專利名稱：結(jié)合il-17a和il-17f的抗體分子的制作方法
結(jié)合IL-17A和IL-17F的抗體分子
本發(fā)明涉及對(duì)IL-17A和IL-17F的抗原決定簇具有特異性的抗體 分子。本發(fā)明還涉及該抗體分子的治療用途及其生產(chǎn)方法。
白介素17( IL-17)，也稱為CTLA-8或IL-17A，是促炎細(xì)胞因子， 其刺激各種非免疫細(xì)胞分泌各種各樣的其他細(xì)胞因子。IL-17A能夠誘 導(dǎo)粘附細(xì)胞，如成纖維細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、上皮和內(nèi)皮細(xì)胞分泌IL-6、 IL-8、 PGE2、 MCP-1和G-CSF，并且還能夠誘導(dǎo)ICAM-1表面表達(dá)、T 細(xì)胞增殖，以及在受照射的成纖維細(xì)胞存在下共同培養(yǎng)時(shí)，誘導(dǎo)CD34+ 人祖細(xì)胞的生長(zhǎng)并分化成嗜中性白細(xì)胞(Fossiez等，1998， Int. Rev. Immunol 16， 541-551 )。 IL-17A主要由激活的記憶T細(xì)胞產(chǎn)生并通 過(guò)與遍在分布的細(xì)胞表面受體(IL-17R)結(jié)合而發(fā)揮作用 (Yao等， 1997， Cytokine, 9, 794-800 )。它也可以通過(guò)結(jié)合IL-17RA和IL-17RC 的復(fù)合物而發(fā)揮作用(Toy等，2006， J. Immunol. 177(11); 36-39 )。 稱為"TH17細(xì)胞"的產(chǎn)生IL-17的T細(xì)胞涉及某些癌癥的發(fā)病機(jī)理 (Weaver等，2006， Immunity, 24， 677-688; Langowski等，2006， 442， 461-465; Iwakura和Ishigame， 2006， J.CI in.Invest. 116， 5， 1218-1222)。
已經(jīng)鑒定了多種IL-17的同系物，其在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中具有相似 和不同的作用。對(duì)于IL-17細(xì)胞因子/受體家族的綜述，參見(jiàn)Dumont， 2003， Expert Opin. Ther. Patents, 13， 287-303。 一種這樣的同 系物是IL-17F，也稱為IL-24和ML-1，其與IL-17A大約55°/。相同， 并且被認(rèn)為與IL-17A共享相同的受體(Kolls和Linden 2004, Immunity, 21, 467-476; Hymowitz等，2001, EMBO J, 20(19)， 5332-5341; Kuestner爭(zhēng)，2007， Journal of Immunology, 179， 5462-5473)。
IL-17A和IL-17F都可以形成同型二聚體和雜二聚體蛋白，其所有都由激活的人CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生(Wright等，2007， J Biol Chem. 282 (18)， 13447-13455)。
IL-17可能促進(jìn)很多由異常免疫反應(yīng)介導(dǎo)的疾病，如類風(fēng)濕性關(guān) 節(jié)炎和呼吸道炎癥，以及器官移植排斥和抗腫瘤免疫。IL-17活性抑 制劑是本領(lǐng)域熟知的，例如小鼠IL-17R:人Fc融合蛋白、小鼠可溶性 IL-17R和抗IL-17單克隆抗體已經(jīng)被用來(lái)證明IL-17在各種類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎模型中的作用(Lubberts等，J. Immunol. 2001 , 167 ， 1004-1013; Chabaud等，Arthritis Res. 2001， 3， 168-177)。此 外，中和多克隆抗體已經(jīng)被用來(lái)減少腹膜粘連的形成(Chung等， 2002， J. Exp. Med, ， 195， 1471-1478 ) 。 WO04/106377中描述了從 大鼠得到的抗人IL-17抗體。WO2006/054059中描述了親和力為大約 220pM的人源化抗IL-17抗體。W02006/013107中描述了親和力為大約 188pM的完全人抗IL-17單克隆抗體。WO2006/088833中描述了結(jié)合 IL-17F和IL-17A/IL-17F的抗體。額005/010044中描述了特異性結(jié) 合IL-17A/IL-17F雜二聚體的抗體。
IL-17F拮抗作用與對(duì)抗哞喘的保護(hù)作用相關(guān)(Kawaguchi等， 2006, J. Allergy Clin. Immunol. 117(4); 795-801 )，并且認(rèn)為 IL-17F在關(guān)節(jié)炎病理學(xué)中也起著作用(Lubberts 2003， Current Opinion in Investigational Drugs, 4 (5)， 572-577)。
因此，IL-17A和IL-17F的雙重拮抗劑在治療IL-17介導(dǎo)的疾病 中比單獨(dú)的拮抗劑更有效。07年9月20日公開的W02007/106769中 描述了結(jié)合IL-17A和IL-17F的抗體。
我們已經(jīng)能夠證明分離能夠結(jié)合IL-17A和IL-17F并且能夠中和 IL-17的兩個(gè)同種型的活性的抗體是可能的。因此，本發(fā)明提供了能 夠結(jié)合IL-17A和IL-17F的抗IL-17抗體。特別地，本發(fā)明的抗體能 夠特異性地結(jié)合IL-17A和IL-17F，即，該抗體不與IL-17的其他同 種型結(jié)合。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體還結(jié)合IL-17A/IL-17F雜二聚體。 優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體中和IL-17A和IL-17F的活性。在一個(gè)實(shí)施方 案中，本發(fā)明的抗體還中和IL-17A/IL-17F雜二聚體的活性。因此，本發(fā)明的抗體具有可以抑制IL-17A和IL-17F的生物活性的有利特性。 因此，本發(fā)明還提供了這樣的抗體在治療和/或預(yù)防由IL-17A或 IL-17F任一種或兩種介導(dǎo)的疾病，如自體免疫或炎癥疾病或癌癥中的 用途。
如在此所用的，術(shù)語(yǔ)"中和抗體"描述了例如，通過(guò)阻斷IL-17A 和IL-17F結(jié)合一種或多種受體和通過(guò)阻斷IL-17A/IL-17F雜二聚體結(jié) 合一種或多種受體，能夠中和IL-17A和IL-17F的生物信號(hào)活性的抗 體。將認(rèn)識(shí)到如在此所用的術(shù)語(yǔ)"中和"指的是可以部分或完全降低 生物信號(hào)活性。此外，將認(rèn)識(shí)到通過(guò)抗體中和IL-17A和IL-17F的程 度可以相同或不同。在一個(gè)實(shí)施方案中，IL-17A/IL-17F雜二聚體活 性的中和程度與IL-17A或IL-17F活性的中和程度相同，可以相同或 不同。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體特異性結(jié)合IL-17A和IL-17F。 特異性結(jié)合意思是抗體對(duì)IL-17A和IL-17F多肽(包括 IL-17A/IL-17F雜二聚體)的親和性比其他多肽高。優(yōu)選，IL-17A和 IL-17F多肽是人。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體還結(jié)合獼猴IL-17F。
IL-17A或IL-17F多肽或表達(dá)一種或兩種所述多肽的兩種細(xì)胞混 合物可以用來(lái)產(chǎn)生特異性識(shí)別多肽的抗體。IL-17多肽(IL-17A和 IL-17F)可以是"成熟"多肽或其生物活性片段或衍生物，優(yōu)選包括 受體結(jié)合位點(diǎn)。優(yōu)選，IL-17多肽是成熟多肽?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域公知 的方法從含有表達(dá)系統(tǒng)的遺傳工程宿主細(xì)胞來(lái)制備IL-17多肽或從天 然生物來(lái)源收集。在本發(fā)明的應(yīng)用中，術(shù)語(yǔ)"多肽"包括肽、多肽和 蛋白。這些可以互換使用，除非另外指出。在一些情況中，IL-17多 肽可以是較大蛋白如融合蛋白的一部分，例如，與親和性標(biāo)記物融合。 可以獲得對(duì)抗這些多肽產(chǎn)生的抗體，其中動(dòng)物的免疫是必需的，通過(guò) 將多肽給予動(dòng)物，優(yōu)選非人動(dòng)物，使用公知和常規(guī)的方案，參見(jiàn)，例 如，Handbook of Experimental Immunology (實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)手冊(cè))， D. M. Weir (編輯)，Vol 4, Blackwell Scientific Publishers, Oxford, England, 1986?？梢詫⒃S多溫血?jiǎng)游?，如兔子、小鼠、大鼠、綿羊、奶牛或豬免疫。然而，通常優(yōu)選的是小鼠、兔子、豬和大鼠。
用于本發(fā)明的抗體包括完整的抗體及其功能性活性片段或衍生 物，可以是，但不限于，單克隆、多價(jià)、多特異性、人源化或嵌合抗
體，結(jié)構(gòu)域抗體，例如，上述任一種的VH、 VL、 VHH、單鏈抗體、Fab 片段、Fab'和F(ab' )2片段和抗原決定部分結(jié)合片段。其他抗體片 段包括國(guó)際專利申請(qǐng)WO2005003169、 WO2005003170和WO2005003171 中描述的那些?？贵w片段及其生產(chǎn)是本領(lǐng)域公知的，參見(jiàn)，例如，Verma 等,1998， Journal of Immunological Methods， 216， 165-181; Adair 和Lawson， 2005. Therapeutic antibodies. Wey/ei^s -
用于本發(fā)明中的抗體包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免 疫活性部分，即，含有特異性結(jié)合抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子。本發(fā) 明的免疫球蛋白分子可以是任何種類(例如，IgG、 IgE、 IgM、 IgD和 IgA)或亞類的免疫球蛋白分子。
可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法制備單克隆抗體，如雜交瘤技術(shù) (Kohler & Milstein， 1975， Nature, 256:495-497 )、三源雜交瘤 技術(shù)、人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)(Kozbor等，1983， Immunology Today, 4:72)和EBV雜交瘤技術(shù)(Cole等，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy (單克隆抗體和癌癥治療)，pp77-96, Alan R Liss， Inc. ， 1985 )。
用于本發(fā)明的抗體也可以使用單淋巴細(xì)胞抗體法來(lái)產(chǎn)生，通過(guò)由 例如Babcook， J. 等，1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93 (15): 7843-78481; ,2/02551; WO2004/051268和國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)?W0 20(H/106377描述的方法克隆和表達(dá)由選擇用于生產(chǎn)特異性抗體的 單淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域cDNA。
人源化抗體是具有一個(gè)或多個(gè)來(lái)自非人物種的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR ) 和來(lái)自人免疫球蛋白分子的框架區(qū)的抗體分子(參見(jiàn)，例如 US5，585，089;窗1/09967 )。
嵌合抗體是已經(jīng)基因工程化的免疫球蛋白基因編碼的那些抗體，使得輕鏈和重鏈基因由屬于不同物種的免疫球蛋白基因片段組成。這 些嵌合抗體很可能抗原性較低。可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法制得二價(jià)
抗體(Milstein等，1983 ， Nature 305:537-539; W0 93/08829 , Traunecker等，1991， EMBO J. 10:3655-3659 )。多價(jià)抗體可以包括 多特異性或可以是單特異性的(參見(jiàn)，例如，W092/22853和 WO05/113605)。
用于本發(fā)明的抗體還可以使用本領(lǐng)域已知的各種噬菌體展示法生 產(chǎn)，并包括Brinkman等(在J. Immunol. Methods, 1995， 182: 41-50) 、 Ames等(J. Immunol. Methods, 1995， 184:177-186)、 Kettlebo面gh等(Eur. J. Immunol. 1994， 24:952-958 ) 、 Persic 等(Gene, 1997 1879-18) 、 Burton等(Advances in Immunology, 1994， 57: 191-280 )和WO90/02809; ,1/10737; W0 92/01047; W0 92/18619; W0 93/11236; W0 95/15982; W0 95/20401和US 5， 698， 426; 5,223,409; 5, 403, 484; 5,580,717 ; 5, 427, 908; 5, 750,753 ; 5,821, 047; 5,571,698 ; 5， 427， 908; 5,516,637; 5, 780,225; 5,658,727; 5,733, 743和5,969, 108中公開的方法。用于生產(chǎn)單鏈 抗體的技術(shù)，如US4， 946，778中所述的那些也適用于產(chǎn)生結(jié)合IL-17A 和IL-17F的單鏈抗體。此外，轉(zhuǎn)基因小鼠，或其他生物體，包括其他 哺乳動(dòng)物，可以用于表達(dá)人源化抗體。
抗體可變結(jié)構(gòu)域中的殘基通常根據(jù)Kabat等設(shè)計(jì)的系統(tǒng)來(lái)編號(hào)。 這個(gè)系統(tǒng)在Kabat 等，1987 ， 在Sequences of Proteins of Immunological Interest(免疫學(xué)關(guān)注的蛋白的序歹'J ) ， US Department of Health and Human Services, NIH， USA (以下稱作"Kabat等 (上文)")中列出。本說(shuō)明書中使用這個(gè)編號(hào)系統(tǒng)，除非另外指出。
Kabat殘基命名并不總是直接對(duì)應(yīng)于氨基酸殘基的線性編號(hào)。實(shí) 際的線性氨基酸序列可能含有比嚴(yán)格的Kabat編號(hào)更少或增加的氨基 酸，嚴(yán)格的Kabat編號(hào)對(duì)應(yīng)于基礎(chǔ)可變結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)組分，無(wú)論 是框架區(qū)還是互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的縮短或插入。對(duì)于給定的抗體，殘 基的正確Kabat編號(hào)可以通過(guò)抗體序列與"標(biāo)準(zhǔn)"Kabat編號(hào)序列的
10同源性殘基比對(duì)來(lái)確定。
根據(jù)Kabat編號(hào)系統(tǒng)，重鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR位于殘基31-35 (CDR-H1)、殘基50-65 (CDR-H2)和殘基95-102 (CDR-H3)。然而， 根據(jù)Chothia( Chothia， C.和Lesk， A. M. J. Mol. Biol. ， 196, 901-917 (1987 ))，相當(dāng)于CDR-H1的環(huán)從殘基26延伸至殘基32。因此，按 照Kabat編號(hào)系統(tǒng)和Chothia的拓樸環(huán)定義聯(lián)合所述，如在此所用的 'CDR-Hl，包括殘基26至35。
根據(jù)Kabat編號(hào)系統(tǒng)，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR位于殘基24-34 (CDR-L1)、殘基50-56 ( CDR-L2 )和殘基89-97 (CDR-L3)。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了對(duì)人IL-17A和人IL-17F具 有特異性的中和抗體，其包含重鏈，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含至少一 個(gè)如下的CDR:具有SEQ ID N0: 1給出的CDR-H1序列的CDR，具有SEQ ID NO: 2給出的CDR-H2序列的CDR和具有SEQ ID NO: 3給出的CDR-H3 序列的CDR。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了對(duì)人IL-17A和人IL-17F 具有特異性的中和抗體，其包含重鏈，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR-Hl、 CDR-H2和CDR-H3中的至少兩個(gè)選自下列序列SEQ ID NO: 1給出的 CDR-H1序列，SEQ ID NO: 2給出的CDR-H2序列和SEQ ID NO: 3給出 的CDR-H3序列。例如，該抗體可以包含重鏈，其中CDR-Hl具有SEQ ID NO: 1給出的序列而CDR-H2具有SEQ ID N0:2給出的序列?；蛘?，該 抗體可以包含重鏈，其中CDR-Hl具有SEQ ID NO: 1給出的序列而 CDR-H3具有SEQ IDN0:3給出的序列，或該抗體可以包含重鏈，其中 CDR-H2具有SEQ ID NO: 2給出的序列而CDR-H3具有SEQ ID NO: 3給 出的序列。為避免疑惑，應(yīng)理解包括全部排列。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了對(duì)人IL-17A和IL-17F具 有特異性的中和抗體，其包含重鏈，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO: 1給出的CDR-Hl序列，SEQ ID NO: 2給出的CDR-H2序列和SEQ ID NO: 3給出的CDR-H3序列。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了對(duì)人IL-17A和IL-17F具有特異性的中和抗體，其包含輕鏈，其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含至少一個(gè)
如下的CDR:具有SEQ ID NO: 4給出的CDR-L1序列的CDR，具有SEQ ID NO: 5給出的CDR-L2序列的CDR和具有SEQ ID NO: 6給出的CDR-L3序 列的CDR。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了對(duì)人IL-17A和IL-17F具 有特異性的中和抗體，其包含輕鏈，其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR-L1、 CDR-L2和CDR-U中的至少兩個(gè)選自下列序列SEQ ID NO: 4給出的 CDR-L1序列，SEQ ID NO: 5給出的CDR-L2序列和SEQ ID NO: 6給出 的CDR-L3序列。例如，該抗體可以包含輕鏈，其中CDR-L1具有SEQ ID NO: 4給出的序列而CDR-L2具有SEQ ID N0:5給出的序列?；蛘?，該 抗體可以包含輕鏈，其中CDR-L1具有SEQ ID NO: 4給出的序列而 CDR-L3具有SEQ IDN0:6給出的序列，或該抗體可以包含輕鏈，其中 CDR-L2具有SEQ ID NO: 5給出的序列而CDR-L3具有SEQ ID NO: 6給 出的序列。為避免疑惑，應(yīng)理解包括全部排列。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了對(duì)人IL-17A和IL-17F具 有特異性的中和抗體，其包含輕鏈，其中可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ IDN0:4 給出的CDR-L1序列，SEQ ID N0:5給出的CDR-L2序列和SEQ ID NO: 6 給出的CDR-L3序列。
本發(fā)明的抗體分子優(yōu)選分別包含互補(bǔ)輕鏈或互補(bǔ)重鏈。
因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的抗體包含重鏈和輕鏈， 其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ IDNO: 1給出的CDR-H1序列、SEQ ID NO: 2 給出的CDR-H2序列和SEQ ID NO: 3給出的CDR-H3序列，其士輕々*-^* 變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO: 4給出的CDR-L1序列、SEQ ID NO: 5給出的 CDR-L2序列和SEQ ID NO: 6給出的CDR-L3序列。
應(yīng)認(rèn)識(shí)到可以對(duì)本發(fā)明提供的CDR進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)氨基酸置換， 而不顯著改變抗體結(jié)合IL-17A和IL-17F以及中和IL-17A和IL-17F 活性的能力。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地測(cè)試任何氨基酸置換對(duì)結(jié)合 和中和的影響，例如通過(guò)使用在此所述的方法。因此，本發(fā)明提供了 包含一個(gè)或多個(gè)選自以下的CDR的抗體CDRH-1 (SEQ ID NO: 1 )、CDRH-2 (SEQ ID NO. 2 ) 、 CDRH-3 (SEQ ID NO: 3 ) 、 CDRL-1 (SEQ ID NO: 4) 、 CDRL-2 (SEQ ID NO: 5 )和CDRL-3 (SEQ ID NO: 6 )，其中 一個(gè)或多個(gè)CDR中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸已被另一個(gè)氨基酸置換。還應(yīng) 認(rèn)識(shí)到可以改變一個(gè)或多個(gè)CDR的長(zhǎng)度，而不顯著改變抗體結(jié)合 IL-17A和IL-17F以及中和IL-17A和IL-17F活性的能力。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含重鏈，其中重鏈可變結(jié)構(gòu) 域包含三個(gè)CDR，其中CDRH-1的序列與SEQ ID NO: 1給出的序列具有 至少60%的同一性或相似性，CDRH-2與SEQ ID N0:2給出的序列具有 至少60%的同一性或相似性和/或CDRH-3與SEQ ID NO: 3給出的序列 具有至少60%的同一性或相似性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗 體包含重鏈，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含三個(gè)CDR，其中CDRH-1的序列 與SEQ ID NO: 1給出的序列具有至少70%、 80%、 90%、 95%或98%的同 一性或相似性，CDRH-2與SEQ ID NO: 2給出的序列具有至少70%、 80%、 90%、 95%或98%的同一性或相似性和/或CDRH-3與SEQ ID NO: 3給出 的序列具有至少70%、 80%、 90%、 95%或98%的同一性或相似性。
如在此所用的"同一性"表示比對(duì)序列中任何特定位置的氨基酸 殘基在這些序列之間是相同的。如在此所用的"相似性"表示比對(duì)序 列中任何特定位置的氨基酸殘基在這些序列之間是相似類型的。例如， 亮氨酸可以取代異亮氨酸或纈氨酸。常常可以彼此取代的其他氨基酸 包括但不限于
-苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸(具有芳香側(cè)鏈的氨基酸)； 一賴氨酸、精氨酸和組氨酸(具有堿性側(cè)鏈的氨基酸)； 一天冬氨酸和谷氨酸(具有酸性側(cè)鏈的氨基酸)； -天冬酰胺和谷氨酰胺(具有酰胺側(cè)鏈的氨基酸)；和 -半胱氨酸和甲硫氨酸(具有含硫側(cè)鏈的氨基酸)。 可以容易地計(jì)算同 一性和相似性的程度(Computational Molecular Biology (計(jì)算分子生物學(xué))，Lesk， A.M.編輯，Oxford University Press, New York, 1988; Biocomput ing. Informatics and Genome Projects (生物計(jì)算信息學(xué)和基因組計(jì)劃)，Smith, D. W.編輯，Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data (序列數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)分析)，Part 1, Griffin, A. M. 和Griffin, H. G.編輯，Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology (分子生物學(xué)中的序歹寸分才斤)，von Heinje， G. ， Academic Press, 1987; 和Sequence Analysis Primer (序歹寸分才斤引物)，Gribskov， M.和Devereux， J.編輯，M Stockton Press, New York, 1991)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含輕鏈，其中輕鏈可變結(jié) 構(gòu)域包含三個(gè)CDR，其中CDRL-1的序列與SEQ ID NO: 4給出的序列具 有至少60%的同一性或相似性，CDRL-2與SEQ ID N0:5給出的序列具 有至少60%的同一性或相似性和/或CDRL-3與SEQ ID NO: 6給出的序 列具有至少60°/。的同一性或相似性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的 抗體包含輕鏈，其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含三個(gè)CDR，其中CDRL-1的序 列與SEQ ID NO: 4給出的序列具有至少70°/。、 80%、 90%、 95%或98%的 同一性或相似性，CDRL-2與SEQ ID NO: 5給出的序列具有至少70%、 80%、 90°/。、 95%或98%的同一性或相似性和/或CDRL-3與SEQ ID NO: 6 給出的序列具有至少70%、 80%、 90%、 95%或98%的同一性或相似性。 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的抗體是單克隆抗體。 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的抗體是嵌合抗體。 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的抗體是CDR移植抗體分子，包 含SEQ ID NOS : 1至6提供的一個(gè)或多個(gè)CDR。如在此所用的，術(shù)語(yǔ) "CDR移植抗體分子"是指其中重鏈和/或輕鏈含有移植入受體抗體 (例如人抗體)的重鏈和/或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域框架的來(lái)自供體抗體(例 如鼠單克隆抗體)的一個(gè)或多個(gè)CDR (如果期望，包括一個(gè)或多個(gè)修 飾的CDR)的抗體分子。對(duì)于綜述，參見(jiàn)Vaughan等，Nature Biotechnology, 1^， 535-539， 1998。在一個(gè)實(shí)施方案中，不是轉(zhuǎn)移 整個(gè)CDR，只有以上描述的任何一個(gè)CDR的一個(gè)或多個(gè)特異性決定殘 基被轉(zhuǎn)入人抗體框架中(參見(jiàn)，例如Kashmiri等，2005， Methods, 36， 25-34 )。在一個(gè)實(shí)施方案中，只有以上描述的一個(gè)或多個(gè)CDR的特異性決定殘基被轉(zhuǎn)入人抗體框架中。在另一實(shí)施方案中，只有以
上描述的每一個(gè)CDR的特異性決定殘基被轉(zhuǎn)入人抗體框架中。
當(dāng)移植CDR或特異性決定殘基時(shí)，考慮產(chǎn)生CDR的供體抗體的類 另iJ/類型后，可以使用任何適當(dāng)?shù)氖荏w可變結(jié)構(gòu)域框架序列，包括小鼠、 靈長(zhǎng)類動(dòng)物和人框架區(qū)。優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明的CDR移植抗體具有包含 人受體框架區(qū)以及一個(gè)或多個(gè)如上所述的CDR或特異性決定殘基的可 變結(jié)構(gòu)域。因此， 一個(gè)實(shí)施方案中，提供了中和CDR移植抗體，其中 可變結(jié)構(gòu)域包含人受體框架區(qū)和非人供體CDR。
可用于本發(fā)明中的人框架區(qū)實(shí)例是KOL、 NEWM、 REI、 EU、 TUR、 TEI、 LAY和POM(Kabat等，上文)。例如，KOL和NEWM可用于重鏈， REI可用于輕鏈，而EU、 LAY和POM同時(shí)可用于重鏈和輕鏈?；蛘?， 可以Y吏用人種系序列；這些可以從http: 〃vbase， mrc-cpe. ac. uk/獲 得。
在本發(fā)明的CDR移植抗體中，受體重鏈和輕鏈不必需來(lái)源于相同 抗體，如果期望，可以包含具有來(lái)源于不同鏈的框架區(qū)的復(fù)合鏈。
對(duì)于本發(fā)明CDR移植抗體的重鏈，優(yōu)選的框架區(qū)來(lái)源于人亞組 VH3序列1-3 3-07連同JH4。因此，提供了包含至少一個(gè)非人供體CDR 的中和CDR移植抗體，其中重鏈框架區(qū)來(lái)源于人亞組序列1-3 3-07 連同JH4。人JH4的序列如下:(YFDY)WGQGTLVTVSS。YFDY基序是CDR-H3 的一部分，而不是框架4的一部分(Ravetch， JV.等，1981， Cell, 27， 583-591 )。
對(duì)于本發(fā)明CDR移植抗體的輕鏈，優(yōu)選的框架區(qū)來(lái)源于人種系亞 組VK1序列2-1-(1) L4連同JK1。因此，提供了包含至少一個(gè)非人供 體CDR的中和CDR移植抗體，其中輕鏈框架區(qū)來(lái)源于人亞組序列VK1 2-1-(1) L4連同JK1。 JK1序列如下:(WT) FGQGTKVEIK。 WT基序是 CDR-L3的一部分，而不是框架4的一部分(Hieter， PA.，等，1982， J. Biol. Chem. ， 257， 1516-1522 )。
同樣，在本發(fā)明的CDR移植抗體中，框架區(qū)也不需要與受體抗體 具有完全相同的序列。例如，可以將不常見(jiàn)的殘基轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)于受體鏈類別或類型來(lái)說(shuō)更常見(jiàn)的殘基?；蛘?，可以改變受體框架區(qū)中所選擇 的殘基，使得它們對(duì)應(yīng)于供體抗體中相同位置發(fā)現(xiàn)的殘基(參見(jiàn)，
Reichmann等，1998， Nature, 332， 323-324 )。這種改變應(yīng)該保持 在恢復(fù)供體抗體親和性所必需的最低限度。W0 91/09967中列出了選 擇可能需要改變的受體框架區(qū)中殘基的方案。
優(yōu)選，在本發(fā)明的CDR移植抗體分子中，如杲受體重鏈具有人VH3 序列1-3 3-07連同JH4，那么除了一個(gè)或多個(gè)供體CDR外，重鏈的受 體框架區(qū)至少在第94位包含供體殘基(根據(jù)Kabat等，(上文))。 因此，提供了 CDR移植抗體，其中至少重鏈可變結(jié)構(gòu)域第94位的殘基 是供體殘基。
優(yōu)選，在根據(jù)本發(fā)明的CDR移植抗體分子中，如果受體輕鏈具有 人亞組VK1序列2-1-(1) L4連同JK1,那么不轉(zhuǎn)移供體殘基，即僅轉(zhuǎn) 移CDR。因此，提供了CDR移植抗體，其中僅僅將CDR轉(zhuǎn)入供體框架中。
供體殘基是來(lái)自供體抗體的殘基，即，最初產(chǎn)生CDR的抗體。 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含重鏈，其中重鏈可變結(jié)構(gòu) 域包含SEQ ID N0:9給出的序列(gH9 )。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含重鏈，其中重鏈可變結(jié) 構(gòu)域包含與SEQ ID NO: 9給出的序列具有至少60%同一性或相似性的 序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含重鏈，其中重鏈可變結(jié) 構(gòu)域包含與SEQ ID NO: 9給出的序列具有至少70%, 80%, 90%， 95%或 9 8 %同 一 性或相似性的序列。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含輕鏈，其中輕鏈可變結(jié)構(gòu) 域包含SEQ ID N0:7給出的序列(gL7 )。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含輕鏈，其中輕鏈可變結(jié) 構(gòu)域包含與SEQ ID NO: 7給出的序列具有至少60%同一性或相似性的 序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含輕鏈，其中輕鏈可變結(jié) 構(gòu)域包含與SEQ ID N0: 7給出的序列具有至少70%， 80°/。， 90%， 95%或 9 8 %同 一 性或相似性的序列。
16在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包舍重鏈和輕鏈，其中重鏈可
變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO : 9給出的序列，其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含 SEQ ID NO: 7給出的序列。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含重鏈和輕鏈，其中重鏈 可變結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID NO: 9給出的序列具有至少60%同一性或相 似性的序列，而輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID N0:7給出的序列具有 至少60°/。同一性或相似性的序列。優(yōu)選，該抗體包含重鏈和輕鏈，其 中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID NO: 9給出的序列具有至少70°/。， 80%, 90%， 95%或98%同一性或相似性的序列，其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與 SEQ ID NO: 7給出的序列具有至少70%， 80%, 90%, 95%或98%同一性 或相似性的序列。
如上所述，本發(fā)明的抗體分子可以包含具有全長(zhǎng)重鏈和輕鏈的完 整抗體分子或其片段，如結(jié)構(gòu)域抗體，例如，VH、 VL、 VHH、 Fab、修 飾的Fab、 Fab， 、 F(ab， )2、 Fv或scFv片段。
考慮到所提出的該抗體分子的功能，尤其是可能需要的效應(yīng)功能 后，可以選擇本發(fā)明抗體分子的恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域，如果存在。例如，恒 定區(qū)結(jié)構(gòu)域可以是人IgA、 IgD、 IgE、 IgG或IgM結(jié)構(gòu)域。尤其是，當(dāng) 抗體分子意欲用于治療用途和需要抗體效應(yīng)功能時(shí)，可以使用人IgG 恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域，特別是IgGl和IgG3同種型?；蛘?，當(dāng) 抗體分子意欲 用于治療目的且不需要抗體效應(yīng)功能，例如用于簡(jiǎn)單阻斷IL-17活性 時(shí)，可以使用IgG2和IgG4同種型。例如，可以使用如Angal等， Molecular Immunology, 1993， 30(1)， 105-108中所述的其中第241 位的絲氨酸已經(jīng)轉(zhuǎn)變?yōu)楦彼岬腎gG4分子。特別優(yōu)選的是包含這種改 變的IgG4恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體重鏈包含CH1結(jié)構(gòu)域，抗體輕鏈包含CL 結(jié)構(gòu)域，k或入。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的抗體是對(duì)人IL-17A和IL-17F 具有特異性的中和抗體，其中重鏈恒定區(qū)包含人IgG4恒定區(qū)，其中第 241位絲氨酸已經(jīng)被脯氨酸取代，如Angal等，上文中所述的。因此，本發(fā)明提供了其中重鏈包含SEQ ID NO : 15中給出的序列或由該序列 組成的抗體。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含重鏈，其中重鏈可變結(jié)構(gòu) 域包含與SEQ ID N0:15給出的序列具有至少60%同一性或相似性的序 列。優(yōu)選，抗體包含重鏈，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID NO: 15 給出的序列具有至少70%， 80%， 90%， 95°/?；?8%同一性或相似性的序 列。
在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的抗體分子包含輕鏈，該輕鏈包 含SEQ ID NO: 11中給出的序列。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含輕鏈，其中輕鏈包含與SEQ ID NO: 11給出的序列具有至少60%同一性或相似性的序列。優(yōu)選，抗 體包含輕鏈，其中輕鏈包含與SEQ ID NO: 11給出的序列具有至少70%， 80%, 90%, 95%或98%同一性或相似性的序列。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抗體，其中重鏈包含SEQ ID NO: 15給出的序列或由該序列組成，而輕鏈包含SEQ ID NO: 11給出的 序列或由該序列組成。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含重鏈和輕鏈，其中重鏈包 含與SEQ ID NO: 15給出的序列具有至少60%同一性或相似性的序列， 而輕鏈包含與SEQ ID NO: 11給出的序列具有至少60%同一性或相似性 的序列。優(yōu)選，該抗體包含重鏈和輕鏈，其中重鏈包含與SEQ ID NO: 15 給出的序列具有至少70%, 80%, 90%, 95%或98%同一性或相似性的序 列，其中輕鏈包含與SEQ ID NO: 11給出的序列具有至少70%, 80%, 90%， 95%或98%同一性或相似性的序列。
本發(fā)明還提供了人IL-17A的特定區(qū)域或表位和/或人IL-17F的特 定區(qū)域或表位和/或人IL-17A/F雜二聚體的特定區(qū)域或表位，其與本 發(fā)明提供的抗體結(jié)合，尤其是包含重鏈序列g(shù)H9 (SEQ ID NO : 9)和 /或輕鏈序列g(shù)L7 (SEQ ID NO: 7)的抗體。
可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何合適的表位作圖方法結(jié)合本發(fā)明提供 的任何一個(gè)抗體來(lái)鑒定人IL-17A多肽的特定區(qū)域或表位和人IL-17F多肽的特定區(qū)域或表位和人IL-17A/F雜二聚體的特定區(qū)域或表位。這 種方法的實(shí)例包括篩選與本發(fā)明抗體結(jié)合的來(lái)源于IL-17A和IL-17F 的不同長(zhǎng)度的肽，最小的片段可以特異性結(jié)合含有該抗體識(shí)別的表位 序列的抗體。IL-17肽可以合成產(chǎn)生或通過(guò)蛋白水解消化合適的IL-17 多肽來(lái)制備。可以通過(guò)例如質(zhì)鐠分析來(lái)鑒定結(jié)合該抗體的肽。在另一 個(gè)實(shí)例中，可使用NMR核磁共振來(lái)鑒定由本發(fā)明抗體結(jié)合的表位。一 旦得到鑒定，如果需要，則可以使用結(jié)合本發(fā)明抗體的表位片段，如 果需要，用作免疫原來(lái)獲得結(jié)合相同表位的其他中和抗體。
交叉阻斷根據(jù)本發(fā)明的抗體結(jié)合的抗體，尤其是包含重鏈序列 gH9 ( SEQ ID NO: 9 )和輕鏈序列g(shù)L7 ( SEQ ID NO: 7 )的抗體，可以類 似地用于中和IL-17A和IL-17F活性。因此，本發(fā)明還提供了結(jié)合人 IL-17A和人IL-17F的中和抗體，其交叉阻斷如上所述任何一個(gè)抗體 與人IL-17A和/或人IL-17F和/或人IL-17A/F雜二聚體的結(jié)合和/或 通過(guò)那些抗體中的任一種交叉阻斷其與IL-17A和/或IL-17F和/或人 IL-17A/F雜二聚體的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，這樣的抗體結(jié)合如上 所述抗體相同的表位。在另一個(gè)實(shí)施方案中，交叉阻斷中和抗體結(jié)合 由上文中所述抗體結(jié)合的表位接近和/或重疊的表位。在另一個(gè)實(shí)施方
的表位或與所述表位接近和/或重疊的表位。
可以使用本領(lǐng)域中任何合適的方法來(lái)鑒定交叉阻斷抗體，例如， 使用竟?fàn)幮訣LISA或BIAcore，其中交叉阻斷抗體與人IL-17A和/或 人IL-17F的結(jié)合阻止了本發(fā)明抗體的結(jié)合，或反之亦然。
在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗 體，其交叉阻斷重鏈包含序列g(shù)H9 (SEQ ID N0 : 9)和輕鏈包含序列 gL7 (SEQ ID NO: 7)的抗體與人IL-17A和人IL-17F的結(jié)合。在一個(gè) 實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的交叉阻斷抗體抑制包含重鏈序列g(shù)H9 (SEQ ID NO: 9 )和輕鏈序列g(shù)L7 ( SEQ ID NO: 7 )的抗體與IL-17A和IL-17F 的結(jié)合，對(duì)IL-17A的抑制高于80°/。，優(yōu)選高于85%，更優(yōu)選高于90%， 甚至更優(yōu)選高于95%，對(duì)IL-17F的抑制高于80%，優(yōu)選高于85%，更
19優(yōu)選高于90%，甚至更優(yōu)選高于95%。
在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了結(jié)合人IL-17A和IL-17F的中和抗體， 其交叉阻斷重鏈包含序列g(shù)H9(SEQ IDN0: 9)和輕鏈包含序列g(shù)L7(SEQ ID NO: 7 )的抗體與人IL-UA、人IL-17F和人IL-17A/F雜二聚體的 結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的交叉阻斷抗體抑制包含重鏈 序列g(shù)H9 (SEQ ID NO : 9)和輕鏈序列g(shù)L7 (SEQ ID NO: 7 )的抗體 與IL-17A、 IL-17F和IL-17A/F雜二聚體的結(jié)合，對(duì)IL-17A的抑制高 于80%，優(yōu)選高于85%,更優(yōu)選高于90%，甚至更優(yōu)選高于95%，對(duì)IL-17F 的抑制高于80%，優(yōu)選高于85%，更優(yōu)選高于90%,甚至更優(yōu)選高于95%, 對(duì)IL-17A/F的抑制高于80%，優(yōu)選高于85%,更優(yōu)選高于90%,甚至 更優(yōu)選高于95%。
在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗 體，其交叉阻斷重鏈包含序列g(shù)H9 ( SEQ ID NO: 9 )和輕鏈包含序列g(shù)L7 (SEQ ID NO: 7 )的抗體與人IL-17A、或與人IL-17F或人IL-17A/F 雜二聚體的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的交叉阻斷抗體抑
制包含重鏈序列g(shù)H9 ( SEQ ID NO : 9 )和輕鏈序列g(shù)L7 ( SEQ ID NO: 7 ) 的抗體與IL-17A或IL-17F或IL-17A/F的結(jié)合，該抑制高于80%，優(yōu) 選高于85%,更優(yōu)選高于90%，甚至更優(yōu)選高于95%。
可替換地或另外地，可以通過(guò)包含重鏈序列g(shù)H9 (SEQ ID NO: 9) 和輕鏈序列g(shù)L7 ( SEQ ID NO: 7 )的抗體來(lái)交叉阻斷根據(jù)本發(fā)明該方面 的中和抗體與人IL-17A和人IL-7F的結(jié)合。因此，還提供了結(jié)合人 IL-17A和人IL-17F的中和抗體，通過(guò)包含重鏈序列g(shù)H9 ( SEQ ID NO: 9 )和輕鏈序列g(shù)L7 ( SEQ ID NO: 7 )的抗體交叉阻斷其與人IL-17A 和人IL-17F的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)包含重鏈序列g(shù)H9(SEQ ID NO: 9)和輕鏈序列g(shù)L7 (SEQ ID NO: 7 )的抗體抑制了本發(fā)明的該 方面提供的中和抗體與人IL-17A和人IL-17F的結(jié)合，該抑制高于 80%，優(yōu)選高于85%，更優(yōu)選高于90%，甚至更優(yōu)選高于95%。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和 抗體分子，通過(guò)包含重鏈序列g(shù)H9(SEQ IDNO: 9)和輕鏈序列g(shù)L7 ( SEQID NO: 7)的抗體交叉阻斷了其與人IL-17A、人IL-17F和IL-17A/F 雜二聚體的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)包含重鏈序列g(shù)H9(SEQID NO: 9)和輕鏈序列g(shù)L7 ( SEQ ID NO: 7 )的抗體抑制了本發(fā)明的該方面 提供的中和抗體與人IL-17A、人IL-17F和人IL-17A/F雜二聚體的結(jié) 合，該抑制高于80%，優(yōu)選高于85%，更優(yōu)選高于90%，甚至更優(yōu)選高 于95%。
因此，還提供了結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗體分子，通 過(guò)包含重鏈序列g(shù)H9 ( SEQ ID NO: 9 )和輕鏈序列g(shù)L7 ( SEQ ID NO: 7 ) 的抗體交叉阻斷了其與人IL-17A或人IL-17F或人IL-17A/F雜二聚體 的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)包含重鏈序列g(shù)H9 (SEQ ID NO: 9) 和輕鏈序列g(shù)L7 (SEQ ID NO: 7)的抗體抑制了本發(fā)明的該方面提供的 中和抗體與人IL-17A或人IL-17F或人IL-17A/F雜二聚體的結(jié)合，該 抑制高于80%，優(yōu)選高于85%,更優(yōu)選高于90%,甚至更優(yōu)選高于95°/。。
本發(fā)明任一方面的抗體分子優(yōu)選具有高結(jié)合親和性，優(yōu)選納摩爾， 甚至更優(yōu)選皮摩爾。將認(rèn)識(shí)到根據(jù)本發(fā)明的抗體對(duì)人IL-17A的結(jié)合親 和性不同于相同抗體對(duì)人IL-17F和/或IL-17A/F雜二聚體的結(jié)合親和 性。在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A的親和性高于對(duì) IL-17F的親和性。在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A的親 和性是其對(duì)IL-17F的結(jié)合親和性的至少10倍。在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā) 明的抗體分子對(duì)IL-17A的親和性是其對(duì)IL-17F的結(jié)合親和性的至少 50倍。在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A的親和性是其對(duì) IL-17F的結(jié)合親和性的至少100倍。在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的抗體分 子對(duì)IL-17F的親和性高于對(duì)IL-17A的親和性。在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā) 明的抗體分子對(duì)IL-17A的親和性和對(duì)IL-17F的親和性相同。在一個(gè) 實(shí)例中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A具有皮摩爾的親和性，而對(duì) IL-17F具有納摩爾的親和性。在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的抗體分子對(duì) IL-17F具有納摩爾的親和性，而對(duì)IL-17A具有皮摩爾的親和性。在 一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A和IL-:HF都具有納摩爾的 親和性。在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A和IL-17F都具有皮摩爾的親和性。
優(yōu)選，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A具有優(yōu)于10nM的結(jié)合親和性。 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A具有優(yōu)于500pM的親 和性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A具有優(yōu)于100pM 的親和性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A具有優(yōu)于 20pM的親和性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體對(duì)IL-17A具有16pM 的親和性。
優(yōu)選，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17F具有優(yōu)于10nM的結(jié)合親和性。 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17F具有優(yōu)于2nM的親和 性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體對(duì)IL-17F具有1. 75nM的親和 性。
優(yōu)選，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A/F雜二聚體具有優(yōu)于10nM的 結(jié)合親和性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A/F雜二 聚體具有優(yōu)于500pM的結(jié)合親和性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗 體分子對(duì)IL-17A/F雜二聚體具有優(yōu)于150pM的結(jié)合親和性。在一個(gè)實(shí) 施方案中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)IL-17A/F雜二聚體具有116pM的結(jié)合 親和性。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)獼猴IL-17F具有優(yōu)于 2nM的結(jié)合親和性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子對(duì)獼猴 IL-17F具有1. 03nM的結(jié)合親和性。
的抗體的親和性。因此，本發(fā)明還涉及本發(fā)明抗體分子的變體，其對(duì) IL-17A和或IL-17F具有提高的親和性?？梢酝ㄟ^(guò)很多親和性成熟方 案獲得這種變體，包括使CDR突變(Yang等，J. Mol. Biol. ， ^1， 392-403， 1995 )、鏈改組(Marks等，Bio/Technology， i^， 779-783， 1992 )、使用大腸桿菌突變林(Low等，J. Mol. Biol. ， ， 359-368，
1996 )、 DNA改組(Patten等，Curr. Opin. Biotechnol，多，724-733，
1997 )、噬菌體展示(Thompson等，J. Mol. Biol.，里，77-88, 1996 )和有性PCR( sexual PCR ) ( Crameri等，Nature,巡，288-291，1998 ) 。 Vaughan等(上文)討論了這些親和性成熟的方法。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體分子中和IL-17A和IL-17F活 性，例如，在實(shí)施例中描述的體外試驗(yàn)中。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā) 明提供了對(duì)人IL-17A和IL-17F具有特異性的中和抗體，其在小于5nM 的濃度下能夠抑制50% 0. 8nM人IL-17A的活性，在小于12nM的濃度 下能夠抑制50% 4. 2nM人IL-17F的活性，用IL-17A或IL-17F誘導(dǎo) 的從海拉細(xì)胞的IL-6釋放來(lái)度量所述抑制活性。在一個(gè)實(shí)施方案中， 抑制50% IL-17A的抗體濃度小于3nM。在一個(gè)實(shí)施方案中，抑制50% IL-17F的抗體濃度小于llnM。在一個(gè)實(shí)施方案中，該試驗(yàn)中使用的人 IL-17A和人IL-17F是重組人IL-17A和IL-17F。在一個(gè)實(shí)施方案中， 中和抗體是人源化或完全人的抗體。
如果期望，本發(fā)明使用的抗體可以綴合一個(gè)或多個(gè)效應(yīng)分子。將
分子連接形成可二連接本發(fā)明抗體的單;蟲部分:'在期望獲得連接效應(yīng)
分子的抗體片段的情況下，這可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)或重組DNA程序來(lái)制 備，其中抗體片段直接連接或通過(guò)偶聯(lián)劑連接效應(yīng)分子。綴合這樣的 效應(yīng)分子與抗體的技術(shù)是本領(lǐng)域公知的(參見(jiàn)，Hellstrom等， Controlled Drug Delivery (受控藥物傳送)，第2版，Robinson等， 編輯，1987， pp. 623-53; Thorpe等，1982， Immunol. Rev. ， 62: 119-58 和Dubowchik等,1999， Pharmacology and Therapeutics (藥理學(xué) 和治療學(xué))，83， 67-123 )。特定的化學(xué)方法，包括，例如，W0 93/06231、 W0 92/22583、 W0 89/00195、 W0 89/01476和WO03031581中所述的那 些?；蛘?，在效應(yīng)分子是蛋白或多肽的情況下，可以使用重組DNA程 序?qū)崿F(xiàn)連接，例如，如WO 86/01533和EP0392745中所述的。
如在此所用的的術(shù)語(yǔ)效應(yīng)分子包括，例如，抗腫瘤劑、藥物、毒 素、生物活性蛋白，例如酶、其他抗體或抗體片段、合成或天然存在 的聚合物、核酸及其片段，例如DNA、 RNA及其片段、放射性核素，特 別是放射性碘、放射性同位素、螯合金屬、納米顆粒和報(bào)告基團(tuán)，如 焚光化合物或通過(guò)NMR或ESR光鐠術(shù)可檢測(cè)到的化合物。效應(yīng)分子的實(shí)例可以包括細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒劑，包括對(duì)細(xì)胞有害
(例如，殺滅)的任何試劑。實(shí)例包括combrestatins、多拉司他汀、 epothilones、 星形孢菌素、maytansinoids、 spongistatins、 根霉 素、軟海綿素、桿孢菌素、hemiasterlins、紫杉酚、細(xì)胞松弛素B、 短桿菌肽D、溴化乙錠、吐根堿、絲裂霉素、鬼臼亞乙苷、tenoposide、 長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花堿、秋水仙素、阿霉素、柔紅霉素、二羥炭疽菌素 二酮、米托蒽醌、光輝霉素、放線菌素D、 l-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、 普魯卡因、丁卡因、利多卡因、心得安和嘌呤霉素及其類似物或同系 物。
效應(yīng)分子還包括但不限于抗代謝物(例如，氨曱蝶呤、6-巰基嘌 呤、6-巰基鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氛烯咪胺)、烷化劑(例 如，二氯甲二乙胺、thioepa苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、亞硝脲氮 芥(BSNU)和環(huán)己亞硝脲(CCNU)、環(huán)磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、 鏈脲佐菌素、絲裂霉素C和順二氯化二氨亞鉑(II) (DDP)順鉑)、 蒽環(huán)類抗生素(例如，柔紅霉素(daunorubicin )(以前是(daunomycin ) 和阿霉素)、抗生素(例如，放線菌素(dactinomycin )(以前是 actinomycin)、博萊霹素、光輝霉素、氨茴霉素(AMC)、刺孢霉素 或多卡米星)和抗有絲分裂劑(例如，長(zhǎng)春新堿和長(zhǎng)春花堿)。
其他效應(yīng)分子可以包括螯合放射性核素，如min和，、Lu177、鉍 213、锎252 、銥192和鴒187錸188;或藥物，如但不限于，烷基磷酸膽堿、 拓樸異構(gòu)酶I抑制劑、紫杉烷和蘇拉明。
其他效應(yīng)分子包括蛋白、肽和酶。感興趣的酶包括但不限于蛋白 水解酶、水解酶、裂解酶、異構(gòu)酶、轉(zhuǎn)移酶。感興趣的蛋白、多肽和 肽包括但不限于免疫球蛋白，毒素，如相思豆毒蛋白、蓖麻毒A、假 單胞菌外毒素或白喉毒素，蛋白，如胰島素、腫瘤壞死因子、cc-干擾 素、p-干擾素、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子或組織纖溶酶原 激活物、血松形成劑或抗血管生成劑，例如，制管張素或內(nèi)皮抑制素， 或生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物，如淋巴因子、白細(xì)胞間介素-1 (IL-1)、白細(xì)胞 間介素-2 (IL-2)、白細(xì)胞間介素-6 (IL-6)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落
24刺激因子(GM-CSF)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子
(NGF)或其他生長(zhǎng)因子和免疫球蛋白。
其他效應(yīng)分子可以包括例如用于診斷中的可檢測(cè)物質(zhì)?？蓹z測(cè)物 質(zhì)的實(shí)例包括各種酶、輔基、熒光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)、生物發(fā)光物質(zhì)、 放射性核素、正電子放射金屬(用于正電子發(fā)射層析成像)和非放射 性順磁性金屬離子。關(guān)于可以綴合抗體用作診斷的金屬離子，通常參 見(jiàn)美國(guó)專利No. 4， 741， 900。合適的酶包括辣根過(guò)氧化酶、堿性磷酸酶、
P -半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶；合適的輔基包括鏈霉抗生物素蛋白、 抗生物素蛋白和生物素；合適的熒光物質(zhì)包括傘形酮、熒光素、異硫 氰酸熒光素、若丹明、二氯三嗪基胺熒光素、丹磺酰氯和藻紅蛋白； 合適的發(fā)光物質(zhì)包括魯米諾；合適的生物發(fā)光物質(zhì)包括熒光素酶、瑩 光素和水母發(fā)光蛋白；和合適的放射性核素包括125I、 131I、 mIn和"Tc。
在另一個(gè)實(shí)例中，效應(yīng)分子可以提高抗體在體內(nèi)的半衰期和/或降 低抗體的免疫原性和/或提高抗體穿過(guò)上皮屏障遞送到免疫系統(tǒng)。該類 型合適的效應(yīng)分子實(shí)例包括聚合物、白蛋白、白蛋白結(jié)合蛋白或白蛋 白結(jié)合化合物，如W005/117984中描述的那些。
在效應(yīng)分子是聚合物的情況下，它通?？梢允呛铣傻幕蛱烊淮嬖?的聚合物，例如，任選取代的直鏈或支鏈聚烷撐、聚亞烷基或聚乙二 醇聚合物或分支或不分支的多糖，例如，同型或異型多糖。
可以存在于上述合成聚合物上的特定的任選取代基包括一個(gè)或多 個(gè)羥基、曱基或甲氧基。
合成聚合物的特定實(shí)例包括任選取代的直鏈或支鏈聚(乙二醇)、 聚(丙二醇)、聚(乙烯醇)或其衍生物，特別是任選取代的聚(乙二醇)， 如單甲氧基聚(乙二醇)或其衍生物。
特定的天然存在的聚合物包括乳糖、直鏈淀粉、葡聚糖、糖原或 其衍生物。
在此所用的"衍生物"意欲包括反應(yīng)性的衍生物，例如，巰基-選擇性的活性基團(tuán)，如馬來(lái)酰亞胺等。反應(yīng)性基團(tuán)可以直接連接或通 過(guò)銜接片段連接聚合物。將認(rèn)識(shí)到這種基團(tuán)的殘基在有些情況下會(huì)作為抗體片段和聚合物之間的連接基形成產(chǎn)物的一部分。
聚合物的大小可以根據(jù)需要而變化，但是平均分子量通常為
500Da至50000Da，優(yōu)選5000至40000Da，更優(yōu)選20000至40000Da。
尤其可以基于產(chǎn)品的預(yù)定用途來(lái)選擇的聚合物大小，例如，局限于特 定組織如腫瘤的能力或延長(zhǎng)循環(huán)半衰期的能力(對(duì)于綜述，參見(jiàn) Chapman, 2002， Advanced Drug Del ivery Reviews， 54， 531-545 )。 因此，例如，在產(chǎn)物意欲離開循環(huán)并穿過(guò)組織，例如用于治療腫瘤的 情況下，使用小分子量聚合物可能是有利的，例如，大約5000Da的分 子量。對(duì)于產(chǎn)物保留在循環(huán)中的應(yīng)用，使用較高分子量的聚合物可能 是有利的，例如，具有20000Da至40000Da范圍的分子量。
特別優(yōu)選的聚合物包括聚烷撐聚合物，如聚(乙二醇)，或尤其是 甲氧基聚(乙二醇)或其衍生物，且特別具有約15000Da至約40000Da 范圍的分子量。
在一個(gè)實(shí)例中，將本發(fā)明中使用的抗體與聚(乙二醇)(PEG)部分連 接。在一個(gè)特別的實(shí)例中，該抗體是抗體片段并可以通過(guò)位于抗體片 段中的任何可利用氨基酸側(cè)鏈或末端氨基酸官能團(tuán)例如任何游離氨 基、亞氨基、硫醇基、羥基或羧基與PEG分子連接。這種氨基酸可以 天然存在于抗體片段中或可以使用重組DM方法而工程化至片段中 (參見(jiàn)，例如，US 5， 219， 996; US 5, 667,425; W098/25971 )。在一 個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的抗體分子是修飾的Fab片段，其中修飾是將一個(gè) 或多個(gè)氨基酸添加至其重鏈C末端以允許連接效應(yīng)分子。優(yōu)選，另外 的氨基酸形成修飾的絞鏈區(qū)，該區(qū)含有可以連接效應(yīng)分子的一個(gè)或多 個(gè)半胱氨酸殘基。多個(gè)位點(diǎn)可用于連接兩個(gè)或多個(gè)PEG分子。
優(yōu)選通過(guò)位于抗體中的至少一個(gè)半胱氨酸殘基的硫醇基共價(jià)連接 PEG分子。與修飾的抗體片段連接的每個(gè)聚合物分子可以與位于片段 中的半胱氨酸殘基的硫原子共價(jià)連接。共價(jià)鍵通常將是二硫鍵或尤其 是硫-碳鍵。在硫醇基用作適當(dāng)激活效應(yīng)分子的連結(jié)點(diǎn)的情況下，例如， 可以使用疏醇選擇性衍生物，如馬來(lái)酰亞胺和半胱氨酸衍生物。激活 的聚合物可以用作制備如上所述的聚合物修飾的抗體片段的原料。激活的聚合物可以是含有硫醇反應(yīng)性基團(tuán)的任何聚合物，如a -卣素羧酸 或酯，例如，碘乙酰胺，酰亞胺，例如，馬來(lái)酰亞胺，乙烯基砜或二 石充化物。這種原料可購(gòu)得(例如從Nektar，以前的Shearwater Polymers Inc., Himtsville， AL， USA)或可以從可購(gòu)得的原料^f吏用 常規(guī)化學(xué)步驟制備。特定的PEG分子包括2OK甲氧基-PEG-胺(可從 Nektar, 以前的Shearwater; Rapp Polymere; 和SunBio獲得)和 M-PEG-SPA (可從Nektar，以前的Shearwater獲得)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體是PEG化的修飾Fab片段，即，具有 與其共價(jià)連接的PEG (聚(乙二醇))，例如根據(jù)EP 0948544中公開 的方法[請(qǐng)參閱 "Poly (ethyleneglycol) Chemistry, Biotechnical and Biomedical Applications"(聚(乙二醇)化學(xué)，生物技術(shù)和 生物藥物應(yīng)用，1992， J. Milton Harris (編輯)，Plenum Press, New York," Poly (ethyleneglycol) Chemistry and Biological Applications"(聚(乙二醇)化學(xué)和生物應(yīng)用)，1997, J. Milton Harris和S. Zalipsky (編輯)，American Chemical Society, Washington DC和"Bioconjugation Protein Coupl ing Techniques for the Biomedical Sciences"(用于生物藥物科學(xué)的生物綴合蛋白連接 技術(shù))，1998， M. Aslam和A. Dent, Grove Publishers， New York, Chapman, A. 2002， Advanced Drug Delivery Reviews 2002, 54:531-545]。在一個(gè)實(shí)例中，PEG與絞鏈區(qū)的半胱氨酸連接。在一個(gè) 實(shí)例中，PEG修飾的Fab片段具有與修飾絞鏈區(qū)中單個(gè)硫醇基共價(jià)連 接的馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)。賴氨酸殘基可以與馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)共價(jià)連接， 并且賴氨酸殘基上的每個(gè)胺基可以連接分子量為大約20， 000 Da的甲 氧基聚(乙二醇)聚合物。因此與Fab片段連接的PEG的總分子量可以 是大約40， 000 Da。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了對(duì)人IL-17A和IL-17F具有特 異性的中和抗體，其是修飾的Fab片段，具有包含SEQ ID NO: 9給出 序列的重鏈和包含SEQ ID NO. 7給出序列的輕鏈，并且在其重鏈C末 端具有含與效應(yīng)分子連接的至少 一個(gè)半胱氨酸殘基的修飾絞鏈區(qū)。優(yōu)
27選，效應(yīng)分子是PEG和使用(W098/25971和W02004072116 )中所述的 方法連接，由此賴氨酰馬來(lái)酰亞胺基與重鏈C末端的半胱氨酸殘基連 接，并且賴氨酰殘基的每個(gè)氨基與分子量約20， 000 Da的甲氧基聚(乙 二醇)殘基共價(jià)連接。因此與抗體連接的PEG的總分子量可以是大約 40， OOODa。
在另一個(gè)實(shí)例中，效應(yīng)分子可以與抗體片段連接，使用國(guó)際專利 申請(qǐng)WO 2005/003169、 WO 2005/003170和WO 2005/003171中描述的 方法。
本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明抗體分子的重鏈和/或輕鏈的分離 DNA序列。優(yōu)選，該DNA序列編碼本發(fā)明抗體分子的重鏈或輕鏈。本 發(fā)明的DNA序列可以包括合成的DNA,例如化學(xué)方法生產(chǎn)的，cDM、 基因組DNA或其任何組合。
編碼本發(fā)明抗體分子的DNA序列可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的 方法獲得。例如，可以按照需要從確定的DNA序列或基于相應(yīng)的氨基 酸序列來(lái)合成編碼部分或全部抗體重鏈和輕鏈的DNA序列。
編碼受體框架序列的DNA是本領(lǐng)域技術(shù)人員普遍可獲得的并且可 以根據(jù)它們的已知氨基酸序列容易地合成。
DNA序列。可以使用寡核苷酸合成技術(shù)完全或部分地合成所需的DNA 序列。如果需要，可以使用定點(diǎn)誘變和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)。
SEQIDN0:8; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO: 18中提供了合適序列的實(shí)例。SEQ ID NO: 18 中的核苷酸1-57個(gè)SEQ ID NO: 14中的核苷酸1-60編碼來(lái)自鼠抗體 B72. 3的信號(hào)肽序列 (Whittle等，1987， Protein Eng. 1(6) 499-505 )，將其分裂來(lái)產(chǎn)生本發(fā)明的中和抗體分子。
本發(fā)明還涉及含有本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)DNA序列的克隆或表達(dá)載 體。因此，提供了包含編碼本發(fā)明抗體的一個(gè)或多個(gè)DNA序列的克隆 或表達(dá)栽體。優(yōu)選，克隆或表達(dá)載體分別包含編碼本發(fā)明抗體分子輕 鏈和重鏈的兩個(gè)DNA序列。優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明的載體包含SEQ ID NO: 14和SEQ ID NO: 18給出的序列。SEQ ID NO: 18中的核苷酸1-57和SEQ ID NO: 14中的核苷酸1-60編碼來(lái)自小鼠抗體B72. 3的信號(hào)肽序列 (分別是SEQ ID NO: 16中的殘基1-19和SEQ ID NO: 12中的1-20)， 最優(yōu)選將其分裂來(lái)獲得本發(fā)明的中和抗體分子。
可以構(gòu)建栽體的一般方法、轉(zhuǎn)染方法和培養(yǎng)方法是本領(lǐng)域技術(shù)人 員公知的。在這方面，參考 "Current Protocols in Molecular Biology"(分子生物學(xué)中的通用方案)，1999， F. M. Ausubel (編 輯)，Wiley Interscience ， New York 和 Cold Spring Harbor Publishing生產(chǎn)的Maniatis Manual。
還提供了包含一個(gè)或多個(gè)克隆或表達(dá)栽體的宿主細(xì)胞，該載體包 含編碼本發(fā)明抗體的一個(gè)或多個(gè)DNA序列。任何合適的宿主細(xì)胞/載體 系統(tǒng)可以用于表達(dá)編碼本發(fā)明抗體分子的DNA序列。可以使用細(xì)菌， 例如，大腸桿菌，和其他微生物系統(tǒng)，或也可以使用真核生物例如哺 乳動(dòng)物宿主細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。合適的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞包括CH0、骨髓 瘤或雜交瘤細(xì)胞。
本發(fā)明還提供了生產(chǎn)根據(jù)本發(fā)明的抗體分子的方法，包括在適于 引起從編碼本發(fā)明抗體分子的DNA表達(dá)蛋白的條件下培養(yǎng)含有本發(fā)明 栽體的宿主細(xì)胞，和分離該抗體分子。
該抗體分子可以只包舍重鏈或輕鏈多肽，而在這樣情況下，只需 要重鏈或輕鏈多肽編碼序列來(lái)用于轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。對(duì)于包含重鏈和輕 鏈的產(chǎn)物的生產(chǎn)，可以用兩個(gè)載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞系，第一個(gè)載體編碼輕鏈 多肽，而第二個(gè)載體編碼重鏈多肽。或者，可以使用單個(gè)載體，該栽 體包含編碼輕鏈和重鏈多肽的序列。
由于本發(fā)明抗體可用于治療和/或預(yù)防病理情況，本發(fā)明還提供了 包含本發(fā)明抗體分子并結(jié)合一種或多種藥物學(xué)上可接受的賦形劑、稀 釋劑或栽體的藥物或診斷組合物。因此，提供了根據(jù)本發(fā)明的抗體用 于制備藥物的用途。該組合物通常以無(wú)菌藥物組合物的一部分提供， 該藥物組合物通常包括藥物學(xué)上可接受的栽體。本發(fā)明的藥物組合物 可以另外包含藥物學(xué)上可接受的佐劑。本發(fā)明還提供了制備藥物或診斷組合物的方法，包括將本發(fā)明的 抗體分子連同一種或多種藥物學(xué)上可接受的賦形劑、稀釋劑或栽體一 起添加和混合。
抗體分子可以是藥物或診斷組合物中唯一的活性成分或可以伴有
其他活性成分，包括其他抗體成分，例如抗TNF、抗IL-1P、抗T細(xì) 胞、抗IFNy或抗LPS抗體，或非抗體成分，如黃噤呤。
該藥物組合物優(yōu)選包含治療有效量的本發(fā)明抗體。如在此所用的 術(shù)語(yǔ)"治療有效量"是指治療、改善或預(yù)防目標(biāo)疾病或病情所需，或 呈現(xiàn)出可檢測(cè)的治療或預(yù)防作用所需的治療劑量。對(duì)于任何抗體，可 以在細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)或在動(dòng)物模型中初步估計(jì)治療有效量，通常在嚙齒 類、兔、狗、豬或靈長(zhǎng)類動(dòng)物中。該動(dòng)物模型也可以用于測(cè)定合適的 濃度范圍和給藥途徑。然后這種信息可用于確定在人類中的有效劑量 和給藥途徑。
對(duì)于人患者的精確治療有效量將取決于疾病狀況的嚴(yán)重性、患者 的一般健康狀況、患者的年齡、體重和性別、飲食、給藥的時(shí)間和頻 率、藥物聯(lián)合、對(duì)治療的反應(yīng)敏感性和耐受度/反應(yīng)。該含量可以通過(guò) 常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定并且在臨床醫(yī)師的判斷之內(nèi)。通常，治療有效量為 0. 01mg/kg至50mg/kg，優(yōu)選0. lmg/kg至20mg/kg。藥物組合物可以 方便地以每劑含有預(yù)定量本發(fā)明活性劑的單位劑型存在。
該組合物可以單獨(dú)給予患者或可以聯(lián)合其他試劑、藥物和激素給 予(例如同時(shí)、按序或分開)。
本發(fā)明抗體分子給予的劑量取決于所治療病情的性質(zhì)、存在的炎 癥程度和取決于該抗體分子是用于預(yù)防還是治療現(xiàn)有的病情。
劑量的次數(shù)將取決于抗體分子的半衰期及其作用的持續(xù)時(shí)間。如 果抗體分子具有短半衰期(例如2至10小時(shí))，需要每天給予一劑或 多劑?；蛘撸绻贵w分子具有半長(zhǎng)衰期(例如2至15天)，僅需要 給予每天一次、每周一次乃至每1個(gè)月或2個(gè)月一次的劑量。
藥物學(xué)上可接受的栽體本身不應(yīng)該誘導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)接受該組合物的個(gè) 體有害的抗體并且不應(yīng)該有毒。合適的載體可以是大的、緩慢代謝的大分子，如蛋白質(zhì)、多肽、脂質(zhì)體、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氨 基酸、氨基酸共聚物和無(wú)活性的病毒顆粒。
可以使用藥物學(xué)上可接受的鹽，例如無(wú)機(jī)酸鹽，如鹽酸鹽、氫溴 酸鹽、磷酸鹽和疏酸鹽，或有機(jī)酸鹽，如醋酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽 和苯甲酸鹽。
治療組合物中的藥物學(xué)上可接受的載體可以另外含有液體，如水、
鹽水、甘油和乙醇。另外，輔料，如潤(rùn)濕劑或乳化劑或pH緩沖劑可以 存在于這樣的組合物中。這樣的載體能使該藥物組合物配制成片劑、 丸劑、糖衣丸、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液和懸浮液，用于由患 者攝取。
優(yōu)選的給藥形式包括適于非腸道給藥的形式，例如通過(guò)注射或輸 注，例如通過(guò)快速濃注或連續(xù)輸注。在產(chǎn)品用于注射或輸注的情況下， 可以釆用含油或含水載體中的懸浮液、溶液或乳濁液的形式，并且可 以含有配制劑，如懸浮劑、防腐劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?；蛘?，抗體 分子可以是干燥形式，在使用前用合適的無(wú)菌液體重建。
一旦配制，本發(fā)明的組合物可以直接給予患者。待治療的患者可 以是動(dòng)物。然而，優(yōu)選該組合物適于給予人患者。
本發(fā)明的藥物組合物可以通過(guò)許多途徑給予，包括但不限于口腔、 靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、透皮、經(jīng)皮下(例如， 參見(jiàn)W0 98/20734 )、皮下、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、腸內(nèi)、局部、舌下、陰 道內(nèi)或直腸途徑。也可以使用無(wú)痛皮下噴射器給予本發(fā)明的藥物組合 物。通常，治療組合物可以制備成可注射的，液體溶液或懸浮液。也 可以制成適于注射前以溶于或懸浮于液體栽體的固體形式。
通常通過(guò)注射、皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)注射或遞送至組織 間隙來(lái)實(shí)現(xiàn)組合物的直接遞送。還可以將組合物給予受損處。劑量治 療可以是單劑量方案或多劑量方案。
將認(rèn)識(shí)到組合物中的活性成分將是抗體分子。正因?yàn)槿绱耍?胃腸道易于降解。因此，如果組合物通過(guò)胃腸道途徑給予，該組合物 將需要含有保護(hù)抗體不被降解的試劑，但其一旦被胃腸道吸收則釋放該抗體。
藥物學(xué)上可接受栽體的深入討論可在 Remington's Pharmaceutical Sciences (雷明頓氏藥物科學(xué))(Mack Publishing Company, N. J. 1991 )中獲得。
還設(shè)想了通過(guò)使用基因治療給予本發(fā)明的抗體。為了實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)， 將在合適的DNA成分控制下的編碼抗體分子的重鏈和輕鏈的DNA序列 導(dǎo)入患者種，使得從DNA序列表達(dá)該抗體鏈并在原位裝配。
本發(fā)明還提供了用于控制炎性疾病的抗體分子。優(yōu)選，該抗體分 子可用于減輕炎性過(guò)程或預(yù)防炎性過(guò)程。
本發(fā)明還提供了用于治療或預(yù)防由IL-17A和/或IL-17F介導(dǎo)的或 與升高的IL-17A和/或IL-17F水平相關(guān)的病理失調(diào)的本發(fā)明的抗體分 子。優(yōu)選，病理情況選自感染(病毒、細(xì)菌、真菌和寄生蟲性的)、 與感染相關(guān)的內(nèi)毒素性休克、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、津喘、盆腔 炎、阿爾茨海默氏病、克羅恩氏病、炎癥性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、 Peyronie氏疾病、乳糜瀉、膽囊疾病、藏毛病、腹膜炎、4艮屑病、脈 管炎、手術(shù)粘連、中風(fēng)、I型糖尿病、萊姆關(guān)節(jié)炎、腦膜腦炎、免疫 介導(dǎo)的中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的炎性障礙，如多發(fā)性硬化和吉-巴綜合 征、其他自體免疫障礙、胰腺炎、外傷(手術(shù))、移植抗宿主疾病、 移植排斥、癌癥(實(shí)體腫瘤，如黑素瘤、肝胚細(xì)胞瘤、肉瘤、鱗狀細(xì) 胞癌、移行細(xì)胞癌、卵巢癌和血液系統(tǒng)惡性腫瘤，尤其是急性髄性白 血病、慢性粒性白血病、胃癌和結(jié)腸癌)、心臟病，包括缺血性疾病， 如心肌梗塞以及動(dòng)脈粥樣硬化、血管內(nèi)凝血、骨吸收、骨質(zhì)疏松癥、 骨關(guān)節(jié)炎、牙周炎和胃酸過(guò)少。
本發(fā)明還提供了用于治療或預(yù)防疼痛的根據(jù)本發(fā)明的抗體分子。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了根據(jù)本發(fā)明的抗體分子用于制造治療或預(yù)防 由IL-17A和/或IL-17F介導(dǎo)的或與升高的IL-17A和/或IL-17F水平 相關(guān)的病理失調(diào)的藥物的用途。優(yōu)選病理失調(diào)是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或多 發(fā)性硬化。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了根據(jù)本發(fā)明的抗體分子在制備治療或預(yù)防疼痛的藥物中的用途。
本發(fā)明的抗體分子可以用于期望降低IL-17A和/或IL-17F在人或 動(dòng)物體中的作用的任何療法中。IL-17A和/或IL-17F可以在體內(nèi)循環(huán) 或可以以出乎意料的高水平局部存在于體內(nèi)的特定部位，例如炎癥部 位。
優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的抗體分子用于控制炎性疾病、自體免疫疾病或 癌癥。
本發(fā)明還提供了治療患有由IL-17A和/或IL-17F介導(dǎo)的疾病或處 于這種風(fēng)險(xiǎn)中的人或動(dòng)物患者的方法，該方法包括將有效量的本發(fā)明 的抗體分子給予患者。
根據(jù)本發(fā)明的抗體分子也可以用于診斷，例如涉及IL-17A和/或 IL-17F的病況的體內(nèi)診斷和成像。
在下面參照附圖的實(shí)施例中，僅通過(guò)說(shuō)明進(jìn)一步描述了本發(fā)明，
其中-.


圖1:
a )抗體CA028 —0496的輕鏈V區(qū)(SEQ ID NO: 7 ) b )抗體CA028-0496的重鏈V區(qū)(SEQ ID NO: 9 ) c)抗體CA028-496的CDRHl( SEQ ID NO: 1 )， C醒2( SEQ ID NO: 2)，
C麵3 ( SEQ ID NO: 3 ) ， CDRL1 ( SEQ ID NO: 4 ) ， CDRL2 ( SEQ ID NO: 5 )，
CDRL3 ( SEQ ID NO: 6 )。
d )抗體CA028-496的輕鏈(SEQ ID NO: 11 )。 e )抗體CA028 — 496的重鏈(SEQ ID NO: 15 )。 f )編碼抗體CA028-496的輕鏈并包括信號(hào)序列的DNA (SEQ ID
NO: 14 )。
g)編碼抗體CA028 — 496的重鏈并包括信號(hào)序列的DNA (SEQ ID NO: 18)。
圖2
a )抗體CA028 — 0496 (圖例中稱為Ab#496 )對(duì)人IL-17A誘導(dǎo)的從海拉細(xì)胞產(chǎn)生IL-6的作用。
b)抗體CA028-0496 (圖例中稱為Ab#496 )對(duì)人IL-17F誘導(dǎo)的從 海拉細(xì)胞產(chǎn)生IL-6的作用。
Z W橫斧#一妓才法
使用大腸桿菌菌林INVaP ( Invitrogen)轉(zhuǎn)化和常規(guī)培養(yǎng)生長(zhǎng)。 DM限制和修飾酶得自Roche Diagnostics Ltd.和New England Biolabs。使用Maxi質(zhì)粒純化試劑盒(QIAGEN，目錄號(hào)12165)進(jìn)行 質(zhì)粒制備。使用ABI Prism Big Dye終止測(cè)序試劑盒(目錄號(hào)4304149 ) 進(jìn)行DNA測(cè)序反應(yīng)并在ABI 3100自動(dòng)測(cè)序儀(Applied Biosystems) 上運(yùn)行。使用AutoAssembler程序(Appl ied Biosystems)分析數(shù)據(jù)。 寡核苷酸得自Invitrogen。使用IgG裝配ELISA確定IgG的濃度。
重組IL-17A和IL-17F購(gòu)自R&D Systems。
通過(guò)使用GS連接物連接IL-17A和IL-17F來(lái)產(chǎn)生重組IL-17A/F
雜二聚體。雜二聚體具有以下序列(SEQ ID NO: 19)。
MGITIPRNPGCPNSEDKNFPRTVMVNLNIHNRNTNTNPKIISSDYYNRSTSPWNLHRN PVPGGSMKLDIGIINENQRVSMSRN正SRSTSPWNYTVTWDPNRYPSEWQAQCRNL
Q
重組獼猴IL-17F (SEQ ID NO: 20)
CVTPV工HHVQ
通過(guò)Entelechon GmbH化學(xué)合成編碼IL-17A/F雜二聚體的DNA 序列，并在Ndel/Xhol位點(diǎn)亞克隆至pET43. la中。使用引入NdeI和Xhol限制位點(diǎn)的引物通過(guò)PCR擴(kuò)增編碼cyno IL-17F的DNA序列。將 PCR產(chǎn)物與pCR4Blunt-T0P0連接并且在消化和在Ndel/Xho1位點(diǎn)上與 pET43. la連接之前驗(yàn)證序列。
使用編碼IL-17同種型的pET43. la DNA來(lái)轉(zhuǎn)染BL21 (DE3)細(xì)胞 并將選擇的羧節(jié)青霉素抗性克隆在含有2%葡萄糖和50pg/ml羧千青 霉素的2TY培養(yǎng)液中在37C下生長(zhǎng)過(guò)夜。然后將培養(yǎng)物稀釋并在相同 的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)至0. 5-0. 7的OD綱，用lmM IPTG誘導(dǎo)并在37C下再 生長(zhǎng)4-5小時(shí)。
通過(guò)離心收集細(xì)胞并從細(xì)胞制得包含體。將包含體溶解于50mM Tris-HCl、 5M鹽酸胍、50mMNaCl、 lmM EDTA、 2mM還原型谷胱甘肽、 0. 2mM氧化型谷胱苷肽(pH8. 5)中。通過(guò)將溶解的蛋白質(zhì)逐滴加入上 述不含鹽酸胍的緩沖液中使IL-17蛋白重折疊，使用強(qiáng)烈攪拌。選擇 最終的體積，使得最終的蛋白濃度不超過(guò)0. lmg/ml。
如果需要，用10mMMES pH6進(jìn)行緩沖液交換之前，將重折疊的蛋 白溶液濃縮。然后將蛋白施加至用20mMMES pH6平衡的Sepharose SP HP柱上。用超過(guò)10柱體積的MESpH6中的0-500mM線性梯度NaCl洗 脫蛋白。對(duì)于IL-17F，梯度延伸至600mM NaCl。為了進(jìn)一步純化IL-17， 收集來(lái)自Sepharose SP HP柱的相關(guān)級(jí)分，濃縮并用20mM CAPSO (pHIO)稀釋，并施加至用20mM CAPSO平衡的Mono Q柱上。用超過(guò) 20柱體積的20mM CAPSO中的0-250mM線性梯度NaCl洗脫蛋白。收集 含有IL-17的級(jí)分并使用1M MES pH6中和。
實(shí)施例1:中和抗IL-17抗體的產(chǎn)生
用重組人IL-17 (購(gòu)自R&D systems)免疫雌性Sprague Dawly 大鼠。大鼠接受100 弗氏佐劑中20 IL-17的四次免疫。使用 WO04/051268中所述的方法分離結(jié)合人IL-17的抗體225。分離抗體 225重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)的基因并且通過(guò) 逆轉(zhuǎn)錄PCR克隆后測(cè)序。
使用人V區(qū)受體框架并通過(guò)改變?cè)摽蚣軈^(qū)的供體殘基數(shù)量來(lái)設(shè)計(jì)一系列的人源化VL和VH區(qū)。設(shè)計(jì)八個(gè)移植VL區(qū)(gLl-8 )和9個(gè)移 植VH區(qū)(gHl-9),并通過(guò)寡核苷酸裝配和PCR誘變構(gòu)建基因。
將輕鏈移植序列亞克隆至人輕鏈表達(dá)載體pKH10, 1中，其含有編 碼人C-k恒定區(qū)(Km3同種異型)的DNA。將重鏈移植序列亞克隆至 人Y -4表達(dá)栽體pVhg4P FL中，其含有編碼含鉸鏈穩(wěn)定突變S241P的 人Y-4恒定區(qū)的DNA (Angal等，上文)。將質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至CH0細(xì) 胞中，并且在IL-17結(jié)合和中和測(cè)試中篩選所產(chǎn)生抗體的活性。根據(jù) 制造商的說(shuō)明書使用Lipofectamine 2000程序(InVUrogen，目錄 號(hào)11668 )進(jìn)行CH0細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。
基于表達(dá)、親和性和中和潛能選擇了最佳的移植物(gL7gH9)， 并命名為CA028-0496。該抗體的V區(qū)序列對(duì)于輕鏈(gL7 )和重鏈(gH9 ) 各自顯示于圖1 (a)和(b),以及SEQ ID NO: 7和9中。
重鏈?zhǔn)荏w框架是人種系序列VH3 1-3 3-07，框架4來(lái)自人JH區(qū) 種系JH4的這個(gè)部分。輕鏈?zhǔn)荏w框架是人種系序列VK1 2-l-(l)L4， 框架4來(lái)自人JK區(qū)種系JK1的這個(gè)部分。
實(shí)施例2:抗體CA028-0496中和IL-17、 IL-17F和IL-17A/F雜 二聚體
海拉細(xì)胞
測(cè)試了抗體CA028 —0496對(duì)抗海拉細(xì)胞中人重組IL-17和人重組 IL-17F的潛能，并與抗體CDP435相比較(W006/054059 )。海拉細(xì)胞 獲自ATCC的細(xì)胞庫(kù)(ATCCCCL-2)。將細(xì)胞生長(zhǎng)于補(bǔ)充10%胎牛血清、 青霉素、慶大霉素和谷氨酰胺的Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基(DMEM) 中。將lxl(T個(gè)細(xì)胞涂布于96孔平底組織培養(yǎng)平板中。將細(xì)胞孵育 過(guò)夜并在測(cè)試緩沖液中洗滌一次。在固定濃度的人TNF-oc存在下孵育 人IL-17A ( 25ng ml—1)或人IL-17F ( 125ng m1—1)，用抗體CA028一0496 或抗體CDP435預(yù)先孵育該混合物。然后將細(xì)胞因子加抗體加入孵育過(guò) 夜的海拉細(xì)胞中。細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中IL-6的產(chǎn)生與加入細(xì)胞中的 IL-17A/IL-17F含量成比例。通過(guò)ELISA測(cè)量人IL-6水平并通過(guò)與已知的人IL-6標(biāo)準(zhǔn)濃度相比較來(lái)定量。
數(shù)據(jù)(圖2a和2b)表明抗體CA028-0496有效地中和了人重組 IL-17A，并且對(duì)人IL-17F具有一定的活性。來(lái)自這些實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)表明 抗體CA028 — 0496對(duì)人重組IL-17( 25ng m1—1 )產(chǎn)生了 43/ng/ml的IC5。, 對(duì)重組IL-17F ( 125ng mr1)產(chǎn)生了 1477ng/ml的IC5。。
因此，抗體CA028 — 0496在該測(cè)試中對(duì)人重組IL-17 (0.78nM)產(chǎn) 生了 0. 29M的IC5。，對(duì)人重組IL-17F( 4. 16nM)產(chǎn)生了 10. 18nM的IC5。 (計(jì)算基于每個(gè)IgG，假定145，000的分子量為平均的IgG4，并假定 IL-17A和IL-17F是二聚體)。
人小膠質(zhì)細(xì)胞
將人小膠質(zhì)細(xì)胞(TCS Cellworks )涂布于平底96-孔平板中5， 000 個(gè)細(xì)胞/孔，總體積為100jil，并且放置24小時(shí)，使其連接塑料。在 該，在10ng/ml人重組TNFa存在和不存在下，將滴定度(5、 1、 0.2 和0. 04 ia g/ml )的人重組IL-17A、人重組IL-17F、獼猴重組IL-17F 和人重組IL-17A/F雜二聚體加入孔中，重復(fù)三份。對(duì)照孔不含有刺激 物，含有單獨(dú)的IL-17A ( 100ng/ml )、單獨(dú)的TNF ot以及IL-17A和 TNFa—起。以110p l/孔的總體積將所有細(xì)胞因子加入，使總的孔體 積為210ja 1。在涉及抗體的實(shí)驗(yàn)中，以相同的方式涂布細(xì)胞。24小時(shí) 后，在相同的時(shí)間加入抗體和細(xì)胞因子，以獲得總的200 ^ 1終體積中 所述的終濃度。
在37t:再孵育24小時(shí)后，收集上清液并在-20iC冷凍直至分析。 為了分析，將上清液稀釋1/10，并根據(jù)制造商的說(shuō)明使用人IL-6MSD 試劑盒測(cè)量IL-6。
發(fā)現(xiàn)測(cè)試的所有IL-17同種型在該測(cè)試中是有活性的，特別是在 TNFa的存在下。
在TNFa存在下測(cè)試抗體CA028-0496對(duì)抗人小膠質(zhì)細(xì)胞中的人重 組IL-17A、人重組IL-17F、獼猴重組IL-17F和人重組IL-17A/F雜二 聚體的潛能，并使用上述方法與對(duì)照抗體和IL-17A特異性抗體相比
37較。
對(duì)照抗體對(duì)任一種所測(cè)試的細(xì)胞因子的活性沒(méi)有作用。
抗體CA028 —0496具有對(duì)抗所有三種細(xì)胞因子IL-17、 IL-17F和 IL-17A/F的抑制活性，包括獼猴IL-17F,而IL-17A特異性抗體只具 有對(duì)抗IL-17A和IL-17A/F雜二聚體的抑制活性。
實(shí)施例3:抗體CA028-0496(人IgG4恒定區(qū))對(duì)IL-17A和IL-17F 的親和性
<吏用BIAcore 3000 ( BIAcore AB )進(jìn)4亍BIA ( Biamolecular Interaction Analysis )。所有實(shí)驗(yàn)均在25匸下進(jìn)行。Fc片段特異性 的Affinipure Fc片段山羊抗人IgG (Jackson ImmunoResearch )通 過(guò)胺類偶聯(lián)化學(xué)作用以"6000反應(yīng)單位UU)的捕獲水平固定在CM5 探測(cè)芯片上。HBS-EP緩沖液(10mM HEPES pH 7. 4， 0. 15MNaCl， 3 mM EDTA， 0. 005%表面活性劑P20， BIAcore AB)用作運(yùn)行緩沖液，流速 10jiL/分鐘。注射10 抗體CA028-0496 ( 1. 81mg/ml )用于由固定 的抗人IgG-Fc捕獲。在以30 p L/min流速?gòu)?0nM至nM以下的雙倍稀 釋，對(duì)捕獲的CA028-0496滴定人IL-17A和IL-17同種型。通過(guò)注射 30)aL 40 mM HC1，接著一次5 |i L 5mM NaOH,重新產(chǎn)生表面。
使用BIAevaluation軟件(3. 2版本)按照標(biāo)準(zhǔn)程序雙重參照和 分析背景扣除結(jié)合曲線。從擬合算法測(cè)定動(dòng)力參數(shù)。
對(duì)抗體CA028 — 0496結(jié)合IL-17A測(cè)定的親和值為16pM。對(duì)IL-17F 為1750pM?？贵wCA028-0496不結(jié)合其他IL-17同種型(IL-17B、 C、 D和E)。因此，抗體CA028-0496特異性地結(jié)合IL-17A和IL-17F。
實(shí)施例4:抗體CA028-0496 (鼠IgGl恒定區(qū))對(duì)IL-17A、獼猴 IL-17F和IL-17A/F雜二聚體的親和性
使用BIAcore 3000 (BIAcore AB )進(jìn)行BIA (Biamolecular Interaction Analysis)。
所有實(shí)驗(yàn)在25t:進(jìn)行。Fc片段特異性的Affinipure F(ab， )2片段山羊抗鼠IgG (Jackson ImraunoResearch)通過(guò)胺類偶聯(lián)化學(xué)作用 以《 6000反應(yīng)單位(RU )的捕獲水平固定在CM5探測(cè)芯片上(Biacore AB) 。 HBS-EP緩沖液(10mM HEPES pH 7. 4, 0. 15MNaCl， 3 mM EDTA， 0. 005%表面活性劑P20, BIAcore AB)用作運(yùn)行緩沖液，流速10uL/ 分鐘。注射10 n L 4 iu g/mL抗體CA028 —0496用于由固定的抗鼠IgG-Fc。 在以30juL/分鐘流速?gòu)?5nM至nM以下的雙倍稀釋，對(duì)捕獲的 CA028-0496滴定人IL-17A、 cyno IL-17F和雜二聚體A/F。通過(guò)以10 pL/分鐘的速率注射10jaL 40 mM HC1，接著注射5 |u L 5mM NaOH，重 新產(chǎn)生表面。
使用BIAevaluation軟件(3.2版本)按照標(biāo)準(zhǔn)程序分析雙重參 照的背景扣除結(jié)合曲線。由擬合算法確定動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
抗體CA028一0496對(duì)IL-17A具有21pM的親和性，IL-17A/F雜二 聚體為116pM。對(duì)獼猴IL-17F為1030pM。
當(dāng)然能理解僅通過(guò)實(shí)施例描述了本發(fā)明，決不意味著限制本發(fā)明， 并且在以下權(quán)利要求范圍內(nèi)可以進(jìn)行細(xì)節(jié)的改動(dòng)。本發(fā)明的每個(gè)實(shí)施 方案的優(yōu)選特征也針對(duì)加以必要的變化的每個(gè)其他實(shí)施方案。將本說(shuō) 明書中引用的全部出版物，包括但不限于專利和專利申請(qǐng)，在此引入 本文作為參考，如同每個(gè)單獨(dú)出版物具體和單獨(dú)指出被引入本文作為 參考，如同充分闡明一樣。
權(quán)利要求
1.結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的中和抗體，其還結(jié)合人IL-17A/F雜二聚體。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的中和抗體，其對(duì)IL-17F具有 優(yōu)于2nM的結(jié)合親和性。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)的中和抗體，其對(duì)IL-17A的結(jié)合親 和性是其對(duì)IL-17F的結(jié)合親和性的至少10倍。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l-4任一項(xiàng)的中和抗體，其對(duì)IL-17A具有優(yōu)于 100pM的結(jié)合親和性。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)的中和抗體，其在小于5nM的濃度 下能夠抑制50%的0. 8nM人IL-17A的活性，在小于12nM的濃度下能 夠抑制50%的4. 2nM IL-17F的活性，用IL-17A或IL-17F誘導(dǎo)的從海 拉細(xì)胞的IL-6釋放來(lái)度量所述抑制活性。
7. 結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗體，其包含重鏈，其中重 鏈的可變結(jié)構(gòu)域包含如下CDR中的至少一個(gè)具有SEQ ID NO: 1給出 的CDR-HI序列的CDR，具有SEQ ID NO: 2給出的CDR-H2序列的CDR 和具有SEQ ID NO: 3給出的CDR-H3序列的CDR。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7的中和抗體，其中重鏈的可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO: 1給出的CDR-H1序列，SEQ ID NO: 2給出的CDR-H2序列和SEQ ID NO: 3給出的CDR-H3序列。
9. 結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗體，其包含輕鏈，其中輕 鏈的可變結(jié)構(gòu)域包含如下CDR中的至少一個(gè)具有SEQ ID NO: 4給出 的CDR-Ll序列的CDR，具有SEQ ID NO: 5給出的CDR-L2序列的CDR 和具有SEQ ID NO: 6給出的CDR-L3序列的CDR。
10. 根據(jù)權(quán)利要求7或權(quán)利要求8的中和抗體，另外包含輕鏈， 其中輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域包含如下CDR中的至少一個(gè)具有SEQ ID NO: 4 給出的CDR-L1序列的CDR，具有SEQ ID NO: 5給出的CDR-L2序列的 CDR和具有SEQ ID NO: 6給出的CDR-L3序列的CDR。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9或權(quán)利要求10的中和抗體，其中輕鏈的可變 結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO: 4給出的CDR-L1序列，SEQ ID NO: 5給出的 CDR-L2序列和SEQ ID NO: 6給出的CDR-L3序列。
12. 結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗體，其中重鏈的可變結(jié) 構(gòu)域包含三個(gè)CDR,并且CDRH-1的序列與SEQ ID NO: 1給出的序列具 有至少60%的同一性或相似性，CDRH-2的序列與SEQ ID N0:2給出的 序列具有至少60%的同一性或相似性和CDRH-3的序列與SEQ ID NO: 3 給出的序列具有至少60%的同一性或相似性。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12的中和抗體，另外包含輕鏈，其中輕鏈的可 變結(jié)構(gòu)域包含三個(gè)CDR，并且CDRL-1的序列與SEQ ID N0:4給出的序 列具有至少60%的同一性或相似性，CDRL-2的序列與SEQ ID NO: 5給 出的序列具有至少60%的同一性或相似性和CDRL-3的序列與SEQ ID NO: 6給出的序列具有至少60%的同 一性或相似性。
14. 根據(jù)權(quán)利要求7至11任一項(xiàng)的抗體，其中重鏈包含SEQ ID NO: 9給出的序列。
15. 根據(jù)權(quán)利要求7至11任一項(xiàng)的抗體，其中輕鏈包含SEQ ID NO: 7給出的序列。
16. 結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗體，具有包含SEQ ID NO: 9 給出的序列的重鏈和包含SEQ ID NO: 7給出的序列的輕鏈。
17. 結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗體，其中輕鏈的可變結(jié) 構(gòu)域包含與權(quán)利要求16抗體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域具有至少80%同一性或 相似性的序列，并且其中重鏈的可變結(jié)構(gòu)域包含與權(quán)利要求16村體的 重鏈可變結(jié)構(gòu)域具有至少80%同一性或相似性的序列。
18. 結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗體，具有包含SEQ ID N0:15給出的序列的重鏈和包含SEQ ID NO: 11給出的序列的輕鏈。
19. 結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗體，其中重鏈和輕鏈與 權(quán)利要求18抗體的相應(yīng)重鏈和輕鏈至少80%相同或相似。
20. 結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗體，其結(jié)合人IL-17A 和/或人IL-17F和/或IL-17A/F雜二聚體上與權(quán)利要求16的抗體相同的表位。
21. 結(jié)合人IL-17A和人IL-17F的中和抗體，其交叉阻斷權(quán)利要 求16的抗體與人IL-17A和/或人IL-17F和/或IL-17A/F雜二聚體的 結(jié)合和/或由權(quán)利要求16的抗體交叉阻斷其與人IL-17A和/或人 IL-17F和/或IL-17A/F雜二聚體的結(jié)合。
22. 根據(jù)權(quán)利要求1-21任一項(xiàng)的抗體，其中抗體是完整的抗體或 其功能活性片段或衍生物。
23. 根據(jù)權(quán)利要求22的抗體，其中抗體片段是結(jié)構(gòu)域抗體，F(xiàn)ab， Fab， ， F(ab， )2， scFv或其表位結(jié)合片段。
24. 根據(jù)權(quán)利要求23的抗體，其中抗體或其片段是CDR-移植抗 體或完全人抗體。
25. 根據(jù)權(quán)利要求l-24任一項(xiàng)的抗體，其中抗體或其片段與一個(gè) 或多個(gè)效應(yīng)分子綴合。
26. 由權(quán)利要求16的抗體結(jié)合的人IL-17A上的表位。
27. 由權(quán)利要求16的抗體結(jié)合的人IL-17F上的表位。
28. 由權(quán)利要求16的抗體結(jié)合的人IL-17A/F雜二聚體上的表位。
29. 編碼根據(jù)權(quán)利要求1至24任一項(xiàng)的抗體的重鏈和/或輕鏈的 分離DNA序列。
30. 含有根據(jù)權(quán)利要求29的一個(gè)或多個(gè)DNA序列的克隆或表達(dá)載體。
31. 根據(jù)權(quán)利要求30的載體，其中該載體含有SEQ ID N0:14和 SEQ ID NO: 18給出的序列。
32. 包含一個(gè)或多個(gè)根據(jù)權(quán)利要求30或權(quán)利要求31的克隆或表 達(dá)載體的宿主細(xì)胞。
33. 用于產(chǎn)生權(quán)利要求1至24任一項(xiàng)的抗體的方法，包括培養(yǎng)權(quán) 利要求32的宿主細(xì)胞和分離抗體。
34. 包含根據(jù)權(quán)利要求1至24任一項(xiàng)的抗體，并結(jié)合藥物學(xué)上可 接受的賦形劑、稀釋劑或栽體中的一種或多種的藥物組合物。
35. 根據(jù)權(quán)利要求34的藥物組合物，另外含有其他活性成分。
36. 根據(jù)權(quán)利要求1至24任一項(xiàng)的抗體或根據(jù)權(quán)利要求34或權(quán) 利要求35的藥物組合物，用于治療或預(yù)防由IL-17A和/或IL-17F介 導(dǎo)的病理失調(diào)，或與IL-17A或IL-17F升高的水平相關(guān)的病理失調(diào)。
37. 根據(jù)權(quán)利要求1至24任一項(xiàng)的抗體在制造用于治療或預(yù)防由 IL-17A和/或IL-17F介導(dǎo)的病理失調(diào)，或與IL-17A或IL-17F升高的 水平相關(guān)的病理失調(diào)的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及對(duì)IL-17A和IL-17F的抗原決定簇具有特異性的抗體分子，抗體分子的治療用途和產(chǎn)生所述抗體分子的方法。
文檔編號(hào)A61P37/06GK101589061SQ200780043116
公開日2009年11月25日 申請(qǐng)日期2007年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月18日
發(fā)明者A·G·波普爾韋爾, R·亞當(dāng)斯, S·E·拉佩奇 申請(qǐng)人:Ucb醫(yī)藥有限公司