專利名稱：：新型線蟲蛋白質(zhì)及其在生產(chǎn)抗蠕蟲藥和疫苗中的應(yīng)用的制作方法新型線蟲類蛋白質(zhì)及其在生產(chǎn)抗蠕蟲藥和疫苗中的應(yīng)用發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于鑒定新型抗蠕蟲藥的篩選，特別涉及抗血矛線蟲屬蠕蟲的藥劑，以及用作針對蠕蟲如血矛線蟲屬(haemonchus)蠕蟲的疫苗或免疫原性藥劑的蛋白服的制備。
背景技術(shù)：
：蠕蟲寄生蟲引起寬范圍的家畜動物的疾病和感染，當(dāng)它們導(dǎo)致疾病和感染時，其導(dǎo)致生產(chǎn)力喪失并且甚至導(dǎo)致動物死亡，因此有相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)重要性。食血(bloodfeeding)線蟲類血矛線蟲屬感染反芻動物的胃腸道內(nèi)層。它在世界范圍內(nèi)具有非常值得考慮的經(jīng)濟(jì)重要性，具有從家畜動物的體重增加的減少、生產(chǎn)力喪失和缺乳到死亡范圍內(nèi)的影響。貧血是感染的基本特征。當(dāng)大量幼蟲感染綿羊時，在綿羊仍然看起來是健康的時候可能突然發(fā)生死亡。這稱為"急性潛伏期病"，此時用糞便檢查看不到卵。包括較少量蠕蟲的慢性感染可能引起水腫(下頜水腫)，缺鐵性貧血癥，進(jìn)展性虛弱，毛發(fā)斷裂(woolbreaks),和死亡。四階段幼蟲和成蟲都刺穿胃壁中的血管，并且以所釋放的血液為生。因此，宿主利用營養(yǎng)來替換失去的血液成分，而不是用于生長和毛發(fā)生產(chǎn)。一種相關(guān)的線蟲胃線蟲屬(Ostertagia)具有相似的作用。疾病血矛線蟲病(haemonchosis)和奧斯特塔格線蟲病(ostertagiasis)特征在于浪費(fèi)，所述浪費(fèi)部分是由于與嚴(yán)重感染相關(guān)的食欲缺乏引起。相關(guān)的攝取血液的線蟲，鉤蟲感染反芻動物、狗、貓、其它食肉動物、和人。超過7億人感染了鉤蟲，特別是美洲鉤蟲(Necatoramericanus)，每年有700-900,000新病例，和50-60,000例由這些寄生蟲的災(zāi)害引起的死亡。蠕蟲寄生蟲的控制目前主要依賴與牧場管理結(jié)合的抗蠕蟲藥的使用。然而，這樣的技術(shù)具有許多缺點(diǎn)…-頻繁的藥物施用和牧場管理通常不切實(shí)際，并且耐藥性蠕蟲品系變得愈加普遍。從血矛線蟲屬獲得的包含蛋白雙聯(lián)體H110D的提取物在注射給綿羊時提供抗血矛線蟲病的保護(hù)。該雙聯(lián)體H110D在血矛線蟲屬蠕蟲的腸內(nèi)腔表面上發(fā)現(xiàn)。H110D的制備和應(yīng)用已經(jīng)在WO-A-88/00835中進(jìn)行了描述。在WO-A-89/00163中，在寄生蟲線蟲蛇形毛圓線蟲(Trichostrongyluscolubriformis)幼蟲中描述了這樣一種蛋白，該蛋白在十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)上具有41Kd的分子量。該蛋白從勻槳的蛇形毛圓線蟲(T.colubriformis)三階段幼蟲中提取。己經(jīng)克隆了關(guān)于該蛋白的基因。在捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(Haemonchuscontortus)中發(fā)現(xiàn)了一種非常相似的DNA序列，盡管尚未報(bào)道血矛線蟲屬蠕蟲基因的體內(nèi)表達(dá)。該文獻(xiàn)還報(bào)道了使用由重組生物體表達(dá)的抗原在綿羊中針對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的接種試驗(yàn)的結(jié)果。在這些試驗(yàn)中，報(bào)告了在糞便中減少的卵數(shù)量，總體上平均減少40%的卵數(shù)量。在接種后63天宰殺時，發(fā)現(xiàn)接種組綿羊含有比對照組平均少52%的蠕蟲。EP0434909公開了具有抗凝活性的蛋白，其可以有效用作疫苗。在WO9402169和WO9526402中公開了其它潛在有效用作疫苗候選物的蛋白。然而，對鑒定新的抗蠕蟲藥和/或開發(fā)針對這樣的寄生蟲的新型疫苗存在緊急需求。本發(fā)明的目的之一是提供用于開發(fā)新抗蠕蟲藥的肽或蛋白。提供用于在反芻動物中提高免疫反應(yīng)的肽或蛋白也是本發(fā)明的目的之一。發(fā)明概述本發(fā)明部分是基于本發(fā)明人鑒定和表征了一種在捻轉(zhuǎn)血矛線蟲中表達(dá)的新型蛋白。本發(fā)明人己經(jīng)鑒定了多種與所述蛋白相關(guān)的生理和酶活性，開創(chuàng)了將所述蛋白用作治療蠕蟲且特別是血矛線蟲屬蠕蟲感染的藥物靶標(biāo)和疫苗候選物的可能性。如在下文更詳細(xì)地描述地，本發(fā)明人已經(jīng)在變性條件下鑒定了蛋白的表觀分子量，約55KDa。基因組和蛋白質(zhì)組研究表明，它包含來自捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(Hco"toWw)的2種高度同源的蛋白。所述蛋白表現(xiàn)出與秀麗隱桿線蟲(C.中的脯氨酰羧肽酶樣蛋白的同源性，并且包括2個絲氨酸羧肽酶S28型結(jié)構(gòu)域。對該蛋白的生理學(xué)和酶學(xué)研究表明所述蛋白具有顯著的二肽基肽酶IV(DPPIV)活性和弱DPPII活性，并且能夠延遲血纖蛋白凝塊形成。因此，在本發(fā)明第一方面，提供用于鑒定抗蠕蟲藥的篩選測定方法，所述測定方法包括使某種藥劑與蠕蟲蛋白接觸的步驟，所述蠕蟲蛋白特征為表現(xiàn)出二肽基肽酶IV活性，并且導(dǎo)致血液凝固時間的增加，從而檢測所述藥劑是否能夠調(diào)節(jié)所述蛋白的所述活性或血液凝固作用。便利地，所述蛋白包括圖2a所示的序列，或如圖2c和2d所示的編碼所述蛋白的核苷酸序列，或基本與其同源或功能等價。也可以使用所述蛋白的片段，只要所述片段表現(xiàn)出所述DPPIV活性和任選地所述增加的血液凝固時間作用。應(yīng)該理解，術(shù)語"調(diào)節(jié)活性"涉及藥劑提高或降低由所述酶表現(xiàn)出的DPPIV和任選地所述血液凝固活性的能力。理想地，所述藥劑將能夠抑制或降低所述酶的DPPIV活性，并且任選地抑制或降低所述酶增加血液凝固時間的能力。根據(jù)第一方面，所述酶可以通過重組方法提供，如在下文更詳細(xì)所述，或簡單地從寄生蟲本身純化。所述酶可以從寄生蟲的食血L4或成蟲階段分離。在能夠測定藥劑對所述酶的DPPIV活性的作用方面，在本領(lǐng)域中許多DPPIV活性測定方法是已知的。一種這樣的測定是由普洛麥格(普洛麥格集團(tuán)(PromegaGroup),美國)提供的DPPIV-GbTM蛋白酶測定方法，其使用促發(fā)光的(proluminescent)DPPIV底物，即Gly-Pro-氨基螢光素，其在由DPPIV酶裂解該底物且隨后由螢光素酶作用后產(chǎn)生"輝光(glow)-型"發(fā)光信號。另一種DPPIV測定方法使用羅丹明llO-綴合的甘氨酸-脯氨酸，其在裂解時(通過羅丹明110)以異硫氰酸熒光素(FITC)波長發(fā)光。另一種DPPIV測定方法使用生色底物，如對-硝基苯胺(pNA)，其在從其二肽上裂解時導(dǎo)致在405nm吸光度的增加。一種這樣的試劑盒由美國PA的BIOMOL國際(BIOMOLInternational,PA,USA)提供。因此，應(yīng)該理解，在本領(lǐng)域中存在多種已知的DPPIV測定方法，并且應(yīng)該理解本發(fā)明不限于任何具體的DPPIV測定方法。典型地，待檢測的藥劑可以是，例如，小的化學(xué)個體，對所述蛋白特異性的抗體，設(shè)計(jì)靶向所述蛋白肽的表達(dá)的RNAi分子，肽模擬物等，可以與分離的酶接觸，并且然后測量所述酶的DPPIV活性。通過與在不加入所述藥劑的條件下所述酶的DPPIV活性水平進(jìn)行比較，可能檢測所述藥劑是否具有對所述酶的DPPIV活性的任何調(diào)節(jié)作用。自然地，一旦已經(jīng)鑒定某種藥劑對所述酶具有作用，則所述藥劑可以施用給活的蠕蟲，如捻轉(zhuǎn)血矛線蟲，以檢測其對該生物體的作用。然后，可以將所述藥劑施用給感染了所述蠕蟲的宿主動物，以檢測所述藥劑對所述寄生蟲在其存在于宿主生物體內(nèi)時的作用，并且確保所述藥劑對所述被感染的宿主動物無害。因此，理想地，按照本發(fā)明鑒定的抗蠕蟲藥是對寄生蟲特異的，并且基本不影響可能存在于宿主動物中的DPPIV蛋白的DPPIV活性。在本領(lǐng)域中，已經(jīng)存在多種已知的DPPIV抑制劑，諸如DiprotinA和B,vildagliptin,Sitagliptin,二甲雙胍,Saxagliptin和MK-0431纈氨酸pyrrolidide,異亮氨酸t(yī)hiazolidide,FE99901(Ferring制藥(FerringPharmaceuticals)),NVP-DPP728(Novartis)，LAF237(Norvartis),SYR322(Syrrx，公司)，SYR619(Syrrx，公司)，并且這些中的任一種或全部可以表現(xiàn)出本發(fā)明所述的抑制酶的活性。事實(shí)上，本發(fā)明人已經(jīng)表明，例如，DiprotinA部分抑制本發(fā)明所述的所述酶的DPPIV型活性。因此，在另一個方面中，提供了DPPIV抑制劑在制備治療蠕蟲感染特別是捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染的藥物中的應(yīng)用。還提供了治療被蠕蟲感染的動物如反芻動物的方法，所述方法包括對所述動物施用DPPIV抑制劑的步驟。不希望受到理論限制，考慮了任何這樣的DPPIV抑制劑，通過調(diào)節(jié)本發(fā)明所述的所述酶的活性，可以消除蠕蟲的生育力、破壞、抑制或殺死蠕蟲，由此治療被感染的動物宿主。除了DPPIV活性之外，本發(fā)明人還觀察到本發(fā)明所述的酶具有增加血液凝固時間的活性。因此，在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，篩選步驟可以用來鑒定抑制所述酶增加凝固時間的能力的藥劑。同樣不希望受到理論限制，考慮了任何這樣的藥劑可以引起由蠕蟲攝取的血液食物在該蠕蟲內(nèi)凝固，如以前一樣導(dǎo)致蠕蟲生物體的破壞或死亡。許多用于檢測血液凝固時間的測定方法是已知的，包括，例如，"凝血因子II時間"和"激活的部分促凝血酶原激酶時間"檢測。這些檢測測量在將特定的激活性化學(xué)劑添加到血液樣品中后血液凝固所花費(fèi)的時間。因此，通過進(jìn)行在存在和不存在藥物候選物的條件下包括本發(fā)明所述的蛋白的檢測，可以告知所述藥物候選物是否能夠調(diào)節(jié)受所述蛋白影響的血液凝固時間。使用血液成分而不是全血的相似檢測是可能的。實(shí)例包括血纖蛋白凝固時間或血纖蛋白凝塊重聚集檢測。通常地，凝塊形成通過使用光度測定方法檢測，因?yàn)槟龎K表現(xiàn)出與包括檢測介質(zhì)的非凝塊不同的光學(xué)特性。在本發(fā)明的另一個方面中，還提供這樣的核酸分子，其包括一種或多種核苷酸序列，所述核苷酸序列編碼蠕蟲絲氨酸羧肽酶或其酶促反應(yīng)性部分或抗原性部分，其基本上對應(yīng)于圖2a所示的預(yù)測的氨基酸序列的全部或部分；或如圖2c或2d所示能夠編碼所述酶或其部分的核苷酸序列；或編碼蠕蟲絲氨酸羧肽酶的序列，其與所述序列的任一個基本同源或可以與所述序列的任一個雜交。因此，本發(fā)明的核酸可以是單鏈或雙鏈DNA，cDNA或RNA。在一種物種內(nèi)不同蠕蟲品系之間，在蠕蟲生命周期的不同階段之間(例如，在幼蟲和成蟲階段之間)，在不同地理起源的相似品系之間，并且還在同一種蠕蟲內(nèi)部，可能發(fā)生在羧肽酶-編碼核苷酸序列中的改變。所述變化包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。當(dāng)用于本文時，"基本上同源"包括具有約60%或更多，例如75%,80%,90%或95%或更多的序列同一性的那些序列，以及還包括功能-等價等位基因變體和通過一個或多個堿基取代、添加、倒位和/或刪除進(jìn)行修飾的相關(guān)序列。"功能等價"意指編碼具有羧肽酶活性的多肽的核酸序列，所述多肽是相似酶促活性的，即，其能夠催化相同的生化或生理反應(yīng)(例如，表現(xiàn)出DPPIV活性和/或增加血液凝固時間的能力)，或是相似免疫反應(yīng)性的，即，其產(chǎn)生針對蠕蟲的宿主保護(hù)性抗體。在本發(fā)明范圍內(nèi)還包括與圖2c或2d中所示的序列雜交的核酸分子，或如上述定義的任何基本同源或功能等價序列。當(dāng)用于本文時，"雜交"定義在中等或高度嚴(yán)格性例如2xSSC,65°C(其中SSC=0.15MNaCl,0.015M檸檬酸鈉，pH7.2)下結(jié)合的那些序列。產(chǎn)生這樣的衍生物相關(guān)序列的方法，例如，通過位點(diǎn)定向誘變，隨機(jī)誘變，或酶裂解和/或連接核酸，在本領(lǐng)域內(nèi)是公知的，確定這樣修飾的核酸是否與所述序列具有顯著同源性的方法，例如通過雜交或核酸測序，在本領(lǐng)域內(nèi)也是公知的。因此，提供本發(fā)明所述的核酸分子能夠大量獲得重組羧肽酶、或其酶性或免疫原性片段，由此允許進(jìn)行上述篩選測定方法和/或開發(fā)抗-蠕蟲疫苗和/或用作抗凝血劑。因此，在本發(fā)明另一方面中，提供包括一種或多種核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列編碼用于藥物篩選測定方法的一種或多種多肽和/或用于產(chǎn)生抗蠕蟲寄生蟲的保護(hù)性抗體的一種或多種多肽，其序列結(jié)合來自圖2a所示的羧肽酶-編碼序列的一個或多個酶性或抗原性區(qū)域。'本發(fā)明還擴(kuò)展至合成的多肽，所述合成的多肽包括組成羧肽酶或其酶性或抗原性部分的一個或多個氨基酸序列，其基本上對應(yīng)于圖2a所述的氨基酸序列的全部或部分，或其功能等價變體。所述酶的酶性部分應(yīng)該理解為比全長蛋白序列短，但是能夠表現(xiàn)出至少一種蛋白生化或抗原性特性，諸如其DPPIV或血液凝固時間活性中的提高。當(dāng)在本文中引用時，術(shù)語"抗體"包括完整的抗體，其包括IgG,IgM和IgA同種型的那些，以及其任何抗原結(jié)合片段(g卩，"抗原-結(jié)合部分")或單鏈。"抗體"是指一種糖蛋白，其包括中間通過二硫鍵連接的至少兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈，或其抗原結(jié)合部分。每條重鏈包括重鏈可變區(qū)(在本文簡寫為VH)和重鏈恒定區(qū)。IgG重鏈恒定區(qū)包括4個結(jié)構(gòu)域即CH1,鉸鏈，Ch2和CH3。每條輕鏈包括輕鏈可變區(qū)(在本文簡寫為VL)和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)包括1個結(jié)構(gòu)域即C^。Vh和Vt區(qū)可以進(jìn)一步細(xì)分為高可變性區(qū)域，其稱為互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)，散布更保守的稱為構(gòu)架區(qū)(FR)的區(qū)域。每個Vh和VL由3個CDRs和4個FRs組成，其以下列順序從氨基端到羧基端排列FR1,CDR1，F(xiàn)R2,CDR2,FR3,CDR3,FR4。重鏈和輕鏈的可變區(qū)包含與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。抗體的恒定區(qū)可以調(diào)節(jié)免疫球蛋白與宿主組織或因子的結(jié)合，所述因子包括免疫系統(tǒng)的各種細(xì)胞(例如，效應(yīng)器細(xì)胞)和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一成分(Clq)。當(dāng)用于本文時，術(shù)語抗體的"抗原-結(jié)合部分"(或簡稱為"抗體部分")是指抗體的保留特異性結(jié)合本發(fā)明的蛋白或蛋白片段能力的一個或多個片段。已經(jīng)表明，抗體的抗原-結(jié)合功能可以由全長抗體的片段執(zhí)行。包含在術(shù)語抗體的"抗原-結(jié)合部分"的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i)Fab片段，其為由VL,VH,Cl和CH1結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；(ii)F(ab，)2片段，其為包括通過鉸鏈區(qū)二硫鍵連接的2個Fab片段的二價片段;(iii)Fd片段，其由VH和CH1結(jié)構(gòu)域組成;(iv)Fv片段，其由抗體一條臂的Vl和Vh結(jié)構(gòu)域組成；(v)dAb片段(Ward等，(1989)自然(Nature)^1:544-546)，其由VH結(jié)構(gòu)域組成；和(vi)分離的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)。此外，盡管Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域Vl和Vh由獨(dú)立的基因編碼，但是它們可以使用重組方法通過合成的連接體結(jié)合，所述連接體能使它們形成單條蛋白鏈，其中Vl和Vh區(qū)配対形成單價分子(稱為單鏈Fv(scFv);參見，例如，Bird等.(1988)科學(xué)(Science)242:423-426;和Huston等.(1988)美國國家科學(xué)院學(xué)報(bào)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)^1:5879-5883)，或它們可以通過其它方法如使用二硫鍵或通過二聚化基序結(jié)合。這樣的單鏈抗體也意欲包含在術(shù)語抗體的"抗原-結(jié)合部分"內(nèi)。這些抗體片段使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)獲得，并且所述片段以與完整抗體相同的方式篩選用途。其它已知的抗體片段包括納米抗體，與其相關(guān)的技術(shù)授權(quán)給比利時的Ablynx。本發(fā)明還包括與本文描述的抗體和抗體片段基本同源的變體和等價物。這些可以包含，例如，保守取代，即，由相似氨基酸取代一個或多個氨基酸。例如，保守取代是指用在同一大組內(nèi)的另一種氨基酸取代一種氨基酸，例如，用另一種酸性氨基酸取代一個酸性氨基酸，用另一個堿性氨基酸取代一個堿性氨基酸，或用另一個中性氨基酸取代一個中性氨基酸。保守氨基酸取代所指的內(nèi)容在本領(lǐng)域中是公知的。當(dāng)用于本文時，"特異性結(jié)合"是指抗體與預(yù)先確定的抗原結(jié)合。典型地，抗體以1(^M或更小的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合，并且以這樣的KD結(jié)合預(yù)先確定的抗原，所述KD比與除所述預(yù)先確定的抗原或緊密相關(guān)的抗原之外的非特異性抗原(例如，BSA，酪蛋白)結(jié)合的Ko小至少兩倍。本發(fā)明還擴(kuò)展至在人或非人動物中刺激針對蠕蟲寄生蟲的免疫反應(yīng)的疫苗組合物，所述組合物包括至少一種上述合成的多肽，以及藥用載體。當(dāng)用于本文時，術(shù)語"多肽"包括全長蛋白、和較短的肽序列二者。本發(fā)明還涉及對本文鑒定的蛋白特異的抗體。所述抗體可以以治療意義用于結(jié)合所述蛋白并且干擾其活性。所述抗體可以是單克隆的或多克隆的，并且可以依據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)制備。與多肽氨基酸序列相關(guān)的"功能等價物"，如上文所用，定義與上述多肽序列相關(guān)的或由上述多肽序列衍生而來的多肽，其中所述氨基酸序列已經(jīng)通過單個或多個氨基酸取代、添加、倒位或刪除而進(jìn)行修飾，并且定義其中氨基酸己被化學(xué)修飾的序列，所述化學(xué)修飾包括糖基化或去糖基化，但是其仍然保留保護(hù)性抗原性(免疫原性)活性。所述功能等價物變體可以作為天然生物學(xué)變化存在，或可以使用已知技術(shù)制備，例如，功能等價的重組多肽可以使用下列己知技術(shù)制備位點(diǎn)定向誘變、隨機(jī)誘變、或酶促裂解和/或氨基酸的連接。本發(fā)明所述的合成多肽可以代表保護(hù)性抗原性序列。當(dāng)用于本文時，術(shù)語"保護(hù)性抗原"定義能夠產(chǎn)生宿主-保護(hù)性(免疫原性)免疫反應(yīng)的那些抗原，所述宿主-保護(hù)性(免疫原性)免疫反應(yīng)即是這樣的宿主反應(yīng)，其引起產(chǎn)生消除寄生蟲的生育力、破壞、抑制或殺死寄生蟲的免疫效應(yīng)器分子、抗體或細(xì)胞，并且由此"保護(hù)"宿主免受臨床或亞臨床疾病以及生產(chǎn)力喪失。這樣的保護(hù)性免疫反應(yīng)可以通常由產(chǎn)生這樣的抗體而證明，所述抗體能夠抑制寄生蟲的代謝功能，導(dǎo)致發(fā)育障礙、卵生產(chǎn)缺乏和/或死亡。本發(fā)明該方面所述的合成多肽可以通過在宿主細(xì)胞中表達(dá)而制備，所述宿主細(xì)胞包含重組DNA分子或包含含有所述重組DNA分子的重組DNA克隆媒介物或載體，所述重組DNA分子包括上文廣泛描述的核苷酸序列，該核苷酸序列與表達(dá)控制序列可操作性的連接。備選地，可以通過直接注射本發(fā)明所述的裸DNA分子到宿主細(xì)胞中而表達(dá)所述多肽。這樣表達(dá)的合成多肽可以是一種融合多肽，其包括表現(xiàn)出本發(fā)明所述的羧肽酶的全長或部分的生化/生理學(xué)免疫原活性的部分，和由與其融合的重組分子的DNA編碼的另一種多肽。例如，可以理想地產(chǎn)生這樣的融合蛋白，其包括與蛋白如(3-半乳糖苷酶、磷酸酶、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、脲酶、乙型肝炎核心抗原(Francis等，1989)等偶聯(lián)的本發(fā)明所述的合成的羧肽酶或其它多肽。大部分融合蛋白通過重組基因表達(dá)形成，在所述重組基因中，兩個編碼序列協(xié)調(diào)地符合閱讀框連接在一起。備選地，多肽可以通過化學(xué)方法在體外連接。本發(fā)明包括羧肽酶-編碼核酸分子的所有這樣的融合或雜交衍生物以及它們各自的氨基酸序列。這樣適當(dāng)重組的DNA和多肽表達(dá)技術(shù)，例如，記述在Sambrook等，1989中。備選地，所述合成多肽可以通過化學(xué)方法產(chǎn)生，諸如公知的Merrifield固相合成法。本發(fā)明的其它方面包括上述核酸分子或合成的肽或多肽用于制備在哺乳動物中特別是反芻哺乳動物中刺激免疫反應(yīng)的疫苗組合物的應(yīng)用。備選地認(rèn)為，本發(fā)明還提供在哺乳動物中特別是反芻動物中刺激針對蠕蟲寄生蟲感染的免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括給所述動物施用疫苗組合物，所述疫苗組合物包括一種或多種由上文定義的核苷酸序列編碼的多肽。疫苗組合物可以依據(jù)本發(fā)明通過疫苗制備領(lǐng)域公知的方法制備。傳統(tǒng)的疫苗制劑可以在存在一種或多種藥用載體或稀釋劑的條件下包括一種或多種本發(fā)明所述的合成多肽，以及，在適當(dāng)情形中，一種或多種合適的佐劑，例如，氫氧化鋁、皂苷、QuilA、或其更純化的形式，胞壁酰二肽、礦物油、或Novasomes。適當(dāng)?shù)妮d體包括液體介質(zhì)，如適合用作賦形劑將所述肽或多肽引入到哺乳動物中的鹽溶液。可以包括其它成分如防腐劑。備選的疫苗制劑可以包括病毒或宿主細(xì)胞，例如，微生物(例如，痘苗病毒、腺病毒、噬菌體沙門氏菌(Salmonella))，其在其中插入了本發(fā)明所述的核酸分子(例如，DNA分子)，以刺激針對由所插入的核酸分子編碼的多肽的免疫反應(yīng)。疫苗組合物的施用可以通過任何常規(guī)途徑實(shí)施，例如，口服或腸胃外，諸如通過肌內(nèi)注射，任選地以這樣的時間間隔，但不限于其進(jìn)行，例如，以7-28天的時間間隔注射兩次。如上文所述，本發(fā)明所述的羧肽酶-編碼序列的表達(dá)可以使用一些己知技術(shù)和表達(dá)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)，包括在原核細(xì)胞中如在大腸桿菌(E.COli)中表達(dá)，和在真核細(xì)胞中如酵母或(of)桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)中表達(dá)，或在轉(zhuǎn)化的哺乳動物細(xì)胞以及在轉(zhuǎn)基因動物和植物中表達(dá)。特別有利地，所述核苷酸序列可以使用轉(zhuǎn)基因線蟲系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)，諸如用于線蟲隱桿線蟲(Caenorhabditis)的系統(tǒng)，例如，在Fire，(1986);Fire等，(1989);Spieth等,(1988);Han等，(1990)中所述。本發(fā)明的另一個方面提供制備上述合成多肽的方法，所述方法包括在表達(dá)所述多肽的條件下，培養(yǎng)上述含有核酸分子的真核細(xì)胞或原核細(xì)胞，并且回收這樣產(chǎn)生的所述多肽。因此，本發(fā)明的其它方面包括包含本發(fā)明所述的核苷酸序列的克隆和表達(dá)載體。所述表達(dá)載體包括與本發(fā)明的核酸分子閱讀框匹配連接的適當(dāng)?shù)目刂菩蛄?，諸如例如翻譯(例如起始和終止密碼子)和轉(zhuǎn)錄控制元件(例如，啟動子-操縱子區(qū)、核糖體結(jié)合位點(diǎn)、終止序列)。本發(fā)明所述的載體可以包括本領(lǐng)域公知和記錄的技術(shù)所述的質(zhì)粒和病毒(包括噬菌體和真核病毒)，并且可以在多種不同表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)，所述表達(dá)系統(tǒng)也是本領(lǐng)域公知和記錄的。適當(dāng)?shù)牟《据d體包括，如上文所述，桿狀病毒以及腺病毒和痘苗病毒。本領(lǐng)域記述了多種其它病毒載體。許多技術(shù)是已知的，并且可以用來將所述載體引入到原核細(xì)胞或真核細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，或引入到生殖細(xì)胞系或體細(xì)胞中以形成轉(zhuǎn)基因動物。在文獻(xiàn)中充分描述了適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染技術(shù)。上文定義的包含本發(fā)明所述的核酸分子的轉(zhuǎn)化的或轉(zhuǎn)染的真核或原核宿主細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因生物體形成本發(fā)明的另一個方面。一般地真核表達(dá)系統(tǒng)，特別是線蟲表達(dá)系統(tǒng)，具有這樣的優(yōu)點(diǎn)，可以發(fā)生翻譯后加工，且特別是發(fā)生糖基化…-在轉(zhuǎn)基因線蟲系統(tǒng)的情形中，可以預(yù)測與在天然蛋白中發(fā)現(xiàn)的相對應(yīng)的糖基化。哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)也具有許多優(yōu)點(diǎn)。哺乳動物宿主細(xì)胞提供天然形式的良好重現(xiàn)和抗原的保護(hù)性表位，原因在于真核表達(dá)系統(tǒng)將產(chǎn)生大腸桿菌缺少的更相似的糖基化模式，二硫鍵和其它翻譯后修飾，大腸桿菌可以產(chǎn)生需要重折疊的不溶蛋白并且具有極差的天然形式重現(xiàn)。另外，哺乳動物糖基化不可能誘導(dǎo)分散(distractfrom)抗蛋白保護(hù)反應(yīng)的免疫反應(yīng)。對于人和家畜動物的保護(hù)，因此，優(yōu)選使用人或動物成纖維細(xì)胞或骨髓瘤細(xì)胞系，如HeLa，——一種人細(xì)胞系;BHK-幼倉鼠腎細(xì)胞；VERO，即一種猴子腎細(xì)胞系；FR3T3，即費(fèi)希爾速率成纖維細(xì)胞(Fisherratefibroblast);NIH3T3，即一種小鼠成纖維細(xì)胞系；C1271,即一種小鼠乳腺瘤細(xì)胞系；CV-1，即非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞；3T6，即小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；L細(xì)胞，即一種小鼠細(xì)胞系；CHO，即中國倉鼠卵巢細(xì)胞系；NSONSI,Sp2和其它小鼠骨髓瘤細(xì)胞系和大鼠骨髓瘤細(xì)胞系如YB2/0和Y3。適用于不同種類的哺乳動物細(xì)胞系的載體在本領(lǐng)域內(nèi)是公知的。通常，這些包括與編碼所述抗原或其片段的核苷酸序列可操作性連接的啟動子和/或增強(qiáng)子。適當(dāng)?shù)膯幼影⊿V40早期或晚期啟動子，例如，PSVL載體，巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動子，小鼠金屬硫蛋白I啟動子和小鼠乳腺瘤病毒長的末端重復(fù)序列。所述載體優(yōu)選地包括適合的標(biāo)記，如關(guān)于二氫葉酸還原酶或谷氨酰胺合酶的基因。這些類型的載體記述在WO86/05807,WO87/04462,WO89/01036和WO89/10404中。對宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)染可以使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)實(shí)施，例如，使用磷酸鈣、DEAE葡聚糖、1，5-二甲基-1，5-二氮十一亞甲基聚甲溴化物、原生質(zhì)體融合、脂質(zhì)體、直接的顯微注射、基因轟擊(genecannon)或電穿孔。優(yōu)選后一種技術(shù)，并且使用電穿孔轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞系的方法由Andreason等，1980描述。一般地，線性DNA比環(huán)形DNA更容易引入。發(fā)明詳述現(xiàn)在，將通過實(shí)施例和參考附圖的形式進(jìn)一步描述本發(fā)明，所述附圖顯示.-圖1絲氨酸羧肽酶富集的蛋白級分在還原條件下的SDS-PAGE圖譜。挑取約55kDa的明顯條帶(條帶A和B)，并且通過胰蛋白酶消化、肽質(zhì)量指紋分析和LC-MS/MS分析進(jìn)行分析；圖2(A)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲絲氨酸羧肽酶樣蛋白Hc-PCPl和Hc-PCP2的預(yù)測氨基酸序列。兩種蛋白中的N端信號序列的裂解位點(diǎn)用箭頭標(biāo)記。推定的糖基化位點(diǎn)用*標(biāo)記。兩種蛋白均包含用[]標(biāo)記的兩個絲氨酸羧肽酶S28型結(jié)構(gòu)域。(B)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲PCP，S的圖示，所述捻轉(zhuǎn)血矛線蟲PCP，s包含信號肽(SP)和兩個羧肽酶S28型結(jié)構(gòu)域。(C)預(yù)測的He-PCP1核苷酸序列。(D)預(yù)測的Hc-PCPS核苷酸序列。圖3通過RT-PCR顯示的//c-;7c/7/和//c-pcj^的轉(zhuǎn)錄。泳道是使用來自出鞘的L3、L4、11日齡和22日齡成蟲寄生蟲的靶RNA的獨(dú)立的RT-PCR反應(yīng)。將關(guān)于細(xì)胞質(zhì)超氧化物歧化酶(5^D^的RT-PCR用作對照，檢驗(yàn)RNA純化的均勻性。圖4二肽基肽酶活性測定。(A)在pH7.5絲氨酸羧肽酶對DPPIV和DPPII特異性底物的劑量依賴性降解。(B)在不同pH溫育的絲氨酸羧肽酶對DPPIV特異性底物的活性。(C)檢測兩種DPPIV特異性抑制劑對絲氨酸羧肽酶DPPIV型活性的作用。圖5添加絲氨酸羧肽酶(PCP，s)對血纖蛋白重聚集的抑制。(A)對照血纖蛋白單體的重聚集與用不同濃度絲氨酸羧肽酶溫育的血纖蛋白單體重聚集的比較。(B)分析DiprotinA對血纖蛋白重聚集抑制的影響。所有結(jié)果表示為在350nm測量的散射光的變化，其是對重聚集的血纖蛋白單體量的測量。圖6絲氨酸羧肽酶對血纖蛋白(x-鏈的蛋白水解性降解和DiprotinA對該活性的部分抑制。(A)血纖蛋白溶液在用絲氨酸羧肽酶溫育之前(泳道1)和溫育15秒之后(泳道2)的10。/。還原SDS-PAGE。(B)對照血纖蛋白溶液(泳道l)、用絲氨酸羧肽酶溫育15秒的血纖蛋白(泳道2)和用絲氨酸羧肽酶和DiprotinA溫育15秒的血纖蛋白(泳道3)的10%還原SDS-PAGE凝膠。圖7oc-鏈的消化產(chǎn)物和Y-鏈協(xié)同泳動和質(zhì)譜分析，表明消化從C端起始。下劃線字體表示a-鏈區(qū)域，其中陽性擊中(hits)用胰蛋白酶消化的片段獲得。注意在C端沒有獲得擊中，這表明該區(qū)域己被羧肽酶活性去除。材料和方法縱遂鎌麥膽節(jié)通過打開和清洗來自感染的綿羊的皺胃而收集成蟲捻轉(zhuǎn)血矛線蟲。將蠕蟲在PBS中勻漿，然后以3000rpm離心5分鐘。收集上清，并且將沉淀物再在PBS中勻漿，然后以3000rpm離心。合并上清，并且以10000g離心10分鐘。沉淀物用PBS洗滌1次，并將合并的上清以35000rpm離心90分鐘。將含有絲氨酸羧肽酶的沉淀物重懸在lmlPBS中，并且在分析前保存在-80。C。微敏欲微譜分叛在還原條件下在10%SDS-PAGE凝膠上分析絲氨酸羧肽酶富集的蛋白提取物。蛋白成分通過考馬斯亮藍(lán)染色顯現(xiàn)。從凝膠上切下蛋白條帶，并用于質(zhì)譜分析。簡言之，使用胰蛋白酶在凝膠中消化蛋白條帶，然后純化，并且通過MALDI-TOF質(zhì)譜分析。必要時，剩余物質(zhì)用于LC-MS/MS分析。Mascot搜索引擎用來分析質(zhì)譜和LC-MS/MS數(shù)據(jù)，并且鑒定所述蛋白。cD順游分蓐艦虔從11日齡捻轉(zhuǎn)血矛線蟲cDNA文庫分離絲氨酸羧肽酶的全長cDNA序列(從此處開始命名為//c-pq/和Z/c-;cp2)?；贓ST簇HCC00232(7/c少c;^j和HCC00298(Hc-pc;9"的共有序列，設(shè)計(jì)特異性引物，以分離每種cDNA的5'和3'末端。引物序列顯示在表1中?；蛱禺愋砸锱cT3cDNA文庫載體引物組合使用。將PCR產(chǎn)物克隆在pGEM-T(普洛麥格(Promega))中并測序。使用DNAstar軟件(DNAstar公司)進(jìn)行序列分析和比對。生激/,息學(xué)使用可在Nembase網(wǎng)址(www.nematodes.org/nematodeESTs/nembase.html)獲得的Partigene生物信息學(xué)途徑(Parkinson箏2004)分析捻轉(zhuǎn)血矛線蟲和其他線蟲的EST數(shù)據(jù)(在www.nema.cap.ed.ac.uk/nematodeESTs/nembase.html上獲得)。使用DNAstar軟件(DNAstar公司)進(jìn)行進(jìn)一步的序列和推定氨基酸序列分析。數(shù)據(jù)庫搜索在NCBI月艮務(wù)器(www.ncbi.nlm.nih.gov/blast)上進(jìn)行。使用信號P-(www.cbs.dtu.dk/services/SignalP)禾口NetNGlyc-程序(www.cbs.dtu.dk/services/NetNGlvc)分析氨基酸序列的信號肽和糖基化位點(diǎn)。及綠麟凝游潛使用反轉(zhuǎn)錄酶偶聯(lián)的PCR(RT-PCR)來確定//c-pc^7和//c-;x^的階段-特異性轉(zhuǎn)錄。使用總RNA分離試劑(高級生物技術(shù)有限公司(AdvancedBiotechnologiesLtd.)),按照Hashmi等(2002)所述，從出鞘的L3、L4和成蟲寄生蟲提取總RNA。RT-PCRs使用Superscript—步RT-PCR系統(tǒng)(Invitrogen)進(jìn)行。用于檢測//c-pc;7或(of)說-;x^轉(zhuǎn)錄物的特異性引物顯示在表1中。在35個擴(kuò)增周期后，在P/。瓊脂糖凝膠上分離RT-PCR產(chǎn)物。關(guān)于細(xì)胞質(zhì)超氧化物歧化酶基因(SODc)的RT-PCR用來控制RNA純化的均勻性，所述細(xì)胞質(zhì)超氧化物歧化酶基因是一種在所有生命周期階段表達(dá)的基因。二嚴(yán)基農(nóng)線/孺定使用一組分別具有對DPPI,II，III和IV的特異性的底物的初始篩選表明存在強(qiáng)DPPIV活性和非常輕微的DPPII活性。然后，分別使用生色底物H-Ala-Pro-對硝基苯胺(pNitroanilide)和H-Lys-Ala-對硝基苯胺(Bachem)測量DPPIV和DPPII活性。兩種底物的儲液it甲醇中制備(濃度為1M)。將不同體積的絲氨酸羧肽酶制備物(2-6nl)與底物(終濃度lmM)混合在100(ilpH3-8范圍內(nèi)的緩沖液中(pH3-5:0.1M醋酸鈉緩沖液，pH6-7:0.1M磷酸緩沖液，pH8:0.1MTris緩沖液)。將樣品在37°C溫育45分鐘，然后轉(zhuǎn)移到微量滴定板。在405nm處測量光密度。每次實(shí)驗(yàn)一式兩份地進(jìn)行。DPPIV抑制劑DiprotinA和DiprotinB對酶活性的作用通過向上述反應(yīng)混合物中加入不同濃度的抑制劑(10piM，100(iM,500和lmM)而確定。廚節(jié)/鄉(xiāng)/羞覆雄定通過加入lW凝血酶儲液(IOmg/ml)并且在37。C溫育15分鐘，來凝固牛血纖蛋白溶液(濃度15mg/ml)。收集血纖蛋白凝塊，并且重懸在8ml1MNaBr/0.05醋酸鈉緩沖液pH5.3中。隨后將這種血纖蛋白單體溶液濃縮至750pl，并且在使用前保存在4。C。通過將5^il血纖蛋白單體溶液與95plPBS混合而實(shí)施血纖蛋白溶液的重聚集/凝固。通過在分光光度計(jì)中測量在350nm處的90。角散射光來監(jiān)測重聚集。結(jié)果表示為在10分鐘期間散射光的變化。在進(jìn)行分光光度計(jì)測量分析前，通過將5pl血纖蛋白單體溶液與不同濃度的絲氨酸羧肽酶在37。C溫育30分鐘，而測定絲氨酸羧肽酶對血纖蛋白重聚集的作用。DPPIV抑制劑DiprotinA的作用通過向上述反應(yīng)混合物中加入0.4pl的0.5M抑制劑儲液而確定。i,歪雄顏定將25嗎按上述制備的血纖蛋白單體與不同濃度的絲氨酸羧肽酶混合，并且在37。C溫育15秒-30分鐘范圍內(nèi)的不同長度的時間。隨后，在還原條件下在10%SDS-PAGE凝膠上分析樣品，并且通過考馬斯亮藍(lán)染色顯現(xiàn)。DiprotinA抑制劑的作用通過向上述反應(yīng)混合物中加入終濃度為O.lM的抑制劑而進(jìn)行研究。結(jié)果錄麼微麟赦絲氨酸羧肽酶富集的級分的蛋白圖譜顯示在圖l中。它包括約55kDa的明顯的條帶(圖l中的箭頭)。從考馬斯亮藍(lán)染色的凝膠上挑取該條帶，并且通過胰蛋白酶消化、肽質(zhì)量指紋分析和LC-MS/MS分析進(jìn)行分析。然后，針對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲EST數(shù)據(jù)篩選該結(jié)果。55kDa條帶的LC-MS/MS分析導(dǎo)致3種肽序歹i」，其顯示與簇HCC00232和HCC00298的100。/。匹配(表2)。簇HCC00232和HCC00298分別包含421和37個單個EST序列。簇HCC00232的共有序列為2579bp長。使用與T3載體引物組合的基因特異性引物通過PCR方法從cDNA文庫分離在5'端的另一個884bp。這形成編碼122kDa蛋白的全長克隆序列。簇HCC00298具有3037bp的共有序列。與在3'端的另一個562bp—起，它編碼129kDa的蛋白，所述3，端的另一個562bp以與上述相同的方法分離。兩種蛋白均表現(xiàn)出與秀麗隱桿線蟲中的脯氨酰羧肽酶樣蛋白(PCP-2acc.NP—501599和PCP-3acc.NP501598.1)的同源性。在捻轉(zhuǎn)血矛線蟲和秀麗隱桿線蟲蛋白之間共有的同一性在約38%變化。這兩種捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蛋白從此處開始命名為Hc-PCPl(簇HCC00232)和Hc-PCP2(簇HCC00298)。Hc-PCPl和Hc-PCP2的序列比對顯示在圖3版A中。這兩種蛋白在氨基酸序列上彼此表現(xiàn)出64%的同一性，并且都包含信號肽和多個推定的糖基化位點(diǎn)(在圖3版A中標(biāo)記)。Hc-PCPl和Hc-PCP2都包括兩個絲氨酸羧肽酶S28型結(jié)構(gòu)域(pfam05577)，其以串聯(lián)重復(fù)排列(圖3版B)。這種特征似乎是線蟲特有的，只有秀麗隱桿線蟲PCP's表現(xiàn)出相似的結(jié)構(gòu)。每個S28結(jié)構(gòu)域編碼51kDa絲氨酸羧肽酶，其近似匹配SDS-PAGE凝膠上條帶B的尺寸。因此，可能是兩個串聯(lián)結(jié)構(gòu)的PCP's被翻譯后加工到4種獨(dú)立的絲氨酸羧肽酶中。i/dA》銀錄漠式在關(guān)于出鞘的L3、L4、11日齡和22日齡寄生蟲的總RNA樣品的RT-PCR中，使用/fc-/cp/和/7c-pcp2特異性引物。RT-PCRs的結(jié)果顯示在圖3中。這兩種基因的轉(zhuǎn)錄物從L4階段開始存在。使用關(guān)于細(xì)胞質(zhì)超氧化物歧化酶基因(SODc)(acc，Z69621)的反轉(zhuǎn)錄酶偶聯(lián)的PCR來控制RNA純化的均勻性。二屋基廁緒絲二肽基肽酶活性測定的結(jié)果顯示在圖4中。在pH7.5，絲氨酸羧肽酶以劑量依賴性方式水解DPPIV特異性底物。發(fā)現(xiàn)非常輕微的針對DPPII特異性底物的活性(版A)。在pH6檢測到針對DPPIV的最大活性(圖4版B)。特異性抑制劑對DPPIV活性的作用顯示在圖4版C中。DiprotinA以劑量依賴性方式部分抑制DPPIV型活性。使用DiprotinB抑制劑沒有觀察到任何作用。踏節(jié)蘇窗/定血纖蛋白重聚集測定的結(jié)果顯示在圖5版A中。向血纖蛋白單體溶液中加入絲氨酸羧肽酶以劑量依賴性方式顯著抑制重聚集，其通過在10分鐘期間內(nèi)散射光的變化而測量。通過加入DPPIV抑制劑DiprotinA，部分逆轉(zhuǎn)這種作用(圖5版B)。血纖蛋白單體溶液在還原條件下在10%SDS-PAGE凝膠上的級分顯示在圖6版A中。其形成約63kDa,56kDa和47kDa的3條蛋白條帶，這些分別是a-鏈、p-鏈和Y-鏈。加入絲氨酸羧肽酶在37°C溫育15秒后導(dǎo)致cx-鏈非?？焖俚牡鞍姿饨到?圖6版A)。加入DiprotinA抑制劑部分逆轉(zhuǎn)這種作用(圖6版B)。a-鏈的消化產(chǎn)物與？鏈協(xié)同泳動和質(zhì)譜分析，(圖7)表明消化從C末端開始。紅色字體表示其中使用胰蛋白酶消化片段獲得陽性擊中的a-鏈區(qū)域。注意，針對C端沒有獲得擊中，這表明該區(qū)域已被羧肽酶活性去除。表l:用于RT-PCR和RACE實(shí)驗(yàn)的PCR引物序列捻轉(zhuǎn)血矛線蟲EST簇(基因名稱)引物序列HCC00232(〃c隱拜"FRT-PCR5，aagcaggttcagccttttcaRRT-PCR5，cttgcccattgttcgttttt5'RACE5'cataatgacgcacgatogacHCC00298(〃c-pcp2JF-RT-PCR5'cgctgacctgtgteaagtgtRRT-PCR5'aagtagccggettcgtattg3'RACE5'ageategccgetttcaat表2:55kDa條帶LC-MS/MS分析的肽序列。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>權(quán)利要求1.一種用于鑒定抗蠕蟲藥的篩選測定方法，所述測定方法包括使藥劑與蠕蟲蛋白或其片段接觸的步驟，所述蛋白或其片段特征在于表現(xiàn)出二肽基肽酶IV活性并且導(dǎo)致血液凝固時間的增加，從而檢測所述藥劑是否能夠調(diào)節(jié)所述蛋白的所述活性或血液凝固作用。2.權(quán)利要求1的篩選測定方法，其中所述蛋白或其片段包括圖2a所示的序列。3.權(quán)利要求1的篩選測定方法，其中所述蛋白或其片段由圖2c或2d所示的序列編碼。4.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的測定方法，其中所述藥劑抑制或減小所述蛋白或其片段的DPPIV活性和/或所述蛋白或其片段增加血液凝固時間的能力。5.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的篩選測定方法，其中所述蛋白或其片段通過重組方式提供或從蠕蟲本身純化而來。6.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的測定方法，其中所述蛋白或其片段從蠕蟲的食血L4或成蟲階段分離。7.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的測定方法，其中所述待檢測的藥劑選自由下列各項(xiàng)組成的組(i)小化學(xué)個體；(ii)對所述蛋白特異性的抗體；(iii)設(shè)計(jì)靶向所述蛋白的表達(dá)的RNAi分子；和(iv)肽模擬物等。8.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的測定方法，其中可以將所述藥劑施用給活的蠕蟲，諸如捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(ifoemtwc/zwco"tor/to)，或施用給感染了所述蠕蟲的宿主動物。9.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的測定方法，其中鑒定的抗蠕蟲藥對寄生蟲特異，并且基本上不影響宿主DPPIV蛋白的DPPIV活性。10.DPPIV抑制劑在制備用于治療蠕蟲感染、特別是捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染的藥物中的應(yīng)用。11.權(quán)利要求10的應(yīng)用，其中所述抑制劑選自由下列各項(xiàng)組成的組(i)DiprotinA禾口B;(ii)vildagliptin;(iii)Sitagliptin;(iv)二甲雙胍；(v)Saxagliptin;(vi)MK-0431纈氨酸pyrrolidide;(vii)異亮氨酸t(yī)hiazolidide;(viii)FE99901;(ix)NVP陽DPP728;(x)LAF237;(xi)SYR322;和(xii)SYR619。12.治療感染了蠕蟲的動物如反芻動物的方法，所述方法包括給所述動物施用DPPIV抑制劑的步驟。13.包括一種或多種核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列編碼蠕蟲絲氨酸羧肽酶和/或其酶反應(yīng)性和/或抗原性部分。14.權(quán)利要求13的核酸分子，其中所述一種或多種核苷酸序列包括圖2c或2d所示的序列，或編碼具有與圖2a所示的氨基酸序列的全部或部分基本上相對應(yīng)的序列的酶。15.包括一種或多種核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列編碼與蠕蟲絲氨酸羧肽酶基本同源的酶，或其可以與權(quán)利要求13或14的任一種序列雜交。16.包括一種或多種編碼一種或多種多肽的核苷酸序列的核酸分子，所述核酸分子用于藥物篩選測定方法和/或用于產(chǎn)生抗蠕蟲寄生蟲的保護(hù)性抗體，所述核酸分子的序列結(jié)合圖2a所示的羧肽酶-編碼序列的一個或多個酶的和/或抗原性區(qū)域。17.—種合成多肽，其包括一種或多種氨基酸序列或其功能等價變體，所述氨基酸序列組成羧肽酶或其酶的和/或抗原性部分，與圖2a所示的氨基酸序列的全部或部分基本相對應(yīng)。18.權(quán)利要求17的合成肽，其中所述肽提供保護(hù)性抗原性序列。19.一種融合多肽，其包括表現(xiàn)出蠕蟲絲氨酸羧肽酶的全部或部分的生化/生理免疫原性活性的部分，和另一種多肽。20.制備權(quán)利要求17-19的合成多肽或融合多肽的方法，所述方法包括下列步驟(a)培養(yǎng)包含權(quán)利要求13-16所述的核酸分子的細(xì)胞；(b)在所述核酸表達(dá)的條件下維持所述細(xì)胞；和(c)回收這樣產(chǎn)生的多肽。21.在人或非人動物中刺激針對蠕蟲寄生蟲的免疫反應(yīng)的疫苗組合物，所述疫苗組合物包括至少一種權(quán)利要求17-19的合成多肽或融合多肽，以及藥用載體。22.—種疫苗制劑，其包括病毒或宿主細(xì)胞，所述病毒或宿主細(xì)胞中插入了一種或多種權(quán)利要求13-16的核酸分子，用于刺激針對由所述一種或多種插入的核酸分子編碼的多肽的免疫反應(yīng)。23.—種抗體，其對權(quán)利要求17-19的蛋白是特異性的。24.權(quán)利要求13-19所述的核酸分子、或合成的或融合的肽/多肽的應(yīng)用，其用于制備在哺乳動物中特別是反芻哺乳動物中刺激免疫反應(yīng)的疫苗組合物。25.—種在哺乳動物中、特別是反芻動物中刺激針對蠕蟲寄生蟲感染的免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括給所述動物施用疫苗組合物，所述疫苗組合物包括由權(quán)利要求13-16的核苷酸序列編碼的一種或多種多肽。26.權(quán)利要求13-16所述的核酸分子、或合成的或融合的肽/多肽的應(yīng)用，其用于制備用作抗凝血劑的藥物。27.—種在哺乳動物中防止和/或延遲血液凝固的方法，所述方法包括給所述動物施用權(quán)利要求13-19所述的核酸分子、或合成的或融合的肽/多肽。全文摘要本發(fā)明涉及用于鑒定新型抗蠕蟲藥的篩選，特別涉及抗血矛線蟲屬蠕蟲藥劑，以及用作針對蠕蟲如血矛線蟲屬蠕蟲的疫苗或免疫原性藥劑的蛋白/肽的制備。文檔編號A61K38/48GK101563103SQ200780041427公開日2009年10月21日申請日期2007年9月13日優(yōu)先權(quán)日2006年9月13日發(fā)明者彼得·布魯諾·吉爾德霍夫,戴維·帕特里克·諾克斯申請人:莫登研究院