專利名稱：：采用疏水性微米微粒的用于減少膽固醇的混合物與方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及包括疏水性微米微粒的混合物，該微米微粒包含帶正電荷的多聚物(例如，諸如殼聚糖等多糖)，該多聚物化學(xué)地結(jié)合到陰離子或非離子表面活性劑，例如卵磷脂。該混合物是有效地用于減少動(dòng)物體內(nèi)的膽固醇，例如，諸如雞等鳥類，或者任何類型的哺乳類動(dòng)物。本發(fā)明還揭示了這些混合物的制造方法以及用途。
背景技術(shù)：
：膽固醇是一種在血流中發(fā)現(xiàn)的固醇脂質(zhì)，它存在于所有體內(nèi)組織的細(xì)胞膜。膽固醇的結(jié)構(gòu)式如下膽固醇由三個(gè)區(qū)組成烴基尾；環(huán)狀結(jié)構(gòu)區(qū)，帶有4個(gè)烴基環(huán)；以及羥氫氧基團(tuán)。該羥氫氧基團(tuán)是極性的，使其可溶于水。該環(huán)狀結(jié)構(gòu)區(qū)和烴基尾是非極性的，因而使其可溶于有機(jī)溶劑，但不溶于水。醫(yī)藥從業(yè)者和健康顧問都建議減少膽固醇的攝入，因?yàn)長(zhǎng)DL(低密度脂蛋白)血液膽固醇水平的提高(血膽脂醇過多)會(huì)導(dǎo)致膽固醇在向心臟和腦供血的動(dòng)脈血管壁沉積的緩慢建立，形成斑(動(dòng)脈血管壁內(nèi)脂肪物質(zhì)的沉積)，該斑會(huì)阻塞這些動(dòng)脈，一個(gè)情形就是已知的動(dòng)脈粥樣硬化。在該斑附近形成的凝塊(血栓)會(huì)阻斷血液流向心肌的各部分以及導(dǎo)致心臟病發(fā)作。如果這樣一個(gè)凝塊阻斷了流向腦部的血液，會(huì)發(fā)生中風(fēng)。高水平的LDL膽固醇(160mg/dL或以上)反映了心臟病的高風(fēng)險(xiǎn)性。雞的雞蛋代表了膽固醇的較高來源(典型地約280mg每個(gè)大雞蛋)，許多醫(yī)學(xué)從業(yè)者和健康顧問都建議在飲食中去除雞蛋，含雞蛋的飲食會(huì)導(dǎo)致高的膽固醇血清濃度。因而，對(duì)于具有已被認(rèn)為過高的膽固醇水平的人來說，傳統(tǒng)雞的雞蛋幾乎都是從食物來源中排除的。稍不幸的是，因?yàn)殡u蛋在某種形式上代表了蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)和其他營(yíng)養(yǎng)成分的基本來源，它被視為質(zhì)量高、營(yíng)養(yǎng)高和密度高，而且相對(duì)比較便宜。因?yàn)殡u蛋的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，研究家禽的科學(xué)家已經(jīng)通過試驗(yàn)試圖讓雞下出較低膽固醇的雞蛋。己經(jīng)嘗試開發(fā)的一個(gè)系統(tǒng)是加入外源有害化學(xué)藥品到每天定量下蛋的母雞?；蛘撸蚰鸽u注射合成激素以便產(chǎn)生想要的降低的膽固醇水平。這個(gè)方法是由這樣的知識(shí)所提示的在人體血液中的膽固醇水平在醫(yī)學(xué)上可通過以下物質(zhì)來調(diào)控激素、鈣離子和鎂離子、高劑量的煙酸以及其他維生素，以及采用甲狀腺活性物質(zhì)。正如所期待的，這樣的處理在大量例子中表現(xiàn)出毒性和不利的副作用。也已發(fā)現(xiàn)，這些藥物作為飼料供應(yīng)時(shí)是不便宜的，在降低總血膽固醇并提高在谷食性動(dòng)物中的HDL/LDL比率(Luhmanetal.,PoultryScience69:852-855(1990);Mori，etal，J.)。一種降低總膽固醇并提高HDL/LDL比率的方法是通過喂食動(dòng)物尤其是雞復(fù)合物，螯合劑膽鹽可避免它們的重吸收，通過較低位的小腸，導(dǎo)致它們隨后排泄。增加的排泄物的膽汁酸的分泌引導(dǎo)肝產(chǎn)生更多的膽汁酸，利用膽固醇作為作為在它產(chǎn)生中的底物。這導(dǎo)致LDL分解代謝加速，其效應(yīng)是減少在血液中的膽固醇含量并改善了HDL-LDL比率。殼聚糖是唯一天然產(chǎn)生的帶正電荷的多糖，它是由殼質(zhì)的脫乙酰作用產(chǎn)生的，是在諸如甲殼綱動(dòng)物、蝦、蟹、真菌類等海洋生物的生物骨架和硬殼中發(fā)現(xiàn)的天然生物多聚物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在小型動(dòng)物(尤其是小鼠和兔子)中，殼聚糖能夠吸收血液膽固醇，也就是膽汁脂質(zhì)，因而降低了這些分子在血液中的水平[J.Nutr.2000;130:2753-2759]。大量的研究己經(jīng)表明，殼聚糖具有特別的能力以獲得更低的"不好的(bad)"LDL膽固醇水平，同時(shí)增加"好的(good)"HDL膽固醇水平，因而改善了HDL/LDL比率。殼聚糖是生物相容性的、無毒性的、非免疫原的，允許將它使用于醫(yī)療、藥物和化妝品領(lǐng)域。殼聚糖的水溶性形式包含正電荷的氨基基團(tuán)，該基團(tuán)能形成與包括蛋白質(zhì)和脂肪酸在內(nèi)的陰離子化合物之間的離子鍵。另外，殼聚糖可形成疏水鍵。為了在水溶液中應(yīng)用殼聚糖，必須發(fā)生晶體結(jié)構(gòu)的溶解轉(zhuǎn)變。在含水的晶體殼聚糖中，水分子在殼聚糖層之間形成柱，并通過在多聚物鏈之間制造水橋(water-bridges)來促成該結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。在采用例如乙酸等弱有機(jī)酸使該殼聚糖溶解的過程中，該氫鍵被打斷。聚合電解質(zhì)粉末的溶解機(jī)制是確信參與球形顆粒結(jié)構(gòu)的形成。在純水中，這過程包括環(huán)繞微粒的膠層的快速形成，伴隨多聚物鏈的緩釋進(jìn)入溶劑中。多聚物鏈的緩釋過程留下一個(gè)聚合體，其解釋為因?yàn)樵趲щ姾傻膫€(gè)別多聚物和電中性聚合體之間形成吸引潛在形成的效應(yīng)。眾所周知，用于聚合電解質(zhì)的溶解的平衡次數(shù)是經(jīng)常數(shù)小時(shí)發(fā)生，甚至多天(Michel,RCetal.Biopolymers53:19-39,2000;ReedWFetal.BerBunzenPhysChem100:685-695，1996)。根據(jù)報(bào)道，該殼聚糖溶液的攪拌持續(xù)時(shí)間是12-24小時(shí)，在室溫下(FredheimGEetalBiomacromolecules4:232-239，2003.)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，殼聚糖能夠在小型動(dòng)物(尤其是小鼠和兔子)中，殼聚糖能夠吸收血液膽固醇，也就是膽汁脂質(zhì)，因而降低了這些分子在血液中的水平[J.Nutr.2000;130:2753-2759]。大量的研究已經(jīng)表明，殼聚糖具有特別的能力以獲得更低的"不好的(bad)"LDL膽固醇水平，同時(shí)增加"好的(good)"HDL膽固醇水平。膽固醇是膽汁酸的前體，膽汁酸是類固醇酸，主要在哺乳動(dòng)物的膽汁內(nèi)發(fā)現(xiàn)，具有親水面和疏水面。已經(jīng)有提示，殼聚糖通過吸收膽汁酸來減低血液膽固醇，導(dǎo)致在膽汁酸的進(jìn)一步合成上對(duì)膽固醇的利用增加，因而從血液中去除膽固醇。包含殼聚糖和葡甘露聚糖的食物纖維供應(yīng)已經(jīng)顯示出在小鼠中較低血液膽固醇水平[JNutr.2000;130:2753-2759]，以及在人體中較低血液膽固醇水平[JAm.CollegeNutrition2002;21(5):428-433]。然而，這需要大量的纖維供應(yīng)，以便在人體中產(chǎn)生膽固醇降低效應(yīng)，需要每天攝取15粒膠囊，提供1.2￡/天的殼聚糖和葡甘露聚糖。研究表明，在人體內(nèi)的總血清膽固醇只降低了7%,而LDL膽固醇減低了10%。在美國(guó)專利第7,067,146號(hào)和第6,814,975號(hào)、美國(guó)專利申請(qǐng)第20050079204號(hào)，以及歐洲專利第1233682號(hào)中，Eritocap教導(dǎo)了將殼聚糖與香菇嘌呤一同使用在一種用于降低膽固醇的食品的制備中。美國(guó)專利第6,323,189號(hào)與歐洲專利第1100344號(hào)教導(dǎo)了包含液體懸浮的穩(wěn)定的殼聚糖，用于體重治療。美國(guó)專利申請(qǐng)第20050175763號(hào)教導(dǎo)了包含由支持物質(zhì)組成的穩(wěn)定矩陣的磷脂，該支持物質(zhì)是以碳水化合物的形式，例如殼聚糖。美國(guó)專利申請(qǐng)第20050100619號(hào)教導(dǎo)了一種降低膽固醇的供應(yīng)，它可包含殼聚糖和磷脂，以及進(jìn)一步的能抑制膽固醇的生物合成的組分，以及進(jìn)一步的能增加膽固醇代謝的組分。殼聚糖不能減少在胃中的膽固醇，因?yàn)樗谌狈δ懼}時(shí)不能吸收未乳化的脂肪，而膽汁鹽僅分泌到小腸內(nèi)。而且，在胃內(nèi)的酸性環(huán)境下，殼聚糖分解并變成帶正電荷，由于它的功能性氨基基團(tuán)。該高帶電荷的多聚物能與存在于胃中的諸如磷脂等帶負(fù)電荷的物質(zhì)發(fā)生強(qiáng)烈反應(yīng)，變成部分飽和。結(jié)果，由于帶有正電荷基團(tuán)，能被帶負(fù)電荷的膽汁酸所反應(yīng)，攝入的殼聚糖在通過胃時(shí)，它的量是減少的。因此，廣泛認(rèn)識(shí)到人們的需求，如果能提供改良的含有殼聚糖的混合物，將增加比例的不飽和的殼聚糖提供到小腸，這將具有較高的優(yōu)勢(shì)，用于降低在諸如鳥類或哺乳類等動(dòng)物體內(nèi)的血液膽固醇。
發(fā)明內(nèi)容這里首次揭示一種用于膽固醇處理的混合物，所述混合物包括多個(gè)復(fù)合微粒，每個(gè)所述復(fù)合微粒包含殼聚糖，殼聚糖化學(xué)地結(jié)合到陰離子表面活性劑或者非離子表面活性劑。根據(jù)一些實(shí)施例，所述陰離子表面活性劑是選自磷脂、膽汁鹽、月桂醇醚硫醚鈉、檸檬酸單甘油酯、硬脂酰鈉、硬脂酰鈣或硬脂酸、硬脂檸檬酸、脂肪酸及其鹽、二乙酰酒石酸單甘油酯，以及它們的組合。根據(jù)一些實(shí)施例，所述磷脂包括卵磷脂。根據(jù)一些實(shí)施例，所述非離子表面活性劑是脂性酒精。這里首次揭示了一種用于膽固醇處理的混合物，所述混合物包括多個(gè)疏水性復(fù)合微粒，每個(gè)所述復(fù)合微粒包括陽(yáng)離子多聚物，該陽(yáng)離子多聚物化學(xué)地結(jié)合到陰離子表面活性劑或者非離子表面活性劑。根據(jù)一些實(shí)施例，所述陽(yáng)離子多聚物包含殼聚糖。根據(jù)一些實(shí)施例，所述陽(yáng)離子多聚物包括聚胺。根據(jù)一些實(shí)施例，所述聚胺包括多熔素或者聚丙烯酰胺。根據(jù)一些實(shí)施例，所述陰離子表面活性劑是選自磷脂、膽汁鹽、月桂醇醚硫醚鈉、檸檬酸單甘油酯、硬脂酰鈉、硬脂酰鈣或硬脂酸、硬脂檸檬酸、脂肪酸及其鹽、二乙酰酒石酸單甘油酯，以及它們的組合。根據(jù)一些實(shí)施例，所述磷脂包括卵磷脂。這里首次揭示了一種用于膽固醇治療的混合物，所述混合物包括多個(gè)殼聚糖-卵磷脂復(fù)合微粒，每個(gè)所述復(fù)合微粒包含殼聚糖，該殼聚糖化學(xué)地結(jié)合到卵磷脂。根據(jù)一些實(shí)施例，所述混合物是干的混合物，其含水量最高為10%w/w。根據(jù)一些實(shí)施例，所述混合物是干的混合物，其含水量最高為20e/。w/w。根據(jù)一些實(shí)施例，所述混合物是干的混合物，其含水量最高為30y。w/w。所述干的混合物的特定水含量可取決于特定的應(yīng)用。根據(jù)一些實(shí)施例，所述干的混合物是以流動(dòng)粉末的形式提供的。根據(jù)一些實(shí)施例，所述干的混合物是以包裝粉末的形式提供的。根據(jù)一些實(shí)施例，所述干的混合物是以小微粒的混合物的形式提供的。根據(jù)一些實(shí)施例，所述混合物的所述復(fù)合微粒是基于2.5克所述混合物的所述復(fù)合顆粒，以1升濃度為0.5%w/w的膽酸鈉溶液溶解，在30分鐘內(nèi)能夠從所述膽酸鈉溶液中去除至少10%的游離膽酸鈉。根據(jù)一些實(shí)施例，所述混合物的所述復(fù)合微粒是基于2.5克所述混合物的所述復(fù)合顆粒，以1升濃度為0.5%w/w的膽酸鈉溶液溶解，在30分鐘內(nèi)能夠從所述膽酸鈉溶液中去除至少20%的游離膽酸鈉。根據(jù)一些實(shí)施例，所述混合物的所述復(fù)合微粒是基于2.5克所述混合物的所述復(fù)合顆粒，以l升濃度為0.5y。w/w的膽酸鈉溶液溶解，在30分鐘內(nèi)能夠從所述膽酸鈉溶液中去除至少30%的游離膽酸鈉。根據(jù)一些實(shí)施例，所述混合物的所述復(fù)合微粒是基于2.5克所述混合物的所述復(fù)合顆粒，以1升濃度為0.5%w/w的膽酸鈉溶液溶解，在30分鐘內(nèi)能夠從所述膽酸鈉溶液中去除至少40%的游離膽酸鈉。根據(jù)一些實(shí)施例，所述復(fù)合微粒的殼聚糖的分子量為0.5x105至3x106道爾頓。根據(jù)一些實(shí)施例，按重量計(jì)，至少10%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。根據(jù)一些實(shí)施例，按重量計(jì)，至少30%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。根據(jù)一些實(shí)施例，按重量計(jì)，至少50%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。根據(jù)一些實(shí)施例，按重量計(jì)，至少70%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。根據(jù)一些實(shí)施例，按重量計(jì)，至少90%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。根據(jù)一些實(shí)施例，除此之外的微粒的直徑尺寸小于0.3微米，按數(shù)量計(jì)，至少10%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑尺寸小于2微米。根據(jù)一些實(shí)施例，除此之外的微粒的直徑尺寸小于0.3微米，按數(shù)量計(jì)，至少50%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑尺寸小于2微米。根據(jù)一些實(shí)施例，除此之外的微粒的直徑尺寸小于0.3微米，按數(shù)量計(jì)，至少90%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑尺寸小于2微米。根據(jù)一些實(shí)施例，i)所述混合物的所述復(fù)合微粒是基于2.5克所述混合物的所述復(fù)合顆粒，以l升濃度為0.5y。w/w的膽酸鈉溶液溶解，在30分鐘內(nèi)能夠從所述膽酸鈉溶液中去除至少15%的游離膽酸鈉；以及ii)按重量計(jì)，至少30%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。根據(jù)一些實(shí)施例，i)所述混合物的所述復(fù)合微粒是基于2.5克所述混合物的所述復(fù)合顆粒，以1升濃度為0.5%w/w的膽酸鈉溶液溶解，在30分鐘內(nèi)能夠從所述膽酸鈉溶液中去除至少35%的游離膽酸鈉；以及ii)按重量計(jì)，至少30%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。根據(jù)一些實(shí)施例，所述多個(gè)復(fù)合微粒包括具有重量比在0.2:1至5:1之間的卵磷脂-殼聚糖的復(fù)合微粒。根據(jù)一些實(shí)施例，所述多個(gè)復(fù)合微粒包括具有重量比在3:1至4:1之間的卵磷脂-殼聚糖的復(fù)合微粒。根據(jù)一些實(shí)施例，所述復(fù)合微粒的殼聚糖和卵磷脂都是化學(xué)地結(jié)合的，通過至少一個(gè)離子相互作用或者疏水相互作用。根據(jù)一些實(shí)施例，所述復(fù)合微粒的殼聚糖和卵磷脂都是互相共價(jià)結(jié)合的。根據(jù)一些實(shí)施例，所述復(fù)合微粒的殼聚糖具有50%至95%的乙?；潭取８鶕?jù)一些實(shí)施例，所述混合物還包括c)至少一個(gè)動(dòng)物飼料，選自以下產(chǎn)品肉類(例如，牛肉或者禽肉，這可用于狗食或者貓食)、谷類(例如，小麥或者燕麥，這可用于雞16飼料或者馬食)、植物種子、玉米(這是常用的，例如，用于雞飼料)，以及豆類(例如，大豆或者大豆產(chǎn)品，這是常用的，例如，用于雞飼料)。根據(jù)一些實(shí)施例，所述混合物的大量蛋白質(zhì)來源的和碳水化合物來源的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值是至少2卡路里每克所述混合物。根據(jù)一些實(shí)施例，在所述混合物內(nèi)，在所述混合物的所述動(dòng)物詞料的重量與所述復(fù)合微粒的重量之間的重量比是至少100:1，而且所述復(fù)合微粒是與所述動(dòng)物飼料同質(zhì)混合的。這里首次揭示了一種制備飼養(yǎng)混合物的方法，所述方法包括a)以至少一種動(dòng)物詞料混合根據(jù)前面所述的任意混合物，該動(dòng)物飼料選自以下產(chǎn)品肉類、谷類、植物種子、玉米，以及豆類。所述混合物可以是任意重量比。在一個(gè)例子中，至少0.5%，或者至少0.1%，或者至少0.2%，或者至少0.3%的總重量的混合物是復(fù)合微粒。所述混合物可以是任意重量比。在一個(gè)例子中，至少1%，或者至少0.5%，或者至少0.3%，的總重量的混合物是復(fù)合微粒。這里首次揭示了一種詞養(yǎng)動(dòng)物的方法，包括喂食根據(jù)前面所述的混合物給動(dòng)物，根據(jù)一些實(shí)施例，該動(dòng)物選自鳥(例如，雞)、豬、牛、馬、貓、羊或狗。這里首次揭示了一種復(fù)合微粒的生產(chǎn)方法，所述方法包括a)提供多個(gè)殼聚糖微粒；b)將所述多個(gè)殼聚糖微粒混合進(jìn)入酸中至少1小時(shí)，獲得第一溶液；C)制備第二溶液，包括陰離子或者非離子表面活性劑；d)在酸性條件下混合第一溶液與第二溶液，形成殼聚糖-表面活性劑復(fù)合微粒，包括殼聚糖化學(xué)地結(jié)合到所述表面活這里首次揭示了一種復(fù)合微粒的生產(chǎn)方法，所述方法包括a)提供多個(gè)殼聚糖微粒；b)將所述多個(gè)殼聚糖微?；旌线M(jìn)入酸中至少1小時(shí)，獲得第一溶液；c)制備第二溶液，包括卵磷脂；d)在酸性條件下混合第一溶液與第二溶液，形成殼聚糖-卵磷脂復(fù)合微粒，包括殼聚糖化學(xué)地結(jié)合到所述卵磷脂；以及e)從所述殼聚糖-卵磷脂復(fù)合微粒制成粉末。根據(jù)一些實(shí)施例，i)按重量計(jì)，所述混合的多個(gè)殼聚糖微粒主要是低分子量殼聚糖微粒，具有0.3xl()S至L5xl()S道爾頓的分子量；以及ii)所述步驟(b)的混合是進(jìn)行了至少1小時(shí)。根據(jù)一些實(shí)施例，D按重量計(jì)，所述混合的多個(gè)殼聚糖微粒主要是中分子量殼聚糖微粒，具有1.5xl0S至5xl()S道爾頓的分子量；以及ii)所述步驟(b)的混合是進(jìn)行了至少2小時(shí)。根據(jù)一些實(shí)施例，i)按重量計(jì)，所述混合的多個(gè)殼聚糖微粒主要是高分子量殼聚糖微粒，具有0.5"06至3^06道爾頓的分子量；以及ii)所述步驟(b)的混合是進(jìn)行了至少3小時(shí)。根據(jù)一些實(shí)施例，所述步驟(b)的混合是進(jìn)行了至少20小時(shí)。根據(jù)一些實(shí)施例，所述步驟(e)的制成粉末包括至少一個(gè)干燥操作，選自i)噴霧干燥；或者ii)凍干干燥。根據(jù)一些實(shí)施例，所述步驟(d)的混合的執(zhí)行，以致所述第一溶液和第二溶液在制成粉末的階段之前被混合在一起，該混合的過程持續(xù)2至30分鐘，該過程的平均溫度低于40攝氏度。根據(jù)一些實(shí)施例，所述混合的時(shí)間最多20分鐘。根據(jù)一些實(shí)施例，所述平均溫度是至少30攝氏度。根據(jù)一些實(shí)施例，所述步驟(d)的混合的執(zhí)行，以致所述第一溶液和第二溶液在制成粉末的階段之前被混合在一起，該混合的過程持續(xù)2至10分鐘，該過程的平均溫度低于50攝氏度。根據(jù)一些實(shí)施例，所述平均溫度是低于45攝氏度。根據(jù)一些實(shí)施例，所述步驟(d)的混合是在某一溫度和某一時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行的，以致按重量計(jì)，至少10%的所述形成的復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。根據(jù)一些實(shí)施例，所述步驟(d)的混合是在某一溫度和某一時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行的，以致按重量計(jì)，至少50%的所述形成的復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。根據(jù)一些實(shí)施例，所述步驟(d)的混合是在某一溫度和某一時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行的，以致按重量計(jì)，至少70%的所述形成的復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。根據(jù)一些實(shí)施例，所述酸是有機(jī)酸，選自以下酸乳酸或者谷氨酸。根據(jù)一些實(shí)施例，所述第二溶液是在水溶液中制備的。根據(jù)一些實(shí)施例，在所述第一溶液的所述混合物中的所述殼聚糖的濃度為0.25%w/w至1%w/w。根據(jù)一些實(shí)施例，在所述第一溶液的所述混合物中的所述殼聚糖的濃度為0.1%w/w至2%w/w。根據(jù)一些實(shí)施例，在所述第二溶液的所述混合物中的所述卵磷脂的濃度為1.25%w/w至5.0%w/w。根據(jù)一些實(shí)施例，在所述第二溶液的所述混合物中的所述卵磷脂的濃度為0.1%w/w至7.5%w/w。根據(jù)一些實(shí)施例，所述步驟(b)中所述酸的pH值被調(diào)節(jié)到3.5。根據(jù)一些實(shí)施例，所述的方法還包括將所述第一溶液與第二溶液中的混合物的pH值調(diào)到7的步驟。根據(jù)一些實(shí)施例，所述的方法還包括允許所述第一溶液與第二溶液中的混合物靜置30分鐘，然后過濾得到微粒。根據(jù)一些實(shí)施例，所述的方法還包括在酸性介質(zhì)中重懸所述過濾得到的微粒。這里首次揭示了一種用于通過殼聚糖在動(dòng)物體內(nèi)比人體內(nèi)使膽固醇更多地減少的方法，所述方法包括增加所述殼聚糖的疏水性。根據(jù)一些實(shí)施例，所述疏水性是通過使殼聚糖與陰離子或者非離子表面活性劑發(fā)生反應(yīng)來增加的。這里首次揭示了在這里所揭示的任意混合物或者方法用于使動(dòng)物不包括人減少體內(nèi)脂肪的用途。這里首次揭示了在這里所揭示的任意混合物或者方法用于動(dòng)物不包括人的肥胖癥的治療的用途。除非另外定義，這里所采用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)都具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所理解的相同的含義。雖然存在許多方法或者物質(zhì)與這里所描述的方法或者物質(zhì)相類似或者等同，它們也可應(yīng)用在本發(fā)明的實(shí)踐或者測(cè)試中，下面描述合適的方法和物質(zhì)。一旦發(fā)生沖突，本專利說明書，包括定義，將受到控制。另外，所有物質(zhì)、方法和范例都是僅是說明性的，不視為對(duì)本專利的限制。附圖簡(jiǎn)要說明本發(fā)明在這里僅通過實(shí)施例結(jié)合附圖的形式來進(jìn)行描述。對(duì)于這里詳細(xì)的特定的作為參考的附圖，需要強(qiáng)調(diào)的是，本發(fā)明所述的微粒是通過范例的方式顯示的，并僅用于說明本發(fā)明的最優(yōu)實(shí)施例，在這里提供的原因是確信本發(fā)明所使用的大多數(shù)概念和原理都是本領(lǐng)域所熟知的。在這點(diǎn)上，不再嘗試更詳細(xì)地展示本發(fā)明的結(jié)構(gòu)性細(xì)節(jié)，這是理解本發(fā)明的基礎(chǔ)性必需知識(shí)。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員通過這些附圖能明確本說明書是如何將本發(fā)明所19述的幾種形式應(yīng)用到實(shí)踐中。在這些附圖中圖1至圖2是用于制造殼聚糖-卵磷脂復(fù)合微粒的示范性技術(shù)的流程圖3至圖4提供了數(shù)字照片，顯示了在磷酸緩沖液中所述復(fù)合微粒的分散和穩(wěn)定；圖5代表數(shù)據(jù)圖表，描述通過殼聚糖-卵磷脂復(fù)合微粒從膽酸鈉溶液去除游離膽酸鈉。最優(yōu)實(shí)施例詳述本發(fā)明提供了一種用于膽固醇處理的混合物，所述混合物包括多個(gè)復(fù)合微粒，每個(gè)所述復(fù)合微粒包括陽(yáng)離子多聚物，例如殼聚糖，該殼聚糖化學(xué)地結(jié)合到陰離子表面活性劑或者非離子表面活性劑，例如卵磷脂。在所述復(fù)合微粒中的殼聚糖和表面活性劑都是化學(xué)地結(jié)合的以形成復(fù)合微粒，因?yàn)樵谒鲫?yáng)離子多聚物與陰離子表面活性劑之間形成了離子相互作用，同時(shí)在多聚物的疏水區(qū)與卵磷脂的脂片段之間形成了疏水相互作用。在陽(yáng)離子多聚物與非離子表面活性劑之間的相互作用包括非離子相互作用。在示范性例子中，陽(yáng)離子多聚物與陰離子多聚物并非共價(jià)地相互結(jié)合。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述復(fù)合微粒包括殼聚糖，該殼聚糖化學(xué)地結(jié)合到卵磷脂。這里所揭示的復(fù)合微?？捎行У赜糜谀懝檀紲p少。特別地，當(dāng)將這里所揭示的復(fù)合微粒給雞服用(例如，與雞食混合)，可有效地用于減少雞內(nèi)的膽固醇，并減少通過這些雞生下的雞蛋內(nèi)膽固醇。結(jié)果，這些雞蛋能保持營(yíng)養(yǎng)和作為人類相對(duì)便宜的食品，而不會(huì)在肝和大動(dòng)脈的膽固醇水平上存在有害的效應(yīng)。理論探討不愿受到理論的束縛，值得注意的是，在示范性例子中，所述復(fù)合微粒同時(shí)提供了三種特性。在這些實(shí)施例中，所述復(fù)合微粒(i)是疏水性微粒，能在腸內(nèi)結(jié)合膽汁酸；(ii)在腸內(nèi)pH條件下，能夠形成部分穩(wěn)定的懸浮物——例如，由于微粒尺寸；以及(iii)在胃中是可溶的。正如前面所注意的，膽汁膽固醇是膽汁酸的前體。通過在腸內(nèi)引入疏水性微粒，它能夠在腸內(nèi)懸浮一定的時(shí)間段，因而它是可能將膽汁酸沖洗出腸道。隨著時(shí)間的過去，假定它能有效地用于減少動(dòng)物體內(nèi)的膽固醇，該動(dòng)物攝取了復(fù)合微粒。這樣，不愿受到理論的束縛，值得注意的是，這前述三個(gè)特性中的第一個(gè)特性是有效地用于在腸內(nèi)結(jié)合膽汁酸。至于前述三個(gè)特性中的第二個(gè)特性，值得注意的是，所述復(fù)合微粒是這樣設(shè)計(jì)以致在進(jìn)入人體腸內(nèi)，該微粒作為穩(wěn)定微粒懸浮在腸內(nèi)介質(zhì)中保持短的時(shí)間，同時(shí)與膽汁鹽發(fā)生相互反應(yīng)。接著，該復(fù)合微粒與膽汁鹽凝聚成團(tuán)。這樣，膽汁鹽通過疏水相互作用陷入多聚物中，避免在通過腸道的過程中發(fā)生水解。所述微粒保持懸浮狀態(tài)的時(shí)間是足夠的以致使它與膽汁鹽發(fā)生相互作用。不能形成至少部分穩(wěn)定的溶液的微粒將在腸液中快速絮凝，以致它與膽汁鹽的結(jié)合和誘捕不會(huì)發(fā)生。這個(gè)特性是條件嚴(yán)格的，例如，要求特定的微粒尺寸。這樣，在示范性例子中，所述微粒是直徑具有0.3至3微米尺寸的微米微粒。至于前述三個(gè)特性中的第三個(gè)特性，需要注意的是，在一些實(shí)施例中，所述復(fù)合微粒應(yīng)是在胃中可溶的，并以有效的形式送到人體小腸用于結(jié)合膽汁酸。根據(jù)這些實(shí)施例，所述復(fù)合微粒是穩(wěn)定的和基本上在人體胃的環(huán)境中不反應(yīng)的，以致它們可以溶解的未飽和的形式被送到腸道。疏水性的討論正如前所述，殼聚糖是帶正電荷的多糖類多聚物，它是不吸收的，因而會(huì)被排泄出來。卵磷脂具有這樣的特征，即作為乳化劑或者去垢劑，它結(jié)合膽汁鹽以避免它們?cè)谛∧c內(nèi)被吸收(Lipids.1976Dec;11(12):830-2)。卵磷脂是低廉、天然的混合物，是醣脂類、甘油三酸酯以及帶負(fù)電荷的磷脂。在本發(fā)明的至少一個(gè)實(shí)施例中，采用了富含卵磷脂的磷脂，然而正常卵磷脂帶有非常高的天然脂，也可采用其他帶有不同脂組分的卵磷脂。不愿被任何特定理論所束縛，通過本發(fā)明可以假設(shè)，通過與疏水尾區(qū)發(fā)生相互作用，非離子表面活性劑可以化學(xué)地結(jié)合殼聚糖分子，導(dǎo)致形成不帶電荷的殼聚糖-表面活性劑復(fù)合微粒，在腸內(nèi)pH環(huán)境下是水溶的。因此，可以認(rèn)為，增加殼聚糖的疏水性將增加它在特定動(dòng)物中與膽汁酸的結(jié)合，例如，在雞中。通過本發(fā)明可以認(rèn)為，在小型動(dòng)物中通過殼聚糖對(duì)膽汁酸的吸收是作為在帶正電荷的殼聚糖多聚物(它與許多其他帶正電荷的血液蛋白質(zhì)競(jìng)爭(zhēng))與帶負(fù)電荷的膽汁酸之間的非特異離子相互作用而發(fā)生的，同時(shí)將殼聚糖結(jié)合到膽汁酸的疏水面上，這是非常特異的。通過本發(fā)明可以假設(shè)，通過與疏水尾區(qū)的相互作用，非離子表面活性劑可吸收殼聚糖分子，導(dǎo)致導(dǎo)致形成不帶電荷的殼聚糖分子，它在腸內(nèi)pH環(huán)境下是水溶性的。因此，可以認(rèn)為，增加殼聚糖的疏水性將增加它在特定動(dòng)物中與膽汁酸的結(jié)合，例如，在雞中。因此，需要注意的是，本發(fā)明提供了一種提升殼聚糖微粒的疏水性的方法，通過提供殼聚糖的"復(fù)合(composite)"微粒，該殼聚糖化學(xué)地結(jié)合到正如卵磷脂等表面活性劑。不愿受到理論的束縛，值得注意的是，本發(fā)明所揭示的復(fù)合微粒具有強(qiáng)疏水性區(qū)，該區(qū)在胃的酸性環(huán)境下是可溶的，可以溶液的方式進(jìn)入小腸，在那里該微米微粒結(jié)合膽汁鹽，然后使其沉淀。以色利耶路撒冷希伯來大學(xué)的Magdassi等人(例如，參見G.NizriandS.Magdassi:Solubilizationofhydrophobicmoleculesinnanoparticlesformedbypolymer-surfactantinteractions,J.ColloidInterfaceSci.291,169-174(2005))已經(jīng)證實(shí)當(dāng)多陽(yáng)離子多聚物與陰離子表面活性劑混合時(shí)，靜電相互作用導(dǎo)致納米微粒沉淀。這樣的微粒是能夠使疏水性分子溶解的，因?yàn)樵谠摱嚓?yáng)離子多聚物內(nèi)形成疏水袋。Magdassi未教導(dǎo)或暗示采用包含殼聚糖的疏水微粒用于減少人體內(nèi)的膽固醇。而且，Magdassi只研究了納米微粒而非微米微粒。Magdassi在美國(guó)專利第5,753,264號(hào)中教導(dǎo)了含水的帶正電荷的殼聚糖的油乳化，其中殼聚糖水溶液被加入到包含陰離子乳化劑的油水乳化物中，以產(chǎn)生不溶性的表面活性劑-殼聚糖復(fù)合物。該乳化劑可包括卵磷脂。Magdassi的專利的目的是使油穩(wěn)定。沒有形成殼聚糖和卵磷脂的微粒，反而首先形成了穩(wěn)定的卵磷脂的乳化物，然后再加入殼聚糖。Magdassi所采用的殼聚糖與卵磷脂的比率是0.5:0.33。該過程式在pH6下進(jìn)行的。如果由Magdassi所描述的該乳化物的pH值被提高到超過7，在所用的殼聚糖與卵磷脂的比率下，在殼聚糖與膽汁酸發(fā)生相互反應(yīng)之前，將立即造成殼聚糖的沉淀。通過本發(fā)明令人驚喜地發(fā)現(xiàn)，包含諸如殼聚糖等帶正電荷多聚物與諸如卵磷脂等陰離子或非離子表面活性劑的混合物，提供了復(fù)合疏水性微米微粒，避免其中殼聚糖在胃內(nèi)與帶正電荷的分子發(fā)生離子相互作用，以致該殼聚糖被送到腸內(nèi)并有效地用于結(jié)合膽汁酸。由本發(fā)明的實(shí)施例所提供的這些混合物優(yōu)選地包括微粒，該微粒能與膽汁酸發(fā)生作用，以便形成復(fù)合物，以至少部分穩(wěn)定、不溶的懸浮形式穿過小腸，目的是避免被游離膽汁鹽消化和瓦解，這些膽汁鹽能夠打斷所述微粒并與卵磷脂發(fā)生反應(yīng)。因此，包含這樣的復(fù)合微米微粒的混合物將非常有效地用于結(jié)合膽汁酸，因而降低了在多種動(dòng)物內(nèi)的LDL膽固醇水平。示范性實(shí)施例所述復(fù)合微粒在胃的酸性環(huán)境中是可溶的，并在人小腸的較高pH中形成懸浮微粒。這樣的微粒能夠與膽汁鹽發(fā)生反應(yīng)，通過與膽汁鹽的疏水部分發(fā)生疏水相互作用，導(dǎo)致沉淀形成不溶性的團(tuán)塊，所述膽汁鹽被捕獲在該團(tuán)塊中。為了獲得這樣的效應(yīng)，所述復(fù)合微粒應(yīng)當(dāng)是足夠疏水性的，以便提供與膽汁鹽的疏水區(qū)進(jìn)行強(qiáng)的疏水相互作用。在一些實(shí)施例中，所述微粒是這樣設(shè)計(jì)的，一直當(dāng)其進(jìn)入人的腸道時(shí)，所述微粒在腸內(nèi)介質(zhì)中保持短時(shí)的穩(wěn)定的微粒懸浮狀態(tài)，同時(shí)與膽汁鹽發(fā)生相互作用。接著，所述微粒沉淀，與膽汁鹽一起形成團(tuán)塊。因此，膽汁鹽通過疏水相互作用陷入該多聚物中，避免在穿過腸道的過程中被水解。用于使所述微粒保持在懸浮狀態(tài)的時(shí)間必須是足夠的能使所述微粒與膽汁鹽發(fā)生相互作用。能形成至少部分穩(wěn)定溶液的微粒在腸液中發(fā)生快速絮凝，以致不會(huì)發(fā)生膽汁鹽的結(jié)合和誘捕。這樣，在一些實(shí)施例中，本發(fā)明所述的微粒在腸介質(zhì)中能夠提供至少部分穩(wěn)定的懸浮狀態(tài)，并是足夠疏水性的以便與膽汁鹽的疏水區(qū)發(fā)生強(qiáng)反應(yīng)，該微粒與膽汁鹽形成沉淀。在本發(fā)明所進(jìn)行的這些實(shí)施例中，可以發(fā)現(xiàn)，通過本發(fā)明所述的卵磷脂-殼聚糖復(fù)合微粒對(duì)膽汁鹽的吸收是受到疏水化程度和微粒尺寸的影響。疏水化程度可由在所述微粒中的卵磷脂濃度和/或所用的卵磷脂類型來控制。微粒尺寸和微粒尺寸分布的討論本發(fā)明現(xiàn)在所揭示的是，在一些實(shí)施例中，所述微粒的尺寸范圍在0.3微米至2微米，而在另一些實(shí)施例中，所述微粒的尺寸范圍是0.3至1.5微米，這些尺寸范圍的微粒都能在進(jìn)入腸內(nèi)pH環(huán)境中時(shí)形成至少部分穩(wěn)定的懸浮液，然后結(jié)合膽汁鹽。需要明確的是，在任何給出的混合物中，所述復(fù)合微粒的微粒尺寸對(duì)于在混合物中每個(gè)微粒而言不會(huì)是同樣的。相反，任何給出的混合物都將具有一定的微粒尺寸分布。在示范性實(shí)施例中，所述微粒中有一定最小百分比的微粒具有給出的尺寸范圍的大小，例如，在0.3微米至2微米，或者0.3微米至1.5微米。不愿受到理論的束縛，需要注意的是，這個(gè)尺寸范圍可以有效地用于提供這樣的微粒，當(dāng)它們被引導(dǎo)進(jìn)入腸內(nèi)時(shí)，能夠形成部分穩(wěn)定的懸浮液。這樣，較大的微粒可能在結(jié)合膽汁酸之前沉淀，而不會(huì)有效地將膽汁酸沖洗出腸道。而較小的微粒可能形成完全穩(wěn)定的懸浮液，將會(huì)減低用于"在與膽汁酸結(jié)合后最終沉淀"的效果，也會(huì)降低用于將膽汁酸沖洗出腸道的效果。而且，較小的微粒也會(huì)更易受到酶消化的影響。這樣，在某些實(shí)施例中，在前述尺寸范圍的所述微粒是用于去除膽汁酸的"活性物質(zhì)"。因此，在一些實(shí)施例中，所述微粒中有一定最小重量百分比或者數(shù)量百分比的微粒具有在目標(biāo)尺寸范圍內(nèi)的尺寸。根據(jù)本發(fā)明所揭示的內(nèi)容，按數(shù)量計(jì)的微粒尺寸分布或者按重量計(jì)的微粒尺寸分布是指"常量樣品(macrosample)"包含至少0.1克樣品或者至少0.5克或至少1克樣品。制造所述復(fù)合微粒的第一種示范性方法現(xiàn)在參見圖l，該圖是用于制造殼聚糖-卵磷脂復(fù)合微粒的一種模范技術(shù)方法的流程圖。在步驟S201中，通過將殼聚糖溶解在0.75。/。HCL中，濃度為約1.5。/。w/w，混合一小時(shí)或者更長(zhǎng)時(shí)間，形成第一溶液。在一些實(shí)施例中，需要一個(gè)最小的混合時(shí)間以便用于后來形成的復(fù)合微粒，使其溶于胃內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施例中，對(duì)于"低分子量"殼聚糖，需要的最小混合時(shí)間是一小時(shí)，而對(duì)于"中分子量"殼聚糖，需要的最小混合時(shí)間是兩小時(shí)，而對(duì)于"高分子量"殼聚糖，需要的最小混合時(shí)間是三小時(shí)。在一些實(shí)施例中，混合時(shí)間的量與混合的"強(qiáng)度"成函數(shù)關(guān)系。例如，在強(qiáng)烈混合下，需要較少的混合時(shí)間，而如果僅是柔和地混合，則需要更多的時(shí)間。在一個(gè)實(shí)施例中，步驟S201的混合持續(xù)進(jìn)行了至少20小時(shí)。在步驟S203中，將卵磷脂溶解于水中，濃度為約7.5。/。w/w，形成第二溶液。在步驟S205中，所述溶液是按給出的比率混合在一起。在復(fù)合微粒中最終形成的殼聚糖與卵磷脂的比率可以通過控制第一溶液與第二溶液的比率來進(jìn)行控制。在步驟S205的混合過程中，所述復(fù)合微粒是在溶液中形成的。在步驟S207中，包括所述復(fù)合微粒的混合溶液是噴霧干燥成為粉末形式的。需注意的是，所述復(fù)合微粒的尺寸可以被控制，例如，通過控制在步驟S205中溶液的溫度，以及控制所述微粒允許在噴霧干燥207之前保留在所述溶液中的時(shí)間量。本發(fā)明已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，所述第一溶液與第二溶液在25攝氏度混合15分鐘能得到好的結(jié)果，在想要的0.3-1.5微米或者0.3-2微米范圍帶有微粒的明顯片段。不愿受到理論的束縛，值得注意的是，通過混合殼聚糖與卵磷脂所產(chǎn)生的微粒的尺寸會(huì)根據(jù)混合時(shí)間和反應(yīng)溫度而增加。過大尺寸的微粒在pH7會(huì)變得不穩(wěn)定，并在與膽汁鹽發(fā)生結(jié)^t前，在腸內(nèi)pH條件下會(huì)先沉淀?；旌蠒r(shí)間過長(zhǎng)或者混合溫度太高，都會(huì)產(chǎn)生尺寸過大的復(fù)合微粒。這樣，在一些實(shí)施例中，步驟S205的混合時(shí)間限制為不超過5分鐘，混合溫度為50°C，或者限制為在40°C混合10分鐘。制造所述復(fù)合微粒的第二種示范性方法在圖2所示的技術(shù)中，步驟S201與S203與圖l所示的技術(shù)相同。在步驟S205中，所述溶液在給出的比率進(jìn)行混合，例如，該比率是卵磷脂與殼聚糖的質(zhì)量比，在3:1至4:1之間。在這一點(diǎn)上，殼聚糖與卵磷脂可離子性地結(jié)合。在步驟S301中，pH提升到7，便于在殼聚糖與卵磷脂之間形成第二結(jié)合(也就是，疏水結(jié)合)的形成，并便于結(jié)合后的沉淀。這可允許在例如約30分鐘內(nèi)發(fā)生。在步驟S305，將絮凝經(jīng)離心并過濾，得到顆粒狀物。步驟S205至步驟S305可重復(fù)進(jìn)行，以便使所述微粒濃縮S309。在步驟S313中，前述顆粒狀物在酸性pH條件下重懸，在步驟S207中，所述微粒被噴霧干燥形成粉末形式。將所述復(fù)合微粒與動(dòng)物飼料混合的方法所述復(fù)合微粒是與營(yíng)養(yǎng)密集型(也就是，在蛋白質(zhì)來源卡路里和/或碳水化合物來源卡路里上具有營(yíng)養(yǎng)密集型)的動(dòng)物飼料混合。在一個(gè)實(shí)施例中，該動(dòng)物飼料是雞食。該飼料包含0.1%至1%(w/w)的復(fù)合微粒。在不同的實(shí)施例中，營(yíng)養(yǎng)密集型詞料可以是任意普通雞或動(dòng)物飼料或者它們的組合，例如烘烤、粉碎、栽培、分層、搗碎、使成彈丸狀、刮擦或者催肥飼料。這些飼料成分包含一種或多種氨基酸、糠、鈣、濃縮品、玉米、元素、微生物、谷物、粗砂、海藻、粗麩皮、礦物質(zhì)、蛋白質(zhì)、示蹤元素、維生素，以及其他特定成分，每ioo克含有至少ioo千卡路里。需要認(rèn)識(shí)到，所用的飼料可根據(jù)所詞養(yǎng)的具體目標(biāo)動(dòng)物而變化，在動(dòng)物飼料中富含復(fù)合微粒?？晒┻x擇的表面活性劑根據(jù)本發(fā)明所述的任意實(shí)施例，可采用任意陰離子或非離子表面活性劑。合適的陰離子表面活性劑的例子包括磷脂、膽汁鹽、月桂醇醚硫醚鈉、檸檬酸單甘油酯、硬脂酰鈉、硬脂酰鈣或硬脂酸、硬脂檸檬酸、脂肪酸及其鹽、二乙酰酒石酸單甘油酯，以及它們的組合。非離子表面活性劑的例子包括十六醇或油醇。在一些實(shí)施例中，陰離子表面活性劑包括磷脂、卵磷脂，又稱為1,2-二酯-Sn-甘油-3-膽堿磷酸或者PtdCh0，它可表示為以下的化學(xué)結(jié)構(gòu)25<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>術(shù)語(yǔ)卵磷脂(lecithin)本身具有不同的意思，當(dāng)使用在化學(xué)和生物化學(xué)中時(shí)的含義與當(dāng)商業(yè)化使用時(shí)的含義是不同的。使用作為化學(xué)術(shù)語(yǔ)時(shí)，卵磷脂是phosphatidylcholine使用作為商業(yè)用語(yǔ)時(shí)，它是指中性和極性脂質(zhì)的天然混合物。卵磷脂(phosphatidylcholine)是一種極性脂類，占商業(yè)上卵磷脂(lecithin)的20-90%濃度。大多數(shù)商業(yè)上卵磷脂(ledthin)產(chǎn)品包含約20%的卵磷脂(phosphatidylcholine)。包含卵磷脂(phosphatidylcholine)的卵磷脂(lecithin)是從以下來源生產(chǎn)的蔬菜、動(dòng)物和微生物來源，但主要是來自蔬菜來源。大豆、向日葵和油菜籽是商業(yè)上卵磷脂的主要植物來源。大豆是最普遍的來源。植物卵磷脂被認(rèn)為是公認(rèn)為安全級(jí)(GRAS)。在營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)上，蛋黃卵磷脂不是卵磷脂的主要來源。天然雞蛋本身包含68%至72%卵磷脂(phosphatidylcholine),而大豆包含20%至22%卵磷脂(phosphatidylcholine)。來自植物的卵磷脂與來自動(dòng)物的脂肪酸組成是不同的。飽和脂肪酸，例如棕櫚酸和硬脂酸，由以下組成19%至24%的大豆卵磷脂；9%至11%的單不飽和油酸；56%至60%的亞油酸；以及6%至9%的^亞麻酸。在蛋黃卵磷脂中，飽和脂肪酸，例如棕櫚酸和硬脂酸，由以下組成41%至46%的蛋卵磷脂，35%至38%的油酸，15%至18%的亞油酸，以及0至1%的a-亞麻酸。大豆卵磷脂是比蛋卵磷脂明顯地富含多不飽和脂肪酸。不飽和脂肪酸主要結(jié)合甘油的第二個(gè)或中間的碳。與其他表面活性劑相比，卵磷脂具有一些優(yōu)勢(shì)。例如，卵磷脂是膽汁鹽復(fù)合物的內(nèi)在部分，它是廉價(jià)的，它是由膽汁酸容易識(shí)別的。優(yōu)選地，陰離子表面活性劑包括卵磷脂，一種磷脂片斷的主要成分，它可從蛋黃或大豆里分離得到。與其他表面活性劑相比，卵磷脂具有一些優(yōu)勢(shì)。例如，卵磷脂是膽汁鹽復(fù)合物的的內(nèi)在部分，它是廉價(jià)的，它是由膽汁酸容易識(shí)別的?？晒┻x擇的殼聚糖在本發(fā)明所述的任意實(shí)施例中，可供選擇的殼聚糖可采用任何合適的帶正電荷的多聚物。合適的帶正電荷的多聚物的例子包括聚胺，例如多熔素和polyamidoanine。根據(jù)本發(fā)明所述的任意實(shí)施例，高分子量殼聚糖是優(yōu)選使用的，因?yàn)榈头肿恿繗ぞ厶蔷哂械偷氖杷?，因此在本發(fā)明所述的混合中是低效率的。高分子量殼聚糖的優(yōu)選范圍是約5xl05-3xl()S道爾頓。在所述復(fù)合微粒中，卵磷脂與殼聚糖的比率可在基于一個(gè)或多個(gè)因素而變動(dòng)，例如殼聚糖的分子量和/或所用的卵磷脂的類型。在一些實(shí)施例中，該比率是在約1:0.2至約5:1的任選范圍，當(dāng)使用富含卵磷脂(phosphatidylcholine)的卵磷脂(lec池in)。因此，所述范圍包括，例如，0.2:1，0.25:1，0.4:1,0.6:1，1:1，1.2:1,2:1,2.8:1,3:1，4:1或5:1。更優(yōu)選地，該范圍是從約3:1到約4:1，例如，包括3:1，3.3:1,3.5:1，3.7:1或4:1?？蛇x地，殼聚糖在所述混合物中的濃度是不大于約1%(w/w)，例如，是約0.1%，約0.2%，約0.25%，約0.3%,約0.4%，約0.5%，約0.6%，約0.7%，約0.8%，約0.9%，約1%，約1.3%,約1.5%或約1.7%或約2%或約2.5%(w/w)?？蛇x地，卵磷脂在所述混合物中的濃度是在約0.1%至約7.5%(w/w)的范圍或者在它們的任意附屬的范圍。本發(fā)明的其他目標(biāo)、優(yōu)點(diǎn)和新特征都將通過以下的實(shí)施例使本領(lǐng)域普通技術(shù)人員得以明晰，這些實(shí)施例不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。此外，正如前面描述的本發(fā)明的每個(gè)實(shí)施例和每個(gè)方面以及在下面的權(quán)利要求中所要求的內(nèi)容，都可在下面的實(shí)施例中找到實(shí)驗(yàn)支持。值得重視的是，本發(fā)明的某些特征，它們?cè)诙鄠€(gè)實(shí)施例的分別的章節(jié)中清楚描述，也將在單個(gè)實(shí)施例中以組合的方式提供出來。相反，本發(fā)明的多種不同特征，它們?cè)趩蝹€(gè)實(shí)施例的章節(jié)中簡(jiǎn)短描述，也將分別或者在任意合適的次組合中提供出來。盡管本發(fā)明已經(jīng)在特定實(shí)施例的關(guān)聯(lián)中進(jìn)行了描述，顯然的是，許多改變、修飾和變化對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言都是顯而易見的。因此，本發(fā)明包含所有這樣的改變、修飾和變化，它們都落入了所附的權(quán)利要求的精神和保護(hù)范圍之內(nèi)。在本說明書中提及的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)文獻(xiàn)都以它們的整體在這里引用作為參考文獻(xiàn)，正如每個(gè)單獨(dú)的出版物、專利和專利申請(qǐng)文獻(xiàn)的同樣的范圍都特別地和個(gè)別地在這里指出作為參考文獻(xiàn)，此外，在本申請(qǐng)中的任何參考文獻(xiàn)的引用或者證明都不會(huì)視同為承認(rèn)該參考文獻(xiàn)是本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。例子材料與方法材料低分子量殼聚糖100,000g/mol(SK-IO)，具有20%的乙?；潭?；以及高分子量殼聚糖2.8x106g/mol(SK-IOO)，具有9%的乙?；潭龋凰鼈兌紒碜匀毡綤oyo公司。部分水解的卵磷脂，導(dǎo)致富含磷脂(HL50IP)，來自德國(guó)Cargill公司。制備方法a.SK-10殼聚糖制備低分子量SK-10殼聚糖在0.5%HC1的溶液(濃度1%)，在25°C攪動(dòng)24小時(shí)。制備卵磷脂的水溶液(濃度10%)，在25°C攪動(dòng)24小時(shí)。每種溶液的pH值被調(diào)節(jié)到3.2。將這兩種溶液混合，在25。C混合15分鐘，混合比例是卵磷脂:殼聚糖的比例為1:1、2:1、3:1、4:1和5:1，以形成懸浮液。收回樣品，以便研究所形成的微粒的尺寸分布和zeta電位。結(jié)果如表l所示。將懸浮液攪拌一小時(shí)，然后送去噴霧干燥(BUCHI小型噴霧干燥器B-2卯)。在該噴霧千燥器入口的溫度是120°C，抽吸器的程度是70%，而泵的程度是25%。首先將形成的粉末重懸在鹽酸(pH3.0)中，形成懸浮微粒，該微粒含有濃度為0.25%w/w的卵磷脂，以及變化的殼聚糖濃度，提供不同比例的卵磷脂-殼聚糖復(fù)合物，如下所示在所述粉末中卵磷脂/SK-10殼聚糖的比率在懸浮液中卵磷脂的濃度(％重量)0.60.151.20.32.80.74151.25從所獲得的每個(gè)粉末中去除0.258，然后重懸在20mlHCl(pH3.0)30分鐘，以模擬人體胃的環(huán)境。然后用NaOH和30ml磷酸緩沖液將這些溶液調(diào)至中性，使得該溶液的pH調(diào)至6.8，以模擬人體腸的環(huán)境；該磷酸緩沖液包含以下成分(以mM為單位)108NaCl，4.7KC1,1.8NaH2P04，15NaHC03，1.2MgS04，1.25CaC12。所述微粒的分布和穩(wěn)定性是以數(shù)碼照片來記錄，在磷酸緩沖液中3小時(shí)后記錄。結(jié)果如圖3所示。28b.SK-100殼聚糖制備高分子量SK-100殼聚糖在0.5%HC1的溶液(濃度1%)，制備卵磷脂的水溶液(濃度10%)，方法同上述的SK-10殼聚糖章節(jié)所述的方法。首先將形成的粉末重懸在鹽酸(pH3.0)中，形成懸浮微粒，該微粒含有濃度為0.25%w/w的卵磷脂，以及變化的殼聚糖濃度，提供不同比例的卵磷脂-殼聚糖復(fù)合物，如下所示在所述粉末中卵磷脂/SK-100殼聚糖的比率在懸浮液中卵磷脂的濃度(％重量)1.250.320.52.80.74151.25收回樣品，以便研究所形成的微粒的尺寸分布。結(jié)果如表2所示。從所獲得的每個(gè)粉末中去除0.258，然后重懸在HC1中，以模擬人體胃的環(huán)境，然后用磷酸緩沖液將溶液的pH調(diào)至6.8，以模擬人體腸的環(huán)境；正如前述的SK-10殼聚糖章節(jié)所述的方法。用數(shù)碼照片記錄所述微粒在磷酸緩沖液中的分布和穩(wěn)定性，5分鐘照片見圖4A，30分鐘照片見圖4B，以及3小時(shí)照片見圖4C。研究在殼聚糖-卵磷脂微粒與膽汁酸之間的相互作用的體外模型為了研究在膽汁酸與本發(fā)明所述的殼聚糖-卵磷脂微粒之間的可能的相互作用，采用了一個(gè)體外模型，該模型基于這樣的假設(shè)溶解的游離膽汁酸衍生物膽酸鈉將會(huì)被所述微粒結(jié)合，致使在上清液中的膽酸鈉的量減少。該方法是在將殼聚糖-卵磷脂微粒以不同比例與膽酸鈉混合后，離心和過濾去除從溶液中被結(jié)合的膽酸鹽，未被結(jié)合的膽酸鹽仍保留在溶液中，由此測(cè)定仍保留在上清液中的游離膽汁酸。對(duì)于在磷酸緩沖液中的膽酸鹽的比色分析是通過如Paul等人的方法(生物化學(xué)雜志，頁(yè)73-82，1948)來進(jìn)行的。簡(jiǎn)單地說，該方法是基于這樣的原理當(dāng)含有膽酸鹽的乙酸溶液用糠醛酸和用硫磺酸處理時(shí)會(huì)產(chǎn)生不同的色度。首先研究了在光吸收度與膽酸鈉濃度之間的關(guān)系，以便證實(shí)比色分析法是用于測(cè)定膽酸鹽濃度的合適方法。結(jié)果見圖5所示。在0.25。/。w/w濃度的高分子量(SK-100)殼聚糖，以不同量的卵磷脂，在下面給出的卵磷脂:殼聚糖比率下，與所用的0，/。w/w濃度的純膽酸鈉進(jìn)行反應(yīng)<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>以上述方法制備所述微粒，在HC1中懸浮30分鐘。然后將所述微粒轉(zhuǎn)送到pH6.8的磷酸緩沖液中，與膽酸鈉混合30分鐘后，檢測(cè)這些溶液。然后將微粒溶液離心和過濾，以便使所述微粒與在上清液中的游離膽酸鹽互相分離，然后進(jìn)行比色分析。對(duì)照品為包含殼聚糖-卵磷脂的磷酸緩沖液，不含有膽酸鈉，該對(duì)照品在腸介質(zhì)中有一定吸收。比色分析的結(jié)果參見下面的表2。用于動(dòng)物飼料的卵磷脂-殼聚糖微粒的制備為了生產(chǎn)足夠量的微粒用于動(dòng)物研究，采用了每小時(shí)16升容量的噴霧干燥器。通過采用這樣的噴霧干燥器，每天可生產(chǎn)約0.5至lkg的所述微粒。將殼聚糖溶解于1%乳酸，在25。C攪拌24小時(shí)，得到殼聚糖溶液(濃度1%)。將卵磷脂溶解于水，在25。C攪拌24小時(shí)，得到卵磷脂溶液(濃度10%)。每種溶液的pH調(diào)至3.3。這兩種溶液在45。C混合5分鐘，混合比例為卵磷脂:殼聚糖的比例為約1:1至4:1，然后轉(zhuǎn)送到噴霧干燥器。樣品中卵磷脂:殼聚糖的比例是l:l、2:1和3:1,用50%麥芽糊精干燥，以便獲得干的樣品。以80%麥芽糊精千燥的樣品中卵磷脂:殼聚糖的比例是3.5:1和4:1?；A(chǔ)雞伺料<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>伺養(yǎng)混合物飼養(yǎng)混合物l:僅為基礎(chǔ)雞飼料飼養(yǎng)混合物2:基礎(chǔ)雞飼料混合殼聚糖粉末，以0.25%的劑量混合飼養(yǎng)混合物3:基礎(chǔ)雞飼料混合殼聚糖粉末，以0.4%的劑量混合飼養(yǎng)混合物4:基礎(chǔ)雞詞料混合(i)殼聚糖粉末，以0.1%的劑量混合；以及混合(ii)卵磷脂粉末，以0.1%的劑量混合詞養(yǎng)混合物5:基礎(chǔ)雞飼料混合(i)殼聚糖粉末，以0.125%的劑量混合；以及混合(ii)卵磷脂粉末，以0.2%的劑量混合飼養(yǎng)混合物6:基礎(chǔ)雞飼料混合(i)殼聚糖粉末，以0.125%的劑量混合；以及混合(ii)卵磷脂粉末，以0.3%的劑量混合飼養(yǎng)混合物7:基礎(chǔ)雞詞料混合殼聚糖-卵磷脂粉末，以0.25%的劑量混合，該殼聚糖-卵磷脂粉末的卵磷脂:殼聚糖的比例為2:1飼養(yǎng)混合物8:基礎(chǔ)雞飼料混合殼聚糖-卵磷脂粉末，以0.25%的劑量混合，該殼聚糖-卵磷脂粉末的卵磷脂:殼聚糖的比例為3:1飼養(yǎng)混合物9:基礎(chǔ)雞飼料混合殼聚糖-卵磷脂粉末，以0.25%的劑量混合，該殼聚糖-卵磷脂粉末的卵磷脂:殼聚糖的比例為3.5:1飼養(yǎng)混合物10:基礎(chǔ)雞飼料混合殼聚糖-卵磷脂粉末，以0.25%的劑量混合，該殼聚糖-卵磷脂粉末的卵磷脂:殼聚糖的比例為4:1飼養(yǎng)混合物ll:基礎(chǔ)雞飼料混合殼聚糖-卵磷脂粉末，以0.4%的劑量混合，該殼聚糖-卵磷脂粉末的卵磷脂:殼聚糖的比例為4:1所述基礎(chǔ)飼料是的粗糙的地面飼料，在所有混合物中所用的基礎(chǔ)飼料都是一樣的，并符合NRC-94要求。飼料混合物7、8和9是用50%麥芽糊精稀釋的。飼料混合物10和11是用80%麥芽糊精稀釋的。動(dòng)物研究方法110只雞，分成11組，每組10只雞。所有雞的年齡是74周。第一批6組雞都是對(duì)照組，不喂食含有殼聚糖-卵磷脂復(fù)合微粒(也就是，殼聚糖化學(xué)結(jié)合卵磷脂的復(fù)合微粒)的殼聚糖-卵磷脂粉末。剩下的5組雞都喂食含有殼聚糖-卵磷脂復(fù)合微粒的殼聚糖-卵磷脂粉末。研究組l，喂食飼料混合物l;研究組2，喂食詞料混合物2，如此類推，第N研究組，喂食第N組飼料混合物，這里的N是在1和11之間的一個(gè)整數(shù)。每天對(duì)雞喂食約125克詞料混合物，共喂食45天。在實(shí)驗(yàn)過程中，監(jiān)測(cè)雞的生理學(xué)變化和雞蛋的品質(zhì)。鳥測(cè)定這些鳥的表現(xiàn)將通過對(duì)以下的測(cè)定來進(jìn)行評(píng)價(jià)活體重量在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，分別對(duì)這些鳥稱重。飼料消耗是以每排籠計(jì)算的。記錄每天死亡率。每天也記錄下蛋量(母雞日產(chǎn)量)。每周測(cè)量喂食效率和蛋重(在當(dāng)天收集所有蛋后)。蛋的品質(zhì)測(cè)定蛋殼品質(zhì)是由灰度％決定——這指示了蛋殼的厚度。蛋殼品質(zhì)的采用以下方法測(cè)定的先對(duì)這些雞蛋個(gè)別稱重，然后打碎雞蛋，清洗蛋殼，在室溫下干燥，用于測(cè)量蛋殼重量和蛋殼厚度，不包括殼內(nèi)的膜。所有雞蛋都是經(jīng)處理的，分開破裂的蛋和檢測(cè)過的蛋。采用以下標(biāo)準(zhǔn)來決定蛋殼品質(zhì)?；瘜W(xué)分析(根據(jù)被認(rèn)可的AOAC方法)濕度(％)，總膽固醇，蛋黃膽固醇，脂肪酸概況，MUFA，PUFA，SAT，LDL，HDL結(jié)果在不同卵磷脂:殼聚糖比例(SK-10殼聚糖)的微粒尺寸和zeta電位在不同卵磷脂:殼聚糖比例所形成的微粒的尺寸和它們的zeta電位情況顯示在表1中。表l樣品號(hào)卵磷脂濃度卵磷脂/殼聚糖比率尺寸Zeta電位(%)(w/w)(微米)(mV)10.050.21.2+4320.070.251.8+4230.10.41.95+4240.31.21.25+3950.72.80.95+33Zeta電位表示所述微粒電荷。如上表所示，zeta電位隨著卵磷脂:殼聚糖比率的增加而減小。在不同卵磷脂:殼聚糖比例(SK-100殼聚糖)的微粒尺寸表2顯示了不同卵磷脂濃度的微粒尺寸。在實(shí)驗(yàn)中的卵磷脂濃度為0.25%。而卵磷脂:32殼聚糖比例是1.2:1、2:1、2.8:1禾B4:1。如下表所示，微粒尺寸總體上隨著時(shí)間以及卵磷脂:殼聚糖比率的增加而增加。表2卵磷脂濃度(％)在15分鐘后的微粒尺寸(nm)在1小時(shí)后的微粒尺寸(nm)0.35183810.3273790.552610300.577110100.75748610.725.277319381270190514601.25117011801.251240785在不同卵磷脂:殼聚糖比例的微粒的分布和穩(wěn)定性圖3顯示了SK-10微粒在3小時(shí)后在磷酸緩沖液中的分布情況，該微粒的卵磷脂:殼聚糖比例為1:1、2:1、3:1、4:1和5:1。圖4A至圖4C顯示了SK-10微粒在5分鐘、30分鐘和3小時(shí)后在磷酸緩沖液中的分布情況。如圖4A至圖4C所示，微粒在1:1的卵磷脂:殼聚糖比例時(shí)是穩(wěn)定的，在超過至少3小時(shí)后仍不會(huì)沉淀?？梢园l(fā)現(xiàn)，這些微粒的平均尺寸是在300-400納微米。當(dāng)該卵磷脂:殼聚糖比例增加時(shí)，可以發(fā)現(xiàn)，所得到的微粒的尺寸是從幾百納微米至1或2微米，這些微粒失去了它們?cè)谠撊芤褐械姆€(wěn)定性，并開始沉淀。微粒沉淀的增加是與卵磷脂:殼聚糖比例的增加成比例的，因?yàn)樵黾恿嗽撐⒘５氖杷糠?。然而，可以認(rèn)為，微粒的太快沉淀將不能提供足夠的時(shí)間供這些微粒與膽汁酸發(fā)生反應(yīng)，因而最優(yōu)選的卵磷脂:殼聚糖比例可歸納為約3:1至4:1。在殼聚糖-卵磷脂微粒與膽汁酸之間相互作用的體外模型為了研究在膽汁酸與本發(fā)明所述的殼聚糖-卵磷脂微粒之間的可能的相互作用，采用了一個(gè)體外模型，該模型基于這樣的假設(shè)溶解的游離膽汁酸衍生物膽酸鈉將會(huì)被所述微粒結(jié)合，致使在上清液中的膽酸鈉的量減少。該方法是在將殼聚糖-卵磷脂微粒以不同比例與膽酸鈉混合后，離心和過濾去除從溶液中被結(jié)合的膽酸鹽，未被結(jié)合的膽酸鹽仍保留在溶液中，由此測(cè)定仍保留在上清液中的游離膽汁酸。對(duì)于在磷酸緩沖液中的膽酸鹽的比色分析是通過如Paul等人的方法(生物化學(xué)雜志，頁(yè)73-82，1948)來進(jìn)行的。簡(jiǎn)單地說，該方法是基于這樣的原理當(dāng)含有膽酸鹽的乙酸溶液用糠醛酸和用硫磺酸處理時(shí)會(huì)產(chǎn)生不同的色度。首先研究了在光吸收度與膽酸鈉濃度之間的關(guān)系，以便證實(shí)比色分析法是用于測(cè)定膽酸鹽濃度的合適方法。結(jié)果見圖5所示。如圖5所示，在溶液中的膽酸鈉濃度(mg/ml)與由比色分析測(cè)定的吸收度之間成線形關(guān)系，這顯示該方法是用于測(cè)定膽酸鹽濃度的合適方法。對(duì)于測(cè)試溶液的比色分析的結(jié)果顯示在下面的表3中。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>如上表所示，卵磷脂含量的增加會(huì)導(dǎo)致由所述殼聚糖-卵磷脂微粒結(jié)合膽酸鹽的增加，以致史少的膽酸鹽殘留在上清液中。增加在所述微粒中的卵磷脂含量可增加所述微粒的疏水特性，因而改善所述微粒的用于結(jié)合膽酸鈉的疏水位點(diǎn)的親和力。從表3的結(jié)果可見，以mg計(jì)算的保留在溶液中的膽酸鹽的量已計(jì)算出來，基于OD值0.4185相當(dāng)于0.74mg膽酸鈉，溶液中卵磷脂:殼聚糖的比例為2:1和3:1?？梢园l(fā)現(xiàn)，在卵磷脂:殼聚糖的比例為1:1時(shí)，膽酸鹽總量的40%保留在上清液中；在卵磷脂:殼聚糖的比例為4:1時(shí)，膽酸鹽總量的12%保留在上清液中；在卵磷脂:殼聚糖的比例為5:1時(shí)，膽酸鹽總量的37%保留在上清液中。因此，在卵磷脂凍聚糖的比例為1:1時(shí)，有60%的膽酸鹽被吸收；在卵磷脂:殼聚糖的比例為4:1時(shí)，有88%的膽酸鹽被吸收；在卵磷脂:殼聚糖的比例為5:1時(shí)，有63%的膽酸鹽被吸收。還可以發(fā)現(xiàn)，當(dāng)所述微粒具有的卵磷脂:殼聚糖的比例為約1:1時(shí)，微粒尺寸的效應(yīng)是比微粒疏水程度的效應(yīng)更為明顯。因?yàn)榧{米級(jí)微粒(直徑約0.4pm)具有較高的表面積，它們更易溶解，但其疏水性低于在更高比例形成的微粒。這些微粒吸收約60%的膽酸鈉。然而，由這些納米級(jí)微粒所吸收的膽酸鹽將因?yàn)椴荒苓M(jìn)一步水解而不能夠通過腸道，但能快速?gòu)乃鑫⒘Ｖ蟹蛛x并保留在腸道中。因而，值得人們采用微米級(jí)微粒來用于本發(fā)明所述的混合物。綜上所述，在測(cè)定膽酸鹽的吸收度的體外實(shí)驗(yàn)是不足以量化被所述微粒誘捕的膽酸鹽的量，隨后從體內(nèi)通過糞便排出。需要進(jìn)行體內(nèi)動(dòng)物研究，以便精確地量化在糞便中排出的膽酸鹽的量。對(duì)于雞實(shí)驗(yàn)的預(yù)期結(jié)果在對(duì)鳥飼料微調(diào)最適宜的喂食添加成分的濃度之后，所期待的結(jié)果是雞蛋的LDL含量會(huì)有高達(dá)30%的減少。在本發(fā)明的說明書和權(quán)利要求書中，以下的每個(gè)動(dòng)詞，"包含(comprise)"、"包括(include)"和"具有(have)"以及它們的聯(lián)用，是用來指示這個(gè)動(dòng)詞的目標(biāo)，而不必要是該動(dòng)詞的主題或者主題的部件、成分、元素或部分的完全列表。這里所引用的所有參考文獻(xiàn)都以它們的整體被引入作為參考。一個(gè)參考文獻(xiàn)的引用并不意味著它構(gòu)成現(xiàn)有技術(shù)的參考文獻(xiàn)。冠詞"a"和"an"在這里是用于指一個(gè)或多于一個(gè)(也就是，至少一個(gè))的該冠詞的語(yǔ)法上的賓語(yǔ)。作為一個(gè)示例，"anelement"的意思是一個(gè)元件或者一個(gè)以上的元件。術(shù)語(yǔ)"包括(including)"在這里是用于指短語(yǔ)"包括但不限于(includingbutnotlimited)",兩者可交換使用。術(shù)語(yǔ)"或者(or)"在這里是用于指術(shù)語(yǔ)"和/或(and/or)"，兩者可交換使用，除非章節(jié)內(nèi)容明確指出的除外。術(shù)語(yǔ)"例如(suchas)"在這里是用于指短語(yǔ)"例如但不限于(suchasbutnotlimitedto)"，兩者可交換使用。本發(fā)明已經(jīng)采用詳細(xì)的實(shí)施例描述的方式對(duì)
發(fā)明內(nèi)容進(jìn)行了描述，但這些示例并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍的限制。已描述的實(shí)施例中包含不同的特征，并非所有這些特征都是本發(fā)明的所有實(shí)施例所必要的。本發(fā)明的一些實(shí)施例僅采用了一些特征，或者可能是某些特征的組合。本發(fā)明的實(shí)施例的變化也得到描述，本發(fā)明的實(shí)施例包含了特征的不同組合，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員所能在已描述的實(shí)施例中注意到的。權(quán)利要求1、一種用于膽固醇處理的混合物，所述混合物包括多個(gè)復(fù)合微粒，每個(gè)所述復(fù)合微粒包括殼聚糖，該殼聚糖化學(xué)地結(jié)合到陰離子表面活性劑或者非離子表面活性劑。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的混合物，其特征在于，所述陰離子表面活性劑是選自磷脂、膽汁鹽、月桂醇醚硫醚鈉、檸檬酸單甘油酯、硬脂酰鈉、硬脂酰鈣或硬脂酸、硬脂檸檬酸、脂肪酸及其鹽、二乙酰酒石酸單甘油酯，以及它們的組合。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的混合物，其特征在于所述磷脂包括卵磷脂。4、根據(jù)權(quán)利要求1至3之一所述的混合物，其特征在于所述非離子表面活性劑是脂性酒精。5、一種用于膽固醇處理的混合物，所述混合物包括多個(gè)疏水性復(fù)合微粒，每個(gè)所述復(fù)合微粒包括陽(yáng)離子多聚物，該陽(yáng)離子多聚物化學(xué)地結(jié)合到陰離子表面活性劑或者非離子表面活性劑。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的混合物，其特征在于所述陽(yáng)離子多聚物包括殼聚糖。7、根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的混合物，其特征在于所述陽(yáng)離子多聚物包括聚胺。8、根據(jù)權(quán)利要求5至7之一所述的混合物，其特征在于所述聚胺包括多熔素或者聚丙烯酰胺。9、根據(jù)權(quán)利要求5至8之一所述的混合物，其特征在于所述陰離子表面活性劑是選自磷脂、膽汁鹽、月桂醇醚硫醚鈉、檸檬酸單甘油酯、硬脂酰鈉、硬脂酰鈣或硬脂酸、硬脂檸檬酸、脂肪酸及其鹽、二乙酰酒石酸單甘油酯，以及它們的組合。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的混合物，其特征在于所述磷脂包括卵磷脂。11、一種用于膽固醇處理的混合物，所述混合物包括多個(gè)殼聚糖-卵磷脂復(fù)合微粒，每個(gè)所述復(fù)合微粒包括殼聚糖，該殼聚糖化學(xué)地結(jié)合到卵磷脂。12、根據(jù)權(quán)利要求11所述的混合物，其特征在于所述混合物是干的混合物，其含水量最高為10%w/w。13、根據(jù)權(quán)利要求12所述的混合物，其特征在于所述干的混合物是以流動(dòng)粉末的形式提供的。14、根據(jù)權(quán)利要求12所述的混合物，其特征在于所述干的混合物是以包裝粉末的形式提供的。15、根據(jù)權(quán)利要求12所述的混合物，其特征在于所述干的混合物是以小微粒的混合物的形式提供的。16、根據(jù)權(quán)利要求11至15之一所述的混合物，其特征在于所述混合物的所述復(fù)合微粒是基于2.5克所述混合物的所述復(fù)合顆粒，以1升濃度為0.5%w/w的膽酸鈉溶液溶解，在30分鐘內(nèi)能夠從所述膽酸鈉溶液中去除至少10%的游離膽酸鈉。17、根據(jù)權(quán)利要求11至15之一所述的混合物，其特征在于所述混合物的所述復(fù)合微粒是基于2.5克所述混合物的所述復(fù)合顆粒，以1升濃度為0.5%w/w的膽酸鈉溶液溶解，在30分鐘內(nèi)能夠從所述膽酸鈉溶液中去除至少20%的游離膽酸鈉。18、根據(jù)權(quán)利要求11至15之一所述的混合物，其特征在于所述混合物的所述復(fù)合微粒是基于2.5克所述混合物的所述復(fù)合顆粒，以1升濃度為0.5%w/w的膽酸鈉溶液溶解，在30分鐘內(nèi)能夠從所述膽酸鈉溶液中去除至少30%的游離膽酸鈉。19、根據(jù)權(quán)利要求11至15之一所述的混合物，其特征在于所述混合物的所述復(fù)合微粒是基于2.5克所述混合物的所述復(fù)合顆粒，以1升濃度為0.5%w/w的膽酸鈉溶液溶解，在30分鐘內(nèi)能夠從所述膽酸鈉溶液中去除至少40%的游離膽酸鈉。20、根據(jù)權(quán)利要求11至19之一所述的混合物，其特征在于所述復(fù)合微粒的殼聚.糖的分子量為0.5x105至3x106道爾頓。21、根據(jù)權(quán)利要求11至20之一所述的混合物，其特征在于按重量計(jì)，至少10%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。22、根據(jù)權(quán)利要求ll至20之一所述的混合物，其特征在于按重量計(jì)，至少30%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。23、根據(jù)權(quán)利要求11至20之一所述的混合物，其特征在于按重量計(jì)，至少50%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。24、根據(jù)權(quán)利要求11至20之一所述的混合物，其特征在于按重量計(jì)，至少70%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。25、根據(jù)權(quán)利要求11至20之一所述的混合物，其特征在于按重量計(jì)，至少90%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。26、根據(jù)權(quán)利要求11至20之一所述的混合物，其特征在于除此之外的微粒的直徑尺寸小于0.3微米，按數(shù)量計(jì)，至少10%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑尺寸小于2微米。27、根據(jù)權(quán)利要求11至20之一所述的混合物，其特征在于除此之外的微粒的直徑尺寸小于0.3微米，按數(shù)量計(jì)，至少50%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑尺寸小于2微米。28、根據(jù)權(quán)利要求11至20之一所述的混合物，其特征在于除此之外的微粒的直徑尺寸小于0.3微米，按數(shù)量計(jì)，至少90%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑尺寸小于2微米。29、根據(jù)權(quán)利要求ll所述的混合物，其特征在于i)所述混合物的所述復(fù)合微粒是基于2.5克所述混合物的所述復(fù)合顆粒，以1升濃度為0.5%w/w的膽酸鈉溶液溶解，在30分鐘內(nèi)能夠從所述膽酸鈉溶液中去除至少15%的游離膽酸鈉；ii)按重量計(jì)，至少30%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。30、根據(jù)權(quán)利要求11所述的混合物，其特征在于i)所述混合物的所述復(fù)合微粒是基于2.5克所述混合物的所述復(fù)合顆粒，以1升濃度為0.5%w/w的膽酸鈉溶液溶解，在30分鐘內(nèi)能夠從所述膽酸鈉溶液中去除至少35%的游離膽酸鈉；ii)按重量計(jì)，至少30%的所述混合物的所述復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。31、根據(jù)權(quán)利要求11至30之一所述的混合物，其特征在于所述多個(gè)復(fù)合微粒包括具有重量比在0.2:1至5:1之間的卵磷脂-殼聚糖的復(fù)合微粒。32、根據(jù)權(quán)利要求11至30之一所述的混合物，其特征在于所述多個(gè)復(fù)合微粒包括具有重量比在3:1至4:1之間的卵磷脂-殼聚糖的復(fù)合微粒。33、根據(jù)權(quán)利要求11至32之一所述的混合物，其特征在于所述復(fù)合微粒的殼聚糖和卵磷脂都是化學(xué)地結(jié)合的，通過至少一個(gè)離子相互作用或者疏水相互作用。34、根據(jù)權(quán)利要求11至32之一所述的混合物，其特征在于所述復(fù)合微粒的殼聚糖和卵磷脂都是互相共價(jià)結(jié)合的。35、根據(jù)權(quán)利要求ll至34之一所述的混合物，其特征在于所述復(fù)合微粒的殼聚糖具有50%至95%的乙?；潭?。36、根據(jù)權(quán)利要求1至35之一所述的混合物，其特征在于，還包括C)至少一個(gè)動(dòng)物飼料，選自以下產(chǎn)品肉類、谷類、植物種子、玉米，以及豆類。37、根據(jù)權(quán)利要求36所述的混合物，其特征在于所述混合物的大量蛋白質(zhì)來源的和碳水化合物來源的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值是至少2卡路里每克所述混合物。38、根據(jù)權(quán)利要求36或37所述的混合物，其特征在于在所述混合物內(nèi)，在所述混合物的所述動(dòng)物飼料的重量與所述復(fù)合微粒的重量之間的重量比是至少100:1，而且所述復(fù)合微粒是與所述動(dòng)物詞料同質(zhì)地混合的。39、一種制備飼養(yǎng)混合物的方法，所述方法包括a)以至少一種動(dòng)物飼料混合根據(jù)權(quán)利要求1至35之一所述的任意混合物，該動(dòng)物飼料選自以下產(chǎn)品肉類、谷類、植物種子、玉米，以及豆類。40、一種詞養(yǎng)動(dòng)物的方法，包括喂食根據(jù)權(quán)利要求36所述的混合物給動(dòng)物，該動(dòng)物選自鳥、豬、牛、馬、貓、羊或狗。41、一種復(fù)合微粒的生產(chǎn)方法，所述方法包括a)提供多個(gè)殼聚糖微粒；b)將所述多個(gè)殼聚糖微?；旌线M(jìn)入酸中至少1小時(shí)，獲得第一溶液；c)制備第二溶液，包括陰離子或者非離子表面活性劑；d)在酸性條件下混合第一溶液與第二溶液，形成殼聚糖-表面活性劑復(fù)合微粒，包括殼聚糖化學(xué)地結(jié)合到所述表面活性劑；以及e)從所述殼聚糖-表面活性劑復(fù)合微粒制成粉末。42、一種復(fù)合微粒的生產(chǎn)方法，所述方法包括a)提供多個(gè)殼聚糖微粒；b)將所述多個(gè)殼聚糖微?；旌线M(jìn)入酸中至少1小時(shí)，獲得第一溶液；C)制備第二溶液，包括卵磷脂；d)在酸性條件下混合第一溶液與第二溶液，形成殼聚糖-卵磷脂復(fù)合微粒，包括殼聚糖化學(xué)地結(jié)合到所述卵磷脂；以及e)從所述殼聚糖-卵磷脂復(fù)合微粒制成粉末。43、根據(jù)權(quán)利要求41或42所述的方法，其特征在于i)按重量計(jì)，所述混合的多個(gè)殼聚糖微粒主要是低分子量殼聚糖微粒，具有0.3x105至1.5xl()S道爾頓的分子量；ii)所述步驟(b)的混合是進(jìn)行了至少1小時(shí)。44、根據(jù)權(quán)利要求41或42所述的方法，其特征在于i)按重量計(jì)，所述混合的多個(gè)殼聚糖微粒主要是中分子量殼聚糖微粒，具有1.5x105至5xl()S道爾頓的分子量；ii)所述步驟(b)的混合是進(jìn)行了至少2小時(shí)。45、根據(jù)權(quán)利要求41或42所述的方法，其特征在于i)按重量計(jì)，所述混合的多個(gè)殼聚糖微粒主要是高分子量殼聚糖微粒，具有0.5xl06至3xl()6道爾頓的分子量；ii)所述步驟(b)的混合是進(jìn)行了至少3小時(shí)。46、根據(jù)權(quán)利要求41或42所述的方法，其特征在于所述步驟(b)的混合是進(jìn)行了至少20小時(shí)。47、根據(jù)權(quán)利要求41至46之一所述的方法，其特征在于所述步驟(e)的制成粉末包括至少一個(gè)干燥操作，選自i)噴霧干燥；或者ii)凍干干燥。48、根據(jù)權(quán)利要求41至47之一所述的方法，其特征在于所述步驟(d)的混合的執(zhí)行，以致所述第一溶液和第二溶液在制成粉末的階段之前被混合在一起，該混合的過程持續(xù)2至30分鐘，該過程的平均溫度低于40攝氏度。49、根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其特征在于所述混合的時(shí)間最多20分鐘。50、根據(jù)權(quán)利要求48或49所述的方法，其特征在于所述平均溫度是至少30攝氏度。51、根據(jù)權(quán)利要求41至47之一所述的方法，其特征在于所述步驟(d)的混合的執(zhí)行，以致所述第一溶液和第二溶液在制成粉末的階段之前被混合在一起，該混合的過程持續(xù)2至10分鐘，該過程的平均溫度低于50攝氏度。52、根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其特征在于所述平均溫度是低于45攝氏度。53、根據(jù)權(quán)利要求41至52之一所述的方法，其特征在于所述步驟(d)的混合是在某一溫度和某一時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行的，以致按重量計(jì)，至少10%的所述形成的復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。54、根據(jù)權(quán)利要求41至52之一所述的方法，其特征在于所述步驟(d)的混合是在某一溫度和某一時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行的，以致按重量計(jì)，至少50%的所述形成的復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。55、根據(jù)權(quán)利要求41至52之一所述的方法，其特征在于所述步驟(d)的混合是在某一溫度和某一時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行的，以致按重量計(jì)，至少70%的所述形成的復(fù)合微粒的直徑具有0.3至2微米的尺寸。56、根據(jù)權(quán)利要求41至55之一所述的方法，其特征在于所述酸是有機(jī)酸，選自以下酸乳酸或者谷氨酸。57、根據(jù)權(quán)利要求41至56之一所述的方法，其特征在于所述第二溶液是在水溶液中制備的。58、根據(jù)權(quán)利要求41至57之一所述的方法，其特征在于在所述第一溶液的所述混合物中的所述殼聚糖的濃度為0.25%w/w至1%w/w。59、根據(jù)權(quán)利要求41至57之一所述的方法，其特征在于在所述第一溶液的所述混合物中的所述殼聚糖的濃度為0.1%w/w至2%w/w。60、根據(jù)權(quán)利要求41至59之一所述的方法，其特征在于在所述第二溶液的所述混合物中的所述卵磷脂的濃度為1.25%w/w至5.0%w/w。61、根據(jù)權(quán)利要求41至59之一所述的方法，其特征在于在所述第二溶液的所述混合物中的所述卵磷脂的濃度為0.1%w/w至7.5%w/w。62、根據(jù)權(quán)利要求41至61之一所述的方法，其特征在于所述步驟(b)中所述酸的pH值被調(diào)節(jié)到3.5。63、根據(jù)權(quán)利要求41至62之一所述的方法，其特征在于，還包括將所述第一溶液與第二溶液中的混合物的pH值調(diào)到7的步驟。64、根據(jù)權(quán)利要求41至62之一所述的方法，其特征在于，還包括允許所述第一溶液與第二溶液中的混合物靜置30分鐘，然后過濾得到微粒。65、根據(jù)權(quán)利要求64所述的方法，其特征在于，還包括在酸性介質(zhì)中重懸所述過濾得到的微粒。66、一種用于通過殼聚糖在動(dòng)物體內(nèi)比人體內(nèi)使膽固醇更多地減少的方法，所述方法包括增加所述殼聚糖的疏水性。67、根據(jù)權(quán)利要求66所述的方法，其特征在于所述疏水性是通過使殼聚糖與陰離子或者非離子表面活性劑發(fā)生反應(yīng)來增加的。68、前述任意權(quán)利要求所述的任意混合物或者方法用于使動(dòng)物不包括人減少體內(nèi)脂肪的用途。69、前述任意權(quán)利要求所述的任意混合物或者方法用于動(dòng)物不包括人的肥胖癥的治療的用途。全文摘要本發(fā)明涉及包括疏水性微米微粒的混合物，該微米微粒包含帶正電荷的多聚物(例如，諸如殼聚糖等多糖)，該多聚物化學(xué)地結(jié)合到陰離子或非離子表面活性劑，例如卵磷脂。該混合物是有效地用于減少動(dòng)物體內(nèi)的膽固醇，例如，諸如雞等鳥類，或者任何類型的哺乳類動(dòng)物。本發(fā)明還揭示了這些混合物的制造方法以及用途。文檔編號(hào)A61K31/722GK101678039SQ200780045222公開日2010年3月24日申請(qǐng)日期2007年12月6日優(yōu)先權(quán)日2006年12月7日發(fā)明者諾亞曲·本·舍拉姆申請(qǐng)人:本巴科技2006有限公司