專利名稱：：替奈普酶用于治療急性缺血性中風的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用溶栓劑治療中風的方法，更具體地，一種以特定的劑量給藥方案施用替奈普酶(tenecteplase)來治療急性缺血性中風(acuteischemicstroke)的方法。
背景技術(shù)：
：中風是對血管疾病所致急性腦損傷的通稱。它對社會造成了嚴重的問題，每年在美國有大約500，000人由于中風而死亡或變成永久殘疾。中風可以歸為兩大類出血性中風(正常血管漏出血液所致)和缺血性中風(供血不足所致腦缺血)；本申請關(guān)注后者。缺血性中風是工業(yè)化國家中所有死亡的大約三分之一的原因，而且是45歲以上成人嚴重的、長期的失能的主要原因。合乎道理的是，人們需要治療急性缺血性中風的藥物療法。中風及中風后發(fā)生的一連串事件的機制已經(jīng)得到了相當?shù)恼J識；對神經(jīng)元損傷和細胞死亡也有了更好的了解。缺血性中風的三種主要機制是血栓形成、栓塞和系統(tǒng)性灌注不足(伴有由此所致的缺血和低氧)。在這些中風類型的每一類中，由于對其供血不足而死亡的腦區(qū)域稱為梗死。腦動脈壁上建成的血栓所導(dǎo)致的腦動脈阻塞通稱為"腦血栓形成"。在腦栓塞中，阻塞腦動脈的閉塞物發(fā)生于循環(huán)的下游(例如，栓子被從心臟帶到腦動脈)。由于難以分辨中風是由于血栓形成或是栓塞造成的，使用術(shù)語"血栓栓塞，，來涵蓋這兩種中風類型。系統(tǒng)性灌注不足可作為血液乳酸水平升高、血細胞比容降低、血壓低、或心臟不能足夠泵出血液的結(jié)果而發(fā)生。當中風癥狀持續(xù)少于24小時且患者恢復(fù)完全時，稱患者經(jīng)歷了短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)。TIA癥狀為言語、視覺、感覺或運動的暫時削弱。因為TIA往往被認為是全面中風的前奏，所以將罹患過TIA的患者作為使用例如抗凝劑(如香豆素和肝素)或抗血小板劑(諸如阿司匹林(aspirin)和噻氯匹定(ticlopidine))的預(yù)防性中風療法的候選者。急性缺血性中風(AIS)是一種異質(zhì)的疾病過程；對病程、恢復(fù)、失能或死亡的預(yù)測是困難的。該病通常是急性血栓栓塞性動脈閉塞病灶導(dǎo)致的。急性缺血性中風中動脈閉塞病灶的位置是相對異質(zhì)的。溶栓劑，諸如重組組織纖溶酶原激活物(rtPA),已經(jīng)用于治療血栓栓塞性中風，其通過溶解導(dǎo)致缺血的血栓來發(fā)揮功能。事實上，靜脈內(nèi)rtPA(阿替普酶(alteplase)，ACTIVASE)是唯一已經(jīng)批準用于治療急性缺血性中風的藥物。靜脈內(nèi)rtPA(0.9mg/kg，最大90mg),其中以推注給予10%的劑量，繼以持續(xù)60分鐘的輸注，是缺血性中風發(fā)作3小時之內(nèi)的推薦治療方法。認為在急性中風之后如能盡可能早地施用這種藥物(Gross等，A^wmswge^,36:1172-1177(1995);Ingall等，及roA:e,35:2418-2424(2004);TheATLANTIS,ECASS,andNINDSrt-PAStudyGroupInvestigators,丄a"cef,363:768-774(2004)),對于恢復(fù)，至少部分恢復(fù)缺血區(qū)域中的腦血流和維持神經(jīng)元生活力是最有用的。然而，另外有證據(jù)表明在更晚的時間通過其它方法的施用是有效的，例如通過使用擴散加權(quán)和灌注MR成像技術(shù)和CT灌注技術(shù)(Tomsick,/Koc./wferv.i^^/o/.，15:S67陽S76(2004))。此外，對于不適合急性缺血性中風的靜脈內(nèi)治療的患者，單獨使用動脈內(nèi)組織纖溶酶原激活物(tPA)或尿激酶或聯(lián)合輔助氣嚢血管成形術(shù)/支架術(shù)進行的基于導(dǎo)管的治療已獲得成功(Ramee等，泣rafe，35:el09-e111(2004))。還有人提出了缺血性中風患者中的靜脈內(nèi)和動脈內(nèi)tPA聯(lián)合再通方法(TheIMSStudyInvestigators,&油，35:904-912(2004》。溶栓，即在缺血性中風中癥狀發(fā)作數(shù)小時內(nèi)用tPA溶解腦動脈血塊，自1996年起已獲準用于治療急性缺血性中風。另外兩種藥劑，即尿激酶原(直接動脈內(nèi)施用到M1或M2動脈血栓中)和靜脈內(nèi)安克洛酶(ancrod)(—種源自馬來半島頰窩毒蛇(pitviper)毒液的降血纖蛋白原劑)，已經(jīng)顯示了治療效益，將來可能用于急性缺血性中風療法。還有人考察了在家兔栓塞性中風模型中使用抗ICAM-l抗體繼以tPA溶栓的效果(Bowes等，A^wra/.,119:215-219(1993))。雖然tPA(缺血后30分鐘)和抗ICAM-1抗體(缺血后5分鐘)各自單獨地相對于對照改善了神經(jīng)學結(jié)果，但是同時施用這兩種化合物的組合并不比單獨施用任一種化合物更有效。當推遲到栓塞后3小時溶栓時，tPA或所述組合均未能降低神經(jīng)學損傷。在家兔中進行的實驗也顯示，tPA(缺血后30分鐘)和一種抗CD18抗體(缺血后5分鐘)各自單獨地改善了神經(jīng)學結(jié)果，盡管同時施用這兩種化合物的組合并不比單獨施用任一種化合物更有效(Bowes等，A^wra/ogy,45:815-819(1995))?？笽CAM-1抗體(缺血后15分鐘)和tPA(缺血后2小時)的組合延長了tPA保持有效的缺血后持續(xù)時間。也就是說，該組合有效地將tPA的治療窗擴展到了tPA在家兔中單獨施用時的有效治療窗以外。在使用tPA和糖蛋白1IB/IIIA受體抑制劑的大鼠中也觀察到了該效果(Li等，Ocw/如'o",107:2837-2843(2003))。美國專利公布2002/0081294和US2004/0057951>開了共施用溶^r化合物和抗CD18抗體來增加哺乳動物諸如人類中梗死相關(guān)動脈中的血流(例如，冠狀動脈堵塞的哺乳動物中的急性心肌梗死(AMI)或腦動脈阻塞導(dǎo)致的局灶性缺血性中風)。美國專利6,541，452公開了一種腦相關(guān)的tPA抑制劑及其治療中風的用途。美國專利公布2004/0176347^^開了一種用于治療腦缺血性疾病的藥物組合物，其包含星形膠質(zhì)細胞功能改善劑和溶栓劑，優(yōu)選tPA,作為活性成分。替奈普酶(TNK，TNKASE,Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,CA)是一種被克隆并表達于中華倉鼠卵巢細胞中的人tPA基因工程變體(Keyt等,A^/.」cad"6^，91:3670-3674(1994))。另見Verstraete，Jw.JMed,109:52-58(2000)關(guān)于第三代溶栓藥的一般概述。替奈普酶在美國已經(jīng)獲準用于對AMI患者的單次-推注(single-bolus)施用，并且已經(jīng)對其進行工程改造以具有與阿替普酶相比更高的纖維蛋白特異性和更長的半衰期。在ASSENT-2雙盲隨機化試驗中，在急性心肌梗死中比較單次推注的替奈普酶和前線載荷的(front-loaded)阿替普酶時，替奈普酶和阿替普酶的30曰死亡率相當。替奈普酶施用的方{更性可能有助于加快醫(yī)院內(nèi)外的治療(VandeWerf等，丄朋c",354:716-722(1999))。這項ASSENT-2研究的結(jié)果表明，接受替奈普酶處理的75歲以上女性患者的總中風率和30日死亡率低于接受阿替普酶處理的患者，盡管差異在統(tǒng)計學上不顯著。作者們得出結(jié)論，女性患者和75歲以上患者可能會更多地受益f依照根據(jù)體重調(diào)整的劑量給藥方案給予的溶栓劑，例如替奈普酶(Vermeer,777ram6a^i^^arc/,103(S1):S101-S104September302001)?？赡茉谥委烝MI中有用的其它溶栓藥包括鏈激酶、尿激7酶、P可尼普酶(anistreplase)、阿替普酶、沙,普酶(samplase)、瑞替普酶(reteplase)、拉諾替普酶(lanoteplase)、葡激酶(staphylokinase)、蟲它毒溶栓酶(fibrolase)、尿激酶原(prourokinase)、和吸血蝙蝠纖溶酶原激活物(Iqbal,C"m'ca/aw/772raw6ow'1s///ewostos/1s，6/1:1-13(2000》。替奈普酶的隨"i方數(shù)據(jù)表明，其顯示與阿替普酶相似的總體功效和耐受i普，一年隨訪之后的死亡率相當。就ASSENT-2中接受晚期治療的患者的死亡率降低和非腦出血并發(fā)癥的發(fā)生率降低而言，替奈普酶相比于阿替普酶明顯具有優(yōu)勢(Dunn和Goa，JwJC"WomsrZVwgj,1(1):51-66(2001))。綜述Callahan等，//eaWDrag,1/5:281-2卯(2001)稱，r-PA和替奈普酶作為推注療法給予時均能有效治療AMI,這個特征可能有助于更早地啟動治療并降低治療費用。后來的一項研究發(fā)現(xiàn)，溶栓藥(瑞替普酶、替奈普酶、阿替普酶和鏈激酶)似乎具有相似的降低死亡率功效，而且GUSTO-I中加速的阿替普酶的表觀效益與此一致(Dundar等，0/Af,96:103-113(2003))。在一項名為ASSENT-3PLUS的試驗中發(fā)現(xiàn)，在院前設(shè)置中(prehospitalsetting)替奈普酶與低分子量肝素依諾肝素(enoxaparin,ENOX)或未分級的肝素聯(lián)合有效治療AMI。替奈普酶與ENOX的聯(lián)合減少早期缺血事件，但需要在高齡患者中測試更低的ENOX劑量(Wallentin等，Ocw/加'o",108:135-142(2003);美國專利7,084,118)。在在夾血性中風的治療中，Jonas等,^朋a/so/Ae7VewAcademySc/e"ce5，939:257-267(2001)公開了動物模型在評估神經(jīng)元保護劑的失敗和溶栓的成功中的預(yù)測價值。據(jù)稱在動物中風模型中具有神經(jīng)保護性的藥劑在人類試驗中均告失敗。已經(jīng)有報道稱溶栓在動物和人類的中風中是有益的。在動物中，神經(jīng)保護劑和溶栓劑對梗死大小的效果是時間依賴性的早期啟動治療的效果最好；而隨著首次治療時間延遲的增加，效益逐漸地-并且最終完全地-喪失。動物數(shù)據(jù)還顯示，總的來說，與溶栓劑相比，神經(jīng)保護劑的有益效果較弱，而且較快完全喪失。人類數(shù)據(jù)顯示，遭受失敗的神經(jīng)保護劑試驗的進入窗(entrywindow)遠遠超出了這些藥劑在動物測試中看到的(任何)成功的窗口。與此相反，人類溶栓試驗一致地將進入時間限制到這些藥劑已在動物中顯示有益效果的窗口中。在臨床中風試驗中，神經(jīng)保護劑未能產(chǎn)生效益，因為它們的最佳效果太弱，而且根據(jù)動物模型可以預(yù)見它們的使用時間已過晚。在早期最佳有效性窗口(earlywindowofoptimaleffectiveness)中臨床使用了在動物模型中效果強于神經(jīng)保護劑的溶栓療法，諸如替奈普酶和尿激酶，產(chǎn)生了有益結(jié)果。靜脈內(nèi)和動脈內(nèi)溶栓用于急性缺血性中風治療的領(lǐng)域正在快速發(fā)展。現(xiàn)代溶栓劑。已經(jīng)研究了將數(shù)種第三代溶栓劑中的兩種用于急性缺血性中風治療，包括替奈普酶和瑞替普酶。依靠結(jié)構(gòu)修飾，第三代溶栓劑的半衰期更長，對血栓基質(zhì)的穿透更多。第一個前瞻性人類臨床試驗評估了動脈內(nèi)瑞替普酶在16名不適合靜脈內(nèi)阿替普酶療法的缺血性中風患者中的安全性和功效。在88%的患者中，經(jīng)過治療后觀察到了接近完全或完全的再通。預(yù)計第三代溶栓劑的開發(fā)和利用將增加缺血性中風患者的再通率和臨床恢復(fù)率(Qureshi等,Crew/Qp/wb"/"ve^ga/Zowa/Z)n/取3(12):1729-1732(2002》。例如，孟替普酶(monteplase),—種經(jīng)過修飾的rtPA,在栓塞性中風大鼠模型中降低沖更死體積和出血性轉(zhuǎn)變(hemorrhagictransformation)(Muramatsu,A^wra/og/ca/ie"arc/2,24:311-316(2002))。其它此類第三代藥物包括拉諾替普酶、纖溶酶、或纖溶酶的截短形式(微纖溶酶(microplasmin))、帶有非溶栓性相關(guān)的神經(jīng)保護性治療活性的直接作用性溶栓劑、重組吸血蝠(desmodusrotundus)唾液纖溶酶原激活物(rDSPA)a-l、和突變型纖維蛋白活4匕的人纖;容酶原(BB10153;BritishBiotechInc.)。Lapchak，(9;/m'o"ow/"ve幼'g加'o加/Dn^y,11:1623-1632(2002)對于這些藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)領(lǐng)域估l了綜述。當前正在進行一項名為CLEAR中風研究的多中心、隨機化、雙盲順序劑量升級臨床試驗，以評估依替巴肽(eptifibatide)與低劑量rtPA聯(lián)合在三小時內(nèi)治療急性缺血性中風的安全性，依替巴肽是一種靜脈內(nèi)環(huán)狀七肽，其選擇性阻斷血小板糖蛋白1Ib/IIIa受體。已經(jīng)有人提出，替奈普酶在中風后可能具有神經(jīng)保護性，因為它比阿替普酶的纖維蛋白特異性更高、對PAI-1有抗性、且其生物學半衰期更長(18分鐘，相比于阿替普酶的10分鐘)，這些特征可能導(dǎo)致中風患者中的腦出血比阿替普酶更少。在2000-2003年間收治的88名急性缺血性中風患者中進行了一項替奈普酶初步研究，使用了四種替奈普酶劑量等級0.1、0.2、0.4和0.5mg/kg。前三種等級沒有癥狀性盧貞內(nèi)出血(ICH)。在0.5mg/kg，13名患者中的2名出現(xiàn)癥9狀性ICH，并且ICH隨劑量的增加而增加(8%-38%),其結(jié)果與早先急性缺血性中風試驗中的阿替普酶組相似。目前正在一項急性缺血性中風患者的隨機化、有對照、IIb期臨床研究中對替奈普酶進行測試，該項研究使用0.1mg/kg替奈普酶、0.4mg/kg替奈普酶和0.9mg/kgrtPA。在一項早先的動物研究中，在栓塞性中風和外周出血(peripheralbleeding)的家兔模型中比較了替奈普酶和阿替普酶的活性。阿替普酶的輸注或替奈普酶的推注施用導(dǎo)致了劑量依賴性的血塊溶解。以毫克每千克為基礎(chǔ)計，發(fā)現(xiàn)替奈普酶比阿替普酶的效力強一個數(shù)量級。與阿替普酶不同，替奈普酶在該模型中導(dǎo)致較少的系統(tǒng)性纖溶酶原激活和較少的出血性轉(zhuǎn)變。替奈普酶沒有延長模板出血時間(templatebleedingtimes)。作者稱通過結(jié)合提高的纖維蛋白特異性和降低的血漿清除，有可能產(chǎn)生一種比野生型tPA更方便、更強效的溶栓劑(替奈普酶)。據(jù)作者稱，出血性轉(zhuǎn)變的顯著減少可歸因于使用該分子所見的系統(tǒng)性纖溶酶原保持(Thomas等，25:2072-2078(1994))。在另一項動物研究中，在家兔栓塞性中風模型中比較了0.6mg/kg或1.5mg/kg劑量的替奈普酶與野生型tPA。野生型tPA和替奈普酶都在大多數(shù)受試者中引起了溶栓，并且彼此沒有區(qū)別。替奈普酶或tpA都沒有影響出血的大小。在一個栓塞性中風模型中替奈普酶顯示了與野生型tPA相似的再通率。tPA增加出血率，而與替奈普酶處理相關(guān)的出血與對照或tPA組相比沒有統(tǒng)計學上的差異。作者提出替奈普酶顯示了作為中風的替代性溶栓治療方法的前景，但他們未能證明與野生型tPA相比安全性有所改善(Chapman等，^rafe,32:748-52(2001))。更近期的人類研究表明與動物研究有許多相似之處，不但體現(xiàn)在缺血后事件的性質(zhì)，還體現(xiàn)在這些事件的時間過程(Callaway,CVre"A^wop/^nmco/ogv,2/3:277-294(2004))。在家兔中，栓塞性中風后六小時共施用NXY-059(100mg/kg)和替奈普酶(0.9mg/kg)能改善臨床評價得分(Lapchak等，五x/en.mewto/vVew廠o/ogv,188:279-285(Aug.2004);Comwe"/1~188:195-199(Aug.2004》。Wagner和Jauch,五xpen'mewto/膽ro/，，188(2):195-199(2004);C畫me"fo"~臉wra/.，188(2):279-85(2004)公開了溶栓劑諸如替奈普酶加上中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)保護療法諸如自由基清除劑NXY059和氮氧化物治療急性中風的窗口。Lapchak等，五jcpen'wwto/Afewra/ogv,185:154-159(2004)公開了替奈普酶和阿替普酶在家兔中小血塊栓塞性中風后的臨床評價分數(shù)的比較。利用家兔小血塊栓塞性中風模型(RSCEM)，對栓塞后l小時靜脈給藥的替奈普酶(0.1mg/kg-3.3mg/kg)和阿替普酶(0.9mg/kg-3.3mg/kg)進行劑量-效應(yīng)譜分析。在別的研究中，在栓塞后3(或6)小時施用替奈普酶(0.9mg/kg)或阿替普酶(3.3mg/kg)以確定這些溶栓劑的治療窗。這兩組研究都在栓塞后24小時進行了行為分析，以便確定能在50%的家兔中產(chǎn)生神經(jīng)學缺陷的有效中風劑量(P50)或血塊量(mg)。該研究表明替奈普酶具有較寬的治療性范圍，治療窗為至少3小時，并具有持續(xù)性的效果。此外，替奈普酶的安全性譜與阿替普酶的相似。替奈普酶對腦內(nèi)出血(ICH)率的增加不會高于阿替普酶所導(dǎo)致的增加。然而，阿替普酶的治療性范圍和窗口比替奈普酶更有限。這些臨床前研究提示，替奈普酶具有比阿替普酶更好的藥理學譜，并支持在中風患者的隨機化雙盲臨床試驗中對替奈普酶進行進一步研究。另參見Araujo等，5bc/e(y/orA^wwcz'e"ce爿6^n3cf/f/"en37"y尸/""wer,Volume:2003，Page:AbstractNo.102.2(2003)Conference:33rdAnnualMeetingoftheSocietyofNeurosdence,NewOrleans,LA,USA,November08-122003。需要提供一種用于改善急性缺血性中風中臨床結(jié)果的方法，諸如通過利用替奈普酶增加腦血流和/或P爭低梗死大小。發(fā)明概述因而，要求保護本發(fā)明。在一個方面中，本發(fā)明提供一種用于治療人類中急性缺血性中風的方法，包括以約0.05-0.5mg/kg的總劑量給人類施用替奈普酶，所述總劑量如下給予(a)約0.015-0.15mg/kg的初始推注劑量，繼以約50-90分鐘的時間段里量等于所述總劑量減去所述初始劑量的輸注；或者(b)純推注。方便的是，將替奈普酶以藥學上可接受的配制劑，諸如本文中更詳細說明的那些配制劑的形式來施用。優(yōu)選的是，總劑量為約0.2-0.3mg/kg，更優(yōu)選約0.25mg/kg。在該方法的一個實施方案中，總劑量以初始推注繼以輸注來給予。優(yōu)選地，初始劑量為約0.08-0.12mg/kg,更優(yōu)選約0.1mg/kg推注，并且/或者，輸注時間段為約55-70分鐘，更優(yōu)選約60分鐘。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，總劑量為約0.25mg/kg,以約0.1mg/kg的初始推注繼以約60分鐘里約0.15mg/kg的輸注來給予。在另一個特別優(yōu)選的實施方案中，在約60分鐘時間里給人類施用總劑量為約0.25mg/kg的替奈普酶，如下給予l分鐘里約0.1mg/kg的初始推注，繼以約60分鐘剩余時間(fortherestofabout60minutes)里約0.25mg/kg的輸注。在該方法的另一個實施方案中，總劑量以純推注給予。總劑量典型地為約0.05-約0.5mg/kg。在一個優(yōu)選的實施方案中，總劑量為約0.25mg/kg。優(yōu)選的是，在這兩種方法中，在自急性缺血性中風發(fā)作起約15分鐘到約20小時之間，更優(yōu)選約45分鐘到約6小時之間，仍更優(yōu)選自急性缺血性中風發(fā)作起至多不超過約3小時的時間對人類施用替奈普酶。在一個優(yōu)選的實施方案中，推注是靜脈內(nèi)推注，并且/或者，輸注是連續(xù)輸注。在這兩種方法的一個優(yōu)選實施方案中，它們進一步包括給人類施用有效量的第二藥物，其中第一藥物是替奈普酶。該第二藥物優(yōu)選是神經(jīng)保護劑、溶栓劑、糖蛋白IIbIIIa拮抗劑、或抗CD18抗體。該第二藥物可以在替奈普酶之前、之后或同時共施用給人類。這樣的第二藥物，例如，可以在缺血性中風發(fā)作后超過約3小時施用于哺乳動物(例如，自中風發(fā)作起約3-8小時內(nèi)，優(yōu)選約3-6小時內(nèi)至少一次)。在另一個方面，本發(fā)明提供一種試劑盒，包括裝有替奈普酶的容器；和關(guān)于使用替奈普酶來治療人類中急性缺血性中風的說明，其通過以約0.05-0.5mg/kg的總劑量給人類施用替奈普酶來實現(xiàn)，所述總劑量如下給予(a)約0.015-0.15mg/kg的初始推注劑量，繼以約50-90分鐘的時間段里量等于所述總劑量減去所述初始劑量的輸注，或者(b)推注。優(yōu)選的是，總劑量為約0.2-0.3mg/kg，更優(yōu)選約0.25mg/kg,初始推注為約0.08-0.12mg/kg。在所述試劑盒的一個實施方案中，總劑量以初始推注繼以輸注來給予。在一個優(yōu)選的實施方案中，總劑量為約0.25mg/kg,以約0.1mg/kg的初始推注繼以60分鐘里約0.15mg/kg的輸注來給予。在所述試劑盒的一個特別優(yōu)選的實施方案中，總劑量為約0.25mg/kg,以約0.1mg/kg的初始推注，繼以約60分鐘里約0.15mg/kg的輸注來給予。在所述試劑盒的另一個特別優(yōu)選的實施方案中，在約60分鐘里給予總劑量為約0.25mg/kg的替奈普酶，如下給予1分鐘里約O.lmg/kg的初始推注，繼以60分鐘剩余時間里約0.25mg/kg的輸注。在所述試劑盒的另一個實施方案中，總劑量以純推注給予。本申請中的試劑盒優(yōu)選進一步包括裝有第二藥物的容器，其中說明書包括聯(lián)合替奈普酶使用第二藥物來治療人類中缺血性中風的說明，其通過給人類施用有效量的第二藥物來實現(xiàn)。優(yōu)選的第二藥物是神經(jīng)保護劑、溶栓劑、糖蛋白libIIIa拮抗劑、或抗CD18抗體。附圖簡述圖l顯示以1分鐘里10%推注繼以l小時剩余時間里90。/。輸注給予0.9m/kg后，由模型預(yù)測的ACTIVASE⑧(阿替普酶)濃度中值。這些是一項1000名受試者的才莫擬(lOOO-subjectsimulation)的結(jié)果。人口統(tǒng)計狀況(demographics)是基于一項先期AIS中風研究的觀察結(jié)果。圖2顯示來自1000名受試者的模擬的模型預(yù)測藥動學(PK)譜(model-predictedpharmacokineticprofiles)，比專交了才莫型予貞測的阿替普酶(ACTIVASE⑧)濃度中值和來自一個0.25mg/kg推注-輸注方案的模型預(yù)測的替奈普酶(TNK)中值、第5和第95百分位的濃度。該模擬是基于以l分鐘里的0.1mg/kg推注、l小時剩余時間里的0.15mg/kg施用的0.25mg/kgTNKase。TNK第5百分位是圖上最下方的(實)線，TNK中值是與ACTIVASE中值線接近的點線，而TNK第95百分位是最上方的虛線。所述模型預(yù)測的阿替普酶濃度中值是基于以10%推注、l小時剩余時間里90。/。給予的0.9mg/kg(90mg/kg最大)(ACTIVASE中值是達到平臺然后在60分鐘后下降的那條實線)。圖3顯示來自1000名受試者的模擬的模型預(yù)測PKi普，比較了一個推注-輸注方案的模型預(yù)測的阿替普酶(ACTIVASE)濃度中值和來自一個0.25mg/kg純推注的方案的模型預(yù)測的替奈普酶(TNK)中值、第5百分位和第95百分位濃度。TNK第5百分位是圖上最下方的(實)線，TNK中值是ACTIVASE中值線上方的點線，而TNK第95百分位是最上方的虛線。所述模型預(yù)測的阿替普酶濃度中值是基于以10%推注、1小時剩余時間里90%給予的0.9mg/kg(90mg/kg最大)(ACTIVASE中值是達到平臺然后在60分鐘后下降的那條實線)。優(yōu)選實施方案的詳述A.定義"中風，，在本申請中定義為中斷(disrupt)向腦部供血至少24小時的腦血管意外(CVA)導(dǎo)致的神經(jīng)學缺陷(neurologicdeficit)。中風可以采取不同的形式，包括出血性中風和缺血性中風，它們各自還可以進一步細分。因此，例如，出血性中風可能以具有ICH或蟲朱網(wǎng)膜下腔出血(SAH)的神經(jīng)學缺陷的突然發(fā)生為特征，而缺血性中風的亞型包括空洞性(lacunar)、血栓栓塞性(thromboembolic)和心栓塞性(cardioembolic)中風。術(shù)語"中風"在本申請中使用最廣義，包括所有形式的中風，無論是否在本申請中具體列出。"短暫性腦缺血發(fā)作，，或"TIA，，在本申請中定義為向腦部供血的暫時中斷，其在24小時內(nèi)完全消解，通常持續(xù)數(shù)分鐘到l小時。"急性缺血性中風"在本申請中定義為由血栓栓塞所引起的腦功能局部或全面擾亂的急性發(fā)生，其持續(xù)超過24小時或者導(dǎo)致死亡。急性局灶性缺血性中風是指由于對腦區(qū)域的供血中斷而導(dǎo)致的腦損傷。本申請關(guān)注的急性缺血性中風通常是由任何一條或多條動脈的堵塞所引起的，所述動脈包括大腦主動脈(maincerebralarteries)(例如大腦中動月永、大腦前動脈、大腦后動脈、頸內(nèi)動3永、推動脈或基底動脈)，以及次級動脈或小動脈。"動脈堵塞"(arterialobstruction)通常是阻塞初級和次級動脈或小動脈的單個栓塞或血栓或者多個血塊顆粒。術(shù)語"腦室內(nèi)出血"或"IVH"用于指腦室內(nèi)部或周圍的出血。IVH通常分為四級第l級出血發(fā)生在腦室的小區(qū)域中；第2級出血還發(fā)生在腦室內(nèi)部；第3級腦室^皮血液擴大；第4級出血延伸到腦室周圍的腦組織。"增加腦血流或減少梗死大小，，意思是通過誘導(dǎo)被處理哺乳動物的腦血流相對于未受處理的哺乳動物發(fā)生統(tǒng)計學或生理學上顯著的增加和/或被處理哺乳動物的梗死大小相對于未受處理的哺乳動物發(fā)生統(tǒng)計學或生理學上顯著的減少，來改善臨床結(jié)果的行為，其中所述增加或減少是例如使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)，諸如血管成像來加以測定的。優(yōu)選的是，施用拮抗劑后2-4小時測定的腦血流相對于未受處理的哺乳動物增加至少30%,優(yōu)選至少50%。理想的是，施用拮抗劑后48小時測量的梗死大小比未處理的哺乳動物少20%，優(yōu)選少50%。"梗死"是指由于血栓或栓塞阻塞局部循環(huán)所致的組織或器官(例如心或腦)的壞死區(qū)域。梗死大小可以通過已知方法來測量。"梗死相關(guān)動脈"是這樣的動脈，當其被血栓或栓塞至少部分阻斷時，導(dǎo)致組織或器官(例如心或腦)中產(chǎn)生梗死。14"治療"或"處理"指治療性處理和預(yù)防性或防范性措施二者。需要治療者包括已經(jīng)患有病癥者，也包括要預(yù)防病癥者。本申請中優(yōu)選的是已經(jīng)被診斷為患有中風，特別是急性缺血性中風的個體的治療。如本申請中使用的，術(shù)語"替奈普酶，，，又稱TNK-tPA或"TNKASE"牌組織型纖溶酶原激活物變體，是指一種tPA變體，標稱為T103N、N117Q、K296A、H297A、R298A、R299AtPA，可獲自Genentech公司(SouthSanFranciscoCA)，其中野生型tPA的Thrl03被改變?yōu)锳sn(T103N),野生型tPA的Asnll7被改變?yōu)镚ln(N117Q),野生型tPA的Lys-His-Arg-Arg(SEQIDNO:l)296-299被改變?yōu)锳la-Ala-Ala畫Ala(SEQIDNO:2)(KHRR296-299AAAA)。參見本申請的背景部分和美國專利5,612,029。"包裝插頁，，用來指通常包含在治療產(chǎn)品的商品包裝中的說明書，它含有關(guān)于下列內(nèi)容的信息適應(yīng)證、用法、劑量、施藥、禁忌證、與包裝產(chǎn)品聯(lián)用的其它治療產(chǎn)品、和/或有關(guān)此類治療產(chǎn)品的使用的警告等等。"藥物"(medicament)是用于治療中風或其癥狀或副作用的活性藥。"第二藥物，，(secondmedicament)是可以添加來幫助第一藥物即替奈普酶來治療中風的藥物。此類第二藥物的實例包括但不限于阿司匹林，細胞間粘附分子(ICAM)-1和LFA-1拮抗劑包括抗體如恩莫單抗(enlimomab)(—種抗ICAM-1單克隆抗體)，和抗CD18及抗CDlla抗體，人抗白細胞抗體如Hu23F2G，糖蛋白IIbIIIa拮抗劑如依替巴肽(eptifibatide)(INTEGRELIN)(一種選擇性阻斷血小板糖蛋白IIb/IIIa受體的靜脈內(nèi)環(huán)狀七肽)，直接凝血酶抑制劑，外部或局部超聲，機械性血塊回收或inaceration，纖維蛋白分解劑、神經(jīng)元損傷愈合劑如堿性成纖維細胞生長因子(例如FIBLAS丁TM),神經(jīng)保護劑如胞磷膽堿(citicoline)、鎂、纟內(nèi)美芬(nalmefene)、地佐環(huán)平(dizocilpine)、尼莫地平(nimodipine)、拉莫三口秦(lamotrigine)、西帕曲近(sipatrigine)、,貝魯峻(lubeluzole)、美西4聿(mexiletine)、氯美。塞峻(clomethiazole)、鈣和鈉通道阻斷劑、(3-氨基-3-羥基-5-甲基異a惡唑-4-丙酸拮抗劑、血清素激動劑、跨膜鉀通道調(diào)控劑、抑制星形膠質(zhì)細胞活化的藥劑(例如ON02506)、抗氧化劑(例如MCI-186)、抗粘附單克隆抗體和抑制血小板聚集的拮抗劑和抗體如阿加曲班(argatroban)和阿昔單抗(abciximab)(REOPROTM)、苯妥英(phenytoin)、氮氧化物、CNS保護性療法、自由基清除劑如替拉扎特(tirilazad)、反應(yīng)性氧代謝物、和抗氧化劑，和除替奈普酶之外15的其它溶栓劑，如下文定義的，諸如例如?；w溶酶原-鏈激酶激活物復(fù)合體(APSAC)、單鏈尿激酶-纖溶酶原激活物(scu-PA)、來自蛇毒的凝血酶樣酶(thrombin-likeenzymes)如安克洛酶(ancrod)(優(yōu)選為靜脈內(nèi)，一種衍生自馬來半島頰窩毒蛇毒液的降纖溶酶原劑)、鏈激酶(例如SAKSTARTM)、尿激酶、阿尼普酶、阿替普酶、沙蘆普酶、瑞替普酶、拉諾替普酶(SUN-9216;GeneticsInstituteInc.)、纖溶酶、截短形式的纖溶酶(微纖溶酶；ThromboGenicsLtd)、帶有非溶栓相關(guān)的神經(jīng)保護性活性的直接作用性溶栓劑，重組吸血蝠(desmodusrotundus)唾液纖溶酶原激活物(rDSPA)a-l(Schering/TeijinPharmaceuticals)、突變型纖維蛋白活化的人纖溶酶原(BB10153;BritishBiotechInc.)、葡萄球菌激酶、蛇毒溶栓酶(fibrolase)、尿激酶原(動脈內(nèi)直接施用到M1或M2動脈血栓中)、孟替普酶(經(jīng)過修飾的rtPA)、帕米普酶(pamiteplase)、替來激酶(tisokinase)、和吸血蝙蝠纖溶酶原激活物、星形膠質(zhì)細胞功能改善劑如US2004/0176347中公開的，自i走捕獲劑如NXY-059(cerovive)、氯吡格雷(clopidogrel)、n-曱基-右旋-天冬氨酸受體阻斷劑、鎮(zhèn)痙藥、胱天蛋白酶3抑制劑、((叔丁亞氨基)曱基)-l，3-(苯二磺酸二鈉-n-氧化物)、依布硒(ebselen)、谷胱甘肽過氧化物酶、去曱安替比林(norphenazone)、羅維玉朱單抗(rovelizumab)、乳月包素卩-內(nèi)酉旨(lactacystinbeta-lactone)、tsukubaenolide、4—月舞醜甲基2-口底口定酸(4phosphonomethylpipecolicacid)、依利羅；也(eliprodil)、針對神經(jīng)節(jié)芬脂GM1的抗體，和任何上述藥物的生物學活性變體、鹽和衍生物。"溶栓劑，，是破碎和/或溶解血栓的分子。示例性的溶栓劑包括鏈激酶、?；w溶酶原-鏈激酶激活物復(fù)合體(APSAC)、尿激酶、單鏈尿激酶-纖溶酶原激活物(scu-PA)、來自蛇毒的凝血酶樣酶如安克洛酶(Bell,W."Defibrinogenatingenzymes"于Colman等,(纟扁)//ewo^os7'51T7^om6os^Lippincott，Philadelphia(1987)p.886)、tPA、和上述每種藥物的生物學活性變體。本發(fā)明可用的合適溶栓劑在例如美國專利5，770,425;5，770，426;5,612,029;5,520,911;5,736,134;5,728,567;5,714,145;5,840,564;5,616,486;5,411,871;5,520,913;5,262,170;和5,108，901中有公開。"共施用"在本申請中使用時，意思是在單獨施用的替奈普酶的有效治療窗中施用第二藥物。如此，第二藥物可以在替奈普酶之前、同時或之后施用。根據(jù)第二藥物的類型，第二藥物諸如抗CD18抗體的施用優(yōu)選在替奈普酶施用開始的約1小時前乃至即將開始施用替奈普酶之前(1-15分鐘之前)開始，更優(yōu)選與替奈普酶的施用同時開始。共施用還涵蓋在開始施用替奈普酶之后施用第二藥物，例如約15-30分鐘之后乃至約3小時之后。共施用包括以單個配制劑的形式施用，其中兩種藥物可以是但并非必須是物理上彼此分開的。單獨施用替奈普酶的"有效治療窗"意思是動脈阻塞導(dǎo)致梗死之后的這樣一個時間段或者時間窗(timewindow)，在此期間單獨施用替奈普酶時，相對于未^l妻受該替奈普酶的對照，有效地恢復(fù)所述動脈中血流的通暢(patency)。對于替奈普酶而言，有效治療窗是物種依賴性的，但利用標準測試法評估替奈普酶相對于對照的效力可以容易地加以確定。術(shù)語"抗CD18抗體，，在本申請中使用時，是指結(jié)合CD18(優(yōu)選人CD18)并抑制或?qū)嵸|(zhì)性降低CD18的生物學活性的抗體。通常，所述抗體將阻斷(部分地或完全地)在其細胞表面表達CD18亞基的細胞(例如嗜中性粒細胞)結(jié)合內(nèi)皮的能力?？笴D18抗體的例子包括MHM23(Hildreth等(1983));M18/2(IgG2a;Sanches-Madrid等，￡w//wmw"o/.,13(3):202-208(1983));H52(美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)保藏物HB10160);Masl91c和IOT18(VermotDesroches等，5"cam/.乂/柳mM"o/"33(3):277-286(1991));和NA-8(WO94/12214)。優(yōu)選的抗體是結(jié)合MHM23或H52所結(jié)合的CD18表位的抗體。優(yōu)選的是，所述抗體對CD18多肽有高度親和力。在優(yōu)選的實施方案中，所述抗體對CD18抗原的親和力為大約4nM或更少。更優(yōu)選的是，所述親和力是大約3nM或更少，最優(yōu)選大約lnM或更少。在某些實施方案中，所述抗體可結(jié)合CD18胞外結(jié)構(gòu)域中與CDllb締合的區(qū)域，而且該抗體也可以解離a鏈和(3鏈(例如，該抗體可以解離CDllb和CD18復(fù)合物，正如MHM23抗體那樣)。II.實施本發(fā)明的模式除了早期介入外，溶栓劑諸如替奈普酶治療中風的結(jié)果，以及治療后中風患者的存活和恢復(fù)，與溶栓療法的施用方式密切關(guān)聯(lián)。本發(fā)明提供了一種改良的替奈普酶治療中風特別是急性缺血性中風的規(guī)程。本發(fā)明的治療規(guī)程和劑量給藥方案所導(dǎo)致的藥動學譜提供最大的功效和安全性，如此反映了中風溶栓療法中的一個顯著進步。在一個方面中，本發(fā)明提供一種用于治療人類中急性缺血性中風的方法，包括以約0.05-0.15mg/kg(優(yōu)選約0.2-0.3mg/kg,更優(yōu)選約0.25mg/kg)的總劑量給人類施用替奈普酶，所述總劑量如下給予約0.015-0.15mg/kg推注(優(yōu)選約0.08-0.12mg/kg推注，更優(yōu)選約0.1mg/kg推注)的初始劑量，繼以約50-90分鐘，更優(yōu)選約55-70分鐘，最優(yōu)選約60分鐘的時間段里總計約0.05-0.5mg/kg(優(yōu)選約0.2-0.3mg/kg，更優(yōu)選約0.25mg/kg)的剩余量的輸注。例如，如果總劑量為約0.25mg/kg替奈普酶，那么初始推注劑量優(yōu)選為約0.1mg/kg,后續(xù)輸注為約0.15mg/kg?；谀壳暗膶嶒灒@是最優(yōu)選的方案，其中后續(xù)輸注在約60分鐘里給予。然而，應(yīng)當注意，最優(yōu)選的劑量給藥方案可以在規(guī)定的劑量給藥范圍內(nèi)有所變化，這取決于多種因素，包括中風的具體類型和程度、患者的狀況、中風發(fā)作后經(jīng)過的時間、等等。替奈普酶的輸注可以在推注劑量完成后立即進行，或者可以與推注劑量的完成相隔多至約30分鐘，但優(yōu)選的是在推注劑量完成后立即啟動輸注。優(yōu)選的是，推注注射是靜脈內(nèi)注射，但其可以通過其它方式注射，諸如動脈內(nèi)注射。優(yōu)選的是，輸注為經(jīng)過靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)或鞘內(nèi)途徑連續(xù)進行，但優(yōu)選的輸注為靜脈內(nèi)輸注。在一個備選的方面中，通過以完全作為推注劑量的方式給予約0.05-0.15mg/kg，優(yōu)選約0.2-0.3mg/kg，更優(yōu)選約0.25mg/kg的總劑量的替奈普酶來治療急性缺血性中風。優(yōu)選的是，所述推注為靜脈內(nèi)推注。中風是一種嚴重的疾患，是美國第三位的致死原因。由于存活和恢復(fù)程度是診斷和介入時間的函數(shù)，在本發(fā)明的方法中，一旦急性缺血性中風疾患得到診斷或者神經(jīng)學檢查的急性缺陷提示急性缺血性中風疾患，則將盡可能快地給患者施用替奈普酶。急性缺血性中風的初始臨床表現(xiàn)典型地包括下列的一項或多項(l)意識改變，諸如木僵或昏迷、意識錯亂或精神激動、記憶喪失、癲癇發(fā)作(seizures)和/或譫妄；(2)劇烈或異常嚴重的頭痛，伴隨意識水平下降/神經(jīng)學缺陷，和/或包括反常/嚴重的頸部或面部疼痛；(3)失語(語無倫次或言語理解困難)；(4)面神經(jīng)無力或面部不對稱；(5)—肢或多肢動作失調(diào)、虛弱、麻痹或感覺喪失；(6)共濟失調(diào)(平衡不良、笨拙或行走困難)；C7)視力喪失；和(8)強烈眩暈、復(fù)視、單側(cè)聽力喪失、惡心、嘔吐和/或畏光。上述一種或多種表現(xiàn)的存在可以是急性缺血性中風的初始征候，可以進行追蹤鑒別診斷和神經(jīng)學檢查來加以核實。急性缺血性中風診斷可以使用神經(jīng)學檢查，以及任選的，神經(jīng)影像技術(shù)諸如計算機體層攝影術(shù)(包括非對比(non-contrast)CT和灌注CT)和核磁共振成像(MRI)(包括擴散加權(quán)成像(diffiisionweightedimaging,DWI)和灌注成像(PI));血管影像(例如雙重掃描(duplexscanning)和經(jīng)顱多普勒超聲和激光多普勒)；和血管造影術(shù)(例如計算機化數(shù)字減影血管造影術(shù)(DSA)和MR血管造影術(shù))，以及其它侵入性或非侵入性技術(shù)。有數(shù)種可用于評估中風嚴重性的標準。包括Barthel指數(shù)(Mahoney和Barthel,Mar7/aw/Me&ca/JowmaZ，14:56-61(1965)),改良的Rankin標準(Rankin,Sco/.MW2:200-215(1957);vanSwieten等,及rafe，19:604-607(1988);Duncan等，5yrafe,31:1429-1438(2000)),Glasgow結(jié)果標準(Jennett和Bond,1(7905):480-4(1975);Teasdale,/臉wra.臉wraswrg.尸syc/n'a—,41:603-610(1978);Jennett等，丄a"cd，1:480-484(1995》，和美國國立衛(wèi)生研究院中風標準(NIHSS)(Brott等，5Vrafe,20:864-870(1989))。本發(fā)明的方法適合用于治療所有嚴重層次的急性缺血性中風。優(yōu)選的是，從緊隨中風發(fā)作之后到中風發(fā)作之后約24小時的任何時刻，以本申請所述的劑量和劑量給藥方案使用替奈普酶至少一次。在某些實施方案中，對患者首次施用替奈普酶是在自中風發(fā)作起約15分鐘(或者約30或45分鐘)至約20小時(更優(yōu)選約10小時，或約6小時，或3小時，或約90分鐘，或約60分鐘)。在一個特定的實施方案中，對于在與急性缺血性中風符合的體征和癥狀發(fā)作后3小時之內(nèi)就醫(yī)的患者，依照本發(fā)明用替奈普酶進行溶栓療法。在本申請的方法中，可以與替奈普酶一起給患者施用有效量的第二藥物(此處替奈普酶是第一藥物)。所述第二藥物可以是一種或多種藥物，并可包括例如上文列舉的那些。優(yōu)選的此類藥物包括神經(jīng)保護劑、鎮(zhèn)痙藥、自旋捕捉劑、細胞間粘附分子(ICAM)-l和LFA-l拮抗劑諸如抗CDlla和抗CD18抗體、糖蛋白nbllla拮抗劑、神經(jīng)元損傷愈合劑、抑制血小板聚集和粘附的抗體、以及人抗白細胞抗體，或除替奈普酶之外的溶栓劑。更優(yōu)選的是神經(jīng)保護劑、其它溶栓劑、糖蛋白libIIIa拮抗劑和抗CD18抗體。這些第二藥物一般使用與此前使用的相同的劑量和施用途徑，或者使用此前使用劑量的約1-99%。如果確實使用此類第二藥物，優(yōu)選的是，第二藥物的用量低于若不存在替奈普酶時的用量，在替奈普酶初始劑量給藥之后的后續(xù)劑量給藥中尤為如此，以消除或減少其導(dǎo)致的副作用。在與替奈普酶推注劑量給藥一起施用有效量的第二藥物時，第二藥物可以與任何次數(shù)的所述劑量給藥一起施用。例如，可以只與一次所述劑量給藥一起施用，或者與多于一次的所述劑量給藥一起施用。在一個實施方案中，第二藥物與初始推注劑量給藥一起施用。在另一個實施方案中，第二藥物與第一次和第二次劑量給藥一起施用。在又一個實施方案中，第二藥物與所有替奈普酶劑量給藥一起施用。聯(lián)合施用包括共施用(同時施用)，使用不同的配制劑或單個藥物配制劑；和以任意次序的序貫施用，其中優(yōu)選存在所有活性藥劑同時發(fā)揮其生物學活性的時間段。優(yōu)選的是，在初始暴露后，降低或消除所述藥劑的量，以減少受試者對有副作用的藥劑諸如潑尼松(prednisone)和環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)的暴露。此外，可以與替奈普酶一起使用INTERCOOLTm裝置等裝置和/或在33。C或類似溫度^f吏用外加冰來治療中風。如下制備替奈普酶的治療用配制劑，即將具有期望純度的替奈普酶與任選的生理學可接受載體、賦形劑或穩(wěn)定劑混合，以凍干配制劑或水溶液的形式供貯存(《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第16版，Osol,A.編，1980)?？山邮艿妮d體、賦形劑或穩(wěn)定劑在所采用的劑量和濃度對接受者是無毒的，而且包括緩沖劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(少于約10個殘基)多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清清蛋白、明膠或免疫球蛋白；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、海藻糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA;糖醇，諸如甘露醇或山梨醇；成鹽相反離子，諸如鈉；和/或非離子表面活性劑，諸如tweentm、PLURONICStm或PEG?；钚猿煞诌€可包載于例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠嚢中(例如分別是羥曱基纖維素或明膠微膠嚢和聚(曱基丙烯酸曱酯)微膠嚢)、在膠狀藥物傳遞系統(tǒng)中(例如脂質(zhì)體、清蛋白微球體、微乳劑、納米顆粒和納米膠嚢)、或在粗滴乳狀液中。此類技術(shù)公開于例如《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第16版，Osol,A.編，1980。20用于體內(nèi)施用的配制劑必須是無菌的。這可容易的通過在凍干和重建之前或之后使用無菌濾膜過濾來實現(xiàn)?？墒褂贸掷m(xù)釋放制劑。持續(xù)釋放制劑的合適例子包括含有替奈普酶的固體疏水性聚合物半透性基質(zhì)，該基質(zhì)以定型產(chǎn)品的形式存在，如薄膜或4敖膠嚢。持續(xù)釋放基質(zhì)的例子包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸西旨)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利3，773,919)、L-谷氨酸和Y-乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物諸如LUPRONDEPOT(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林構(gòu)成的可注射微球體)及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。雖然諸如乙烯-乙酸乙烯和乳酸-乙醇酸等聚合物能夠持續(xù)釋放分子100天以上，但是某些水凝膠釋放蛋白質(zhì)的時間較短。當封裝的抗體在體內(nèi)長時間維持時，它們可能由于暴露于37。C的潮濕環(huán)境而變性或聚集，導(dǎo)致生物學活性損失和免疫原性可能改變?？筛鶕?jù)相關(guān)機制來設(shè)計合理的穩(wěn)定化策略。例如，如果發(fā)現(xiàn)聚集機制是經(jīng)由硫-二硫化物互換而形成分子間S-S鍵，那么可通過修飾巰基、由酸性溶液凍干、控制含水量、采用適宜添加劑和開發(fā)特定的聚合物基質(zhì)組合物來實現(xiàn)穩(wěn)定化。持續(xù)釋放的替奈普酶組合物還包括脂質(zhì)體封裝的替奈普酶。含有替奈普酶的脂質(zhì)體是通過本領(lǐng)域已知的方法制備的，諸如Epstein等，尸rac.Ato/.」cadScz'."5^4,82:3688(1985);Hwang等，尸rac.A^/.」cad5W.L/iSL4，77:4030(1980);和美國專利4,485，045及4，544,545中描述的。一般而言，所述脂質(zhì)體是小(約200-800埃)單層類型，其中脂質(zhì)含量大于約30mol.。/。膽固醇，并對所選的比例進行調(diào)整以實現(xiàn)最優(yōu)的替奈普酶療法。美國專利5,013,556公開了具有延長的循環(huán)時間的脂質(zhì)體。替奈普酶要使用的確切總劑量、多少通過推注施用而多少通過輸注施用、或者是否僅使用推注將取決于例如下列因素待治療的中風的確切性質(zhì)、中風的嚴重程度和病程、施用替奈普酶是為了預(yù)防目的還是治療目的、先前的療法、患者的臨床史及對替奈普酶的響應(yīng)、及主治醫(yī)師的裁量。該療法的進程可通過本申請詳細說明的常規(guī)技術(shù)和測定法來容易地加以監(jiān)測。在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供裝有可用于改善中風臨床結(jié)果的材料的制品和試劑盒。所述制品包括帶有標簽的容器。合適的容器包括例如瓶子、小管和試管。容器可以用多種材料諸如玻璃或塑料制成。容器裝有對治療本申請定義的中風有效的組合物，并可以具有無菌存取口(例如容器可以21是具有皮下注射針頭可刺穿的塞子的靜脈內(nèi)溶液袋或小管)。組合物中的活性劑是替奈普酶。容器上的標簽指示該組合物用于如上所述治療中風，還可說明體內(nèi)用途諸如上文所述的那些用途的指導(dǎo)。具體地，在一個實施方案中，所述試劑盒包括裝有替奈普酶的容器，和關(guān)于使用替奈普酶來治療人類中急性缺血性中風的說明，其通過以約0.05-0.5mg/kg的總劑量給人類施用替奈普酶來實現(xiàn)，所述總劑量如下給予(a)約0.015-0.15mg/kg的初始推注劑量，繼以約50-90分鐘的時間段里量等于所述總劑量減去所述初始劑量的輸注；或者(b)推注。優(yōu)選的是，總劑量為約0.2-0.3mg/kg,更優(yōu)選約0.25mg/kg,而選項(a)下的初始劑量為約0.08-0.12mg/kg,更優(yōu)選約0.1mg/kg。在所述試劑盒的一個實施方案中，總劑量以初始推注繼以輸注來給予。在一個優(yōu)選的實施方案中，總劑量為約0.25mg/kg,以約0.1mg/kg的初始推注，繼以約60分鐘里約O.15mg/kg的輸注給予。在所述試劑盒的另一個實施方案中，總劑量以推注給予。這些試劑盒任選地還包括裝有第二藥物的容器，其中說明書包括聯(lián)合替奈普酶使用所述第二藥物來治療人類中缺血性中風的說明，其通過給人類施用有效量的所述第二藥物來實現(xiàn)。示例性的第二藥物和優(yōu)選的第二藥物在上文已指明。本發(fā)明的試劑盒還可包括另一容器，其裝有藥學可接受的緩沖劑，諸如磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏溶液和右旋糖溶液。其還可以包括從商業(yè)和用戶立場上看需要的其它器材，包括其它緩沖劑、稀釋劑、濾器、針頭、注射器及記載了使用說明的包裝插頁。下面的實施例系為說明目的而非作為限制而提供。在此通過援引方式并入本說明書中所有引用文獻的公開內(nèi)容。實施例用于治療急性缺血性中風的替奈普酶劑量給藥方案的確定通過進行PK建模，建立了一套改善替奈普酶治療AIS的安全性和功效的劑量給藥方案。已經(jīng)證明，對于ACTIVASE⑧(阿替普酶)(Gulba等《/^m,Co〃.Carafo/.,30〃:1611-1617(1997);Tanswell等，乂」肌Cb〃.Carafe/.,19/5:1071-1075(1992))和TNKase(替奈普酶)(Wang-Clow等，爿w.//ea"7:,141/1:33-40(2001);Tanswell等，C7/".尸/wrmacoh'"^，41/15:1229-45(2002))而言，溶栓劑的功效結(jié)果都與劑量和濃度相關(guān)。該觀察結(jié)果提示，利用基于PK的方法進行溶栓劑的劑量選擇會是適當?shù)?。此外，對一項家兔體內(nèi)PK和藥效學(PD)研究的PK分析提示，當比較曲線下面積(AUC)和達到50。/。血塊溶解的時間(timeto50%clotlysis)時，阿替普酶和TNKase差不多是等功效的(Thomas等，^rafe，25/10:2072-2078(1994))。根據(jù)對接受阿替普酶和TNKase治療的AMI患者的TIMI10B臨床研究也推出了該結(jié)論，在此研究中不但發(fā)現(xiàn)阿替普酶和TNKase的功效和安全性結(jié)果是相似的，而且在關(guān)鍵治療時間點30分鐘和90分鐘時阿替普酶和TNKase的濃度也是相似的。這些時間點之所以重要，是因為它們分別標志著阿替普酶輸注速率的改變和阿替普酶輸注的終止(Modi等，C7/".P/zamz.,40/5:508-515(2000))。由此得出結(jié)^侖，由于藥物濃度和響應(yīng)之間的關(guān)系，以及由于相似濃度下的相似功效，重現(xiàn)治療期間(0-60分鐘)阿替普酶的濃度時間曲線和暴露情況的TNKase給藥方案會在AIS中產(chǎn)生相似的功效和可能更好的安全性。因而，使用阿替普酶急性心肌梗死(AMI)PK歷史數(shù)據(jù)以及AMI和中風中的TNKase數(shù)據(jù)進行PK建模來提供合適的AISTNKase劑量。根據(jù)該PK建模，優(yōu)選的方案是劑量為0.25mg/kg,以0.1mg/kg的初始推注，繼以60分鐘里0.15mg/kg的輸注來給予。AIS劑量給藥策略中TNKase劑量的第二選擇是0.25mg/kg的推注。TNKase的劑量給藥方案是利用旨在重現(xiàn)0.9mg/kgUSPI劑量給藥(l分鐘里10%推注和1小時剩余時間里90%)的相關(guān)治療期中阿替普酶的暴露和濃度時間譜的建模-模擬方法得出的。這需要根據(jù)公開的PK參數(shù)和濃度建立阿替普酶結(jié)構(gòu)和錯誤模型(PK模型)，并且從機構(gòu)內(nèi)部的AMI和AISPK數(shù)據(jù)構(gòu)建TNKase人群PK模型(PPK模型)。所有計算是利用NONMEM建模軟件包第5版(Beal,Boeckman，和SheinerNO畫EMuser'sguide,1988-1992.1992.SanFrancisco,CA,UniversityofCalifornia,SanFrancisco)來進行的。據(jù)記載，阿替普酶遵循二隔室和三P鬲室PK(two-andthree-compartmentPK)(Seifried等,7Tzr細6os^&//aewostas7.s，61/3:497-501(1989);Tanswell等,爿/^"e/w/"e(/brac/2wg,41/12:1310-19(1991);Tanswell等,C//",泡畫co/.77/^，46/2:155-62(1989);23Tanswell等，/Co〃egeo/Ca^/o/ogy.,19/5:1071-75(1992);Tebbe等，T7zeJomwg/o/Ca^/o/o^,64/8:448-53(1989》。選擇了二隔室模型，因為它是文獻中最新近記載的，而且使用的是更為常用的前線載荷劑量給藥方案(Neuhaus等，j:Co〃.CaW/o/.,19/5:885-891(1992))。還使用了PK參數(shù)和30及90分鐘時濃度的均值和標準偏差(Tanswell等，乂」w.Cb〃.Carafe/.,19/5:1071-75(1992))。雖然該模型是基于阿替普酶的AMI劑量給藥方案的相關(guān)PK，但就用于模擬針對AIS的阿替普酶USPI劑量給藥方案會達到的濃度而言，這些PK參數(shù)被認為是合理的近似(Genentech)。表l總結(jié)了最終用于模擬的阿替普酶PK模型參數(shù)。表l:阿替普酶PK參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>TNKasePPK模型是使用來自AMI試驗TIMI10B(Modi等，見上文)和一項先期劑量升級AIS試驗的患者個體血清濃度數(shù)據(jù)得出的。使用二隔室模型最好地描述了這些組合數(shù)據(jù)。表2總結(jié)了最終的模型結(jié)果。表2:TNKase(替奈普酶)最終模型估值<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>由于TNKasePK測定沒有區(qū)分內(nèi)源tPA和施用的TNKase，在模型中納入了一個基線參數(shù)來記錄內(nèi)源tPA水平。根據(jù)下式納入體重(WT)和年齡(AGE)作為關(guān)于清除率(CL)的協(xié)變量Cl廣(^(『3}/81.8)037V碼/58)-0.200^是CL的群體估值，CLj是個體CL，WTj是個體體重，中值體重為81.8,而AGEj是個體年齡，中值年齡為58。然后使用所述TNKasePPK模型對候選劑量給藥方案進行AIS劑量給藥方案估計和模擬，以圖產(chǎn)生與阿替普酶預(yù)測結(jié)果相似的濃度-時間譜和暴露。所述TNKase劑量給藥方案的基礎(chǔ)是阿替普酶USPI劑量給藥方案在60分鐘治療期內(nèi)的濃度-時間譜和暴露(圖l)。策略是利用它作為TNKase劑量給藥的近似目標。圖l提示，10%阿替普酶推注導(dǎo)致了近似穩(wěn)態(tài)的藥物濃度，然后在剩余的60分鐘內(nèi)阿替普酶的濃度相當恒定。然后利用從2-60分鐘以2分鐘間隔獲得的模型估計濃度中值的多個值計算有效濃度均值(計算機程序JMP版本5丄2003)(SASInstituteInc.)和AUC。基于觀察到的時間-濃度譜，中風的第一個TNKase方案包括一次推注繼以一次恒定輸注。由下式得出達到有效濃度均值需要的推注劑量推^麻量=xCV效其中群體體積(populationvolume)CW=阿替普酶有效濃度均值阿替普酶有效濃度均值和TNKase^(群體體積)分別為約1800ng/mL和4072mL,需要大約0.1047mg/kg的TNKase推注劑量。阿替普酶暴露定義為AUC0-60分鐘。在60分鐘劑量給藥期間內(nèi)獲得相似暴露所需要的TNKase劑量由下式得出其中^"C,rt,v。,e=0-60分鐘治療期內(nèi)的阿替普酶AUC=TNKase群體清除率60分鐘劑量給藥期間內(nèi)的阿替普酶AUC由下式計算阿替普酶AUOCV放x60分鐘其中CVfO-60分鐘的阿替普酶有效濃度均值阿替普酶的有效濃度均值大約為1800ng/mL,所得AUC為108,000ng*min/mL。在105mL/min的TNKase群體清除率(populationclearance)的條件下，維持與有效濃度相近的濃度和暴露所需要的總TNKase劑量為在l小時里施用0.16mg/kg。從算得的0.1047mg/kg推注劑量和60分鐘里0.16mg/kg輸注確定了一種更適用于臨床的劑量，即0.1mg/kg推注和60分鐘里0.15mg/kg輸注，并且在1000名受試者的模擬中對其進行了測試。圖2顯示來自此方案的均值、第5百分位和第95百分位濃度，與阿替普酶的模型預(yù)測濃度相比較。使用計算機程序WinNonlin3.0版本2001(WinNonlin)計算了0-60分鐘的治療期間的AUC、60-120分鐘的治療后期間的AUC、及0-120分鐘的總AUC,并總結(jié)于表3。表3:TNKase的AUC和濃度比較-0.25mg/kg推注/輸注劑量給藥方案<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>中值濃度阿替普酶0.25mg/kgTNKaseG2分鐘19591934030分鐘18241874060分鐘18711877*八1^=曲線下面積根據(jù)這些結(jié)果，將下述TNKase劑量確定為AIS中合適的TNKase劑量給藥方案以l分鐘里的O.lmg/kg推注和1小時剩余時間里O.15mg/kg的輸注來施用0.25mg/kg。如果能夠改善結(jié)果，考慮確定別的劑量給藥方案。在導(dǎo)致阿替普酶被批準用于中風的臨床研究中，出血是限制劑量的毒性。然而，AMI文獻提示，較高濃度的溶栓劑可改善血塊溶解。在至少兩項以前線載荷劑量給藥方案施用阿替普酶的研究中都觀察到了暴露與響應(yīng)之間的這種關(guān)系，導(dǎo)致AMI中結(jié)果的改善(Gulba等，同上；Neuhaus等，同上)。由于TNKase的纖維蛋白特異性在理論上可容許提高劑量而又減少對纖維蛋白原的影響和隨之而來的出血風險，考慮了0.25mg/kg的推注劑量給藥方案。目的是施用更高的早期劑量以改善血塊溶解(與AMI中阿替普酶觀察到的結(jié)果一致)，而不改變纖維蛋白原或增加出血風險。這種推注方案還會降低推注-輸注方案所觀察到的、較晚時間點上的低水平暴露。圖3顯示來自所述0.25mg/kg推注方案的模型預(yù)測的阿替普酶濃度中值和模型預(yù)測的TNKase中值、第5百分位及第95百分位濃度。表4總結(jié)了AUC值并比較了關(guān)鍵時間點上的濃度。總的來說，從對0.25mg/kg推注的模擬觀察到的暴露和濃度時間曲線提示這種用于純推注治療的方案是合適的。表4:TNKase的AUC和濃度比較-0.25mg/kg純推注劑量給藥方案阿^^酶__0.25mg/kgTNKaseAUC*%AUC*%%阿替普酶(中值)AUC(中值)AUCAUCAUC(0-60)1079418714019181130AUC(60-120)15487133324219215AUC(0-120)12342810017343310014127<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>綜上，利用藥動學建模和模擬確定了TNKase用于治療急性缺血性中風的推注-輸注及純推注劑量給藥方案。設(shè)計這些劑量給藥方案以提供與阿替普酶施用于AIS患者時相比更好的替奈普酶安全性和功效。雖然已經(jīng)結(jié)合優(yōu)選的實施方案和具體的實際實施例對本發(fā)明做出了必要的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀了上面的說明書之后將能夠?qū)崿F(xiàn)本文公開之主題的各種變化、等同物替換和改變，而不背離其精神和范圍。因此，本發(fā)明可以與本文中具體描述的方式不同的方式來實施。因此，專利證書對其所給予的保護僅應(yīng)被隨附的權(quán)利要求及它們的等同物所限定。權(quán)利要求1.一種用于治療人類中急性缺血性中風的方法，包括以約0.05-0.5mg/kg的總劑量給人類施用替奈普酶，所述總劑量如下給予(a)約0.015-0.15mg/kg的初始推注劑量，繼以約50-90分鐘的時間段里量等于所述總劑量減去所述初始劑量的輸注；或者(b)推注。2.權(quán)利要求l的方法，其中所述總劑量為約0.2-0.3mg/kg。3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述總劑量為約0.25mg/kg。4.權(quán)利要求1-3中任一項的方法給予。5.權(quán)利要求1-4中任一項的方法注。6.權(quán)利要求1-5中任一項的方法7.權(quán)利要求1-6中任一項的方法8.權(quán)利要求1-7中任一項的方法9.權(quán)利要求1-8中任一項的方法予約0.1mg/kg的初始推注，繼以約60分鐘里約0.15mg/kg的輸注。10.權(quán)利要求l-3中任一項的方法，其中所述總劑量以推注給予。11.權(quán)利要求1-10中任一項的方法，其中所述替奈普酶是在自急性缺血性中風發(fā)作起約15分鐘至20小時之間的時間施用給人類的。，其中所述總劑量以初始推注繼以輸注來，其中所述初始劑量為約0.08-0.12mg/kg推，其中所述初始劑量為約0.1mg/kg推注。,其中所述輸注時間段為約55-70分鐘。，其中所述輸注時間段為約60分鐘。,其中所述總劑量為約0.25mg/kg，如下給12.權(quán)利要求l-ll中任一項的方法，其中所述替奈普酶是在自急性缺血性中風發(fā)作起約30分鐘至6小時之間的時間施用給人類的。13.權(quán)利要求1-12中任一項的方法，其中所述替奈普酶是在自急性缺血性中風發(fā)作起約30分鐘至3小時之間的時間施用給人類的。14.權(quán)利要求1-13中任一項的方法，其中所述推注是靜脈內(nèi)推注。15.權(quán)利要求1-14中任一項的方法，進一步包括給人類施用有效量的第二藥物，其中第一藥物是替奈普酶。16.權(quán)利要求15的方法，其中所述第二藥物是神經(jīng)保護劑、溶栓劑、糖蛋白libIIIa拮抗劑、或抗CD18抗體。17.—種試劑盒，包括(a)裝有替奈普酶的容器；和(b)關(guān)于使用替奈普酶來治療人類中急性缺血性中風的說明，其通過以約0.05-0.5mg/kg的總劑量給人類施用替奈普酶來實現(xiàn)，所述總劑量如下給予(a)約0.015-0.15mg/kg的初始推注劑量，繼以約50-90分鐘的時間段里量等于所述總劑量減去所述初始劑量的輸注；或者(b)推注。18.權(quán)利要求17的試劑盒，其中所述總劑量為約0.2-0.3mg/kg。19.權(quán)利要求17或18的試劑盒，其中所述總劑量為約0.25mg/kg。20.權(quán)利要求17-19中任一項的試劑盒，其中所述總劑量以初始推注繼以輸注來給予。21.權(quán)利要求17-20中任一項的試劑盒，其中所述初始劑量為約0.08-0.12mg/kg。22.權(quán)利要求17-21中任一項的試劑盒，其中所述總劑量為約0.25mg/kg，如下給予約0.1mg/kg的初始推注，繼以約60分鐘里約0.15mg/kg的輸注。23.權(quán)利要求17-19中任一項的試劑盒，其中所述總劑量以推注給予。24.權(quán)利要求17-23中任一項的試劑盒，進一步包括裝有第二藥物的容器，其中所述說明包括聯(lián)合替奈普酶使用第二藥物來治療人類中缺血性中風的說明，其通過給人類施用有效量的第二藥物來實現(xiàn)。25.權(quán)利要求24的試劑盒，其中所述第二藥物是神經(jīng)保護劑、溶栓劑、糖蛋白libIIIa拮抗劑、或抗CD18抗體。全文摘要一種用于治療人類中急性缺血性中風的方法，包括以約0.05-0.5mg/kg的總劑量給人類施用替奈普酶，所述總劑量如下給予(a)約0.015-0.15mg/kg的初始推注劑量，繼以約50-90分鐘的時間段里量等于所述總劑量減去所述初始劑量的輸注；或者(b)推注。還描述了用于實施該方法的試劑盒。文檔編號A61K38/16GK101505785SQ200780031811公開日2009年8月12日申請日期2007年8月1日優(yōu)先權(quán)日2006年8月29日發(fā)明者彼得·庫布勒申請人:健泰科生物技術(shù)公司