專利名稱：：黑色素生成抑制組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及具有抑制由于光照射等導(dǎo)致的發(fā)病的皮膚變黑的作用的黑色素生成抑制組合物，更詳細(xì)的是，涉及以醋酸菌的細(xì)胞內(nèi)容物作為有效成分的黑色素生成抑制組合物以及使用這種組合物的美白方法。
背景技術(shù)：
：一直以來(lái)已知的是，為了防止由于紫外線等導(dǎo)致的皮膚變黑(曬黑)，防止斑點(diǎn)'雀斑的皮膚色素沉積，以及促進(jìn)皮膚美白和美膚效果等，抑制皮膚表皮中黑色素的生成十分重要。黑色素的生成是由于色素細(xì)胞的活性化而顯著促進(jìn)了黑色素產(chǎn)生能力而產(chǎn)生的，其機(jī)制并不完全清楚，但據(jù)推測(cè)這是通過(guò)酪氨酸酶的作用由酪氨酸變成二羥基苯丙氨酸(DOPA)，再由二羥基苯丙氨酸變成D0PA苯醌后，經(jīng)過(guò)各種中間體產(chǎn)生的。其結(jié)果是提出了很多用于抑制黑色素生成的化妝品，例如，以往廣泛使用了混合了過(guò)氧化氳，過(guò)氧化鈉，過(guò)硼酸鋅，過(guò)硼酸鎂和過(guò)硼酸鈉等過(guò)氧化物的化妝品。但是，這些過(guò)氧化物在保持性，物理或化學(xué)穩(wěn)定性等方面存在問(wèn)題。近年來(lái)，開(kāi)發(fā)了混合有半胱氨酸，羥基醌，曲酸，抗壞血酸(維生素C)等天然物質(zhì)的化妝品。但是，實(shí)際狀況是，它們無(wú)論如何，都難以具有能夠充分滿足的保存性，穩(wěn)定性和美白效果。而且，上述天然物質(zhì)中的曲酸是通過(guò)醋酸桿菌屬(Acetobacter)和葡糖桿菌屬(Gluconobacter)等醋酸菌產(chǎn)生的物質(zhì)，盡管有人提出了混合有曲酸生產(chǎn)性的醋酸菌的培養(yǎng)液(除去了醋酸菌)的具有美白效果和防止曬黑效果的美白化妝品(例如，參照專利文獻(xiàn)1)，但需要開(kāi)發(fā)出安全性更高，效果更強(qiáng)的黑色素生成抑制組合物。專利文獻(xiàn)l:特開(kāi)昭53-6432號(hào)公報(bào)
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的課題本發(fā)明的目的在于提供內(nèi)用(經(jīng)口攝取、注射等)和/或外用(皮膚涂布，貼布等)時(shí)安全性高且效果更強(qiáng)的黑色素生成抑制組合物，而且還在于提供使用這種黑色素生成抑制組合物的防止曬黑的方法。用于解決課題的方法鑒于上述課題，本發(fā)明人著眼于一直作為釀造制醋菌等使用的認(rèn)識(shí)到高安全性的醋酸菌。此外，已知醋酸菌自古以來(lái)就與人們的飲食生活深深相關(guān)，在食醋制造之外，例如歐洲的傳統(tǒng)食品里海酸奶(Caspianseayogurt)中也含醋酸菌，也有長(zhǎng)期的食用歷史。而且，由于醋酸菌在食醋發(fā)酵工序中的發(fā)酵終止后，經(jīng)過(guò)過(guò)濾，再被廢棄，因此可以便宜地獲得。本發(fā)明人從在這種醋酸菌的細(xì)胞內(nèi)容物中看到了強(qiáng)黑色素生成抑制作用，確認(rèn)具有防止曬黑效果，從而完成本發(fā)明。也就是說(shuō)，權(quán)利要求l中涉及的本發(fā)明提供黑色素生成抑制組合物，其特征在于含有醋酸菌的細(xì)胞內(nèi)容物作為有效成分。而且，權(quán)利要求2中涉及的本發(fā)明提供權(quán)利要求1所述的黑色素生成抑制組合物，其^皮制備成適于內(nèi)用。此外，權(quán)利要求3中涉及的本發(fā)明提供權(quán)利要求1所述的黑色素生成抑制組合物，其被制備成適于外用。此外，權(quán)利要求4中涉及的本發(fā)明提供美白方法，其特征在于內(nèi)用和/或外用權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)所述的黑色素生成抑制組合物。而且，本發(fā)明和以往所知具有美白效果的醋酸菌在培養(yǎng)液中產(chǎn)生的曲酸不同，是以醋酸菌的細(xì)胞內(nèi)容物作為有效成分。4發(fā)明的效果本發(fā)明的醋酸菌的細(xì)胞內(nèi)容物通過(guò)內(nèi)用和/或外用能夠發(fā)揮強(qiáng)黑色素生成抑制作用，因此通過(guò)本發(fā)明能夠提供安全性高、效果強(qiáng)的黑色素生成抑制組合物以及美白方法。圖1:是改良型布羅諾(Bronaugh)擴(kuò)散腔的模式圖。具體實(shí)施例方式作為本發(fā)明中使用的醋酸菌，沒(méi)有特別限制，例如，可以例舉屬于葡糖酸醋桿菌屬(Gluconacetobacter)，葡糖桿菌屬(Gluconobacter)，醋桿菌屬(Acetobacter)，Asaia屬或Acidomonas屬等的醋酸菌。更詳細(xì)的是，首先，作為葡糖酸醋桿菌屬(Gluconacetobacter)的醋酸菌，可以例舉漢氏葡糖酸醋桿菌(Gluconacetobacterhansenii)，重氮營(yíng)養(yǎng)葡糖酸醋桿菌(Gluconacetobacterdiazotrophicus)，Gluconacetobacterintermedius，Gluconacetobactersacchari，木糖葡糖酸醋桿菌(Gluconacetobacterxylinus)，歐洲葡糖酸醋桿菌(Gluconacetobactereuropaeus)，月良從葡萄酸醋桿菌(Gluconacetobacteroboediens)等。接著，作為葡糖酸醋桿菌屬(Gluconacetobacter)的醋酸菌，可以例舉弗氏葡萄桿菌(Gluconacetobacterfrateurii)，蠟狀葡糖桿菌(Gluconacetobactercerinus)等。此外，作為醋桿菌屬(Acetobacter)的醋酸菌，可以例舉Acetobactertropicalis，Acetobacterindonesiensis,Acetobactersyzygii，Acetobactercibinongensis，Acetobacterorientalis，巴氏醋桿菌(Acetobacterpasteurianus)，Acetobacterorleanensis，Acetobacterlovaniensis，醋化醋桿菌(Acetobacteraceti)，果實(shí)醋桿菌(Acetobacterpomorum),Acetobactermalorum等。此夕卜，作為Asaia屬的醋酸菌，可以例舉Asaiabogorensis,Asaiasiamensis等。而且，作為Acidomonas屬的醋酸菌，可以例舉Acidomonasmethanolica等。此外，作為醋酸菌，除上述外，還可以適當(dāng)使用可以在食醋制造或酸奶等發(fā)酵食品中使用的醋酸菌，從自然界分離的并且已經(jīng)在微生物保藏機(jī)構(gòu)中保藏的可以發(fā)放的保藏菌林等。而且，由于醋酸菌可以在醋酸發(fā)酵中使用而且在椰果(Natadecoco)，里海酸奶，紅茶菌等中有食用歷史，因此認(rèn)為其安全性高，尤其是，由于在食醋發(fā)酵工序中在發(fā)酵后通過(guò)過(guò)濾而被分離，再被廢棄，因此還可以大量便宜地獲得。權(quán)利要求1中涉及的本發(fā)明中，使用從上述醋酸菌中取出的細(xì)胞內(nèi)容物構(gòu)成黑色素生成抑制組合物，細(xì)胞內(nèi)容物的制備，可以使用例如通過(guò)對(duì)清洗的醋酸菌進(jìn)行破碎處理使細(xì)胞內(nèi)容物漏出，以懸浮狀態(tài)含有破碎細(xì)胞片的懸浮液(以下有時(shí)也稱為懸浮液)等，而且，也可以使用通過(guò)用離心分離機(jī)等使該懸浮液離心分離，除去細(xì)胞殘?jiān)@得的上清液(以下有時(shí)也稱為上清液)。而且，還可以有效利用對(duì)這些懸浮液和上清液進(jìn)行濃縮，使之干燥后的物質(zhì)。醋酸菌的破碎處理可以按照常規(guī)方法，例如在將醋酸菌懸浮于蒸餾水，磷酸緩沖液，檸檬酸援沖液等各種緩沖液等后，用超聲波式破碎才幾，法式?jīng)_床(Frenchpress)等高壓式石皮碎機(jī)來(lái)實(shí)施。而且，在上述懸浮液和上清液的制備中，除了水和各種緩沖液之外，還可以聯(lián)合使用丙酮，乙醇，甲醇，丙醇，異丙醇，丁醇等各種親水性有機(jī)溶劑。而且，權(quán)利要求1涉及的本發(fā)明中的黑色素生成抑制效果，可以通過(guò)下述試驗(yàn)法進(jìn)4于確認(rèn)。也就是說(shuō)，可以利用對(duì)從人取出的皮膚切片進(jìn)行UVA照射使黑色素沉淀的試驗(yàn)系統(tǒng)。該試驗(yàn)系統(tǒng)在設(shè)想為內(nèi)用時(shí)，可以通過(guò)對(duì)從人取出的皮膚切片正下方添加評(píng)價(jià)物質(zhì)來(lái)驗(yàn)證效果。此外，在設(shè)想為外用時(shí)，可以通過(guò)對(duì)從人取出的皮膚切片表面添加評(píng)價(jià)物質(zhì)來(lái)驗(yàn)證效果。使用醋酸菌的細(xì)胞內(nèi)容物的黑色素生成抑制組合物可以按照常規(guī)方法，例如如前所述將醋酸菌懸浮于蒸餾水等中后，通過(guò)離心分離經(jīng)超聲波破碎處理的懸浮液，制備出除去細(xì)胞殘?jiān)纳锨逡?。而且，還可以根據(jù)需要對(duì)該上清液進(jìn)行濃縮。這些上清液和濃縮物可以直接作為黑色素生成抑制組合物來(lái)使用，而且還可以通過(guò)液相色鐠法或逆流分布法等分離純化黑色素生成抑制物質(zhì)，并且收集這些物質(zhì)，將其作為黑色素生成抑制物質(zhì)使用。權(quán)利要求1涉及的本發(fā)明的黑色素生成抑制組合物的形態(tài)，可以作為溶解于水、醇、含水醇等中的溶液的形態(tài)，以及通過(guò)對(duì)其進(jìn)行干燥獲得的粉末的形態(tài)，或者通過(guò)將其成形獲得的片劑的形態(tài)等來(lái)使用。權(quán)利要求2涉及的本發(fā)明是被制備成適于內(nèi)用的權(quán)利要求1記栽的黑色素生成抑制組合物。內(nèi)用時(shí)，可以是美容輔助食品，食品，藥品等(口服劑，注射劑等)等，其形態(tài)沒(méi)有特別限制。例如，作為內(nèi)用時(shí)的食品形態(tài)，具體可以例舉混合于以西紅柿，胡蘿卜等作為原料的蔬菜汁，蘋果，菠蘿，葡萄柚，橙子，桃等為原料的果汁，或者蔬菜汁和果汁的混合品，醇飲料，牛奶，酸奶等乳制品，運(yùn)動(dòng)飲料，咖啡，紅茶，綠茶，烏龍茶等茶制品，或者黑醋，谷物醋，米醋，玄米醋，黑醋，醇醋，蘋果醋和葡萄醋等以水果作為原料的水果醋，含有蔬菜作為原料的蔬菜醋等的食醋制品，糖果，口香糖，果凍，冰洪淋，小甜餅等點(diǎn)心類；主食面包，米飯，面等主食等中。權(quán)利要求3中涉及的本發(fā)明是被制備成適于外用的權(quán)利要求1中記載的黑色素生成抑制組合物。外用時(shí)，其形態(tài)可以是貼布劑，涂布劑等，其形態(tài)沒(méi)有特別限定。例如，作為外用時(shí)的涂布劑的形態(tài)，具體可以例舉混合在分別混合了丙三醇，纖維素等賦形劑，羥甲基纖維素，阿拉伯樹(shù)膠等增稠劑以及聚環(huán)氧乙烷，山梨聚糖脂肪酸酯等表面活性劑的化妝水，化妝乳劑，乳液，美容涂敷劑(pack)等基礎(chǔ)化妝品，粉底等彩妝化妝品，洗發(fā)液，護(hù)發(fā)素，沐浴液等化妝用品，入浴劑(bathagent)等中。通過(guò)以上述形態(tài)聯(lián)合使用本發(fā)明的黑色素生成抑制組合物，含有其它天然物來(lái)源的功能成分，可以預(yù)期累加效應(yīng)乃至協(xié)同效應(yīng)。作為本發(fā)明的黑色素生成抑制組合物的醋酸菌的細(xì)胞內(nèi)容物的給藥量，根據(jù)該細(xì)胞內(nèi)容物中活性成分的濃度等而不同，一般在內(nèi)用時(shí)，成人每天為0.OOlmg~100g,優(yōu)選在0.lmg~10g。在外用時(shí)，每100cm2皮膚為0.001mg~100g,優(yōu)選在0.01mg~10g。在內(nèi)用和外用同時(shí)給藥時(shí)，內(nèi)用為成人每天0.001mg~lOOg，并且，外用為每100cii^皮膚為0.001mg~lOOg，優(yōu)選內(nèi)用為成人每天0.01mg~10g，并且，夕卜用為每100cm2皮膚為0.Olmg-lOg。權(quán)利要求4涉及的本發(fā)明為美白方法，其特征在于內(nèi)用和/或外用權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)記載的黑色素生成抑制組合物。當(dāng)防止曬黑進(jìn)行美白時(shí)，能夠內(nèi)用或者外用權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)記載的黑色素生成抑制組合物，還能夠兩種方式一起使用。在內(nèi)用或者外用時(shí)，醋酸菌的細(xì)胞內(nèi)容物的給藥量等如上所述。權(quán)利要求4涉及的本發(fā)明中，能夠通過(guò)內(nèi)用或者外用權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)記栽的黑色素生成抑制組合物，可以防止曬黑。實(shí)施例接下來(lái)，通過(guò)實(shí)施例更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，本發(fā)明的范圍不受這些實(shí)施例的任何限制。實(shí)施例l(懸浮液以及上清液的大量制備)作為醋酸菌林，使用木糖葡糖酸醋桿菌NBRC15237(GluconacetobacterxylinusNBRC15237)林。該菌林保藏于獨(dú)立行政法人制品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)生物技術(shù)本部生物遺傳資源部門(千葉縣木更津市上總鐮足2-5-8)，是可以發(fā)放的醋酸菌。用高速離心機(jī)(8000rpm，20分鐘)對(duì)使用該醋酸菌的醋酸發(fā)酵中的IO千升醋酸發(fā)酵液收集菌體，獲得了10kg濕菌體。將獲得的10kg濕菌體懸浮于35升水中，用法式?jīng)_床壓力式細(xì)胞破碎機(jī)，在10000psi的破碎壓力破碎后，制成懸浮液。然后，用高速離心機(jī)(8000rpm，20分鐘)除去荻得的40kg懸浮液的細(xì)胞殘?jiān)?，獲得30kg上清液。實(shí)施例2(設(shè)想內(nèi)用時(shí)的黑色素生成抑制效果)為了驗(yàn)證作為內(nèi)用劑的效果，按照下述(l)-(4)的順序，評(píng)價(jià)實(shí)施例1中制備的懸浮液或上清液的黑色素生成抑制效果。(1)將從人取出的皮膚切片(informedconsent完成)裝入改良型布羅諾擴(kuò)散腔(概略示于圖1)。在皮下側(cè)的培養(yǎng)液中按預(yù)定濃度添加實(shí)施例1中制備的懸浮液或上清液。(2)添加懸浮液或上清液后，3小時(shí)后，按20J/cm2的強(qiáng)度對(duì)皮膚切片照射紫外線A波(UV-A)40秒。而且，將硅酸玻璃夾在燈與試樣之間。(3)對(duì)皮膚切片進(jìn)行器官培養(yǎng)。而且，培養(yǎng)基采用DMEMab培養(yǎng)基(+)10%FBS(胎兒牛血J求)。(4)24小時(shí)后，通過(guò)對(duì)黑色素進(jìn)行DOPA染色，根據(jù)柱狀圖分析評(píng)價(jià)黑色素生成程度(11=2~3)。此外，黑色素濃度用DOPA染色度pixel/皮膚基底層距離mm表示。以上結(jié)果示于表1和表2。其結(jié)果是，在設(shè)定內(nèi)容的試驗(yàn)系中，可以在懸浮液和上清液中確認(rèn)存在抑制黑色素生成的作用。9表l設(shè)想內(nèi)用時(shí)的懸浮液的黑色素生成抑制效果試驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表2設(shè)想內(nèi)用時(shí)的上清液的黑色素生成抑制效果試驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例3(設(shè)想為外用時(shí)的黑色素生成抑制效果)為了驗(yàn)證作為外用劑的效果，按照下述(l)-(4)的順序，評(píng)價(jià)實(shí)施例1中制備的懸浮液或上清液的黑色素生成抑制效果。(1)將從人取出的皮膚切片(informedconsent完成)裝入改良型布羅諾擴(kuò)散腔(概略示于圖1)。按預(yù)定濃度將實(shí)施例1中制備的懸浮液或上清液溶解于水中再添加到皮膚表面上。(2)添加懸浮液或上清液后，3小時(shí)后，按20J/cm2的強(qiáng)度對(duì)皮膚切片照射紫外線A波(UV-A)40秒。而且，將硅酸玻璃夾在燈與試樣之間。(3)對(duì)皮膚切片進(jìn)行器官培養(yǎng)。而且，培養(yǎng)基采用DMEMab培養(yǎng)基(+)10%FBS(胎兒牛血球)。(4)24小時(shí)后，通過(guò)對(duì)黑色素進(jìn)行DOPA染色，根據(jù)柱狀圖分析評(píng)價(jià)黑色素生成程度(n=2~3)。此外，黑色素濃度用D0PA染色度pixel/皮膚基底層^巨離mm表示。以上結(jié)果示于表3和表4。其結(jié)果是，不僅在內(nèi)用而且在外用給藥時(shí)，可以在懸浮液和上清液中確認(rèn)存在抑制黑色素生成的作用。表3設(shè)想外用時(shí)的懸浮液的黑色素生成抑制效果試驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表4設(shè)想外用時(shí)的上清液的黑色素生成抑制效果試驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實(shí)施例4(設(shè)想內(nèi)用/外用聯(lián)合施用時(shí)黑色素生成抑制效果試驗(yàn))為了驗(yàn)證作為內(nèi)用劑和外用劑聯(lián)合使用的效果，按照下述(l)~(4)的順序，評(píng)價(jià)實(shí)施例1中制備的懸浮液和上清液的黑色素生成抑制效果。(l)將從人取出的皮膚切片(informedconsent完成)裝入改良型布羅諾擴(kuò)散腔(概略示于圖1)。在皮下側(cè)(內(nèi)用)的培養(yǎng)液中按預(yù)定濃度添加實(shí)施例1中制備的懸浮液或上清液。此外，將實(shí)施例1制備的懸浮液按照預(yù)定濃度溶解于水中，再添加到皮膚側(cè)(外用)。并且，作為聯(lián)合施用，按預(yù)定濃度在皮下側(cè)(內(nèi)用)的培養(yǎng)液中添加實(shí)施例l制備的上清液，將實(shí)施例1制備的懸浮液按照預(yù)定濃度溶解于水中，再添加到皮膚側(cè)(外用)(2)分別添加懸浮液和上清液后，3小時(shí)后，按20J/cm"的強(qiáng)度對(duì)皮膚切片照射紫外線A波(UV-A)40秒。而且，將硅酸玻璃夾在燈與試樣之間。(3)對(duì)皮膚切片進(jìn)行器官培養(yǎng)。而且，培養(yǎng)基采用DMEMab培養(yǎng)基(+)10%FBS(胎兒牛血球)。(4)24小時(shí)后，通過(guò)對(duì)黑色素進(jìn)行DOPA染色，根據(jù)柱狀圖分析評(píng)價(jià)黑色素生成程度(n=2~3)。此夕卜，黑色素濃度用DOPA染色度pixel/皮膚基底層距離mm表示。以上結(jié)果示于表5。根據(jù)表5的結(jié)果，懸浮液或上清液的單獨(dú)施用中確認(rèn)存在抑制黑色素生成的作用，與此同時(shí)通過(guò)聯(lián)合施用獲得了更為顯著的黑色素生成抑制效果。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例5(片劑的制造)用高速離心機(jī)(8000rpm，20分鐘)對(duì)10千升的醋酸發(fā)酵液收集菌體，獲得10kg的濕菌體。將10kg濕菌體懸浮于35千升水中，用法式?jīng)_床壓力式細(xì)胞破碎機(jī)，用10000psi的破碎壓力破碎，破碎形成的物質(zhì)形成醋酸菌的懸浮液。然后，用高速離心機(jī)(8000rpm，20分鐘)除去獲得的醋酸菌的40kg懸浮液的細(xì)胞塵(celldebris)，獲得30kg上清液。用大型冷凍干燥機(jī)對(duì)獲得的30kg上清液進(jìn)行冷凍減壓千燥，獲得了約50g的干燥菌體。加入獲得的干燥物lg(0.7重量W,結(jié)晶纖維素35g(26.9重量％)，干燥玉米淀粉67g(51.5重量％)，乳糖22g(16.9重量％)，硬脂酸鈣2g(1.5重量。/。)和作為結(jié)合劑的聚乙烯吡咯烷酮3g(2.3重量％)，混合粉末化后，填充于硬明膠膠嚢中。可以期待上述制備的片劑作為黑色素抑制組合物可以有效經(jīng)口攝取。實(shí)施例6(果凍的制造)用高速離心機(jī)器(8000rpm，20分鐘)對(duì)醋酸發(fā)酵液10千升的收集菌體，獲得了濕菌體10kg。使獲得的濕菌體10kg分散于等量的蒸餾水。在通過(guò)使分散的20kg的醋酸菌分散液3次通過(guò)高壓均化器(20000psi)實(shí)施細(xì)胞^f皮壞處理獲得懸浮液后，用大型冷凍干燥機(jī)冷凍減壓干燥，獲得了1.5kg的干燥菌體粉末。均勻混合獲得的干燥菌體粉末8g(0.8重量％)，砂糖250g(25重量%)，角叉菜膠1.6g(0.16重量％),刺槐豆膠O.8g(0.08重量％)，黃原膠0.8g(0.08重量％),獲得粉狀混合物。用鍋計(jì)量300g的水，溶解黑砂糖30g(3.0重量％)，再混合還原糖漿150g(15重量％),加入先前獲得的粉狀混合物，一邊攪拌使其不成塊狀，再混合。將它們攪拌均勻，加入余下的水258.8g，加溫。溶液溫度在85。C加熱IO分鐘溶解后，用流水冷卻，獲得了果凍食品。上述制備的果凍可以作為黑色素生成抑制組合物，期待可有效經(jīng)口攝取。實(shí)施例7(飲料的制造)用高速離心機(jī)器(8000rpm，20分鐘)對(duì)10千升醋酸發(fā)酵液收集菌體，獲得了濕菌體10kg。使獲得的濕菌體10kg分散于IOOL食醋中。使分散的醋酸菌分散液3次通過(guò)高壓均化器(20000psi),實(shí)施細(xì)胞破壞處理。將該溶液分注于容積為500ml的瓶中，通過(guò)加溫至75'C進(jìn)行殺菌，獲得了食醋飲料。上述制備的飲料可以作為黑色素生成抑制組合物，期待可有效經(jīng)口攝取。實(shí)施例8(化妝水的制造)用高速離心機(jī)器(8000rpm，20分鐘)對(duì)醋酸發(fā)酵液10千升的收集菌體，獲得了濕菌體10kg。使獲得的濕菌體10kg懸浮于35升水中，用法式?jīng)_床壓力式細(xì)胞破碎機(jī)，用10000psi的破碎壓力破碎，破碎形成的物質(zhì)形成醋酸菌的懸浮液。然后，用高速離心機(jī)(8000rpm,20分鐘)除去獲得的醋酸菌的40kg懸浮液的細(xì)胞塵，獲得30kg上清液?；旌汐@得的lg上清液(2.0重量％)，丙三醇1.5g(3.0重量％)，1.3丁二醇2.5g(5.0重量％)，榲梓(PYRUSCYDONIA)籽提取物4.0g(8.0重量%)，純化水37.75g(75.5重量％)，再混合聚氧化乙烯山梨聚糖月桂酸酯0.6g(1.2重量°/),乙醇2.5g(5.0重量％)，對(duì)氧基苯曱酸甲酯0.lg(O.2重量％)，香料0.05g(0.1重量％),混合溶液，制成化妝水。可以期待上述制備的化妝水作為黑色素抑制組合物可以有效涂布。實(shí)施例9(化妝乳劑的制造)用高速離心機(jī)器(8000rpm，20分鐘)對(duì)醋酸發(fā)酵液10千升的收集菌體，獲得了濕菌體10kg。使獲得的濕菌體10kg分散于等量的蒸餾水。在通過(guò)使分散的20kg的醋酸菌分散液3次通過(guò)高壓均化器(20000psi)實(shí)施細(xì)胞^5皮壞處理獲得懸浮液后，用大型冷凍干燥機(jī)冷凍減壓干燥，獲得了1.5kg的干燥菌體粉末。在75度加溫混合獲得的干燥物lOg(lO.0重量％)，黃原膠0.lg(0.1重量％)，甘油1.0g(1.0重量％)，1,3丁二醇5.0g(5.0重量％)，對(duì)氧基苯甲酸甲酯0.2g(0.2重量％)，純化水55.0g(55.0重量％)，再對(duì)在75度加溫溶解了荷荷巴油3.0g(3.0重量W，角鯊烯2.0g(2.0重量％)，甲基聚硅氧烷0.5g(0.5重量％)，硬脂醇0.5g(0.5重量％)，三己酸甘油酯12.5g(12.5重量％)，單硬脂酸甘油酯0.5g(0.5重量％)，單硬脂酸二甘油酯1.5g(1.5重量％)，單硬脂酸十甘油酯3.0g(3.0重量％)，對(duì)氧基苯曱酸丙酯0.lg(0.1重量％)的溶液進(jìn)行混合乳化，攪拌的同時(shí)冷卻到50°C，添加0.lg(O.1重量％)各種香料，制成化妝乳劑。上述制備的化妝乳劑作為黑色素生成抑制組合物能夠期待可以有效涂布。產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明的醋酸菌的細(xì)胞內(nèi)容物，通過(guò)內(nèi)用和/或外用可以發(fā)揮強(qiáng)的黑色素生成抑制作用，因此通過(guò)本發(fā)明能夠提供安全性高且效果強(qiáng)的黑色素生成抑制組合物以及美白方法。因此，本發(fā)明能夠廣泛應(yīng)用于食品領(lǐng)域，美容領(lǐng)域，化妝品領(lǐng)域等。權(quán)利要求1、黑色素生成抑制組合物，其特征在于含有醋酸菌的細(xì)胞內(nèi)容物作為有效成分。2、權(quán)利要求1所述的黑色素生成抑制組合物，其被調(diào)制成適于內(nèi)用。3、權(quán)利要求1所述的黑色素生成抑制組合物，其被調(diào)制成適于外用。4、美白方法，其特征在于內(nèi)用和/或外用權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)所述的黑色素生成抑制組合物。全文摘要本發(fā)明的目的在于提供內(nèi)用(經(jīng)口攝取、注射等)和/或外用(皮膚涂布、貼布等)時(shí)安全性高且效果更強(qiáng)的黑色素生成抑制組合物，而且還在于提供使用這種黑色素生成抑制組合物的美白方法。本發(fā)明提供特征在于含有醋酸菌的細(xì)胞內(nèi)容物作為有效成分的黑色素生成抑制組合物。而且，本發(fā)明還提供特征在于內(nèi)用和/或外用前述黑色素生成抑制組合物的美白方法。文檔編號(hào)A61K35/74GK101641108SQ20078005199公開(kāi)日2010年2月3日申請(qǐng)日期2007年3月19日優(yōu)先權(quán)日2007年3月19日發(fā)明者立元秀樹(shù)申請(qǐng)人:味滋康集團(tuán)有限公司