°/。同一性或相似性，CDRH-2的序列與SEQIDNO:2給出的序列具有至少60%同一性或相似性而CDRH-3的序列與SEQIDNO:3給出的序列具有至少60%同一性或相似性。7.根據(jù)權(quán)利要求6的中和抗體，另外包含輕鏈，其中輕鏈可變區(qū)包含三個(gè)CDR，并且CDRL-1的序列與SEQIDNO:4給出的序列具有至少60%同一性或相似性，CDRL-2的序列與SEQIDNO:5給出的序列具有至少60%同一性或相似性而CDRL-3的序列與SEQIDNO:6給出的序列具有至少60%同一性或相似性。8.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)的抗體，其中重鏈包含SEQIDN0:9給出的序列。9.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)的抗體，其中輕鏈包含SEQIDNO:7給出的序列。10.結(jié)合人IL-17的中和抗體，具有包含SEQIDNO:9給出序列的重鏈和包含SEQIDN0:7給出序列的輕鏈。11.結(jié)合人IL-17的中和抗體，其中輕鏈可變區(qū)包含與權(quán)利要求10的抗體的輕鏈可變區(qū)具有至少80%同一性或相似性的序列，而其中重鏈可變區(qū)包含與權(quán)利要求10的抗體的重鏈可變區(qū)具有至少80%同一性或相似性的序列。12.結(jié)合人IL-17的中和抗體，具有包含SEQIDN0:15給出序列的重鏈和包含SEQIDNO:11給出序列的輕鏈。13.結(jié)合人IL-17的中和抗體，其中重鏈和輕鏈與權(quán)利要求12的抗體的相應(yīng)重鏈和輕鏈至少80%同一或相似。14.對(duì)人IL-17具有100pM或更好的結(jié)合親和力的中和抗體。15.結(jié)合人IL-17的中和抗體，其結(jié)合與權(quán)利要求10的抗體相同的表位。16.結(jié)合人IL-17的中和抗體，其對(duì)人IL-17具有100pM或更好的結(jié)合親和力并交叉阻斷權(quán)利要求10的抗體與人IL-17的結(jié)合或因權(quán)利要求10的抗體結(jié)合人IL-17而被交叉阻斷。17.被權(quán)利要求10的抗體結(jié)合的人IL-17上的表位。18.結(jié)合人IL-17的中和抗體，其在小于2nM的濃度下能夠50%抑制0.8nM人IL-17的活性，所述抑制活性基于IL-17誘導(dǎo)的從Hela細(xì)胞釋放的IL-6來(lái)測(cè)定。19.編碼權(quán)利要求1至18任一項(xiàng)的抗體的重鏈和/或輕鏈的分離的DNA序列。20.包含根據(jù)權(quán)利要求19的一個(gè)或多個(gè)DNA序列的克隆或表達(dá)栽體。21.根據(jù)權(quán)利要求20的載體，其中該載體包含SEQIDNO:14和SEQIDNO:18給出的序列。22.包含一個(gè)或多個(gè)根據(jù)權(quán)利要求20或權(quán)利要求21的克隆或表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。23.生產(chǎn)權(quán)利要求1至18任一項(xiàng)的抗體的方法，包括培養(yǎng)權(quán)利要求22的宿主細(xì)胞并分離該抗體。24.—種藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1至18任一項(xiàng)的抗體與一個(gè)或多個(gè)藥物可接受賦形劑、稀釋劑或載體組合。25.根據(jù)權(quán)利要求24的藥物組合物，另外包含其他的活性成分。26.根據(jù)權(quán)利要求1至18任一項(xiàng)的抗體或根據(jù)權(quán)利要求24或權(quán)利要求25的藥物組合物，用于治療或預(yù)防IL-17介導(dǎo)的或與升高的IL-17水平相關(guān)的病理障礙。27.根據(jù)權(quán)利要求1至18任一項(xiàng)的抗體用于制備治療或預(yù)防IL-17介導(dǎo)的或與升高的IL-17水平相關(guān)的病理障礙的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及對(duì)IL-17的抗原決定簇具有特異性的抗體分子、該抗體分子的治療應(yīng)用和生產(chǎn)所述抗體分子的方法。文檔編號(hào)A61K39/395GK101501072SQ200780029886公開(kāi)日2009年8月5日申請(qǐng)日期2007年6月25日優(yōu)先權(quán)日2006年6月29日發(fā)明者A·G·波普爾韋爾,R·亞當(dāng)斯,S·E·拉佩基申請(qǐng)人:Ucb醫(yī)藥有限公司