專利名稱：：用玻璃覆蓋的生物學(xué)試劑的制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物學(xué)材料和試劑以玻璃狀、多孔狀態(tài)長(zhǎng)期貯存。特別地，其涉及使用多孔板制備這些材料和試劑和其貯存的方法。
背景技術(shù)：
：少數(shù)生物學(xué)活性材料足夠穩(wěn)定，從而它們可在室溫下進(jìn)行分離、純化且然后在溶液中貯存。一般地，將生物學(xué)試劑貯存在保持在4。C、-20。C或-7CTC的甘油溶液中?？蓪⑺鼈兩⒀b(mbulk)貯存，然后在使用前與其他試劑組合。在制備用于生物學(xué)樣品的便利和有效的測(cè)試的試劑中，經(jīng)常重要的是獲得均勻、預(yù)估量(discreetamount)的干燥的化學(xué)摻合物。用于穩(wěn)定生物學(xué)試劑的載體或填充物的一種類型是形成玻璃的填充材料。將生物學(xué)試劑溶液并入形成玻璃的填充材料(所述材料是水溶性或水溶脹性物質(zhì))。然后將它們干燥以產(chǎn)生固定和穩(wěn)定生物學(xué)試劑的玻璃狀組合物。關(guān)于用于穩(wěn)定生物學(xué)試劑的形成玻璃的填充材料參見US5,098,893、US5,200,399和US5,240,843。碳水化合物例如葡萄糖、蔗糖、麥芽糖或麥芽三糖是重要的形成玻璃的物質(zhì)組。可使用其他多羥基化合物例如碳水化合物衍生物如山梨糖醇和經(jīng)化學(xué)修飾的碳水化合物。另一類重要的形成玻璃的物質(zhì)是合成的聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺或聚乙烯亞胺。形成玻璃的物質(zhì)的另外的實(shí)例包括糖類共聚物例如由GEHealthcare在注冊(cè)商標(biāo)FIC0L1JM下銷售的那些糖類共聚物。FICOLL具有5,000至1,000,000的分子量且包含通過醚橋鍵與雙功能基團(tuán)連接的蔗糖殘基(US3,300,474)。此種基團(tuán)可以是2、3或更多個(gè)碳原子但通常不超過10個(gè)碳原子的亞烷基。雙功能基團(tuán)用于將糖殘基連接在一起。此種聚合物可以例如通過糖與卣代醇或雙環(huán)氧(bis-epoxy)化合物的反應(yīng)來制備。碳水化合物聚合物的玻璃狀基質(zhì)中的經(jīng)穩(wěn)定的生物學(xué)材料可以通過冷凍干燥(Treml等人US5,593,824;Franks和HatleyUS5,098,893)或通過真空干燥(Walker等人US5,565,318)來制備。這些水溶性試劑方便地用于復(fù)雜的分子生物學(xué)應(yīng)用。該方法具體用于由以單次使用的等分試樣分配的酶、核苷酸和其他組分組成的試劑系統(tǒng)。玻璃狀基質(zhì)的重建遞送用于應(yīng)用(包括DNA擴(kuò)增和DNA測(cè)序)的經(jīng)緩沖的酶。目前在市場(chǎng)上存在許多干燥的分子生物學(xué)產(chǎn)品。然而，這些產(chǎn)品中的一些通過相當(dāng)麻煩且包括大量的手工勞動(dòng)的方法來制備。其他產(chǎn)品當(dāng)干燥時(shí)需要冷凍。存在對(duì)用于產(chǎn)生環(huán)境溫度干燥的試劑的改進(jìn)方法的需要。發(fā)明概述在本發(fā)明的第一方面，提供了產(chǎn)生干燥的試劑制劑的方法。該方法包括步驟提供至少一種經(jīng)緩沖的生物學(xué)試劑的水溶液；將形成玻璃的填充材料與經(jīng)緩沖的試劑溶液混合來形成其中填充材料的濃度足以促進(jìn)玻璃狀多孔組合物形成的混合物；將預(yù)先確定量的混合物分配入多孔容器的孔；將容器中的混合物干燥以形成干燥的試劑制劑；其中所述試劑制劑是水溶性的且具有對(duì)于室溫穩(wěn)定性是足夠的Tg?；旌衔飪?yōu)選是均一的溶液。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，將干燥的試劑制劑收集入試劑瓶中以用于延長(zhǎng)的室溫貯存。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，將干燥的試劑貯存于多孔容器中以進(jìn)行延長(zhǎng)的貯存，用密封帶密封容器的頂部。任選地，密封帶是熱激活的。根據(jù)本發(fā)明的多孔容器可以是二氧化硅塑模(silicamould)或聚苯乙烯板。當(dāng)多孔容器是聚苯乙烯板時(shí)，本發(fā)明還包括在凍干前將聚苯乙烯板置于金屬塑模上，從而各聚苯乙烯板孔的外壁與所述金屬塑模的孔緊密接觸以進(jìn)行有效的熱傳遞。我們發(fā)現(xiàn)這改進(jìn)了干燥方法且產(chǎn)生了具有提高的完整性的干燥的試劑。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了根據(jù)上述方法制備的干燥的生物學(xué)試劑組合物。根據(jù)本發(fā)明制備的試劑組合物是水溶性的且具有對(duì)于持室溫穩(wěn)定性是足夠的Tg。優(yōu)選地，試劑組合物具有結(jié)構(gòu)完整性。生物學(xué)試劑組合物能夠在短于1分鐘，優(yōu)選30秒內(nèi)完全溶解在25)il水溶液中。試劑組合物優(yōu)選具有低于10%的含濕量。試劑組合物可具有至少一種當(dāng)于室溫下在水溶液中單獨(dú)存在時(shí)不穩(wěn)定的試劑。試劑組合物還可包含多種當(dāng)在室溫下于水溶液中存在時(shí)相互之間可以反應(yīng)或可以不反應(yīng)的試劑。因此，本發(fā)明的目的和優(yōu)點(diǎn)是提供干燥的生物學(xué)試劑組合物和產(chǎn)生所述組合物的方法。根據(jù)下列描述，本發(fā)明的這些和其他目的以及優(yōu)點(diǎn)將變得顯而易見。然而，該描述僅僅是優(yōu)選實(shí)施方案。因此，應(yīng)當(dāng)依賴權(quán)利要求來估計(jì)本發(fā)明的整個(gè)范圍。附圖描述圖1顯示用于按照本發(fā)明的實(shí)施方案制備干燥的試劑制劑的方法的方法工作流程。圖2顯示，從左上角開始用于按照本發(fā)明的實(shí)施方案制備干燥的試劑制劑的方法的384孔聚苯乙烯板；右上角顯示具有l(wèi)千萬拷貝至1000拷貝的起始濃度的不同量的入DNA作為模板的標(biāo)準(zhǔn)曲線，包括無模板對(duì)照；左下角從384孔聚苯乙烯板制備的貯存在塑料瓶中的干燥的試劑制劑餅/立方塊(cube);右下角顯示干燥的試劑制劑成功地用于XDNA實(shí)時(shí)qPCR擴(kuò)增反應(yīng)的擴(kuò)增圖。圖3顯示，從左上角開始用于按照本發(fā)明的實(shí)施方案制備千燥的試劑制劑的方法的96孔二氧化硅塑模；右上角顯示具有1千萬個(gè)拷貝至1000個(gè)拷貝的起始濃度的不同量的XDNA作為模板的標(biāo)準(zhǔn)曲線，包括無模板的對(duì)照；左下角從96孔二氧化硅塑模制備的貯存在塑料瓶中的干燥的試劑片劑；右下角顯示干燥的試劑制劑成功地用于XDNA實(shí)時(shí)qPCR擴(kuò)增反應(yīng)的擴(kuò)增圖。圖4顯示包含PCR制劑的96孑LPCR板在凍干前進(jìn)入金屬支架(metalholder)。圖5顯示不同形式的按照本發(fā)明的的實(shí)施方案制備的室溫穩(wěn)定的PCR試劑。左上角瓶中的干燥的PCR混合物。右上角96孔板中的干燥的PCR混合物。左下角384孔板中的干燥的PCR混合物。右下角96孔穿孔板(perforatedplate)中的干燥的PCR混合物。圖6顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案制備的干燥的PCR試劑的穩(wěn)定性。干燥的PCR混合物用于XDNA的qPCR。對(duì)于(l)'濕'制劑珠混合物(左上方)、(2)使用當(dāng)前規(guī)程制備的干燥的餅(右上方)和(3)來自GEHealthcare的puRetaqReady-To-Go(RTG)PCR珠(左下方)，注意到相似的性能。右下方一式三份進(jìn)行的上述三個(gè)反應(yīng)的Ct值和PCR效率。新形式和pureTaq珠的Ct值和PCR效率值是相當(dāng)?shù)?。圖7顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案制備的干燥的PCR試劑的穩(wěn)定性。將干燥的PCR混合物于4(TC和室溫(RT)下貯存8天。將干燥的試劑用于XDNA的qPCR，具有相似的性能。左上角于RT下貯存的干燥的PCR試劑餅(reagentcake)。右上角于4CTC下貯存的干燥的PCR試劑餅。左下角于RT下貯存的puReTaq珠(GEHealthcare)。右下角于4(TC下貯存的puReTaq珠。圖8顯示一式兩份進(jìn)行的上述四個(gè)反應(yīng)的Ct值和PCR效率。當(dāng)前形式和pureTaq珠的Ct值和PCR效率值在40。C和室溫下是相當(dāng)?shù)?。圖9顯示按照本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)的結(jié)果。左上圖使用凍干的試劑包括TaqMan引物和探針的實(shí)時(shí)PCR。左下圖凍干的試劑對(duì)照(TaqMan引物和探針未凍干，其他試劑如實(shí)施例1中一樣進(jìn)行凍干)。右上圖商業(yè)puReTaqRTG珠對(duì)照(所有其他試劑未進(jìn)行凍時(shí)，^有等量的模板DNA:的反應(yīng)落在標(biāo)準(zhǔn)曲線上(右下圖:；"X，，表示"未知的")。圖10顯示Phi29DNA聚合酶以凍干的形式是穩(wěn)定的。進(jìn)行使用凍干的試劑或"濕"混合物進(jìn)行的全基因組擴(kuò)增測(cè)定。在即使使用已在40。C下貝i存35天的凍干的試劑的情況下，檢測(cè)到強(qiáng)烈的擴(kuò)增。圖U顯示與常規(guī)的"濕"試劑盒(RocheIVT)相比，使用凍干的IVT試劑(A、B、C)進(jìn)行的DNA模板的成功轉(zhuǎn)錄。ntc:無模板對(duì)照。發(fā)明詳述7生物學(xué)試劑許多生物學(xué)試劑適合通過本發(fā)明的方法來貯存。本發(fā)明的生物學(xué)試劑組合物特別適合用于進(jìn)行許多種有益地或必需地對(duì)血漿或稀釋的血漿進(jìn)行的分析程序。分析程序通常需要將血漿與一種或多種試劑球(reagentsphere)組合，從而在血漿中發(fā)生可與血漿的特定組分或特征的測(cè)量相關(guān)的一些光學(xué)上可檢測(cè)的變化。優(yōu)選，血漿將經(jīng)歷導(dǎo)致可通過常規(guī)分光光度計(jì)、熒光計(jì)、光檢測(cè)器等測(cè)量的改變的顏色、熒光、發(fā)光等的反應(yīng)或其他變化。在一些情況下，可進(jìn)行免疫測(cè)定和其他特異性結(jié)合測(cè)定?？蓪?duì)其應(yīng)用本發(fā)明的其他類別的生物學(xué)試劑是蛋白質(zhì)和肽，包括其衍生物例如糖蛋白。此種蛋白質(zhì)和肽可以是任何酶、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(transportprotein)(例如血紅蛋白、免疫J求蛋白、激素、血液埃是固因子(bloodclottingfactor)和藥理活性蛋白或肽)。可對(duì)其應(yīng)用本發(fā)明的另一種類別的生物學(xué)試劑包括核苷、核苷酸(例如脫氧核苷酸、核糖核苦酸和雙脫氧核苦酸)、二核苷酸、寡核苦酸和還有酶輔因子，無論這些是否是核苷酸。酶底物通常也是可對(duì)其應(yīng)用本發(fā)明的生物學(xué)試劑。用于在貯存中穩(wěn)定的生物學(xué)試劑可從天然來源，動(dòng)物、植物、真菌或細(xì)菌分離，或可通過從通過發(fā)酵和人工培養(yǎng)生長(zhǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生和從其分離。此種細(xì)胞可以是或可以不是遺傳轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。本發(fā)明的另一個(gè)發(fā)展是在玻璃試劑球中貯存反應(yīng)系統(tǒng)的超過一種試劑。這可用于將需要在例如測(cè)定或診斷試劑盒中一起使用的材料。在單個(gè)玻璃狀制劑中貯存試劑以對(duì)于最終的用途方便的形式提供它們。例如，如果測(cè)定需要底物或輔因子和酶的組合，那么可將兩種或所有這三種物質(zhì)以需要的濃度比貯存在玻璃狀試劑球中和準(zhǔn)備好用于測(cè)定。如果貯存多種試劑，則可將它們?cè)谒匀閯┲谢旌显谝黄穑缓笠黄鸩⑷氩Ａе?。備選地，可單個(gè)地將它們并入分開的玻璃中，所述分開的玻璃之后^皮混合在一起。當(dāng)作為單個(gè)組合物(其可以是混合在一起的兩種玻璃)貯存多種試劑時(shí)，一種或多種試劑可以是蛋白質(zhì)、肽、核香、核苷酸或酶輔因子。試劑還可能可以是更簡(jiǎn)單的種類。例如，標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定程序可能需要丙酮酸鹽和NADH存在于一起。兩者都可以以可接受的穩(wěn)定性單獨(dú)貯存。然而，當(dāng)一起置于水溶液中時(shí)，它們開始反應(yīng)。如果以需要的比例一起置于玻璃狀試劑球中時(shí)，它們不反應(yīng)，且玻璃可被貯存。關(guān)于反應(yīng)，我們是指任何生物化學(xué)反應(yīng)。本發(fā)明的優(yōu)選生物學(xué)試劑是提供試劑系統(tǒng)以檢測(cè)、擴(kuò)增、修飾或測(cè)序核酸的酶和輔因子。此種酶包括但不限于DNA聚合酶(例如克列諾(Klenow))、T7DNA聚合酶或各種熱穩(wěn)定性DNA聚合酶例如TaqDNA聚合酶；AMV或鼠逆轉(zhuǎn)錄酶、T4DNA連接酶、T7、T3、SP6RNA聚合酶、p莖菌體Phi29DNA聚合酶和限制性內(nèi)切酶。輔因子包括核苷酸、寡核普酸、DNA、RNA、對(duì)于酶活性必需的鹽(例如鎂、鉀和鈉)以及緩沖能力所需要的鹽。緩沖鹽提供了正確的pH范圍且有助于穩(wěn)定性?？墒褂玫囊恍┚彌_劑包括TrispH7.6-8.3。可使用根據(jù)下文中的實(shí)施例1的規(guī)程估計(jì)任何潛在的生物學(xué)試劑。因此，使得合適的生物學(xué)試劑在試劑球中穩(wěn)定，如通過功能性測(cè)試如實(shí)施例1中的功能性測(cè)試所確定的。形成玻璃的填充材料可用于本發(fā)明的形成玻璃的填充材料的實(shí)例包括碳水化合物例如FICOLLtm、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、松三糖、DEXTRANtm和甘露糖醇；蛋白質(zhì)例如BSA、明膠和膠原；以及聚合物例如PEG和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。形成玻璃的填充材料優(yōu)選是FICOLLTM聚合物、BSA、蔗糖、DEXTRAN或其組合。用于本發(fā)明的最優(yōu)選形成玻璃的填充材料是FICOLLtm聚合物。制劑通過迭代法(iterativeprocess)確定生物學(xué)試劑、形成玻璃的填充材料和水的高粘性混合物的制劑。首先，人們確定系統(tǒng)希望的終使用濃度。濃度通常以體積摩爾濃度來表示。各生物學(xué)試劑可具有不同的配方。第二，將這些濃度轉(zhuǎn)變成重量/劑量基礎(chǔ)(basis)(對(duì)于固體)和體積/劑量基礎(chǔ)(對(duì)于液體)。第三，選擇高粘性混合物的百分比固體濃度和希望的混合物體積的初始值。55%的固體濃度已顯示表現(xiàn)良好。高于62%的固體濃度，混合9物太粘以至不能分配。如果乳劑是希望的，低于52%的固體濃度，混合物太稀，且干燥為透明和硬的。如果半乳劑是希望的，且允許10%的更低限度。關(guān)于"％的固體"，我們是指(固體重量乘以100)除以(液體重量+固體重量)。如果允許形成玻璃的材料進(jìn)入溶液，則混合物將干燥為硬的和玻璃狀的。因此，希望的混合物是乳劑而非溶液。關(guān)于乳劑，我們是指飽和的混合物，從而存在兩相，固相和液相。例如，本發(fā)明是生物學(xué)試劑/緩沖液中的形成玻璃的填充材料的半乳劑。固體的存在給乳劑提供了不透明至白色。當(dāng)干燥時(shí)，高粘性乳劑仍然形成玻璃，但可在表面獲得小孔以便水通過，且加速干燥的試劑制劑的溶解。乳劑應(yīng)當(dāng)具有白色。如果其是透明的，其最可能將干燥為硬的和玻璃狀的，且從而，將是無孔的。關(guān)于孔隙度，我們是指干燥的制劑試劑包含幫助所述制劑溶解的氣泡的袋。優(yōu)選孔隙度允許制劑在大約2分鐘或更少的時(shí)間內(nèi)溶解。本發(fā)明的另一種形式提供了特征在于為半乳劑的形成玻璃的填充材料和生物學(xué)試劑/緩沖液的混合物。關(guān)于該混合物，我們是指具有至少一些乳劑性質(zhì)的混合物。本發(fā)明的半乳劑可通過使用上述迭代法使固體濃度達(dá)到大約10%至大約50%來形成。然后分配和干燥半乳劑來形成干燥的試劑制劑。第四，人們計(jì)算可使用來自第二步驟的每劑量形成玻璃的材料的克數(shù)可產(chǎn)生的劑量的數(shù)目。第五，使用劑量的數(shù)目和來自第二步驟的重量/劑量比，人們確定其他組分的重量/體積。最后，使用在第五步驟中確定的重量和體積，人們計(jì)算終混合物的百分比固體。如果混合物的終百分比固體在希望的范圍外，則人們使用另一個(gè)初始值重復(fù)第三至第六步驟直至終值在正確的范圍內(nèi)?？墒褂酶鶕?jù)上述的迭代法的規(guī)程估計(jì)任何潛在的形成玻璃的材料。因此，合適的形成玻璃的材料產(chǎn)生了具有可接受的硬度、大小、形狀、Tg、孔隙度、溶解性和穩(wěn)定性的試劑制劑。多孔容器用于制備干燥的試劑制劑的多孔容器的實(shí)例包括聚苯乙烯板、二氧化硅塑模等。優(yōu)選，多孔板是具有使得能夠使用用于應(yīng)用例如PCR的標(biāo)準(zhǔn)熱循環(huán)儀的標(biāo)準(zhǔn)尺寸和版面設(shè)計(jì)的多孔板。通常，多孔容器包括兩個(gè)區(qū)域，孔區(qū)和邊界。邊界可以是任何大小、形狀或厚度，但優(yōu)選形成具有與標(biāo)準(zhǔn)96孔或384孔商業(yè)微量滴定板的外部大小相似的外部大小的多孔平臺(tái)，其大小為寬度大約85.5mm乘長(zhǎng)度127.75mm。通常，板包括許多排列在網(wǎng)格中的空洞。這些空洞稱為孔且用作個(gè)別反應(yīng)的反應(yīng)容器，或用于個(gè)別樣品的貯存容器?？讓⒁远S線性陣列排列在多孔平臺(tái)上。然而，孔可以以任何類型的陣列例如幾何或非幾何陣列提供?？椎臄?shù)目可以是在這些范圍內(nèi)的96的倍數(shù)，優(yōu)選是乘以96的整數(shù)的平方。商業(yè)板中的孔通常經(jīng)設(shè)計(jì)具有標(biāo)準(zhǔn)的間隔。96孔板具有12列和8行，相鄰的孔的中心之間間隔9mm。384孔板具有24列和16行，相鄰的孔的中心之間間隔4.5mm。1536孔板具有48列和32行，相鄰的孔的中心之間間隔為2.25mm。也使用構(gòu)成上述格式的一半的微量滴定板。還可獲得的是在相鄰的孔的中心之間具有相似間隔的孔帶。具有這些尺寸的多孔容器可與自動(dòng)機(jī)器學(xué)(robotics)和儀器例如多孔平臺(tái)轉(zhuǎn)位器(translocator)和讀數(shù)器(如它們?cè)诒绢I(lǐng)域內(nèi)所稱呼的)相容。用于制備多孔平臺(tái)的材料將通常為聚合物，因?yàn)檫@些材料使它們適合于大多數(shù)制備技術(shù)。優(yōu)選，選擇已知具有低熒光或其他性質(zhì)的聚合物。材料可以顯著地促進(jìn)通過本領(lǐng)域內(nèi)已知的和將來開發(fā)的模塑法例如鑲嵌造型或注模法來進(jìn)行板的制備。聚合物板的備選是96孔和384孔形式的二氧化硅塑模。如下文中的實(shí)施例所顯示的，96孔穿孔二氧化硅模塑的板可用于分配和凍干試劑。此處的優(yōu)點(diǎn)是在凍干后應(yīng)當(dāng)可容易地從塑模取出干燥的試劑?；旌虾头峙淙缦轮苽湟话阒苿?與實(shí)施例一樣使用DNA標(biāo)記制劑)在使用前，通常對(duì)所使用的所有試劑進(jìn)行高壓滅菌或過濾滅菌(優(yōu)選0.25pm的濾器)。制備制劑，且將其在冰上貯存直至分配。對(duì)于200ml(足以用于20,000個(gè)單劑制劑)DNA標(biāo)記制劑，將各15g的Ficoll400和Ficoll70和20g;^三糖加入大約90ml無菌水，且在攪拌板上混合直ii至溶解。將50ml20X濃縮DNA標(biāo)記緩沖液(200mMTrispH7.5、200mMMgCl2、1MNaCl)與10m110mg/mlBSA溶液一起加入。加入各1ml的100mMATP、GTP和TTP。一旦所有試劑存在于溶液中，就將制劑在冰上或在冷凍的條件下貯存直至其用于分配。緊在使用前，加入400Ku克列諾片段DNA聚合酶(原液的最低濃度應(yīng)當(dāng)為100Ku/ml以使甘油濃度在終制劑中保持低于1%)。同樣緊在使用前，加入1200A260個(gè)單位的d(N)9引物。在向制劑中加入前，引物應(yīng)當(dāng)在65。C下加熱7分鐘，且快速在冰上冷卻。在加入酶和引物后，終體積應(yīng)當(dāng)使用無菌水調(diào)至200ml。終溶液的密度將為1.14g/ml。試劑均一溶液的每分配的劑量的終體積通常小，例如5-30^1，優(yōu)選10|Lil，以當(dāng)試劑制劑溶解于工作溶液中時(shí)允許產(chǎn)生10-100w的工作體積。將預(yù)先確定量的均一溶液分配入多孔容器的各個(gè)孔，通常使用液體分配自動(dòng)裝置(robot)(96孔/384孔針)。以4pl至20|ul,但優(yōu)選10^tl的體積分配溶液。干燥方法可通過冷凍干燥或凍干干燥分配的樣品。合適的干燥程序產(chǎn)生具有可接受的硬度、大小、形狀、Tg、孔隙度、溶解性和穩(wěn)定性的試劑制劑。一般的成功的冷凍干燥的概況在下面示于表1中。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>干燥的優(yōu)選方法是經(jīng)由凍干。分配的試劑在96或384孔聚苯乙烯板中進(jìn)行了成功的干燥。令人驚訝地，當(dāng)將聚苯乙烯薄壁板置于配備的金屬板支架且與其直接接觸時(shí)，干燥方法更好地進(jìn)行且與在無金屬支架的情況下干燥的板相比，沒有觀察到干燥的試劑的泡沫或絮片(圖l和4)。聚苯乙烯孔(管)的外壁與金屬板支架的金屬孔的直接接觸間接地增加了金屬架子的接觸面積，這反過來獲得了至樣品的更好的熱傳遞。在另一方面，對(duì)于各孔，二氧化硅塑模具有厚壁和平底，且二氧化硅塑模中的凍干法在不使用金屬支架的情況下合理地良好進(jìn)行。這可能歸因于塑模與冷凍干燥器架子的更好的接觸以及二氧化硅的熱傳遞性質(zhì)。優(yōu)選凍干的概況在下面示于表2中。注意，在進(jìn)行下列程序前，將樣品在-46。C下于冷凍干燥器中冷凍1小時(shí)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>加熱后溫度(。C)真空(毫托)時(shí)間(分鐘)注釋281002000保持貯存我們成功地在基于聚苯乙烯和二氧化硅的板或塑模中制備了片劑、圓柱體和立方體形式的穩(wěn)定的生物學(xué)試劑。我們的技術(shù)允許溫度敏感性蛋白質(zhì)和核酸分子穩(wěn)定化成在環(huán)境溫度下穩(wěn)定的單劑形式。單劑形式(珠或餅)可包含預(yù)先分配的特異性測(cè)定所需的緩沖劑、鹽、去污劑和核苷酸等，在所述測(cè)定中使用所述分子。這些酶和組合可用于許多種分子生物學(xué)應(yīng)用，包括但不限于PCR、RT-PCR、實(shí)時(shí)PCR、全基因組擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄和cDNA合成應(yīng)用。我們的方法消除了對(duì)將試劑混合物冷凍滴入液氮中或冷凍滴至冷表面上的需要，然而干燥的試劑保持良好的結(jié)構(gòu)完整性。方法在制備過程中具有更少的步驟。當(dāng)正確密封時(shí)，干燥的試劑制劑可直接貯存在板或塑才莫中，且這顯著地減少了制備和包裝成本。備選地，可以作為片劑從二氧化硅塑才莫和作為立方塊從polyfiltronics96孔板取出干燥的試劑，然后將其貯存在密封的容器即加蓋的瓶子。板或塑模的密封可通過下述實(shí)現(xiàn)帽、帶、熱激活帶等。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，板的密封通過使用AbGene，sThermo-Seal和Easy-Peel片的熱激活密封來實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的試劑制劑是室溫穩(wěn)定的。關(guān)于"室溫穩(wěn)定的"，我們是指制劑可在22。C下貯存超過6個(gè)月，其與在笫一次干燥試劑后測(cè)量的活性相比，有少于20%的酶活性丟失。本發(fā)明的試劑制劑具有至少l(TC的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)。試劑制劑一般的Tg是40。C。至少40。C的Tg將保證在室溫(22。C)下的穩(wěn)定性。優(yōu)選Tg是45。C。玻璃化轉(zhuǎn)變溫度是這樣的溫度，即高于該溫度，玻璃狀材料的粘性快速降低且玻璃狀材料轉(zhuǎn)變成橡膠，然后轉(zhuǎn)變成在甚至更高的溫度下轉(zhuǎn)變成流體的可變形的塑料。玻璃化轉(zhuǎn)變溫度用作制劑的穩(wěn)定性的重要指標(biāo)。在低于Tg的溫度或接近其時(shí)，樣品保持為穩(wěn)定的玻璃。當(dāng)溫度上升高于Tg時(shí)，樣品成為橡膠且較不穩(wěn)定。Tg使用差示掃描量熱法來進(jìn)行測(cè)量。將2-5mg(l-2個(gè)粉碎的球)樣品置于鋁鍋中。通過以10。C/分鐘的速率使樣品經(jīng)歷從0。C至IO(TC的受控溫度程序來確定樣品的Tg。測(cè)量流至樣品和從樣品流出的熱并且將其表示為基線中的變動(dòng)(shift)。Tg表示為在該基線變動(dòng)的中點(diǎn)的溫度。一般的孔隙度允許球在1分鐘或更短的時(shí)間內(nèi)溶解在20pl水中。優(yōu)選孔隙度將允許在30秒或更短的時(shí)間內(nèi)溶解。我們制備用玻璃覆蓋的(glassified)生物學(xué)試劑制劑的方法提供了幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)。制備方法大大簡(jiǎn)化。將試劑混合物直接分配入多孔板的孔，所迷多孔板具有與商業(yè)微量滴定板相同的標(biāo)準(zhǔn)版式。這消除了對(duì)在液氮中或在冷表面上冷凍試劑滴的需要。然后冷凍分配的混合物，在孔中凍干，且也可將其貯存在孔中。這消除了對(duì)將珠或餅從干燥鍋轉(zhuǎn)移至貯存容器的需要。因?yàn)榭蓪⒏稍锏慕M合物貯存在多孔板中，所以所述組合物可用于自動(dòng)化的隨后工作流程中。自動(dòng)機(jī)器學(xué)系統(tǒng)可用于處理板。此外，制備的組合物在環(huán)境溫度下是穩(wěn)定的。這節(jié)省了運(yùn)輸成本(無干冰運(yùn)輸)，消除了對(duì)冷藏箱貯存的需要和縮短了試劑制備時(shí)間(無融化)。其為隨后的用戶提供了方便?？蓪⒋蠖鄶?shù)測(cè)定相關(guān)性組分預(yù)先分配和穩(wěn)定入單劑形式。其節(jié)省了用戶時(shí)間和用于制備試劑的主混合物(mastermix)的塑料消費(fèi)品成本。其還提供了增加的再現(xiàn)性和可靠性，因?yàn)槠錅p少了污染的危險(xiǎn)和誤差。使用預(yù)先分配的反應(yīng)物制備組合物。這使樣品處理和移液步驟減少至最少，從而減少了由用戶產(chǎn)生的污染的危險(xiǎn)和移液誤差。實(shí)施例本實(shí)施例僅提供用于舉例說明的目的，且不應(yīng)當(dāng)解釋為限定由所附權(quán)利要求限定的本發(fā)明的范圍。在本說明書的下面和其他地方提供的所有參考文獻(xiàn)都并入本文作為參考。實(shí)施例1:于384孔聚苯乙烯板中進(jìn)行的干燥的PCR混合物的制備按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程制備生物學(xué)試劑制劑，在本情形中為用于PCR的試劑混合物。簡(jiǎn)而言之，10pl球的制劑包含25mMTris-HCl(pH9.0于室溫下)、125mMKCl、3.75mMMgCl2、0.5mMdNTP、0.6mg/mlBSA、3.5個(gè)單位的rTaqDNA聚合酶以及包括合成的聚合物Ficoll400(6.25%)、Ficoll70(6.25%)和第二碳水化合物松三糖(10%)的形成玻璃的填充材料。在使用前通常將所有試劑高壓滅菌或過濾滅菌。制備試劑并且將其在冰上貯存直至混合和分配入聚苯乙烯板或二氧化硅塑^t。終制劑由形成玻璃的填充材料、BSA、dNTP和rTaqDNA聚合酶以及上述鹽組成。試劑均一溶液的每劑量終體積為10(il。這允許25(il的PCR工作體積。使用自動(dòng)移液器將試劑分配入384板聚苯乙烯板。將384孔板置于預(yù)先冷卻(-46i:)的Vertis冷凍千燥器的頂部進(jìn)行大約60分鐘來冷凍試劑。然后按照前述表2中描述的方法，使冷凍的試劑經(jīng)歷第一和隨后的第二干燥過程。通過簡(jiǎn)單地用粘合蓋或帽或熱密封裝置(thermoseal)覆蓋板來將包含干燥的試劑的板貯存在作為完整包裝的包含干燥劑的可再密封袋中。備選地，將干燥的試劑作為干燥的試劑片劑或立方塊從板取出，然16后將其貯存在瓶中，且將瓶貯存在包含千燥劑的可再密封的袋中。通過XDNA的實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增和將擴(kuò)增概況與商業(yè)產(chǎn)品(puReTaqRTG珠(beads);GEHealthcare)的擴(kuò)增概況比較來測(cè)試干燥的試劑組合物的穩(wěn)定性。用于測(cè)試的引物是SEQIDNO:1(5'-GGTTATCGAAATCAGCCACAGCGCC-3')和SEQIDNO:2(5'隱GATGAGTTCGTGTCCGTACAACTGG-3')。實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增的結(jié)果示于圖2。在圖2中，384孔聚苯乙烯板示于左上側(cè)，其用于制備干燥的試劑組合物。將干燥的試劑片劑貯存在塑料瓶(左下側(cè))和于室溫下于包含干燥劑的可再密封的袋中貯存大約1周。包含干燥的試劑的384孔板示于左上側(cè)，其用粘合密封裝置覆蓋。人DNA模板的不同稀度的標(biāo)準(zhǔn)曲線示于右上側(cè)。XDNA的不同稀度的實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線示于右下側(cè)。最后，實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增反應(yīng)的成功證明干燥的試劑組合物是穩(wěn)定的。實(shí)施例2:于96孔二氧化硅塑沖莫中進(jìn)行的干燥的PCR混合物的制備按照實(shí)施例1制備生物學(xué)試劑制劑和形成玻璃的填充材料并且將它們混合在一起。使用自動(dòng)移液器將大約20^試劑混合物分配入96孔二氧化硅塑模(圖3,左上側(cè))。將二氧化硅塑模置于預(yù)先冷卻的(-46。C)Vertis冷凍干燥器中進(jìn)行大約60分鐘來冷凍試劑。然后按照前述表2中所描述的方法使冷凍的試劑經(jīng)歷第一和隨后的第二干燥過程?？赏ㄟ^簡(jiǎn)單地用粘合密封裝置覆蓋和通過將板置于包含干燥劑的鋁袋中來將干燥的試劑貯存在作為完整包裝的塑模中。備選地，作為千燥的試劑餅從塑模取出干燥的試劑，然后將其貯存在包含干燥劑的瓶中。通過根據(jù)實(shí)施例1的XDNA的實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增和將擴(kuò)增概況與商業(yè)產(chǎn)品(puReTaqRTG珠；GEHealthcare)的擴(kuò)增概況比較來測(cè)試千燥的試劑組合物的穩(wěn)定性。結(jié)果示于圖3。在圖3中，96孔二氧化硅塑模示于左上側(cè)，其用于制備干燥的試劑組合物。在進(jìn)行XDNA功能測(cè)試前在包含干燥劑的可再密封的袋中將干燥的試劑立方塊貯存在塑料瓶(左下側(cè))中進(jìn)行1周。XDNA模板的不同稀度的標(biāo)準(zhǔn)曲線示于右上側(cè)。人的不同稀度的實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增圖示于右下側(cè)?？傊?，實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增反應(yīng)的成功證明干燥的試劑組合物是穩(wěn)定的。實(shí)施例3:于96孔聚苯乙板中進(jìn)行的干燥的PCR混合物的制備按照實(shí)施例1制備生物學(xué)試劑制劑和形成玻璃的填充材料并且將它們混合在一起。使用液體分配自動(dòng)裝置分配10nl試劑混合物(圖1,左下側(cè))。將96孔板置于96孔金屬支架上(圖4)。將與金屬支架一起的96孔板置于預(yù)先冷卻的(-46。C)Vertis冷凍干燥器中進(jìn)行大約60分鐘來冷凍試劑。然后按照前述表2中所描述的方法使冷凍的試劑經(jīng)歷第一和隨后的第二干燥過程?？赏ㄟ^簡(jiǎn)單地用粘合密封裝置或帽或熱密封裝置在熱封機(jī)的幫助下覆蓋板來將干燥的試劑貯存在作為完整包裝的96孔板中。使用新制備的"濕"制劑和與puReTaqRTG珠一起的干燥的試劑進(jìn)行XDNA實(shí)時(shí)PCR功能測(cè)試。將密封的板在室溫下或在40。C的培養(yǎng)箱中于包含干燥劑的袋中貯存8天。通過XDNA的實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增(根據(jù)實(shí)施例1)和將擴(kuò)增概況與商業(yè)產(chǎn)品(puReTaqRTG珠；GEHealthcare)的擴(kuò)增概況比較來測(cè)試干燥的試劑組合物的穩(wěn)定性。結(jié)果示于圖6、7和8。圖6顯示使用96孔干燥的PCR餅進(jìn)行的XqPCR和與"濕"制劑和pureTaqRTG珠的比較。該圖顯示4務(wù)照本發(fā)明的實(shí)施方案制備的干燥的PCR試劑的穩(wěn)定性。使用始于1千萬個(gè)拷貝至IO個(gè)拷貝的不同濃度的XDNA作為模板連同無模板的對(duì)照進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增。對(duì)于當(dāng)前形式(右上方)、puReTaqRTG珠(左下方)和'濕'制劑(左上方)，在Ct值和PCR效率(右下方的表)方面注意到相似的性能。圖7顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案制備的干燥的PCR試劑的穩(wěn)定性。將干燥的PCR混合物在40。C或室溫(RT)下貯存8天，然后用于XDNA的qPCR。按照本發(fā)明制備的試劑，與商業(yè)puReTaqRTG珠相比，獲得相似的性能。左上角于RT下貯存的干燥的PCR試劑餅。右上角于40。C下貯存的干燥的PCR試劑餅。左下角于RT下貯存的puReTaqRTG珠。右下角于40。C下貯存的puReTaqRTG珠。圖8顯示當(dāng)前形式試劑和pureTaqRTG珠在室溫和40°C下的Ct值和PCR效率。實(shí)施例4:用于實(shí)時(shí)PCR測(cè)定的干燥的試劑的制備實(shí)時(shí)PCR成為日益普遍的用于基因表達(dá)分析的測(cè)定平臺(tái)。用于檢測(cè)實(shí)時(shí)PCR中擴(kuò)增的產(chǎn)物的一個(gè)方法使用與^t板的特定部分同源的雙標(biāo)記單鏈(ss)DNA探針。該探針上的熒光修飾用作報(bào)道分子(reporter)(FAM)和猝滅劑(TAMRA)。在單鏈模板存在的情況下，探針與模板退火，但由于報(bào)道分子染料與猝滅劑染料的緊密相鄰而不發(fā)出熒光信號(hào)。當(dāng)TaqDNA聚合酶乂人才莫^1擴(kuò)增DNA時(shí)，酶的5，-3，外切核酸酶活性切割與模板退火的標(biāo)記的探針，從而釋放猝滅劑染料，從而允許報(bào)道分子發(fā)熒光。然后通過實(shí)時(shí)儀器記錄熒光信號(hào)。我們?cè)诒疚闹凶C明PCR引物和TaqMan探針一起可在賦形劑存在的情況下進(jìn)行凍干，并且與其中引物和探針未進(jìn)行凍干的反應(yīng)相比可用于實(shí)時(shí)PCR而無功能損失。用于制備用于測(cè)定P-肌動(dòng)蛋白的2.5x濃縮制劑的制劑包括25mMTrispH9、125mMKC1、3.75mMMgCl2、0.6mg/mlBSA、0.5mMdNTPs、0.25U/|ulrTaq、0.05%Tween20、0.05%NP-40、1.5^Mp-肌動(dòng)蛋白正向引物(SEQIDNO:3:5，國(guó)TCACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3')、1.5jaM卩-肌動(dòng)蛋白反向引物(SEQIDNO:4:5，-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3，)、1|3-肌動(dòng)蛋白探針(SEQIDNO:5:5，-FAM-ATGCCC_N(TAMRA)CCCCCATGCCATCCTGCGTp陽3')、6.25%Ficoll70、6.25%Ficoll400和10%松三糖。將10微升等分試樣的制劑移液入96孔板，然后進(jìn)行凍干。將單一干燥的餅和變化的量的人基因組DNA模板在25込l的終體積中進(jìn)行再水化。使用ABI7900FastRealTime儀進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)。將反應(yīng)與上述不包含引物和探針的相似制劑進(jìn)行比較。對(duì)于這些在后的反應(yīng)，在PCR反應(yīng)設(shè)置期間加入了引物和探針。此外，可商購(gòu)獲得的puReT叫RTG珠用作另外的對(duì)照。圖9顯示這些反應(yīng)的結(jié)果。左上圖使用凍干的試劑(包括TaqMan引物和探針)的實(shí)時(shí)PCR。左下圖凍干的試劑對(duì)照(引物和探針不包括在凍干的制劑中，但在實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)之前加入)。右上圖商業(yè)puReT叫RTG珠對(duì)照(所有其他試劑未進(jìn)行凍干)。所有反應(yīng)產(chǎn)生等價(jià)的擴(kuò)增概況、R值和斜率。當(dāng)puReTaqRTG反應(yīng)用于產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線而將其他反應(yīng)視為未知的時(shí)，具有等量的模板DNA的反應(yīng)落在標(biāo)準(zhǔn)曲線上(右下圖)。我們的結(jié)果證明TaqMan引物和探針易于進(jìn)行RTG整合。實(shí)施例5:包含Phi29DNA聚合酶的干燥的試劑的制備Phi29DNA聚合酶廣泛地用于全基因組擴(kuò)增以及滾環(huán)擴(kuò)增。我們將組擴(kuò)增的制劑中進(jìn)行凍干。我們的分析證明凍干的制劑在進(jìn)行全基因組擴(kuò)增中具有與"濕"制劑相同的活性。GenomiPhiHY(HighYield)DNA擴(kuò)增試劑盒(GEHealthcare)包括通過等溫鏈置換擴(kuò)增進(jìn)行全基因組擴(kuò)增所必需的所有組分。用于GenomiPhi反應(yīng)的原材料可以是純化的DNA或非純化的細(xì)胞裂解物。DNA的微克量可以在僅僅少數(shù)小時(shí)內(nèi)從納克量的原材料產(chǎn)生。來自GenomiPhiHY反應(yīng)的一般DNA產(chǎn)量為每50|lU反應(yīng)40-50pg,平均產(chǎn)物長(zhǎng)度大于10kb。由于酶的校對(duì)3，-5，外切核酸酶活性，DNA復(fù)制極其精確。將包含Phi29DNA聚合酶、隨機(jī)六聚體、dNTP和GenomiPhiHY反應(yīng)緩沖劑以及穩(wěn)定劑Ficoll70、Fico11400、松三糖和BSA的GenomiPhi反應(yīng)混合物作為2X混合物制備。將10pi體積等分試樣的混合物分配入12孔PCR帶管(striptube)。使用VirTis冷凍干燥器將分配的產(chǎn)物凍干成餅。將干燥的產(chǎn)物在室溫或4(TC下貯存35天。使用低至10ng的人基因組DNA,用這些產(chǎn)物成功地進(jìn)行全基因組擴(kuò)增。在第O時(shí)間和在RT或4(TC下貯存35天后，將這與使用新制備的混合物進(jìn)行的全基因組擴(kuò)增進(jìn)4于比4交。圖10顯示使用凍干試劑或"濕"混合物進(jìn)行的全基因組擴(kuò)增測(cè)定的結(jié)果。將10ng的人基因組DNA用作模板材料，在30。C下進(jìn)行90分鐘的擴(kuò)增反應(yīng)。預(yù)期應(yīng)當(dāng)在90分鐘內(nèi)產(chǎn)生大于4pg的DNA。使用PicoGreen測(cè)定，即使用已在40。C下貯存35天的凍干的試劑也檢測(cè)到強(qiáng)烈的擴(kuò)增。Phi29DNA聚合酶以凍干的形式被成功地穩(wěn)定化。實(shí)施例6:用于體外轉(zhuǎn)錄的干燥的試劑的制備轉(zhuǎn)錄是由所有類型的細(xì)胞常規(guī)進(jìn)行的至關(guān)重要的生物學(xué)過程，在該過程中使用DNA模板，利用依賴DNA的RNA聚合酶例如T7RNA聚合酶制備RNA。體外轉(zhuǎn)錄(IVT)是在試管中在細(xì)胞外進(jìn)行的產(chǎn)生由終端用戶選擇的轉(zhuǎn)錄物的該相同過程。然后可將所得的RNA分子用于蛋白質(zhì)的體外翻譯或雜交反應(yīng)例如RNA印跡、DNA印跡、樣t陣列分析和顯微注射。我們成功地產(chǎn)生了凍干的環(huán)境溫度穩(wěn)定的IVT試劑，其中將除去模板的RNA生產(chǎn)所需要的所有組分在賦形劑存在的情況下進(jìn)行凍干。這極大地簡(jiǎn)化了IVT反應(yīng)，從而使終端用戶只需要加入才莫板DNA和水來;^士臺(tái)&^。用于產(chǎn)生凍干的試劑的IVT制劑包括40mMTrispH8.0、0mMMgCl2、4mM亞精胺、10mMDTT、50|ug/mlBSA、10mMNaCl、0.5mMATP、0.5mMCTP、0.5mMGTP、0.5mMUTP、2URNAGuard、10UT7RNA聚合酶(GEHealthcare)、6.25%Ficoll400、6.25%Ficoll70、10%松三糖。將制備的制劑以25^tl的等分試樣分配入8孔帶管，然后按照實(shí)施例1和表2進(jìn)行凍干。使用來自RocheSP6/T7IVT試劑盒的對(duì)照DNA測(cè)試干燥的試劑餅。使用RocheSP6/T7IVT試劑盒平行進(jìn)行IVT反應(yīng)。如所預(yù)期的，使用凍干的試劑以及Roche試劑盒產(chǎn)生大約1000個(gè)堿基對(duì)的轉(zhuǎn)錄物(圖11)。因此，轉(zhuǎn)錄所必需的試劑在賦形劑存在的情況下被成功地凍干，且其可在DNA才莫板存在的情況下在正確的反應(yīng)體積中進(jìn)行再水化來產(chǎn)生RNA轉(zhuǎn)錄物。盡管已顯示和描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，但在本領(lǐng)域內(nèi)^艮顯然的是，可在不背離本發(fā)明的教導(dǎo)的情況下，進(jìn)行變化和修飾。上述描述于現(xiàn)有技術(shù)在它們的正確的觀點(diǎn)中考慮時(shí)，本發(fā)明的實(shí)際范圍意欲在下列權(quán)利要求中進(jìn)行限定。權(quán)利要求1.制備干燥的試劑制劑的方法，其包括步驟(a)提供至少一種經(jīng)緩沖的生物學(xué)試劑的水溶液；(b)將形成玻璃的填充材料與經(jīng)緩沖的試劑溶液混合來形成其中填充材料的濃度足以促進(jìn)玻璃狀多孔組合物形成的混合物；(c)將混合物以基本上均勻的滴的形式分配入多孔容器的孔中，其中單個(gè)滴分配入各個(gè)孔；(d)干燥所述容器中的滴以形成試劑制劑；其中所述試劑制劑是水溶性的且具有對(duì)于室溫穩(wěn)定性是足夠的Tg。2.權(quán)利要求1的方法，其還包括將干燥的滴收集入用于干燥的試劑的延長(zhǎng)的貯存的試劑瓶。3.權(quán)利要求1的方法，其還包括用密封帶或熱密封裝置密封多孔容器以進(jìn)行干燥的試劑的延長(zhǎng)的貯存。4.權(quán)利要求3的方法，其中所述密封帶是熱激活的。5.權(quán)利要求l的方法，其中所述多孔容器是二氧化硅塑模。6.權(quán)利要求l的方法，其中所述多孔容器是聚苯乙烯板。7.權(quán)利要求6的方法，其中所述聚苯乙烯板是96孔板。8.權(quán)利要求6的方法，其中所述聚苯乙烯板是384孔板。9.權(quán)利要求6的方法，其還包括，在所述干燥步驟之前，將所述聚苯乙烯板置于金屬塑模上，其中所述多孔聚苯乙烯板的每一個(gè)孔的外壁與所述金屬塑模的孔緊密接觸。10.權(quán)利要求l的方法，其中所述干燥步驟通過凍干來實(shí)現(xiàn)。11.權(quán)利要求l的方法，其中所述至少一種經(jīng)緩沖的生物學(xué)試劑是用于生物學(xué)測(cè)定的測(cè)定混合物。12.權(quán)利要求1的方法，其還包括在所述干燥步驟之前冷凍所述分配的混合物。13.包含根據(jù)權(quán)利要求1的方法制備的干燥的試劑制劑的試劑組合物。14.權(quán)利要求13的試劑組合物，其中所迷干燥的試劑制劑包含足夠的用于單次測(cè)定的生物學(xué)試劑。15.權(quán)利要求11的方法，其中所述測(cè)定混合物包括除了擴(kuò)增模板和引物外的用于PCR所必需的所有試劑。16.權(quán)利要求11的方法，其中所述測(cè)定混合物包括除了模板外的用于體外轉(zhuǎn)錄所必需的所有試劑。17.權(quán)利要求11的方法，其中所述測(cè)定混合物包括除了模板外的用于全基因組擴(kuò)增所必需的所有試劑。18.權(quán)利要求11的方法，其中所述測(cè)定混合物包括除了模板外的用于實(shí)時(shí)PCR測(cè)定所必需的所有試劑。全文摘要本發(fā)明涉及制備干燥的試劑制劑的方法，該方法包括步驟提供至少一種經(jīng)緩沖的生物學(xué)試劑的水溶液；將形成玻璃的填充材料與經(jīng)緩沖的試劑溶液混合來形成其中填充材料的濃度足以促進(jìn)玻璃狀多孔組合物形成的混合物；將混合物以基本上均勻的滴的形式分配入多孔容器的孔中，其中單個(gè)滴分配入各個(gè)孔；干燥容器中的滴來形成試劑制劑。試劑制劑是水溶性的且具有對(duì)于室溫穩(wěn)定性是足夠的Tg。文檔編號(hào)A61K9/14GK101516337SQ200780034507公開日2009年8月26日申請(qǐng)日期2007年9月13日優(yōu)先權(quán)日2006年9月18日發(fā)明者J·W·法喬斯,M·D·皮爾斯,R·波納卡申請(qǐng)人:通用電氣醫(yī)療集團(tuán)生物科學(xué)公司